论苦玄参化学成分和定量分析研究进展
苦玄参为玄参科(scrophulariacea) 植物苦玄参picria felterrae lour.的干燥全草，为常用中药，系玄参科苦玄参属唯一的一种植物，为一年生草本，其性寒味苦，具有清热解毒、消肿止痛的功能。用于感冒风热、咽喉肿痛、痄腮、胃热腹痛、痢疾、跌打损伤、疖痈、毒蛇咬伤〔1,2〕等证。在民间传统应用已有二百多年的历史，收载于中药材标准中，具有良好的应用前景。现将其近年来在化学成分和质量分析的研究进展综述如下。
1化学成分
迄今为止，苦玄参中的化学成分主要集中在葫芦苦素(cucurbitacin)三萜成分和黄酮类化合物的研究报道，国外对苦玄参进行研究，发现其有效成分主要为四环三萜苷类。三萜成分是苦玄参中最早被报道的一类化学成分，由于它们与葫芦科植物中的苦味素结构相似，所以也有文献将其称为葫芦苦素(cucurbitacin)〔3〕。成桂仁等自苦玄参药材中共分离鉴定了 6 个葫芦苦素类苷元、1 个皂酮、10 个皂苷〔4～17〕和 3 个黄酮〔18〕。王力生等〔19〕从苦玄参乙醇提取物的较低极性部位中分离鉴定了6个化合物，即n-benzoylphenylalanyl-l-phenylalaninol acetate①，1-羟基-7羟甲基蒽醌②，9，16-二羟基-10，12，14-三烯-十八碳酸③，5，7，4'-三羟基黄酮④，β-谷甾醇⑤和胡萝卜苷⑥。化合物①～③的13c-nmr数据为首次提供。邹节明等〔20〕用硅胶和mci柱色谱分离纯化，得到2个不含呋喃环的葫芦苦素类化合物，分别鉴定为11，24-二酮-5，21-二烯葫芦素-3α-o-β-d-吡喃木糖基-16α-o-α-l-吡喃鼠糖苷（脱氢拜俄尼苷）和己降葫芦苦素f，其中前者为新化合物，后者首次从苦玄参中分离得到。此外，他们还用采用大孔树脂、硅胶柱色谱纯化得到一个新的三萜皂苷—11，22-三羰基-16α-羟基-(20s，24)- 环氧苦味素-5，23-二烯-2β-o-β-d-吡喃葡糖苷（苦玄参苷xi）〔21〕。现将已从苦玄参中分离鉴定的三萜成分和黄酮类化合物结构整理如下。
1.1四环三萜类苷及苷元
见表1～2，图1～6。表1四环三萜类苷及苷元结构式（略）表2四环三萜类苷及苷元结构式（略）表3黄酮类化合物结构式（略）
2定量分析
四环三萜苷类是苦玄参中主要活性成分，苦玄参ia和ib是其中的主要苷元，药理实验证明，苦玄参干浸膏有明显的抗炎及镇痛作用〔22〕。2014版《中国药典》正文未收载该品种，但有些以其为原料的中成药如妇炎净胶囊等已收载入《中国药典》（2014年版及2014版）〔23〕。目前学者对苦玄参质量分析的研究主要集中在对苦玄参药材及其中成药中苦玄参苷ia含量的测定方面。
2.1高效液相色谱法
勇等〔24〕用rp-hplc法，采用c18 ods2柱(5 μm，4.6 mm×250 mm)，以乙腈-0.3％磷酸(34∶66)为流动相，流速lml／min，柱温为25℃，检测波长为264 nm，对不同产地、不同采收季节苦玄参中苦玄参苷ia进行含量测定。结果显示，苦玄参苷ia进样量在0．42～2．10 μg的围呈良好的线性关系（r=0.999 9），平均回
收率为100.4％，rsd=1.64％(n=6)。实验证明不同产地苦玄参中苦玄参苷ⅰa的含量不同，苦玄参采收季节不同是影响其含量的一个因素。邹节明等〔25〕将超滤技术用于苦玄参等药材有效成分的分离提取，以提取物中有效成分（苦玄参苷ⅰa）的转移率、药液的膜通量和干膏（固体物）降低率3个考察指标作为评价的标准，对苦玄参水提液进行超滤实验，用hplc法测定苦玄参苷ia的含量，结果在超滤前药液中的含量约为0.28％，而超滤后在药液中能达到0.22％以上，转移率能够达到80％以上，干膏降低率达到了45％以上，取得了良好的效果。
成远等〔26〕采用rp-hplc法测定、、亳州、樟树和5个产地苦玄参中苦玄参苷ia含量，色谱条件为：
kro-masilc-18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm)，柱温35℃；流动相乙腈-0.5%醋酸=36∶64，流速1.0 ml/min，检测波长264 nm。结果显示各地苦玄参药材中苦玄参苷ⅰa的含量差异较大，亳州和樟树所产苦玄参药材中苦玄参苷ⅰa的含量较高。邹节明等〔27〕以hplc法测定苦玄参苷ia的含量为指标，筛选适用的大孔吸附树脂型号，评价树脂吸附与解吸工艺，结果表明苦玄参提取物精制适用hpd50号树脂，吸附阶段泄漏点和饱和点分别在1.5和l1左右，解吸阶段的适用乙醇浓度分别为50%，苦玄参苷ia含量可提高4倍以上。甄汉深等〔28〕采用agilent zorbax eclipse xdb c8色谱柱(4.6 mm×150 mm，5 μm)，以乙腈-0.5%醋酸(32∶68)为流动相，流速1 ml?min-1，检测波长264 nm，测定两种不同产地种植的苦玄参药材的茎、叶中苦玄参苷ⅰa的含量。实验结果显示，苦玄参苷ⅰa在2.28～11.4 μg 围线性良好，平均加样回收率为101.1%，rsd=2.4%(n=5)。两种产地叶中苦玄参苷ⅰa均明显高于茎。
胡慧玲等〔29〕用kromasil ods-1 hplc柱c18(250 mm×4.6 mm,5 μm)，以乙腈-水-冰醋酸(38∶62∶0.5)为流动相，流速1.0 ml/min，柱温40℃，检测波长264 nm，对妇炎宁片中的苦玄参苷ia进行了含量测定。结果为苦玄参苷ia在线性围为0.1～0.6 μg围线性良好(r=0.999 5)，平均回收率为101.22%，rsd=2.16%(n=5)，10批样品的平均测定结果为3.44 mg/g。
2.2薄层扫描法
邹节明等〔30〕采用薄层扫描法测定不同产地苦玄参的根、茎、叶中苦玄参苷ⅰa和ⅰb的含量，以甲醇为溶媒，超声提取苦玄参各药用部位，提取物经大孔树脂d101精制后，点于含1%cmc-na的硅胶gf254板上，以氯仿-甲醇-水(4∶1∶0.1)为展开剂展开后，用camag tlcⅲ型线性扫描仪测定，检测波长为268 nm，狭缝尺寸为8 mm×0．6 mm。结果显示，苦玄参苷ⅰa的点样量在1.1～5.4 μg，苦玄参苷ⅰb在1.0～6.2 μg围与各自峰面积呈良好的线性关系，r分别为0.999 0和0.999 2，加样回收率分别为98.3%和97.5%；在同一产地不同药用部位中，苦玄参苷ⅰa和ib的含量：叶中最高，茎中次之，根中最低；在同一药用部位中，叶中苦玄参苷ⅰa含量高于ⅰb，根和茎中苦玄参苷ⅰb含量高于ⅰa。
勇〔31〕采用双波长薄层扫描法分别测定炎肿化毒片、炎见宁片和妇炎净胶囊中苦玄参苷ⅰa的含量，用5%cmc-na的硅胶gf254板，展开剂为氯仿∶甲醇=4∶1，在紫外灯下（254 nm）检视定位，进行光谱扫描，扫描条件为：λs=270nm，λr=350 nm，sx=3，反射式锯齿形扫描。结果表明苦玄参苷ⅰa的点样量在2.4～7.2 μg 间呈良好的线性关系，平均加样回收率为97.9%，rsd=1.8%(n=5)。明廉〔32〕用同
样的方法测定苦玄参中苦玄参苷ⅰa的含量，从测定结果来看，与成桂仁〔12〕报道从苦玄参中提取分离苦玄参苷ⅰa和ⅰb的收得率0.25%和0.17%基本一致。
2.3其他方法
王力生等［33］以tlc为检测手段，考察d-101大孔吸附树脂对苦玄参总皂苷的吸附和洗脱条件，并采用分光光度法测定提取物中苦玄参皂苷的含量。结果d-101大孔吸附树脂可以把苦玄参总皂苷含量由浸膏中的8.7%提高至27.3%，增加20%乙醇洗脱操作可进一步提高至52.1%；苦玄参总皂苷的最大吸收波长为261 nm，与苦玄参苷ⅰa一致。苦玄参苷ⅰa在4.56～91.2 μg/ml与吸光度呈良好的线性关系，平均回收率为96.3%。结果表明，d-101大孔吸附树脂能有效富集并纯化苦玄参总皂苷；分光光度法测定苦玄参总皂苷含量具有快捷、准确的特点。
3结语
苦玄参所含化学成分复杂，具有多种生物活性。本文依据皂苷元母核将其归纳分类，为进一步探讨苦玄参的化学成分和构效关系研究提供了方便和依据。苦玄参苷ia是苦玄参三萜部位中含量最高的成分，在干植物中的含量约为0.25%〔12〕，有中枢抑制作用和抗补体作用〔3〕，是苦玄参的主要活性成分，因此苦玄参定量分析方面报道最多的是苦玄参苷ⅰa的含量测定，各地苦玄参药材中苦玄参苷ⅰa的含量差异较大，含量的差异与很多因素有关，与采收的季节也有关系，因此，今后可对苦玄参的最佳采收期及最适加工方法进行进一步考究。苦玄参苷ⅰa的含量测定方法比较发现，薄层扫描法测定含量时易出现斑点不清、拖尾等现象。高效液相色谱法集分离和测定为一体，简便、稳定、重复性好，易与其他干扰成分分开，可作为苦玄参质量控制的研究方法。
【参考文献】
〔1〕壮族自治区卫生厅．中药材标准（1900年版）〔s〕.：科学技术，1992：225．
〔2〕中国药材公司．中国中药资源志要〔m〕.：科学，1994：1149．〔3〕ying huang, tess de bruyne, sandra apers, et al．complement-inhibiting cucurbitacin glycosides from fel-tarrae〔j〕.j. nat. prod.，1998，61：757．
〔4〕成桂仁，金静兰，文永新，等．自苦玄参中分得五种新三萜化合物〔j〕.药学通报，1981，16：116．
〔5〕福森，启泰，海富．环氧形苦玄参苷元的晶体机构〔j〕.物理学报，1981，30(8)：1141．
〔6〕成桂仁，金静兰，甘立宪．苦玄参酮ⅰ的结构〔j〕.植物学报，1982，24 (2)：194．
〔7〕成桂仁，金静兰，文永新，等．苦玄参化学成分研究ⅰ-苦玄参苷元ⅰ的结构〔j〕.化学学报，1982，40(8)：737．
〔8〕甘立宪，伍文超，周维善，等．苦玄参化学成分研究ⅱ-苦玄参苷元ⅱ和ⅲ的结构〔j〕.化学学报，1982，40(9)：812.
〔9〕甘立宪，周维善，成桂仁，等．苦玄参苷元ⅳ及其降解产物的结构研究〔j〕.植物学报，1982，24(1)：59．
〔10〕甘立宪，毛国清，伍文超，等．苦玄参化学成分的研究ⅴ-苦玄参苷元v 和vi的结构〔j〕.化学学报，1982,，40(10)：926．
〔11〕甘立宪，毛国清，伍文超，等．苦玄参化学成分的研究ⅵ-苦玄参苷元2及有关化合物的立体化学〔j〕.化学学报，1984，42(1)：70．
〔12〕成挂仁，金静兰，文永新，等．苦玄参化学成分的研究ⅶ-苦玄参戒ⅰa 和ⅰb的结构〔j〕.化学学报，1985，43．374．
〔13〕金静兰，文永新，成桂仁，等．苦玄参化学成分的研究ⅷ-苦玄参苷ⅱ的结构〔j〕.化学学报，1987，45(10)：1133．
〔14〕成桂仁，金静兰，文永新，等．苦玄参苷a和b的结构〔j〕.植物，1984,，4(1)：51．
〔15〕lin youjun, chen zhongliang．new tetracyclic triperpene glycoside from picria fel-tarrae lour〔j〕.journal of asian natural products research，1998，1 (1)：21．〔16〕gan lixian, chen yuqing, zhou weishan, et al．studies on triterpenoids and their glycosides from chinese medicinal herb picria fel-tarrae lour〔j〕.studies in organic chemistry (amsterdam)，1986，26 (new trends natural product chemistry)：95．〔17〕lihong hu, zhongliang chen, yuyuan xie．new triterpenoid saponins from picria fel-tarrae〔j〕.j. nat. prod.，1996，59 (12)：1186．
〔18〕huang, ying, de bruyne, tess, apers, et al．flavonoid glucuronides from picria fel-tarrae〔j〕.phytochemistry，1999，52(8)：1701．
〔19〕王力生，马学敏，郭亚健．苦玄参的化学成分研究〔j〕.中国中药杂志，2014，29（2）：149．
〔20〕邹节明，王力生，马学敏．苦玄参中一个新葫芦素成分的分离与结构鉴定〔j〕.药学学报，2014，39（11）：910．
〔21〕邹节明，王力生，郭亚健，等．苦玄参中一个新苦玄参酮苷的分离与结构鉴定〔j〕.药学学报，2014，40(1)：36．
〔22〕周芳，萍，勇，等．苦玄参干浸膏抗炎镇痛作用的实验研究〔j〕.中国中医药科技，2014，13(4)：244．
〔23〕国家药典委员会．中国药典，ⅰ部〔s〕.：化学工业．2014：457．〔24〕勇，甄汉深，婧，等．hplc法测定苦玄参中苦玄参苷ⅰa的含量〔j〕.世界科学技术一中医药现代化，2014，8（6）：28．
〔25〕邹节明，阮征，建华，等．超滤技术分离中药有效成分的实验研究〔j〕.中国医药学报，2014，18(2)：76．
〔26〕成远，钟宏．高效液相色谱法测定不同产地苦玄参中苦玄参苷ⅰa含量〔j〕.化学工程师，2014，2：37．
〔27〕邹节明，陆浩，何斌，等．苦玄参、黄芩与黄柏的大孔树脂提取研究〔j〕.中草药，2014，34(3)：222．
〔28〕甄汉深，何翠薇，勇，等．高效液相色谱法测定苦玄参药材中的苦玄参苷ⅰa含量〔j〕.科学院学报，2014，22(s)：403．
〔29〕胡慧玲，付超美，王战国．hplc测定妇炎宁片中苦玄参苷ⅰa的含量〔j〕.中成药，2014，29(3)：附10．
〔30〕邹节明，王力生，严海，等．tlcs法测定苦玄参中苦玄参苷ⅰa和ⅰb的含量〔j〕.药物分析杂志，2014，25(6)：654．
〔31〕勇．几种含苦玄参的中成药定性定量研究〔j〕.中国现代应用药学杂志，2014，17(2)：106．〔32〕明廉．苦玄参中苦玄参甙ⅰa的含量测定〔j〕.医学院学报，1997，10(6)：698．
〔33〕王力生，邹节明，郭亚健．d-101大孔吸附树脂纯化苦玄参总皂苷的研究〔j〕.中草药，2014，35(5)：515．