山西医科大学
硕士学位论文
GM-CSF基因治疗白血病的实验研究
姓名：付素珍
申请学位级别：硕士
专业：儿科学
指导教师：李亚蕊;杨达胜
20030611
ＧＭ—ＣＳＦ基因治疗白血病的实验研究
摘要
白血病是儿童和青少年常见的恶性肿瘤之一，鉴于白血病细胞的不局限性，其治疗方法受到很大的限制。抗肿瘤免疫反应主要是由细胞介导的，Ｔ细胞是主要的效应细胞。肿瘤抗原须经过抗原递呈细胞的加工、递呈才能有效激活Ｔ淋巴细胞。树突状细胞是专职的、最重要的抗原递呈细胞，在抗肿瘤免疫应答过程中发挥重要作用。ＧＭ．ＣＳＦ能促进树突状细胞分化、成熟，刺激ＭＨＣ分子和共刺激分子表达，并具有诱导粒细胞和巨噬细胞分化和调节免疫应答的作用。本研究呆用分子克隆技术，构建小鼠ＧＭ—ＣＳＦ（ｍＧＭ．ＣＳＦ）真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．ＧＭ．ｃｓＦ，并用电穿孔法将其导入白血病细胞系ＦＢＬ．３，筛选鉴定后，用丝裂霉素灭活制备转ＧＭ—ＣＳＦ基因瘤苗，初步探讨其作为瘤苗的有效性，并由此探索白血病免疫治疗的可行性。主要研究结果如下：
１．真核表达重组质粒ｐｃＤＮＡ３一ＧＭ—ｃｓＦ的构建
用ＰＣＲ方法从ＰＥＴ．３０ａ（＋）一ＧＭ．ＣＳＦ原核表达重组质粒扩增目的ｃＤＮＡ序列，并引入ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ酶切位点。用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切ＰＣＲ产物后装入ｐｃＤＮＡ３空载质粒，构建了真核表达重组质粒ｐｃＤＮＡ３．ＧＭ．ＣＳＦ。酶切和测序结果与预期相符，无插入、丢失、突变，并且方向正确。
２．电穿孔法转染ＦＢＬ．３细胞及ＧＭ．ＣＳＦ高表达细胞克隆的筛选用电穿孔法将ｐｃＤＮＡ３．ＧＭ—ＣＳＦ重组质粒转染入小鼠红白血病细胞系ＦＢＬ一３细胞，经Ｇ。，。筛选和限制性稀释法克隆化后，获
得Ｇ４１８抗性细胞克隆。经ｑ，８筛选、ＰＣＲ和ＲＴ—ＰＣＲ鉴定，证明ＧＭ—ＣＳＦ基因整合到了受体细胞染色体中并稳定表达。应用ＲＴ—ＰＣＲ、骨髓造血祖细胞增殖实验和骨髓造血祖细胞集落刺激实验筛选出了相对高表达ＧＭ—ＣＳＦ的细胞克隆ＦＢＬ．３一ＧＭ—ＣＳＦ（克隆３）。
３．ＦＢＬ．３．ＧＭ．ＣＳＦ细胞生物学特性
ＦＢＬ一３一ＧＭ—ＣＳＦ细胞体外生物学特性与ＦＢＬ．３．ｖｅｃｔ和ＦＢＬ．３细胞相比没有明显差异，它们的细胞形态间无差别，生长速度亦相似。体内致瘤性实验中，各组肿瘤均持续生长，但同一接种数量间相比，ＦＢＬ－３－ＧＭ－ＣＳＦ平均出瘤时间比ＦＢＬ一３一ｖｅｃｔ和ＦＢＬ．３晚，肿块平均体积也相应较小，生存期略有延长，但均无显著性差异。４．丝裂霉素灭活ＦＢＬ．３．ＧＭ．ＣＳＦ后作为瘤苗的有效性和白血病免疫治疗的可行性
丝裂霉素灭活ＦＢＩ。．３．ＧＭ．ＣＳＦ后作为瘤苗，免疫小鼠产生的免疫保护力，明显强于ＦＢＬ一３．ｖｅｃｔ和ＦＢＬ．３。ＦＢＬ．３．ＧＭ．ＣＳＦ组与ＦＢＬ一３一ｖｅｃｔ、亲本ＦＢＬ．３肿瘤细胞和ＰＢＳ对照组相比出瘤时间晚、肿瘤生长速度慢、小鼠生存期延长，其中有４／１０的小鼠长期存活（超过６０天）。另外，转基因瘤苗免疫治疗动物实验结果也显示：与ＦＢＬ．３．ｖｅｃｔ、亲本ＦＢＬ．３肿瘤细胞和ＰＢＳ对照组相比ＦＢＬ一３一ＧＭ—ＣＳＦ组肿瘤生长速度受到明显抑制，其中２只小鼠肿瘤完全消失；小鼠生存期延长，其中有２／１０的小鼠长期存活（超过６０天）。
以上研究结果显示出丝裂霉素灭活ＦＢＬ＇－３．ＧＭ．ＣＳＦ后作为瘤苗的有效性和白血病免疫治疗的可行性。为进一步的临床研究和应用打下了基础。
关键词：白血病ＧＭ．ＣＳＦ瘤苗免疫预防免疫治疗
ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｙｏｆＧＭ—ＣＳＦＧｅｎｅ
ＴｈｅｒａｐｙｏｆＬｅｕｋｅｍｉａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ
Ｔｈｅ１ｅｕｋｅｍｉａｉｓａｃｏｍｍｏｎｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｆｏｒｃｈｉｌｄｒｅｎａｎｄｔｅｅｎ－
ａｇｅｒｓ．Ｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｓｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｗｅｒｅｃｏｎｆｉｎｅｄｂｙｔｈｅｄｉｆｆｕｓｉｏｎｏｆｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓ．Ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｉｔｙｉｓｐｒｉｍａｒｉｌｙｃｅｌｌ—ｍｅｄｉａｔｅｄ，ｗｉｔｈＴ
ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓａｓｔｈｅｍａｉｎｅｆｆｅｃｔｏｒｃｅｌｌｓ．Ｔｕｍｏｒａｎｔｉｇｅｎｓａｒｅｆｉｒｓｔ
ｃｅｌｌｓ（ｈｐｃ）．Ｔｈｅｐｒｏｃｅｓｓｅｄａｎｄｐｒｅｓｅｎｔｅｄｂｙａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ
ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃｐｅｐｔｉｄｅｓａｒｅｅｘｐｒｅｓｓｅｄｏｎＡＰＣｉｎｔｈｅｃｏｎｔｅｘｔｏｆＭＨＣｃｌａｓｓＩｍｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄｐｒｅｓｅｎｔｅｄｔｏＴｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ（ＤＣ）ｉＳｔｈｅｍｏｓｔｉｍｐｏｒｔａｎｔＡＰＣｉｎｔｈｅｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅ．ＧＭ．ＣＳＦｉｓａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｉｍｍｕｎｅｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｃｙｔｏｋｉｎｅｔｈａｔ
ｔｈｅｉｒｐｒｏｍｏｔｅｍａｔｕｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＤＣ，ｕｐ—ｒｅｇｕｌａｔｅ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＭＨＣｍｏｌｅｃｕｌｅｓａｎｄｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，ｉｎｄｕｃｅ
ｏｆｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅａｎｄｍｏｎｏｃｙｔｅ‘ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ＧＭ—ＣＳＦｇｅｎｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅｌｉｎｅａｇｅｓ．Ｉｎｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｓｔｕｄｙ，ａｍｏｕｓｅ
ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｗａｓ
ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｗａｓｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＦＢＬ一３ｃｅｌｌｓｂｙｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ．Ｔｈｅａｉｍｏｆｔｈｉｓｓｔｕｄｙｉｓｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈ
ａｎｄｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｍｉｔｏｍｙｃｉｎ—ＣｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＦＢＬ．３．ＧＭ．ＣＳＦｉｎｔｏｍｉｃｅ
ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｔｈｅｍａｉｎｒｅｓｕｌｔｓａｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓ：
ｉｍｍｕｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｆ
１．ＴｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆｐｃＤＮＡ３一ＧＭ－ＣＳＦｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄ
３
ＭｏｕｓｅＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡｗａｓａｍｐｌｉｆｉｅｄｆｒｏｍｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｏｆＰＥＴ一３０ａ（＋）一ＧＭ—ＣＳＦｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｂｙＰＣＲｆｉｒｓｔａｎｄＢａｍＨＩａｎｄＥｃｏＲＩｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｓｉｔｅｓｗｅｒｅｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄ．ＴｈｅｉｎｓｅｒｔｅｄｆｒａｇｍｅｎｔｗａｓｃｕｔｂｙＢａｍＨＩａｎｄＥｃｏＲＩｄｉｇｅｓｔｉｏｎａｎｄｌｉｇａｔｅｄｉｎｔｏｐｃＤＮＡ３ｖｅｃｔｏｒ．ＴｈｅｐｃＤＮＡ３?－ＧＭ－－ＣＳＦｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｗａｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｗａｓｃｌｅａｖｅｄｗｉｔｈａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅｅｎｄｏｎｅｕｃｌｅａｓｅｓａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｏｒｉｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｉｎｓｅｒｔｗａｓｆｏｕｎｄｔｏｂｅｃｏｒｒｅｃｔ，ｗｈｉｌｅｎｏｒｅａｒｒａｎｇｅｍｅｎｔｏｒｍｕｔａｔｉｏｎｗａｓｆｏｕｎｄ．
２．ＴｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎｉｎｔｏＦＢＬ一３ｃｅｌｌｓｂｙｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎａｎｄｓｅｌｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｈｉｇｈＧＭ－ＣＳＦｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃｅｌｌｃｌｏｎｅ
ＴｈｅｐｃＤＮＡ３?－ＧＭ－－ＣＳＦｅｕｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｐｌａｓｍｉｄｗａｓ
ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄｉｎｔｏＦＢＬ一３ｃｅｌｌｓｂｙｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ．ＡｆｔｅｒｓｃｒｅｅｎｉｎｇｂｙＧ４１８ａｎｄｃｌｏｎｉｎｇｂｙｌｉｍｉｔｉｎｇｄｉｌｕｔｉｏｎ，ｗｅｏｂｔａｉｎｅｄｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｌｃｌｏｎｅｓ（ＦＢＬ．３一ＧＭ—ＣＳＦ）．ＰＣＲａｎｄＲＴ—ＰＣＲａｓｓａｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＧＭ－ＣＳＦｇｅｎｅｈａｓｉｎｔｅｇｒａｔｅｄｉｎｔｏＦＢＬ－３－ＧＭ—ＣＳＦｃｅｌｌｓａｎｄｓｔａｂｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄ．Ｔｈｅｎ，ａｈｉｇｈＧＭ－ＣＳＦｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｃｅｌｌｃｌｏｎｅ（ｃｌｏｎｅ３）ｗａｓｓｅｌｅｃｔｅｄｂｙＲＴ－ＰＣＲ，ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅａｓｓａｙａｎｄｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒｃｅｌｌｃｏｌｏｎｙｆｏｒｍａｔｉｏｎａｓｓａｙ．
３．ＴｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＦＢＬ一３－ＧＭ－ＣＳＦｃｅｌｌｓ
ＴｈｅｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆＦＢＬ．３．ＧＭ—ＣＳＦｃｅｌｌｓｈａｄｎ’ｔ
ａｎｄＦＢＬ－３ｃｅｌｌｓ，ｏｂｖｉｏｕｓｌｙｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｃｏｍｐａｒｉｎｇｗｉｔｈＦＢＬ一３一ｖｅｃｔ
ｏｎ．ＴｈｅｉｎｃｌｕｄｉｎｇｃｅｌｌｕｌａｒｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙａｎｄｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｓａｎｄＳＯ
ＦＢＬ．．３．．ＧＭ．．ＣＳＦｃｅｌｌｓｗｅｒｅｉｎｊｅｃｔｅｄｉｎｔｏｔｈｅｓｙｎｇｅｎｉｃｍｉｃｅａｎｄｆｏｕｎｄｔｈａｔｔｕｍｏｒｆｏｒｍａｔｉｏｎｗａｓｄｅｌａｙｅｄａｎｄｔｉｍｅｏｆｓｕｒｖｉｖａｌｗａｓｌｅｎｇｔｈｅｎｅｄｓｌｉｇｈｔｌｙａｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅＦＢＬ－３．ｖｅｃｔａｎｄＦＢＬ－３ｃｅｌｌｓ．
４．Ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｍｉｔｏｍｙｃｉｎ—ＣｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＦＢＬ－３－
４
ＧＭ—ＣＳＦｉｎｔｏｍｉｃｅａｎｄｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｉｍｍｕｎｅ
ｔｈｅｒａｐｙｏｆｌｅｕｋｅｍｉａＴｈｅｄａｔｅｏｆａｎｉｍａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｍｉｔｏｍｙｃｉｎ—ＣｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＦＢＬ一３一ＧＭ—ＣＳＦｉｎｔｏｍｉｃｅｃｏｕｌｄｉｎｄｕｃｅｐｏｔｅｍａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｉｒｌｌｎｌｕｎｅｒｅａｃｔｉｏｎｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈＦＢＬ。３一ｖｅｃｔ，ＦＢＬ一３ｃｅｌｌｓａｎｄＰＢＳ．Ｆｏｒｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｍｉｔｏｍｙｃｉｎ．ＣｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＦＢＬ－３一ＧＭ—ＣＳＦｉｎｔｏｍｉｃｅ．ｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅｓｏｆｔｕｍｏｒｗｅｒｅｄｅｃｒｅａｓｅｄｍａｒｋｅｄｌｙａｎｄｔｉｍｅｏｆｓｕｒｖｉｖａｌｏｆｍｉｃｅｗａｓｌｅｎｇｔｈｅｎｅｄｄｒａｍａｔｉｃａｌｌｙａｓｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅＦＢＬ一３一ｖｅｃｔａｎｄＦＢＬ一３ｃｅｌｌｓａｎｄＰＢＳｇｒｏｕｐｓ．Ｔｈｅａｂｏｖｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎｗｉｔｈｍｉｔｏｍｙｃｉｎ．ＣｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄＦＢＬ－３一ＧＭ—ＣＳＦｉｎｔｏｍｉｃｅａｎｄｆｅａｓｉｂｉｌｉｔｙｏｆｉｍｍｕｎｅｔｈｅｒａｐｙｏｆｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｐｒｏｖｉｄｅｄｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｎｄｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌｄａｔａｆｏｒｃｌｉｎｉｃａｌｓｔｕｄｙａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｌｅｕｋｅｍｉａ；ＧＭ—ＣＳＦ；ＧＭ－ＣＳＦｇｅｎｅ—ｍｏｄｉｆｉｅｄｖａｃｃｉｎｅｏｆｔｕｍｏｒｃｅｌｌ；Ｉｍｍｕｎｅｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ：Ｉｍｍｕｎｅｔｈｅｒａｐｙ
５
ＧＭ—ＣＳＦ基因治疗白血病的实验研究
刖蟊
白血病（Ｌｅｕｋｅｍｉａ）是我国常见的十大恶性肿瘤之一，在我国各种恶性肿瘤死亡率中，白血病居第６位或第７位，但在儿童和青少年恶性肿瘤中，白血病居第ｌ位。鉴于白血病细胞的不局限性，其治疗方法受到很大的限制。因此，积极探索白血病新的治疗途径正日益受到关注。
１９０１年，ＤａｕｌＥｈｒｌｉｃｈ首次提出机体免疫系统具有控制肿瘤生长的能力，７０年代初，Ｂｕｍｅｔ正式提出免疫监视学说（ＩｍｍｕｎｅＳｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ），认为肿瘤能被免疫系统识别，视为“非己”而被宿主排斥。许多事实均支持肿瘤免疫的存在：某些肿瘤自发消退的现象、纯系同基因动物肿瘤移植排斥实验、免疫抑制后导致肿瘤发病率提高Ｉ”等。已经证实突变或重排的癌基因和抑癌基因产物ｆ２Ｊ、病毒编码的抗原【３Ｊ、肿瘤细胞内异常激活的蛋白Ｈｊ等均可作为肿瘤抗原，被主要组织相容性复合物（ｍａｊｏｒｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙｃｏｍｐｌｅｘ，ＭＨＣ）分子递呈，激活Ｔ细胞。自从第一个人肿瘤抗原ＭＡＧＥ一】被发现证实以来Ｉ”，已发现了大量能激活免疫系统产生保护性应答的人肿瘤相关或特异抗原，人肿瘤抗原的存在已不再成为争议。
抗肿瘤免疫主要是由细胞介导的，其中Ｔ细胞介导的特异性免疫反应在抗肿瘤免疫中发挥重要作用１６】。Ｔ细胞的有效激活至少需要两种信号，一种是由ＴＣＲ／ＣＤ３与ＭＨＣ—Ａｇ相互作用所传递的抗原特异性信号，另一种是由Ｂ７等共刺激分子和黏附分子所传递的非抗原特异性信号，如果缺乏该信号，ＭＨＣ．Ａｇ复合物与ＴＣＲ／ＣＤ３
结合可导致Ｔ细胞克隆性无反应或缺失『７Ｊ。参与第二信号传递的共刺激分子包括：Ｂ７、ＩＣＡＭ一】、ＬＦＡ一３．ＨＡＳ等【８１。
肿瘤细胞往往缺乏共刺激分子和粘附分子［９１，ＭＨＣ分子表达低下或缺如１１０】，抗原加工、递呈也存在许多缺陷Ｉ”１。因此，肿瘤细胞常不能有效地向Ｔ细胞递呈抗原，也不能有效地激活Ｔ细胞产生抗肿瘤免疫应答。如何提高肿瘤患者的抗肿瘤免疫反应，成为目前抗肿瘤研究的热点之一。若要激活Ｔ细胞抗肿瘤免疫反应，肿瘤抗原须经过抗原递呈细胞（ａｎｔｉｇｅｎｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｃｅｌｌ，ＡＰＣ）加工、递呈，由ＡＰＣ激活Ｔ淋巴细胞。因此，在肿瘤免疫应答的起始中，ＡＰＣ发挥重要作用。在已知的ＡＰＣ中，树突状细胞（ｄｅｎｄｒｉｔｉｃｃｅｌｌ，ＤＣ）是专职的、最重要的ＡＰＣ，只有它才能激活纯真的Ｔ淋巴细胞｜ｌ２１。ＤＣ具有特异的移行和成熟功能¨３ｌ，在周围组织中它们处于非成熟状态，能高效率捕获抗原，随后即沿外周淋巴管向淋巴结移行，此时，其抗原捕获能力降低，而细胞表面表达高密度的ＭＨＣ分子和共刺激分子而变为成熟的ＤＣ，到达淋巴结的Ｔ淋巴细胞库中高效激活抗原特异的Ｔ淋巴细胞ＩＩ４１。
为了增进机体的抗肿瘤免疫功能，可通过增加肿瘤细胞免疫原性和／或使ＡＰＣ高效获得肿瘤抗原等方法来完成。如：将肿瘤抗原与ＤＣ共育ⅢＪ、肿瘤抗原小肽直接负载给ＤＣＩ怕Ｊ、肿瘤ＲＮＡ导入ＡＰＣＩｌ７Ｊ、肿瘤细胞和ＡＰＣＩｌ８ｌ、肿瘤细胞内导入细胞因子Ｉ旧Ｊ等。
粒细胞一巨噬细胞集落刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅｍａｃｒｏｐｈａｇｅ—
ｃｏｌｏｎｓ，～ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｆａｃｔｏｒ，ＧＭ—ＣＳＦ）能促进ＤＣ分化、成熟，刺激ＭＨＣ分子和共刺激分子表达，并具有诱导粒细胞和巨噬细胞分化和调节免疫应答的作用ｍＩ。近年来，ＧＭ—ＣＳＦ在抗肿瘤免疫中的作用愈加受到重视。
将ＧＭ—ＣＳＦ基因导入肿瘤细胞后再用射线或丝裂霉素灭活，使瘤细胞不致瘤，但灭活的瘤细胞仍能保持一段时间分泌ＧＭ．ＣＳＦ，此即转ＧＭ—ＣＳＦ基因瘤苗。将转ＧＭ—ＣＳＦ基因瘤苗接种于局部皮肤后，则瘤细胞分泌的ＧＭ—ＣＳＦ可募集并诱导ＤＣ增生并有效捕捉肿瘤抗原，进而到淋巴结中激活Ｔ淋巴细胞，激活抗肿瘤免疫。转ＧＭ．ＣＳＦ基因瘤苗的研究，目前主要局限于肾细胞癌、胰腺癌、骨髓瘤和淋巴瘤【２】’２２。２３Ｉ等，未见用于白血病的研究。
为此，本研究采用分子克隆技术，构建小鼠ＧＭ—ＣＳＦ（ｍＧＭ．ＣＳＦ）真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．ＧＭ．ＣＳＦ，并用电穿孔法将其导入白血病细胞系ＦＢＬ一３，筛选鉴定后，用丝裂霉素灭活制备转ＧＭ—ＣＳＦ基因瘤苗，初步探讨其作为瘤苗的有效性，并由此探索白血病免疫治疗的可行性。
实验材料
一、研究材料
１．菌株
ＤＨ５ａ由新乡医学院分子生物学实验室保存。
２．质粒
（１）ＰＥＴ一３０ａ（＋）一ＧＭ—ＣＳＦ原核表达重组质粒由千新来博士惠赠，该质粒含编码分泌性ＧＭ．ＣＳＦ蛋白的从ＧＭ．ＣＳＦ全长ｃＤＮＡ第二个ＡＴＧ开始的ＧＭ—ＣＳＦ的ｃＤＮＡ序列。
（２）ｐｃＤＮＡ３真核表达质粒由新乡医学院分子生物学实验室保存。３．细胞系
ＦＢＬ一３红白血病细胞系（Ｃ５７ＢＬ／６小鼠来源）由新乡医学院分子生物学实验室保存。
４．实验动物
Ｃ５７ＢＬ／６小鼠购于中国医学科学院实验动物所。
二、主要试剂
１．工具酶及分子量参照物
（１）限制性内切酶：ＮｄｅＩ、Ｓａｌｌ、ＥｃｏＲＩ、ＢａｍＨｌ：Ｐｒｏｍｅｇａ公司（２）Ｔ４ＤＮＡ连接酶：Ｐｒｏｍｅｇａ公司
（３）Ｔａｑ酶、ＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔＩＩＲｎａｓｅＨＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ：
ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ公司
（４）ＤＮＡ分子量参照物：ｌ００ｂｐＤＮＡＭａｒｋｅｒｓ和入ＤＮＡ／ＨｉｎｄｌＩＩ
Ｍａｒｋｅｒｓ：Ｐｒｏｍｅｇａ公司
２．生化试剂
（１）琼脂糖、Ｔｒｉｓ：ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ公司
细菌分离培养方法及操作步骤无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基,37℃恒温培养24 h,观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法与实验动物分离法。 平板划线接种法 这就是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落(有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌),以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作: 1、右手持接种环,在酒精灯上火焰灭菌; 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后,挑取被检料少许,左手持琼脂平板,以食指为
支点,用拇指与无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时,迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。 3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。(注意:划线时,以腕力使接种环在琼脂平板表面划动,尽量不要划破培养基,划的线条要密,但不能重复旧线,以免培养物形成菌 苔。) 图3 平板划线接种法 4、划线完毕,合上平皿盖,将琼脂平板倒置,放入37℃温箱内培养
18－24小时。 注意:分离培养用的平板培养基应表面干燥,可于临用前置37℃孵育箱内30分钟,这样表面即干燥有利于分离培养,又使培养基预温,对培养某些较娇弱的细菌有利。 细菌药敏试验方法操作步骤药敏试验就是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节,一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药,减少抗菌素使用的盲目性,从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中,用经(酒精灯)火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式; 用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后,找到第二点划线至平皿的1/2,依次划线,直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线
白血病职业病的诊断标准 必须是在从事职业活动的过程中产生的，必须是国家公布的职业病分类和目录所列的职业病才能称作职业病。 白血病职业病诊断标准： （１）体征：皮肤出血斑点，胸骨压痛，淋巴结、肝脾肿大。 （２）临床症状：急骤高热，进行性贫血或显著出血，周身酸痛乏力。 （３）实验室：血象白细胞总是明显增多（或减少），可出现原始或幼稚细胞。骨髓象骨髓有核红细胞占全部有核细胞50%以下，原始细胞≥30%，可诊断为急性白血病；如骨髓有核红细胞≥50%，原始细胞占非红系细胞的比例 ≥30%，可诊断为急性红白血病。 中国职业病呈现的特点是： （１）接触职业病危害人数多，患病数量大。 （２）职业病危害分布行业广，中小企业危害严重。 （３）职业病危害流动性大、危害转移严重。 （４）职业病具有隐匿性、迟发性特点，危害往往被忽视。 （５）职业病危害造成的经济损失巨大，影响长远。 职业病定义： （１）职业病，劳动者在职业活动中接触职业性危害因素所直接引起的疾病。 （２）法定职业病，以法规形式规定的职业病，称为法定职业病。2013版《职业病分类和目录》中所列的132种疾病。 （３）职业病诊断标准，具有法规意义的职业病诊断技术标准。作为职业病科和有关临床医师诊断及处理职业病的依据。 （４）职业病诊断分级标准，采用能作为职业病诊断依据的临床及实验室有代表性的指标，区别病情的严重程度。
（５）现场调查，深入作业或事故现场进行调查，旨在了解职业危害因素 的品种、性质、来源、同工种人群的接触情况及健康状况，必要时进行作业环 境的监测及接触者的健康检查等以明确职业性危害因素与健康损害的关系。 （６）职业病诊断，对某种疾病的本质、病情程度及其与职业性危害因素 有无因果关系所作出的判断结论。必须依据职业史、现场调查和医学检查的结果，进行综合辨证分析和逻辑推理，除外类似表现的其他疾患，方可作出诊断。
表1A.美国临床微生物学实验室在非苛养菌常规试验和报告中应考虑的具有FDA临床适应证的抗菌药物建议分组总注释： A.对四环素敏感的菌株被认为对多西环素和米诺环素也敏感。然而，某些对四环素中介或耐药的 菌株可能对多西环素、米诺环素或二者敏感。 B.利福平不能单独用于抗菌治疗。 C.分离于泌尿道菌株不被常规报告。 D.头孢噻吩仅被用于预报口服药物结果，包括头孢氨苄、头孢泊肟、头孢氨苄和氯碳头孢。以前 关于头孢噻吩结果可预报其他头孢菌素敏感性建议仍然正确，但近年来还没有数据证实此建议。 E.当测试粪便中分离的沙门菌和志贺菌株时，只有氨苄西林、一种氟喹诺酮类和复方新诺明可用 于常规报告。另外，对肠道外感染沙门菌粉分离株，应测试并报告一种三代头孢菌素，假如需要，也可测试和报告氯霉素。分离于肠道内和肠道外伤寒样沙门菌（伤寒沙门菌和副伤寒沙门菌A-C）需进行药敏试验。分离于肠道内非伤寒样沙门菌不需进行常规药敏试验。 F.从CSF中分离菌株，试验和报告头孢噻肟和头孢曲松，以取代头孢唑林。 G.其他非肠杆菌科细菌包括假单胞菌和其他非苛养、非发酵葡萄球菌的革兰阴性杆菌，但不包括 铜绿假单胞菌、不动杆菌、洋葱伯克霍尔德菌和嗜麦芽窄食单胞菌，因为对这些菌种的建议试验和报告药物表格已分开。 鼻疽伯克霍尔德菌和假鼻疽伯克霍尔德菌试验和报告药物建议请参阅CLSIM45文件。 H.仅对金黄色葡萄球菌包括耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA） I.青霉素敏感的葡萄球菌对葡萄球菌感染具有临床疗效的其他β-内酰胺类药物也敏感。青霉素耐 药葡萄球菌对青霉素酶不稳定青霉素类耐药。除具有抗-MRSA活性新的头孢菌素外，苯唑西林耐药葡萄球菌对当前所有使用的β-内酰胺类药物均耐药。因此，仅测试青霉素和头孢西丁或苯唑西林二者中任一种，则可推测对各种β-内酰胺类药物的敏感或耐药性。除具有抗-MRSA 活性药物外，不建议常规测试其他β-内酰胺类药物。 J.分离于呼吸道菌株不报告达托霉素结果。 K.头孢西丁纸片扩散法或MIC试验结果可用于预报金黄色葡萄球菌和路登葡萄球菌分离株是否存在mecA介导的苯唑西林耐药。对凝固酶阴性葡萄球菌(除路登葡萄球菌外)，检测mecA介
急性白血病的诊断检查方法有哪些 急性白血病的发病率逐年上升，尤其是在儿童及青年恶性肿瘤中，白血病已列足首位，死亡率较高。而长期存活率也不容乐观，例如白血病中的急性淋巴细胞瘤，其成人2年生存率国外先进水平才30%-50%，国内不足30%，疗效差的甚至不到10%。 急性白血病的诊断方法介绍 1、症状和体征 （1）发热：发热大多数是由感染所致。 （2）出血：早期可有皮肤粘膜出血；继而内脏出血或并发弥散性血管内凝血。 （3）贫血：进行性加重。 （4）白血病细胞的浸润表现：淋巴结、肝、脾肿大，胸骨压痛。亦可表现其他部位浸润，如出现胸腔积液、腹腔积液或心包积液，以及中枢神经系统浸润等。 2、血细胞计数及分类：大部分患者均有贫血，多为中重度；白细胞计数可高可低，血涂片可见不同数量的白血病细胞；血小板计数大多数小于正常。 3、骨髓检查：形态学，活检（必要时）。 4、免疫分型 5、细胞遗传学：核型分析、FISH(必要时） 6、有条件时行分子生物学检测 根据临床表现、血象和骨髓象特点，诊断一般不难。由于白血病类型不同，治疗方案及预后亦不尽相同，因此诊断成立后，应进一步分型。此外，还应与下列疾病作鉴别。 1、骨髓增生异常综合征 该病的RAEB及RAEB-T型除病态造血外，外周血中有原始和幼稚细胞，全血细胞减少和染色体异常，易与白血病相混淆。但骨髓中原始细胞不到30%。 2、某些感染引起的白细胞异常 如传染性单核细胞增多症，血象中出现异形淋巴细胞，但形态与原始细胞不同，血清中嗜异性抗体效价逐步上升，病程短，可自愈。百日咳、传染性淋巴细胞增多症、风疹等病毒感染时，血象中淋巴细胞增多，但淋巴细胞形态正常，病程良性，多可自愈。
肺泡灌洗液细菌培养及药敏结果分析 发表时间：2018-02-02T15:22:23.477Z 来源：《临床医学教育》2017年12月作者：邹单东韦柳华程红革[导读] 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。 广西医科大学第四附属医院广西柳州545005 [摘要] 目的：了解肺泡灌洗液中细菌种类及耐药情况，为临床合理用药提供依据。方法：美国Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定及药敏试验。结果：灌洗液细菌培养阳性率56.2%；195例细菌中革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%；主要细菌依次是铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌。主要革兰阴性菌对亚胺培南耐药率为0～15.1%，大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产超广谱β-内酰 胺酶 (ESBLs)阳性率为62.5%、64.1%，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）检出率为60.0%，细菌多药耐药现象严重。结论：不同细菌对抗菌药物的耐药性不同，灌洗液细菌培养及药敏试验可为临床合理用药提供依据。 [关键词] 肺泡灌洗液；细菌分布；耐药性 [Abstract] Objection: in order to understand the type of bacteria and susceptibility test results in irrigating solution, and provide an according to rational use of drug for clinical.Methods: the instrument of identification and susceptibility test is Microscan Autoscan-4, USA.Result: the positive rate of irrigating solution is 56.2%; the Gram-negative bacteria has 90.8% in these 195 bacterias, and Gram-positive bacteria has 9.2%; the main type of these bacteria are Pseudomonas aeruginosa, Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii . the tate of the bacterias, which resist to imipenem, is 0~15.1% in these Gram-negative bacterias; the rate of Pneumonia crayresearch bacteria and baumanii, which product ESBLs, is 62.5%、64.1%,respectively; and the rate of MRSA is 60.0%. and the phenomenon of multidrug resistant is Very serious.Conclusion: the drug resistance of bacteria is differrent, the bacterial culture and susceptibility test results of irrigating solution can provide basis of rational drug use for clinical. [Key words] irrigating solution; Bacteria distribution; drug resistanc 下呼吸道感染是临床较为常见的感染，病原菌种类多、耐药性强。目前病原诊断普遍采用痰培养，但因其易污染，痰液质量难以保障，临床价值有限。肺泡灌洗液与痰液相比，对下呼吸道感染诊断具有更高特异性和敏感性，同时细菌药敏结果对临床抗感染治疗更具价值【l】。因此，我们对2010年从肺泡灌洗液中分离到的195例细菌的药敏结果进行回顾性分析，以期为临床抗感染治疗提供依据，现将结果报道如下。 1 材料和方法 1.1 标本来源 251例灌洗液为2010年我院住院患者予以纤支镜支气管肺泡灌洗治疗后采集所得。同一患者多次分离到的细菌不重复计入。 1.2 细菌鉴定和药敏试验采用Microscan Autoscan-4微生物分析仪对细菌作鉴定和药敏试验。药敏试验判断标准、结果解释、MRSA、ESBLs检测参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)标准【2】。定期用标准菌株做药敏质量控制。 1.3 数据处理数据均由WHONET 5.4软件分析处理所得。 2 结果 2.1 细菌分布 251例灌洗液细菌培养阳性率为56.2%(141/251)。共分离细菌195例，革兰阴性菌占90.8%，革兰阳性菌占9.2%，细菌构成比见表1。 2.2药敏结果大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌产ESBLs株为10例、25例，阳性率为62.5%、64.1%，MRSA 6例，检出率为60.0%。主要细菌对抗菌药物的耐药率，见表2。
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗指南(完整版) 成人急性淋巴细胞白血病(ALL)是最常见的成人急性白血病之一，约占成人急性白血病的20%~ 30%，目前国际上有比较统一的诊断标准和不同研究组报道的系统治疗方案，完全缓解(CR)率可达70%~90%，3~5年无病生存(DFS)率达30%~60%[1]；美国癌症综合网(NCCN)于2012年首次公布了ALL的诊断治疗指南，我国于2012年发表我国第1版成人ALL 诊断与治疗的专家共识[2]，得到了国内同行的认可。最近2016版WHO 造血与淋巴组织肿瘤分类[3]发表，对于ALL的分类有一些更新，提出了一些新概念；NCCN对于成人ALL的临床指南也先后几次修改[4]。基于此，对我国成人ALL诊断与治疗的专家共识进行了更新。 一、诊断分型 (一)概述 ALL诊断应采用MICM(形态学、免疫学、细胞遗传学和分子学)诊断模式[5]，诊断分型采用WHO 2016标准。最低标准应进行细胞形态学、免疫表型检查，以保证诊断的可靠性；骨髓中原始／幼稚淋巴细胞比例≥20％才可以诊断ALL；免疫分型应采用多参数流式细胞术，最低诊断分型可以参考1995年欧洲白血病免疫学分型协作组(EGIL)标准(表1)[6]，疾病分型参照WHO 2016版分类标准[3]。同时应除外混合表型急性白血病，混合表型急性白血病的系列确定建议参照WHO 2008造血及淋巴组织肿瘤分类的标准(表2)，可以同时参考1998 EGIL标准(表3)[7]。
表1 急性淋巴细胞白血病(ALL)的免疫学分型(EGIL，1995) 表2 混合表型急性白血病的WHO 2008诊断标准 表3 双表型急性白血病的诊断积分系统(EGIL, 1998)
入院记录 姓名: 工作单位:无 性别:女?职业:农民 年龄:４５岁入院日期:20１０年0４月２6日09时09分 民族:汉族记录日期:2010年04月26日 籍贯: 病史陈述者:患者本人 婚姻:已婚?可靠程度:可靠 家庭地址: 主诉:反复乏力、头晕5月余、 现病史:患者于入院前5月无明显诱因出现乏力、头晕,恶心,食欲下降,全身不适症状,伴有高热,最高体温达400C,咳嗽,无咳痰,腹胀,无明显腹痛,无鼻衄、牙龈出血,无便血、血尿。患者就诊,血常规检查回示:WＢC ４9。5×１09/Ｌ,RBC 1、46×10１2/Ｌ, HGB 53g/L,PLT 5×１09／Ｌ;诊断为:贫血;给予输注浓缩红细胞改善贫血,血浆预防出血,血小板增加血小板计数,预防出血,清开灵、头孢呋辛钠联合左氧氟沙星抗感染,未进行任何特殊检查及明确诊断,给予输注青霉素注射液等药物治疗,乏力、高热症状未明显好转,并呈进行性加重,出现乏力、头晕加重,体温40OC,经患者家属要求,转我院诊断治疗,我院急诊科以”重度贫血"收住我科,患者入院后,急查血常规回示:WＢC ４7。6×１０9/Ｌ,RBC １。25×１012/L, HＧB 46g／L,PLT 4×１09/L;骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(M１);给予第一周期ＤA方案(DＮR 40ｍg d1－3 ,Ａra－ｃ200ｍｇｄ１-7)静脉化疗;预防化疗副作用,抗感染及对症、支持治疗;2010年0１月０4日复查骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1-PR);第二周期Ｄ
A方案(ＤNＲ４0mg d1－3 ,Aｒa—c 20０mg d1－7)静脉化疗,积极预防骨髓抑制等治疗,定期腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病,2010年01月2８日复查骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1—ＣＲ);2０10年０2月0８日给予第三疗程给予大剂量阿糖胞苷化疗(Ara－ｃ2000mg ｄ１-３)+大剂量甲氨碟呤化疗,复查血常规:WＢC 1。１2×109/L,L 0。68×109/L,ＲＢC 2、17×101２/L,HGB 67ｇ/L,PLT ５9×109/Ｌ;病情好转出院;患者于20１0年03月17日再次来我科就诊,骨髓细胞形态学检查回示:急性粒细胞白血病未分化型(M1—CR);给予ＭA方案(MＩT 10mg d １－3,Ara-ｃ２0０ｍg ｄ１-7)静脉化疗,预防化疗副作用,及对症、支持治疗,２０10年０3月2４日给予腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病,复查血常规:WＢC 1、４９×１09/L,L 0。76×109/L, ＲＢＣ2、０2×101２/L,HGＢ６8g/L,ＰＬT １7８×109/Ｌ;患者病情好转出院。目前患者为进一步治疗来我科化疗,我科以＂急性粒细胞白血病未分化型(Ｍ1型)"收住。自发病以来,患者精神差,食欲、睡眠欠佳,大小便正常,体重无明显变化。 既往史:既往体健,否认肝炎、结核、伤寒等传染病史,否认心脏病、糖尿病等慢性病史,否认外伤及手术史、否认输血及血制品史。否认食物及药物过敏史,预防接种史不详。 个人史:生于原籍,无疫区居住史。生活规律,无粉尘、毒物及放射性物质接触史,无特殊不良嗜好、 月经史:14,3—５/2８—30,２010年04月1８日。既往色暗红,量中等,无痛经。 婚育史:已婚,育有１子２女,现爱人与孩子身体健康,家庭关系与睦、
实训细菌的药物敏感性试验 教学目标 使学生掌握细菌药物敏感性试验的操作方法，能够利用本试验方法选择敏感药物治疗兽医临床常见的细菌性传染病。 材料准备 1．器材：温箱、天平、打孔机、滤纸、无菌试管及吸管、镊子、接种环、酒精灯等。 2．试剂：蒸馏水。 3．培养基：普通琼脂平板。 4．菌种：金黄色葡萄球菌及大肠杆菌的固体培养物。 5．药品：链霉素、金霉素、新霉素、红霉素等抗菌药物。 6．硫酸钡标准管：取1%~1.5%氯化钡0.5ml加1%硫酸溶液99.5ml，充分混匀即成，用前充分振荡。 方法步骤 将抗菌药物置于接种待检菌的固体培养基上，抗菌药物通过向培养基内的扩散，抑制敏感细菌的生长，从而出现抑菌环。由于药物扩散的距离越远，达到该距离的药物浓度越低，由此可根据抑菌环的大小，判定细菌对药物的敏感度。 （一）含药纸片的制备 1．滤纸片最好选用新华1号定性滤纸，用打孔机打成直径6mm的滤纸片，放在小瓶中或平皿中，在121.3℃灭菌15min，再置100℃干燥箱内烘干备用。 2．药液的配制用无菌蒸馏水将各药稀释成以下浓度：磺胺100mg/ml、青霉素100IU/ml、链霉素、金霉素、新霉素、红霉素、多粘菌素1000μg/ml。 3．含药纸片的制备将灭菌的滤纸片用无菌的镊子摊布于灭菌平皿中，按每张滤纸片饱和吸水量为0.01ml计算，50张滤纸片加入药液0.5ml。要不时翻动，使纸片充分吸收药液，浸泡1~2h后于37℃温箱中烘干备用。对青霉素、金霉素纸片的干燥宜采用低温真空干燥法，干燥后立即放入瓶中加塞，放干燥器内或置-20℃冰箱中保存。纸片的有效期一般为4~6个月。 （二）测验方法 1．钩取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌落各4~5个，分别接种于肉汤培养基中，37℃培养4~6h。 2．用灭菌生理盐水稀释培养菌液，使其浊度相当于硫酸钡标准管。装有以上两种成分的试管须相同，硫酸钡应用前需充分振动。 3．用无菌棉拭子蘸取上述肉汤培养液，在试管壁上挤压除去多余的液体，在琼脂培养基表面均匀涂抹。每种细菌分别接种1~2个琼脂平板。
药敏试验方法： 默认分类 2009-05-06 22:37 阅读285 评论0 字号：大中小 K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单 位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤 出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接 种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个 纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K- B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidex pneumo-kit)于室温。 ·3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科）
头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ）亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN）红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素 红霉素（E）氧氟沙星（OFL）克林霉素(CM) 肺炎克雷伯菌产酸克雷伯菌和大肠杆菌ESBLs的检测
完善急性髓系白血病的诊断标准 *导读：英法美协作组诊断标准：英法美协作组(FAB协作组)于1976和1985年先后提出了AML的形态学诊断标准及修改建议，1991年又增补一特殊亚型，即AML微分化型，先介绍如下。…… (1) M0(急性髓系白血病微分化型)：骨髓中原始细胞≥90%(NEC)，胞浆大多透亮或中度嗜碱，五嗜天青颗粒及Auer小体，核仁明显，类似ALL—12型，细胞化学过氧化酶及苏丹黑B染色3%;免疫表型髓系标志CD33及(或)CD13可阳性。淋系抗原阴性，但可有CD7+，Td T+;电镜髓过氧化酶(MPO)阳性。 (2) M1(急性白粒细胞白血病未化型);原理细胞(I+II型)≥ 90%(NEC),其中至少有3%的原粒细胞过氧化酶或苏丹黑染色阳性，早幼粒细胞以下的各阶段粒细胞或单核细胞10%。 (3) M2 (急性粒细胞性白血病部分分化化型)：原粒细胞(I+II 型)占30%-90%(NEC)，早幼粒细胞一下至中性分叶核粒细胞10%，单核细胞20%;如有的早期粒细胞形态特点既不像原粒细胞I型 或II型，也不像早幼粒细胞(正常的或多颗粒型)，核染色质很细，有1-2个核仁，胞浆丰富，嗜碱性，有不等量的颗粒，有时颗粒聚集，这类细胞10%时，亦属此型。 (4) M3(急性早幼粒细胞白血病);骨髓中以异常的多颗粒早幼粒 细胞为主。 (5) M4(急性粒单核细胞白血病)：有下列多种情况。
1) 骨髓原始细胞30%(NEC)，原粒细胞加早幼、中性中幼及其他中性粒细胞占30%--80%,不同成熟阶段的单核细胞(常为幼稚及成熟单核细胞)20%。 2) 骨髓象如上所述，外周血中单核细胞系(包括原始、幼稚及成熟单核细胞)≥5X109/L。 3) 骨髓象如上所述，外周血单核细胞系5×109/L，而血清溶菌酶以及细胞化学支持单核细胞数量显著者。 4) 骨髓象类似M2，而单核细胞系20%，或血清溶菌酶超过正常(11.5±4)mg/L，的3倍，或尿溶菌酶超过正常(2.5mg/L)的3倍。 5) 骨髓象类似M2，而外周血单核细胞系≥5×109/L时亦可划分为M4。 M4EO(急性粒单核细胞白血病伴嗜酸粒细胞增多)：除具有上述M4个性特点外，骨髓嗜酸粒细胞5%(NEC)，其形态除有典型的嗜酸颗粒外，还有大而不成熟的嗜碱颗粒，核常不分叶，细胞化学氯乙酸脂酶及PAS染色明显阳性。 (6) M5(急性单核细胞白血病)：又分为两种亚型。 M5n ：骨髓原单核细胞I+II型≥80%(NEC)。 M5b：骨髓原单核细胞I+II型80%(NEC)，其余为幼稚及成熟单核细胞等。 (7) M6(红白血病)：骨髓原始细胞(原粒细胞或原单核细胞，NEC)I+II型≥30%，红细胞系≥50%。 (8) M7(急性巨核细胞白血病)：骨髓原巨核细胞≥30%，如原始
入院记录 姓名：工作单位：无 性别：女职业：农民 年龄：45岁入院日期：2010年04月26日09时09分 民族：汉族记录日期：2010年04月26日 籍贯：病史陈述者：患者本人 婚姻：已婚可靠程度：可靠 家庭地址： 诉：反复乏力、头晕5月余。 5月无明显诱因出现乏力、头晕，恶心，食欲下降，全身不适症状，伴有高热，最高体温达400C，咳嗽，无咳痰，腹胀，无明显腹痛，无鼻衄、牙龈出血，无便血、血尿。患者就诊，血常规检查回示：WBC 49.5×109/L，RBC 1.46×1012/L, HGB 53g/L，PLT 5×109/L；诊断为：贫血；给予输注浓缩红细胞改善贫血，血浆预防出血，血小板增加血小板计数，预防出血，清开灵、头孢呋辛钠联合左氧氟沙星抗感染，未进行任何特殊检查及明确诊断，给予输注青霉素注射液等药物治疗，乏力、高热症状未明显好转，并呈进行性加重，出现乏力、头晕加重，体温40OC，经患者家属要求，转我院诊断治疗，我院急诊科以"重度贫血"收住我科，患者入院后，急查血常规回示：WBC 47.6×109/L，RBC 1.25×1012/L, HGB 46g/L，PLT 4×109/L；骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1）；给予第一周期DA方案（DNR 40mg d1-3 ，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗；预防化疗副作用，抗感染及对症、支持治疗；2010年01月04日复查骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病
未分化型（M1-PR）；第二周期DA方案（DNR 40mg d1-3 ，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗，积极预防骨髓抑制等治疗，定期腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病，2010年01月28日复查骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-CR）；2010年02月08日给予第三疗程给予大剂量阿糖胞苷化疗（Ara-c 2000mg d1-3）+大剂量甲氨碟呤化疗，复查血常规：WBC 1.12×109/L，L 0.68×109/L,RBC 2.17×1012/L，HGB 67g/L，PLT 59×109/L；病情好转出院；患者于2010年03月17日再次来我科就诊，骨髓细胞形态学检查回示：急性粒细胞白血病未分化型（M1-CR）；给予MA方案（MIT 10mg d1-3，Ara-c 200mg d1-7）静脉化疗，预防化疗副作用，及对症、支持治疗,2010年03月24日给予腰椎穿刺术及鞘内注射阿糖胞苷、甲氨碟呤预防中枢神经系统白血病，复查血常规：WBC 1.49×109/L，L 0.76×109/L, RBC 2.02×1012/L，HGB 68g/L，PLT 178×109/L；患者病情好转出院。目前患者为进一步治疗来我科化疗，我科以"急性粒细胞白血病未分化型（M1型）"收住。自发病以来，患者精神差，食欲、睡眠欠佳，大小便正常，体重无明显变化。 病等慢性病史，否认外伤及手术史。否认输血及血制品史。否认食物及药物过敏史，预防接种史不详。 个人史：生于原籍，无疫区居住史。生活规律，无粉尘、毒物及放射性物质接触史，无特殊不良嗜好。 月经史：14,3-5/28-30,2010年04月18日。既往色暗红,量中等,无痛经。 婚育史：已婚，育有1子2女，现爱人和孩子身体健康，家庭关系和睦。
细菌分离培养方法及操作步骤 无菌取血液或脏器、淋巴结划线接种于鲜血琼脂平板或血清琼脂平面培养基、普通肉汤培养基，37℃恒温培养24 h，观察其生长特性。目前细菌分离培养的常用方法有平板划线分离法、加热分离法和实验动物分离法。 平板划线接种法 这是目前临床上最常用的分离接种方法。它可以从被检病料中通过划线可使细菌分离、分散生长而形成单个菌落（有利于从含有多种细菌的标本中分离出目的菌），以便挑选可疑菌落作纯培养加以鉴定。具体操作： 1、右手持接种环，在酒精灯上火焰灭菌； 图1 病料采集图2 接种环灭菌 2、待接种环冷却后，挑取被检料少许，左手持琼脂平板，以食指为支点，用拇指和无名指将平皿揭开一空隙。大约20℃时，迅速地将接种环轻轻地涂布在培养基的边缘。
3、在涂布处来回移动作曲线形划线接种。（注意：划线时，以腕力使接种环在琼脂平板表面划动，尽量不要划破培养基，划的线条要密，但不能重复旧线，以免培养物形成菌苔。） 图3 平板划线接种法 4、划线完毕，合上平皿盖，将琼脂平板倒置，放入37℃温箱内培养18－24小时。 注意：分离培养用的平板培养基应表面干燥，可于临用前置37℃孵育箱内30分钟，这样表面即干燥有利于分离培养，又使培养基预温，对培养某些较娇弱的细菌有利。
细菌药敏试验方法操作步骤 药敏试验是抗菌药使用以前必不可少的一个基本环节，一个正确的药敏结果能够科学的指导养殖户用药，减少抗菌素使用的盲目性，从而减少养殖户损失。在临床实际生产中具备重要意义。 1、在“超净台”中，用经（酒精灯）火焰灭菌的接种环挑取适量细菌培养物，以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。具体方式；用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌，以每点开始划线涂菌至平皿的1/2。然后，找到第二点划线至平皿的1/2，依次划线，直至细菌均匀密布于平皿。 图4 接种环划线 2、以无菌操作将灭菌的不锈钢小管（外径为4毫米、孔径与孔距均为3毫米，管的两端要光滑，也可用玻璃管、瓷管），放置在培养基上打孔，将孔中的培养基用针头挑出，并以火焰封底，使培养基能充分的与平皿融合（以防药液渗漏，影响结果）。
药敏试验方法： K-B法： 1 从孵育了16-24小时的琼脂平板上（血平板），挑出单个菌落，直接用生理盐水制成0.5麦氏单位。 2 在15分钟内，用无菌棉拭子蘸取调好的菌液，在液面上方管壁处旋转并用力挤压几次，以从中挤出过多的菌液。 3 用棉拭子在无菌的M-H培养基表面化线接种，再重复操作两次，每次将平板转动60度，每次接种都应保证接种物均匀分布，最后用棉拭子涂抹平板的边缘。 4 将确定好的药敏纸片分贴到平板表面。每个纸片都应压一下，以保证与平板表面完全接触。每个纸片中心间距24mm。纸片一旦与平板接触，不应再移动。 5 贴完纸片后，应在15分钟内放入35度孵箱。嗜血杆菌属，链球菌属放入3%-5%的CO2烛缸。 6 孵育24小时以后，测量各药敏纸片抑菌圈直径，与NCCLS手册比较，作出结果判断。 说明：细菌药敏结果的判断以NCCLS为标准，所以药敏试验的每一步都应严格按照NCCLS操作，否则将失去意义。链球菌、奈瑟菌属、流感嗜血杆菌、除铜绿假单孢菌和不动杆菌外的假单孢菌属不用K-B法. 肺炎链球菌胶乳凝集测定法 1 在一干净玻片上分别滴两滴生理盐水。 2 从冰箱取出鉴定试剂(Slidexpneumo-kit)于室温。 3 在其中一滴生理盐水上滴加R1试剂，在另外一滴上滴加R2试剂，用搅拌棒混匀。 4 轻轻晃动玻片2分钟，观察结果。 5 2分钟内，如R1出现凝集为阳性；如R1和R2均未出现凝集为阴性。 注：R3为阳性对照。 药敏纸片的选择 1、革兰阴性杆菌（肠杆菌科） 头孢噻肟（CTX）头孢唑林（CZ）头孢他定（CAZ） 氨苄西林（AM）哌拉西林（PIP）阿米卡星（AN） 头孢噻吩（CF）环丙沙星（CIP）头孢呋辛（CXM） 庆大霉素（GM）头孢噻肟/棒酸（CTX/CA） 头孢他定/克拉维酸（CAZ/CA）羧苄青霉素（CB） 奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦（PIP/TZ） 亚安培南头孢匹肟（FEP）头孢克罗（CEC） 2、铜绿假单孢菌/不动杆菌 妥布霉素（TM）阿米卡星（AN）安曲南（AZT） 头孢哌酮（CFP）哌拉西林（PIP）头孢匹肟 头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP）头孢他定（CAZ） 左旋氧氟沙星（OFL）亚安培南哌拉西林/三唑巴坦 3、金黄色葡萄球菌 苯唑西林（OX）青霉素G（P）头孢唑林（CZ）阿米卡星（AN） 红霉素（E）头孢噻肟（CTX）环丙沙星（CIP） 万古霉素奥格门丁（AMX/CA）哌拉西林/三唑巴坦 头孢噻吩（CF） 4 、肠球菌 氨苄西林（AM）万古霉素环丙沙星（CIP） 庆大霉素（GM）红霉素（E）氧氟沙星（OFL） 5、除肺炎链球菌外链球菌 氨苄西林（AM）头孢噻肟（CTX）万古霉素
作业习题 ◎<名词解释> ◎<问答题> ◎<选择题> ※<名词解释> 1.造血微环境 2.髓外造血 3.造血干细胞 4.造血祖细胞 5.血细胞的成熟 6.红髓 7.干抽 8.非红系百分比 9.粒红比值 10.骨髓稀释 11.幼红细胞造血岛 12.吞噬细胞 13.细胞化学染色 14.氟化钠抑制率 15.环形铁粒幼红细胞 16.酯酶双染色 17.中性粒细胞碱性磷酸酶积分 18.再生障碍性贫血 19.再障危象 20.缺铁性贫血 21.铁粒幼细胞贫血 22.巨幼细胞贫血 23.恶性贫血 24.溶血性贫血 25.血管内溶血 26.血管外溶血 27.不稳定血红蛋白病 28.免疫性溶血性贫血 29.原位溶血 30.地中海贫血
31.血红蛋白病 32.血红蛋白S 33.症状性贫血 34.红细胞中间脆性 35.红细胞渗透脆性 36.白血病 37.急性白血病 38.慢性白血病 39.慢性粒细胞白血病急变 40.微量残留白血病 41.急性混合性白血病 42.全髓白血病 43.急性髓细胞白血病微小分化型 44.浆细胞白血病 45.M蛋白 46.粒细胞缺乏症 47.白细胞减少症 48.类白血病反应 49.FAB分型 50.MICM分型 51.WHO分型 52.白血病裂孔现象 53.棒状小体 54.柴捆细胞 55.费城染色体 56.Ⅱ型原始细胞 57.急性白血病完全缓解 58.急性白血病部分缓解 59.急性白血病复发 60.毛细胞白血病 61.骨髓增生异常综合征 62.未成熟前体细胞异常定位 63.骨髓增生性疾病 64.镜影细胞 65.原发性巨球蛋白血症 66.骨髓纤维化 67.类脂质沉积病 68.戈谢细胞 69.尼曼-匹克细胞 70.海蓝细胞 71.纤溶系统 72.国际标准化比值（INR） 73.外源凝血系统 74.内源凝血系统
临床细菌培养结果与药敏试验敏感性和耐药分析 发表时间：2016-07-09T12:43:14.773Z 来源：《医师在线》2016年5月第9期作者：夏芳 [导读] 通过对药材水分、灰分及浸出物的考察，制定了土五加的检查成分，有效地控制药材质量，从源头进行监控，保证药材的来源。夏芳 河南省南阳油田总医院河南南阳 473132 摘要：目的了解我院临床所送标本分离菌株的特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据。方法收集2015年1月—2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果与药敏实验作分析。结果 1782份标本由21个科室所送标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌检出116株，占分离菌的20%。革兰氏阴性杆菌中以大肠埃希菌分离率最高，为25.4%，依次为铜绿假单胞菌11.5 % ，阴沟杆菌9.1% 肺炎克雷伯菌8.6% ，鲍曼不动杆菌5.2%； 革兰式阳性球菌以表皮葡萄菌为主，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌阳性率为23.8%，耐甲氧西林凝固酶阴性球菌为44.1%，大肠埃希菌产ESBLS为66%，肺炎克雷伯菌产ESBLS为39.6%，奇异变形杆菌产ESBLS为50%，革兰氏阴性菌耐药相当严重，大部分耐药在50%以上。结论定期对临床所选标本的细菌培养和药敏鉴定结果进行分析，有助于临床合理用药，减少耐药菌的发生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。 关键词：细菌培养药敏试验 抗生素的合理使用已是人们关注的焦点，而合理使用抗生素的前提对于临床医生来说，基于两点出发：一是经验性用药；二是在细菌培养后，在药敏的指导下用药。而我们所说的“经验”性用药，是建立在细菌培养和药敏的回顾性总结的基础上而言的，所以检验科的微生物室应及时的总结临床所送标本分离菌构成特征及耐药情况，为临床提供“经验”用药的依据，为减少耐药菌的产生，降低医疗费用和改善医患关系有重要意义。基于这一目的，我们收集了2015年1月至2015年10月我院临床各科送检的1782份标本所分离出的病原菌鉴定结果及药敏试验结果，报告如下： 材料与方法 一、标本来源：住院与门诊共计21个科室，所送检的标本包括：血、尿、便、痰、分泌物、引流物、穿刺液、胸腹水等共计1782份。 二、材料与试剂：BACTEC9120全自动血培养仪、DL-96细菌鉴定系统、使用配套鉴定及药敏分析卡。 三、方法：各种标本以无菌方法接种于相应的培养基中，至于全自动培养箱孵育，如有细菌生长则进行鉴定和药敏试验，细菌的分离、鉴定严格按全国临床检验操作规程进行，药敏试验采用纸片法和MIC法。 四、统计学处理：用WHONET5.4统计软件进行处理和分析。 结果 一、1782份标本细菌的检出率 1782份标本由21个科室送检标本组成，共检出阳性标本555例，检出率为31.1%。临床各科送检标本数与检出率 本次分离出的555株细菌，革兰氏阴性菌439株，占分离菌的79.1%；革兰氏阳性菌116株，占分离菌的20.9%。
中国成人急性淋巴细胞白血病诊断与治疗指南（2016年版） 成人急性淋巴细胞白血病（ALL）是最常见的成人急性白血病之一，约占成人急性白血病的20%~ 30%，目前国际上有比较统一的诊断标准和不同研究组报道的系统治疗方案，完全缓解（CR）率可达70%~90%，3~5年无病生存（DFS）率达30%~60%；美国癌症综合网（NCCN）于2012年首次公布了ALL的诊断治疗指南，我国于2012年发表我国第1版成人ALL诊断与治疗的专家共识，得到了国内同行的认可。最近2016版WHO造血与淋巴组织肿瘤分类发表，对于ALL的分类有一些更新，提出了一些新概念；NCCN对于成人ALL的临床指南也先后几次修改。基于此，对我国成人ALL诊断与治疗的专家共识进行了更新。一、诊断分型（一）概述ALL诊断应采用MICM（形态学、免疫学、细胞遗传学和分子学）诊断模式，诊断分型采用WHO 2016标准。最低标准应进行细胞形态学、免疫表型检查，以保证诊断的可靠性；骨髓中原始/幼稚淋巴细胞比例≥20%才可以诊断ALL；免疫分型应采用多参数流式细胞术，最低诊断分型可以参考1995年欧洲白血病免疫学分型协作组（EGIL）标准（表1），疾病分型参照WHO 2016版分类标准。同时应除外混合表型急性白血病，混合表型急性白血病的系列确定建议参照WHO 2008造血及淋巴组织肿瘤分类的标准（表2），可
以同时参考1998 EGIL标准（表3）。预后分组参考G?kbuget 等发表的危险度分组标准（表4）。细胞遗传学分组参考NCCN 2016建议：预后良好遗传学异常包括超二倍体（51~65条染色体）、t（12；21）（p13；q22）和（或）ETV6-RUNX1；预后不良遗传学异常包括亚二倍体（<44条染色体）、t（v；11q23）[t（4；11）和其他MLL重排]、t（9；22）（q34；q11.2）、复杂染色体异常。建议开展相关的遗传学检查，提供诊断分型、预后判断所需的标志，如：IKZF1缺失、CDKN2A/B缺失、CRLF2重排、JAK2重排、NOTCH1突变等（有条件者可以行ABL1、ABL2基因分离探针的分析）。ALL诊断确立后应根据具体分型、预后分组采用规范化的分层治疗策略，以取得最佳治疗效果。（二）WHO 2016版前体淋巴细胞肿瘤分类1．原始B淋巴细胞白血病/淋巴瘤：具体见表5。2．原始T淋巴细胞白血病/淋巴瘤：根据抗原表达可以划分为不同的阶段：早期前T、前T、皮质T、髓质T。建议分类：早期前体T淋巴细胞白血病（Early T-cell precursor lymphoblastic leukemia，ETP）。（三）几种特殊类型ALL的特点 1．BCR-ABL1样ALL（BCR-ABL1-like ALL）：（1）和BCR-ABL1阳性ALL患者具有相似的基因表达谱。（2）共同特征是涉及其他酪氨酸激酶的易位、CRLF2易位。还包括EPO受体（EPOR）截短重排、激活等少见情况。CRLF2易位患者常与JAK基因突变有关。（3）涉及酪氨酸激酶突变的
第五篇实验室检查 血液实验室检查 正常外周血细胞发育过程 ▲造血肝细胞（HSC）→造血祖母肝细胞（ ▲血红蛋白由亚铁血红素和珠蛋白肽链联接形成 血液RBC和Hb正常值: 对象RBC（10/L）Hb（g/L） 男性(4.0~5.5)120~160g/l 女性(3.5~5.0)110~150 g/l 新生儿(15~20)180~190 g/l 儿童(5~12)120~140 g/l RBC及Hb的病理变化 一、病理增多1.相对性增多见于各种原因引起的血液浓缩，如严重呕吐和大量面积烧伤 2.继发性增多见于缺氧性疾病→RBC代偿性增多，见于肺心病，先天性心脏病 3.原发性增多见于真性红细胞增多症 二、病理减少当血液中的RBC及Hb低于参考值称为贫血 贫血根据Hb的水平将贫血分为四级 性别/分级轻度贫血中度贫血重度贫血极重度贫血 男性Hb <120 g/L Hb <90g/L Hb <60g/L Hb <30g/L 女性Hb <110 g/L 血细胞比容测定 血细胞比容（HCT）旧称血细胞压积（PCV）是指血细胞占全血容积的比值 临床意义： （1）增多：引起红细胞增多的原因均可使HCT增高 1.HCT是掌握血液稀释程度的可靠指标 2.作为判断血液粘滞度的指标 （2）减少：见于各种贫血和血液稀释 红细胞三种平均值主要用贫血的形态学分类 红细胞平均值测定:血细胞分析仪法:MCV:80~100fl; MCH:27~34pg,MCHC:320~360g/L (MCV为红细胞平均体积; MCH为红细胞平均血红蛋白量; MCHC为红细胞平均血红蛋白浓度)贫血的形态学分类 类型MCV MCH MCHC病因 正常细胞性贫血80~10027~34320~360再生障碍性贫血,急性失血,急性溶血,白 血病 大细胞性贫 血 >100>34320~360巨幼细胞贫血（缺乏叶酸和维生素B12） 单纯小细胞性贫血<80<27320~360慢性感染,炎症,尿毒症,肝病,恶性肿瘤所 致的贫血 小细胞低色素性贫血<80<27<320缺铁性贫血,珠蛋白生成障碍性贫血,铁粒 幼细胞性贫血 红细胞体积分布宽度（RDW）红细胞大小分布的离散程度