伤寒沙门菌调节因子UhpA的功能研究_李君辉

第20卷第3期

2010年5月

江苏大学学报(医学版)Journa l o f Jiangsu U n i ve rsity(M ed ici ne Ed iti on) V o.l 20N o .3M ay 2010

伤寒沙门菌调节因子Uhp A 的功能研究

李君辉1,罗 哲1,谢新民1,李安平2,杜 鸿2,生秀梅2,黄新祥

2(江苏大学1.生命科学研究院; 2.基础医学与医学技术学院生物化学研究室,江苏镇江212013)[摘 要] 目的:探讨伤寒沙门菌调节因子U hpA 的功能。方法:用载体pBAD 介导回补uhpA 至伤寒沙门菌uhpA 基因缺陷变异株,用q RT-PCR 观察cy s M 和tre B 基因表达,用表达载体pET-22b 原核表达U hp A 蛋白,用凝胶阻滞试验观察U hp A 蛋白与cy s M 和tre B 启动子区域DNA 片段的结合。结果:成功构建p BAD uhpA 重组质粒,在uhpA 缺陷变异株中回补uhpA 基因后,c y s M 和tre B 的表达明显恢复,但U hpA-H is6蛋白与cy s M 和tre B 的启动子区域DNA 片段无明显结合。结论:伤寒沙门菌U hp A 在高渗应激条件下能促进硫代谢及海藻糖代谢相关基因表达,且可能为间接作用。

[关键词] 伤寒沙门菌;U hp A;凝胶阻滞;基因表达调节

[中图分类号] R 378.2 [文献标志码] A [文章编号] 1671-7783(2010)03-0185-05

[基金项目]国家自然科学基金资助项目(30570088)

[作者简介]李君辉(1983)),男,江苏镇江人,硕士研究生;黄新祥(通讯作者),教授,博士生导师,E-m a i :l hux i nx @yahoo .com.hk R esearch of the functi on of the regul ator UhpA in

Salm onell a enteri ca serovar Typhi

LI Jun-hui 1,LUO Zhe 1,X I E X in-m in 1,LI An-p ing 2,DU H ong 2,SHE NG X iu-m ei 2,H UANG X in-x iang 2(1.S chool ofL ife S ci en ce ;2.Depart m en t of B i oche m i stry ,S chool ofM edical Science and Laborat oryM ed ici ne ,J i angs u Un i versity ,Zhen jiang

J i angs u 212013,Ch i na)[A bstract] Objective :To explore the functi o n of the regu lator UhpA i n Sal m onella enterica serovar Typh.i M et hods :A reco m binant p las m id pB AD uhpA conta i n i n g the uhpA gene w it h its o wn pr o m o ter w as transferred into the uhpA de leted mutant o f S.entericar serovar Typh.i qRT-PCR w as perfor m ed to obser ve the expression of cy s M and treB .UhpA prote i n w as expressed by a reco m binant plas m i d pET-22b uhpA in E.coli .The gel sh ift assays w as perfo r m ed to exp l o re t h e co mb i n ation bet w een UhpA and the pro m o ter reg ion of cy s M and tre B .R esults :Reco m binant p l a s m id pBAD uhpA was successf u ll y constructed .A fter co m p le -m enti n g uhpA gene i n the uhpA de l e ted m utan,t the expression of cys M and treB w as obv i o usly restored .G el sh ift assays sho w ed thatUhp A prote i n cou l d not bind the pro m ote reg ion of cy s M and treB .Conc l u sion :A t up -sh ift high os m o tic treat m en,t t h e U hpA m ay pro m ote the expressi o n of genes involved i n the m etabo lis m of su lf u r and trehalose i n d irectly .

[Key w ords] Sal m onella en terica serovar Typh;i UhpA;gel shift assay ;gene expression regulati o n

伤寒沙门菌(Sal m onella enterica serovar Typh i)

是沙门菌属中一种人类严重的肠道致病菌,已成为

一种重要的原核生物基因表达与信息调控研究的模

式菌[1]。沙门氏菌在感染的过程中,必须适应新环

境(渗透压、酸性环境、巨噬细胞吞噬、抗菌肽等),

对不同环境的调节主要由细菌多种双组分调节系统

(t w o -co m ponent regu latory syste m )来介导[2]。目前

在沙门氏菌和埃希菌(E scherichia coli )中已发现数十种双组分调节系统。UhpB /U hpA 作为一种双组分调节系统,调控转运蛋白UhpT 的表达,从而有助于细菌利用外界环境中的6-磷酸葡萄糖作为碳源或能量来源[3]。我们最近的基因芯片相关分析表明,uhpA 基因缺陷变异株在高渗应激条件下相对于野生株有一系列基因的表达发生了明显的下调,而且这些基因大多与硫代谢相关。这提示在高渗应激条件,uhpA 基因可能

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