广州大学
综合性实验报告
实验课题：土壤中产淀粉酶芽孢杆菌的筛选及淀粉酶活力的测定
学院生命科学学院
年级：14级
专业班级：生物技术142班
姓名陈子禧学号1414300004
实验地点：广州大学生化楼
指导教师熊文婷老师、陈琼华老师
一．实验目的及任务
（1）了解微生物分离纯化的原理及微生物分离纯化常用方法和技术。
（2）掌握从土壤中筛选产淀粉酶菌株的原理及方法。【包括物理上的温度筛选和生化上的培养基筛选】
（3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力测定的原理及方法。【检测淀粉酶活性】（4）从不同环境土壤样品中筛选出能产淀粉酶的芽孢杆菌【包括取样、筛选及培养方法】（5）对所学习过的微生物实验方法进行综合技能训练【包括糖发酵试验、IMViC试验、淀粉水解试验等，且学习新的鉴定方法如柠檬酸盐利用试验、酪素、酪氨酸的水解试验等】
（6）培养自行设计实验流程、综合分析解决问题及判断实验结果的能力。
（7）作为一个四人团队，且作为组长，掌握进度把握和根据个人长处和时间进行调配分工，培养团队合作能力，集思广益，将4个人的思路进行整合从而应用到实验中。
( 8 )实事求是，对失误和实验数据进行准确真实记载，对自己的错误进行分析。
二．摘要：
本次实验的目的是为了从土壤样品中筛选出2株产淀粉酶芽胞杆菌随后进行纯化培养和菌种保藏，并进行17项生化鉴定实验得到参数后与伯杰氏细菌鉴定手册对比后确认菌种的种名。
我们组在个不同环境中（河边和树下）分别采取2个土壤样品制取土壤悬液并进行挑取菌种并培养，最终筛选出2个菌种后经过4次划线纯化后各取一个菌种进行细菌鉴定试验，并进行了17项细菌生化鉴定试验后（包括接触酶试验、糖发酵试验、V.P试验、MR试验、吲哚试验、耐盐试验、柠檬酸盐利用试验、明胶试验、硝酸盐还原试验、酪素水解试验、酪氨酸水解试验、运动性试验、温度试验、PH试验、卵黄反应试验、淀粉水解试验、0.001%溶菌酶试验）
经过对伯杰氏细菌鉴定手册比对后，初步鉴定出树下土壤所取菌种为凝结芽孢杆菌及河边土壤所取菌种为蜡状芽孢杆菌，其中河边的蜡状芽孢杆菌可以产淀粉酶但树下的芽孢杆菌并不能分解淀粉，这是我们组因为实验顺序编排不当造成的大失误，但最后仍得到1株产淀粉酶能力较强的蜡状芽孢杆菌。进而对该2株菌种进行斜面保存并上交，对实验过程的各种现象进行记录并分析，并以该实验报告作为载体对我们本次的试验作总结及进行成果汇报。
关键词：芽孢杆菌、细菌鉴定生化试验、装片、培养基、伯杰氏手册
三．前言
芽孢杆菌在土壤中分布广泛，是一类好氧或兼性厌氧、产生抗逆性内生孢子的杆状细菌。这类细菌多数为腐生菌,主要分布于土壤、植物体表面及水体中,由于它们能够产生对热、紫外线、电磁辐射和某些化学药品有很强抗性的芽孢,因此能忍受多种不良环境并在环境适宜时芽孢萌发。【本次实验由于条件限制，故所筛选的芽孢杆菌均为好氧菌，兼性厌氧型可能因环境不适已遭淘汰】
土壤中蕴含着丰富的微生物资源,芽孢杆菌是其中具有重要应用价值的微生物类群。有些菌种可以分泌多种酶,可应用于工业生产;有些菌种产生对昆虫毒性较强的蛋白,可生产微生物农药;有些菌种可作为多种分泌蛋白基因表达受体,在基因工程领域中有较高应用价值。
淀粉酶是水解淀粉和糖原酶类的总称,是用于酿酒、食品、医药、纺织、饲料等具有商业价值的重要酶类。所以分离出产淀粉酶的芽孢杆菌有重要意义。
四、实验原理
我们的取样点位于广州大学，处于广州大学城四面环江，地处南亚热带,其气候属南亚热带典型的季风海洋气候。可初步判断芽孢杆菌资源丰富。
本方案用五点取样法釆集土壤样品,采用纯培养的方法,分离获得芽孢杆菌。对菌株进行形态学观察及生理生化分析,以挑选出可产淀粉酶的菌株并进行镜检制片并进行细菌生化鉴定试验，与伯杰氏细菌鉴定手册进行比对，从而鉴定出产淀粉酶芽胞杆菌的种。
五．实验材料
试剂与配方：
试剂：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、葡萄糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4?7H2O、FeSO4?7H2O、95%乙醇、0.5%番红色液、蒸馏水等
配方：
（1）牛肉膏蛋白胨培养基：
营养琼脂3.3%、蒸馏水100mL、pH7.2-7.4。
（2）营养肉汤:
牛肉膏0.3%、蛋白胨1.0%、NaCl 0.5%、蒸馏水100ml、pH（5.7、7.2→对照）。（3）半固体培养基(运动性试验）：
琼脂0.5%、牛肉膏0.3%、蛋白胨1.0%、NaCl 0.5%、蒸馏水100ml、pH7.2-7.4。（4）淀粉水解培养基:
营养琼脂3.3%、可溶性淀粉2%、蒸馏水100ml、PH7.2-7.4
（5）卵黄反应培养基：
无菌条件下去卵黄加等量的生理盐水，摇匀后，取5ml加入到融化的约50-55℃的100ml的营养琼脂中（内含1g葡萄糖)，混匀后倒入培养皿内。制成的卵黄平板过夜后即可使用。
（6）硝酸盐还原实验培养基:
胰蛋白胨1.0%,酵母浸粉0.5%,NaCl 1.0%, KN03 0.1%,蒸馏水1OOmL,调节pH7.0。
（7）明胶培养基：
NaCl 0.5%、蛋白胨1.0%、牛肉膏0.3%、明胶12%、蒸馏100mL，调pH 7.2-7.4。（8）西蒙斯氏柠檬酸钠盐培养液：
柠檬酸钠0.2%、NaCl 0.5%、MgSO40.02%、磷酸二氢钾0.1%、磷酸氢氨0.1%、溴麝香草酚蓝水溶液1ml、琼脂2%、蒸馏水100ml、PH7.2-7.4。
（9）耐盐试验培养基（2%、5%、7%、10%）：
营养琼脂3.3%、NaCl（0.2%、0.5%、0.7%、1.0%）、蒸馏水100ml、PH7.2-7.4。（10）糖发酵培养基（110℃灭菌-切记重设温度绝不能破坏糖成分，且需用漏斗移入试管）Ⅰ.葡萄糖发酵培养基：
葡萄糖1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl 0.5%、磷酸氢二钾0.02%、0.2%溴钾酚紫（最后加入）、PH7.2-7.4。
Ⅱ.乳糖发酵培养基：
乳糖1.5%、蛋白胨0.2%、NaCl 0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾酚紫0.2%（最后加入）、PH7.2-7.4。
Ⅲ.木糖发酵培养基：
木糖1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl 0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾酚紫0.2%（最后加入）、PH7.2-7.4。
Ⅳ.阿拉伯糖培养基：
阿拉伯糖1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl 0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾酚紫0.2%（最后加入）、PH7.2-7.4。
Ⅴ.甘露醇发酵培养基：
甘露醇1.0%、蛋白胨0.2%、NaCl 0.5%、磷酸氢二钾0.02%、溴钾酚紫0.2%（最后加入）、PH7.2-7.4。
（11）葡萄糖蛋白胨培养基(VP、MR试验）（110℃灭菌）：
葡萄糖0.5%、蛋白胨0.5%、NaCl 0.5%、PH7.2-7.4。
（12）蛋白胨水培养基（吲哚试验）：
蛋白胨1.0%、NaCl 0.5%、PH7.2-7.4。
(13)酪氨酸培养基（酪氨酸水解试验）：
L-酪氨酸0.5g悬浮于10ml蒸馏水中，20min 110℃灭菌，与100ml无菌营养琼脂混合，即成酪氨酸水解平板。
(14)酪素水解培养基（酪素水解试验):
取5g脱脂奶粉与一号三角瓶中，加入50ml蒸馏水，110℃灭菌。另称1.5g琼脂置于含50mL蒸馏水的二号三角瓶中,120℃灭菌,待冷至45-50°C时,将两液混匀倒成平板,即为牛奶平板。将平板倒置过夜,使表面水分干燥
(15)0.9%无菌生理盐水
称取0.85g NaCl于100ml蒸馏水中，摇匀，120℃灭菌。
工具:取样：铁锹、尺子、塑料袋等
培养：接种环（针）、培养皿、棉塞、试管、试管架、锥形瓶、标签纸、打火机、酒精灯、报纸、橡皮筋、无菌棉签、滤纸片、载玻片、香柏油、二甲苯、擦镜纸、精密pH试纸、吸水纸、培养基平板，无菌水，试管架，酒精灯，酒精瓶，记号笔等
其他工具：无菌操作台、恒温振荡培养箱、恒温培养、光学显微镜、高压灭菌锅、干热空气灭菌箱等
六．实验步骤及记录
①．土壤取样
通过实地考察，以土壤肥沃程度优先，确定采样点。采集5-20㎝深度的土壤，五点采样，样品装在2个无菌纸袋中编号为“河边”和“树下”两个组名。记录采样时间、地点、环境、土壤类型等。样品存于4℃冰箱保存备用。
②．土壤悬浊液的制备
已配好0.9%的生理盐水并加入玻璃珠于锥形瓶，高压灭菌后，将已采集的泥土样品（河边、树下）摇匀后各取10.0g于100ml生理盐水的锥形瓶中，随后我们将其放置水浴摇床进行保温并摇匀，并在85°C~90°C区间保持了20min（目的为了杀死不能产生芽孢的细菌），取出并将该两组土壤悬浊液放置入冰箱冷藏。
③分离纯化
【菌种的挑选】
用一支新的无菌枪头从各浓度土壤稀释液中分别吸取0.2 mL涂布于已标记好稀释度的牛肉膏蛋白胨培养基上,每个浓度梯梯度取两个重复,标记日期、时间、组别，置于37℃培养箱中培养24h。
经过24h后从树下的（1:100、1:1000、1:10000）3个培养基中挑选出3个单菌落，并在河边的（1:100、1:1000、1:10000）3个培养基中挑选出7个单菌落；将10个已灭菌的培养皿标好采样地点及提取液浓度，并在皿底画十字分为1、2、3、4区域，以便其后进行划线纯化。划线时先在已经平板培养基的一边作第1次平行划线3~4条，再转动培养皿约60°角，并将接种环上剩余物烧掉，待冷却后通过第1次划线部分作第2次平行划线，再用同法通过第2平行划线部分作第3次平行划线和通过第3次平行划线部分作第4次平行划线。划线完毕，在培养皿底部和顶部写上菌落编号和对应的纯化次数如“树1-1、河1-1”将以上10个已接种培养皿倒置于28~29℃恒温培养箱中培养约20h（倒置培养以免冷凝水滴落污染培养基）。
【菌种的纯化】
纯化三次后进行镜检，挑取纯化的菌种进行单染色，观察细菌是否为杆状，以及细菌的大小、两端形态、粗细、着色深浅等是否一致。若不全为杆状，则弃用，若个体形态不一致，且形态不一致的两种或多种细菌数量相当，则再次纯化，直至个体形态一致。我们组在纯化第四次时已得到满意结果，并保留2号和9号菌种进行后续实验舍去其余组别并重新编号为T （tree代表采集地）、R（riverside代表采集地），将T、R两组进行斜面接种（6支试管三组，其中一组为了明天实验活化，一组为了菌种保藏，另一组进行备用）
④.产淀粉酶芽孢杆菌的筛选（我组操作顺序错误）
利用接种环挑取纯化的菌落分别点种到含淀粉培养基的无菌平板上，并标记菌落编号、日期、时间、组别，放置在37℃恒温培养箱中培养48h。取出平板滴加路哥氏碘液，缓慢摇晃至碘液将平板覆盖均匀，静置，产生透明圈的菌株初步定为淀粉酶产生菌株。【我们的筛选环节定位错误，已将部分菌种筛去，余下的T、R两组仅有R能够产生透明圈】
从活化后的斜面中沾取备份菌株接种于牛肉膏蛋白胨培养基，37℃培养12h进行革兰氏染色，培养24h进行芽孢染色。若未观察到芽孢，挑取与之前挑取位置不同位置的菌落再次染色观察。若仍未观察到芽孢，从斜面中挑取形态与选取的菌株不同的菌株进行活化、染色。
⑤镜检
*单染色法
1、涂片：用1%盐酸清洁玻片后，在玻片中央滴上一小滴蒸馏水，再用无菌操作的方法挑菌少许于玻片的水中，并充分混匀涂成薄膜。
2、干燥：将涂片置火焰高处微热烘干或自然干燥。
3、固定：涂面朝上，通过微火2-3次。
4、染色：待玻片冷却后加结晶紫（或者石炭酸复红）1-2滴于涂片上，覆盖涂面染色1-2分钟。
5、水洗：倾去染色液，用水自玻片一端轻轻冲洗至流下的水变无色为止（注：勿冲去菌体）。
6、干燥：自然干燥，或用吸水纸吸干。
7、镜检：油镜观察并进行摄影记录
*芽孢染色方法
1、涂片、干燥及固定
2、加温染色：加5%孔雀绿染色液于玻片上，微火加热至冒蒸汽维持5分钟。
3、水洗将玻片冷却，水洗直到流出的水中无绿色为止。
4、常温复染：加番红染色2分钟后，倾去染色液，水洗，直接用吸水纸吸去余水。
5、镜检：用油镜观察。记录结果。
*革兰氏染色方法
1. 涂片、干燥及固定
2. 初染：在做好的涂面上滴加草酸铵结晶紫染液，染1-2分钟，倾去染液，流水冲洗至无紫色。
3. 媒染：先用新配的路哥氏碘液冲去残水，而后用其覆盖涂面1分钟，后水洗。
4. 脱色：除去残水后，滴加95%酒精进行脱色约25秒，后立即用流水冲洗。
5. 复染：滴加番红染色液，染2分钟，水洗后用吸水纸吸干。
6. 镜检：观察记录染色结果。
⑥.初步鉴定
以上实验已经挑选出可产芽孢的革兰氏阳性菌。随后进行17项细菌生化鉴定。并进行简述（1）接触酶试验：【T、R两个菌种均为阴性】
用接种环挑取适量菌苔插入装有H2O2的试管中，观察是否有大量气泡产生，将接种环灼烧、冷却后插入H2O2中作空白对照。
（2）糖发酵试验：【T、R两个菌种均只在葡萄糖发酵实验中呈阳性，且变色不产气，其余各组糖发酵试验均呈阴性】
用接种环将两种杆菌分别接种于葡萄糖、木糖、阿拉伯糖、甘露醇的发酵管内，每种发酵管做两个平行，标记，并设置不接种菌的相同发酵管做空白对照37℃培养24h。
观察记录，与对照管比较，若接种培养液保持原有颜色，其反应结果为阴性，表明该菌不能利用该种糖，记录用“-”表示，若培养液呈黄色，反应结果为阳性，表明该菌能分解该种糖产酸，记录用“+”表示。培养液的杜氏小管内气泡明显增大为阳性反应，表明该菌分解糖能产酸产气，记录用“+”表示，如杜氏小管内没有气泡为阴性反应，记录用“-”表示。
（3）V.P试验：【T、R两个菌种均为阴性】
取葡萄糖蛋白胨培养液的试管，编号，以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24h，培养完后，取出上述试管充分震荡2min每管分别加入40%NaOH溶液10~20滴，并加ɑ—萘酚，振荡试管，置37℃温箱中保温15-30min 后，若培养基呈红色，记录为V.P试验阳性反应（+）表示，若不呈红色，记录为V.P试验阴性反应（用“-”）表示。
（4）MR试验：【T、R两组均为阳性】
取葡萄糖蛋白胨培养液的试管，编号，以无菌操作分别接种少量菌苔至以上相应试管中，空白对照管不接菌，置37℃恒温箱中，培养24h，培养完后，取出上述试管，加入甲基红试剂2滴，变红色则呈阳性（+），黄色为阴性（-）。
（5）吲哚试验：【T、R两组均为阴性】
取装有蛋白胨水培养液的试管编号，以无菌操作分别接种少量菌苔到以上相应试管中，并做空白对照，置37℃培养箱中24h，在培养液中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂，如有吲哚存在，乙醚层呈玫瑰红色，说明吲哚试验为阳性反应，否则为阴性反应。
（6）耐盐试验：
将分离获得的菌种分别接种在含盐2%、5%、7%、10%的培养基中，设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃下培养，观察生长状况，并做记录。记录方式如下：不生长：-，生长差：+，生长一般：++，生长良好：+++；
（7）柠檬酸盐利用试验:【R菌种呈阳性变蓝色，T菌种呈阴性与空白组相同】
取若干装有西蒙斯柠檬酸盐培养基的试管，将菌种接入试管，置于37℃恒温箱中培养24~48h。若培养基为蓝色，则表明能利用柠檬酸盐作为碳源生长，以“+”表示。若培养基为绿色则为阴性，以“—”表示。
(8)明胶试验: 【T为阳性、R为阴性】
挑取菌种，以较大量穿刺接种于明胶高层约2/3深度或点种于平板培养基。于20~22℃培养7~14天。每天观察结果，若因培养温度高而使明胶本身液化时，应不加摇动、静置冰箱中待其凝固后、再观察其是否被细菌液化，如确被液化，即为试验阳性，以“+”表示。平板试验结果的观察为在培养基平板点种的菌落上滴加试剂，若为阳性，10-20min后，菌落周围应出现清晰带环。否则为阴性。
(9)硝酸盐还原试验:【T、R两菌种均为明显阳性】
接种于硝酸盐培养基中，于35℃培养1-4d.将甲、乙液等量混合后（约0.1 mL）加入培养基内，立即观察结果。结果：出现红色为阳性。若加入试剂后无颜色反应，可能是：①硝酸盐没有被还原，试验阴性；②硝酸盐被还原为氨和氮等其他产物而导致假阴性结果，这时应在试管内加入少许锌粉，如出现红色则表明试验确实为阴性。
(10）酪素水解试验：【T、R均产生明显透明圈，为阳性】
取牛奶平板，将菌种划线接在平板上，每皿1株菌。设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃恒温箱培养，若菌落周围和下面酪素已被分解而呈透明则为阳性。
（11）酪氨酸水解试验：【结晶均不消失，T、R两组均为阴性】
取酪氨酸平板，将测试菌接种于划线接于培养基上，设置一组对照，一组平行实验组，并置于37℃恒温箱培养，若酪氨酸结晶被水解而变透明则为阳性。
（12）运动性试验：【T菌种为树根状生长，，R菌种直立生长】
使用半固体营养琼脂试管,将接种针从培养基中央自上而下直刺到试管底1-1.5cm处，沿穿刺线拔出接种针，置于37℃培养箱中培养24小时观察。观察是否为树根状生长，若有，则菌株有鞭毛，若直立生长，则菌株无鞭毛。
（13）温度试验：
使用牛肉膏蛋白胨培养基，将菌株接种到平板上，分别在5℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃、60℃条件下培养24小时，观察细菌是否生长。
(14)PH试验：
将菌株分别接种到不同PH为5.7和7.2的营养肉汤中，置于37℃培养24小时，观察是否长菌，比较生长情况。
（15）卵黄反应试验：【T无乳白色的浑浊环，R产生乳白色浑浊环】
取18-24小时的斜面或培养液中的菌体，点种在卵黄反应培养基中，点的直径约为2-3mm，置于37℃培养箱中培养18-24小时，观察，如菌落四周形成乳白色的浑浊环，表示卵磷脂分解生成脂肪，说明有卵磷脂酶。
（16）0.001%溶菌酶试验：【T、R两个菌种均为阴性】
将菌种制成菌悬液，涂布在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基上，将干净的小滤纸片充分浸在溶菌酶试剂中，贴在平板上，置于37℃培养箱中培养24小时后观察，若出现抑菌圈，则为阳性反应，无则为为阴性反应。
(17)淀粉水解试验：【R为阳性，T为阴性】
将菌种接种到淀粉水解平培养基中，置于37℃培养基中培养24小时，观察是否有透明圈出现，若有，则菌种能产胞外淀粉酶，若无，则不能产该酶。
将以上鉴定结果与以下伯杰氏手册进行比对
通过比对可以得知T(树下采集菌种)为凝结芽孢杆菌、R（河边采集菌种）为蜡状芽孢杆菌*菌落和个体形态观察（详细步骤见上页）
1、单染色
2、革兰氏染色
3、芽孢染色
七．实验结果记录及分析
1.土壤样品记录： 土壤采集地点
颜色 湿度 气味 广州大学生化楼的树木下
红褐色
中度，较干爽，呈粉末状 无特殊异味
广州大学生化楼下的河涌
边 棕黑色 高度，较湿润，呈粘土状 土腥味重，似放线菌气味
备注：采集时间为2015.12.3号下午，温度约为20~25摄氏度,树下样品记为T ，河边样品记为R
2.土壤稀释液涂布后培养情况：
我们从树下的（1:100、1:1000、1:10000）中挑选出3个单菌落，并在河边的（1:100、1:1000、1:10000）中挑选出7个单菌落进行纯化培养。随后我们选择了两个来自该两组采样点的菌种用作后续实验
R(riverside)组 T(tree)组
3.菌落特征描述
由以上2张图及现场观察可以看出：
R 组菌：浅黄偏白色，表面扁平，边缘较为圆滑，湿润且色泽较为光滑，无特殊异味。 通过第四次划线纯化，已明显产生单菌落。
T 组菌：白色，表面扁平，边缘粗糙呈放射性生长状，湿润程度偏低较为粗糙，无特殊异味。 通过第四次划线纯化，已明显产生单菌落。
土壤记号/稀释梯度
1/100 1/1000 1/10000 1/100000 T
较多菌落 3个菌落 2个菌落 无菌生长 R 多菌落 5个菌落 1个菌落 无菌生长
4.镜检观察：
经过小组讨论并商量已筛选出两个形态和采样地点各不同的菌种，并经镜检后，已进行四次划线纯化的单染色装片。
A.单染色法:
R(riverside)组对应上文河边T(tree)组对应上文树下
（菌体细长）（菌体粗短）
菌种R：用显微镜油镜在10*100的放大倍数下观察，细杆状细菌被染成紫红色，均匀（除右下角集团外）散布在视野图内，杆状细菌较为细长如细丝状，个别菌体末端紫色较深，应该是形成了芽孢。
菌种T：用显微镜油镜在10*100的放大倍数下观察，粗短杆状细菌被染成紫红色。连接较为紧密有形成链状的趋势，疑似观察到芽孢，较小的小型菌体从正常体型的杆菌末端分出。
B.革兰氏染色观察：
菌种R：用显微镜油镜在10*100的放大倍数下观察，细杆状细菌被染成紫色，证明该菌为革兰氏阳性菌。染色较浅部分应该为该菌芽孢。一个细胞内一边或两边深的部分，可能都是正在形成的晶体蛋白。
菌种T: 用显微镜油镜在10*100的放大倍数下观察，粗杆状细菌被染成紫色，较浅部分应为芽孢。
以上两个镜检结果均证明R、T两个菌种为革兰氏阳性菌。
C.芽孢染色观察：
【备注】：由于在第一次镜检时培养时间不够或操作失误，无法将芽孢染成绿色，只能从革兰氏染色中确定产芽孢的特性，加上考虑对于无芽孢杆菌在制悬液时高温水浴已被杀死，故从划线纯化第四次开始预设T、B两个菌种为产芽孢杆菌，并与实验最后一天重新取用48h 培养物进行制作芽孢染色装片并进行镜检观察。
菌种R：显微镜油镜在10*100的放大倍数下观察，杆状细菌被染成紫红色。
细菌中央被染成绿色的柱形部分及游离在外的绿色圆形部分为该菌芽孢
（培养时间可能较长导致游离芽孢的产生）但仍可明确判定为产芽孢杆菌.
(R菌)
菌种T：显微镜油镜在10*100放大倍数下观察，粗杆状细菌被染成紫红色.菌体连成链状大量中间存在绿色部分，且视野中游离芽孢明显较多，可明确判定为产芽孢杆菌.
5.细菌生化鉴定
①接触酶试验：
*记录：（产气为动态过程，采用文字记录）
菌种R：挑取活化的菌种R并接入装有H2O2的试管中，观察到无气泡产生，说明该菌
的接触酶试验为阴性。
菌种T：菌种T与菌种R实验现象大致相同。挑取活化的菌种T并接入装有H2O2的试
管中，观察到无气泡产生，说明该菌的接触酶试验为阴性。
【备注】由于第一次使用浓度较稀的H2O2无反应，但通过用重新稀释得到的H2O2溶
液仍无反应，故均判断为阴性
实验现象分析：
由以上现象判断，T菌种和B菌种均不产生接触酶
②.糖发酵试验：
*记录：（实验组较多，采用文字记录）
R、T两种菌在木糖、阿拉伯糖、乳糖、甘露醇发酵中均呈现为阴性(-),既不产酸也不
产气,【本次实验均采用1个菌种2个实验，即进行平衡实验且留有每种糖发酵实验空
白对照，确保实验的准确性】
实验项目菌种A 菌种B 空白对照葡萄糖发酵试验+（变色不产气）+（变色不产气）-
乳糖发酵试验- - -
木糖发酵试验- - -
阿拉伯糖试验- - -
甘露醇发酵试验- - -
实验现象分析：以上结果现象说明T、R两个菌种均能分解利用培养基中的葡萄糖作为碳
源生长且将葡萄糖分解为有机酸使溴甲酚紫变色为黄色，但产酸不产气，故杜氏小管中无气
泡生成，且T、R两组实验的黄色深浅近乎一样，故可判定它们分解葡萄糖的效率相近，能
较好地分解利用培养基中的葡萄糖。
③.VP试验：
*记录：（采用文字记录）
菌种R的两个平衡组现象相同，均呈黄色，为阴性（-）；
菌种T的两个平衡组现象相同，均呈黄色，为阴性（-）。
空白组：呈黄色
实验现象分析：
由以上现象记录判断R、T菌种均为VP试验阴性，说明R、T菌种均不能利用葡萄糖脱羧
形成乙酰甲基甲醇。所以均与空白组一样呈现黄色。
④.MR试验：
*记录：（采用文字记录）
菌种R：加甲基红指示剂1-2滴，呈现浅的淡红色，判断呈弱阳性。
菌种T：加甲基红指示剂1-2滴，呈现鲜红色，判断呈阳性。
空白组：无明显现象。
实验现象分析：在已判断葡萄糖发酵试验为阳性的基础下，R、T两菌种在分解葡萄糖过程中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量有机酸，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指示剂变红变色。由以上现象及分析可判断MR试验中为T为阳性、R为弱阳性。
p.s：医学上的检验标准：较为严格，甲基红为酸性指示剂，pH范围为4.4-6.0，其pK 值为5.0。故在pH5.0以下，随酸度而增强红色，在pH5.0以上，则随碱度而增强黄色，在pH5.0或上下接近时，可能变色不够明显，此时应延长培养时间，重复试验。
⑤.吲哚试验：
从37°C培养箱经培养24h后取出R、T两组实验组，在培养液中加入乙醚1-2ml，经充分振荡使吲哚萃取至乙醚中，静置片刻后乙醚层浮于培养液的上面，此时沿管壁缓慢加入5-10滴吲哚试剂。
*记录：（采用文字记录）
加入吲哚试剂后
菌种R：无红色产生，呈阴性
菌种T：无红色产生，呈阴性
实验现象分析：
由以上加入吲哚试剂的现象可得出R、T两菌种均不能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质)，进而不能与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用，无法生成玫瑰吲哚而呈无色，故判断R、T两菌种均为吲哚试验阴性。
⑥.耐盐实验：
*记录：（组别较多，采用文字记录现象）
含盐量为2%的培养基： T和R菌种均能生长，形成白色菌落，其中T菌落面积较大含盐量为5%的培养基：T和R菌种均不能生长
含盐量为7%的培养基: T和R菌种均不能生长
含盐量为10%的培养基：T和R菌种均不能生长
实验现象分析：
T菌种能在含盐量2%的培养基中生长；而B菌种也能2%的培养基中生长,但两个菌种在含盐量为5%的培养基、含盐量为7%的培养基、含盐量为10%的培养基均不能生长
同时可以初步猜想华南地区即广州大学土壤点的盐浓度较低。T、R两个菌种只适合在含盐量较低的环境中存活，耐盐度较差即同时说明对环境中盐度变化适应能力差。
⑦.柠檬酸盐利用试验：
*记录（现象以文字及图片记录）
菌种R：菌种R经过两天培养，柠檬酸盐培养基颜色由绿色变成蓝色，说明说明菌种R 在柠檬酸盐利用试验中表现为阳性（+）
菌种T：菌种T与空白对照一样，柠檬酸盐培养基颜色依然呈现绿色。说明菌种T在柠檬酸盐利用试验中表现为阴性（-），不能利用柠檬酸盐作为碳源生长且接种物已转变为黄褐色，且后面稀释划线部分无新菌落生成，故可推断不能生长繁殖的T菌落已经死亡。
实验现象记录分析：
柠檬酸盐培养基系一综合性培养基，其中柠檬酸钠为碳的唯一来源。而磷酸二氢铵是氮的唯一来源。如R菌能利用柠檬酸钠为碳源，因此能在柠檬酸盐培养基上生长，并分解柠檬酸盐后产生碳酸盐，使培养基变为碱性。此时培养基中的溴麝香草酚蓝指示剂由绿色变为深蓝色。而不能利用柠檬酸盐为碳源的细菌如T菌，在该培养基上不生长，不能利用柠檬酸钠作为碳源,且观察到T菌的划线部分无新的菌落生成，而旧的接种物已变为黄褐色（不知是否可以判定已经死亡）。
【同时在T菌培养基中发现一个蓝色点，经判断为培养基被划破的地方，应被杂菌污染，所以个人认为若在培养皿中进行柠檬酸盐实验，虽然变色现象会比试管更明显，但由于与空气接触面积大，易增加杂菌污染，所以更应避免破坏培养基，且必须倒置培养】
⑧.明胶试验：
*记录：（为性质实验，故采用文字记录）
经过在20℃培养箱中培养7天后，从培养箱中取出，但因为室温较高故所有试管中的明胶均不能凝固，所以我们将冰箱中放置20分钟后再进行观察。
在取出培养箱时，连同空白组和平衡实验带来的总和共5支管，均是液体状态，无法判断是否被细菌液化，故放置进冰箱静置观20分钟观察。结果呈现如下：
菌种R:2支试管明胶状态与空白组情况一样，均为凝结状态，倾斜后液体不晃动呈现半固体状态。故判断R菌种为明胶试验阴性（-）
菌种T:2支试管明胶呈现液体状，倾斜后液体会流动。故判断为明胶试验阳性（+）
空白组：凝固状态，倾斜后明胶不流动。
菌种R 菌种T 菌种R 空白组
实验现象记录分析：
*通过本次明胶试验，我们可以判定菌种R不能产生明胶酶，菌种T可以产生明胶酶。因为该实验原理是利用某些细菌可产生一种胞外酶-明胶酶，能使明胶分解为氨基酸，从而失去凝固力，半固体的明胶培养基成为流动的液体。
*而实质上我们也可以同时明白到明胶【明胶是胶原部分水解而得到的一类蛋白质】作为一种大分子有机物不能被细菌直接利用，故细菌会分解出一种胞外酶-明胶酶，使明胶这种大分子被酶分解成氨基酸后进入蛋白质利用，而氨基酸为小分子与蛋白质的结构不同，故不能凝固。我同时感觉到这个实验对我们的生化机理也有十分重要的指导作用，可以解释许多细胞分泌胞外酶的现象。
p.s．同时其实我们发现这种明胶运动实验所耗时间较长为7天，所以通过百度搜寻，我们找到一个更为快捷得出结果的医学检验方法。明胶琼脂平板法可于普通琼脂加入1%明胶倾注平板后，分为四个区，每个区分别划线接种一种被检菌，经24-48小时培养后，于培养基表面注入氯化汞溶液(氯化汞12g，蒸馏水80ml，浓盐酸16ml)，如细菌液化明胶，则在菌落周围出现透明带。通过用透明带产生的效果，减少细菌需要消耗的底物的量，同时使效果更明显，且透明带的出现远远比明胶液化效果的产生来得更快。
在现实应用上，该测试更多用于医学检测如：胃肠炎、肠热症、菌血症或败血症、破伤风、气性坏疽、肉毒中毒、结肠炎等急性疾病，故诊断时间和处理时间应尽可能压缩，故根据准确性和时效性，可能以上查到的方法2更适合用于现实生活。
⑨.硝酸盐还原试验：
*记录：（为性质实验，采用图片记录，该实验我们有失误，未加入杜氏小管）菌种R：分为2组进行平衡实验，加入约0.1ml（10滴AB混合液）后，试管里立即出现深的橙红色，并产生一部分絮状沉淀物（如图见图一试管底部深色部分），说明菌种R能利用硝酸盐，其在硝酸盐还原试验中表现为阳性(+)。
菌种T：菌种T与菌种R试验现象大致相同,且颜色深浅程度也相近。加入约0.1ml（10滴AB混合液）后，试管里立即出现深的橙红色并亦产生一部分絮状不溶物（如图见图二第三支试管上半部白色絮状部分）。说明菌种T能利用硝酸盐，其在硝酸盐还原试验中表现为阳性（+）。
空白组：培养基溶液加入AB混合液后始终为黄色，无明显实验现象。
T R T R 空白T R T R 空白（图一）（图二）
实验现象记录分析：
通过本次实验的结果，我们能获悉到菌种R和菌种T均能通过还原途径利用硝酸盐，其在硝酸盐还原试验中表现为阳性(+)。在进行实验时混合AB两液能闻到浓烈的醋酸味，故在网上搜索原理发现本实验是通过一些细菌（阳性菌）能将硝酸盐还原为亚硝酸盐，随后亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶苯磺酸这个原理进行的。
而该实验我们也有失误，未加入杜氏小管进行对产氮气的检测，因为实质上硝酸盐还原过程会因细菌不同而异。有的细菌仅使硝酸盐还原为亚硝酸盐，如大肠埃希菌等；有的细菌可使其还原为亚硝酸盐和离子态的铵；有的细菌能使硝酸盐或亚硝酸盐还原为氮，如沙雷菌属；有的细菌还可以将其还原产物在合成性代谢中完全利用。所以加入杜氏小管能更加具体地分析细菌的特性从而对细菌的分类鉴别，医学上对病人的诊断有着不可或缺的作用，而不应仅仅获悉实验的颜色变化。
从沉淀物方面推测，絮状物有可能是蛋白质与亚硝酸盐产生的变性，亦有可能是蛋白质的盐析或者是菌体繁殖的细菌沉淀。因为反应原理较为复杂，我仍未完全剖析明白，故只能做出初步推测
另外，如果想检查培养基中硝酸盐是否被分解，可取锌粉少许加入培养基内，如出现红色表明硝酸盐仍存在;若不出现红色，表示硝酸盐已被分解。
⑩.酪素水解试验：
*记录：（现象通过图像进行记录）
菌种R：通过观察并进行测量菌种R的2个接种位点都产生直径约为1.0cm的透明圈，说明菌种R能产生可以水解酪素的物质，在酪素水解试验中表现为阳性(+)
菌种T：通过观察并进行测量菌种T的2个接种位点都产生直径约为0.70~0.90cm的透明圈(均比菌种R产生的透明圈小，说明菌种T能产生可以水解酪素的物质，在酪素水解试验中表现为阳性(+)
空白组：无接种位点即为空白组，无透明圈等现象产生。
反面正面
实验现象记录分析：
通过本次实验记录发现，T、R两个菌种都能产生酪素酶使牛奶（奶粉）中的天然酪素结晶进行分解利用。尽管已经尽量减少变量处于同一个培养皿即也培养时间相同，但由于接种物的量(菌量不同)无法通过透明圈判断哪个菌种的酶产生效率更高。
?.酪氨酸水解试验：
*记录：（由于无阳性现象产生，采用文字记录）
菌种R：均能生长，为白色菌落但无透明环。证明酪氨酸结晶没有被水解，为阴性（—）菌种T：均能生长，为白色菌落但无透明环。证明酪氨酸结晶没有被水解，为阴性（—）空白组：无菌生长，无明显变化。
实验现象记录分析：
通过实验现象显示，菌种R与菌种T均不能利用酪氨酸，培养基内的酪氨酸结晶依然存在无任何水解效应，细菌只是利用其中的营养琼脂进行生长繁殖。
?.运动性试验：
*记录：
菌种R：表面有较厚白色菌膜，试管澄清，为直立的生长柱仅在柱的周边生成微量白色菌落，故判断为运动性试验阴性（-）。
菌种T:表面有白色菌膜厚度与菌种R相似，为树根状的生长柱，树根状明显，试管同样为澄清状态，故判断为运动性试验阳性（+），细菌具有鞭毛有运动能力。
R管 R管 T管 T管 T R （对比图）实验现象记录分析：
经过对以上实验现象进行分析，可观察到T菌种在穿刺通道中形成树根状的生长柱，且随着接种针由上而下深入培养基菌量逐渐减少的原因，上端扩散的云雾状效果明显而下端扩散效果较弱。即由该现象可判断T菌种有鞭毛能运动扩散到半固体培养基中；而R菌种无法在半固体培养基中扩散，只能向上表面进行生长繁殖，故判断为无鞭毛，但又因为两个菌种在表面都产生浓重的白色菌膜，故可推测为好氧菌。
?.温度试验：
*记录：（本次实验组数较多，采用文字记录并进行表格阐述）红色为菌落面积最大的温度组
温度梯度T菌种R菌种
5°C-（无菌落生长）-（无菌落生长）
10°C-（无菌落生长）-（无菌落生长）
15°C+（有菌落生长）+（有菌落生长）
20°C+（有菌落生长）+（有菌落生长）
25°C+（有菌落生长）+（有菌落生长）
30°C+（有菌落生长）+（有菌落生长）
35°C+（有菌落生长）+（有菌落生长）
40°C+（有菌落生长）+（有菌落生长）
45°C+（有菌落生长）-（无菌落生长）
55°C -（无菌落生长）有杂菌污染-（无菌落生长）
50°C-（无菌落生长）-（无菌落生长）
60°C-（无菌落生长）-（无菌落生长）
实验现象记录分析：
经过本次实验结果证明：
菌种T均能在15~45℃条件下长出菌株。说明菌种B大致的耐热范围为：15~45℃。且最适宜其生长的温度为35~45℃。
菌种R均能在15~45℃条件下长出菌株。说明菌种B大致的耐热范围为：15~45℃。且最适宜其生长的温度为35~40℃。
两株菌种的耐温范围相近。也同时证明该两菌种对温度的适应能力较差，无法在低温或高温的情况下使芽孢出芽进行生长繁殖
?.PH试验：
*记录：（实验采用文字记录）
菌种R：菌种R在PH为5.7时，皆不长菌；在PH为7.2时，也皆不长菌，观察到除了刚接种时产生的颗粒状接种物外并无其他菌落沉淀。此处可能有实验错误，将
进行分析。
菌种T：菌种T在PH为5.7时，皆长菌；在PH为7.2时，也皆长菌。现象为均产生白色的菌落沉淀（可观察到沉淀的白色菌量明显比接种时带来的菌量多）。说明菌
种B所能承受的酸碱度大致范围为：PH5.7~7.2.
空白组：空白组在PH为5.7和7.2两个酸碱度梯度的培养条件下均无菌落产生，说明培养基无杂菌污染。
实验现象记录分析：
通过以上实验现象分析我们发现菌种T在PH5.7~7.2的液体培养基中均能生长，证明在耐酸的效果较好。
而对于菌种R的现象我觉得原因可能有以下2点：1.PH调节有错误，可能因PH试纸检测方面有问题，但由于我们均进行了平行试验，即PH=5.7/7.2时对于一个菌种均有一个备份实验，故这个可能不大。2.菌种R为好氧菌，肉汤中的含氧量较低，菌种R可能以芽孢的方式存活下来，液体环境并不适合菌种R进行生长繁殖，故无法观察到现象。本次实验以进行18h后进行观察，应不存在培养时间不足的问题。3.接种环节出错，接种环温度较高已将细菌杀死或者挑取的细菌为芽孢部分活力低不能进行快速繁殖
其实在PH为7.2~7.4附近，我们可以确切肯定菌种T和菌种B都能够很好地生长繁殖，因为我们划线及其他实验均采用7.2~7.4的PH进行，特别是在硝酸盐实验中PH约为7.2附近，而菌种R和菌种T均能产生明显的阳性反应。故可证明菌种R是可以在液体环境中生长繁殖。所以我们可以基本判定导致失误的原因最有可能是3。
医学微生物学考试试卷（A） (临床医学本科、影像医学本科、中医药学本科、实验技术本科、预防医学本科) 班级学号姓名 注意事项： 1．在试卷上写上姓名、班级。在答题卡上填上学号，将相应的数字涂黑，并写上班级、姓名和试卷类型（A卷/B卷）。交卷时必须将答题卡与试卷一起上交，否则以零分计算！ 2．本份试卷由基础知识题和病例分析题组成，共150个选择题，请按题目要求，在备选答案中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应的字母涂黑，做在试卷上无效。 3．考试时请严格遵守考场纪律，原则上不允许上厕所。 第一部分、Ａ型选择题 （由一题干和５个备选答案组成，请选出一个最佳答案。共90个选择题） 1.哪种疾病的病原体属于非细胞型微生物： A.疯牛病 B.梅毒 C.结核病 D.沙眼 E.体癣 2.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是: A.单细胞 B.二分裂方式繁殖 C.对抗生素敏感 D.有由肽聚糖组成的细胞壁 E.仅有原始核结构，无核膜 3.革兰阳性菌细胞壁： A.肽聚糖含量少 B.缺乏五肽交联桥 C.对溶菌酶敏感 D.所含脂多糖与致病性有关 E.有蛋白糖脂外膜 4.青霉素杀菌机制是: A.干扰细胞壁的合成 B.与核糖体50S亚基结合，干扰蛋白质合成 C.影响核酸复制 D.与核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成 E.损伤细胞膜 5.有关“细菌鞭毛”的叙述，哪一项是错误的: A.与细菌的运动能力有关 B.许多革兰阳性菌和阴性菌均有鞭毛 C.在普通光学显微镜下不能直接观察到 D.可用于细菌的鉴定 E.将细菌接种在固体培养中有助于鉴别细菌有无鞭毛(半固体) 6.有关“芽胞”的叙述，错误的是: A.革兰阳性菌和阴性菌均可产生（都是阳性） B.不直接引起疾病 C.对热有强大的抵抗力 D.代谢不活跃 E.通常在细菌处于不利环境下形成 7.用普通光学显微镜油镜观察细菌形态时，总放大倍数为: A.10倍 B.100倍 C.400倍 D.900～1000倍 E.10000倍 8.脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌经结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色后，菌体分别呈: A.红色和紫色 B.紫色和紫色 C.紫色和无色 D.无色和无色 E.无色和紫色 9.革兰染色法是最常用的一种染色法，其实际意义不包括:
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
广州大学 2012年研究生入学考试试题（全日制专业学位硕士） 招生领域：教育硕士 科目名称：语言学基础 科目代码：928 Ⅰ.Define the following terms (4 points each, 20%) 1. functional linguistics 2. minimal pair 3. consonant 4. syntax 5. synonymy Ⅱ. Indicate whether the following statements are true or false (1 point each, 10%) 1. In modern linguistic studies, the written form of language is given more emphasis than the spoken form for a number of reasons. 2. Voicing is a phonological feature that distinguishes meaning in both Chinese and English. 3. The part of a sentence which comprises an infinite verb or a verb phrase is grammatically called predicate. 4. The smallest meaningful unit of language is allomorph. 5. Human language is arbitrary. 6. All normal children have equal ability to acquire their first language. 7. In most cases, the illocutionary force of “freeze!” is a warning. 8. Linguistics is the course of language. 9. In English, pitch and length constitute intensity which seems to determine stress. 10. Tense and reference are two terms often encountered in the study of meaning. 1
［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量 ［实验材 料］: 打孔器 (1) 将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适 当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又 不流失。 (2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。 (3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。 (4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于3 7 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球 蛋白或补体成分的含量。 在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂 中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。 沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大 小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。 实验二 ［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验） ［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠 ［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载 实验一 1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管 ［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径: 毫米 ［实验分析］
玻片等 ［试验步骤］: （1）取一片载玻片，标记出左右。 （2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。 （3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。 （4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。 （5）观察判定结果。 ［实验结果］:（凝集和非凝集的描述） 左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。 右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。 ［实验分析］:（结合实验原理） 孕妇尿液中的HCG含量显著增高。尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。 非孕妇尿液中HCG含量极少，不足以抑制抗HCG与HCG乳胶抗原发生间接凝集反应，所以出现乳胶颗粒的凝集，为乳胶间接凝集抑制阴性反应。
一、选择题(每题1分,共30分) A型题: 每一考题有A、B、C、D、E五个备选答案，请从中选择一个最佳答案填入题干后括号内。 1．细菌的革兰染色性主要决定于：( ) A．核质结构B．细胞壁结构C．细胞膜结构 D．磷壁酸的有无E．中介体的有无 2．溶原性细菌是指：( ) A．带有前噬菌体基因组的细菌B．带有毒性噬菌体的细菌 C．带有温和噬菌体的细菌D．带有R质粒的细菌 E．带有F质粒的细菌 3．能引起内毒素性休克的细菌成分是：( ) A．肽聚糖B．磷壁酸C．LPS D．菌体抗原E．荚膜多糖 4．关于顿挫感染，下列叙述中哪项正确?( ) A. 因宿主细胞内有相应抑制物 B. 因宿主细胞DNA有关基因激活 C. 因宿主细胞缺乏有关酶 D. 因感染病毒有核酸缺失 E. 因感染病毒抗原性转变 5．细菌芽胞特有的、并与其高度耐热性有关的成分是：( ) A．磷脂B．肽聚糖C．磷壁酸 D．二氨基庚二酸E．吡啶二羧酸 6．下列哪种实验可用来检测致癌物质？( ) A．Ames test B．transformation test C．fluctuation test D．replica plating test E．Widal test 7．杀灭包括芽胞的所有微生物的方法称作：( ) A．消毒B．无菌C．灭菌D．灭活E．防腐 8. 下列无芽胞的细菌中，抵抗力最强的是: ( ) A. 乙型溶血性链球菌 B. 金黄色葡萄球菌 C. 淋病奈瑟菌 D. 肺炎球菌 E. 脑膜炎奈瑟菌 9. 下列哪项不是病毒在细胞内增殖的指标？( ) A. 细胞病变效应 B. 红细胞吸附 C. 细胞代谢的改变 D. 干扰现象 E. 细胞培养液混浊 10．霍乱弧菌能粘附定植于小肠粘膜上皮细胞是因为具有：( ) A．鞭毛B．ＬＴＡC．菌毛D．Ｋ抗原E．Ｖｉ抗原11．对青霉素产生耐药性的最常见的细菌是：( ) A．Streptococcus B．Staphylococcus C．Meningococcus D．Gonococcus E．Pneumococcus 12．分枝杆菌属最突出的特点是：( ) A．胞壁含大量脂质B．无特殊结构C．呈分枝生长 D．一般不易着色E．抗盐酸乙醇脱色 13. 下列哪种物质与结核结节和干酪样坏死有关？( ) A．分枝菌酸B．蜡质ＤC．磷脂 D．索状因子E．硫酸脑苷脂
2019广州大学考研619汉语综合考试与827阅读与写 作复习全析（含真题） 《2019广州大学考研619汉语综合考试复习全析（含历年真题，共三册）》由鸿知广大考研网依托多年丰富的教学与辅导经验，组织官方教学研发团队与广州大学优秀研究生共同合作编写而成。全书内容紧凑权威细致，编排结构科学合理，为参加2019广州大学考研的考生量身定做的必备专业课资料。 《2019广州大学考研619汉语综合考试复习全析（含历年真题）》全书编排根据广州大学考研参考书目： 1．《语言学纲要》，叶蜚声、徐通锵，北京大学。 2、《现代汉语》（增订版），黄伯荣、廖序东主编，高等教育出版社。 3、《古代汉语》，王力主编，中华书局。 结合提供的往年广大考研真题内容，帮助报考广州大学考研的同学通过广大教材章节框架分解、配套的课后/经典习题讲解及相关985、211名校考研真题与解答，帮助考生梳理指定教材的各章节内容，深入理解核心重难点知识，把握考试要求与考题命题特征。 通过研读演练本书，达到把握教材重点知识点、适应多样化的专业课考研命题方式、提高备考针对性、提升复习效率与答题技巧的目的。同时，透过测试演练，以便查缺补漏，为初试高分奠定坚实基础。 适用院系： 人文学院：语言学及应用语言学、汉语言文字学 资料选购适用科目：
619汉语综合考试（自命题） 本书包括以下几个部分内容： Part 1 - 考试重难点与笔记： 通过总结和梳理《现代汉语》（黄伯荣增订五版）、《古代汉语》（王力校订重排本）、《语言学纲要》（叶蜚声、徐通锵北大修订版）各章节复习和考试的重难点，建构教材宏观思维及核心知识框架，浓缩精华内容，令考生对各章节内容考察情况一目了然，从而明确复习方向，提高复习效率。该部分通过归纳各章节要点及复习注意事项，令考生提前预知章节内容，并指导考生把握各章节复习的侧重点。 Part 2 - 教材配套课后/经典习题与解答 针对教材《现代汉语》（黄伯荣增订五版）经典课后习题配备详细解读，以供考生加深对教材基本知识点的理解掌握，做到对广大考研核心考点及参考书目内在重难点内容的深度领会与运用。 Part 3 - 名校考研真题详解汇编： 根据教材内容和考试重难点，精选本专业课考试科目相关的名校考研真题，通过研读参考配套详细答案检测自身水平，加深知识点的理解深度，并更好地掌握考试基本规律，全面了解考试题型及难度。 Part 4 - 广州大学历年考研真题： 汇编广大考研专业课考试科目的2014-2017年考研真题试卷，方便考生检查自
2010 916 Part I Multiple Choice Questions (40marks,2marks each) Directions: Read the following statements carefully and choose the best answer from the four alternatives. Put your choices on the Answer Sheet. ( ) 1. Language is a system of arbitrary vocal symbols used for human . A. contact B. communication C. relation D. community ( ) 2. which brand of linguistics studies the meanings of language? A. phonetics B. syntax C. semantics D. phonology ( ) 3. which branch of phonetics concerns the production of speech sounds? A. acoustic phonetics B. articulatory phonetics C. auditory phonetics D. none of the above ( ) 4. in English ise and tion are called . A. prefixes B. suffixes C. infixes D. free morphemes ( ) 5. is a field of linguistics that studies the sentences structure of language. A. morphology B. syntax C. pragmatics D. applied linguistics ( ) 6. cold and hot are a pair of antonyms. A. gradable B. complementary C. reversal D. converseness ( ) 7. speech act theory was proposed by in 1962. A. Saussure B. Austin C. Chomsky D. Grimm ( ) 8. is defined as a conscious process of accumulating knowledge of a second language usually obtained in school settings. A. competence B. performance C. learning D. acquisition ( ) 9. which description of the meaning components of the word mother is correct? A. +human, +adult, male B. +human, adult, +male C. human, +adult, male D. +human, +adult, +male ( ) 10. most of the violations of the maxims of the cooperative principle give rise to . A.breakdown of conversation B. confusion of one s intention C.hostility between speakers and listeners D.conversational implicatures ( ) 11. according to sequential rules in English, which of the following combinations of sounds is not possible in English? A. bilk B. blik C. kilb D. lbki ( ) 12. /p/ and /b/ can occur in the same environment and distinguish meaning, therefore they are . A. in phonemic contrast B. in complementary distribution C. a minimal pair D. allophones ( ) 13. is regarded as the founder of modern linguistics. A. Searle B. Chomsky C. Austin D. Saussure ( ) 14. the fact that children acquire spoken language before they can read or write indicates that language is primarily . 1
医学微生物学考试试卷（A）(附答案) (临床医学本科、影像医学本科、中医药学本科、实验技术本科、预防医学本科)班级学号姓名 注意事项： 1．在试卷上写上姓名、班级。在答题卡上填上学号，将相应的数字涂黑，并写上班级、姓名和试卷类型（A卷/B卷）。交卷时必须将答题卡与试卷一起上交，否则以零分计算！ 2．本份试卷由基础知识题和病例分析题组成，共150个选择题，请按题目要求，在备选答案中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应的字母涂黑，做在试卷上无效。 3．考试时请严格遵守考场纪律，原则上不允许上厕所。 第一部分、Ａ型选择题 （由一题干和５个备选答案组成，请选出一个最佳答案。共90个选择题） 1.哪种疾病的病原体属于非细胞型微生物： A.疯牛病 B.梅毒 C.结核病 D.沙眼 E.体癣 2.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是: A.单细胞 B.二分裂方式繁殖
C.对抗生素敏感 D.有由肽聚糖组成的细胞壁 E.仅有原始核结构，无核膜 3.革兰阳性菌细胞壁： A.肽聚糖含量少 B.缺乏五肽交联桥 C.对溶菌酶敏感 D.所含脂多糖与致病性有关 E.有蛋白糖脂外膜 4.青霉素杀菌机制是: A.干扰细胞壁的合成 B.与核糖体50S 亚基结合，干扰蛋白质合成 C.影响核酸复制 D.与核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成 E.损伤细胞膜 5.有关“细菌鞭毛”的叙述，哪一项是错误的: A.与细菌的运动能力有关 B.许多革兰阳性菌和阴性菌均有鞭毛 C.在普通光学显微镜下不能直接观察到 D.可用于细菌的鉴定
E.将细菌接种在固体培养中有助于鉴别细菌有无鞭毛 6.有关“芽胞”的叙述，错误的是: A.革兰阳性菌和阴性菌均可产生 B.不直接引起疾病 C.对热有强大的抵抗力 D.代谢不活跃 E.通常在细菌处于不利环境下形成 7.用普通光学显微镜油镜观察细菌形态时，总放大倍数为: 倍倍 倍～1000倍 倍 8.脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌经结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色后，菌体分别呈: A.红色和紫色 B.紫色和紫色 C.紫色和无色 D.无色和无色 E.无色和紫色 9.革兰染色法是最常用的一种染色法，其实际意义不包括: A.鉴别细菌 B.初选抗菌药物 C.了解细菌致病性 D.了解细菌的染色性
环境微生物学实验报告 一、实验目的 （1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验器皿与材料 （1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。 （2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 三、实验步骤 （1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm 处时停止旋转。 （3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。 四、思考题 （1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了
找到目的物并移动到中央。 （2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？ 答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。 五、生物图 实验二、微生物培养基的配制与灭菌 一、实验目的 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。 二、实验器皿与材料 （1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。 （2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。 三、实验原理 培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型
8.3 The Structural Approach结构教学方法理论书P148 8.3.1 Syntagmatic and Paradigmatic Relations横组合关系和纵聚合关系 1.Approach:以关于语言性质及语言习得的理论为基础的，指导教学方法的理论。不同的语言观产生不同的教学方法理论，不同的理论形成不同的教学法。 2.Signifier:能指，说话人用来代表客观世界具体事物或抽象概念的语音序列或书写符号序列，如，地表一个“可以居住的教筑物”的英语词。 3.signified:所指，用语音序列或书写符号序列所代表的客观世界的具体事物或抽象概念。如，英语house 所代表的“可以居住的建筑物”。 8.3.1.1 Syntagmatic Relation 书P149 横组合关系，语言单位在一定的语言平面（level of language）上构成序列性结构的这种关系。和话语的时间流或文字的线性延伸有关（但不等同）。如take care（小心）呈现出下列横组合关系：（1）音序;(2)书写上的字母线性序列t-a-k-e-c-a-r-e(可看出音序与字母序的不等同)（3）形态上的形位序列，如{take}+{care}（4）语法上的“动词（中心词）+名词（附属词）”的序列。 8.3.1.2 Paradigmatic Relations 书P149 Paradigmatic Relations纵聚合的关系：横组合体内某一特定部分的可以互相替代或比较的语言单位之间的关系。 8.3.2The Sentence句书P151 1.The Sentence句：语法平面上分析的最大单位和结构描写的上限（下限是形位morpheme）. 在语法结构上是完整的（不完全句或省略句在所处的语境中应该是完整的）。前后可以有长短不等的停顿，以及跟停顿前位置有关的语言特征（高音变化及音调）。在书面上，一般由终端标点符号（句号；问号；感叹号）。在连贯的话语中英特定的语调或语调序列标明（如含有一个以上的意群则又语调序列）。更简单的说，可称句为内在的完整话语。句的素材是词类（名词；形容词；动词等），句下有各级语法语法单位（分句;词组；词；形位）。句的单位如段，则属语篇（discoures）范畴。 2.Utterance 话语，一个人在一次言语行为（speech act）中用词的序列所表白的内容。可以是（1）一个词，如：A：Have you done your homework？（甲：你的家庭作业做好了吗？）B：Yeah（乙：做好了）；（2）一个句，如上面的Have you done your homework？（3）可以是句以上的单位，如段落，段落群等。其中的referance utterances可参考话语在书中有提到.P151 8.3.3Immediate Constituent Analysis(IC analysis)直接成分分析书P152 1.Ultimate constituents of sentence，句子最基本的组成，通过例子理解记忆P152 直接成分这个概念最早是由美国语言学家布龙菲尔德在1933年首次出版的《语言论》中提出来的。他说"任何一个说英语的人，如果他有意来分析语言形式，一定会告诉我们：Poor John ran away的直接成分是poor John和 ran away这两个形式；而这两个形式又分别是个复合形式；ran away的直接成分是ran……和away……;poor John的直接成分是……poor和John"。换句话说，直接成分（immediate constituent），是直接位于结构体层面之下的成分，这个结构体可能是个句子，如Poor John ran away，也可能是个词组，如 poor John。从理论上讲，结构体也可以是一个单词。一个单词也可以分析出直接成分--语素，如lovely可以分析出﹛love﹜和﹛ly﹜,talked 可以分析出和﹛talk﹜和﹛ed﹜。最后一层的成分即语素，叫做最终成分。由此我们可以说只是成分而不是结构体的是语素，只是结构体而不是成分的是句子。所以直接成分分析法可以定义为这样的分析法：先把句子分析为直接成分--词组（或短语），再把这些直接成分依次切分，得到各自的直接成分，层层切分，直到最终成分为止。但是实际上为了方便，我们通常切到词为止。句子的直接成分分析法可以用括弧表示，例如：（a）（（Poor）（John））（（ran）（away））现在的问题是：我们怎么知道切分的地方？为什么我们说Poor John和ran away是句子的直接成分？而不是poor和 John ran away，或者poor John ran和away?答案，也就是这里运用的标准，是替换性：看一
医学微生物学模拟试题(一) [A1型题] 以下每一考题下面有A、 B、 C、 D、 E 5个备选答案，请从中选一个最佳答案，并在答题卡将相应题号的相应字母所属方框涂黑。 1．用来测量细菌大小的单位是 A. cm B．mm C. um D．nm E．Pm 2．细菌缺乏下列哪一种结构仍可存活 A．细胞壁 B．细胞膜 C．细胞质 D．核质 E．以上均可
3．下列有鉴别意义的细菌代谢产物是：A．靛基质 B. 色素 C．H2S D．酸性气体 E．以上均是 4．H—O变异属于 A．毒力变异 B．菌落变异 C．鞭毛变异 D．形态变异 E．耐药性变异 5. 是已知毒物中毒性最强者 A．肉毒毒素 B．破伤风痉挛毒素 C．白喉外毒素 D．霍乱肠毒素 E．金葡萄肠毒素 6．抗毒素 A．为外毒素经甲醛处理后获得 B．可中和游离外毒素的毒性作用。
C．可中和与易感细胞结合的外毒素的毒性作用D．由细菌内毒素刺激机体产生 E．B十C 7．湿热灭菌法中效果最好的是 A．高压蒸气灭菌法 B．流通蒸气法 C．间歇灭菌法 D．巴氏消毒法 E．煮沸法 8．哪种实验不属于细菌的生化反应 A．糖发酵试验 B．外斐试验 C．VP试验 D. 靛基质生化试验 E. 甲基红试验 9．链球菌感染后引起的变态反应性疾病 A．产褥热 B. 风疹 C．风湿热 D．波状热 E．以上均不是
10．关于淋球菌 A．女性感染者比男性更严重 B．G+肾形双球菌 C．空气传播 D．无垂直传染 E．人是惟一宿主 11．关于痢疾杆菌 A．易入血引起败血症 B．菌毛是致病的重要因素 C．不能引起休克 D．福氏痢疾杆菌因能产生外毒素，故引起的痢疾比较严重E．我国以志贺氏痢疾感菌感染多见。 12．肠道致病菌特征 A．抗原结构复杂，均有H、 O抗原 B．在SS琼脂上为无色不透明菌落 C．多数分解乳糖 D．可用免疫血清鉴定分型 E．革兰阴性杆菌 13．霍乱弧菌 A．有周鞭毛，运动十分活泼
广州大学2010年研究生入学考试试题（全日制专业学位硕士）（部分） 招生领域：教育硕士 科目名称：语言学基础 科目代码：916 Part I Multiple Choice Questions (40marks,2marks each) Directions: Read the following statements carefully and choose the best answer from the four alternatives. Put your choices on the Answer Sheet. ( ) 1. Language is a system of arbitrary vocal symbols used for human . A. contact B. communication C. relation D. community ( ) 2. which brand of linguistics studies the meanings of language? A. phonetics B. syntax C. semantics D. phonology ( ) 3. which branch of phonetics concerns the production of speech sounds? A. acoustic phonetics B. articulatory phonetics C. auditory phonetics D. none of the above ( ) 4. in English –ise and –tion are called . A. prefixes B. suffixes C. infixes D. free morphemes ( ) 5. is a field of linguistics that studies the sentences structure of language. A. morphology B. syntax C. pragmatics D. applied linguistics ( ) 6. cold and hot are a pair of antonyms. A. gradable B. complementary C. reversal D. converseness ( ) 7. speech act theory was proposed by in 1962. A. Saussure B. Austin C. Chomsky D. Grimm ( ) 8. is defined as a conscious process of accumulating knowledge of a second language usually obtained in school settings. A. competence B. performance C. learning D. acquisition ( ) 9. which description of the meaning components of the word “mother”is correct? A. +human, +adult, —male B. +human, —adult, +male C. —human, +adult, —male D. +human, +adult, +male ( ) 10. most of the violations of the maxims of the cooperative principle give rise to . A.breakdown of conversation B. confusion of one’s intention C.hostility between speakers and listeners D.conversational implicatures ( ) 11. according to sequential rules in English, which of the following combinations of sounds is not possible in English? A. bilk B. blik C. kilb D. lbki ( ) 12. /p/ and /b/ can occur in the same environment and distinguish meaning, therefore they are . A. in phonemic contrast B. in complementary distribution C. a minimal pair D. allophones ( ) 13. is regarded as the founder of modern linguistics. 1
山东大学实验报告2012年 12 月 4日 姓名系年级 2011级生科2班组别四 科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应 微生物的生理生化反应 一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、【实验仪器与试剂】 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄 糖蛋白胨水培养基； 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管 三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质 分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 （1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并 非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
1 测量细菌大小用以表示的单位是_________ 。_ 2. 在消毒灭菌时应以杀死 ________ 作_ 为判断灭菌效果的指标。 3. 细菌的形态鉴别染色法最常用的是 _________ ，_ 其次是______ 。 4. 根据细菌的外形，可分为 _________ 、_ ______ 、_________ 。_ 5. 细菌群体生长繁殖分为 、 6. _________________________________ 人工培养基按功能或用途分为、_ _______ 、_ _____________ 、、_ _________________________________ 5类培 养基。 7. 根据细菌代谢时对氧气的需求与否分为 _____ 、_________ 、_ _______ 、 ________。_ 8. 细菌生长繁殖的条件是 ________ 、 _______ 、_ ______ 、 _________ 。_ 9. ______________________________ 人工培养基按物理性状分为、_ 、_ 3类培养基。 10. 高压蒸汽灭菌的温度是 _______ ，压力是_________ ，时间持续 ________ 。 11. 半固体培养基主要用于 _______ ，斜面培养基________，_ 平板培养基主要用于________ 。_ 12. __________________________ 光学显微镜观察细菌应用 _ 镜观察，它的放大倍率是倍。 13. ____________________________________________ 抗酸染色把细菌分成两类，阳性菌呈___色，阴性菌呈_____________________________________________________色。 14. 细菌的色素分为 ________ 和_ __________ 2种 15.SS培养基多用于____________ 的分离培养。 16. 热力灭菌分为__________ 和_ ___________ 灭_ 菌。 17. 湿热灭菌分为___________ 、_______ 、 ________ 、 _______ 、 ______ 。 18. 紫外线杀菌的机理主要是破坏细菌__________ 。_ 19. 对于毒素、血清、抗生素不耐高温灭菌的制物制品应采用的灭菌方法是____________ 。_ 20. 化学消毒剂杀菌的机理是 ____________ 、 ________ 、_ ____________ 。_ 21. 致病菌的检验程序主要有 _________ 、_ ______ 、_________ 、_ _______ 等_ 。 22. 根据葡萄球菌在血琼脂平板培养基中产生的色素不同，将葡萄球菌分为 ________ 、________ 、_______ 三种。其中致病力最强的葡萄球菌为_________ ，产生的色素为 ___________ 。 23. 根据链球菌在血琼脂平板培养基中生长后菌落周围溶血现象的不同，可将链球菌分为 _______ 、_ _______ 、_ __________ 三大类。 24. 鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌实验是 ________ 、 _______ 。_ 25. 人工培养脑膜炎双球菌、淋球菌常用的培养基是 ________ 或 ______ 。 26. 伤寒杆菌分离培养，在病程早期第一周应取 _______ 标本；发病第2、3 周应取_________ 标本，其阳性率高。 27. 大多数志贺菌不分解乳糖，只有 ________ 志贺菌能 _______ 分解乳糖。 28. 霍乱弧菌耐 ________不耐酸，常用的人工培养基是 _____ 或_ _________ 。 29. 白喉棒状杆菌在亚碲酸钾血平板生长时，其菌落呈 ______ 。 30. 培养白喉棒状杆菌常选用的培养基是 ______ 。 31. 毒力鉴定是鉴别白喉棒状杆菌与其他棒状杆菌的重要试验。体外法可用 ______ ，体内法可用 ________ 。 32. 结核分枝杆菌常用 _____ 染色，呈现_________ 色。 33. 结核分枝杆菌对湿热敏感，经 _____ C ________ m ir即可被杀死。 34. 结核菌素试验所用的试剂有 ___ 、_________ 两种。 35. 幽门螺杆菌形态呈 ______ 、_______ 或______ 状。目前认为与人类的 _______ 、 ________ 疾病有关。 36. 绿脓杆菌在生长繁殖过程中能产 ______ 色素。