原料化验手册
2007年06月
目录
实验仪器 (1)
第一部分饲料常规成分分析方法
实验一饲料中干物质的测定 (2)
实验二饲料中粗蛋白的测定 (3)
实验三饲料中粗脂肪的测定 (4)
实验四饲料中水溶性氯化物的测定 (4)
实验五饲料中粗灰分的测定 (7)
实验六饲料中钙的测定 (7)
实验七饲料中总磷量的测定 (9)
实验八饲料中粗纤维的测定 (10)
实验九植物蛋白原料生熟度判定 (11)
实验十氯化胆碱含量的测定 (13)
实验十一油脂酸价的测定 (14)
实验十二油脂过氧化值的测定 (14)
实验十三鱼粉掺假检测及真蛋白质的测定 (15)
实验十四饲用玉米脂肪酸值的测定 (17)
实验十五油脂碘价的测定 (18)
实验十六锅炉水测定方法 (19)
第二部分饲料原料的掺假检验
一﹑伪劣玉米蛋白粉的识别 (20)
二﹑掺假豆粕的鉴定 (21)
三﹑磷酸盐的鉴别 (22)
四﹑鱼粉掺假鉴定 (23)
五﹑氯化胆碱的真伪鉴别 (25)
六﹑肉骨粉掺假检验 (26)
附1：镜检培训知识笔记 (29)
附2：原料质量的判断与掺假识别培训 (31)
附3：油脂检验………………………………………………………………………………
实验仪器
一．称量仪器
1.物理天平
2.分析天平
二．加热仪器
1.电炉和电热板（500W.800W.1000W.1200W）
2.高温电炉（带温度控制器）
3.烘箱
4.水浴锅
5.酒精灯和酒精喷灯
三．玻璃仪器
1.烧杯类
1）烧杯（体积10ml—5000ml）
2）锥形瓶
3）具塞锥形瓶和碘量瓶
4）烧瓶
2.量具类
1）滴定管：酸式滴定管和碱式滴定管
2）量筒和量杯（5.10.25.50.250.1000.2000ml）
3）容量瓶（10.20.25.50.100.250.1000.2000ml）
4）移液管（2.5.10.15.25.50ml）
2.试剂瓶类
1）广口瓶和小口瓶
2）滴瓶
3.试管类
1）普通试管（10mm×75mm—41mm×225mm）
2）离心管（5.10.15.25.50ml）
3）比色管
4.其他玻璃仪器和陶瓷器皿
1）表面皿
2）干燥器
3）称量瓶
4）漏斗
5）坩埚
四．部分小型精密仪器
1.分光光度计
2.酸度计
3.离心机
4.振荡机
5.粉碎机
6.定氮仪
说明：
（1）实验中所涉及的化学试剂没有特别要求，均为化学纯，水为蒸馏水或相应程度水。 （2）实验适用范围无特别说明均为配合饲料和单一饲料。
（3）实验过程中提到的干燥后冷却没有特别说明都在冷却器中冷却30min ，恒重过程没有
说明均为再烘干30min ，再冷却30min ，再称重，直至达到相应要求。 （4）实验中涉及滴定终点都是滴到预期颜色变化且30s 不褪色为止。 （5）一般单一饲料或配合饲料（固体）样品制备常用方法为用四分法将原始样品缩至500g ，
风干粉碎过40目，再用四分法按实验用量取。
（6）对实验结果中提到的重复行要引起足够的重视，对于相对偏差超过要求的，决不能简单将实验结果取平均值，必须重新实验。
第一部分 饲料常规成分分析方法
实验一 饲料中干物质的测定
1.适用范围
配合饲料和单一饲料
2.原理
100-105℃下烘去饲料中蛋白质，淀粉及细胞膜上的吸附水，得到干物质含量。
3.试样的制备
用四分法将原始样品缩至500克，风干后粉碎至过40目，再用四分法缩至20克，装入密封器，放阴凉干燥处保存。
4.测定
洗净称样皿，在100-105℃烘箱中烘1小时，取出，再干燥器中冷却30分钟后称重，称准至0.0002克，再烘30分钟，同样冷却，称重，直至二次称重之差小于0.0005g 为止，取最小量为称样皿重。用已恒重称样皿准确称取5g 样品（准确至0.0002g ），不盖称样皿盖，在100-105℃烘箱中烘3小时，取出，加盖，同样冷却称重，再同样烘1小时，冷却，称重，直至二次称重之差小于0.002g 即为恒重。
5.结果计算
（1） 计算
水分（%）=
式中：m1——105℃烘干前试样及称样皿重（g ）； m2——105℃烘干后试样及称样皿重（g ）； m0——已痕重的称样皿重（g ）。 （2） 重复性
（3） 每个试样取二个平行样测定，取平均值为测定结果，两个平行值不得超过0.2%，否
则重做。
m1- m2
m1- m0
实验二 饲料中粗蛋白质的测定（定氮仪法）
1. 原理
试样中含氮化合物 浓硫酸处理 氨气 浓硫酸吸收 硫酸铵
四硼酸铵 标准溶液滴定 含氮量
2. 试剂
（1） 硫酸（GB 625-77）：化学纯 （2） 硫酸铜（GB 665-78）：化学纯
（3） 硫酸钾（HG 3-920-76）或硫酸钠（HG 3-908-76）：化学纯 （4） 氢氧化钠（GB 628-78）：分析纯，40g 溶于100ml 水中配成40%水溶液 （5） 硼酸（GB 628-78）：分析纯，40g 溶于100ml 水中配成2%溶液 （6） 混合指示剂：甲基红（HG 3-958-76）0.1%乙醇溶液，溴甲酚绿（HG 3-1200-79）
0.5%乙醇容易，二溶液1：1混合
（7） 0.01mol/l 盐酸标准溶液 （8） 硫酸铵（GB 1396-28）：分析纯 （9） 蔗糖（HG 3-1001-76）：分析纯 3. 实验步骤 （1） 样品消化
称0.3-0.5g 样品于消化管中 加3-5g 无水硫酸钠或硫酸钾 加10ml 硫酸
在420℃消化炉上消化（约1h ） 深蓝色澄清液体 冷却15min 加20ml 蒸馏水，摇匀 （2） 蒸馏
1） 接收瓶准备：取25硼酸（4%）于锥形瓶，加4滴混合指示剂
4. 空白实验
每次分析时，应该做所用化学试剂及分析系统的空白实验以补偿他们对实验的影响。 5. 结果计算 （1）计算
粗蛋白质（%）= ×100
式中：v2——试样滴定时用标准盐酸量 v1——空白滴定时用标准盐酸量
c ——盐酸标准溶液的浓度
浓碱下蒸馏
硼酸吸收
（v2-v1）×c ×0.0140×6.25
m
m ——试样质量
0.0140——每ml1NHCL 标准溶液相当于N 的克数 6.25——氮换算成蛋白质的平均系数 （3） 重复性
每个试样取二个平行样进行测定，取其平均值，二次滴定用标准液之差不超过0.1ml 。 cp%＞25%时，允许相对偏差为1%；
10%≤cp%≤25时，允许相对偏差为2%； cp%≤10%时，允许相对偏差为3%
实验三 饲料中粗脂肪的的测定
1.原理：在索氏提取器中用石油醚（HG 3-1002-76 化学纯）提取试样，计算绝
干试样的损失量。
2.测定
脱脂滤纸和称样皿干燥（105±2℃）恒重至相差0.0008g ，滤纸用铅笔编号，称取2 克样品包入滤纸中，放入称样皿，105℃烘3h ，冷却称重，再干燥30min ，直至恒重。然后放入浸提器中，石油醚刚淹没滤纸包为好，50℃下水浴加热，提取约5小时，取出滤纸包，置于通风橱中20min ，待石油醚挥发完，105℃烘箱烘1h ，干燥器中冷却30min ，称重，恒重至相差0.0001g 。
3.结果计算
（1）计算
粗脂肪（%） = ×100
试中：w1——已恒重的滤纸加称样皿重
w2——已恒重的滤纸，称样皿加样品重 w3——已恒重的滤纸，称样皿加绝干样品重
w4——已恒重的滤纸，称样皿加浸提后的样品重
（2）重复性
每个试样取二个平行样进行测定，取其平均值； 粗脂肪含量在10%以上，允许相对偏差为3%； 粗脂肪含量在10%以下，允许相对偏差为5% 。
实验四 饲料中水溶性氯化物的测定
法一：快速法 1.原理
试样搅拌溶解氯化物 ，用铬酸钾作指示剂，用标准硝酸银溶液滴定。
2.试剂准备
（1） 铬酸钾指示剂：10%铬酸钾水溶液
W3-w4
W2-w1
（2） 氯化钠（GB 12530-77）：于500灼烧1h ，干燥器中冷却保存，称5.8454g ，溶解于
水中，转入1000容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，为0.1N 氯化钠标准溶液；
（3） 0.1N 硝酸银标准溶液：取硝酸银（分析纯）16.989g ，溶于1000ml 水中。贮存于棕
色瓶中，即为0.1N 硝酸银溶液。
标定：准确取氯化物标准溶液25ml ，于250ml 锥形瓶中，加入25ml 水及0.5ml 铬酸钾指示剂，用硝酸银标准溶液滴定，出现红棕色，且30秒不褪色为终点。
硝酸银标准溶液的当量浓度N = =M/V ×0.4277
式中：M 为氯化钠的重量；V 为硝酸银标准溶液的体积；0.05845为与1ml 硝酸银标准溶液（1N ）相当的氯化钠克数。
3.测定
5g 左右样品取上层清液20ml+
硝酸银滴定 溶液呈砖红色
4．结果处理
NaCl% = ×100
式中：V ——硝酸银溶液的体积ml N ——硝酸银溶液的当量浓度
58.45——与1mol 硝酸银相当的氯化钠的克数 M ——试样重g
法二：国标法 1.原理
Cl-
+ AgNO 3 Agcl + 硫氰酸铵
AgCNS+NH 4NO 3
2.试剂准备
（1） 硝酸
（2） 硫酸铁（60g/L ）溶液：称取硫酸铁[Fe2(so4)3XH2O]60克，加水微热溶解后，加
水至1000ml 。
（3） 硫酸铁指示剂 250g/l 的硫酸铁水溶液，过滤除去不溶物，与等体积的浓硝酸混合
均匀。
（4） 氨溶液 1+19水溶液
（5） 硫氰酸铵(0.02mol/l)溶液：称取硫氰酸铵1.52g ，溶于1000ml 水中。 （6） 氯化钠标准贮备溶液 ：基准级氯化钠于500灼烧1h ，干燥器中冷却保存，称5.8454g ，
溶解于水中，转入1000容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，为0.1N 氯化钠标准溶液
M ×25 V ×0.05845×1000 加100ml 蒸馏水
搅拌15min ，静置15min
蒸馏水50ml 铬酸钾指示剂1ml V ×N ×100×58.45
M ×20×1000
（7） 氯化钠标准工作溶液（0.02mol/l ）：准确吸取氯化钠标准贮备溶液20ml 与1000容
量瓶中，定容。
（8） 硝酸银标准溶液 （0.02mol/l ）：称取3.4g 硝酸银溶于1000ml 水中，贮于棕色瓶中。
1) 体积比 吸取硝酸银溶液20ml ，加硝酸银4ml ，指示剂2ml ，在剧烈摇动下用硫
氰酸铵溶液滴定，滴至终点为淡红色。二溶液的体积比为
2) 标定
氯化钠标准溶液10ml
100ml 容量瓶 硝酸4ml 震荡使沉淀凝结，定容过滤于三角瓶中 取定
硝酸银标准溶液25ml
容液50ml+硫酸铁指示剂2ml 硫氰酸铵溶液滴定 红棕色
硝酸银标准溶液浓度=
式中：m ——氯化钠质量g
v1——硝酸银标准溶液体积ml v2——硫氰酸铵溶液体积ml
F ——硝酸银与硫氰酸铵溶液的体积比
0.05845——与1ml 硝酸银标准溶液（1mol/l ）相当的氯化钠质量
3.仪器准备
（1） 实验室用样品粉碎机
（2） 分样筛 孔径0.45m （40目） （3） 分析天平
（4） 刻度移液管 10，2ml （5） 滴定管 酸式，25ml （6） 容量瓶 100，1000ml （7） 烧杯 250ml
（8）
滤纸 快速，直径15cm ；满速，直径12.5cm
4.测定步骤
称取3g 左右样品 + 硫酸铁溶液50ml + 氨水溶液100ml
取50ml 滤液
浓硝酸10ml 100ml 容量瓶 取50ml 澄
硝酸银标准溶液25ml
清液 淡橘红色
硝酸银溶液体积
硫氰酸铵体积
m ×20/1000×10/100
0.05845×（v1-FV2×100/50）
搅拌，放置10min
干快速滤纸过滤
搅拌，放置10min
干过滤入150ml 锥形瓶中沉
硫酸铁指示剂10ml
硫氰酸铵溶液滴定
5.数据处理
（1）计算
氯元素百分含量= ×100
式中 m ——样品质量
v1——硝酸银溶液体积ml
v2——滴定消耗的硫氰酸铵溶液体积 F ——硝酸银与硫氰酸铵溶液体积比 C ——硝酸银溶液的浓度
0.0355——与1ml 硝酸银标准溶液1mol/l 相当的氯元素质量g （2）重复性
每个样品取2个平行样进行测定，以算术平均值为分析结果。
氯含量在3%以下，允许绝对差0.05，含量在3%以上，允许相对偏差3%
6.注意事项
（1）在标定硝酸银溶液时，或滴定试样滤液时，速度应快，且不要过分剧烈摇动，以防下述反应：AgCl+CNS- AgCNS+Cl- ，多消耗硫氰酸铵溶液，使结果偏底。 （2）本法测定中是根据氯离子来计算氯化钠含量的，但由于配合饲料或单一饲料（如鱼粉或合成赖氨酸等）中，都带入氯离子，所以此估测值仅做参考值。
实验五 饲料中粗灰分的测定
1. 原理：在600℃灼烧后所得残渣，用重量百分比表示
2. 测定
（1） 将干净的带盖坩埚放入茂福炉中在600℃下烧30min （坩埚盖半开），
等炉温降至200℃，将坩埚移入干燥器中，冷却1h 后称重，再将坩埚放入茂福炉中灼烧，恒重。
（2） 在坩埚中称取风干样2克。 （3） 将试样在电炉上炭化至无烟，再移入茂福炉中，在600℃下灼烧，坩
埚盖半开，约烧4h ，直至样本呈白色为止。
（4） 冷却完毕，待炉温降至200℃，移入干燥器内冷却1h ，称重，再将坩
埚放入茂福炉中烧15min ，再冷却，恒重至相差0.0001克。 3. 数据处理
粗灰分含量（%）= ×100
实验六 饲料中钙的测定
1. 原理：高温将试样中有机物破坏，使钙制备成溶液，用三乙醇铵，乙二胺，
盐酸羟铵 和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用EDTA 标准溶液络合滴定钙。 2. 试剂准备
(V1-V2F ×100/50)c ×150×0.0355
m ×50
（坩埚重+灰分重）-坩埚重
样品重
（1） 盐酸羟铵
（2） 盐酸：1+1（v1+v2） （3） 浓硝酸 （4） 高氯酸
（5） 氢氧化钾溶液：200g/l
（6） 三乙醇胺水溶液：1+1（v1+v2） （7） 乙二胺水溶液：1+1（v1+v2）
（8）
淀粉溶液：10g/l ，称取1g 可溶性淀粉放入200ml 烧杯中，加5ml 水润湿，加95ml 沸水搅拌，煮沸，冷却备用
（9） 孔雀石绿水溶液：1g/L
（10） 钙黄绿素-甲基百里香酚蓝指示剂：0.1g 钙黄绿素与0.13g 甲基百里香酚
蓝，5g 氯化钾研细，贮于磨口瓶中备用
（11） 钙标准溶液：0.0010g/ml
（12） 乙二胺四乙酸钠标准滴定溶液（EDTA ），T=0.4mg/ml （滴定度），表示1ml
标准溶液相当于0。4mg 钙。 3. 测定
（1） 试样分解
干法：测定灰分后的试样+盐酸溶液10ml+浓硝酸数滴 ，小心煮沸，冷却，转入100ml 容量瓶中，冷却，定容，摇匀。 湿法（无机物或液体饲料）：称取0.2g 样品于凯氏烧瓶中，加入浓硝酸30ml ，加热煮沸5min ，取下冷却后加入高氯酸10ml ，小心煮沸驱逐黄烟至白烟（严禁蒸干），冷却后加水20ml ，煮沸驱逐二氧化氮，冷却后转入100ml 容量瓶，定容，摇匀。 （2） 测定
5-10ml 试样分解液+ +氢氧化钾溶液 无色
黑色背景下EDTA 滴定 绿色荧光消失
4.数据处理 （1） 计算
Ca% = ×100
（2） 重复性 做二个平行样，对钙量在5%以上，允许相对偏差在3%，钙量5-1%，允许相对偏差5%，钙量1%以下，允许相对偏差10%。
5.标准溶液的配置和标定
（1） 0010g/ml 钙标准溶液的配置：准确称取2.497g 于105-110℃干燥至恒
淀粉溶液10ml
水50ml
乙二胺1ml
三乙醇胺2ml
1滴孔雀石绿
5ml 氢氧化钾溶液
0.1g 盐酸羟胺 钙黄素少许 EDTA 标液对钙的滴定度×消耗EDTA 体积
试样质量×移取分解液体积/分解液总体积
重的基准碳酸钙，溶于40ml盐酸中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水
转移至1000ml容量瓶中，稀释至刻度。
（2）T=0.0004g/mlEDTA标准滴定溶液的配置：称取3.8EDTA二钠放入200ml 烧杯中加200ml水，加热溶解冷却后用水转移到1000ml容量瓶中，稀
释至刻度。
（3）EDTA标准滴定溶液的标定：准确吸取钙标准溶液10ml，同试样测定进行滴定。 EDTA滴定溶液对钙的滴定度为
钙标准溶液的浓度×钙标准溶液体积/EDTA标准溶液的用量
实验七饲料中总磷量的测定
1.原理
游离磷 + 钒钼酸铵酸性溶液中磷钼黄（黄色），420nm波长下比色测定。
2.试剂
（1）盐酸
（2）硝酸
（3）高氯酸
（4）钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25g，加硝酸250ml，另称取钼酸铵25g，加水400ml加热溶解之后，在降温条件下将后者倒入前者，定容，避光保存。（5）磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1h，在干燥器中冷却30min，称取
0.2195g溶于水，定量转入1000ml容量瓶中，加硝酸3ml，定容，即为50ug/ml
的磷标准液。
3.测定
（1）试样的分解：同测钙。
（2）标准曲线的制作
准确移取0﹑1.0﹑2.0﹑5.0﹑10.0﹑15.0ml磷标准溶液于50ml的容量瓶中，各加钒钼酸铵10ml，定容，放10min，以0ml溶液为参比，用10mm比色池，420nm 波长下，测吸光度。以磷为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线或做出回归方程。（3）试样的测定
准确移取试样分解液ml于50ml容量瓶中，加钒钼酸铵10ml，定容，比色测定吸光度，用标准曲线查得试样分解液的含磷量。
4.结果计算
磷% = 标准曲线查得含磷量/试样质量×移取试样分解液体积×100
重复性：取至少二个平行样取平均值。含磷量小于0.5%，允许相对偏差小于10%，含磷量在0.5%之上，允许偏差不超过3%。
实验八饲料中粗纤维的测定
1.原理
用固定量的酸和碱，在特定条件下消煮样品，再用乙醚，乙醇除去醚容物，经高温灼烧扣除矿物质的量，所余为粗纤维。
2.试剂
（1）硫酸：分析纯，0.255±0.005N（每100ml含硫酸1.25g，用氢氧化钾标准溶液标定。）
（2）氢氧化钠：分析纯，0.313±0.005N（每100ml含氢氧化钠1.25g，用茎准邻苯二甲酸氢钾标定）
（3）酸洗石棉：将中等长度洗涤石棉薄铺在蒸发皿中，放入600℃茂福炉中灼烧16h，用配置的1.25%硫酸浸没石棉，煮沸30min，过滤，用蒸馏水洗净酸，同样用1.25%
氢氧化钠煮沸30min，过滤，用蒸馏水洗净。烘干。放入600℃茂福炉中灼烧16h，
烧去有机物。
（4）正辛醇
3.测定
（1）取2g样品用乙醚提去脂肪后，全部移入500ml锥形瓶中。
（2）在锥形瓶中加煮沸的0.255N 硫酸液200ml和1滴防泡沫剂。用蜡笔在液面处画一刻度线，在锥形瓶口加表玻璃盖或连接回流冷凝瓶。
（3）将锥形瓶立即放在电热板上加热，使瓶内液体在2min内煮沸，继续煮沸30min，每隔5min摇动锥形瓶一次，以充分混合瓶内物质，避免样品贴杂液面以上的瓶壁
上，在加热过程中溶液若有蒸发，应添加煮沸的蒸馏水至锥形瓶的200ml刻度处。
（4）30min后立即移开锥形瓶，随后用铺有滤布的抽滤漏斗抽滤。调节漏斗抽气速度，使200ml滤液在10min内全部滤净，再以沸水洗涤锥形瓶与残渣，直至滤液用蓝
色石蕊试纸检查呈中性反应为止。
（5）用200ml煮沸的0.313N氢氧化钠溶液，将滤布上的残全部冲入原锥形瓶中，在锥形瓶中加表玻璃皿。
（6）立即将锥形瓶放在电热板上，在1min内煮沸，重复（3）（4），在洗涤过程中可先用25ml煮沸的0.255N硫酸液，再用沸水洗涤，直至滤液用红色石蕊试纸检查诚
中性反应为止。
（7）在抽滤瓶上安装一个铺有石棉的致密薄层古氏坩埚。
（8）将滤布上的饿残渣全部移入古氏坩埚，进行方法同（5），但是只用蒸馏水冲洗，用抽滤瓶抽去古氏坩埚中的水。再用25ml乙醇冲洗坩埚中的水。
（9）将坩埚及内容物放入105℃烘箱中烘至恒重。
（10）将坩埚及内容物先在电炉上炭化，然后移入600℃茂福炉中灼烧，至恒重（约30min）。
4.计算
粗纤维% = 坩埚及内容物烘干后的重量-灰化后坩埚及内容物重量/样本重× 100
实验九植物蛋白原料生熟度判定
一植物蛋白的氢氧化钾溶解度的测定
1.目的：判断豆粕，棉粕等植物蛋白原料加工的生熟度，一般豆粕的溶解度在70
—85%。
2.试剂
（1）2%氢氧化钾试剂，0.042mol，pH为12.5。
（2）其他试剂为定氮所需试剂。
（3）制备氢氧化钾试剂：取2.360g氢氧化钾于容量瓶中，溶解于水，稀释至1000ml，注意补充氢氧化钾的纯度。
3.实验步骤
2.0g样品（过60目），加入250ml锥形瓶中，再加100ml氢氧化钾溶解并搅拌
20min。再将50ml上清液转入离心管，以2700转/分转速离心10min，取10-20ml
上清液进行消化，凯氏定氮。
4.计算
蛋白质溶解度，PS%=溶解于KOH中的蛋白质%/原样本中的粗蛋白质% ×100
二大豆制品中尿素酶活性的测定方法
方法一：酸度计法
1.原理:根据AOCS法，测定出自于大豆及加工产品的尿素酶活化度。
2.仪器
（1）可调节温度的恒温水浴锅
（2）pH计
（3）50ml碘瓶
3.试剂
（1）磷酸二氢钾
（2）磷酸氢二钾
（3）尿素[CO（NH2）2]
（4）甲苯
（5）0.05M磷酸缓冲液：
磷酸二氢钾3.403g 100ml水中
混合1000ml，调pH为7.0 磷酸氢二钾4.335g 100ml水中
（6）尿素缓冲液：取分析纯尿素15g，溶于500ml磷酸缓冲液，再加5ml
甲苯防腐剂（防止霉菌发酵），调pH 值为7.0
4.步骤
0.8g样品+40ml尿素缓冲液
试样粉碎到0.35mm以下摇匀后放入
0.8g样品+40ml磷酸缓冲液
30℃恒温水浴槽中，每5min摇匀一次，反应30min，在5min内测定pH值。
5.计算：尿素酶活化度（pH值上升值）=试样的pH测定值-空白的pH值
方法二尿素酶快速测定法——酚红法（参考法）
1.称取0.2g经磨细的豆粕样品放置试管中，注入2%尿素1ml，开始计
时，加入指示剂苯酚2滴，再加入8ml蒸馏水，（20-30s）开始震摇
试管约10s，直至全脂豆粕浮在液体层，每摇动10s约等待3s，再观
察溶液层颜色，如果出现粉红色，计下时间，与尿素酶活性表对照，
如果颜色不变，则再摇10s约等待3s，然后再观察溶液层颜色，重复
操作，如一直不变，再重头开始。（做实验以前，要先做空白实验，
如果呈粉红色则指示剂已经不能用，重新配置指示剂。震摇停止后观
察溶液的颜色时要等3s，不可太快或太慢，否则会看错，晚间不能做
该实验。
时间（min）豆粕尿素酶活性
0-1 0.9以上
1-2 0.9-0.7
2-3 0.7-0.5
3-3.5 0.5-0.4
3.5-4 0.4-0.3
4-4.5 0.3-0.25
4.5-5 0.25-0.2
5-6 0.2-0.15
6-7 0.15-0.1
7-9 0.1-0.05
12无色0
方法三：尿素酶活性快速测定法——酚红法（粗略法）
1. 原理：尿素酶 + 尿素氨气（用酚红作指示剂）
2.试剂
（1）N氢氧化钠：称0.4g氢氧化钠溶于100ml水中。
（2）0.1N硫酸：将2.77ml浓硫酸加入1000ml水中稀释。
（3）尿素—酚红溶液：
0.14g酚红溶于35ml水中+7ml0.1N氢氧化钠
混合 0.1N硫酸滴定琥珀色
21g尿素溶于300ml水中
2. 方法：将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中，将已调好的尿素——酚
红溶液加入小玻皿中的豆粕上，直至完全锦湿，停留5min ，观察豆粕的红色反应。
少量红点 微量活跃（△pH=0.05-0.10） 约25%红点 中度活跃（△pH=0.10-0.25） 约50%红点 活跃（△pH=0.30-0.50） 约75%红点
非常活跃（△pH ≧2.0）
5min 没红点出现，停留25min 任无
豆粕过熟
实验十 氯化胆碱含量的测定
一 . 70%氯化胆碱水溶液中氯化胆碱含量的测定
1.原理：乙酸汞 + 氯化胆碱 氯化汞 + 乙酸盐 高氯酸 滴定
2.试剂
（1） 冰乙酸：优级纯
（2） 乙酸汞试液：50g/L ，取5g 乙酸汞研细，加100ml 温热的冰乙酸溶解 （3） 结晶紫指示剂：2g/L ，取0.2g 结晶紫，加100ml 冰乙酸 （4）
高氯酸标准溶液（0.1mol/L ）
3.测定
0.3g 样品 + 20ml 冰乙酸 +2ml 乙酸酐 +10ml 乙酸汞试液 + 2滴结晶紫指示液 摇匀，用高氯酸标准溶液滴定至溶液呈纯蓝色，同时进行空白测定。 4.计算
氯化胆碱% = ×100
式中：c0——高氯酸标准溶液的浓度
V ——滴定试样时消耗的高氯酸溶液体积 V0——滴定空白时消耗的高氯酸溶液体积 M ——试样的质量
二次平行测定结果绝对差值不大于0.2%，取其平均值
二 . 50%氯化胆碱粉剂中氯化胆碱含量的测定：原理，试样制备不同，其余与一同 1. 原理：将样品中的氯化胆碱用甲醇萃取出来，蒸发掉溶剂后，再用非水滴定法测定其
中的氯化胆碱含量。
2. 试样的制备
称取在105℃下干燥3h 的样品0.7g ，置于250ml 锥形瓶中，加40ml 甲醇，充分摇动30min 后过滤，再用约20ml 甲醇洗涤沉淀4次，将滤液和洗液合并，在水浴上蒸发至干，备用。 3. 测定：试样加微热冰乙酸20ml 后，按一.3 程序操作测定。
允许平行差值不大于0.5%，取其平均值。
三 . 50%氯化胆碱粉剂中氯化胆碱含量的快速测定
CO （V-V0）×139.63
m ×1000
105℃下干燥3h 的样品0.7g 置于250ml 的锥形瓶中，+40ml 冰乙酸 ，在电炉上加热保持微沸10min ，+ 2ml 乙酸酐+2滴结晶紫指示剂，在用高氯酸标准溶液滴定至溶液呈纯蓝色。
实验十一 油脂酸价的测定
1. 原理：用中性乙醚-乙醇混合溶液溶解油脂及其脂肪酸，再用碱标准溶液滴定。
2. 试剂准备
（1） 中性乙醚-乙醇混合溶液：乙醚与乙醇2：1混合，临用前以酚酞为指示剂，用
0.1N 氢氧化钠标准溶液滴定至中性。
（2） 0.1N 的氢氧化钾标准溶液 3. 测定
3-5g 样品 + 中性乙醚-乙醇混合液50ml + 3滴酚酞指示剂 0.1N 氢氧化钾滴定 淡红色 4. 数据处理
酸价 =
56.1——氢氧化钾的摩尔质量
实验十二 油脂过氧化值的测定
1.原理：油脂中的过氧化物 + 碘化钾 碘用硫代硫酸钠滴定
2.试剂
（1） 氯仿-冰乙酸混合溶液：氯仿40ml 加冰乙酸60ml ，混匀 （2） 饱和碘化钾溶液：取碘化钾5g ，加水10ml （3） 0.02mol/l 硫代硫酸钠标准溶液 （4）
0.5%淀粉指示剂
3.测定
2-3g 试样，注入250ml 碘量瓶中，加入30ml 氯仿-冰乙酸混合溶液，振摇使试样溶解，加1ml 饱和碘化钾溶液，加塞后摇匀，在暗处放置3min ，取出加水100ml ，摇匀后立即用0.02ml/l 的硫代硫酸钠标准溶液滴定至淡黄色，加0.5%淀粉指示剂1ml ，滴定至蓝色消失为止，再做空白实验。
4.计算
过氧化值%（以碘%表示） =
0.1269——与1mlmol/l 硫代硫酸钠标准溶液相当的碘的克数
氢氧化钾溶液浓度×消耗氢氧化钾体积×56.1
试样的质量
（耗硫代硫酸钠体积-空白耗其体积）×其浓度×0.1269
试样的质量
实验十三鱼粉掺假检测及真蛋白质的测定
一.鱼粉中掺尿素的测定
1.原理
尿素尿素酶氨态氮甲酚红红色与尿素含量成正比
2.定性测定
试剂：0.1%甲酚红指示剂，0.1g甲酚红溶于100ml95%乙醇中
方法一：
5g鱼粉加入二支试管中，其中1支加入少许黄豆粉，各加蒸馏水5ml，振摇后置60-70℃水浴中放30min，取出后滴加6滴0.1%甲酚红指示剂，如果加黄豆粉的试管出现深紫红色，说明掺有尿素，无尿素呈黄色或棕黄色
方法二：
取鱼粉2g于烧杯中，加水20ml，搅拌后放置几分钟后过滤，取样品滤液2ml于白色蒸发皿中，加3滴0.1%甲酚红指示剂，再加6滴黄豆液（5g黄豆粉加水100ml浸泡1h，取其滤液），静置5min，若有尿素存在即呈深紫色且散开象蜘蛛网样。无尿素呈黄色。
3.定量测定
（1）试剂
1)对二甲氨基甲醛（DMAB）溶液：溶解4.0gDMAB于100ml无水乙醇中加10ml浓盐酸摇匀。
2)尿素标准溶液：储备液，称取5.00g尿素，用水稀释至100ml
1.0mg/ml标准工作溶液：量取10ml储备溶液稀释至100ml
0.2mg/ml标准工作液：量取10ml储备液稀释至50ml，再取此稀释液10ml稀释至100ml
3)乙酸锌溶液：溶解22.0gZn（AC）2﹒2H2O于水中，加入3ml冰乙酸，并稀释到100ml
4)亚铁氰化钾溶液：称取10.6gK4Fe（CN）6.3H2O用水稀释到100ml
5)磷酸盐缓冲液（pH=7）：将3.403g无水磷酸二氢钾和4.355g无水磷酸氢二钾分别溶于
100ml水中，合并次二溶液，并稀释至1000ml
6)活性炭
（2）测定方法
a)样品制备：样品粉碎到20目以下，称取1.00g样品于150ml烧杯中，加入1g活性炭并
准确移取90ml水，摇匀，放置10min，再分别加入5ml乙酸锌溶液和5ml亚铁氰化钾溶液，搅匀并放置30min，用滤纸过滤，滤液待用。同时做空白实验。
b)标准曲线绘制
测1%以上尿素含量的样品，用1.0mg/ml浓度的标准液，用1cm比色池；含量在1%以下的样品，用0.2mg/ml浓度标准液，用2cm比色池。
分别取尿素标准液0.1.2.3.4.5.7.10ml和磷酸盐缓冲液5ml于9个25ml具塞比色管中，加水约18ml，分别加入DMAB液5ml，用水稀释到刻度，摇匀，放置10min。然后以0ml 标准管为参比，在420nm波长下，测定吸光度。以吸光度为纵坐标，尿素浓度为横坐标作图，图形应该为一条直线，否则重做。
C）样品测定
准确移取一定量样品滤液（样品尿素含量在1%以下取15ml，1%以上取5ml）于25ml比色管中，以下操作同b）。由所测吸光度查标准曲线。
样品尿素含量在1%以下时：尿素（%）=2/3 ×（ C –C0）/m
样品尿素含量在1%以上时：尿素（%）=2（C – C0）/m
式中：C.C0——分别是测定样品和试剂空白所查得的尿素含量，mg
m——测定样品重，g
二 .鱼粉中掺入植物质、胺盐和鞣革粉的化学检验
（１）适用范围：适用于生产、加工、经销、调拨的饲料级鱼粉中掺入植物质、胺盐和鞣革粉的直接化学鉴别检验．
（２）试剂
1)碘
2)碘化钾
3)间苯三酚
4)二苯基卡巴腙
5)碘化汞化学纯
6)氢氧化钠
7)乙醇
8)硫酸
9)６mol/l氢氧化钠溶液
10)２mol/l硫酸溶液
11)碘－碘化钾溶液：取碘化钾６g溶于１００ml水中，再加入２g碘溶解摇
匀．
12)间苯三酚溶液：取间苯三酚２g加９０％乙醇到１００ml使溶解，摇匀
13)二苯基卡巴腙溶液：取二苯基卡巴腙０.２g，加９０％乙醇１００ml使
溶解，摇匀
14)奈斯勒试剂：取碘化汞２３g，碘化钾１.６g于１００ml的６ml／l氢氧
化钠溶液中，混合均匀．倾取上清液放置到棕色瓶中保存．
15)生豆粉：取新鲜干燥的大豆粉或刀豆粉碎后，过４０目，加盖保存．
16)尿素酶溶液：称取尿素酶０.２g溶于50ml水中,冰箱保存.
17)甲酚红指示剂:称取0.1g甲酚红溶于10ml乙醇中,溶解后再加乙醇到
100ml.
( 3 ) 鱼粉中掺入植物质的检验
1)原理:植物质中含有木质素和淀粉.木质素+间苯三酚在强酸条件下反应,产生红色
的化合物,淀粉与碘化钾反应可产生蓝色化合物.
2)方法:
1-2g鱼粉于50ml烧杯中,加入10ml水加热5min,冷却,滴入2滴碘-碘化钾溶液,观察颜色变化,如果溶液颜色立即变为蓝色表明试样中有淀粉存在。
另取鱼粉1g置于表面皿中，用间苯三酚溶液浸湿，放置5-10min，滴加浓盐酸2-3滴，观察颜色，如果试样呈深红色，则表明试样中含有木质素。
（4）鱼粉中掺入铵盐的检验
1)原理：铵盐一般都含有氨态氮，奈斯勒试剂能与含氨态氮物质产生黄褐色沉淀，
尿素在碱性条件下，由于尿素酶的催化作用，可生成氨态氮。
2)检验方法：取鱼粉试样1-2g于试管中，加10ml水振摇2min，静置20min，取上
清液2ml到蒸发皿中，加入1mol/l氢氧化钠溶液1ml置水浴上蒸干，再加水数
滴和生豆粉约10mg，静置2-3min，加奈斯勒试剂2滴。如试样有黄褐色沉淀产
生则表明有尿素存在。
鱼粉中掺有铵态氮物质的检验方法：取鱼粉1-2g，加水10ml，振摇2min，静置20min，取上清液2ml加1mol/l氢氧化钠1ml，加奈斯勒试剂2滴。如试样有黄褐色沉淀
表明有NH4+存在。
（5）鱼粉中掺入鞣革粉的检验
1）原理：用铬鞣制的皮革中均含有铬，将鱼粉灰化，鞣铬中有一部分铬转化为6价铬，在强酸性条件下，6价铬可与二苯基卡巴腙反应生成铬-二硫代卡巴腙的
紫红色水溶性化合物。
2）方法：取鱼粉试样1-3g于坩埚中置于电炉上炭化到烟散尽，于550-660℃高温炉中灰化30min，直到却变为灰白色，加入2mol/l硫酸溶液10ml搅拌，加二
苯基卡巴腙溶液数滴，观察颜色变化，如紫红色表明鱼粉中掺有鞣革粉。（6）真蛋白的测定
方法一：盐析法
1)试剂：
I.硫酸铜溶液：10%，称取50.00g硫酸铜加水溶解，并稀释到500ml。
II.氢氧化钠溶液：2.5%，称取12.50g氢氧化钠，加水溶解，并稀释到500ml。
III.盐酸标准溶液：0.05mol/l。
2）测定
1g样品 + 50ml蒸馏水于250ml烧杯中，于电炉上加热煮沸，加入20ml10%硫酸铜溶液，再在搅拌下缓缓加入20ml2.5%氢氧化钠溶液，摇匀，从电炉上取下，室温下放置2h。
沉淀物用中速定性滤纸倾泻法过滤。并用少量70℃以上热水多次洗涤烧杯和沉淀物，直至滤液无硫酸根离子（用5%BaCl2溶液检验无沉淀），连沉淀物一起放入80℃烘箱中烘到略潮，放入凯氏定氮烧瓶中，消化，测定其中的蛋白质含量，同时进行空白测定。方法二：测非蛋白氮法
1）NP的测定
称取15g 左右样品，准确加入100ml5%三氯乙酸溶液，浸泡震荡2h，静置过滤，精确量取10-20ml滤液定氮，同时做空白实验。
2）一般进口鱼粉cp在80%以上，国产鱼粉cp在75%以上。
实验十四饲用玉米脂肪酸值的测定
1.试剂
1）01mol/lKOH乙醇标准溶液：取0.5mol/lKOH溶液100ml，用乙醇（95%）稀释到1L，然后安GB601标定。
2）酚酞指示剂：2g/l乙醇溶液
3）无水乙醇
2.步骤
将平均样品按四分法制得约80g样品粉碎，过0.45mm（40目）孔径筛，立即称取10g样品，于150ml具塞三角瓶中，加50ml无水乙醇，加塞振动10min，过滤，并用无水乙醇洗3次，每次15ml，然后加酚酞3滴，用0.01mol/lKOH乙醇标准溶液滴定到溶液呈微红色，同时取90ml乙醇做空白。
3.数据处理
脂肪酸值 = （V - V0）× C × 56.1 / m × 100
式中： V——样品消耗碱标准溶液的体积，ml C—— KOH标准溶液的浓度，mol/l
VO ——空白消耗碱标准溶液的体积，ml M ——样品的质量，g
实验十五 油脂碘价的测定
1.原理：将试样溶于惰性有机溶剂中，加入过量的氯化碘的冰醋酸溶液（韦氏碘液）与油脂
中的不饱和脂肪酸起加成反应，生成饱和的卤素衍生物，再加入过量的碘化钾与剩余的氯化钾作用而生成游离碘，再用硫代硫酸钠标准溶液滴定游离的碘。
2.测定
根据试样碘值的大小，按下表称取试样（m ，准确至试样溶解，然后由滴定管精确放入5ml 韦氏液（加入速度不可过快，应掌握再2min 左右）立即盖紧瓶塞（塞口和瓶口先用少量15%KI 溶液润湿，以防碘挥发）摇匀后在20℃条件下于暗处静置30min （碘价在130以上的静置60min ），使加成反应完全，到时立即加入15%碘化钾溶液20ml 和水100ml ，不断振摇下用0.1N 硫代硫酸钠溶液滴定至溶液有棕红色变成淡黄色时，加入1ml 淀粉指示剂（5%），继续滴定至蓝色消失为止。同时做空白实验。
碘价数值与试样用量表 碘价 试样用量范围（g ） 碘价 试样用量范围（g ） 20 0.8461-1.5865 100 0.2538-0.3173 40 0.6346-0.7935 120 0.2115-0.2644 60 0.4231-0.5288 140 0.1813-0.2266 80 0.3173-0.3966
160
0.1587-0.1983
3.数据处理
碘价 = ×100
式中：V1——滴定试样消耗的硫代硫酸钠的量，ml
V2——滴定空白消耗的硫代硫酸钠的量，ml
每个试样做二个平行实验，碘价在100以上不超过1，碘价在100以下，不超过0.6，取平均数。
4.韦氏液的配置
称取13g 纯碘于500ml 烧杯中加200ml 冰醋酸，在水浴上微热使其溶解，冷却后移入1000ml 容量瓶中，以冰醋酸稀释至刻度，从容量瓶中取150ml 作韦氏液用，其余碘液按图装置通入经过洗涤和干燥的氯气，使之与碘作用，生成氯化碘，反应：盐酸与高锰酸钾反应生成氯气，经过水洗涤除去水溶性杂质，经浓硫酸洗后可脱水净化。氯气与碘反应生成氯化碘，将氯气通入碘冰乙酸溶液中，使碘冰乙酸溶液由浓褐色变为透明的橙红色为止。
（V2-V1）×N ×0.1269 m