一、植物组织培养：狭义指对植物体组织或由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养直至生成完整植株。广义：无菌操作分离植物体一部分(即外植体)接种到培养基，在人工条件下培养直至生成完整植株。生物技术中的一个基本技术。
MS：MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的，特点是无机盐和离子浓度较高，是较稳定的离子平衡溶液，它的硝酸盐含量高，其营养丰富，养分的数量和比例合适，不需要添加更多的有机附加物，能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广，多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。
愈伤组织愈伤组织callus在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在植物体切面上产生。
cDNA文库：包含细胞全部的mRNA信息的反转录所得到的cDNA的集合体。
胚状体：是指植物在离体培养条件下，非合子细胞经过胚胎发生和发育的过程形成的胚状结构，又称体细胞胚。
体细胞杂交：体细胞杂交又称体细胞融合，指将两个GT不同的体细胞融合成一个体细胞的过程。融合形成的杂种细胞，兼有两个细胞的染色体。
分子标记：是指在分子水平上DNA序列的差异所能够明确显示遗传多态性的一类遗传标记。
基因工程原称遗传工程，亦称重组DNA技术，是指采用分子生物学手段，将不同来源的基因，按照人类的愿望，在体外进行重组，然后将重组的基因导人受体细胞，使原有生物产生新的遗传特性，获得新品种，生产新产品的技术科学。
细胞培养指动物、植物和微生物细胞在体外无菌条件下的保存和生长。过程：①取材和除菌；②培养基的配制；③接种与培养。
生物反应器是适用于林木细胞规模化培养的装置。
生物技术biotechmlogy：也称生物工程，是指人们以现代生命科学为基础，结合其他基础学科的科学原理，采用先进的工程技术手段，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需产品或达到某种目的。
外植体explant：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
植物细胞的全能性：植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
再分化：脱分化的分生细胞（愈伤组织）在一定的条件下，重新分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株的过程。
器官发生organogenesis：亦称器官形成，一般指脊椎动物个体发育中，由器官原基进而演变为器官的过程。各种器官形成的时间有早有晚，通过器官发生阶段，各种器官经过形态发生和组织分化，逐渐获得了特定的形态并执行一定的生理功能
体细胞胚胎发生：单细胞或一群细胞被诱导，不断再生非合子胚，并萌发形成完整植株的过程。
PCR：聚合酶链式反应是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。Recombinant DNA重组DNA：是指采用分子生物学手段，将不同来源的基因，按照人类的愿望，在体外进行重组，然后将重组的基因导人受体细胞，使原有生物产生新的遗传特性，获得新品种，生产新产品的技术科学。
细胞融合：两个或多个细胞相互接触后，其细胞膜发生分子重排，导致细胞合并、染色体等遗传物质重组的过程称为细胞融合。
悬浮培养：悬浮培养是细胞培养的基本方法，不仅为研究细胞的生长和分化提供了一个
独特的实验系统，而且细胞增殖速度快，适于进行大规模培养，在植物产品工业化生产上有巨大的应用潜力。
二、1. 植物器官培养包括哪些步骤
植物器官培养主要是指对植物的根、茎、叶等器官进行的离体培养。
2. 举例说明林木体细胞胚的诱导方法。
胚状体的产生有两种方式，一是外植体首先经诱导产生愈伤组织，由愈伤组织进一步发育成胚状体；二是直接从外植体的某个部位分化出胚状体。
胚状体诱导方式：（1）愈伤组织产生胚状体（最常见方式）；（2）在一定条件下可以直接从器官上发生胚状体，如山楂传粉后的胚珠在离体培养条件下，可由合子胚产生许多胚状体；（3）悬浮培养的单细胞发生；花药培养中，从小孢子或花粉可以发育成为成熟的胚状体
3. 分子标记的特点是什么主要应用在哪些方面
分子标记：在分子水平上DNA序列的差异所能够明确显示遗传多态性的一类遗传标记。DNA分子标记与其他标记相比，优点为：①它克服了形态标记数量上的有限性和同工酶标记的时空表达问题。②大多数分子标记是共显性的，基因组变异极其丰富。分子标记在数量上几乎是无限的，在植物发育的不同阶段、不同组织的DNA都可用于标记分析。
③DNA分子标记不受环境影响，其变异只是源于等位位点DNA序列的差异o④不需专门创造特殊的遗传材料。
4. 什么是菌根茵根对宿主植物的作用有哪些如何发挥菌根生物技术在林业生产中的作用
菌根是植物的根系与土壤真菌形成的一种互惠共生体系。菌根形成后菌根真菌从植物体内获取必要的碳水化合物及其他营养物质，而植物也从真菌那里得到所需的营养及水分，从而它们达到一种互利互助，互通有无的高度统一酌关系，菌根既具有一般植物根系所具有的特征，又有专性真菌所具有的特征。
菌根对宿主植物的作用(菌根生物技术与林业生物技术有何关系)：菌根能扩大宿主植物根的吸收面积；增加宿主植物对磷及其他矿质营养的吸收；菌很真菌能产生植物生长调节物质；菌根改善植物根际环境；苗根增强植物的防病、抗病能力
如何发挥菌根生物技术在林业生产中的作用：
（1）适地适树适菌：造林工作提倡“适地适树”。那么菌根技术的应用也应为特定立地条件生长的树种选择最适合的菌种，称之为“适地适树适菌”。只有这样才能最大限度地发挥菌根的有益作用。(2)林业技术的配合：菌根技术的应用必须配合于适当的生产技术措施，原则是为菌根真菌的继续生长与菌根形成创造最适合的条件。否则菌根无法发挥其应有的作用。(3)正确而灵活运用按种技术：①菌根的形成是在植物的营养根上，所以，接种时应尽量使菌剂直接与苗根接触，在短期内使其侵染形成菌根，尽早发挥菌根的有益作用。②接种以幼苗期接种为最好，以春季新的营养根生长时为最佳。②接种量也应适当，接种量的大小与菌根形成的速度有直接关系。幼苗接种量可小一些，大的苗木接种量可适当加大，一般在生产应用前适当做生产小试为更科学合理。
5. 木本植物起始培养褐化现象的产生原因和预防措施各是什么原因：由于外植体切口表面渗出的酚类物质氧化的结果。预防措施：及时转到新鲜培养基上；先进行液体培养；加入抗氧化物，如抗坏血酸、盐酸半胱氨酸；加入吸收酚类化合物的活性炭、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）；由于光能促进酚的氧化，开始时培养物置于暗处培养。
6. 简述基因工程的一般步骤:(1)提取目的基因；(2) 目的基因与运载体结合；(3) 将目的基因导入受体细胞；(4)目的基因的检测和表达。
7. 如何对转基因生物进行安全性评价
转基因生物安全评价是转基因生物应用和生态环境安全必须进行的程序。
1营养评价：对转基因食品营养价值的评价包括３个要素：组成成分、在膳食中的作（是否补充某种营养素）和在膳食中的应用情况，应结合人体的膳食摄入情况对其营养价值进行评价2.毒理性分析：从理论上讲，任何外源基因的转入都有可能导致遗传工程体产生不可预知或意外的变化。转基因食品的毒理学评价试验项目包括：毒物动力学和代谢试验、遗传毒性、增殖性、致病性、啮齿类动物９０ｄ亚慢性喂养试验及其它毒性试验３.过敏性分析：重点分析基因的来源、目标蛋白与已知过敏原的序列同源性，目标蛋白与已知过敏病人血清中ＩｇＥ能否发生反应，以及目标蛋白的理化特性。主要分为两种情况：①在转基因食品中含有的外源基因来自已知含有过敏原的生物，在这种情况下，新的决定树主要针对氨基酸序列的同源性和表达蛋白对过敏病人潜在的过敏性。②在转基因食品中含有外源基因来自未知含有过敏原的生物，则应该考虑与环境和食品过敏原的氨基酸同源性。
8. 生物技术包括哪些基本的内容它对人类社会将产生怎么样的影响
生物技术又称生物工程，即应用生物学和工程学的原理，对生物材料、生物所特有的功能，定向地组建成具有特定性状的生物新品种的综合性的科学技术。
生物工程包括五大工程，即遗传工程(基因工程)、细胞工程、微生物工程(发酵工程)、酶工程(生化工程)和生物反应器工程。在这五大领域中，前两者作用是将常规菌(或动植物细胞株)作为特定遗传物质受体，使它们获得外来基因，成为能表达超远缘性状的新物种——“工程菌”或“工程细胞株”。后三者的作用则是这一有巨大潜在价值的新物种创造良好的生长与繁殖条件，进行大规模的培养，以充分发挥其内在潜力，为人们提供巨大的经济效益和社会效益。
它对人类社会将产生怎么样的影响：生物技术因其具有高附加值、低能耗、低公害、高研究与开发比重等特色，对人类解决生产与健康、食品短缺、资源与能源缺乏、环境污染重大问题以及其它新型电子信息器件的研制等带来了前所未有的新希望，对农业、工业、医学、药物学、能源、环保、冶金、化工原发挥着重要作用。它必将对人类社会的政治、经济、军事和生活等方面产生巨大的影响，为世界面临的资源、环境和人类健康等问题的解决提供美好的前景。如生物工程在医药方面有着广泛的应用：人类的许多疾病都与基因有关。在基因水平上对人类的疾病进行诊断和治疗，是科学家们正在探求的另一个重大课题。为了弄清人类约10万个基因的结构和功能，美国从1988年开始实施“人类基因组计划”，目前这项研究已经成为国际间合作的一项重大科研课题。
当然，生物科学的新进展远不止这些。除了在生物工程和生态学领域以外，生物科学在其他许多领域也取得了令人鼓舞的进展，向人们展示出美好的前景。
但是技术的发展往往具有正反两种作用，也是一把双刃剑，现代生物技术在带给人类社会新的发展的同时，也带来了潜在的负面影响。一方面，由于生物技术的对象是生命，使其因在人类、动物、植物、微生物之间进行认为的相互转移，目前人类对这种基因调整后的结果尚无十足把握，因而有一定的不确定性。
9. 影响木本植物器官发生的主要因子有哪些
（1）基因型与外植体；（2）培养基与激素；（3）其他因素：光照、温度等培养条件对诱导木本植物器官发生再生植株起着重要调控作用
10. 用图例说明体胚的发育形式(包括被子植物和裸子植物)。
11. 生物技术有哪些方面的的风险你如何评价这些风险
人们对生物技术安全性的担忧(1)基因工程对微生物的改造是否会产生某种有致病性的微生物，这些微生物都带有特殊的致病基因，如果它们从实验室逸出并且扩散，势必造成类似鼠疫那样的可怕疾病的流行。(2)转基因作物及食品的生产和销售，是否对人类
和环境造成长期的影响，擅自改变生物基因将会引起一些难以预料的危险。 (3)分子克隆技术在人类身上的应用将造成巨大的社会问题，并对人类自身的进化产生影响；而应用在其他生物上同样具有危险性，因为所创造出的新物种可能具有极强的破坏力而引发一场浩劫。 (4)生物技术的发展将不可避免地推动生物武器的研制与发展，使笼罩在人类头上的生存阴影越来越大。
(5)动物克隆技术的建立，如果被某些人用来制造克隆人、超人，将可能破坏整个人类的和平。应该说，这种种忧虑在理论上都是很有道理，并且都有着其现实基础的。所幸的是，人们(包括科学家与公众)从生物技术诞生那天起就一直对其加以关注并采取防御措施，因此目前为止，还没有出现大规模的灾难。
生物技术对伦理、道德、法律的影响
(1)转基因技术某些宗教团体禁止食用的动物基因转入他们通常食用的动物中，这可能触怒这些团体，例如将猪的基因转入绵羊；将动物基因转入食用植物可能会引起一些素食主义者的特别关注；用含人类基因的生物体作为动物饲料而可能引发的伦理问题。
(2)动物克隆技术上面已经提到人的克隆可能对人类社会的破坏。从法律层面看，人的克隆同样给人们带来困扰，提供体细胞的人与被克隆的人从法律上看是父子、母子或兄弟 (3)人类基因组与基因诊断技术一个人的遗传信息(基因组序列)是不是一种隐私基因诊断过程会不会侵犯个人隐私保险公司或工厂的顾主是否有权力要求投保人或被雇佣者进行基因组检测，预测他们将来可能罹患某些疾病，再决定是否接受投保或雇佣
12. 简述利用体胚发生再生遗传转化植株的主要途径
13. 什么叫人工种子简述其制作的主要流程
人工种子又称合成种子、无性种子，通常是指将植物离体培养中产生的胚状体(体细胞胚)、不定芽、小鳞茎、顶芽、腋芽等繁殖体包裹在能够提供养分的胶囊(人工胚乳)和具有保护功能的外膜(人工种皮)内，形成类似于天然植物种子的结构。
植物人工种子制作的程序包括以下步骤：
①体细胞胚的诱导及同步化控制：胚状体是离体培养过程中植物再生的方式之一。可从悬浮培养的单细胞、愈伤组织、花粉或胚囊而获得。胚状体一般在培养物的表面产生，其形状与合子胚类似，但胚状体却是无性繁殖的产物。胚状体和合于胚一样，其发育过程都要经历：原胚—球形胚—心形胚—鱼雷形胚—成熟胚等各个发育阶段。用于制作人工种子的胚状体应是成熟胚或接近成熟的胚，此时胚体积较大，内部物质积累也较丰富，结构也较完整。为了使人工种子发芽整齐均匀，要求体细胞胚发育成熟必须一致，因此，胚状体须经同步化处理。②胚状体的包埋:包埋剂。目前，研究和应用较多的包埋基质是水凝胶性的海藻酸钠③人工种子的储藏及萌发。
人工种子的基本制作流程:外植体的选择和消毒——愈伤组织的诱导——体细胞胚的诱导——体细胞胚的同步化——体细胞胚的分选——体细胞胚的包裹(人工胚乳)——包裹外膜——发芽成苗试验——体细胞胚变异程度与农艺研究
1、组织培养实验室必要的设备有：常规设备、灭菌设备、无菌操作设备、培养设备、细胞鉴定设备。
2、培养基成分主要包括：水、无机营养物、有机营养物、植物生长调节剂、糖类。
3、生长素/细胞分裂素的高低决定着外植体的发育方向，其比值高：有利于根的形成；低：有利于芽的形成。
4、培养基中加入活性炭的目的：吸附培养过程中外植体释放出的有害物质。
5、绝大多数培养植物再生植株时都先经过愈伤组织阶段。
1、简述植物组织培养的理论依据植物组织培养的理论依据是植物细胞具有全能性。即植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2、植物组织培养技术主要包括哪些环节各环节的主要工作内容(1)培养基的配置及灭菌：包括培养基的选择、母液配置、培养基配置、培养基灭菌；（2）外植体的选择和灭菌：供体植物材料的选择、外植体的选择和处理；（3）无菌接种技术：包括接种室的消毒、工作人员用工作服、口罩等的消毒、超净工作台的清洁与杀菌、操作工具的灭菌；（4）培养技术：主要是培养条件的控制，包括温度、光照、湿度等各种物理环境条件及培养基的组成、PH、渗透压等各种化学环境条件。（5）试管苗的驯化和移栽。
植物组织培养的简单过程：剪接植物器官或组织——经过脱分化（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过再分化形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。
大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做愈伤组织。再适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。
3、器官发生形成小苗的方式：（1）愈伤组织仅有根或芽器官的分别形成，即无根的芽或无芽的根；（2）先生芽，后长根，多数情况（3）先生根，再从根的基部长芽。这种情况比较难诱导芽的形成，尤其对单子叶植物（4）现在愈伤组织的临近不同部位分别生成芽和根，然后二者结合起来形成完整的植株。
4、在植物组织培养中，通过哪些途径可以得到完整的植株
答:(1)外植体--愈伤组织--根、芽--试管苗；（2）外植体--胚状体--试管苗；（3）外植体--根、芽--试管苗。
5、胚状体发生途径与器官发生途径形成植株的区别
答:（1）胚状体具有两极性，即有茎端和根端；（2）胚状体的维管组织与外植的维管组织无结构上的联系；（3）胚状体维管组织的分布是独立的“Y”字型。
1.生物技术也可称为生物工程（Bioengineering），它是在分子生物学、细胞生物学和生物化学等理论基础上建立起来的。通俗地说，生物技术就是利用生物（动物、植物或微生物）或其产物，来生产对人类有用的物质的技术。
2.基因工程(Gene Engineering)，又称基因操作(gene manipulation)，重组DNA (recombinant DNA)。基因工程是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因(DNA分子)，按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性，获得新品种，生产新产品,或是研究基因的结构和功能。
3.细胞工程(Cell Engineering)，关于细胞工程的定义和范围还没有一个统一的说法，一般认为，细胞工程是根据细胞生物学和分子生物学原理，采用细胞培养技术，在细胞水平进行的遗传操作。细胞工程大体可分染色体工程、细胞质工程和细胞融合工程。
4.酶工程(Enzyme Engineering)，又称酶技术。它是围绕着酶所特有的生化催化特性，结合现代的技术手段，在体外模拟或在常温常压下生成酶反应的产品以及利用重组DNA 技术定向改变酶，进行酶的修饰，或酶的全人工合成。
5.蛋白质工程(Protein Engineering)，是更广义上的包括酶工程在内的蛋白质修饰操作，通过对蛋白质及酶的化学修饰及基因改造获得具有特殊功能的非天然蛋白质的技术。
6.发酵工程(fermentation engineering)，又称微生物工程，微生物发酵工程。利用生
物,主要是微生物的某种特定功能，通过现代化工程技术手段，生产有用物质，或把微生物直接用于某种工业化生产的一种技术体系。
7.植物组织培养概念（concept）狭义概念：指对植物体组织或由植物器官培养产生的愈伤组织进行培养直至生成完整植株。广义概念：无菌操作分离植物体一部分(即外植体)接种到培养基，在人工条件下培养直至生成完整植株。
8.愈伤组织〔callus〕:在离体培养过程中形成的具有分生能力的一团不规则细胞，多在植物体切面上产生。
9.外植体〔explant〕：从植物体上分离下来的用于离体培养的材料。
10.细胞全能性（totipotency）理论，植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
11.分化〔differentiation〕：细胞在分裂过程中发生结构和功能上的改变，从而在个体发育中形成各类组织和器官完成整个生活周期。
12.脱分化〔dedifferentiation〕：已分化好的细胞在人工诱导条件下，恢复分生能力，回复到分生组织状态的过程。
13.再分化〔redifferentiation〕：脱分化后具有分生能力的细胞再经过与原来相同的分化过程，重新形成各类组织和器官的过程。
14.原生质体（protoplast):去除全部细胞壁的细胞
15.亚原生质体（subprotoplast):只含有部分原生质的原生质体（有核或无核）
16.微原生质体（miniprotoplast):经细胞松弛素B处理得到的仅含少量胞质及核或染色体的小原生质体
17.原生质球（球状体，spheroplast):残存少量细胞壁的原生质体
18.胚状体:从体细胞或与生殖细胞有关的细胞发生的胚状结构，均称为“胚状体”。19体细胞胚胎发生：从植物体细胞获得胚状体的过程.
20.转基因植物是指利用基因工程技术，在离体条件下，对不同生物的DNA进行加工，并按照人们的意愿和适当的载体重新组合，再将重载体转入受体中，并使其在体内表达的植物。
21.重组DNA技术(DNA recombination technique)：是用酶学的方法将不同来源的DNA 在体外切割，连接组成一个杂合的DNA分子的技术。
22限制性内切酶（restriction endonuclease,restrction enzymes）是一类专门切割DNA的酶，它们能特异结合一段被称为限制酶识别顺序的特殊DNA序列。并切割dsDNA。所谓限制（restriction）=切割（clearage）=水解（hydrolysis）该部位的核苷键（磷酸二酯键）
23.载体：要把一个有用的基因（目的基因——研究或应用基因）通过基因工程手段送到生物细胞（受体细胞），需要运载工具（交通工具）携带外源基因进入受体细胞，这种运载工具就叫做载体（vector）。
24PCR：又称多聚酶链式反应，是一种体外DNA 扩增技术，是在模板DNA、引物和４种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将待扩增的DNA片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经“高温变性——低温退火——引物延伸”三步反应的多次循环，使DNA片段在数量上呈指数增加，从而在短时间内获得我们所需的大量的特定基因片段。
25菌根：土壤中某些真菌与植物根的共生体。
26：分子标记：广义的：(molecular marker)是指可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白质。狭义的：只是指DNA标记，而这个界定现在被广泛采纳：能反映生物个体或种群间
基因组中某种差异特征的DNA片段，它直接反映基因组DNA间的差异。
简答题：1. 影响木本植物器官发生的主要因子
答：(1)基因型与外植体(2) 培养基与激素A:生长素类在组织培养中，生长素主要被用于诱导愈伤组织形成，诱导根的分化和促进细胞分裂、伸长生长。在促进生长方面，根对生长素最敏感。在极低的浓度下，（１０－５～１０－８mg/L）就可促进生长。生长素与细胞分裂素的比例决定着发育的细胞类型，决定着愈伤组织再分化，是长根还是长芽。B 细胞分裂素类，这类激素是腺嘌呤的衍生物
（3) 其他因素：光照、温度等培养条件对诱导木本植物器官发生再生植株起着重要调控作用。
2.胚状体与器官发生型的区别
1、胚状体的识别:A两极分化，有根和茎尖。有分化中心，可以镜检确定；B维管束不与愈伤组织相连，是独立的；C具有典型的胚胎发生形态：圆形，心形，鱼雷形，子叶；D胚状体苗。有子叶和芽鞘，呈颗粒状。
2、器官发生型:A没有两极分化B维管束与愈伤组织相连C没有典型的胚胎发生过程D 没有子叶E有根发生
3.转基因植物的步骤
A目的基因的分离b.载体构建c.导入细菌并利用细菌繁殖扩增重组DNAd.对植物组织或细胞进行转化e.植株再生f.转基因植株的鉴定h.转基因植株的种植
7.与其它遗传标记相比，分子标记的优点
（1）直接以DNA的形式表现，在生物体的各个组织、各个发育阶段均可检测到，不受季节、环境限制，不存在表达与否等问题（2）数量极多，遍布整个基因组，可检测座位几乎无限（3）多态性高，自然界存在许多等位变异，无须人为创造（4）表现为中性，不影响目标性状的表达
（5）许多标记表现为共显性的特点，能区别纯合体和杂合体。
8.植物基因工程的优势（相对于传统育种的缺点）
（1）传统育种的缺点：a：杂交性状难选择，b：远缘亲本难杂交，c：杂交过程耗时，d：不同物种不能杂交
（2）植物基因工程优势A：植物细胞的全能性：几乎任何部位的单细胞都可以再生出完整的植株。叶片、茎尖分生组织、种子、幼胚、胚性悬浮细胞、胚性愈伤组织。B：植物容易大面积栽培：如大麦、水稻、甘蔗、玉米、向日葵等。C：能接受任何基因：可以把人的基因、植物的基因、动物的基因，任何一个基因都可以组合到植物里去。D：快速育种：拿一个抗病基因转进去，短时间内就得到一个抗病品种。转基因技术能对农作物的质量、数量进行精确的改良和提高，大大降低了生产成本，缓解了环境不断恶化的情况。
4.生物技术有哪些方面的风险你如何评估这些风险
A：基因污染：基因工程、细胞融合等技术使物种间进行任意基因转移成为可能，完全打破了物种间的屏障，这就有可能造成无法预料的生态后果。如，污染传统作物而改变其消费性质。污染自然界的基因库。影响自然界的生态平衡等。
B：转基因食品的安全性：近几年来，对转基因食品的安全性争论非常热烈。关于转基因食品的安全性目前尚无定论，科学家认为，转基因食品可能带来的风险有两个：一是基因被破坏或其不稳定性将会带来新的毒素；二是外来基因产生的新的蛋白质可能会带来过敏性或毒性。因此，用转基因生物生产的转基因食品和药品要进入市场，必须进行消费安全评估。我国也十分重视对转基因生物和食品的管理，卫生部于2002年4月8日发布了《转基因食品卫生管理办法》，并于当年的7月1日起施行。
C:基因治疗的不确定性:首先，目前发现的有治疗价值的基因还不多，而多基因控制的遗传病机理目前还不是非常清楚。其次，治疗中为了使基因有效地进入细胞内，基因常与腺病毒或逆转录病毒整合在一起，但病毒对机体的潜在风险还没有得到很好的解决。目前的技术还不能保证将基因引入生殖细胞对后代不造成伤害并且有效。
D:异种移植的危险性: 异种移植虽然能解决器官移植中的器官来源不足的问题，但从目前的技术水平来看，异种移植存在着相当大的风险，暂时还无法作为治疗手段展开。E:生物武器的恐慌:２００１年在美国发现的多起炭疽热病例为全世界敲响了警钟：如果对生物技术的发展再不加以必要的限制，它很可能会成为未来恐怖分子施用的主要恐怖手段。1972年，一些国家发起缔结了《禁止生物武器公约》，我国于1994年也加入了这一公约。
总之，生物技术的发展是一把双刃剑，如果没有一个全世界认可并执行的国际准则，生物技术的发展将会遇到阻碍并产生偏差，甚至会威胁到整个人类和地球的生存和安全。2000年1月29日在加拿大蒙特利尔通过的生物安全议定书，建立了以信息共享和科学决策为基础的全球框架，协助政府对生物技术的益处与风险加以管理。中国是签署该议定书的国家之一。
5.转基因植物的风险
A转基因作物本身成为杂草；B转基因作物使其亲缘野生种成为杂草或超级杂草；C转基因作物可能产生新的病毒或疾病；d.转基因作物对非目标生物的危险；e转基因作物作为外来种对新生境的入侵，使生物多样性受到威胁；f转基因作物对生态系统及生态过程的影响；g其它一些不可预计的风险。
6.组织培养过程
一、培养材料的采集：组织培养所用的材料非常广泛，可采取根、茎、叶、花、芽和种子的子叶，有时也利用花粉粒和花药，其中根尖不易灭菌，一般很少采用。对于木本花卉来说，阔叶树可在一、二年生的枝条上采集，针叶树种多采种子内的子叶或胚轴，草本植物多采集茎尖。
二、培养材料的消毒
（一）先将材料用流水冲洗干净，最后一遍用蒸馏水冲洗，再用无菌纱布或吸水纸将材料上的水分吸干，并用消毒刀片切成小块。
（二）在无菌坏境中将材料放入70％洒精中浸泡30－60秒。
（三）再将材料移入漂白粉的饱和液或％升汞水中消毒10分钟。
（四）取出后用无菌水冲洗三、四次。
三、制备外植体：将已消毒的材料，用无菌刀、剪、镊等，在无菌的环境下，剥去芽的鳞片、嫩枝的外皮和种皮胚乳等，叶片则不需剥皮。然后切成－0.5厘米厚的小片，这就是外植体。在操作中严禁用手触动材料。
四、接种和培养（一）接种：在无菌坏境下，将切好的外植体立即接在培养基上，每瓶接种4－10个。（二）封口：接种后，瓶、管用无菌药棉或盖封口，培养皿用无菌胶带封口。（三）温度：培养基大多应保持在25℃左右，但要因花卉种类及材料部位的不同而区别对待。
（四）增殖：外植体的增殖是组培的关键阶段，在新梢等形成后为了扩大繁殖系数，需要继代培养。把材料分株或切段转入增殖培养基中，增殖培养基一般在分化培养基上加以改良，以利于增殖率的提高。增殖1个月左右后，可视情况进行再增殖。
（五）根的诱导：继代培养形成的不定芽和侧芽等一般没有根，必须转到生根培养基上进行生根培养。1个月后即可获得键壮根系。
五、组培苗的练苗移栽：试管苗从无菌到光、温、湿稳定的环境进入自然环境，必须进
行炼苗。一般移植前，先将培养容器打开，于室内自然光照下放3天，然后取出小苗，用自来水把根系上的营养基冲洗干净，再栽入已准备好的基质中，基质使用前最好消毒。移栽前要适当遮荫，加强水分管理，保持较高的空气湿度（相对湿度98％左右），但基质不宜过湿，以防烂苗。
分子生物学试题及答案 一、名词解释 1．cDNA与cccDNA：cDNA是由mRNA通过反转录酶合成的双链DNA；cccDNA是游离于染色体之外的质粒双链闭合环形DNA。 2．标准折叠单位：蛋白质二级结构单元α－螺旋与β－折叠通过各种连接多肽可以组成特殊几何排列的结构块，此种确定的折叠类型通常称为超二级结构。几乎所有的三级结构都可以用这些折叠类型，乃至他们的组合型来予以描述，因此又将其称为标准折叠单位。 3．CAP：环腺苷酸（cAMP）受体蛋白CRP（cAMP receptor protein ），cAMP与CRP结合后所形成的复合物称激活蛋白CAP（cAMP activated protein ） 4．回文序列：DNA片段上的一段所具有的反向互补序列，常是限制性酶切位点。 5．micRNA：互补干扰RNA或称反义RNA，与mRNA序列互补，可抑制mRNA的翻译。 6．核酶：具有催化活性的RNA，在RNA的剪接加工过程中起到自我催化的作用。 7．模体：蛋白质分子空间结构中存在着某些立体形状和拓扑结构颇为类似的局部区域 8．信号肽：在蛋白质合成过程中N端有15~36个氨基酸残基的肽段，引导蛋白质的跨膜。 9．弱化子：在操纵区与结构基因之间的一段可以终止转录作用的核苷酸序列。 10．魔斑：当细菌生长过程中，遇到氨基酸全面缺乏时，细菌将会产生一个应急反应，停止全部基因的表达。产生这一应急反应的信号是鸟苷四磷酸(ppGpp)和鸟苷五磷酸（pppGpp）。PpGpp与pppGpp的作用不只是一个或几个操纵子，而是影响一大批，所以称他们是超级调控子或称为魔斑。 11．上游启动子元件：是指对启动子的活性起到一种调节作用的DNA序列，-10区的TATA、-35区的TGACA 及增强子，弱化子等。 12．DNA探针：是带有标记的一段已知序列DNA，用以检测未知序列、筛选目的基因等方面广泛应用。13．SD序列：是核糖体与mRNA结合序列，对翻译起到调控作用。 14．单克隆抗体：只针对单一抗原决定簇起作用的抗体。 15．考斯质粒：是经过人工构建的一种外源DNA载体，保留噬菌体两端的COS区，与质粒连接构成。16．蓝-白斑筛选：含LacZ基因（编码β半乳糖苷酶）该酶能分解生色底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷)产生蓝色，从而使菌株变蓝。当外源DNA插入后，LacZ基因不能表达，菌株呈白色，以此来筛选重组细菌。称之为蓝-白斑筛选。 17．顺式作用元件：在DNA中一段特殊的碱基序列，对基因的表达起到调控作用的基因元件。18．Klenow酶：DNA聚合酶I大片段，只是从DNA聚合酶I全酶中去除了5’→3’外切酶活性 19．锚定PCR：用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴，然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。 20．融合蛋白：真核蛋白的基因与外源基因连接，同时表达翻译出的原基因蛋白与外源蛋白结合在一起所组成的蛋白质。 二、填空 1． DNA的物理图谱是DNA分子的（限制性内切酶酶解）片段的排列顺序。 2． RNA酶的剪切分为（自体催化）、（异体催化）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（IF-1）、（IF-2）和（IF-3）。 4．蛋白质的跨膜需要（信号肽）的引导，蛋白伴侣的作用是（辅助肽链折叠成天然构象的蛋白质）。5．启动子中的元件通常可以分为两种：（核心启动子元件）和（上游启动子元件）。 6．分子生物学的研究内容主要包含（结构分子生物学）、（基因表达与调控）、（DNA重组技术）三部分。7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（肺炎球菌感染小鼠）、（ T2噬菌体感染大肠杆菌）这两个实验中主要的论点证据是：（生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（hnRNA在转变为mRNA的过程中经过剪接，）、 （mRNA的5′末端被加上一个m7pGppp帽子，在mRNA3′末端多了一个多聚腺苷酸(polyA)尾巴）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（亚基对DNA的利用来说是一种经济的方法）、（可以减少蛋白质合成过程中随机的错误对蛋白质活性的影响）、（活性能够非常有效和迅速地被打开和被关闭）。 10．蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11．半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP—CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP—CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（ S2）开始，无G时转录从（ S1）开
福建师范大学分子生物学期末考试试题（第一套） 一、名词解释（15分，每小题3分） 1、中心法则：遗传信息沿着从DNA到RNA，RNA到蛋白质的方向进行传递。反转录的发现，是对中心法则的完善。 2、复性：变性的DNA在一定的条件下恢复成天然结构的现象。 3、卫星DNA：在高度重复的序列中，常有一些AT含量很高的简单高度重复序列，例如螃蟹DNA含有AT的简单重复序列，有时在30个左右的碱基对中，才插有一个GC对，因而AT含量高达97%。由于AT浮力密度较小，因而在将DNA切断成数百个碱基对的片段进行超速离心时，常会在主要的DNA带的上面有一个次要的带相伴随，这条次要的带称为卫星DNA。 4、聚合酶链反应：利用与DNA模板序列的两端互补的一对寡聚核苷酸引物来扩增一段DNA 序列。由一种热稳定的DNA聚合酶经过三步反应即变性、引物退火和聚合的循环从两个引物来相对延伸。 5、操纵子：一个或几个结构基因与一个调节基因和一个操纵基因，加上启动子构成一个操纵单元，这个单元称为操纵子。在操纵子中，结构基因产生mRNA并作为模板合成蛋白质；而调节基因则产生一种阻遏蛋白与操纵基因相互作用；阻遏蛋白与操纵基因结合从而阻碍了结构基因转录成为mRNA；在诱导过程中，诱导物通过与阻遏蛋白相结合而阻止阻遏蛋白与操纵基因结合。 二、填空（10分，每空1分） 1、Southern blotting用于鉴别----DNA -------。 2、原始转录物的一些序列被-----更改---------，叫做RNA编辑。 3、------颠换-----是由嘧啶变为嘌呤或由嘌呤转变为嘧啶。 4、大肠杆菌RNA聚合酶的-----核心酶-----为α2ββ’。 5、同一氨基酸具有多个密码子，编码同一氨基酸的密码子称为------- -同义密码子---------。 6、数个生化反应可由-------核酶---------催化，这种具有催化功能的RNA可以剪切自身或其它的RNA分子，或者完成连接或自身剪接反应。 7、在质粒DNA的制备中，用酚或酚-氯仿混合液抽提以除去碱裂解液中残余----蛋白质------。 8、--------开放的阅读框-------是指新测DNA序列中，由计算机辨认出的可能编码区域，它是从起始密码子起到终止密码子止的一段连续的密码子区域。 9、噬菌体φX174基因组只有-----5386----个核苷酸，却编码11种蛋白。 10、转录是以DNA一条链为模板的RNA的酶促合成。我们把模板链称为-----反义链-----。 三、选择题（共25分，每题1分） 1、在DNA组成中符合当量定律，即A=T,G=C,A+G=T+C;这就是----------定则。 A Chargaff B Watson-Crick C van de Waal D S-D 2、DNA的复制方向只能以----------方向复制。 A 2’—3’ B 5’—2’ C 3’—5’ D 5’—3’ 3、在原核生物mRNA起始密码子AUG上游的8-13个核苷酸有一段可受核糖体结合、保护和富含嘌呤的3-9个核苷酸的共同序列，一般为5’AGGAGGU3’,称为---------序列。 A S-D B Hogness D sextama D pribnow 4、细菌蛋白质合成的起始因子有------------------。
Section A 细胞与大分子 简述复杂大分子的生物学功能及与人类健康的关系。 Section C 核酸的性质 1.DNA的超螺旋结构的特点有哪些？ A 发生在闭环双链DNA分子上 B DNA双链轴线高卷曲，与简单的环状相比，连接数发生变化 C 当DNA扭曲方向与双螺旋方向相同时，DNA变得紧绷，为正超螺旋，反之变得松弛为负超螺旋。自然界几乎所有DNA分子超螺旋都为负的，因为能量最低。 2.简述核酸的性质。 A 核酸的稳定性：由于核酸中碱基对的疏水效应以及电荷偶极作用而趋于稳定 B 酸效应：在强酸和高温条件下，核酸完全水解，而在稀酸条件下，DNA的核苷键被选择性地断裂生成脱嘌呤核酸 C 碱效应：当PH超出生理范围时（7-8），碱基的互变异构态发生变化 D 化学变性：一些化学物质如尿素，甲酰胺能破坏DNA和RNA二级结构中的 而使核酸变性。 E 粘性：DNA的粘性是由其形态决定的，DNA分子细长，称为高轴比，可被机械力和超声波剪切而粘性下降。 F 浮力密度：1.7g/cm^3,因此可利用高浓度分子质量的盐溶液进行纯化和分析 G 紫外线吸收：核酸中的芳香族碱基在269nm 处有最大光吸收 H 减色性，热变性，复性。 思考题：提取细菌的质粒依据是核酸的哪些性质？ 质粒是抗性基因，，在基因组或者质粒DNA中用碱提取法。 Sectio C 课前提问 1.在1.5mL的离心管中有500μL，取出10 μL稀释至1000 μL后进行检测，测得A260=0.15。 问（1）：试管中的DNA浓度是多少？ 问（2）：如果测得A280=0.078, .A260/A280=？说明什么问题？ (1)稀释前的浓度：0.15/20=0.0075 稀释后的浓度：0.0075/100=0.75ug/ml （2）0.15/0.078=1.92〉1.8，说明DNA中混有RNA样品。 2.解释以下两幅图
分子生物学备选考题 名词解释: 1.功能基因组学 2.分子生物学 3.epigenetics 4.C值矛盾 5.基因簇 6.间隔基因 7.基因芯片 8.基序（Motifs） 9.CpG岛 10.染色体重建 11.Telomerase 12.足迹分析实验 13.RNA editing 14.RNA干涉（RNA interference） 15.反义RNA 16.启动子（Promoter） 17.SD序列(SD sequence) 18.碳末端结构域（carboxyl terminal domain，CTD） 19.single nucleotide polymorphism，SNP 20.切口平移（Nick translation） 21.原位杂交 22.Expressing vector 23.Multiple cloning sites 24.同源重组 25.转座 26.密码的摆动性 27.热休克蛋白嵌套基因 28.基因家族增强子 29.终止子 30.前导肽RNAi 31.分子伴侣 32.魔斑核苷酸 33.同源域 34.引物酶 35.多顺反子mRNA 36.物理图谱、 37.载体（vector） 38.位点特异性重组 39.原癌基因（oncogene） 40.重叠基因、 41.母源影响基因、
42.抑癌基因（anti-oncogene）、 43.回文序列（palindrome sequence）、 44.熔解温度（melting temperature, Tm） 45.DNA的呼吸作用（DNA respiration） 46..增色效应（hyperchromicity）、 47.C0t曲线（C0t curve）、 48.DNA的C值（C value） 49.超螺旋(superhelix) 、 50.拓扑异构酶（topoisomerase）、 51.引发酶(primase) 、 52.引发体(primosome) 53.转录激活(transcriptional activation) 54.dna基因(dna gene)、 55.从头起始(de novo initiation) 、 56.端粒（telomere） 57.酵母人工染色体（yeast artificial chromosome, YAC）、 58.SSB蛋白（single strand binding protein）、 59.复制叉(replication fork)、 60.保留复制(semiconservative replication) 61.滚环式复制(rolling circle replication)、 62.复制原点(replication origin)、 63.切口(nick) 64.居民DNA (resident DNA) 65.有义链(sense strand) 66.反义链(antisense strand) 67.操纵子(operon) 、 68.操纵基因(operator) 69.内含子(内元intron) 70.外显子(外元exon) 、 71.突变子(muton) 、 72.密码子（codon）、、 73.同义密码（synonymous codons）、 74.GC盒(GC box) 75.增强子(enhancer) 76.沉默子(silencer) 77.终止子(terminator) 78.弱化子（衰减子）(attenuator) 79.同位酶(isoschizomers) 、 80.同尾酶(isocandamers) 81.阻抑蛋白（阻遏蛋白）(repressor) 82.诱导物（inducer）、 83.CTD尾（carboxyl-terminal domain ） 84.载体（vector）、 85.转化体(transformant)
武汉大学 2001 年攻读硕士学位研究生入学考试试题 一、解释概念(20 分,每个4分) 1. Satellite DNA-卫星DNA,又称串联重复序列，由2~6个核苷酸组成的重复单位组成的串联重复。 2. Replisome-复制体,是指由多种复制相关蛋白组成的复合物。 3.逆转座子，指另一类能够通过逆转酶和整合酶共同作用介导转座的转座子 4. 反式激活因子，一类能结合到顺式作用元件上形式激活作用的蛋白质 5. 衰减子，原核生物操纵子上一段能够显著减弱或终止转录作用的核苷酸序列 衰减作用，指原核生物中根据底物浓度变化来调控基因转录进程的中断与否的一种调控机制。 三、问答题(50 分) 1.说出双链DNA 复制起始有关的五种重要的酶或蛋白并简述它们的功能。(15 分) 2.简述增强子的特点和性质及作用机制。(10 分) 3.简述真核RNA 聚合酶II的转录起始复合物装配过程和转录起始(15 分) 4.DNA限制性内切酶EcoRI是人们熟悉的常用内切酶,它是在大肠杆菌(E.coli)R株中发现的,它被广泛用于分子克隆操作和DNA分析。pUC质粒是常用克隆载体之一,它的多克隆位点上有EcoRI、BamHI、KpnI、HindIII 等酶切点。假如要你把一段由EcoRI切割产生的外源DNA段克隆到pUC 质粒中,并把重组质粒转化大肠杆菌R株来扩增,已知条件是所用的R
菌株中只有EcoRI一种限制性内切酶,你设计如何做才能确保成功?为什么?(10 分) 武汉大学 2002 年攻读硕士学位研究生入学考试试题 三、问答: 1、简述(或绘图说明)真核细胞RNA 聚合酶II 转录的起始需要哪些基本转录因子及其装配过程(15 分) 2、简述(或绘图说明)色氨酸操纵子弱化的机制(15分) 3、在讨论基因家庭时经常提到胚胎、胎儿和成体形成的蛋白质,这些述语是指什么现象?可用什么术语来描述这一类基因家族(5分) 4、你正在进行Southern blot 分析,并刚刚完成凝胶电泳部分,下一步是将胶浸泡在NaOH 溶液中使DNA 变性为单链,为了节约时间,你跳过这一步,直接把DNA 从胶上转到硝酸纤维
1.核酸与蛋白质的结构比较表如下： 核酸（Nucleic acids） 蛋白质（Proteins） DNA RNA 一级结构Primary structure 核苷酸序列 AGTTCT 或AGUUCU 的排列顺序 3，，5，- 磷酸二酯键 氨基酸排列顺序 肽键 二级结构Secondarystructure 双螺旋 主要是氢键，碱基堆积 力 配对（茎-环结构） （同左） 有规则重复的构象 （α-helix ，β－sheet， β-turn） 氢键 三级结构Tertiary structure 超螺旋RNA空间构象 一条肽链的空间构象 范德华力氢键疏水 作用盐桥二硫键等 四级结构Quaternarystructure 多条肽链 （或不同蛋白） 3.分离和纯化核酸：聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）与琼脂糖凝胶电泳（AGE）广泛用于核酸的分离、纯化 与鉴定 基因组DNA的分离与纯化：（一）酚抽提法（二）甲酰胺解聚法（三）玻棒缠绕法（四）DNA样品的进一 步纯化：纯化的方法包括透析、层析、电泳及选择性沉淀等 4原核生物与真核生物基因信息传递过程中的差异 1. DNA的复制 原核生物真核生物 DNA聚合酶DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、ⅢDNA聚合酶α、β、γ、δ、ε五种，其中δ为主要的聚合酶， γ存在于线粒体中 原核的DNA聚合酶I具有5'-3'外切酶活性。真核生物的聚合酶没有5'-3'外切酶活性，需要一种叫FEN1 的蛋白切除5'端引物 DNA聚合酶III复制时形成二聚体复合物 起始复制地点：细胞质复制地点：细胞核 复制时间：DNA合成只是发生在细胞周期的S期 有时序性，即复制子以分组方式激活而非同步启动复制起点：一个起始位点，单复制子复制起点：多个复制起始位点，多复制子 起始点长度：长起始点长度：短 延长冈崎片段：比较长冈崎片段：比原核生物要短 引物：RNA，切除引物需要DNA聚合酶I 引物：较原核生物的短，除RNA外还有DNA，所以真核生 物切除引物需要核内RNA酶，还需要核酸外切酶。 终止基因为环状的DNA，复制的终止点ter，催 化填补空隙为DNA-polⅠ，DNA连接酶连 接冈崎片段成DNA链真核生物基因为线状的DNA，其复制与核小体的装配同步进行，复制后形成染色体，DNA-polε填补空隙，存在端粒及端粒酶防止DNA的缩短（RNA引物留下的空白无法填补时出现DNA的缩短）
分子生物学试题（一） 一.填空题(,每题1分,共20分) 一.填空题(每题选一个最佳答案,每题1分,共20分) 1. DNA的物理图谱是DNA分子的（）片段的排列顺序。 2. 核酶按底物可划分为（）、（）两种类型。 3．原核生物中有三种起始因子分别是（）、（）和（）。 4．蛋白质的跨膜需要（）的引导，蛋白伴侣的作用是（）。5．真核生物启动子中的元件通常可以分为两种：（）和（）。6．分子生物学的研究内容主要包含（）、（）、（）三部分。 7．证明DNA是遗传物质的两个关键性实验是（）、（）。 8．hnRNA与mRNA之间的差别主要有两点：（）、（）。 9．蛋白质多亚基形式的优点是（）、（）、（）。 10.蛋白质折叠机制首先成核理论的主要内容包括（成核）、（结构充实）、（最后重排）。 11.半乳糖对细菌有双重作用；一方面（可以作为碳源供细胞生长）；另一方面（它又是细胞壁的成分）。所以需要一个不依赖于cAMP-CRP的启动子S2进行本底水平的永久型合成；同时需要一个依赖于cAMP-CRP的启动子S1对高水平合成进行调节。有G时转录从（S2 ）开始，无G时转录从（S1 ）开始。 12．DNA重组技术也称为（基因克隆）或（分子克隆）。最终目的是（把一个生物体中的遗传信息DNA转入另一个生物体）。典型的DNA重组实验通常包含以下几个步骤： ①提取供体生物的目的基因（或称外源基因），酶接连接到另一DNA分子上（克隆载体），形一个新的重组DNA分子。 ②将这个重组DNA分子转入受体细胞并在受体细胞中复制保存，这个过程称为转化。 ③对那些吸收了重组DNA的受体细胞进行筛选和鉴定。 ④对含有重组DNA的细胞进行大量培养，检测外援基因是否表达。 13、质粒的复制类型有两种：受到宿主细胞蛋白质合成的严格控制的称为（严紧型质粒），不受宿主细胞蛋白质合成的严格控制称为（松弛型质粒）。 14．PCR的反应体系要具有以下条件： a、被分离的目的基因两条链各一端序列相互补的 DNA引物（约20个碱基左右）。 b、具有热稳定性的酶如：TagDNA聚合酶。 c、dNTP d、作为模板的目的DNA序列 15．PCR的基本反应过程包括：（变性）、（退火）、（延伸）三个阶段。 16、转基因动物的基本过程通常包括： ①将克隆的外源基因导入到一个受精卵或胚胎干细胞的细胞核中； ②接种后的受精卵或胚胎干细胞移植到雌性的子宫；
第2章染色体与DNA 名词解释 原癌基因：细胞内与细胞增殖相关的正常基因，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。 复制：以亲代DNA或RNA为模板，根据碱基配对的原则，在一系列酶的作用下，生成与亲代相同的子代DNA或RNA的过程。 转座子 (transposon 或 transposable element)：位于染色体DNA上可自主复制和位移的基本单位。包括插入序列和复合转座子。 半保留复制：以亲代DNA双链为模板以碱基互补方式合成子代DNA，这样新形成的子代DNA 中，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的，这种复制方式叫半保留复制。 染色体：染色体是遗传信息的载体，由DNA、RNA和蛋白质构成，其形态和数目具有种系的特性。在细胞间期核中，以染色质形式存在。在细胞分裂时，染色质丝经过螺旋化、折叠、包装成为染色体，为显微镜下可见的具不同形状的小体。 核小体：是构成真核生物染色体的基本单位，是DNA和蛋白质构成的紧密结构形式，包括200bp左右的DNA和9个组蛋白分子构成的致密结构。 填空题 1.真核细胞核小体的组成是 DNA和蛋白 2.天然染色体末端不能与其他染色体断裂片段发生连接，这是因为天然染色体末端存在端粒结构。 3.在聚合酶链反应中，除了需要模板DNA外，还需加入引物、DNA聚合酶、dNTP和镁离子。 4.引起DNA损伤的因素有自发因素、物理因素、化学因素。 5.DNA复制时与DNA解链有关的酶和蛋白质有拓扑异构酶Ⅱ、解螺旋酶、单链DNA结合蛋白。 6.参与DNA切除修复的酶有DNA聚合酶Ⅰ、DNA连接酶、特异的核酸内切酶。 7.在真核生物中DNA复制的主要酶是DNA聚合酶δ。在原核生物中是DNA聚合酶Ⅲ。 8.端粒酶是端粒酶是含一段RNA的逆转录酶。 9.DNA的修复方式有错配修复、碱基切除修复、核苷酸切除修复、DNA的直接修复。 选择题 1.真核生物复制起点的特征包括（B） A. 富含G-C区 B. 富含A-T区 C. Z-DNA D. 无明显特征 2.插入序列（IS）编码（A） A.转座酶 B.逆转录酶 C. DNA合成酶 D.核糖核酸酶 3.紫外线照射对DNA分子的损伤主要是(D) A.碱基替换 B.磷酸脂键断裂 C。碱基丢失 D.形成共价连接的嘧啶二聚体 4.自然界中以DNA为遗传物质的大多数生物DNA的复制方式（C） A.环式 B.D环式 C.半保留 D.全保留 5.原核生物基因组中没有（A） A.内含子 B.外显子 C.转录因子 D.插入序列 6.关于组蛋白下列说法正确的是(D)
南昌大学医学院分子生物学试题 姓名______________ 成绩__________ 一、单项选择题（每小题1分，共20分） 1．用于DNA鉴定的技术是（ C ） A. Northern blot B. Eastern blot C. Southern blot D. Western blot 2．影响酶促反应速度的因素不包括（ D ） A. 底物浓度 B. 酶的浓度 C. 反应温度 D. 酶原的浓度 3．下列氨基酸中含有羟基的是（ A ） A. 丝氨酸 B. 亮氨酸 C.甘氨酸 D. 色氨酸 4．治疗艾滋病的AZT是 A、DNA类似物 B、RNA类似物 C、核苷类似物 D、蛋白酶抑制剂5．四环素抗菌作用的原理是（ C ） A.抑制氨基酰-tRNA进位 B.抑制转肽酶 C.抑制转位酶 D.与核糖体小亚基结合 6．原核生物中参与转录起始的酶是（D） A. 解链酶 B.引物酶 C. RNA聚合酶全酶 D. RNA聚合酶核心酶7．核酸中核苷酸之间的连接方式是（ B ） A. 2’3’-磷酸二酯键 B. 3’5’-磷酸二酯键 C. 2’5’-磷酸二酯键 D. 肽键 8．目前认为基因表达调控的主要环节是（） A. 翻译起始 B. 转录起始 C. 转录后加工 D.基因活化 9．与DNA损伤修复过程缺陷有关的疾病是（） A.黄嘌呤尿症 B. 痛风 C. 卟啉病 D. 着色性干皮病 10．糖复合物不包括下列哪种物质（） A. 糖蛋白 B. 蛋白聚糖 C. 脂聚糖 D. 糖原 11．有关一个DNA分子的Tm值，下列哪种说法正确（） A. G+C比例越高，Tm值也越高 B. A+T比例越高, Tm值也越高 C. Tm值越高，DNA越易发生变性 D. Tm值越高，DNA越不稳定12．有机磷农药中毒时，下列哪一种酶受到抑制？（） A.已糖激酶 B. 碳酸酐酶 C. 胆碱酯酶 D.乳酸脱氢酶13．绝大部分膜受体的化学物质为（） A.糖脂 B. 糖蛋白 C. 脂蛋白 D. 类固醇 14． G蛋白是指（） A. 蛋白激酶C B.蛋白激酶G C.鸟苷酸环化酶 D.鸟苷酸结合蛋白15．依赖钙离子的蛋白激酶是( ) A. PKA B. PKC C. PKG D. TPK
1、广义分子生物学：在分子水平上研究生命本质的科学，其研究对象是生物大分子的结构和功能。2 2、狭义分子生物学：即核酸（基因）的分子生物学，研究基因的结构和功能、复制、转录、翻译、表达调控、重组、修复等过程，以及其中涉及到与过程相关的蛋白质和 酶的结构与功能 3、基因：遗传信息的基本单位。编码蛋白质或RNA等具有特定功能产物的遗传信息 的基本单位，是染色体或基因组的一段DNA序列(对以RNA作为遗传信息载体的 RNA病毒而言则是RNA序列)。 4、基因：基因是含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，包含产生一条多肽链或功能RNA所必需的全部核苷酸序列。 5、功能基因组学：是依附于对DNA序列的了解，应用基因组学的知识和工具去了解 影响发育和整个生物体的特定序列表达谱。 6、蛋白质组学：是以蛋白质组为研究对象，研究细胞内所有蛋白质及其动态变化规律的科学。 7、生物信息学：对DNA和蛋白质序列资料中各种类型信息进行识别、存储、分析、模拟和转输 8、蛋白质组：指的是由一个基因组表达的全部蛋白质 9、功能蛋白质组学：是指研究在特定时间、特定环境和实验条件下细胞内表达的全部蛋白质。 10、单细胞蛋白：也叫微生物蛋白，它是用许多工农业废料及石油废料人工培养的微 生物菌体。因而，单细胞蛋白不是一种纯蛋白质，而是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、核酸及不是蛋白质的含氮化合物、维生素和无机化合物等混合物组成的细胞质团。 11、基因组：指生物体或细胞一套完整单倍体的遗传物质总和。 12、C值：指生物单倍体基因组的全部DNA的含量，单位以pg或Mb表示。 13、C值矛盾：C值和生物结构或组成的复杂性不一致的现象。 14、重叠基因：共有同一段DNA序列的两个或多个基因。 15、基因重叠：同一段核酸序列参与了不同基因编 码的现象。 16、单拷贝序列：单拷贝顺序在单倍体基因组中只出现一次，因而复性速度很慢。单 拷贝顺序中储存了巨大的遗传信息，编码各种不同功能的蛋白质。 17、低度重复序列：低度重复序列是指在基因组中含有2～10个拷贝的序列 18、中度重复序列：中度重复序列大致指在真核基因组中重复数十至数万（<105）次的重复顺序。其复性速度快于单拷贝顺序，但慢于高度重复顺序。 19、高度重复序列：基因组中有数千个到几百万个拷贝的DNA序列。这些重复序列 的长度为6~200碱基对。
绪论 思考题：（P9） 1.从广义和狭义上写出分子生物学的定义？ 广义上讲的分子生物学包括对蛋白质和核酸等生物大分子结构与功能的研究，以及从分子水平上阐明生命的现象和生物学规律。 狭义的概念，即将分子生物学的范畴偏重于核酸（基因）的分子生物学，主要研究基因或DNA结构与功能、复制、转录、表达和调节控制等过程。其中也涉及与这些过程相关的蛋白质和酶的结构与功能的研究。 2、现代分子生物学研究的主要内容有哪几个方面？什么是反向生物学？什么是 后基因组时代？ 研究内容： DNA的复制、转录和翻译；基因表达调控的研究；DNA重组技术和结构分子生物学。 反向生物学：是指利用重组DNA技术和离体定向诱变的方法研究已知结构的基因相应的功能，在体外使基因突变，再导入体内，检测突变的遗传效应，即以表型来探索基因结构。 后基因组时代：研究细胞全部基因的表达图式和全部蛋白质图式，人类基因组研究由结构向功能转移。 3、写出三个分子生物写学展的主要大事件（年代、发明者、简要内容） 1953年Watson和Click发表了?脱氧核糖核苷酸的结构?的著名论文，提出了DNA的双螺旋结构模型。 1972~1973年，重组DNA时代的到来。H.Boyer和P.Berg等发展了重组DNA 技术，并完成了第一个细菌基因的克隆，开创了基因工程新纪元。 1990~2003年美、日、英、法、俄、中六国完成人类基因组计划。解读人类遗传密码。 4、21世纪分子生物学的发展趋势是怎样的？ 随着基因组计划的完成，人类已经掌握了模式生物的所有遗传密码。又迎来了后基因组时代，人类基因组的研究重点由结构向功能转移。相关学说理论相应诞生，如功能基因组学、蛋白质组学和生物信息学。生命科学又进入了一个全新的时代。 第四章 思考题：（P130） 1、基因的概念如何？基因的研究分为几个发展阶段？ 概念：基因是原核、真核生物以及病毒的DNA和RNA分子中具有遗传效应的核苷酸序列，是遗传的基本单位和突变单位以及控制形状的功能单位。 发展阶段：○120世纪50年代以前，主要从细胞的染色体水平上进行研究，属于基因的染色体遗传学阶段。 ○220世纪50年代以后，主要从DNA大分子水平上进行研究，属于分
问答题： 1 衰老与基因的结构与功能的变化有关，涉及到：（1）生长停滞；（2）端粒缩短现象；（3）DNA损伤的累积与修复能力减退；（4）基因调控能力减退。 2 超螺旋的生物学意义：（1）超螺旋的DNA比松驰型DNA更紧密，使DNA分子体积变得更小，对其在细胞的包装过程更为有利；（2）超螺旋能影响双螺旋的解链程序，因而影响DNA分子与其它分子（如酶、蛋白质）之间的相互作用。 3 原核与真核生物学mRNA的区别： 原核：（1）往往是多顺反子的，即每分子mRNA带有几种蛋白质的遗传信息（来自几个结构基因）。（2）5端无帽子结构，3端一般无多聚A尾巴。（3）一般没有修饰碱基，即这类mRNA分子链完全不被修饰。 真核：（1）5端有帽子结构（2）3端绝大多数均带有多聚腺苷酸尾巴，其长度为20-200个腺苷酸。（3）分子中可能有修饰碱基，主要有甲基化，（4）分子中有编码区与非编码区。 4 tRNA的共同特征： （！）单链小分子，含73-93个核苷酸。（2）含有很多稀有碱基或修饰碱基。（3）5端总是磷酸化，5末端核苷酸往往是pG。（4）3端是CPCPAOH序列。（5）分子中约半数的碱基通过链内碱基配对互相结合，开成双螺旋，从而构成其二级结构，开头类似三叶草。（6）三级结构是倒L型。 5 核酶分类：（1）异体催化的剪切型，如RNaseP；（2）自体催化的剪切型，如植物类病毒等；（3）内含子的自我剪接型，如四膜虫大核26SrRNA前体。 6 hnRNA变成有活性的成熟的mRNA的加工过程： （1）5端加帽；（2）3端加尾（3）内含子的切除和外显子的拼接；（4）分子内部的甲基化修饰作用，（5）核苷酸序列的编辑作用。 7 反义RNA及其功能： 碱基序列正好与有意义mRNA互补的RNA称为反意义或反义RNA，又称调节RNA，这类RNA是单链RNA，可与mRNA配对结合形成双链，最终抑制mRNA作为模板进行翻译。这是其主要调控功能，还可作为DNA复制的抑制因子，与引物RNA互补结合抑制DNA的复制，以及在转录水平上与mRNA5末端互补，阻止RNA合成转录。 8 病毒基因组分型：（1）双链DNA（2）单链正股DNA（3）双链RNA（4）单链负股RNA（5）单链正股RNA 9 病毒基因组结构与功能的特点： （1）不同病毒基因组大小相差较大；（2）不同病毒的基因组可以是不同结构的核酸。（3）病毒基因组有连续的也有不连续的；（4）病毒基因组的编码序列大于90%；（5）单倍体基因组，（6）基因有连续的和间断的，（7）相关基因丛集；（8）基因重叠（9）病毒基因组含有不规则结构基因，主要类型有：a几个结构基因的编码区无间隔；bmRNA没有5端的帽结构；c结构基因本身没有翻译起始序列。 10 原核生物基因组的结构的功能特点： （1）基因组通常仅由一条环状双链DNA分子组成。 （2）基因组中只有1个复制起点。 （3）具有操纵子结构。（4）编码顺序一般不会重叠。（5）基因是连续的，无内含子，因此转录后不需要剪切。（6）编码区在基因组中所占的比例（约占50%）远远大于真核基因组，但又远远小于病毒基因组。（7）基因组中重复序列很少（8）具有编码同工酶的基因。（9）细菌基因组中存在着可移动的DNA序列，包括插入序列和转座子。 （10）在DNA分子中具有多种功能的识别区域。 11??真核生物基因组结构与功能的特点：
一.解释概念(20分,每个4分) 卫星DNA 复制体逆转座子反式激活因子衰减子与衰减作用 三、问答题(50分) 1. 说出双链DNA复制起始有关的五种重要的酶或蛋白并简述它们的功能。(15分) 2. 简述增强子的特点和性质及作用机制。(10分) 3. 简述真核RNA聚合酶II的转录起始复合物装配过程和转录起始(15分) 4. DNA限制性内切酶EcoRI是人们熟悉的常用内切酶,它是在大肠杆菌 (E.coli)R株中发现的,它被广泛用于分子克隆操作和DNA分析。pUC质粒是常用克隆载体之一,它的多克隆位点上有EcoRI、BamHI、KpnI、HindIII等酶切点。假如要你把一段由EcoRI切割产生的外源DN**段克隆到pUC质粒中,并把重组质粒转化大肠杆菌R株来扩增,已知条件是所用的R菌株中只有EcoRI一种限制性内切酶,你设计如何做才能确保成功?为什么?(10分) 武汉大学2002分子生物学 三.问答: 1.简述(或绘图说明)真核细胞RNA聚合酶II转录的起始需要哪些基本转录因子及其装配过程(15分) 2.简述(或绘图说明)色氨酸操纵子弱化的机制(15分) 3.在讨论基因家庭时经常提到胚胎、胎儿和成体形成的蛋白质,这些述语是指什么现象?可用什么术语来描述这一类基因家族(5分) 4. 你正在进行Southern blot分析,并刚刚完成凝胶电泳部分,下一步是将胶浸泡在NaOH溶液中使DNA变性为单链,为了节约时间,你跳过这一步,直接把DNA 从胶上转到硝酸纤维素膜上,你将标记好的探针与膜杂交,却发现放射自显影结果是一片空白,哪里错了呢?(5分)
一、下列名词翻译成中文，并简要解释 1、Domains and motifs 2、Alternative splicing 3、Reporter genes 4、The PCR cycle 5、Restriction mapping 6、Multiple cloning sites 7、DNA libraries 8、Proteomics 9、Replicon 10、Semi-conservative replication 二、简答题(共5题,每题8分,共40分) 1、请列举三种以上蛋白质纯化技术,并说明不同纯化技术的简单原理。 2、简述DNA损伤与DNA突变之间的区别与相互关系。 3、简述密码的简并性(degeneracy)和同义密码子(synonymous codon)及其在生物学上的重要性。 4、简述原核生物转录起始与转录终止过程中所涉及的主要蛋白质和核酸结构及其具体作用。 5、简述cDNA文库的构建过程。 三、论述题(共5题,1-4题每题15分,第5题10分,共70分) 1、人类基因组计划完成的社会意义和科学意义是什么？ 2、什么是操纵子(operon)？试说明色氨酸操纵子(Trp operon)在原核基因表达调控中的调控机制和重要作用。 3、请简要解释顺式作用元件与反式作用因子,并举二例加以说明它们的相互作用方式。 4、试说明真核细胞与原核细胞在基因转录、翻译及DNA的空间结构方面存在的主要差异,表现在哪些方面？ 5、限制性核酸内切酶有哪几种类型？哪一种类型的限制酶最适合于基因工程,为什么？请简要说明其理由。
注：根据课件容简单整理，为了方便大家理解，容较多;如果仅仅为了考试，可以根据自己的需要进行容的删减。 Lecture 1. Introduction 1. What is Molecular Biology? Molecular biology seeks to explain the relationships between the structure and function of biological molecules and how these relationships contribute to the operation and control of biochemical processes. Molecular biology is the study of genes and their activities at the molecular level, including transcription, translation, DNA replication, recombination and translocation. 分子生物学的研究容 Major content of molecular biology ◆ Structure and Function of nucleic acid ★conformation and function of DNA ★conformation and function of RNA ◎mRNA ◎tRNA◎rRNA ◎ ribozyme ◎antisence RNA ◎ microRNA ◎ RNA interfrence 人们开发出：RNAi、RNAa、ncRNA、SiRNA、microRNA、Antisene RNA、SatellileRNA、TelomereRNA、lincRNA、InCRNA、PiRNA、qiRNA、endoSiRNA 等等，其他还有RNA结合蛋白(RNPs)、RNA酶等成百上千种RNA相关的新成员，组成了一个庞大的RNA新世界 这些RNA不仅在基因-蛋白质的合成中发挥重要作用，它更调节和管理着—基因的转录、表达、表型等几乎所有的功能。 在细胞增殖、分化、生长、凋亡、生殖、发育、遗传、损伤、修复、炎症、感染、防治等一切生命活动中发挥着重要作用； RNA还是生命起源的“先驱’’，近年来研究证明，RNA比DNA更古老，它是地球上最早出现的生命形式；它可以携带遗传信息，能自我复制，自我进化，自我编译，又具有催化分子功能------,以后才有了DNA和蛋白质，才有了今天的生物世界。 RNA更是人类生命健康的维护者，它不仅调节和管理着人类的一切生命活动，而且它还是防治许多重大的疾病和开发新药物的靶分子和预警分子，并可直接和间接的发挥防治疾病的作用。 ◆Functional Genomics ◎As the Human Genome Project has mostly determined the genetic sequence, the next step is functional genomics, which will reveal each gene's functions and controls ◎ Human Genome Diversity Project ◎ Environmental Genome Project ◎Pharmacogenomics ◎Comparative Genomics Artificial life 人工生命是通过人工模拟生命系统,来研究生命的领域。人工生命的概念，包括两个方面容 1.属于计算机科学领域的虚拟生命系统，涉及计算机软件工程与人工智能技术，以及 2.基因工程技术人工改造生物的工程生物系统，涉及合成生物学技术。 分子生物学与医学 ◆人体发育调控和人体功能调控的分子生物学基础 ◎发育、分化与衰老的分子生物学基础 ◎细胞增殖调控的分子生物学基础 ◎神经、分泌和免疫调控的分子生物学基础 ◆基因与疾病 ◎疾病的分子机理 致病基因的克隆 复杂疾病的分子基础 ◎基因诊断 ◎基因治疗 Lecture 2 structure and function of gene 第一节基因的概念及其发展 一基因（gene）（一）基因的概念的产生和发展 2、Morgan 基因的物质载体是染色体 3、G.Beadle & R.Tatum 基因是决定蛋白质一级结构的遗传物质单位 5、O. Avery 基因的化学本质是DNA 6、Jacob & Monod 基因是在特定的遗传调控系统的调节下和控制下表达其功能的遗传物质单位 7、现代的基因概念 基因是核酸分子中储存遗传信息的遗传单位，是指储存有功能的蛋白质多肽链或RNA序列信息所必需的全部核苷酸序列 二、基因组（genomic） The genome is the entirety of an organism's hereditary information. It is encoded either in DNA or, for many types of virus, in RNA. The genome includes both the genes and the non-coding sequences of the DNA 细胞或生物体中，一套完整单倍体的遗传物质的总和。 人类基因组包含24条染色体以及线粒体上的全部的遗传物质。 第二节真核生物基因组 一、基因分类 1、结构基因（strutual gene）可被转录形成mRNA并进而翻译位多肽链，构成各种结构蛋白的基因 2、调节基因（regulatory gene）可调节、控制结构基因表达的基因。其突变可能会影响一个或多个结构基因的功能，导致一个（或多个）蛋白质的改变。 3、rRNA基因和tRNA基因 二、基因的结构 enhancer pr omoter e xon 5UTR, 3UTR intron （一）编码区 1 、外显子（exon） 2、含子（intron） ★GT—AG规则： 含子多是以GT开始，并以AG结尾 ★一个基因的含子可以是另一个基因的外显子。 ★外显子的数量是描述基因结构特征的重要指标。 三、调控元件（acting elements） （二）前导区： 位于编码区的上游，相当于mRNA5端的非编码区 （三）调节区： 包括启动子、增强子等基因编码区的两侧，也称侧翼序列 ◎顺式调控元件（cis-acting elements）：与结构基因表达调控相关。能够被基因调控蛋白特异性识别和结合的DNA序列。 ◎反式调控元件（trans-acting elements）:一些可以通过结合顺式元件而调节基因转录活性的蛋白因子。 （一）启动子（promoter） 启动子是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位，也就是使转录开始的部位。在基因表达的调控中，转录的起始是个关键。常常某个基因是否应当表达决定于在特定的启动子起始过程。 2 启动子的类型 (1)一类是RNA聚合酶可以直接识别的启动子这类启动子应当总是能被转录。 但实际上也不都如此，外来蛋白质可对其有影响，即该蛋白质可直接阻断启动子，也可间接作用于邻近的DNA结构，使聚合酶不能和启动子结合 (2)另一类启动子在和聚合酶结合时需要有蛋白质辅助因子的存在。这种蛋白质因子能够识别与该启动子顺序相邻或甚至重叠的DNA顺序。 3 启动子的共同顺序 ⑴真核生物基因启动子位于RNA合成开始位点的上游大约10bp和35bp处有两个共同的顺序，称为-10和-35序列。这两个序列的共同顺序如下, -35区“AATGTGTGGAAT”， -10区“TTGACATATATT”。 -10序列又称为Pribnow盒(原核生物)。是RNA聚合酶所结合和作用必需的顺序