微生物实验
微生物实验
细菌形态观察
细菌分布
消毒灭菌
细菌形态观察
一、实验目的
1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护
2.掌握细菌的三种形态
3.掌握临床常见细菌的形态及染色
4.掌握细菌的特殊结构
5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点
二、实验原理
1. 普通光学显微镜（油镜）的使用
1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头
2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时停止转动，
以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰
3. 根据需要调节显微镜亮度
2. 普通光学显微镜的维护
1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前
2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用干
净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头
3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内
4.做好使用记录
3．微生物知识
1．细菌按形态分类：
球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）
杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）
螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）
2．细菌的基本结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体
3．细菌的特殊结构
荚膜：如肺炎双球菌
鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌
菌毛
芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌
4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体
真核类：真菌、原生动物、显微藻类
非细胞类：病毒、亚病毒
5．真菌
单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。如：霉菌
6．白假私酵母菌（白念）
生物学性状：G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落
厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定
致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、CNS感染
微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝
7．新型隐球菌
生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3倍）
致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢性脑膜炎微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外围有宽厚荚膜为阳性
三、实验材料
记号笔：1支；大镊子：1支；火柴：1盒；蜡笔：1支；试管架：1个；酒精灯：1个；接种环：1支；Olympus显微镜：1台；显微镜使用记录本：1个
四、实验内容
1. 观察细菌三种形态
1）球菌
链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌
2）杆菌
破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌
3）螺形菌
弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌
2. 观察细菌的特殊结构
芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌
3. 绘图
葡萄球菌(staphyloccocus)；肺炎双球菌(pneumo coccus)；脑膜炎球菌(meningococcus)；破伤风杆菌（Clostridium Tantenus）；霍乱弧菌（vibrio cholera)；芽胞(spore)；鞭毛（flagellum)；荚膜(capsule)；钩端螺旋体(leptospira)
五、实验结果
绘8幅细菌镜下图，已交。
六、思考与讨论
1．显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因
（1）未滴加镜油
（2）镜头不干净
（3）标本放置反了，所以达不到对焦平面
（4）制片问题：标本太厚、染色误差等
细菌分布
一、实验目的
1. 掌握固体培养基的制备
2. 掌握机体常见部位及环境中的细菌采样、培养、及初步鉴定
3. 掌握革兰氏染色方法及结果判定
二、实验原理
1. 培养基：
1．细菌生长所需营养物质：水、碳源、氮源、无机物和生长因子
2．培养基分类：
（1）根据营养物质：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基
（2）根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基
3．细菌在培养基中的生长状况：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长
2. 革兰氏染色：
革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖(peptidoglycan)层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使孔径缩小，通道弯曲，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过，因而将染料洗去而被脱色。
三、实验材料
咽拭子、羊血培养皿：1套/人；大号普通培养皿：1块/2人；载玻片：1片/人；A、B菌：6套/桌；NS：1份/人；滤纸：1张/人；消毒液：4套/桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称药纸、称药勺、量筒：1套/桌
四、实验内容
1. 培养基制备
1）按产品要求称取营养琼脂
2）每实验桌制备200ml
3）高压蒸汽灭菌后，在洁净工作台内倒平皿
4）所制备的普通平皿用于空气培养
2. 机体不同部位的细菌采样、培养
1）咽部正常菌群的采样、培养
咽拭子擦拭咽部，平行划线法接种于羊血平皿。
2）手指消毒前后细菌的采样培养
未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿。
3. 环境中细菌采样培养
1）空气培养
将培养皿打开暴露于空气中，20分钟后盖好平皿盖儿
2）流通纸币（或硬币）的细菌采样培养
将硬币正反面分别在培养基上充分接触
3）采样结束后，将培养皿底部朝上放入铁丝筐，统一置培养箱：37℃18-24小时
4. A、B、C菌鉴定（革兰氏染色法）
1）. 细菌涂片制备程序：
（1）取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去油
（2）蜡笔画线将玻片分割为A、B、C三区域
（3）接种环取生理盐水分别滴入A、B两区域各一滴
（4）分别取少许A、B 、C菌，与生理盐水充分混匀成菌液，风干后形成菌膜
（5）固定（火焰上方缓缓通过三次）
（6）革兰氏染色
（7）滤纸吸干水分，油镜观察
2）. 革兰氏染色：
（1）细菌涂片、火焰固定
（2）结晶紫初染1min
（3）卢戈氏碘液媒染1min
（4）95%乙醇脱色30-40s
（5）沙黄复染1min
五、实验结果
A：G+，球菌，推测为金黄色葡萄球菌；
B：G-，短杆菌，推测为大肠杆菌；
六、思考与讨论
1．影响革兰氏染色的因素：
（1）细菌本身因素：
菌龄：如果菌龄太大，可能出现假阴性
（2）操作因素
涂片：取菌应适量，涂片要均匀，如果某个部分菌层太厚，可能在脱色时达不到，会导致局部假阳性
固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性；但是固定不够，细菌会在水洗时被冲掉
初染：初染时间虽然说是1分钟，但是可以适当延长，时间太短会出现假阴性；染色滴加不均匀可能出现半阴半阳
媒染：和初染一样
脱色：脱色时间不能过长，基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了，否则容易出现假阴性复染：复染时间需足够长，否则可能会染不上
消毒灭菌
一、实验目的
1. 了解实验室常用消毒灭菌方法及其原理
2. 掌握实验中所用仪器的使用方法
3. 掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定
4. 强化革兰氏染色技能
二、实验原理
1．口咽部及皮肤正常菌群
鼻咽部及扁桃体：葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等
口腔：链球菌多见、放线菌、螺旋体、G-杆菌等
皮肤：表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌
2．溶血类型
α溶血：现象：草绿色溶血环
常见菌种：机会致病菌（甲链、肺链）
原理：细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白
β溶血：现象：透明溶血环
常见菌种：致病菌（乙链)
原理：细菌释放溶血素使红细胞破裂，血红蛋白释放
三、实验材料
咽拭子培养物：1套/人；空气、纸币、手指消毒前后培养物：1套/2；载玻片：1片/人；NS：1支/人；滤纸：1张/人
四、实验内容
1. 常用消毒灭菌方法：（示教讲解）
1）．热力灭菌：
（1）干热灭菌法：焚化、烧灼、干烤（160 ℃，2小时）
（2）湿热灭菌法：煮沸（2%Na2CO3，105 ℃）；高压蒸汽灭菌（，20分钟，121℃，临床运用最广的灭菌方法）
2）. 紫外线（Ultraviolet radiation)：
波长265nm-266nm(DNA吸收光谱）杀菌能力最强。紫外光穿透力差，一般只用于不耐热物品表面的消毒。
3）. 过滤(filtration)
用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌，用于不耐热物质的灭菌（血清、毒素、抗生素等）滤菌器：薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器
4）. 低温
保存菌种（冷冻真空干燥法）
6）．实验室常用化学消毒剂：
70-75%乙醇
洁净台消毒：来苏水擦拭
防腐剂：三氯甲烷、硫柳汞、叠氮钠
2．细菌分布结果鉴定
1）观察菌落
2）取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观察
五、实验结果
1. 咽部正常菌群的采样、培养结果：
在羊血培养皿上出现四种菌落：
（1）数目多，划线沿线都有；针尖大小；无色、光滑、湿润、透明、圆形。周围出现草绿色溶血环，发生了不完全溶血即α溶血。
（2）数目较多，划线沿线都有；较小；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形。
（3）少，只出现在四个点；中型；乳黄色、光滑、半湿润、不透明、形状不规则。在此种菌落下方的培养基出现了透明溶血环，发生了完全溶血即β溶血。
（4）1个菌落；较大；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形。粘稠。
取（1）、（2）、（3）进行革兰氏染色，结果如下;
（1）G+，链球菌，根据不完全溶血推断，为甲型链球菌。
（2）G-，球菌，细胞个体小，形状像金黄色葡萄球菌，但是染色为阴性。
（3）G-，球菌。
2. 手指消毒前后细菌的采样培养结果：
1）消毒前：
仅出现2个菌落，较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
革兰氏染色结果：G-，杆菌
2）消毒后：无菌落出现。
3. 硬币正反面的细菌采样培养结果：
1）正面
三种菌落：
（1）13个菌落；较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。和手指消毒前的菌落一样。
（2）1个菌落；较大；白色、光滑、湿润、近似圆形。
（3）5个菌落；较大；中央乳黄色边缘颜色变浅、光滑、湿润、中间凸、不规则、边缘光滑
取其中（2）、（3）进行革兰氏染色，结果如下：
（2）G-，杆菌。和手指消毒前的细菌一样
（3）G-，链杆菌。形态较大，形状像炭疽芽胞杆菌，但是没有芽孢且染色为阴性。
2）反面
两种菌落：
（1）2个；较大，乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
（2）多个，沿硬币边缘线连成一片；针尖大小、无色、光滑、湿润、透明。
4. 空气培养结果
平皿敞开在实验室的窗台上放置了约20分钟，当时阳光照在上面：
平皿出现了五种菌落：
（1）11个；中等大小；白色、光滑、湿润、半透明、圆形
（2）2个；较大；周围白色，中间有一个透明圈，光滑、湿润、中间凹的圆饼状
（3）1个；较大；周围黄色，中间有一个透明的圆形区域，半湿润、没有光泽
（4）1个；较大；边缘橘黄色，中央偏白、明显凸起、干燥、形状不规则
（5）1个；较大；边缘透明，中央乳黄色，光滑、湿润、半透明、圆形
取其中（3）、（4）进行革兰氏染色，结果如下：
（3）G-，杆菌。和手指消毒前、硬币正面菌落（2）的细菌一样
（4）出现三种细菌：
G-，双球菌
G+，双球菌
G-，梭菌
六、思考与讨论
1．巴氏消毒法的利用
巴氏消毒法是一种低温消毒法，包括：低温维持法：摄氏度维持30分钟；高温瞬时法：摄氏度作用15-30秒。
该法适用于食品的消毒。现主要应用于乳制品。
2．为什么湿热消毒法的温度比干热消毒法低？
课堂上讲到的干热消毒法温度都比湿热消毒法要高，说明湿热灭菌法可在较低的温度下达到的灭菌效果可以与干热法相同，分析原因如下：
（1）湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；
（2）水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能，在干热状态下，由于热穿透力较差，微生物的耐热性较强，必须长时间受高温的作用才能达到灭菌的目的（3）蒸汽潜热大，每1克水由气态变成液态可释放出529卡热能，可迅速提高物体的温度。
3．细菌分布试验结果讨论
咽部正常菌群主要为：溶血和非溶血性链球菌、球菌等，不同人由于个体差异和取样部位差异，所得菌种也有所不同
手的消毒是有效的，消毒后细菌明显减少了。同时手上的菌是很多的，所以需要常洗手。手上较常见的是四联球菌。
硬币上的菌也相对较多，因为它经历的环境很多。
在咽部、硬币和未消毒的手上，都得到了一种很像大肠杆菌的革兰氏阴性杆菌，说明这种菌分布
非常广泛。
4．空气培养取样染色时，为什么得到三种菌？
图1 空气培养取样革兰氏染色（10*100）
一般认为，菌落形成是一个菌落到培养基上并增殖而来，但是在空气培养得到的菌落取样染色时，发现了三种形态完全不同的菌（如图1，较大的双球菌和梭菌为革兰氏阴性，较小的双球菌为革兰氏阳性）。可能的原因有：
（1）取样的污染，该菌落被两次取用，可能遭到污染
（2）在非常小的概率下，三个不同的菌掉到了同一处，同时这三种菌的生长互不影响甚至互利，于是形成了混合菌群。
（3）三个菌落在生长过程中由于靠得很近而融合了。
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
一、实验目的 1.了解细菌生长的基本营养条件，熟悉培养基的种类，掌握培养基制备的原则和一般方法； 2.掌握无菌操作技术，掌握病原菌的分离与培养方法； 3.了解实验室和医院空气的有菌环境，加强消毒灭菌的观念；掌握医院病房空气的细菌检测方法；掌握空气的卫生细菌学监测指标及意义； 4.了解人体体表的有菌环境，加强消毒灭菌的观念； 5.掌握油镜的使用方法，掌握细菌涂片标本的制备及革兰氏染色法的原理及操作，熟悉细菌的基本形态 6.掌握几种常用的生化反应的名称、原理、方法、结果讨论及用途； 7.掌握血浆凝固酶的原理、方法、结果观察及判断； 8.掌握抗菌素敏感性试验的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法； 9.掌握玻片凝集反应试验的原理、方法、结果观察及判断。
二、实验器材 1.培养基的制备：试管架、移液管、棉塞、牛皮纸、手套、石棉网、橡皮筋、蒸馏水、天平、称量器皿、药勺、锥形瓶、量筒、电炉、试管、洗耳球、干粉培养基。 2.细菌的分离培养：接种环，酒精灯，打火机，浓汁标本1支，粪便标本1支；碘酒棉球1瓶，酒精棉球1瓶，眼科镊子2把；伊红美蓝平板2个，营养琼脂平板5个。 3.细菌的纯培养：接种环，酒精灯，打火机，中性笔，斜面4支，细菌分离培养物（上次实验平板） 4.细菌的形态学检查：接种环，酒精灯，打火机，中性笔，斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1本，载玻片4张，显微镜，革兰氏染色试剂6组，染色架8个。 5.细菌的生化试验等：接种环，接种针，酒精灯，打火机，中性笔，斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，镊子2把，兔血浆，生理盐水。 6.细菌的血清学试验、结果分析：接种环，酒精灯，打火机，玻片、志贺菌诊断血清，半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。
第三章细菌分布与消毒灭菌 一、单5选1 1.杀灭物体上所有微生物的方法称为: A.消毒 B.灭菌 C.无菌 D.防腐 E.无菌操作 2.杀灭物体上病原微生物的方法称为: A.消毒 B.灭菌 C.无菌 D.防腐 E.无菌操作 3.微生物学实验过程中防止污染与感染的方法称为: A.消毒 B.灭菌 C.无菌 D.防腐 E.无菌操作 4.消毒的含义是: A.杀灭物体上所有的微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.使物体上无活菌存在 D.杀死含芽胞的细菌 E.抑制微生物生长繁殖 5.灭菌的概念是: A.杀灭物体上所有微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.抑制微生物生长繁殖的方法 D.杀死细菌繁殖体 E.使物体不含活菌 6.防腐的概念是: A.杀灭物体上所有的微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.使物体上无活菌存在 D.杀死含芽胞的细菌 E.抑制微生物生长繁殖 7.无菌是指: A.杀灭物体上的所有微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C.物体上无活的微生物存在 D.杀死含芽胞的细菌 E.抑制微生物生长繁殖 8.下列哪项可经巴氏消毒法灭活: A.牛奶 B.空气 C.手术器械 D.基础培养基 E.物体表面 9.巴氏消毒法的温度和时间是:
A.100℃ 10分钟 B.121℃ 15分钟 C.80℃ 10分钟 D.62℃ 30分钟 E.71.7℃ 30分钟 10.高压蒸汽灭菌法的参数为： A.100℃10～20分钟 B.121.3℃15～20分钟 C.80 ℃ 5～10分钟 D.62℃30分钟 E.71.7℃15～30分钟 11.正常微生物群是指: A.广泛存在于正常人体内脏的微生物群 B.存在于正常人体所有腔道的微生物群 C.正常时对人体无害也无利的微生物群 D.存在于出生前后的正常人群体表的微生物群 E.存在于正常人体体表的微生物群 12.条件致病微生物的致病条件不包括: A．寄居部位的改变 B．免疫功能降低 C．微生物群分布失调D．长期大量应用广谱抗菌药，正常微生物群被抑制 E．使用有关的微生态制剂 13.正常微生物群对人体的生理作用不包括: A．生物拮抗 B．营养作用 C．抗炎症作用 D．免疫作用 E．抗衰老作用 14.大肠杆菌通常寄生于正常人体的: A．皮肤 B．口腔 C．外耳道 D．肠道 E．尿道 15.幽门螺杆菌常寄生于人体的部位是： A．胃 B．口腔 C．皮肤 D．外耳道 E．尿道 16.因长期大量使用抗生素引起的腹泻属于: A．外源性感染 B．微生物失调 C．交叉感染 D．环境污染感染 E．潜伏感染 17.治疗微生物群失调症可使用: A．维生素 B．纤维素 C．抗生素 D.类毒素 E.微生物制剂 18.*随着年龄的增长，肠道内明显减少的细菌是: A.双岐杆菌 B．乳酸杆菌 C．大肠杆菌 D．葡萄球菌 E．肠球菌
山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：微生物大小与数量的测定姓名：丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一）微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具——测微尺，包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片，一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm（即10μm）。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小，而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，有 等分为50小格和100小格两种。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同，目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺 测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数，即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小；杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm，枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二）微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法，本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器)，于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等，它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数，基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后，总容积为0.02mm3，而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm，因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。（除 了用这些计菌器外，还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法， 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操
药敏试验： 用药敏实验进行药物敏感度的测定，以便准确有效的利用药物进行治疗。目前，临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法，稀释法（包括琼脂和肉汤稀释法），抗生素浓度梯度法（E-test 法），和自动化仪器等。 简介： 体外抗菌药物敏感性试验简称药敏试验（AST），是指在体外测定药物抑菌或杀菌能力的试验。 根据美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)近期推荐的标准，对非苛氧菌（肠杆菌科细菌、铜绿假单胞菌、和其他非肠科杆菌、葡萄球菌属细菌、肠球菌属细菌）和苛氧菌（嗜血杆菌属细菌、淋病奈瑟菌、肺炎链球菌和其他链球菌）选择常规药敏试验的首选药物（A 组抗生素）或临床使用的主要抗生素（B组抗生素）进行药敏试验。 抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。 随着新型致病菌的不断出现，抗菌药的防治效果越来越差。并且各种致病菌对不同的抗菌药物的敏感性不同，同一细菌的不同菌株对不同抗菌药物的敏感性也有差异。长期以来，各种致病菌耐药性的产生使各种常用抗菌药物往往失去药效，以及不能很好的掌握药物对细菌的敏感度，所以一个正确的结果，可供临床医师选用抗菌药物的参
考，并提高疗效。农业部动物检疫所青岛易邦生物工程有限公司动物疫病诊疗中心总结出几套适合基层进行药敏试验的操作方法，现简单介绍如下。 实验步骤： 实验材料 普通营养琼脂培养基：可去生化试剂店购买，做不同细菌的药敏试验可选择不同的培养基，如做大肠杆菌的药敏试验可选择普通营养琼脂或麦糠凯培养基。做沙门氏菌可选择血清培养基。 药敏试纸：购买或自制（详见实验准备） 细菌：待做药敏试验的细菌 仪器：接种环、酒精灯、打孔器、牛津杯、移液器、滴头 实验准备 2.1 药敏片的准备：购买或自制 2.1.1 制备方法：取新华1号定性滤纸，用打孔机打成6毫米直径的圆形小纸片。取圆纸片50片放入清洁干燥的青霉素空瓶中，瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅15-20分钟高压消毒后，放在37℃温箱或烘箱中数天，使完全干燥。 2.1.2 抗菌药纸片制作：在上述含有50片纸片的青霉素瓶内加入药液0.25毫升，并翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片捣烂。同时在瓶口上记录药物名称，放37℃温箱内过夜，干燥后即密盖，如有条件可真空干燥。切勿受潮，置阴暗干燥处存放，有效期3-6个月。
山东大学实验报告2012年 12 月 4日 姓名系年级 2011级生科2班组别四 科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应 微生物的生理生化反应 一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、【实验仪器与试剂】 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄 糖蛋白胨水培养基； 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管 三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质 分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 （1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并 非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
第2章细菌的分布与消毒灭菌 学习要点 一、细菌的分布 1. 土壤 主要存在一些自营菌和腐物寄生菌，在自然界物质循环中起重要作用。 土壤中也有一些随着人及动物的分泌物、排泄物及尸体、残骸进入土壤的致病菌，但只有能形成芽胞的致病菌，如破伤风梭菌、肉毒梭菌、产气荚膜梭菌、炭疽芽胞杆菌等可长时间存活。 处理被泥土污染的创伤时要特别注意防止破伤风梭菌、产气荚膜梭菌等的感染。 2．水 如被人和动物粪便污染，就可能带上伤寒沙门菌、痢疾志贺菌、霍乱弧菌、致病性大肠埃希菌、钩端螺旋体等。通过水源易引起各种感染，特别是消化道传染病的暴发流行。 3．空气 空气中的细菌是吸附在尘埃微粒上，常见的致病菌有结核分支杆菌、白喉棒状杆菌、百日咳鲍特菌、金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌、脑膜炎奈瑟菌、军团菌等，可引起呼吸道传染病或伤口感染。 4．有生命物体的表面和与外界相通的腔道中 这些部位能为细菌生长繁殖提供条件，存在着复杂的细菌群及其它微生物，包括致病菌和非致病菌。 5．无生命物体的表面和与外界相通的内表面 其细菌均来源于土壤、水、空气以及人和动物的污染。 二、消毒与灭菌 是指用物理或化学方法来抑制或杀死外环境中及机体体表的微生物，以防止微生物污染或病原微生物传播的方法。 以下术语常用来表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度。 消毒指杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀灭芽胞或某些非
病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂（disinfectant）。 灭菌指杀灭物体上所有微生物的方法。包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。经过灭菌的物品称“无菌”物品。需进入人体内部的医用器材要求绝对无菌。 防腐防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。 无菌不存在活菌的意思。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。 清洁是指通过除去尘埃和一切污秽以减少微生物数量的过程。是物品消毒、灭菌前必须经过的处理过程，有利于提高消毒、灭菌的效果。1．物理消毒灭菌法 热力灭菌法 高温对细菌具有明显的致死作用。但细菌芽胞对温度的抵抗力较繁殖体强。 (1) 干热消毒灭菌法 ①焚烧：直接点燃或在焚烧炉内焚烧。适用于废弃物品或动物尸体等。 ②烧灼：直接用火焰灭菌，适用于微生物学实验室的接种环、试管口等的灭菌。 ③干烤：利用干烤箱灭菌，一般加热至160℃～170℃经2 h。适用于高温下不变质、不损坏、不蒸发的物品。 (2) 湿热消毒灭菌法 ①巴氏消毒法：用较低温度杀灭液体中的病原菌或特定微生物，以保持食物中不耐热成分不被破坏的消毒方法。今广泛采用加热至71.7℃持续15～30s。 ②煮沸法：一般细菌的繁殖体5min能被杀死。此法常用于消毒食具、刀剪、注射器等。 ③高压蒸汽灭菌法：是一种最有效的灭菌方法。当蒸汽压力达到103.4 kPa(1.05kg/cm2)，温度为121.3℃，如维持15～20min，可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物。此法常用于培养基、生理盐水、手术器械和敷料等耐高温、耐湿热物品的灭菌，是医院使用最广的灭菌方法。
年级：2009 专业：医学检验班级：一班姓名：赵富海学号：2009221792 实验八、细菌的药物敏感试验 【K-B法】 菌种（均为幼龄菌）：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠埃希菌1.5×108/ml 药物纸片：青霉素、庆大霉素、新诺明、环丙沙星 方法： 1.涂菌（棋盘划线法），室温放10min； 2.贴药敏纸片，注意间距（大于24mm）和边距（大于15mm）； 3.置35℃24h判读结果。 结果如图所示： 金黄色葡萄球菌 金黄色葡萄球菌抗菌药物敏感性试验评价结果 实验结论：金黄色葡萄球菌对青霉素耐药，对庆大霉素、新诺明、环丙沙星敏感。 【试管稀释法】 菌种：金黄色葡萄球菌1.5×108/ml、大肠b1.5×108/ml 抗生素：庆大霉素32u/ml 方法： 1.对倍稀释抗生素
2.加菌液0.1ml/管，摇均35℃16—18h 3.判读MIC 试验操作如下图所示： 注意:设立对照管(肉汤对照管,待测菌生长对照管和质控菌生长对照管) 结果判断: 不出现肉眼可见生长的最低药物浓度为该药对该细菌的MIC. 如图： 实验结论：MIC=原药物浓度(32u/ml) ×稀释倍数(1:24)=2u/ml 【联合药敏试验】（示教） 金黄色葡萄球菌大肠b 结果判断： 金黄色葡萄球菌联合药敏试验结果判读：
①青+链=青单+链单→相加作用 ②青+红=青单+红单→相加作用 ③青+万=青单+万单→相加作用 ④青+林＞青单+林单→协同作用 大肠b联合药敏试验结果判读： ①青+红=青单+红单→相加作用 ②青+链=青单+链单→相加作用 ③青+林=青单或林单→无关作用 ④青+南＞青单+南单→协同作用 【实验讨论】 1．K-B法原理 将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂平板上。纸片中所含有的药物吸取琼脂中的水分溶解后便不断地向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度。在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度。并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关关系，即抑菌圈愈大，MIC 愈小。 2. K-B法影响因素 ①培养基的质量，如PH、深度、硬度和表面湿度等； ②药敏纸片的质量，含药量和保存方式； ③接种菌量正确与否是影响结果的重要因素之一，取决于比浊标准的配制，正确使用和保存； ④试验操作质量：接种细菌后贴片时5~15分钟； ⑤孵育条件，温度和时间：培养时间16~18h,不要超过24h。 3．稀释法原理： 以水解酪蛋白（MH）液体培养基将抗生素作不同浓度的稀释，然后种入待测细菌，定量测定抗菌药物对被测菌的最低抑菌浓度(MIC)或最低杀菌浓度（MBC）。 4. 稀释法影响因素：培养基、接种菌量、蛋白质结合率、抗菌药物的配制、结果观察的时间等因素均能影响本试验的结果。 5．抗生素药物敏感性试验（AST）的意义 ①可预测抗生素治疗的效果，既AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验结果为“耐药”时，使用该药物治疗肯定失败； ②指导临床医生选择使用抗生素，AST的结果往往在给予病人经验性治疗24~48h之后，若AST结果为“敏感”，该治疗为有效，若结果为“耐药”，即应更换药物； ③提供所选择药物的依据； ④监测耐药性，分析耐药菌的变迁，掌握耐药菌感染病的流行病学，控制和预防耐药菌感染的发生和流行。 6．通过此次实验掌握纸片扩散法（K-B法）、试管稀释法的原理、操作方法、结果的判读及其临床意义，并掌握联合药敏试验结果的观察、判断。
细菌药物敏感试验实验报告 药物敏感性试验的基本原则 1药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2药敏试验测试的前提条件： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。 错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3测试结果应准确： 实验室应遵照CLSI文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理
体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 具体的专业要求 1标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。在规范临床送检的前提下，实验室进行药敏试验和报告药敏结果时，应首先考虑标本的特殊性。实际工作中需重点考虑的标本如下。 1．脑脊髓液： 正常和疾病状态不能穿透血脑屏障的药物，常规不应报告。报告审核时，对于分离自脑脊髓液的菌，下列药物不能报告：仅有口服剂型的抗菌药物、一、二代头孢菌素(除外静脉用头孢呋辛)、头霉素类、克林霉素、大环内酯类、四环素类和喹诺酮类。
微生物实验报告：微生物 形态观察 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多 的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状 体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
第三章细菌分布与消毒灭菌 一、单 5 选1 1. 杀灭物体上所有微生物的方法称为: A. 消毒 B. 灭菌 C. 无菌 D. 防腐 E. 无菌操作 2. 杀灭物体上病原微生物的方法称为: A. 消毒 B. 灭菌 C. 无菌 D. 防腐 E. 无菌操作 3. 微生物学实验过程中防止污染与感染的方法称为: A. 消毒 B. 灭菌 C.无菌 D.防腐 E. 无菌操作 4.消毒的含义是: A. 杀灭物体上所有的微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C. 使物体上无活菌存在 D.杀死含芽胞的细菌 E. 抑制微生物生长繁殖 5. 灭菌的概念是: A. 杀灭物体上所有微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C. 抑制微生物生长繁殖的方法 D.杀死细菌繁殖体 E. 使物体不含活菌 6. 防腐的概念是: A. 杀灭物体上所有的微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C. 使物体上无活菌存在 D.杀死含芽胞的细菌 E. 抑制微生物生长繁殖 7. 无菌是指: A. 杀灭物体上的所有微生物 B.杀死物体上的病原微生物 C. 物体上无活的微生物存在 D.杀死含芽胞的细菌 E. 抑制微生物生长繁殖 8. 下列哪项可经巴氏消毒法灭活 : A. 牛奶 B. 空气 C.手术器械 D. 基础培养基 E. 物体表面 9. 巴氏消毒法的温度和时间是:
A. 100 C 10 分钟 B.121 C 15 分钟 C.80 C 10 分钟 D.62 C 30 分钟 E.71.7 10. 高压蒸汽灭菌法的参数为： A.100 C 10?20分钟 B.121.3 C 30 分钟 C 15?20 分 钟 C.80 C 5?10分钟 D.62 C 30分钟 E.71.7 C 15?30 分钟 11. 正常微生物群是指: A. 广泛存在于正常人体内脏的微生物群 B. 存在于正常人体所有腔道的微生物群 C. 正常时对人体无害也无利的微生物群 D. 存在于出生前后的正常人群体表的微生物群 E. 存在于正常人体体表的微生物群 12. 条件致病微生物的致病条件不包括: A.寄居部位的改变 B ?免疫功能降低C．微生物群分布失调 D. 长期大量应用广谱抗菌药，正常微生物群被抑制 E. 使用有关的微生态制剂 13. 正常微生物群对人体的生理作用不包括: A .生物拮抗 B .营养作用 C .抗炎症作用 D .免疫作用 E .抗衰老作用 14. 大肠杆菌通常寄生于正常人体的: A .皮肤 B .口腔 C .外耳道D 15. 幽门螺杆菌常寄生于人体的部位是： A .胃 B .口腔 C .皮肤D 16. 因长期大量使用抗生素引起的腹泻属于:肠道E.尿道外耳道E.尿道 A .外源性感染 B .微生物失调 D .环境污染感染 E .潜伏感染 C .交叉感染 17. 治疗微生物群失调症可使用: A .维生素 B .纤维素 C .抗生素 D. 类毒素E. 微生物制剂 18.* 随着年龄的增长，肠道内明显减少的细菌是 A. 双岐杆菌B .乳酸杆菌C .大肠杆菌D .葡萄球菌 E .肠球菌
常见细菌药物敏感性试验报告规范中国专家共识 微生物学检验为感染性疾病的诊断、治疗和控制提供了必不可少的证据。因此微生物学检验报告是临床和实验室等多方共同关注的焦点。国内临床微生物学检验发展较为薄弱，报告存在着种种不足。同时，临床与实验室的沟通存在一定不足，密切协作非常必要。基于实际存在的问题，为规范国内临床微生物学检验药物敏感性试验报告，加强临床与实验室合作，发挥检验医师作用，特制订本共识，以期指导相关报告的规范化，减少错误，增加专业信息，提高服务质量，为临床医学诊、治、控提供坚实的科学依据。本共识限于常见细菌的药物敏感性报告。 一、药物敏感性试验的意义和基本原则 (一)意义 药物敏感性试验可以检测细菌对于抗细菌药物的敏感性，为临床用药、新药研究、监测耐药变迁、发现耐药机制等提供客观证据[1]。对于经验治疗，依据一方面来自医生自身的经验，一方面是实验室长期不断提供的数据积累。临床需要考虑不同感染的病原谱和常见病原对不同药物的敏感性；对于靶向治疗，特定分离株的具体药敏试验结果可以用于判断经验治疗选药合理性、经验治疗效果分析、调整治疗选药依据等。 (二)基本原则 1．药敏试验检测获得性耐药，不必测试天然耐药： 天然耐药是细菌菌种固有的特征，耐药基因一般位于染色体，可以长期稳定遗传，表现为对某类或某种药物的天然耐药[2]。天然耐药信息一般由基础医学和临床文献提供。部分天然耐药，体外试验条件下可能无法检测出来，因而导致假敏感，如果报告将成为极重要错误，严重误导临床。常见菌种对各类药物的天然耐药见文献[3,4]。实验室全体人员应熟知这些信息，可将其发给临床学习和参考。 2．药敏试验测试的前提条件[5]： 实验室应具备相应检测的人员能力、客观条件、结果解释依据。标本处理、菌株分离鉴定、药敏试验操作等环节规范、标准、结果可信；具备对结果的解释能力，能够提供临床会诊服务。临床常规工作，分离株(可能)有临床意义而非定植或污染时，才可进行药敏试验。错误示例：来自痰标本的溶血葡萄球菌，未作标本质量评估和半定量培养，进行药敏试验；来自粪便标本肠球菌属进行药敏试验等。 3．测试结果应准确： 实验室应遵照C L S I文件或相关规范建立本医院药敏试验的质量管理体系。质控菌株、频率、质控范围符合相关要求；定期参加实验室室间比对项目。建议保留菌株，以便复核。 二、具体的专业要求 (一)标本类型 临床微生物学的一大特点是标本种类繁多，而不同药物在这些部位的分布不同。标本的规范采集、质量保证、立即运送和有效保藏有赖于临床、实验室以及相关各方的密切合作。
实验报告课程名称：生命科学趣味实验 实验名称：微生物形态观察 指导教师： 一、实验目的： 1．掌握普通光学显微镜的原理、结构、各部分的功能和使用方法。 2．了解酵母菌、霉菌的个体形态特征。 二、实验原理： 显微镜成像原理：目镜、物镜各自相当于一个凸透镜，被检标本置于聚光器与物镜之间，即物镜下方1～2倍焦距之间，物镜可使标本在物镜的上方形成一个倒立放大实像（倒像），该实像正好位于目镜的下焦点（焦平面）之内，目镜进一步将它放大成一个虚像，通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处。 三、实验仪器、材料 酵母菌涂片、霉菌涂片。 奥林巴斯显微镜、擦镜纸等。 四、实验方法： 1 显微镜安置 取显微镜时一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳，置显微镜于平整实验台上，镜座距实验台边缘约3～4 cm，接通电源。 注意：显微镜移动时切忌用单手拎提。 2 选择物镜 将低倍物镜放入光路。 3 调整光强 打开显微镜主电源，调整照明度。通过亮度调整旋钮来改变电压大小从而调整显微镜亮度强弱。 4 调整聚光器位置和孔径光阑 在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，40倍），观察时将其与使用物镜相对应倍率放到正面。 5 放置标本 调粗调旋钮使载物台下降，向外拉开机械式载物台样本夹自前向后将标本切片放入平台，标本放稳后，再将标本夹轻轻放回原位；通过垂直旋转移动杆和水平旋转移动杆来上下和左右移动标本。
6 聚焦 ① 对焦要领为：从侧面看，转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近标本；一边看目镜，一边调粗调旋钮，使载物台下降；看到标本后，再用细调旋钮正确对焦。 ② 调整瞳距：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右视野一致。标识●的位置表示瞳距。 ③ 调整屈光度数：以右眼看右侧目镜，旋转粗、细调旋钮对好焦距；以左眼看左侧目镜，旋转屈光度调整环，对好焦距。 ④ 目镜眼罩使用方法：戴眼镜时候，将眼罩折叠，可防止眼镜和目镜接触所造成擦痕；不戴眼镜时候，将折叠眼罩向外拉长，可防止目镜和眼睛之间射入不必要光线，利于观察。 7 观察 在低倍镜找到合适目的菌将其移到视野中央。 8 高倍镜下观察 ① 转换高倍镜：眼睛从侧面注视物镜，用手转动转换器，换高倍镜。 ② 调焦：眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调旋钮，直至视野内看到清晰物像为止。一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦，转动物镜转换器将其它物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本的准焦状态，称为物镜同焦，利用物镜同焦，可以保证在使用高倍镜时仅用细调旋钮即可对物像清晰聚焦，从而避免使用粗调旋钮时可能误操作损坏镜头或载玻片。 9 绘图 10 显微镜用毕后处理 （1）下降载物台，取下标本。 (2) 用擦镜纸清洁物镜及目镜； (3) 将各部分还原：载物台下降到最低位置；聚光器下降到最低位置；物镜镜头呈∧型，使物镜处于非光路位置；关好电源，将显微镜主电源开关拨到电压值为最小状态，然后断开电源。 五、实验结果： 10× 霉菌涂片 六、实验讨论： 可写实验体会。
微生物学实验报告 实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察 第一部分：显微镜的使用 一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。 2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。 3．了解各种显微镜的主要特征。 二、实验原理 （一）光学显微镜的构造 微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。 1、机械部分 普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。 2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。 （二）放大倍数 标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。 显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。 R=0.61λ/N.A 式中：R-----分辨距离； λ------作用光的波长； N.A------数值口径。 一些介质的折射率
介质折射率 空气 水玻璃香柏油 1 13 55 1.56 三、实验内容 （一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。 （二）方法： 细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法： 1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。 2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。 3、更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。 4、油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中（6）项处理。 5、最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形， 以免与聚光器发生碰撞。 四、思考题 1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。 答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。 2、使用不同放大倍数的物镜时，工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？ 答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？ 答：香柏油只在使用油镜头时（100倍物镜）使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的
脓汁和粪便标本中病原菌的分离培养与检测 专业：中西医临床医学七年制学号：2012054015 姓名：杨小静 实验目的：本次脓汁粪便标本中病原微生物的检测实验，旨在通过培养基制备，病原菌的分离与培养，以及细菌鉴别实验如革兰氏染色法，血浆凝固酶试验，药敏试验，半固体接种法实验，从而对医学微生物学主要的研究方法和手段有一定程度的了解，初步掌握微生物试验的基本技能和原理，也有助于无菌观念的树立。 1.实验器材： 接种针、接种环、油性笔、打火机、试管架、普通冰箱、冷藏室、隔水式电热恒温培养箱、生物显微镜、电炉、蒸馏水、玻片缸、消毒液、1‰新洁而灭、天平、砝码、细菌干粉培养基、锥形瓶、量筒、试管筐、糖发酵管、灭菌平皿、试管（棉塞）、刻度吸管、洗耳球、称量纸、硫酸纸、牛皮纸、橡皮筋、尺子 2.实验方法与步骤：①培养基的制备②细菌的分离培养③细菌的纯培养④细菌的形态学检查⑤细菌的生化试验等⑥细菌的血清学试验、结果 第一次实验 2.1培养基的制备、消毒和灭菌 如下图表格内容要求所示制备培养基。 表一 组号培养基称量 (g) 水量 (ml) 煮沸 (次) 分装 (ml) 备注（40人份） 1 营养琼脂11.4 300 4瓶，500ml瓶，平板 2～4 营养琼脂 2.9 75 3 5 15支×3，中试管，斜面5～7 营养肉汤 1.1 50 1 3 15支×3，小试管，液体8～10 半固体 1.9 50 3 3 15支×3，小试管，高层 第二次实验 2.1手指和空气的细菌学检查 实验步骤：1空气的细菌学检查：每组1个营养琼脂平板，选择采样地点（实验室、卫生间或任选地点），将平板盖打开，盖朝下放置在平板旁边，平板暴露于空气中15分钟，然后平板倒扣盖上，作标记。37℃温箱培养24小时，观察结果。（※CFU/m3 ＝50000N÷AT≈86N(直径7cm平板）。N：平板上的菌落数。A：平板面积(平方厘米)。T：采样时间(分钟)。 CFU /m3 ＝50,000N÷AT ≈8333 2手指皮肤的细菌学检查： 上:甲、丙→常规洗手甲和乙、丙和丁共用1个平板