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细胞凝集反应实验报告

细胞凝集反应实验报告
细胞凝集反应实验报告

细胞生物学实验报告

一.实验名称:细胞凝集反应

二.实验原理:

细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构,脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被.目前认为:细胞间的联系,细胞的生长和分化,免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。

凝集素(lectin)是一类含糖的(少数例外)并能与糖专一结合的蛋白质,它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接,在细胞间形成“桥”的结果,加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。

凝集素是指一种从各种植物,无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白,因其能凝集红血球(含血型物质),故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA),通常以其被提取的植物命名,如刀豆素

A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等,凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物,它们具有的某些“亲合”特性,能被免疫细胞化学技术方法所应用。

血型鉴别实验,也是凝集反应的一种。

三.实验用品:

土豆块茎

显微镜,粗天平,载玻片,滴管2支,离心管2支

PBS缓冲液:称取NaCl7.2g,Na

2HPO

4

1。48g,KH

2

PO

4

0。43g,加蒸馏水,定

容至1000ml,调pH值到7.2.

4。2%的红细胞

四.实验步骤:

1.称取土豆去皮块茎2g,加10mlPBS缓冲液,浸泡2h,浸出的粗提液中含

有可溶性土豆凝集素。

2.以无菌方法抽取兔子静脉血液(加抗凝剂),加生理盐水3ml,在

1000r/min,离心5min,重复3次离心,最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。

3.分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴,置双凹片左孔内,充分

混匀。

4.同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴,置双凹片右

孔内,充分混匀,做对照实验。

5.摇晃5-10min后,观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。

试剂土豆凝集素PBS缓冲液

现象

在振荡过程中,溶液中

的红细胞渐渐凝集成颗

粒状,逐渐聚拢,最后

在液滴中形成一大块血

红色血块。

在振荡过程中,红细胞

不断向中间靠拢,最终

形成中间颜色较深,边

缘颜色较浅的红细胞浑

浊溶液。

结果红细胞发生凝集红细胞未发生凝集

说明结论

土豆凝集素可使血液发生凝集,PBS缓冲液不能使

血液发生凝集。

图左为PBS缓冲液对照图右为土豆凝集素

图一图二土豆凝集素(*4)图一中为在振荡了11min后,细胞凝集的现象,中间凝结成血块,周围叫澄清,边缘为干涸的红细胞凝结成的颗粒附着在玻片上。在低倍镜(*4)下观察,可以看到红细胞凝结成块状,周围液体近乎透明,说明红细胞发生了凝集。

图三图四 PBS缓冲液(*4)图三中为在振荡了之后,红细胞并没有聚集成颗粒状,只是由于向心力左右而聚拢在一起呈透明凝胶状。在低倍镜(*4)下观察可见到均匀的透明液体,没有红细胞凝结而成的颗粒。

六.实验分析:

实验所得结果可见,红细胞并没有如预期那般在中央凝结成大血块,而周围近乎透明,分析其原因可能为:

(1)在滴加土豆凝集素时,没有加入半滴,而是加入了一滴,反而导致了细胞凝集效果下降.

(2)在晃动过程中,速度过慢,且晃晃停停,导致红细胞凝结成的颗粒状在玻片上凝固。

(3)血浆浓度的影响,血浆浓度不合适导致细胞凝集作用减弱。

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