急性毒性试验
(-)经典的急性致死性毒性试验
通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50)
1、实验动物
常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50；如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。
2、染毒剂量设计
首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按几何级数)染毒，找出找出10%、90% (或0%~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组：
i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1)或：i=(lgLD100-lgLD0)/ (n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)；
n为设计的剂量组数。
有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。
3、观察
染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50o在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。
观察内容包括：
(1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。
(2)动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。
(3)中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、
循环、自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、
惊厥、腹泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或
竖毛。
(4)病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进
行组织病理学检查。
4、LD50计算
(1)霍恩氏法
(2)简化寇氏法
M=X - i (S p - 0. 5)
式中:m―logLD50,
X—最高剂量组剂量对数值，
p—死亡率(用小数表示)，
工p—死亡率总和，
i—相邻两组剂量对数之差。
(3)直接回归法：
死亡频率呈正态分布，则变化曲线为典型的“钟罩”型；死亡频率化为累积死亡频率，反应曲线呈s形；累积死亡频率化为概率单位时，反应曲线呈直线。
（二）急性毒性试验的其他方法
1.固定计量法
2.急性毒性分级法
3?上、下移动法
亚慢性毒性和慢性毒性的评价方法1、
实验动物
要求选拔两种实验动物，一种为啮齿类，首选是大鼠，另一种为非啮齿类，首选是狗。亚慢性毒性试验一般每个剂量组20只大鼠，或每组4'6只狗。慢性毒性试验每组40只大鼠，狗每组8只或以上。
2、染毒途径
常用的染毒途径是经胃肠道、经呼吸道和经皮肤染毒。
3、染毒期限
工业毒理学——3—6个月
食品毒理学一一6个月一1年
环境毒理学一一6个月一1年
致癌试验一一接近或等于动物的预期寿命
4、剂量分组
（1）亚慢性毒性的剂量选择：
阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组
急性毒性的阈剂量:l/20'l/5LD50
组距：3、10倍，最低不小于2倍
（2）慢性毒性的剂量选择
阴性对照组，低剂量组，中剂量组，高剂量组
亚慢性阈剂量：l/50'l/5LD50
组距：2~5倍,最低不小于2倍
5、观察指标
（1）中毒症状（行为和外观）
（2）体重：每周称量一次
（3）食物利用率（试验动物每食入100g饲料所增长的体重克数）
（4）实验室检查
1）血液学检查
2）尿液检查
3）血液生化学检查
（5）病理及病理组织学检查
对濒死动物进行解剖。试验结束及恢复期结束时，活杀实验动物。
1）系统解剖：消化道、肺、肝、肾、淋巴腺、眼、皮肤等，记录有无肉眼可见的异常变化。
2）脏器系数：是指某个脏器质量与体重的比值，又称脏体比值。常以100g体重或lg 体重计。需称量脏器湿重并计算其脏器系数。
3）组织病理学检查
（6）特界性指标
6、结果分析：选择适当的统计学方法进行各剂量组与阴性对照组的比较。
亚慢性毒性试验 2.3.9.1 目的 （1)检测消毒剂较长期染毒对实验动物的毒性作用及其靶器官，并确定其最大未观察到有害作用剂量。 （2)为慢性毒性和致癌试验的剂量设计提供依据。 2.3.9.2 实验动物 一般用啮齿类动物，首选大鼠。所用大鼠应为 4周～6 周龄者。全部试验至少需用 80 只动物。 2.3.9.3 试验分组 将实验动物随机分为4组(3个剂量组和1个对照组)，每组20只动物，雌雄各半。选择受试物剂量时，高剂量组应出现明显的毒性反应，但不引起死亡，如果出现动物死亡应不超过 10%；中间剂量组应可观察到轻微的毒性效应；低剂量组应不引起任何毒性效应(属未观察到有害作用剂量)。至于具体的剂量选择，可考虑高剂量为LD50的1/20~1/5，高、中、低3个剂量间的组距以3倍~5倍为宜，最低不小于2倍。另以受试物溶剂代替受试物进行试验，作为阴性对照组。 2.3.9.4 操作程序 （1）采用灌胃方式或将受试物掺入饲料经口染毒。 （2）灌胃法每天灌胃1次，每周称体重，并按体重调整受试物给予量。如受试物掺入饲料时，应定期称饲料消耗量，计算消毒剂摄入量。
（3）试验期为3个月(90d)，末次染毒后24h检测各项观察指标，然后处死实验动物，做病理学检查。 2.3.9.5 观察指标 观察指标，可因消毒剂毒理作用不同而异，一般至少包含以下方面。 （1）临床观察：观察动物中毒表现，每周称量体重1次，食物消耗量至少1次~2次。 （2)血液学检查：包括血红蛋白含量、红细胞数、白细胞及其分类计数、血小板数、网织红细胞数等。 （3)血液生物化学检查：例如天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶、尿素氮、肌酐、血清总蛋白和白蛋白、总胆固醇、总胆红素等。必要时，可根据所观察到的受试物毒性效应，或与受试物化学结构相似物质的毒性作用，选择其他一些生化指标。 （4)脏器重量：测量主要脏器(如肝、肾、肾上腺、睾丸等)的脏器重量和脏器系数。 （5)病理学检查：实验结束时，处死所有动物，进行系统解剖和肉眼观察，并将主要器官和组织（如心、肺、肝、肾、脾、脑、肾上腺、睾丸、卵巢、胃肠和系统解剖时发现的异常组织等）固定、保存。当各剂量组动物尸检未发现明显病变时，先进行高剂量组和阴性对照组动物肝、肾、胃、肠及其它重要的和可能受损的脏器的组织病理学检查。如发现病变，还应对中、低剂量组动物相应的器官进行组织病理学检查。 2.3.9.6 评价规定
毒理学作业 农药2,4-滴钠盐原药为白色粉末，水溶性，表1是其对SD大鼠的急性经口试验结果，请根据表中结果，给出该农药的90天亚慢性试验的试验方案，以及如何对保证实验质量予以控制。 表1 2，4-滴钠盐原药对SD大鼠急性毒性实验结果 剂量设置高剂量为25%LD50，中剂量为12.5%, 低剂量为6.3%。 雌性LD50为584mg/kg，高剂量为146mg/kg,中剂量为73mg/kg,低剂量为37mg/kg；雄性为501mg/kg，高剂量为125mg/kg，63mg/kg,低剂量为31mg/kg。 根据GB15670《农药登记毒理学实验方法》的农药急性毒性分级标准，2，4-滴钠盐原药的LD50>500mg/kg，属于低度农药。因此试验时选择SD大鼠的LD50为584mg/kg。
农药2,4-滴钠盐原药SD大鼠亚慢性毒性试验 目的;研究喂饲农药2,4-滴钠盐原药对大鼠的亚慢性毒性。 方法：取初断乳SD大鼠80只，雌雄各半按照体重随机分为4组。将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别拌入饲料经口喂饲染毒90d。 观察：大鼠外观体征、体质量、进食情况等。在实验中期和末期采血检测检测血液学。试验末期检测血生化指标以及尿常规检查。实验结束时处死实验动物，计算脏器指数，并对主要脏器进行病理组织学观察。 1 材料和方法 1.1 受试物 农药2,4-滴钠盐原药，白色粉末，水溶性，由某地某农药公司提供。SPF级初断乳大鼠80只，雌雄各半，体质量50~100 g，由XXX实验动物研究所繁育场提供，动物合格证号为医动字第XX-XXXX号。 1.2 饲养与管理 SPF 环境条件下，同组同性别两只一笼喂养，自由进食和饮水。环境温度21～25℃，相对湿度40%～60%。严格控制昼夜交替。 1.3实验方法 试验前将雌、雄大鼠各半按体重随机分为3个剂量组和1个对照组，每组20只，将2,4-滴钠盐原药按146、73、37mg/kg mg/kg剂量分别均匀混入饲料中制成颗粒饲料辐照灭菌后分别供高、中、低剂量组动物食用，连续每日一次喂养90d；对照组给予不加受试物的正常饲料。 1.4 观察指标 1.4.1一般情况 试验期间观察动物的一般情况包括外观体征和行为活动、粪便性状、食物摄入量及体重变化等。 1.4.2血常规 在实验中期和末期按常规方法测定血液学指标 1.4.3血液生化指标 试验末期检测血液生化指标 1.4.5尿常规检查 尿常规测定颜色、pH值、比重(SG)、尿糖(GLU)、尿蛋白，将尿液离心，并对尿中沉淀物进行镜检。 1.4.6脏器病理 解剖动物，取心、肝、脾、肺、肾、胃肠、肾上腺、胸腺、脑和卵巢、睾丸等脏器，观察大体变化并称重（胃肠除外），计算脏器指数[脏器质量/体重）×100%]。 将解剖取得的脏器福尔马林固定，常规制片，HE 染色，光学显微镜进行病理组织学检查。
2012年11月第9卷第32期 ·论著· CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报色胺酮（TRYP ）为吲哚喹啉类生物碱，其化学名称为吲哚[2，1-b]喹唑啉-6，12-二酮（6，12-dihydro-6，12-dioxoindo lo-[2，1-b]-quinazoline ），主要存在于马蓝（Strobilanthes cusia ）、蓼蓝（Polygonum tinetorium Lour ）、菘蓝（Isatis tinctoria L.）等产蓝植物中，现也可通过微生物发酵或人工合成得到[1]。近年来药理研究表明其具有抗菌、抗炎、抗肿瘤、抗疟和杀虫作用，特别是可以通过多种途径对肿瘤细胞增殖具有抑制作用[1-9]。经文献报道和本课题组研究发现，色胺酮对K562白血病细胞有突出的抑制和诱导凋亡的作用[2-3]。为了评价其成药的安全性，为进一步制剂的剂量设计提供参考，笔者对其极性毒性进行了研究，现将结果报道如下：1仪器与试药 ABX MICROS 60三分类细胞计数仪（西京医院儿科）；COBAS INTEGRA 400Plus 全自动生化分析仪；分析天平（德国赛多利斯）。 色胺酮（TRPY ）粉末由西北大学生命科学院提供，经HPLC 法检测其含量高于95%，其他试剂均为分析纯，临用前配制成混悬液用以灌胃。 昆明种小鼠，雄性，体重（20±2）g ，使用许可证号：SCXK （军）字第2007-007号。2方法与结果2.1急性毒性实验 取适应性饲养3d 后的小鼠10只，禁食不禁水12h ，每组于 1d 内按50mg/kg 剂量灌胃给药3次，每8小时给药1次。给药 后仔细观察小鼠的外观、行为、活动、精神、食欲、皮毛、呼吸和鼻、眼、口及大小便等。结果连续观察3d ，体重略有减轻，但未见死亡，其他未见异常，无法测出半数致死量（LD 50）。对小鼠进行大体解剖，发现胃肠道有明显的黄色粉末状物体，推测是未被完全吸收的色胺酮粉末，其他未见明显异常。2.2亚急性毒性实验 2.2.1日常行为观察取小鼠40只，随即分为对照组和高、中、低三个剂量组。根据药代动力学研究[10]定其剂量分别为：高剂量组80mg/kg 、中剂量组50mg/kg 、低剂量组25mg/kg ，对照组给同体积生理盐水，连续给药30d 。每日观察动物的精神、活动、毛色状态、记录摄食量及体重变化。见表1、2。结果表明各剂量组体重和进食量与对照组比较差异均无统计学意义（P >0.05）。 2.2.2血常规检查末次给药后2h 眼球取血，进行血常规和生化指标测定，即红细胞（RBC ）、白细胞（WBC ）计数、血红蛋白（HGB ）、平均血红蛋白（MCH ）等。见表3。 2.2.3脏器系数检测末次给药2h 后摘眼球取血，取血后解剖大鼠，观察各组织脏器均无明显异常，摘取心、肝、脾、肺、肾和脑等组织，用生理盐水清洗，滤纸吸干多余水分后称重，按以下公式计算脏器系数，脏器系数（‰）=脏器重量（g ）体重（g ）×100‰， 结果见表4。用SPLM 3.0版软件进行统计学检验和方差分析显示，其结果差异无统计学意义（P >0.05）。3讨论 白血病是严重危害人类生命健康的造血系统恶性肿瘤。当前，白血病的临床治疗仍采用传统的大剂量联合化疗，但此 色胺酮对小鼠急性和亚急性毒性实验研究 李捷缪珊王四旺王剑波谢艳华 第四军医大学天然药物学教研室，陕西西安 710032 [摘要]目的观察色胺酮灌胃后小鼠产生的急性毒性反应，以评价色胺酮原料药的安全性。方法将色胺酮设定3个剂量组，灌胃给药，小鼠未出现死亡，故以高、中、低三个给药剂量进行亚急性毒性研究。连续喂养观察体态行为，30d 后摘眼球取血作血常规检测。结果试验小鼠的行为未出现异常，无小鼠死亡。各组小鼠的体重及其增重、进食量、食物利用率与对照组比较差异均无统计学意义（均P >0.05）；各计量组血常规指标与对照组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论色胺酮具有较好的安全性。[关键词]色胺酮；安全性；急性毒性试验；小鼠[中图分类号]R282.71[文献标识码]A [文章编号]1673-7210（2012）11（b ）-0013-02 Acute and sub-acute toxicity test of TRYP in mice LI Jie MIAO Shan WANG Siwang WANG Jianbo XIE Yanhua Department of Nature Medicine,the Fourth Military Medical University,Shaanxi Province,Xi ′an 710032,China [Abstract]Objective To evaluate the safety of TRYP by observing the acute toxic reaction of mice after oral administra -tion.Methods The mice were oral administrated with TRPY at three different dosages.No death of mice was found.So three doses of the high,middle and low for subacute toxicity study were given.After feeding for 30days,the blood hema -tology was detected.Results Dreg-treated mice had no behavior anomaly and death in the observation period.The differ -ence of body weight,weight increased,food in-take and utilization ratio in each group was not significant (P >0.05).The hematology in each dose group had no significant difference compared with control group (P >0.05),either .Conclusion TRYP is relatively safe. [Key words]TRYP;Safety;Acute toxicity;Mice [基金项目]国家“重大新药创制”科技重大专项（项目编号：2011ZX09401-308）。 [作者简介]李捷（1983-），女，硕士研究生，助教；研究方向：中药药理学。[通讯作者]王四旺（1958-），男，教授，博士生导师；研究方向：中药新药开发。 13
第三节慢性毒性作用及其试验方法 一、概念和试验目的 (一) 慢性毒性概念 慢性毒性是指以低剂量外来化合物长期给予实验动物接触，观察其对实验动物所产生的毒性效应。 (二) 试验目的 慢性毒性试验是确定外来化合物的毒性下限，即长期接触该化合物可以引起机体危害的阈剂量和无作用剂量。为进行该化合物的危险性评价与制定人接触该化合物的安全限量标准提供毒理学依据，如最高容许浓度和每日容许摄入量等。 二、慢性毒性试验设计 （一）慢性毒性试验期限 一般认为工业毒理学慢性试验动物染毒6个月或更长时间；而环境毒理学与食品毒理学则要求实验动物染毒1年以上或2年。也有学者主张动物终生接触外来化合物才能全面反映外来化合物的慢性毒性效应，以及求出阈剂量或无作用剂量。 但是，也有学者认为大鼠为进行慢性毒性试验动物，接触受试化合物1年以上不一定必要。多次经验证明延长接触1年以上，大鼠也不再出现新的毒性效应(致癌试验除外)。例如有报道在122种化合物中，大鼠连续接触3个月之后才出现毒性效应的只有3种(占2.46%)，其它化合物均在3个月内已出现毒性效应。因此认为以大鼠为试验对象时连续接触外来化合物90天，即可确定受试化合物的长期无作用水平。但是，这种观点还存有争论。因此在食品及环境毒理学中进行慢性毒性试验，接触外来化合物的时间仍以2年为好。 （二）实验动物与饲养环境 1、实验动物 慢性毒性试验选择实验动物的条件与亚慢性毒性试验相同。但实验动物最好为纯系甚至同窝动物均匀分布于各剂量组。 实验动物年龄应较小，大鼠和小鼠应为初断奶者，即小鼠出生后3周，体重 10~12g；大鼠出生后3~4周，体重50~70g。性别要雌雄各半。 2、动物饲养环境
什么是急性毒性试验 急性毒性试验，其实就是一种毒性研究，当然对我们来讲对这种常识问题，很多人都不会去注重，因为毕竟不是作为学术研究的人，但是对这些常识有一些基本的常识了解，其实对我们的生活，也可以带来一定的帮助功效，下面就为大家具体介绍一下，什么是急性毒性试验。 急性毒性试验是指一次或24小时每多次染毒的试验，是毒性研究的第一步。要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，以提供受试物质的急性毒性资料，确定毒作用方式、中毒反应，并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。试验概述及染毒方法 概念和实验目的 急性毒性是指机体(人或实验动物)一次(或24小时内多次)接触外来化合物之后所引起的中毒效应，甚至引起死亡。
但须指出化合物使实验动物发生中毒效应的快慢和剧烈的 程度，可因所接触的化合物的质与量不同而异。有的化合物在实验动物接触致死剂量的几分钟之内，就可发生中毒症状，甚至死亡。而有的化合物则在几天后才显现中毒症状和死亡，即迟发死亡。此外，实验动物接触化合物的方式或途径不同，“一次”的 含义也有所不同。凡经口接触和各种方式的注射接触，“一次” 是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内。而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次”是指在一个特定的期间内实验动物持续 地接触受试化合物的过程，所以“一次”含有时间因素。 以上就是关于急性毒性试验的内容介绍，希望通过这些介绍，每个人对这些常识，都有一定的认识和了解，虽然说很多时候在生活当中，我们运用不到，但是毕竟对这种常识有一定的了解，对自己身体的保护，也是比较有利的。
急性毒性试验 (-)经典的急性致死性毒性试验 通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50) 1、实验动物 常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50；如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。 2、染毒剂量设计 首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按几何级数)染毒，找出找出10%、90% (或0%~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1)或：i=(lgLD100-lgLD0)/ (n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n为设计的剂量组数。 有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。 3、观察 染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50o在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。 观察内容包括： (1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。 (2)动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。 (3)中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、 循环、自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、 惊厥、腹泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或 竖毛。 (4)病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进 行组织病理学检查。 4、LD50计算 (1)霍恩氏法 (2)简化寇氏法 M=X - i (S p - 0. 5) 式中:m―logLD50, X—最高剂量组剂量对数值，
?综述? 慢性毒性试验最新研究进展△ 黎运西1,2,金小宝2,曾爱华2,苏小茹3,朱家勇2 (11佛山市顺德第一人民医院检验科,广东佛山528300;21广东药学院基础学院病原生物研究所,广东广州510006; 31广州中医药大学实验动物中心,广东广州510006) 摘要:为了优化慢性毒性试验的研究方法与方案,更好地评价临床新药安全性,提高慢性毒性试验结果与临床试验的符合率,本文就实验模型动物的选择、检测方法、结果评价等方面的最新研究进展以及应该注意的问题进行综述,以总结如何提高实验可靠性和效率的方法与方案,使慢性毒性试验的研究结果更加符合药物的临床试验结果。 关键词:慢性毒性试验;药物研究;临床前研究学科分类代码:350 中图分类号:R96512 文献标识码:A 文章编号:1004-5775(2009)08-0583-04 △基金项目:广东省产业技术研究与开发项目, 2008B080703065 作者简介:黎运西,男,汉族,副主任检验师,病原 生物学硕士研究生。 The Latest Advancement of Chronic Toxicity Tests LI Y un -xi ,J I N X iao -bao ,ZE NG Ai -hua ,et al 1 (Department of Clinical L aboratory ,The First People ’s Hospital of S hunde of Fushan City ,Fushan 528300,China )Abstract :This paper reviews the chronic toxicity tests in viv o and provides several Approaches to im proving concordance between animal toxicity test and clinical trial to av oid the error 1F or exam ple ,the animals should be reas onablely chosen in toxicological study 1M oreover ,the suitable methods and techniques for animal toxicity tests were als o should be cho 2sen 1At last ,the results of animal toxicity tests should be correctly avaluated 1Through these m othods ,the accordance between the chronic tests and clinical trials could be maintained 1K ey w ords :Chronic toxicity test ;Drug study ;Preclinical study 慢性毒性试验等体内毒性试验已经被广泛应用于新药开发领域,但还存在很多问题,如动物的浪费严重、动物模型之间的差异;一些毒理学试验方法的不完善之处;在毒理学结果的安全性评价中,分不清有害效应和非有害效应;由于动物与人类的基因差异性所致的对毒性反应的差异而造成的错误评价等。这些问题影响了动物毒性试验的准确率与效率。因此,必须应用一系列的技术去克服这些问题。本文综述了慢性毒性试验的一些方法,并提出如何应用新技术提高慢性毒性试验的准确率与效率,使其更加符合临床试验的结果并提高动物的利用率。 首先,是在慢性毒性试验中选择合适类型和数量的动物;其次,是选择合适的检测方法及技巧;最后,对毒理学动物实验结果进行合理而科学的综合性安全评价。通过这些方法,提高慢性毒性试验的可靠性与效率。1 实验动物类型及其数量的确定更加严格111 动物数量的确定 随着欧盟号召取消短期的动物体内毒性试验,为了更符合人道主义和减少动物浪费,应尽更大的 努力去减少实验动物的数量〔1〕 。但要用体外试验取代动物毒性试验,目前尚未成熟。本文认为,发展完善地取代动物试验的毒理学试验技术,才是根本的出路。而弄清毒性作用的靶点的细胞或分子机制,才能做到有的放矢。但目前还要用有限的动物试验去证实体外试验的可行性。当前,可以改进的是在许可的情况下减少动物使用数量。例如,借 鉴急性毒性试验的方法〔2〕 ,先用1个剂量受试物去试,再根据这个剂量的结果增或减剂量做其它剂量组。因为这样可减少动物方面的研究开支。112 选择符合实验要求的遗传背景一致的动物 由于对化合物的耐受性不同,因而从相同剂量耐受性分析可以显示不同的个体对化合物的敏感 性不同〔3〕 。另外,测试动物基因型会影响代谢、生物利用率和靶器官的敏感性;株或表型则会决定免
几种经典毒性试验的应用 1.寇氏法和改良寇氏法 论文题目：《沙冬青种子总黄酮对小鼠急性毒性作用研究》 论文作者：陈慧，宁明刚，刘宇，梁剑平，何玉琴，贾宁 摘要：研究沙冬青种子总黄酮对小鼠的急性毒性作用，并测定沙冬青种子总黄酮单次给药的半数致死剂量（LD 50 ）或最大耐受剂量（MTD）。将70只体质量为（20±2）g的SPF级KM小鼠随机分成7组，雌雄各半，每组每只小鼠分别灌胃0.4ml的无菌生理盐水（对照组）及相同体积、不同浓度沙冬青种子总黄酮溶液，灌胃后7d内仔细观察小鼠的反应，观察并记录小鼠中毒症状和死亡数，利 用改良寇氏法测定该总黄酮的LD 50 。试验结束后记录各组小鼠的体质量变化，进行病理剖检，同时每组随机取2只小鼠（雌雄各1只），分别采取心脏、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏等进行病理组织学检查。结果表明：沙冬青种子总黄酮对小 鼠的LD 50为2004.47mg/kg，LD 50 的 95%可信限为1693.78~2372.47mg/kg。死亡小 鼠急性毒性主要表现为安静少动，即而出现走路不稳、腹卧昏睡、呼吸急促、连 续性抽搐而死亡。说明小鼠在沙冬青种子总黄酮中毒后，心脏、肝脏、脾脏和肾脏等主要器官都受到一定程度的损害，但对小鼠的持续影响较小；沙冬青种子总黄酮毒性较低，符合低毒化合物标准（500~5000mg/kg为低毒化合物）。 实验结论：沙冬青总黄酮的毒性总体上很低，临床用药安全性高。但并不代表沙冬青总黄酮没有毒性，剂量过高或不合理用药同样会产生不利影响。为全面掌握沙冬青总黄酮的毒性资料，以更好地为药效学试验的剂量设计及临床拟定安全剂量提供参考，有必要进一步深入进行沙冬青总黄酮的亚急性毒性研究和长期毒性及器官毒性研究。 论文出处：甘肃农业大学学报2013年6月第48卷第3期 2.概率单位——对数图解法 论文题目：《利用概率单位法估算EC 50 的研究》 论文作者：赵劲松，于书霞 摘要：以两组典型毒性数据为例，综合比较了5种常见概率单位模型计算程 序在EC 50 估算上的差异，并在此基础上比较了3种不同置信区间的估算方法，在
急性慢性和亚慢性毒性实 验 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
急性毒性试验 （一）经典的急性致死性毒性试验 通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量—反应关系并求得LD50（LC50） 1、实验动物 常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50；如果试验是为畸形试验做剂量准备，也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。 2、染毒剂量设计 首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔（一般按几何级数）染毒，找出找出10%~90%（或0％~100％）的致死剂量范围，然后在这个剂量范围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10)／(n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0)／(n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n为设计的剂量组数。 有的毒性较小，此时可不再求其LD50，而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时，一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg（体
实验室最危险的17种物质慢性毒性，最易忽视~身体是革命的本钱呐！！！！！！！！！！！！！！ 分享分享是一种美德关闭 各位兄弟姐妹们务必小心 1.DMSO： DMSO是二甲基亚砜，用途广泛。用作乙炔、芳烃、二氧化硫及其他气体的溶剂以及腈纶纤维纺丝溶剂。是一种即溶于水又溶于有机溶剂的极为重要的非质子极性溶剂。对皮肤有极强的渗透性，有助于药物向人体渗透。也可作为农药的添加剂。也是一种十分重要的化学试剂。 DMSO也是一种渗透性保护剂，能够降低细胞冰点，减少冰晶的形成，减轻自由基对细胞损害，改变生物膜对电解质、药物、毒物和代谢产物的通透性。 但是研究表明，DMSO存在严重的毒性作用，与蛋白质疏水集团发生作用，导致蛋白质变性,具有血管毒性和肝肾毒性。 DMSO是毒性比较强的东西，用的时候要避免其挥发，要准备1%-5%的氨水备用，皮肤沾上之后要用大量的水洗以及稀氨水洗涤. 最为常见的为恶心、呕吐、皮疹及在皮肤、和呼出的气体中发出大蒜、洋葱、牡蛎味。 吸入：高挥发浓度可能导致头痛，晕眩和镇静。 皮肤：能够灼伤皮肤并使皮肤有刺痛感，如同所见的皮疹及水泡一样。若二甲基亚砜与含水的皮肤接触会产生热反应。要避免接触含有毒性原料或物质的二甲基亚砜溶液，因其毒性不为人所知，而二甲基亚砜却可能会渗入肌肤，在一定条件下会将有毒物质代入肌肤。 吸收：吸收危险性很低。 2.EB：EB（Ethidium bromide，溴化乙锭） 溴化乙锭是一种高度灵敏的荧光染色剂，用于观察琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶中的DNA。溴化乙锭用标准302nm 紫外光透射仪激发并放射出橙红色信号，观察琼脂糖凝胶中DNA最常用的方法是利用荧光染料溴化乙锭进行染色，溴化乙锭含有一个可以嵌入DNA堆积碱基之间的一个三环平面基团。它与DNA的结合几乎没有碱基序列特异性。在高离子强度的饱和溶液中，大约每2.5个碱基插入一个溴化乙锭分子。当染料分子插入后，其平面基团与螺旋的轴线垂直并通过范德华力与上下碱基相互作用。这个基团的固定位置及其与碱基的密切接近，导致与DNA结合的染料呈现荧光，其荧光产率比游离溶液中染料有所增加。DNA吸收254nm处的紫外辐射并传递给染料，而被结合的染料本身吸收302nm和366nm的光辐射。这两种情况下，被吸收的能量在可见光谱红橙区的590nm处重新发射出来。由于溴化乙锭-DNA复合物的荧光产率比没有结合DNA的染料高出20-30倍，所以当凝胶中含有游离的溴化乙锭（0.5ug/ml）时，可以检测到少至10ng的NDA条带。溴化乙锭可以嵌入碱基分子中，导致错配。溴化乙锭是强诱变剂，具有高致癌性！会在60－70度是蒸发（所以最好不要在胶太热的时候加，或者
硫酸铜亚慢性经口毒性实验设计 一、实验目的 通过该实验不仅可获得一定时期内反复接触受试物后引起的健康效应、受试物作用靶器官和受试物体内蓄积能力资料，并可估计接触的无有害作用水平，后者可用于选择和确定慢性实验的接触水平和初步计算人群接触的安全性水平。 二、实验原理 1.亚慢性毒性实验：是指在实验动物部分生存期内，每日反复经口接触受试物后所引起的不良反应。 2.无有害作用水平（No-adverse-effect level）：是指在实验中不引起任何有害作用的最大染毒剂量，可用每日单位动物体重接触受试物的重量(mg/kg)表示。 三、实验仪器及试剂 实验试剂：3%-5%苦味酸、0.5%酸性品红、蒸馏水、无水硫酸铜、水、动物饲料 实验动物：健康、6-8周大鼠（80只） 实验仪器：灌胃针（16号）、电子天平、动物体重秤、饲养室、烧杯、容量瓶、吸量管、吸耳球、胶头滴管、手术剪、托盘、镊子、药匙等 四、实验步骤 1. 实验动物的选择：选择80只6-8周，体重在50-100g的健康大鼠，大鼠体重相差不超过10%（±5-10g）。 2. 实验管理：实验前动物先适应环境和饲料5天。适应期间和实验期间雌雄分笼饲养，所有动物通过灌胃的方式进行染毒，每周染毒7天，连续染毒90天。 3. 实验条件：饲养室温度控制在22±4℃，相对湿度在40%-70%之间，无对流风，昼夜各半。实验期间正常饲料喂养，饮水不限。 4. 实验动物染色和分组 1）抓取大鼠：抓取大鼠前最好戴上防护手套。进行染色时，可采取左手固定法，只是用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏大鼠背部皮肤，这样便可进行各种简单的实验操作；也可以用左手食指和中指放在颈背部的两侧，拇指和无名指放在胸前，分别用手指夹住左右前肢抓起来。 Tips：辨认大鼠的雌雄：观察生殖器与肛之问的距离，雌性较雄性近具沟；观察生殖突起，雄性较大、较圆，雌性较小具裂缝；仰卧观察乳头，雄性不明显，雌性明显。 2）染色编号：用黄色3%-5%苦味酸0.5%酸性品红对动物进行染色标记，黄色和红色分别代表个位和十位。大鼠分为左、中、右三区，左上区、左中部和左下肢分别表示1、2、3或者10、20、30，如图1。
名词解释编辑 急性毒性试验是指一次或24小时内多次染毒的试验，是毒性研究的第一步。 要求采用啮齿类或非啮齿类两种动物。通常为小鼠或大鼠采用经口、吸入或经皮染毒途径。急性毒性试验主要测定半数致死量（浓度），观察急性中毒表现，经皮肤吸收能力以及对皮肤、粘膜和眼有无局部刺激作用等，以提供受试物质的急性毒性资料，确定毒作用方式、中毒反应，并为亚急性和慢性毒性试验的观察指标及剂量分组提供参考。 2概述及染毒方法编辑 一、概念和试验目的 (一) 急性毒性概念 急性毒性是指机体(人或实验动物)一次(或24小时内多次)接触外来化合物之后所引起的中毒效应，甚至引起死亡。 但须指出化合物使实验动物发生中毒效应的快慢和剧烈的程度，可因所接触的化合物的质与量不同而异。有的化合物在实验动物接触致死剂量的几分钟之内，就可发生中毒症状，甚至死亡。而有的化合物则在几天后才显现中毒症状和死亡，即迟发死亡。此外，实验动物接触化合物的方式或途径不同，“一次”的含义也有所不同。凡经口接触和各种方式的注射接触，“一次”是指在瞬间将受试化合物输入实验动物的体内。而经呼吸道吸入与经皮肤接触，“一次”是指在一个特定的期间内实验动物持续地接触受试化合物的过程，所以“一次”含有时间因素。 (二) 实验目的 1.求出受试化合物对一种或几种实验动物的致死剂量(通常以LD50为主要 参数)，以初步估计该化合物对人类毒害的危险性。 2.阐明受试化合物急性毒性的剂量－反应关系与中毒特征。 3.利用急性毒性试验方法研究化合物在机体内的生物转运和生物转化过程 及其动力学变化。也可用于研究急救治疗措施。 二、实验动物和染毒方法 (一) 实验动物选择 在卫生毒理学领域中，体内试验以实验动物为研究对象，最终是为了阐明受试外来化合物对人的急性危害性质和危害强度。所以选择实验动物时，要求在其接触化合物之后的毒性反应，应当与人接触该化合物的毒性反应基本一致，虽然利用任何一种或几种实验动物的急性毒性结果向人外推都必须十分慎重，但这一选择实验动物的原则仍非常重要。 1.物种选择以选择哺乳动物为主。目前实际应用中以大鼠和小鼠为主，尤以 大鼠使用很多。需指出大鼠并非对外来化合物都最敏丅感。家兔常用于研究化合物的皮肤毒性，包括对粘膜的刺激。猫、狗也用于急性毒性试验，但因价贵不易于大量使用。猪为杂食动物，对一些化合物的生物效应表现与人有相似之处，尤其是皮肤结构与人较近似。但因体大、价贵，不便大量使用。 归纳起来，在进行化合物急性毒性研究中，选择实验动物的原则是：尽量选择对化合物毒性反应与人近似的动物；易于饲养管理，试验操作方便；易于获得、品系纯化，且价格较低的动物。为了有利于预测化合物对人的危害，要求选择两
兽药慢性毒性和致癌试验指导原则 一、概述 （一）定义与目的 慢性毒性和致癌试验是预测药物在临床应用中诱发癌症危险性的评价方法。在动物的大部分生命期间，经过反复给予受试药物后观察其呈现的慢性毒性作用及其剂量－反应关系，尤其是进行性和不可逆毒性作用及肿瘤疾患。确定受试药物的无作用剂量(NOEL)，作为最终评定受试药物能否应用于动物尤其是食品动物的依据。 为了确保慢性毒性和致癌试验结果的真实性、可靠性和可追溯性，根据新兽药研究的规律，结合国内兽药毒理学评价的实际情况制定了本指导原则。（二）适用范围 本指导原则适用于评价兽用化学药品、中兽药、消毒剂及饲料药物添加剂对动物的慢性毒性和/或致癌性的测定。 长期毒性试验发现有可疑肿瘤发生，某些器官组织细胞异常、药物结果与已知致癌物有关或代谢物与已知致癌物有关、作用机制为细胞毒类等情况下，要求进行致癌试验。 二、试验设计 （一）材料与方法 1.实验动物 （1）实验动物种类选择 一般要求选用两个种属的实验动物，即啮齿类和非啮齿类，目前已掌握大白鼠和小白鼠各品系的特点及诱发肿瘤的敏感性，故可优先将其用于慢性毒性和致癌试验。对活性不明的受试药物，则应选用两种性别的啮齿类和非啮齿类动物。 （2）动物的起始周龄和体重
慢性毒性试验期长，故一般用刚断乳的大鼠或小鼠。大鼠50～70g（出生3～4周），小鼠10～15g（出生3周）。动物个体体重的变动范围不超出各性别平均体重的20%。 （3）动物的性别和数量 每个剂量组的动物数应满足试验结束时进行统计学处理的要求，如大鼠40～60只（小鼠数应据此适当增加），一般雌雄各半，雌鼠应为非经产鼠、非孕鼠。如果将慢性毒性试验与致癌试验结合进行，每组雌雄动物数均应在50只以上。如计划在试验过程中定期剖杀动物，则动物数应相应增加。 （4）肿瘤自发率 实验动物的自然肿瘤发生率原则是控制到越低越好，但试验结果评价时主要是以在相同条件下观察对照组与各剂量组的肿瘤发生率及其剂量-反应关系作为判定依据。 2.受试药物 应与其他做非临床和临床试验的兽药为同批次产品。 3.仪器设备 一般生理生化和剖检仪器。 （二）试验步骤 1.剂量组设计 设3～5剂量组和一个对照组。高剂量组根据90天喂养试验确定，一般应引起一些毒性表现或损害作用，但不引起太多动物死亡；低剂量组不引起任何毒性作用；在高剂量和低剂量之间再设1～3剂量组，剂量可按几何级数或其他规律划分。对照组除了不给予受试药物外，其他各方面都应与试验组相同。如果受试药物使用了某种毒性不明的介质，则应同时设未处理对照和介质对照。 2.给药方法 经口给药，可加入饲料、饮水中或灌胃。如果受试药物是灌胃给药，应每周称体重两次，根据体重计算给予受试药物的量。 3.受试药物的配制及存放 （1）一般用蒸馏水作溶剂，如受试药物不溶于水，可用食用植物油、医用淀粉、羧甲基纤维素等配成乳浊液或悬浊液。受试药物应于灌胃前新鲜配制，除非有资料表明以溶液（或乳浊液、悬浊液）保存具有稳定性。同时应考虑使用的
茶多酚毒理学试验及其评价方案 摘要：本文为茶多酚急性毒性试验、蓄积性试验和致突变试验的方案。确定大鼠口服LD50，毒性强弱，是否可作为食品添加剂，及其添加用量。 关键字：茶多酚、L—EGCG、急性毒性试验、蓄积性试验、致突变试验 茶多酚（Tea Polyphenols）是茶叶中多酚类物质的总称。研究表明，茶多酚等活性物质具解毒和抗辐射作用，能有效地阻止放射性物质侵入骨髓，并可使锶90和钴60迅速排出体外，被健康及医学界誉为“辐射克星”。为了使作为天然抗氧化剂广泛应用于食品和医药等产品中, 必须探讨T P 的安全性.。本文对T P 进行了毒性试验及遗传毒理试验外, 还增加了某些亚急性毒性试验及慢性毒性试验。 1 材料 1.1受试物: TP, 淡棕色粉剂, 由桂林实力天然食品有限公司提供，密闭干燥 保存, 临用时以生理盐水溶解配制成溶液。 1.2实验动物:昆明种小白鼠,体重(20±2) g。Wistar大白鼠, 5周龄,体重(105±25) g。 1.3仪器: 日立7170A 生化全自动分析仪(日本日立公司) ,AC920 血球全自动 分析仪(瑞典)。 2 方法 2.1大鼠急性经口毒性试验(改良寇氏法)： 2.1.1大鼠急性毒性预试验: 按卫生部卫法监发(2003)42号文5《保健食品安全性毒理学评价程序和检验方法规范》及所附小鼠、大鼠。选取体重为(200±20) g 的雄性白鼠24只,按体重随机分为4 组, 每组6只, 禁食12 h 后,按0.2ml/10 g 一次性灌胃给药, 给药剂量分别为4.5、 3.0、2.5、1.8 g/kg。给药后观察14 d白鼠死亡数及死亡分布情。 2.1.2 LD50测定: 根据预试验结果, 确定100%的死亡剂量为LD100, 0% 的死亡剂量为LD0, 100%致死和100%存活量之间设5个剂量,根据i=(lgLD100-lgLD0)/(n-1)确定组距。选取体重为(20±2) g大鼠50只,按体重随机分为5组, 每组10 只, 禁食12 h 后, 各组按0.2ml/10 g 一次性灌胃给药, 观察14 d 死亡情况。根据Karber法，确定大鼠经口LD50值。 2.2小鼠急性经口毒性试验： 2.1.2 LD50测定(改良寇氏法) : 根据大鼠LD50值，设置4种给药剂量，选取体重为(20±2) g 雄性小白鼠24 只,按体重随机分为4 组, 每组6 只, 禁食12 h 后, 各组按0.2ml/10 g 一次性灌胃给药, 观察14d 死亡情况。根据Karber法，确定小鼠经口LD50值。
中药急性毒性实验简介 动物急性毒性实验研究目的：阐明药物的毒性作用；了解其毒性靶器官；长期毒性实验剂量参考；药效学研究的剂量的设计依据；临床实验起始剂量的参考 受试物： 用于申报新药的受试物应采用制备工艺稳定，符合临床试验用质量标准规定的中试样品。 如果由于给药容量或给药方法限制，可以采用原料药进行试验。 实验动物： 通常采用哺乳动物进行实验； 通常选用雌雄各半（临床为单性别用药除外）； 年龄和体重：一般采用健康成年动物（如临床拟用于儿童，采用幼年动物）； 初始体重不应偏离平均体重的20%。 给药途径： 可采用不同给药途径，但其中包括与拟临床给药途径一致的给药途径。 经口给药时必须禁食不禁水过夜。 给药容量： 小鼠一次不超过40ml/kg，大鼠一次给药容量不超过20ml/kg。 观察期限 一般为14天，如果毒性反应较慢应延长观察时间。 观察指标 动物体重变化，饮食，外观，行为，分泌物，排泄物，死亡情况，中毒反应等。 对死亡动物应及时进行大体解剖，器官异常时进行组织病理学检查。 结果处理和分析 根据所观察到的各种反应出现的时间、严重程度、持续时间等，分析各种反应在不同剂量时的反应率、反应程度。 判断出可能涉及的组织、器官和系统以及毒性靶器官等。 根据急性毒性实验结果，结合其他安全性实验、有效性实验等，分析其开发前景。 通常测定的毒性剂量 最大给药量，最大无毒剂量，最大耐受量，致死量（LD50，LD5）等。 通常测定的毒性反应剂量： 最大给药量： 单次或24h内2-3次（间隔4-6h一次）给予的最大给药剂量（合理的最大给药浓度，最大给药容量），观察动物出现的反应。 中药及复方制剂急性毒性研究中常用。
急性毒性试验 (一)经典的急性致死性毒性试验 通过试验得到化合物引起动物死亡的剂量一反应关系并求得LD50 ( LC50) 1、实验动物 常用的实验动物是小鼠或大鼠。一般受试动物应是雌、雄各半；若雌、雄动物对待测化学物 毒性的敏感程度有明差异，则应分别求出各自的LD50;如果试验是为畸形试验做剂量准备， 也可仅做雌性动物的LD50试验。小动物每组10只，狗等大动物可每组6只。 2、染毒剂量设计 首先要了解化学毒物的结构式、分子量、常温常压下的状态、纯度、杂质成分与含量、溶解 度、挥发度、PH等理化性质。对于新的受试化学物，找出与受试化学毒物结构与理化性质 近似的化学物的毒性资料，并以文献资料中相同的动物种系和相同接触途径所测得的 LD50(LC50)值作为受试化学物的预期毒性中值，先用少量动物，以较大的剂量间隔(一般按 几何级数)染毒，找出找出10%~90%(或0% ~100%)的致死剂量范围，然后在这个剂量范 围内设几个剂量组。改良寇氏法最好设5个剂量组，每组10只动物，雌雄各半，剂量组要 求以等比级数设置。根据以下公式计算出剂量分组： i=(lgLD90-lgLD10) / (n-1) 或：i=(lgLD100-lgLD0) / (n-1) 式中i为组距(相邻的两个剂量组对数剂量之差)； n 为设计的剂量组数。 有的毒性较小，此时可不再求其LD50,而应进行限量试验。在用大鼠或小鼠进行试验时， 一般用20只动物，雌雄各半。单次染毒剂量一般限定为5g/kg (体重)，对于食品毒理学试验，限量要求为15g/kg (体重)。如果实验动物无死亡或仅有个别动物死亡(死亡率低于50%), 则可得出LD50大于限量的结论。 3、观察 染毒后一般要求观察14天，依据14天内动物的总死亡情况计算LD50。在实际工作中，依据受试物有关测试规程要求确定观察期的长短。 观察内容包括： (1)动物死亡情况：包括动物死亡数及各自的死亡时间。 (2)动物体重：于染毒前、染毒后每周和死亡时测定体重。 (3)中毒反应症状：临床观察每天至少一次，观察皮肤、被毛、眼睛和粘膜改变，呼吸、循环、 自主和中枢神经系统以及四肢活动和行为方式的变化等，特别要注意有无震颤、惊厥、腹 泻、嗜睡等现象。神经毒性：惊厥、共济失调和死亡。植物神经兴奋：腹泻或竖毛。 (4)病理学检查：解剖进行尸检，观察各器官有无改变，对肉眼观察有变化的脏器需进 行组织病理学检查。 4、LD50计算 (1)霍恩氏法 (2)简化寇氏法 M = X - i(工p - 0.5) 式中：m —log LD50, X —最高剂量组剂量对数值， p —死亡率(用小数表示)， 工p—死亡率总和， i —相邻两组剂量对数之差。