实验一微生物的形态和结构观察
一、实验目的
1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法；
2、掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤；
3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等的个体形态和结构。
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二、基本原理
普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。
普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。
机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。镜座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台，是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本，标本移动器可使标本前后和左右移动，有的标本移动器带有游标尺，
可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位；镜筒是连接目镜和物镜的金属筒，镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接；物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适的物镜；调节器安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过调节粗、细螺旋便可清晰地观察到标本。
光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜和反光镜等，较好的显微镜有内光源。目镜一般由两块透镜组成，不同的目镜上刻有5×、10×和15×等字符以表示该目镜的放大倍数；物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成，根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜（4×、10×和20×）、高倍物镜（40×和45×）和油镜（90×、95×和100×）等。被检物体经显微镜的目镜和物镜放大后的总放大倍数是物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。
形态观察主要包括群体形态和个体形态观察两方面。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为简单染色、鉴别染色和特殊染色。本实验主要观察微生物的个体形态，掌握在细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法——革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。
革兰氏染色有着重要的理论与实践意义，其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。
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三、仪器和药品
仪器：显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯药品：结晶紫95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌（培养18~24小时的斜面菌种）细菌酵母菌等标本片。
草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫2.0g，95%乙醇20mL；B液草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。将A和B充分溶解后混合静止24小时过滤使用。
革氏染液：碘1g ，碘化钾2g ，蒸馏水300mL。
蕃红染液：%蕃红的乙醇溶液10mL，蒸馏水100mL混合过滤。
脱色液：95%乙醇。
…
四、实验步骤
（一）、显微镜的使用
1、标本放置
下降镜台或升高镜筒，把标本片置镜台上，用载玻片夹夹牢。
2、调焦
转动粗调节螺旋，升高镜台或下降镜筒，使低倍物镜的前端接近载玻片，在物镜上观察，可看到物像，然后转动细调节螺旋，使物像清晰。
3、使用油镜
用低倍镜看到物像后，选择合适的视野，并把要观察的部位置于视野的中央；把孔径光阑开到最大，使与油镜的数值口径相匹配，选择合适的照明；转动粗调节螺旋，使镜台下降或镜筒上升，在染色标本处滴加1~2滴镜油，转动物镜转换器，把油镜置镜筒下方；转动粗调节螺旋，使镜台上升或镜筒下降，让镜头的前端浸入镜油中。操作时要从侧面仔细观察，只能让镜头浸入镜油中紧贴着标本而避免让镜头撞击载玻片，导致玻片和镜头损坏；然后在目镜下进行观察，并缓慢地转动粗调节螺旋，使镜台下降或镜筒上升即可看到物像，再转动细调节螺旋使物像清晰。
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转动粗调节螺旋，使镜台下降或镜筒上升时，若油镜已离开油滴，必须重新进行上述操作；不得边在目镜上观察，边转动粗调节螺旋，使镜台上升或镜筒下降使镜头前端浸入油滴中，否则易使镜头撞击载玻片，损坏标本和镜头。
4、显微镜使用后的处置
观察结束后，转动粗调节螺旋使镜台下降或镜筒上升，取出染色标本片，然后先用擦镜纸擦去油镜上的镜油，再用擦镜纸沾少许二甲苯擦去粘在油镜上的镜油，最后用擦镜纸擦净二甲苯；把镜头转成“八”字形，套入镜罩后放入显微镜柜中。
（二）革兰氏染色
1、涂片
取洁净的载玻片一张，将其在火焰上微微加热，除去上面的油脂，冷却，在中央部位
滴加一小滴无菌水，用接种环在火焰旁从培养24小时的斜面上挑取少量菌体与水混合；烧去环上多余的菌体后，再用接种环将菌体涂成直径约1cm的均匀薄层。制片是染色的关键，载玻片要洁净，不得沾污油脂，菌体才能涂布均匀。注意初次涂片，取菌量不应过大，以免造成菌体重叠。
2、干燥
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涂布后，待其自然干燥。
3、固定
将已干燥的涂片标本面向上，在微火上通过3~4次进行固定。固定作用为杀死细菌，使蛋白质凝固，菌体牢固粘附于载玻片上，染色时不被染液或水冲掉，增加菌体对染料的结合力，使涂片易着色。
4、染色
在涂片处滴加草酸铵结晶紫染液1~2滴，使其布满涂菌部分，染色1分钟。斜置载玻片，倾去染液后用水轻轻冲去染液至流水变清。注意水流不得直接冲在涂菌处，以免将菌体冲掉。
5、媒染
滴加革氏碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟，用水冲去碘液。
6、乙醇脱色
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斜置载玻片于一烧杯上，滴加95%乙醇，轻轻摇动载玻片，至乙醇液不呈现紫色时停止（约分钟）；立即用水冲净乙醇并用滤纸轻轻吸干。脱色是革兰氏染色的关键，必须严格掌握乙醇的脱色程度。若脱色过度则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时阴性菌被误染为阳性菌。
7、复染
蕃红染液复染1分钟后水洗。
8、吸干并镜检
用滤纸轻轻吸干载玻片上的水分，干燥后镜检。在研究工作中要确证未知菌的革兰氏反应时，则需要同时用已知菌进行染色作为对照。
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五、实验结果
1、描述所观察微生物的特征；
2、绘出所观察微生物的形态图；
3、记录革兰氏染色结果，分辨出革兰氏阳性菌或阴性菌；如果染色结果不理想，分析原因。
六、讨论
1、为什么必须用培养24小时以内的菌体进行革兰氏染色
2、要得到正取的革兰氏染色结果，必须注意那些操作哪一步是关键步骤为什么
3、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠
第一节细菌 一形态 (一) 形状：基本形状 球状----球菌杆状---杆菌螺旋状----螺旋菌 1.球菌 基本形状：圆球形、扁圆球形、椭圆球形 种类(依子细胞的空间排列方式分)： 单球菌一个方向分裂子细胞分散 双球菌一个方向分裂子细胞成对排列 链球菌一个方向分裂子细胞链状排列 四联球菌二个方向分裂，子细胞田字形排列 八叠球菌三个方向分裂，子细胞立方形排列 葡萄球菌多个方向分裂，子细胞葡萄状排列 2.杆菌 基本形状 杆状 圆柱状 同一种杆菌宽度比较稳定，长度易变 种类 与工农业生产关系密切 大多数杆菌菌体分散存在，如鼠疫巴氏杆菌、大肠杆菌、麻风杆菌、痢疾志贺氏菌 有些呈链状排列、栅状排列、八字形排列，如苏云金杆菌。 3.螺旋菌 基本形状 弯曲杆状 包括 o弧菌菌体弯曲呈弧形或逗号形，如霍乱弧菌 o螺旋菌菌体回转如螺旋状，如红螺菌 (二)大小 单位 微米 1mm=1000μm 球菌大小以直径表示:0.5-2.0微米 杆菌宽度与球菌相似，长度:0.2-8.0微米 螺旋菌大小以菌体两端点间距离表示 (三)影响细菌形状和大小的因素
菌龄 环境条件 o环境条件适宜的幼龄菌，表现正常的大小和形态 o环境温度偏高、营养条件失调的老龄菌，菌体萎缩 二、细菌的细胞结构 所有的细菌都有共同的基本结构 细胞壁 o原生质体（细胞膜、细胞质、原核） 某些细菌有特殊结构 o如鞭毛、荚膜、芽孢等 （一）基本结构 1．细胞壁 ·功能 a)维持细胞外形 b)保护原生质体，在渗透压不宜的环境中保持生命力 Gram staining 1884年丹麦医生C.Gram 涂片→结晶紫初染（紫色）→碘液处理→乙醇脱色→复红复染（红色） 除支原体、螺旋体、细菌L型外，所有原核生物均有细胞壁，可区分为Gram阳性或阴性菌，两者在化学组成及细胞壁结构上差异显著 可能原理 结晶紫-碘复合物 o阳性菌壁厚，肽聚糖含量高，结构紧密，含脂量少;酒精脱色，肽聚糖不溶于酒精，紫色不褪，复染不能进行 o阴性菌相反 肽聚糖是原核生物细胞壁特有的化学组成，青霉素等能破坏其结构或抑制其合成 2．细胞膜(细胞质膜) 功能 a)物质转运与营养作用，渗透屏障 b)呼吸作用与生物合成作用中心 化学组成 蛋白质 60-70% 磷脂 20-30% 多糖 2%
实验一微生物的形态和结构观察 一、实验目的 1、掌握普通光学显微镜的正确使用方法； 2、掌握革兰氏染色法的原理及操作步骤； 3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等的个体形态和结构。 二、基本原理 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 普通光学显微镜是由一组光学系统和支持及调节光学系统的机械系统组成。 机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。镜座是显微镜的基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台，是放置标本的地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本，标本移动器可使标本前后和左右移动，有的标本移动器带有游标尺，可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也是移动显微镜时手握的部位；镜筒是连接目镜
和物镜的金属筒，镜筒上端插入目镜，下端与物镜转换器相接；物镜转换器安装在镜筒的下端，其上装有3~5个不同放大倍数的物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适的物镜；调节器安装在镜臂基部，是调节物镜与被检标本距离的装置，通过调节粗、细螺旋便可清晰地观察到标本。 光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜和反光镜等，较好的显微镜有内光源。目镜一般由两块透镜组成，不同的目镜上刻有5×、10×和15×等字符以表示该目镜的放大倍数；物镜是显微镜中很重要的光学部件，由多块透镜组成，根据物镜的放大倍数和使用方法的不同，分为低倍物镜（4×、10×和20×）、高倍物镜（40×和45×）和油镜（90×、95×和100×）等。被检物体经显微镜的目镜和物镜放大后的总放大倍数是物镜的放大倍数和目镜放大倍数的乘积。 形态观察主要包括群体形态和个体形态观察两方面。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色，显示出细菌的一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。根据细菌个体形态观察的不同要求，可将染色分为简单染色、鉴别染色和特殊染色。本实验主要观察微生物的个体形态，掌握在细菌学中广泛使用的重要鉴别染色法——革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类。 革兰氏染色有着重要的理论与实践意义，其染色原理是利用细菌的细胞壁组成成分和结构的不同。革兰氏阳性菌的细胞壁肽聚糖层厚，交联而成的肽聚糖网状结构致密，经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成的大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，结晶紫与碘的复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。 三、仪器和药品 仪器：显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯药品：结晶紫95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌（培养18~24小时的斜面菌种）细菌酵母菌等标本片。 草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫2.0g，95%乙醇20mL；B液草酸铵0.8g，蒸馏水80mL。将A和B充分溶解后混合静止24小时过滤使用。 革氏染液：碘1g ，碘化钾2g ，蒸馏水300mL。 蕃红染液：2.5%蕃红的乙醇溶液10mL，蒸馏水100mL混合过滤。 脱色液：95%乙醇。
微生物实验 微生物实验 细菌形态观察 细菌分布 消毒灭菌
细菌形态观察 一、实验目的 1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护 2.掌握细菌的三种形态 3.掌握临床常见细菌的形态及染色 4.掌握细菌的特殊结构 5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点 二、实验原理 1. 普通光学显微镜（油镜）的使用 1. 在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头 2. 从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时 停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰 3. 根据需要调节显微镜亮度 2. 普通光学显微镜的维护 1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前 2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最 后，用干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头 3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内 4.做好使用记录 3．微生物知识 1．细菌按形态分类： 球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等） 杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等） 螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等） 2．细菌的基本结构 细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体 3．细菌的特殊结构 荚膜：如肺炎双球菌 鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌 菌毛 芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌 4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。 原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体 真核类：真菌、原生动物、显微藻类 非细胞类：病毒、亚病毒 5．真菌 单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
大理大学课程教案 （理论教学） 课程名称：微生物学与人类健康 课程类型：（ 2 ）1、必修；2、选修；3、其它 授课对象：非医学专业（本科）14/15 级 授课时间：2016 至2017 学年 1 学期 计划学时：24 学时（其中：理论24 ，实验：0 ）任课教师：武有聪、张雷 所属学院：基础医学院 课程管理部门（教研室）：医学微生物学及免疫学教研室 大理学院教务处
教材：人民卫生出版社出版（出版社），刘晶星编著，2013年第8版讲授人：武有聪专业技术职务：副教授 学历：研究生学位：博士学位 所属章节：第1-2章计划学时：3h 教学目的和要求： 1.掌握：细菌细胞壁的组成、功能；革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁的不同点及 意义；质粒的概念及其作用；核蛋白体的组成及意义；异染颗粒的意义；L-型细菌的概念及其意义；细菌的特殊结构及意义。细菌生长繁殖的条件及方式；根据细菌对氧需要的分类及细菌厌氧生长的原理；细菌合成代谢产物的种类及意义。 2.熟悉：细菌的大小与测量单位；细菌的基本形态；细菌的基本结构及功能；中介体 的概念；常见细菌生化反应的种类；细菌生化反应的概念及其在细菌鉴别上的意义； 细菌群体的生长繁殖规律。 教学重点及难点： 1.细菌的大小与形态 2.细菌的特殊结构（荚膜，鞭毛，菌毛，芽孢） 3.细菌的基本结构（细胞壁，细胞膜，细胞质） 教学方法：讲授为主、列表法、图示法 使用教具：多媒体 思考题： 1.细菌的基本结构有哪些它们各有什么作用 2.细菌的特殊结构有哪些它们各有什么作用 参考资料： 1.《医学微生物学》（第六版）周正任主编人民卫生出版社 2.《医学微生物学与免疫学》沈关心主编人民卫生出版社 3.《医学微生物学》中国协和医科大学、北京医科大学联合出版社
微生物实验报告：微生物 形态观察 The Standardization Office was revised on the afternoon of December 13, 2020
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有3种：球状，杆状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆菌、链杆菌等，是细菌中种类最多 的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的1至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬，且数量较多的丝状 体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。
3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材
实验报告课程名称：生命科学趣味实验 实验名称：微生物形态观察 指导教师： 一、实验目的： 1．掌握普通光学显微镜的原理、结构、各部分的功能和使用方法。 2．了解酵母菌、霉菌的个体形态特征。 二、实验原理： 显微镜成像原理：目镜、物镜各自相当于一个凸透镜，被检标本置于聚光器与物镜之间，即物镜下方1～2倍焦距之间，物镜可使标本在物镜的上方形成一个倒立放大实像（倒像），该实像正好位于目镜的下焦点（焦平面）之内，目镜进一步将它放大成一个虚像，通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处。 三、实验仪器、材料 酵母菌涂片、霉菌涂片。 奥林巴斯显微镜、擦镜纸等。 四、实验方法： 1 显微镜安置 取显微镜时一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳，置显微镜于平整实验台上，镜座距实验台边缘约3～4 cm，接通电源。 注意：显微镜移动时切忌用单手拎提。 2 选择物镜 将低倍物镜放入光路。 3 调整光强 打开显微镜主电源，调整照明度。通过亮度调整旋钮来改变电压大小从而调整显微镜亮度强弱。 4 调整聚光器位置和孔径光阑 在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，40倍），观察时将其与使用物镜相对应倍率放到正面。 5 放置标本 调粗调旋钮使载物台下降，向外拉开机械式载物台样本夹自前向后将标本切片放入平台，标本放稳后，再将标本夹轻轻放回原位；通过垂直旋转移动杆和水平旋转移动杆来上下和左右移动标本。
6 聚焦 ① 对焦要领为：从侧面看，转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近标本；一边看目镜，一边调粗调旋钮，使载物台下降；看到标本后，再用细调旋钮正确对焦。 ② 调整瞳距：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右视野一致。标识●的位置表示瞳距。 ③ 调整屈光度数：以右眼看右侧目镜，旋转粗、细调旋钮对好焦距；以左眼看左侧目镜，旋转屈光度调整环，对好焦距。 ④ 目镜眼罩使用方法：戴眼镜时候，将眼罩折叠，可防止眼镜和目镜接触所造成擦痕；不戴眼镜时候，将折叠眼罩向外拉长，可防止目镜和眼睛之间射入不必要光线，利于观察。 7 观察 在低倍镜找到合适目的菌将其移到视野中央。 8 高倍镜下观察 ① 转换高倍镜：眼睛从侧面注视物镜，用手转动转换器，换高倍镜。 ② 调焦：眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调旋钮，直至视野内看到清晰物像为止。一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦，转动物镜转换器将其它物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本的准焦状态，称为物镜同焦，利用物镜同焦，可以保证在使用高倍镜时仅用细调旋钮即可对物像清晰聚焦，从而避免使用粗调旋钮时可能误操作损坏镜头或载玻片。 9 绘图 10 显微镜用毕后处理 （1）下降载物台，取下标本。 (2) 用擦镜纸清洁物镜及目镜； (3) 将各部分还原：载物台下降到最低位置；聚光器下降到最低位置；物镜镜头呈∧型，使物镜处于非光路位置；关好电源，将显微镜主电源开关拨到电压值为最小状态，然后断开电源。 五、实验结果： 10× 霉菌涂片 六、实验讨论： 可写实验体会。
显微镜观察结果描述 化药1105刘佳兴110150139 摘要：微生物分为原核微生物和真核微生物，主要有细菌、真菌和病毒，本文主要介绍放线菌、蓝细菌支原体、立克次氏体、衣原体、酵母菌、病毒和霉菌。 关键词：形态，结构，功能 1、微生物的分类系统 这里仅简述原核微生物和真核微生物的分纲体系。 1.1原核生物界（Procaryotae） （1）光能营养原核生物门 Ⅰ蓝绿光合细菌纲（蓝细菌类）；Ⅱ红色光合细菌纲；Ⅲ绿色光合细菌纲 （2）化能营养原核生物门 Ⅰ细菌纲；Ⅱ立克次氏体纲；Ⅲ柔膜体纲；Ⅳ古细菌纲 1.2真核微生物（Eucaryotic microbes） 真菌可分以下四纲： Ⅰ藻状菌纲菌丝体无分隔，含多个核。有性繁殖形成卵孢子或接合孢子；Ⅱ子囊菌纲菌丝体有分隔，有性阶段形成子囊孢子；Ⅲ担子菌纲菌丝体有分隔，有性阶段形成担孢子； Ⅳ半知菌纲包括一切只发现无性世代未发现有性阶段的真菌。 粘菌也可分为四纲，即 Ⅰ网粘菌纲自细胞两端各自伸出长的粘丝并接连形成粘质的网络——假原质团；Ⅱ集胞粘菌纲分泌集胞粘菌素，形成假原质团；Ⅲ粘菌纲形成原质团，腐生性自由生活；Ⅳ根 2.1形态结构 DNA、核糖体、鞭毛、纤毛、荚膜、细胞壁、质膜
2.2基本形态 （1）球菌：按其排列方式又可分为单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌，葡萄球菌和链球菌。 （2）杆菌：细胞形态较复杂，有短杆状、棒杆状、梭状、月亮状、分枝状。 （3）螺旋状：可分为弧菌（螺旋不满一环）和螺菌（螺旋满2~6环，小的坚硬的螺旋状细菌）。此外，人们还发现星状和方形细菌。 3、古细菌 古细菌（archaeobacteria）（又可叫做古生菌或者古菌）是一类很特殊的细菌，多生活在极端的生态环境中。具有原核生物的某些特征，如无核膜及内膜系统；也有真核生物的特征，如以甲硫氨酸起始蛋白质的合成、核糖体对氯霉素不敏感、RNA聚合酶和真核细胞的相似、DNA具有内含子并结合组蛋白；此外还具有既不同于原核细胞也不同于真核细胞的特征，如：细胞膜中的脂类是不可皂化的；细胞壁不含肽聚糖，有的以蛋白质为主，有的含杂多糖，有的类似于肽聚糖，但都不含胞壁酸、D型氨基酸和二氨基庚二酸。 3.1与真细菌主要区别 1．形态学上，古细菌有扁平直角几何形状的细胞，而在真细菌中从未见过。 2．中间代谢上，古细菌有独特的辅酶。如产甲烷菌含有F420，F430和COM及B因数。3．有无内含子(introns)上，许多古细菌有内含子。 4．膜结构和成分上，古细菌膜含醚而不是酯，其中甘油以醚键连接长链碳氢化合物异戊二烯，而不是以酯键同脂肪酸相连。 5．呼吸类型上，严格厌氧是古细菌的主要呼吸类型。 6．代谢多样性上，古细菌单纯，不似真细菌那样多样性。 7．在分子可塑性(molecular plasticity)上，古细菌比真细菌有较多的变化。 8．在进化速率上，古细菌比真细菌缓慢，保留了较原始的特性。 4、放线菌 放线菌（Actinomycete）是原核生物的一个类群。因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。 4.1形态 大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.5～1微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1、巩固显微镜的使用方法，重点学习掌握油镜的使用方法。 2、观察并区别常见的细菌、放线菌和真菌菌落的基本形态特征和特殊结构。 3、学习微生物画图法，体会并展现微生物形态的美学价值。 二、实验原理（略） 三、实验器材 1、普通光学显微镜、镜油、镜头纸、擦镜液。 2、细菌装片：金黄色葡萄球菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、破 伤风梭菌、固氮菌、螺菌。 3、霉菌装片：黑根霉、曲霉、青霉、毛霉。 4、酵母菌装片：出芽酵母。 5、放线菌装片。 6、微生物单菌落划线平板：大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、泾阳链霉菌、青 霉、酵母菌。 四、实验步骤 1、显微镜的基本调节 用10×物镜对焦，安放标本，调节光亮度、焦距、瞳距和视度，找到要观察的区域；换40×物镜，用细准焦螺旋调焦。 2、霉菌的特征结构观察 用400×观察黑根酶、曲霉、毛霉装片、青霉装片，用1000×观察接合孢子装片。 3、放线菌的特征结构观察 用1000×观察放线菌装片。 4、细菌基本形态观察 （1）显微镜下观察金黄色葡萄球菌装片，注意菌体间关系。 （2）显微镜下观察枯草芽孢杆菌、大肠杆菌装片。 （3）显微镜下观察螺菌装片，注意菌体螺旋。 5、细菌特殊结构观察 （1）油镜下观察固氮菌装片，注意细菌荚膜。 （2）油镜下观察螺菌装片，注意鞭毛的染色，位置，数目，形态和大小； （3）用油镜观察苏云芽孢杆菌，巨大芽孢杆菌，枯草芽孢杆菌等，注意芽孢。 6、酵母菌的形态观察 观察出芽酵母形状和出芽方式、树枝状分支的假丝酵母的形状和大小。 7、微生物菌落观察 观察大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、泾阳链霉菌、青霉、酵母菌的菌落平板，
动物界 植物界 真菌界酵母菌、霉菌、担子菌微生物原生生物界单细胞藻类、原生动物 原核生物界细菌、放线菌、蓝细菌、 立克次体、支原体、衣原体 病毒界病毒 微生物的分类和鉴定的相关概念： 微生物的分类和鉴定离不开以下三步： ⑴获得该微生物的纯培养物 ⑵测定一系列鉴定指标 ⑶查找权威性鉴定手册 现代微生物分类方法的依据主要有： ⑴核酸分析 ⑵DNA杂交试验 ⑶细胞壁成分分析 ⑷红外光谱 微生物的分类单位依次为：界、门、纲、目、科、属、种。在科与属之间可加“族”。上述分类单位中以“种”概念的界定最为关键。
种的概念： 种是一个分类的基本单位。它是一大群表型特征高度相似、亲缘关系极其接近、与同属内其它种有着明显差异的菌株的总称。在微生物分类学中，一个种只能用该种内的一个典型菌株来作为具体标本，这个典型菌株就是该种的模式种。 变种是对种的进一步细分的单元。从自然界分离到某一微生物的纯种，必须与已知的典型种所记载的特征完全符合，才能鉴别为同一个种。有时分离到的纯种却有某一特征与典型菌种不相同，其余特征都相同，而且这一特征又是稳定的，我们称这一纯种为典型种的变种。 亚种与变种是近义词，两者经常混用。有时我们将实验室获得的变异型称为亚种或小种。 菌株表示任何一个独立分离的单细胞（或病毒粒子）繁殖而成的纯种群体及其一切后代，即同种微生物的每个不同来源的纯培养物。同一菌种的不同菌株间，作为分类鉴别的主要性状是相同的，但是非鉴别用的“小”性状可以有很大的差异，尤其是生化性状，如代谢产物的产量性状等。菌株实际上是某一微生物达到“遗传性纯”的标志。一旦某菌株发生自发突变或经诱变、杂交或其它方式发生遗传重组后，均应确定新的菌株名称。
实验五微生物菌落形态观察 1、本次实验的目的和要求 （1）观察细菌、酵母菌、霉菌三大类微生物具体菌落的形态特征。 （2）总结三类微生物菌落的一般特征并能识别。（特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。） 2、实验内容或原理 菌落：单个菌体在固体平面培养基上生长繁殖形成的肉眼可见的群体。 区分和识别各类微生物可从菌落形态（群体形态）和细胞形态（个体形态）两方面进行，菌落形态是无数细胞形态的集中反映，因此每一大类微生物都有其一定的菌落特征，可通过这些特征差异区分和识别。 特征描述：形状、大小、颜色、边缘、隆起、光泽、质地等。 细菌菌落特征：凝胶状、表面较光滑、湿润、与培养基结合不紧密，易挑取，正反颜色一致。 酵母菌菌落特征（与细菌相似) ：比细菌大而厚，不透明，表面光滑、湿润、粘稠，易用针挑起。多呈乳白色，少数呈红色。 霉菌的菌落特征：比细菌菌落大，由菌丝组成疏松的绒毛状、絮状或蜘蛛网状，有的无固定大小，延至整个培养基中，产色素，使菌落显色。 3、需用的仪器和试剂 （1）培养基：PDA培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、YEPD培养基 （2）菌落观察： （a）霉菌：黑曲霉、黑根霉、青霉、犁头霉、毛霉 （b）酵母菌：酿酒酵母菌 （c）细菌：大肠杆菌 4、实验步骤 1.细菌菌落形态观察包括：菌落大小、颜色、形状（圆形、不规则、假根形）、边缘（整齐光滑、叶状、波浪状、锯齿状、丝状）、隆起（扁平、低凸起、高凸起）、透明度（透明、半透明、不透明）、光泽（金属光泽、油脂性光泽）、质地（油脂状、膜状、粘稠状）、表面状态（光滑、褶皱、颗粒状、龟裂状）等。 2.大多数酵母菌的菌落与细菌相似，呈圆形，湿润有粘性，不透明，表面光滑，有油脂光泽。多数为白色或乳白色，少数为红色，培养时间长了，颜色会变暗。与培养基结合不紧，易被挑起。质地粘稠，边缘皱褶状。 3.霉菌由分枝状菌丝组成，菌丝粗而长，形成菌落疏松，菌丝有绒毛状、棉絮状、蜘蛛网状，菌落很大是细菌的几十倍，表面蔓延，有多种颜色，菌落正反面颜色多有不同。
微生物形态结构和培养特性观察 １、微生物的形态结构观察主要是通过染色，在显微镜下对其形状、大小、排列方式、细胞结构（包括细胞壁、细胞膜、细胞核、鞭毛、芽孢等）及染色特性进行观察，直观地了解细菌在形态结构上特性，根据不同微生物在形态结构上的不同达到区别、鉴定微生物的目的。 ２、细菌细胞在固体培养基表面形成的细胞群体叫菌落（colony）。不同微生物在某种培养基中生长繁殖，所形成的菌落特征有很大差异，而同一种的细菌在一定条件下，培养特征却有一定稳定性。以此可以对不同微生物加以区别鉴定。因此，微生物培养特性的观察也是微生物检验鉴别中的一项重要内容。 １）细菌的培养特征包括以下内容：在固体培养基上，观察菌落大小、形态、颜色（色素是水溶性还是脂溶性）、光泽度、透明度、质地、隆起形状、边缘特征及迁移性等。在液体培养中的表面生长情况（菌膜、环）混浊度及沉淀等。半固体培养基穿刺接种观察运动、扩散情况。（下图）
图细菌的培养特征 1.点状 2.圆形 3.丝状 4.不规则形 5.假根状 6.纺锤状 7.扁平 8.隆起
9.凸起10.垫状11.脐状12.边缘整齐13.波状14.裂片状15.啮蚀状16.丝状17.卷发状18.丝线状19.刺毛状20.串珠状21.疏展状22.树根状23.假根状24.丝状25.串珠状26.乳头状27.绒毛状28.树根状29.量杯状30.萝卜状31.漏斗状32.囊状33.层状34.絮状35.环 状36.蹼状37.膜状 ２）霉菌酵母菌的培养特征：大多数酵母菌没有丝状体，在固体培养基上形成的菌落和细菌的很相似，只是比细菌菌落大且厚。液体培养也和细菌相似，有均匀生长、沉淀或在液面形成菌膜。霉菌有分支的丝状体，菌丝粗长，在条件适宜的培养基里，菌丝无限伸长沿培养基表面蔓延。霉菌的基内菌丝、气生菌丝和孢子丝都常带有不同颜色，因而菌落边缘和中心，正面和背面颜色常常不同，如青霉菌：孢子青绿色，气生菌丝无色，基内菌丝褐色。霉菌在固体培养表面形成絮状、 绒毛状和蜘蛛网状菌落。
第一章原核微生物的形态结构与功能 第一节细菌 细菌（Bacteria）是一类个体微小、具有细胞壁的单细胞原核微生物 一、细菌的个体形态 1、球菌（Coccus） 细胞个体呈球形或椭圆形，不同种的球菌在细胞分裂时会形成不同的空间排列方式，常被作为分类依据。 （1）单球菌如尿素微球菌（Micrococcus ureae）。 （2）双球菌如肺炎双球菌（Diplococcus pneumoniae）。 （3）链球菌如乳链球菌（Streptococcus lactis）。 （4）四链球菌如四链微球菌（Micrococcus tetragehus）。 （5）八叠球菌如尿素八叠球菌（Sarcina ureae）。 （6）葡萄球菌如金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。 2、杆菌（Bacillus） 细胞呈杆状或圆柱形，一般其粗细（直径）比较稳定，而长度则常因培养时间、培养条件不同而有较大变化。 3、螺旋菌（Spirilla） 包括：弧菌、螺菌、螺旋体。 4、细菌的特殊形态 柄细菌、肾形菌、臂微菌、网格硫细菌、贝日阿托氏菌(丝状)、具有子实体的粘细菌、三角形、方形等特殊形态的细菌。 二、细菌的个体大小 细菌大小的测定： （1）测量：测微尺 （2）长度单位：微米( m) （3）表示： 球菌：直径 杆菌：宽×长 螺菌：宽、长、螺距 细菌大小测量结果的影响因素： 个体差异； 干燥、固定后的菌体会一般由于脱水而比活菌体缩短1/3-1/4； 染色方法的影响，一般用负染色法观察的菌体较大； 幼龄细菌一般比成熟的或老龄的细菌大； 环境条件，如培养基中渗透压的改变也会导致细胞大小的变化。 细菌细胞的重量约为1×10 －9～1×10－10mg， 即每克细菌约含1～10万亿个菌体细胞
实验一微生物得形态与结构观察 一、实验目得 1、掌握普通光学显微镜得正确使用方法； 2、掌握革兰氏染色法得原理及操作步骤; 3、在显微镜下观察细菌、酵母菌等得个体形态与结构. 二、基本原理 普通光学显微镜就是由一组光学系统与支持及调节光学系统得机械系统组成。 普通光学显微镜就是由一组光学系统与支持及调节光学系统得机械系统组成. 机械系统包括镜座、镜臂、镜台、物镜转换器、镜筒及调节器等。镜座就是显微镜得基座，使显微镜能平稳地放置在桌子上；镜台又称载物台,就是放置标本得地方，镜台上有压片夹用以固定被检标本,标本移动器可使标本前后与左右移动，有得标本移动器带有游标尺,可指明标本所在位置；镜臂用以支持镜筒，也就是移动显微镜时手握得部位；镜筒就是连接目镜与物镜得金属筒,镜筒上端插入目镜,下端与物镜转换器相接;物镜转换器安装在镜筒得下端，其上装有3～5个不同放大倍数得物镜，可以通过转动物镜转换器随意选用合适得物镜;调节器安装在镜臂基部，就是调节物镜与被检标本距离得装置，通过调节粗、细螺
旋便可清晰地观察到标本。 光学系统主要包括目镜、物镜、聚光镜与反光镜等，较好得显微镜有内光源。目镜一般由两块透镜组成，不同得目镜上刻有5×、１0×与15×等字符以表示该目镜得放大倍数；物镜就是显微镜中很重要得光学部件，由多块透镜组成,根据物镜得放大倍数与使用方法得不同，分为低倍物镜（４×、10×与２0×）、高倍物镜（4０×与45×)与油镜（９0×、９5×与100×)等。被检物体经显微镜得目镜与物镜放大后得总放大倍数就是物镜得放大倍数与目镜放大倍数得乘积。 形态观察主要包括群体形态与个体形态观察两方面。细菌个体微小，且较透明，必须借助染色法使菌体着色,显示出细菌得一般形态结构及特殊结构，在显微镜下用油镜进行观察。根据细菌个体形态观察得不同要求,可将染色分为简单染色、鉴别染色与特殊染色。本实验主要观察微生物得个体形态，掌握在细菌学中广泛使用得重要鉴别染色法—-革兰氏染色法；通过此染色，可将细菌鉴别为革兰氏阳性菌(G＋)与革兰氏阴性菌（Ｇ—）两大类。 革兰氏染色有着重要得理论与实践意义，其染色原理就是利用细菌得细胞壁组成成分与结构得不同。革兰氏阳性菌得细胞壁肽聚糖层厚，交联而成得肽聚糖网状结构致密,经乙醇处理发生脱水作用，使孔径缩小，通透性降低，结晶紫与碘形成得大分子复合物保留在细胞内而不被脱色，结果使细胞呈紫色。而革兰氏阴性菌肽聚糖层薄，网状结构交联疏松，而且类脂含量较高，经乙醇处理后，类脂被溶解,细胞壁孔径变大,通透性增加,结晶紫与碘得复合物被溶出细胞壁，因而细胞被脱色，再经蕃红复染后细胞呈红色。 三、仪器与药品 仪器:显微镜酒精灯接种柄接种环洗瓶载玻片滤纸镜油擦镜纸无菌水烧杯 药品:结晶紫95%乙醇草酸铵碘碘化钾蕃红二甲苯降酚细菌(培养18～２４小时得斜面菌种)细菌酵母菌等标本片。 草酸铵结晶紫染液：A液结晶紫２。０ｇ，９5%乙醇２0mL；B液草酸铵0．8g，蒸馏水8０ｍL。将A与Ｂ充分溶解后混合静止２４小时过滤使用。 革氏染液：碘1g ，碘化钾２g ,蒸馏水300mL。 蕃红染液：２、5%蕃红得乙醇溶液１0mＬ，蒸馏水１00mL混合过滤。 脱色液:95％乙醇。 四、实验步骤 (一）、显微镜得使用
菌和酵母菌的异同 细菌和多数酵母菌都是单细胞微生物。菌落中各细胞间都充满毛细管水、养料和某些代谢产物，因此，细菌和酵母菌的菌落形态具有尖似的特征，如湿润、较光滑、较透明、易挑起、菌落正反面及边缘、中央部位的颜色一致，且菌落质地较均匀等。它们之间的区别如下： 细菌：由于细胞小，故形成的菌落也较小，较薄、较透明且有“细腻”感。不同的细菌会产生不同的色素，因此常会出现五颜六色的菌落。此外，有些细菌具有特殊的细胞结构，因此，在菌落形态上也有所反映，如无鞭毛不能运动的细菌其菌落外形较圆而凸起；有鞭毛能运动的细菌其菌落往往大而扁平，周缘不整齐，而运动能力特强的细菌则出现更大、更扁平的菌落，其边缘从不规则、缺刻状直至出现迁居性的菌落，例如变形杆菌属和菌种。具有荚膜的细菌其菌落更粘稠、光滑、透明。荚膜较厚的细菌其菌落甚至呈透明的水珠状。有芽孢的细菌常因其折光率和其他原因而使菌落呈粗糙、不透明、多皱褶等特征。细菌还常因分解含氮有机物而产生臭味，这也有助于菌落的识别。 酵母菌：由于细胞较大（直径约比细菌大10倍）且不能运动，故其菌落一般比细菌大、厚而且透明度较差。酵母菌产生色素较为单一，通常呈矿蜡色，少数为橙红色，个别是黑色。但也有例外，如假丝酵母因形成籍节状的假菌丝，故细胞易向外圈蔓延，造成菌落大而扁平和边缘不整齐等特有形态。酵母菌因普遍能发酵含碳有机物而产生醇类，故其菌落常伴有酒香味。 2．放线菌和霉菌的异同 放线菌和霉菌的细胞都是丝状的，当生长于固体培养基上时有营养菌丝（或基内菌丝）和气生菌丝的分化。气生菌丝向空间生长，菌丝之间无毛细管水，因此菌落外观呈干燥、不透明的丝状、绒毛状或皮革状等特征。由于营养菌丝伸入培养基中使菌落和培养基连接紧密，故菌丝不易被挑起。由于气生菌丝、孢子和营养菌丝颜色不同，常使菌落正反面呈不同颜色。丝状菌是以菌丝顶端延长的方式进行生长的，越近菌落中心的气生菌丝其生理年龄越大，也越早分化出子实器官或分生孢子，从而反映在菌落颜色上的变化，一般情况下，菌落中心的颜色常比边缘深。有些菌的气生菌丝还会分泌出水溶性色素并扩散到培养基中而使培养基变色。有些菌的气生菌丝在生长后期还会分泌滴，因此，在菌落上出现“水珠”。 放线菌：放线菌属原核生物，其菌丝纤细，生长较慢，气生菌丝生长后期逐渐分化出孢子丝，形成大量的孢子，因此菌落较小，表面呈紧密的绒状或粉状等特征。由于菌丝伸入培养基中常使菌落边缘的培养基呈凹状。不少放线菌还产生特殊的土腥味或冰片味。 霉菌：霉菌属真核生物，它们的菌丝一般较放线菌粗（几倍）且长（几倍至几十倍），其生长速度比放线菌快，故菌落大而疏松或大而紧密。由于气生菌丝会形成一定形状、构造和色泽的子实器官，所以菌落表面往往有肉眼可见的构造和颜色。 根据上述特征可将四大类微生物菌落的识别要点归纳如下： 三、实验材料和用具 已知菌落：细菌类（大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌）酵母（酿酒酵母）放线菌类（细黄链
1.微生物的形态与结 构 https://www.doczj.com/doc/2414209662.html,work Information Technology Company.2020YEAR
大理大学课程教案 （理论教学） 课程名称：微生物学与人类健康 课程类型：（ 2 ）1、必修；2、选修；3、其它 授课对象：非医学专业（本科） 14/15 级 授课时间： 2016 至 2017 学年 1 学期 计划学时： 24 学时（其中：理论 24 ，实验： 0 ） 任课教师：武有聪、张雷 所属学院：基础医学院 课程管理部门（教研室）：医学微生物学及免疫学教研室 大理学院教务处
教材：人民卫生出版社出版（出版社），刘晶星编著，2013年第8版讲授人：武有聪专业技术职务：副教授 学历：研究生学位：博士学位 所属章节：第1-2章计划学时：3h 教学目的和要求： 1.掌握：细菌细胞壁的组成、功能；革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁的不同点及 意义；质粒的概念及其作用；核蛋白体的组成及意义；异染颗粒的意义；L-型细菌的概念及其意义；细菌的特殊结构及意义。细菌生长繁殖的条件及方式；根据细菌对氧需要的分类及细菌厌氧生长的原理；细菌合成代谢产物的种类及意义。 2.熟悉：细菌的大小与测量单位；细菌的基本形态；细菌的基本结构及功能；中介体 的概念；常见细菌生化反应的种类；细菌生化反应的概念及其在细菌鉴别上的意 义；细菌群体的生长繁殖规律。 教学重点及难点： 1.细菌的大小与形态 2.细菌的特殊结构（荚膜，鞭毛，菌毛，芽孢） 3.细菌的基本结构（细胞壁，细胞膜，细胞质） 教学方法：讲授为主、列表法、图示法 使用教具：多媒体 思考题： 1.细菌的基本结构有哪些它们各有什么作用 2.细菌的特殊结构有哪些它们各有什么作用 参考资料： 1.《医学微生物学》（第六版）周正任主编人民卫生出版社
实验四酵母菌与霉菌的形态观察 一.实验目的 1.观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。 2.观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。 3.观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。 4.进一步熟悉显微镜的使用。 二.实验原理 酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。 酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。 霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。 霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。 霉菌菌落由分枝状菌丝组成，较疏松，呈毛状、棉絮状、绒毛状或毡状。由于不同霉菌形成的孢子均有不同颜色、构造、性状，故菌落表面呈现出不同的结构和色泽特征。菌丝一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌丝较老，先产生孢子，故常形成同心圆。 三.实验器材 1.菌种：面包酵母、根霉、曲霉、青霉。 2.仪器：显微镜。 3.其它：生理盐水、乳酸酚棉兰染液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、美 兰、镊子、大头针。 四.步骤与方法 1.酵母菌细胞形态观察 （1）制片：用接种环挑取一环面包酵母菌种于载玻片上的一滴美兰染液中混匀，盖上盖玻片静置4~5分钟。盖时先将盖玻片的一边与液滴接触，然后慢慢放下，避免产生气泡。 （2）镜检：用高倍镜观察，光线弱些，绘图表示个体细胞的大小、形状、芽孢或裂殖情况，并观察死活酵母情况。 2.霉菌的形态观察 （1）制片方法：在洁净的载玻片加一滴乳酸酚棉兰染液，用大头针或镊子从
菌落特征比较 菌落特征比较： 细菌：湿润，粘稠，易挑起 放线菌：干燥，多皱，难挑起，菌落较小，多有色素 酵母菌：湿润，粘稠，易挑起，表面光华，比细菌的菌落大而厚 霉菌：菌丝细长，菌落疏松，成绒毛状、蜘蛛网状、棉絮状， 无固定大小，多有光泽，不易挑起 细菌：一般形成较小的圆形菌落，颜色有白色、黄色等，表面光滑或不光滑 放线菌：菌落背面有同心圆形纹路。这点可以和细菌菌落区分。 酵母菌：菌落为淡黄色，光滑，半透明，比细菌菌落大。 霉菌：菌落大型，肉眼可见许多毛状物，棕色、青色等，可见黑色的分生孢子群。 对于科学实践中鉴别微生物种类有重要意义。 微生物菌落形态图片
金黄色葡萄球菌在BP琼脂上典型特征金黄色葡萄球菌呈圆形 , 表面光滑、凸起、湿润 , 直径 2 ～ 3mm 。灰黑色至黑色 , 有光泽 , 常有浅色 ( 非白色 ) 的边缘 , 周围绕以不透明圈 ( 沉淀 ), 其外常有一清晰带 ( 卵磷脂环 ) 。当用接种针触及菌落时具有黄油样粘稠感。有时可见到不分解脂肪的菌株 , 除没有不透明圈和清晰带外 , 其他外观基本相同。从长期贮存的冷冻或脱水食品中分离的菌落 , 其黑色常较典型菌落浅些 , 且外观可能较粗糙 , 质地较干燥。 金黄色葡萄球 菌在海博金黄色葡萄球菌显色培养基上典型特征典型的金黄色葡萄球菌为灰黑色菌落，其外围有一不透明圈。本培养基用于直接鉴定金黄色葡萄球菌，如果在 18-24 小时没有出现典型菌落，需再培养 18-24 小时。有时金黄色葡萄球菌不显灰黑色，但其外围有一不透明圈。 金黄色葡萄球 在甘露醇高盐 琼脂培养基上 典型特征 典型特征：金黄色葡萄球菌显黄色，其外围有一黄色的晕环。