单克隆抗体分离纯化中的离子交换层析介质

单克隆抗体分离纯化中的离子交换层析介质

离子交换层析介质在生物技术制药中应用广泛。可以设计层析工艺中的各个步骤中使用,如:捕获,中度纯化、精细纯化等步骤。在抗体纯化工艺中广泛使用的三步法:protein A捕获-阳离子交换-阴离子交换。

2.1. 阳离子交换CEX 层析介质

在抗体纯化工艺中,CEX 一般使用吸附模式(Bind-and-Elute BE)。阳离子交换可以去除HCP 、脱落的Protein A以及部分高分子量的聚体等杂质。Protein A的PI 在5.1;而单克隆抗体的PI 一般在4-9,大部分在PI 超过6.0。更改上样的pH 可以使脱落的Protein A的或Protein A的降解片段在流穿中去除,也可在上样后的中间清洗步骤中去除。文献报道阳离子交换的载量(Protein A捕获洗脱样品)在几十mg/ml 以上。并且收率较高均>98%. Sp Sepharose FF 是在生物制药中使用非常广泛的一类阳离子交换介质。琼脂糖为生物兼容性层析介质,这类介质是纯化工艺中初步分离粗的混合物的首选。此时良好的分辨率与高流速的结合是非常重要的。这些介质的常规线流速是100至400cm/h。

2.2. 阴离子交换AEX 层析介质

阴离子交换在抗体纯化工艺中可以去除DNA 、病毒、Protein A脱落、内毒素、部分聚体以及酸性的HCP 。

在抗体工艺中AEX 层析一般采用流穿模式(Flow-through FT),既上样过程中抗体在穿透峰,杂质吸附在层析介质上。对于PI 比较高的抗体分子,pH 在7-8.0左右时,抗体流穿。而DNA 、内毒素以及病毒等可以吸附在层析介质上。文献报道,阴离子交换的载量在140mg/ml 以上。根据抗体的性质,选择适当的pH ,在低电导下,抗体流穿。典型的结果:收率99%,DNA<10pg,protein A<10ppm. Q Sepharose FF 是在生物制药中使用非常广泛的一类阳离子交换介质。琼脂糖为生物兼容性层析介质,这类介质是纯化工艺中初步分离粗的混合物的首选。此时良好的分辨率与高流速的结合是非常重要的。这些介质的常规线流速是100至400cm/h。

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