绿色木霉
木霉菌属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目，粘孢菌类，是一类普遍存在的真菌。
绿色木霉（Trichoderma viride）在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。在植物病理生物防治中具有重要的作用
绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。
使用方法
可直接加入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中，在分解纤维、病理防治中有重要作用。
1.1 形态学特征木霉的菌落生长迅速，呈不定型棉絮状或致密丛束状，其表面的颜色多呈绿色。菌丝有隔分枝，厚垣孢子有或无。分生孢子梗是菌丝的短侧枝，侧枝上对称或互生分枝，形成二级和三级分枝，分枝角度为锐角或近于直角，在分枝末端形成瓶状小梗。分生孢子多为卵圆形，无色或绿色，簇生于小梗顶端。
1.2 生态学特性
1.2.1 生长发育的物理条件
1.2.1.1 温、湿度生长适温为20－28℃，在6℃或32℃仍生长良好，它是一种嗜温真菌，在37℃条件下能生长，但在48℃条件下不能生长；木霉的生长要求较高湿度，其营养生长的相对湿度要求92%以上，孢子的形成需要93%－95%，因而木霉在潮湿土壤中的生命力较干性土壤中强。
1.2.1.2 光照若光照以对数比例增强可以促进分生孢子的产生，有研究发现380nm和440nm波长的光诱导力最强，而254nm和1100nm以外波长的光不可能诱导繁殖体的产生。木霉经日光处理3min或经紫外线光处理10-30s诱导产孢的效果更好。
1.2.1.3 pH值和CO2木霉的最适生长pH值为5－5.5，在pH值为1.5或9.0的培养基上也可能生长，但酸性条件比碱性条件下的萌发率更高。CO2对木霉生长的影响取决于CO2的浓度和培养基的pH值，在碱性基质中，高浓度的CO2有利于木霉菌的生长。
1.2.2 营养条件
1.2.2.1 碳源木霉菌株能够利用多种有机物作为碳源，较理想的是单糖、双糖、多糖、嘌呤、嘧啶和氨基酸等。绿色木霉在富含碳水化合物的培养基上大量产生酸类，用葡萄糖或淀粉作为碳源，该菌产生60%－80%的柠檬酸（理论上推算）。
1.2.2.2 氮源在缓冲介质中，铵是木霉菌最易利用的氮源，其他氮源如氨基酸、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐也能维持其正常生长。以天冬门素为氮源生长特别好，含氮量低，会促进孢子形成，对高浓度硝酸盐的负影响由于硫酸镁的存在可以得到补偿。
1.2.2.3 无机盐及微量元素无机盐对木霉的生长很重要，对绿色木霉来说，镁离子能促进其生长，铜离子能促进分生孢子色素形成，铁离子对孢子的形成也很重要。
绿色木霉 木霉菌属于半知菌亚门、丝孢纲、丝孢目，粘孢菌类，是一类普遍存在的真菌。 绿色木霉（Trichoderma viride）在自然界分布广泛，常腐生于木材、种子及植物残体上。绿色木霉能产生多种具有生物活性的酶系，如：纤维素酶、几丁质酶、木聚糖酶等。在植物病理生物防治中具有重要的作用 绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。 使用方法 可直接加入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中，在分解纤维、病理防治中有重要作用。 1.1 形态学特征木霉的菌落生长迅速，呈不定型棉絮状或致密丛束状，其表面的颜色多呈绿色。菌丝有隔分枝，厚垣孢子有或无。分生孢子梗是菌丝的短侧枝，侧枝上对称或互生分枝，形成二级和三级分枝，分枝角度为锐角或近于直角，在分枝末端形成瓶状小梗。分生孢子多为卵圆形，无色或绿色，簇生于小梗顶端。 1.2 生态学特性 1.2.1 生长发育的物理条件 1.2.1.1 温、湿度生长适温为20－28℃，在6℃或32℃仍生长良好，它是一种嗜温真菌，在37℃条件下能生长，但在48℃条件下不能生长；木霉的生长要求较高湿度，其营养生长的相对湿度要求92%以上，孢子的形成需要93%－95%，因而木霉在潮湿土壤中的生命力较干性土壤中强。 1.2.1.2 光照若光照以对数比例增强可以促进分生孢子的产生，有研究发现380nm和440nm波长的光诱导力最强，而254nm和1100nm以外波长的光不可能诱导繁殖体的产生。木霉经日光处理3min或经紫外线光处理10-30s诱导产孢的效果更好。 1.2.1.3 pH值和CO2木霉的最适生长pH值为5－5.5，在pH值为1.5或9.0的培养基上也可能生长，但酸性条件比碱性条件下的萌发率更高。CO2对木霉生长的影响取决于CO2的浓度和培养基的pH值，在碱性基质中，高浓度的CO2有利于木霉菌的生长。 1.2.2 营养条件 1.2.2.1 碳源木霉菌株能够利用多种有机物作为碳源，较理想的是单糖、双糖、多糖、嘌呤、嘧啶和氨基酸等。绿色木霉在富含碳水化合物的培养基上大量产生酸类，用葡萄糖或淀粉作为碳源，该菌产生60%－80%的柠檬酸（理论上推算）。 1.2.2.2 氮源在缓冲介质中，铵是木霉菌最易利用的氮源，其他氮源如氨基酸、尿素、硝酸盐、亚硝酸盐也能维持其正常生长。以天冬门素为氮源生长特别好，含氮量低，会促进孢子形成，对高浓度硝酸盐的负影响由于硫酸镁的存在可以得到补偿。 1.2.2.3 无机盐及微量元素无机盐对木霉的生长很重要，对绿色木霉来说，镁离子能促进其生长，铜离子能促进分生孢子色素形成，铁离子对孢子的形成也很重要。
食用菌木霉的危害症状及防治方法 木霉俗称绿霉。属于真菌门，半知菌亚门。在自然界中分布极广，对各种食用菌的致病力强，不仅危害菌丝体生长阶段，也危害食用菌子实体，它是生产中发生最普遍、危害性最严重的杂菌之一，不论制种还是栽培，也不论生料、熟料、发酵料、发菌期间均可发生，甚至在出菇阶段也有发生，个别品种如草菇的菌种在完成发菌后亦可发生该种杂菌，并且发生的温度范围也越来越广，不少地区的银耳、香菇，近年的平菇、鸡腿菇等生产中曾发生毁灭性的污染，木霉就是主要杂菌之一。 危害症状木霉的主要生物特征为其菌丝成熟期很短，往往在一周内即可达到生理成熟，然后即生出绿色霉层，即其孢子层。当基料被侵染后，菌丝阶段不易察觉，直到出现霉层时才能引起注意；起初只是点状或斑块状，当条件合适或食用菌菌丝不很健壮时，很快发展为片状，直至污染整个菌袋或料床，若不及时采取措施，菇棚内短时间即可成一片绿色，其孢子飞扬，周边棚墙上也将附着大量木霉孢子，给以后的生产留下严重隐患。 发生规律木霉主要生存在朽木、枯枝落叶、土壤、有机肥、植物残体上和空气中。许多栽培的老菇房，带菌的菇具和场所是主要的初侵染源，已发病所产生的分生孢子，可多次重复侵染更为频繁。木霉发病率的高低与环境条件的关系较大，木霉孢子在15-30`C下萌发
率较高，菌丝体在4-42`C的温度下均能生长，在25-30`C生长最快。孢子在空气相对湿度95%的条件下，萌发最快，相对湿度低于85%较难萌发。因此，在高温、高湿、通气不良和培养料呈偏酸性时，很容易滋生木霉。木霉侵染寄主后，与寄主争夺养分和空间，同时还分泌毒素杀伤、杀死寄主，把寄主的菌丝缠绕、切断。 防治措施（1）制种或熟料栽培拌料时按比例加入1：1000倍疣霉净，并严格灭菌，以彻底杀死其孢子。 （2）科学调配基料组分，使营养全面、均衡，以保证食用菌菌丝的健康和抗性，可对霉菌形成拮抗或抑制。实践证明，生产中按比例加入天天菇耳壮即可。 （3）发酵栽培时，加入疣霉净后，基料仍要发酵均匀，尽可能多的杀死或抑制其孢子。 （4）接种操作要严格、规范，不使霉菌孢子落于料中。研究发现，接种时，开启食用菌接种净化机5min后再进行操作，生产效果与常规甲醛熏蒸相仿，并且，杜绝了甲醛对人体的刺激，避免了甲醛残留的可能。 （5）菌种或菌袋发菌以及出菇期间，每5天左右对菇棚空闲处
灵芝栽培中木霉的预防和治疗 灵芝是一种名贵的中药材，近年来灵芝的生产发展很快，但在灵芝栽培中常因杂菌的污染造成不同程度的损失，其中绿色木霉是发生频率和危害程度最高的，在灵芝栽培的各个阶段均可发生。 灵芝是一种名贵的中药材，近年来灵芝的生产发展很快，但在灵芝栽培中常因杂菌的污染造成不同程度的损失，其中绿色木霉是发生频率和危害程度最高的，在灵芝栽培的各个阶段均可发生。绿色木霉广泛存在于自然界的各种有机物质和土壤中，还常以分生孢子的形式漂浮在空气中，它适应性强，特别是在营养丰富的基质上生长迅速，传播蔓延快，既可以和栽培的灵芝菌丝竞争养料，消耗养分，也可以分泌毒素破坏灵芝菌丝的细胞质，抑制灵芝菌丝的生长，严重影响着灵芝的产量和质量，是灵芝栽培中病害防治的重点。在近几年的栽培中我们采取了以预防为主、并辅助治疗的措施，取得了较好的效果。 1、选用抗杂性好、菌丝生长势强的灵芝品种。选用优质的灵芝品种是栽培成功的关键。抗病能力好、生长势强的品种不易被绿色木霉菌感染。 2、严格挑选栽培用种。所选菌种要求种性纯正，菌丝生活力强，菌丝洁白、浓密、健壮、菌龄适宜，防止菌种带入绿色木霉。 3、搞好栽培环境的清洁卫生。菇房内要清除菌渣、垃圾，彻底清洗栽培用架，并进行空间消毒，消灭杂菌隐匿场所，以减少传播媒介。搞好环境卫生对防止污染能起到事半功倍的效果。 4、严格选料。培养料要求新鲜、无霉变，用前要曝晒数天，培
养料配方要求合理，主料和辅料要充分拌匀，含水量控制在60%-70%左右，装量合适、松紧适度，装好后立即进行高压或常压灭菌，以防培养基的酸化。灭菌要求彻底。 5、接种中树立严格的无菌观念。由于空气中到处漂浮有绿色木霉的孢子，操作时不能因为肉眼看不见而麻痹大意，操作人员的双手、衣物和所用接种工具、材料须严格消毒，如选用接种室接种的操作人员应戴上帽子，以防头发上落有绿色木霉的孢子。接种动作要尽量快捷、熟练，防止接种过程中带入杂菌、杂菌孢子，对灭菌过程中破损的袋子用胶布封好，并在封口处用75%酒精消毒。 6、适当加大接种量，可使灵芝菌丝以绝对优势迅速占领地盘，减少杂菌的污染，起到以菇抑菌的作用。 7、保证培养室内具有适宜的小气候，把好菌丝培养关。控制25℃左右的温度、60%-70%的湿度，注意通风换气，严防高温高湿，创造灵芝菌丝生长的最适宜环境条件，促进灵芝菌丝快速生长，迅速占领整个料面。 8、认真抓好出芝阶段的培养管理工作。浙江一带灵芝栽培一般选在春季进行，出芝时正好是6、7月份的高温季节，子实体生长阶段由于需要较高的湿度，因此是防治绿色木霉污染的重要时期。灵芝原基长出后，要及时拔去棉塞或开袋，以免原基损坏而感染绿色木霉菌。做好保温保湿工作，同时加强通风和给予一定的光照，促使原基健康地长成子实体，子实体成熟后及时采摘。 9、加强早期防治。定期检查生长情况，一旦发现污染，应采取
木霉菌与植物病害的生物防治 摘要：木霉菌是重要的植物病害防治菌，广泛分布于自然界。木霉菌具有广泛的适应性，能够杀伤多种重要的植物病原菌，作用机制多种多样。除了从自然界分离筛选之外，木霉菌的诱变育种改良技术，原生质体融合技术以及基因操作技术已有效地应用于木霉菌的改造。木霉菌的大量生产技术以及菌剂的制备技术也有较大发展，已经有10多种商品化制剂。木霉菌的筛选技术是需要重视的研究领域，而其发展则离不开对生态学和作用机制的详细了解。木霉菌具有广阔的研究与应用前景。 关键词：木霉菌;；植物病害；生物防治 1前言 木霉菌(Trichoderma spp.) 属于半知菌类的丝孢纲，丛梗孢目，丛梗孢科，广泛存在于土壤、根围、叶围、种子和球茎等生态环境中1932年，Weindling发现木素木霉(Trichodermalignorum) 可以寄生于多种植物病原真菌，建议将该菌用于土传植物病害的生物防治，木霉菌生防研究工作从此开始。由于木霉菌的广泛适应性、广谱性及多机制性，一直是植病生防学家研究的重点对象。由于生物技术的发展，木霉菌已由单一地从自然界分离筛选达到有目的地利用生物技术进行改造以获得新型菌株的程度，如原生质体融合技术的引入已成功地研制出商品制剂F-Stop。截止到1997年，国内外已经登记的木霉菌制剂多达11种，其中包括哈茨木霉菌(Trichodermaharzianum)5个，多孢木霉菌(Trichodermapolysporum) 1个，绿色木霉菌(Trichodermaviride)2个，其他木霉菌(Trichoderma spp. ) 3个，多数用于植物土壤传播病害的防治，如Sclerotinia，Phytophthora，Rhizoctonia，Pythium，Fusarium，Verticillium等。 2木霉菌的分类 由于木霉菌株的形态特征复杂，又缺乏稳定性，木霉菌的种类鉴定长期处于混乱状态。直到1939年，木霉菌的种类鉴定或是依据Gilman的工作，或是各行其事，没有统一的鉴定标准。1939年，Bisby检查了大量的木霉菌分离物，没有发现稳定的鉴别特征可供参考，因此主张木霉菌(Trichoderma)是一个单种属(monotypicgenus)。他的意见得到许多真菌学家的认可，此后相当长一段时间内，凡是产生绿色孢子的木霉菌都定为绿色木霉(Trichodermaviride)。然而木霉属是
木霉及其肉座菌有性阶段种类名录 1 Trichoderma aggressivum Samuels & Gams (侵占木霉) 1.1 Trichoderma aggressivum f.aggressivum Samuels & Gams (侵占木霉侵占 变种) 1.2 Trichoderma aggressivum f. europaeum Samuels & Gams (侵占木霉欧洲 变种) 2 Trichoderma arundinaceum Zafari, Fraf. & Sanuels (苇状木霉) 3 Trichoderma asperellum Samuels，Lieckfeldt & Nirenberg (棘孢木霉) 4 Trichoderma atroviride Karsten / Hypocrea atroviridis Dodd, Lieckfeldt et Samuels (深绿木霉/肉座菌) 5 Trichoderma aureoviride Rifai / Hypocrea aureoviridis Plowr. & Cooke (黄绿木霉/肉座菌) 6 Trichoderma austrokoningii Samuels & Druzhinina/Hypocrea austrokoningii Samuels & Druzhinina (澳洲康宁木霉/肉座菌) 7 Trichoderma brevicompactum Kraus, Kubicek & Gams (短密木霉) 8 Trichoderma candidum Chaverri & Samuels /Hypocrea candida Chaverri & Samuels (雪白木霉/肉座菌) 9 Trichoderma caribbaeum Samuels & Schroers (加勒比木霉) 9.1 Trichoderma caribbaeum var. aequatoriale Samuels & Evans (加勒比木霉 厄瓜多尔变种) 9.2 Trichoderma caribbaeum var. caribbaeum Samuels & Schroers (加勒比木 霉加勒比变种) 10 Trichoderma catoptron Chaverri & Samuels /Hypocrea catoptron Berk. & Broome (低头木霉/肉座菌) 11 Trichoderma ceraceum Chaverri & Samuels /Hypocrea ceracea Chaverri & Samuels (蜡座木霉/肉座菌) 12 Trichoderma ceramicum Chaverri＆Samuels /Hypocrea ceramica Ellis & Everh. (陶瓷木霉/肉座菌) 13 Trichoderma cerinum Bissett, Kubicek & Szakacs (蜡素木霉) 14 Trichoderma chlorosporum Chaverri & Samuels /Hypocrea chlorospora Berk. & Curtis (绿孢木霉/肉座菌) 15 Trichoderma chromospermum Chaverri & Samuels /Hypocrea chromosperma Curtis & Peck (色精木霉/肉座菌) 16 Trichoderma cinnamomeum Chaverri & Samuels /Hypocrea cinnamomea
重寄生菌木霉灭毒剂作为抗红豆尖孢镰刀菌和强雄腐霉的生物防治药剂以及大豆生长促进剂 文章信息 Article history: Received 18 May 2010 Received in revised form 23 July 2010 Accepted 2 August 2010 关键词: 木霉灭毒剂 大豆 生物防治药剂 红豆尖孢镰刀菌 强雄腐霉 生长促进剂 摘要: 木霉灭毒剂被证实能够有效地针对两种真菌病原体, 感染大豆的红豆尖孢镰刀菌和强雄腐霉进行生物防治.在体外进行的生物防治试验,木霉显示了试验病原真菌的重寄生现象和破坏性控制.这两种病原体显著影响发芽,强雄腐霉具有严重的影响(发芽率只有5%).大豆根系发育不良是由于感染和外加的负面影响在根瘤固氮以及植物的进一步发展阶段.在生物防治活性测定中,结果表明木霉菌生长促进大豆植物的生长.木霉强化嫩枝和根系的生长以及十二周后果实的产量.腐霉和镰刀菌感染的木霉治愈过的植株比病原体单独的高194%和141%.木霉治愈过的果实产量每株66而对照植株只有41.腐霉和镰刀菌感染过的木霉治愈植株果实产量分别为43和53他们比被病原体感染的分别高5倍和1.6倍. 1简介 大豆(毛豆属Merr. cv. Lotus,早期品种,加拿大魁北克省农业和农业食品参考中心)是最重要的农作物之一(Herridge et al., 2008; Prévost et al., 2010)以及植物蛋白和油的来源.大豆占全球豆类作物种植面积的一半和68%的产量以及修复16.4 Tg N/year,它代表了大于四分之三的种植面积施用氮肥(Herridge et al., 2008).真菌疾病是一个主要的获得高产商业大豆的障碍,普遍使用一些化学杀菌剂控制这些疾病.由于生物防治剂的出现化学杀菌剂的应用已被取代,因为出现了杀菌及耐药菌株以及公众对于健康和化学物质对环境的影响的关注.在过去的几十年里,几个潜在的生防微生物已被隔离,以及商业化和特点,因此植物病害生物防治已受到更多的关注(Shali et al., 2010).木霉被认为是现在的生防和促生长剂对于许多的作物来说(V erma et al., 2007; Bai et al., 2008; Savazzini et al., 2009).病原体,寄生菌和抗真菌化合物的竞争中最重要的是生防机制(V erma et al., 2007; Savazzini et al., 2009).木霉种群可以比较容易的生长在不同的土壤类型,可以继续在检测水平持续几个月.木霉灭毒剂(被印度理工学院分离获得,印度新德里)是对土传植物病原微生物制剂,他可以轻松地分散在植物根周围以及帮助植物生长(V erma et al.,2007). 镰刀菌属和腐霉属,是两种真菌病原体能够严重感染大豆从而影响大豆的从萌发生长到各生长阶段.腐霉属,感染常见于玉米和大豆,造成两种作物的猝倒疾病.这种损害是由腐霉引起的对于种植者能够带来重大的经济损失. (Zhang and Y ang, 2000).镰刀菌如茄病镰刀菌感染大豆幼苗根和叶症状(坏死,枯黄,落叶等)通常花开前后略有下降.该菌株可减少严重感染早期,种子和荚果的减产. (Luo et al., 1999).强雄腐霉3047(收集于AAFC Ottawa collection, Ontario)
木霉菌( Trichoderma spp)是食用菌生产上最重要的病菌之一,对食用菌危害极大,每年都造成很大的损失。 木霉又称绿霉，为食用菌主要竞争性杂菌，分布广，对多种食用菌子实体寄生力也很强。蘑菇、香菇、草菇、平菇、风尾菇、金针菇、猴头菇、木耳和银耳等几乎所有食用菌在制种和栽培过程中都受其侵染危害，发生轻时局部范围少出菇或出现斑点菇，重时导致整批菌种报废或整床培养料毁坏。 1、症状识别培养料染菌后初期产生白色纤细致密菌丝，逐渐形成无定形菌落，以后从菌落中心到边缘逐渐产生分生孢子，使菌落由浅绿变成深绿色霉层。通常菌落扩展很快，特别在高温高湿条件下，几天内木霉菌落可遍布整个料面，毫无收获。 2、病原及发病规律危害食用菌的木霉均属半知菌木霉菌真菌，常见种为绿色木霉和康氏木霉。绿色木霉菌落外观深绿色或蓝绿色。康氏木霉菌落外观浅绿、黄绿或绿色。病菌分布很广，栽培菇房、带菌的工具和废料等场所是病菌主要初侵染源。以分生孢子通过气流、水滴和昆虫等传播扩散。高温高湿和偏酸环境适宜病菌生长繁殖。菌丝生长温度4-42℃，25-30℃生长最快，孢子萌发温度10-35℃，15-30℃萌发率最高。25-27℃菌落由白变绿只需4-5昼夜。高湿对菌丝生长和孢子萌发有利，孢子萌发要求相对湿度95%以上，但在较干燥的坏境中也能生长。病菌喜微酸条件，pH值4-5生长最好。通常接种时消毒不严格，棉塞潮湿，生产环境不干净易染病，菌丝愈合、定植或采菇期菇柄基部伤口多易受感染。 3、防治方法 ①注意接种箱、接种室、栽培菇房及有关用具的彻底灭菌，保持生产坏境洁净。防止消毒施用甲醛过最，以免甲醛变成甲酸形成酸性环境。 ②根据病菌和食用菌对温度的不同要求，尽可能利用不适宜木霉生长环境条件，先让生产食用菌发菌良好，形成竟争优势。如香菇菌丝25℃生长最好，16℃时菌丝生长速度大于木霉菌丝，25℃以上木霉菌丝大于香菇。在香菇接种后先l6℃培养，待菌丝占满料面后，逐渐提升到25℃，避免木霉侵染。 ③尽量选择低温干燥季节栽培，菌丝愈合价段覆盖塑料膜，注意适当通风降湿，后期揭膜不宜过早，以防病菌侵染。生产菇房空气湿度控制在85%左石，保持清洁卫生和通风良好，避免或减少侵染。高温潮湿或多雨季节加强菇房通风排湿，勤翻堆。播种后或生产期间发现木霉污染，立即挖除，同时注意把死菇、老根清除干净，防止病菌菌丝扩散蔓延。 ④适时进行药剂防治，菌种袋或菌种块局部发生木霉时，可用1%克霉灵或0.5%多丰农，或 0.1%施保功或0.1%扑海因或0.2%食用菌专用万力，或2%甲醛溶液注射或涂抹，也可用10%漂白粉溶液局部涂抹。菇床培养料发生木霉时，可直接在污染料面上撒薄层石灰粉，控制病菌扩展蔓延。 ⑤必要时用克霉灵、多丰农、施保功或食用菌专用万力拌料防治。
2001杨合同，徐砚珂，王加宁，唐文华。木霉菌类生物防治菌的生态学特性。山东植物病理研究。中国农业出版社，北京，Pp132-138 木霉菌类生物防治菌的生态学特性 杨合同，徐砚珂，王加宁 （山东省科学院生物研究所，济南，250014） 唐文华 （中国农业大学植物病理系，北京，100094） 摘要：在多种植物根际能分离到对棉花枯萎病菌有拮抗作用的木霉菌。本文分离并鉴定的拮抗性木霉菌有绿色木霉菌（Trichoderma viride)，哈茨木霉菌（Trichoderma harzianum)和康宁木霉菌(Trichoderma koningii)。木霉菌的菌落伸展速度在菌株间差别不明显。木霉菌菌株的产孢能力比较强，多数菌株在每克培养基中的分生孢子产量均在21×108个/克干重以上。木霉菌可以耐受土壤的抑菌作用，加入土壤7天后的回收率均在13.1%以上；木霉菌接种棉花种子后可以进入棉花植株内部，有的可以到达茎的中部。木霉菌显示出明显的根际效应，不同菌株在棉花根际的定殖能力有很大差异。 前言 良好的适应性，多机制性和广谱性是木霉菌在生物防治研究工作中受到广泛关注的重要原因。优秀木霉菌类生物防治菌的分离与筛选与样本的来源有很大关系，普遍认为生防菌株应当尽可能来自病害衰退田，或者寄主植物的周围环境，如根表，根际及其生长所在的土壤（Baker et al, 1974; Cook et al, 1983）。木霉菌分布广泛，能够从很多环境如土壤，污水，植物组织等分离得到，但是木霉菌类生防菌株对于植物是否有选择性，则少有研究。本文采集了多种样品进行木霉菌的分离，以棉花为宿主植物，以棉花立枯病菌、枯萎病菌和黄萎病菌为指示菌株，筛选了木霉菌类生物防治菌，研究了他们的生态学特性，希望为木霉菌的宿主专化性提供证据。 材料与方法 1 生防菌株的分离与筛选 1.1 样品的处理 采集并供分离的植物样品12科近20种的植物，分别是禾本科：小麦、早熟禾；豆科：蚕豆；菊科：泥胡菜；十字花科：播娘蒿；锦葵科：木槿，棉花；百合科：葱、蒜；堇菜科：紫花地丁；蔷薇科：玫瑰、西府海棠；栋科：香椿；忍冬科：锦带花；伞形科：芹菜；大戟科：菠菜，等等。其它样品包括各种食用菌的患病子实体，主要包括木耳、灵芝和各种磨菇。分离时，取植物根际土壤（在实验室内将根系土壤稍风干，轻拍根系，使粘附土壤脱落，然后以灭菌水充分漂洗根上残留的土壤，漂洗液即为根际土样。 1.2 分离方法 木霉菌的分离用PDA培养基(含氯霉素100ppm)。将样品稀释102－105倍，取0.1ml于培养基平板，用灭菌的L形玻璃棒涂匀，置于28℃恒温箱中培养，真菌产孢之前纯化，保存于PDA斜面上。TSM培养基（MgSO4·7H2O 0.2g，K2HPO4 0.9g，KCl 0.15g，NH4NO3 1.0g，葡萄糖3.0g，氯霉素0.25g，玫瑰红0.15g，敌克松60%可湿性粉剂0.3g，PCNB0.2g，琼脂20g）也用于木霉菌的分离（唐文华等，1992）。 1.3 筛选木霉菌生防菌株的指示性状 （1）平板上对目标病原菌的拮抗作用，以抑菌圈的有或无来判断。 （2）平板上对目标病原菌的重复寄生能力。 以上测定所用的指示菌株为：棉花立枯病菌(Rhizoctonia solani) Rhs-1，本研究室分离保存；
绿色木霉 一、木霉菌概述： 木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不 同环境条件下的土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉菌已有了初步的认识，但直到上世纪60年代木霉菌的分类地位才得以确定。大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并 能提高农作物的抗逆性，促进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改良剂。由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为 友好的生物农药木霉菌受到了广泛的关注。 绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理生物防治中具有 重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。绿色木霉菌剂防治 蔬菜根结线虫病的生物农药，还可以防治黄瓜等葫芦科、番茄等茄科蔬菜的根结线虫 病害。绿色木霉菌剂生物农药通过产生抗生素、营养竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性等机制。可直接加入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中， 在分解纤维、病理防治中有重要作用。 二、木霉菌特点： 在防治灰霉病上，主要有以下几个防治特点： 1.拮抗作用：木霉菌通过产生小分子的抗生素和大分子的抗菌蛋白或胞壁降解酶类来 抑制病原菌的生长、繁殖和侵染。木霉菌在抗生和菌寄生中,可产生几丁质酶、β21 ,3 葡聚糖酶、纤维素酶和蛋白酶来分解植物病原真菌的细胞壁或分泌葡萄糖苷酶等胞外 酶来降解病原菌产生的抗生毒素。同时，木霉菌还分泌抗菌蛋白或裂解酶来抑制植物 病原真菌的侵染。 2.竞争作用：木霉菌可以通过快速生长和繁殖而夺取水分和养分、占有空间、消耗氧 气等,以至削弱和排除同一生境中的灰霉病病原物。 3.重寄生作用:研究发现木霉菌会在特定环境里形成腐霉对灰霉病菌具有重寄生作用,它进入寄主菌丝后形成大量的分枝和有性结构,因而能抑制葡萄灰霉病症状的出现。 4.诱导抗性:木霉菌可以诱导寄主植物产生防御反应,不仅能直接抑制灰葡萄孢的生长和繁殖,而且能诱导作物产生自我防御系统获得抗病性。 5.促生作用:经实验人员发现，木霉菌在使用过程中，不仅能控制灰霉病的发生,而且能增加种子的萌发率、根和苗的长度以及植株的活力。
目录 第一章文献综述 (1) 1.1木霉菌分类研究进展 (2) 1.1.1Rifai集合种系统 (4) 1.1.2Bissett系统 (4) 1.1.3Gams&Bissett分类系统 (6) 1.1.4系谱系统分类 (6) 1.2种内遗传多样性研究 (7) 1.3次生代谢物多样性研究 (9) 11 (11) 第二章木霉菌分离、鉴定与分布多样性.......................................................................................................... 2.1材料与方法 (11) 2.1.1材料 (11) 2.1.1.1土样及木霉 (11) 2.1.1.2培养基 (11) 2.1.1.3仪器 (11) 2.1.2方法 (11) 2.1.2.1土壤样品采集 (11) 2.1.2.2木霉菌分离 (12) 2.1.2.3菌种的保存 (12) 2.1.2.4形态观察与描述 (12) 2.1.2.5分子鉴定方法 (12) 2.2结果与讨论 (13) 2.2.1种类鉴定 (13) 2.2.2新记录种记述 (27) 2.2.3环境对木霉菌多样性的影响 (29) 2.2.3.1地区对多样性的影响 (29) 2.2.3.2作物种植对多样性的影响 (29) 2.2.3.3盐渍化对多样性的影响 (30) 2.3结论与讨论 (32) 35 (35) 第三章木霉菌生物学特性多样性研究.............................................................................................................. 3.1材料与方法 (35) 3.1.1材料 (35) V
木霉对土传病害的生防机制及其应用前景 【摘要】文章从竞争作用、重寄生作用、抗生作用、诱导抗性等四个方面对木霉防治土传病原菌的作用机制进行了概述,并对其应用前景进行了展望。 【关键词】木霉土传病害生防机制应用前景 近年来随着温室蔬菜栽培面积的不断扩大,保护地栽培已经成为设施农业发展的新特点,并产生了很好的经济效益,但由于保护地多年连作的原因,为土传病原菌提供了赖以生存的寄主和适宜的繁殖环境。枯萎病、根腐病、青枯病、根结线虫病等都是常见的土传病害,严重制约了高效农业的发展。土传病害可以通过采用喷施农药的手段进行防控,但农药的使用与当前绿色、环保的的大主题相悖,因此,生物防治则表现出了极大的优势。木霉菌就是一类普遍存在于土壤以及植物残体等环境中的生防益菌。它可以拮抗两种或两种以上的病原菌,为了使其发挥更好的效果,我们必须了解木霉拮抗真菌作用的机理[1],本文从竞争作用、重寄生作用、抗生作用、诱导抗性等多方面总结了木霉防治土传病原菌的作用机制,以求达到木霉菌的最佳生防效果,并对其应用前景进行展望。 1.木霉的生防机制 1.1 竞争作用竞争作用参与的双方是生防菌株和病原菌,他们主要是争夺营养和生长空间。木霉菌较病原菌对环境的适应性强,且生命力顽强,生长速度更快, 能够快速抢占生长的空间,将植物表面或侵入点附近低浓度营养物质作为起点,吸收营养,从而抢占病原菌的入侵位点[2],将病原菌的生长控制在很小的范围内。竞争作用机制在木霉菌拮抗植物根际的病原菌的作用较明显,对于已经有病害潜伏的植物根系,如果施用木霉的孢子悬浮液,一段时间后会发现木霉分布满根系的表面;相对地,不喷施木霉的根系,一段时间后,它的根系则布满了病原菌
一、木霉菌概述：木霉菌属真菌门，半知菌亚门，丝孢纲，丝孢目，丛梗孢科，木霉属，广泛存在于不同环境条件下的土壤中。自19世纪中叶，人类对木霉 菌已有了初步的认识，但直到上世纪60年代木霉菌的分类地位才得以确定。 大多数木霉菌可产生多种对植物病原真菌、细菌及昆虫具有拮抗作用的生物活 性物质，比如细胞壁降解酶类和次级代谢产物，并能提高农作物的抗逆性，促 进植物生长和提高农产品产量，因此被广泛用于生物防治、生物肥料及土壤改 良剂。由于化学农药对环境的负面影响较为严重，所以对环境较为友好的生物 农药木霉菌受到了广泛的关注。 绿色木霉是所产纤维素酶活性最高的菌株之一，所产生的纤维素酶对作物有降 解作用，效果非常好，绿色木霉又是一种资源丰富的拮抗微生物，在植物病理 生物防治中具有重要的作用。具有保护和治疗双重功效，可有效防治土传性病害。绿色木霉菌剂防治蔬菜根结线虫病的生物农药，还可以防治黄瓜等葫芦科、番茄等茄科蔬菜的根结线虫病害。绿色木霉菌剂生物农药通过产生抗生素、营 养竞争、微寄生、细胞壁分解酵素、以及诱导植物产生抗性等机制。可直接加 入腐熟剂、有机肥料、生物菌剂等肥料中，在分解纤维、病理防治中有重要作用。 二、木霉菌特点： 系列产品在防治灰霉病上，主要有以下几个防治特点： 1.拮抗作用：木霉菌通过产生小分子的抗生素和大分子的抗菌蛋白或胞壁降解 酶类来抑制病原菌的生长、繁殖和侵染。木霉菌在抗生和菌寄生中,可产生几丁质酶、β21 ,3 葡聚糖酶、纤维素酶和蛋白酶来分解植物病原真菌的细胞壁或分泌葡萄糖苷酶等胞外酶来降解病原菌产生的抗生毒素。同时，木霉菌还分泌抗 菌蛋白或裂解酶来抑制植物病原真菌的侵染。 2.竞争作用：木霉菌可以通过快速生长和繁殖而夺取水分和养分、占有空间、 消耗氧气等,以至削弱和排除同一生境中的灰霉病病原物。 3.重寄生作用:研究发现木霉菌会在特定环境里形成腐霉对灰霉病菌具有重寄生作用,它进入寄主菌丝后形成大量的分枝和有性结构,因而能抑制葡萄灰霉病症 状的出现。 4.诱导抗性:木霉菌可以诱导寄主植物产生防御反应,不仅能直接抑制灰葡萄孢 的生长和繁殖,而且能诱导作物产生自我防御系统获得抗病性。
里氏木霉 一、里氏木霉概述：里氏木霉是多细胞的真核微生物，红褐肉座菌的无性型,隶属于丛梗孢目木霉属。其作为工业菌株用于生产分解不同植物材料的酶类，包括纤维素酶、半纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等，已有多年历史。里氏木霉所产生的一种主要的纤维酶一纤维二糖水解酶，由单拷贝基因编码，其产量可达里氏木霉胞外分泌性蛋白总量的50%。由此可见，纤维二糖水解酶启动子是很强的启动子。因此在对里氏木霉的遗传改造中，常利用纤维二糖水解酶的启动子与终止子序列构建载体，并利的前导肽序列引导重组蛋白进行分泌性表达。里氏木霉具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力；并具有真核的分泌机制，很可能还具有与哺乳动物系统相似的蛋白修饰性能，如：高甘露糖型和N-糖基化等。由于里氏木霉具有以上优良性能，再加之其工业化规模发酵条件已比较成熟，这些都促进了对里氏木霉的遗传改造，为同源或异源分泌性蛋白的产生提供了一条行之有效的途径。 里氏木霉不仅具有适于蛋白生产的诸多优点，且对人没有毒性，在产酶条件下也不产生真菌毒素和抗生素。近年来的实践表明，经过基因工程手术改造的里氏木霉重组菌株是安全无害的。 二、里氏木霉使用说明：里氏木霉主产纤维素酶-纤维二糖水解酶，具有极好的合成蛋白和分泌蛋白的能力，一般采用的发酵方法有两种：固态发发酵和液体深层培养发酵生产纤维素酶，产生的纤维素酶是胞外酶。现在的固体发酵比较的成熟，液态发酵一般采用的是流加发酵。主要用于秸秆腐熟剂添加使用。
产品用途：作为饲料添加剂使用, 作饲料用：1.提高饲料原料中营养物质的转化，提高原料的消化能力和代谢能力，提高动物生产性能。 2.提高内源酶的分泌及活性，促进营养物质的消化吸收，提高饲料利用率。 3.促进动物肠道内有益菌的生长从而抑制有害菌的繁殖，有效提高了动物的免疫力，并有效防止腹泻。 使用量：建议添加80-100克/吨。 添加方法：均匀的混合于粉料中 保存方法:25℃以下低温干燥保存 产品包装：4kg一袋 保质期：阴凉干燥下12个月 注意事项:防暴晒、雨淋，避免高温或阳光直射；防止与皮肤或粘膜性物质接触。
木霉菌液体深层发酵产厚垣孢子技术及产品开发 一、木霉菌的基本生物学特性及生产技术概况 木霉菌(Trichoderma spp.)属半知菌亚门，丝孢纲，丛梗孢目，粘孢菌类，是一类普遍存在的腐生真菌，是真菌类中最有潜力的植物病害生物防治菌株，可用来防治多种植物真菌性病害。常见的木霉属种类有哈茨木霉（T.harzianum）、哈氏木霉（T.hamatum）、多孢木霉（T.polysorum）、康氏木霉（T.koningii）、拟康氏木霉（T. pseudokoningii）、绿色木霉（T.viride）和长枝木霉（T.longibrachiatum）等。在众多种类中，绿色木霉（T.viride）和哈茨木霉（T.harzianum）在植病防治防治效果方面表现尤为突出，是目前生产上主要应用的菌株。 木霉菌在其生长周期内可以产生三种繁殖体，包括菌丝体、厚垣孢子和分生孢子。目前生产上常用的木霉菌剂多为它的活分生孢子制剂，已有许多商品化的木霉菌分生孢子制剂问世，如以色列开发的哈茨木霉T39可湿性粉剂Trichodex，美国的Topshield(哈茨木霉T22)等。 木霉菌的分生孢子形成于瓶形小梗上，分生孢子近球形，椭圆形，或短倒卵形，壁光滑或细胞壁上明显而微小粗糙突起，浅色或无色，大小2～5×2.4～4μm。 木霉菌常常形成厚垣孢子，在基内菌丝上产量大，间生，或者在营养菌丝侧枝的尖端端生，圆形或椭圆形，无色至浅黄色或绿色，大小7~12×10～13μm，表面光滑或细胞壁有加厚现象，无性生殖产生，通常有耐不良环境条件的能力。厚垣孢子是木霉菌重要的繁殖体形式。木霉属厚垣孢子在土壤中存活能力要优于分生孢子，至少能存活20月。 自从木霉的生防效果得到广泛认同以来，许多研究者就对木霉的产孢条件进行了大量的摸索。木霉菌分生孢子的产生条件相对要求较低，在多种固体或液体培养基中都能够产生分生孢子。城市垃圾、腐败的咖啡果皮、禽类的粪便以及混以牛粪的咖啡果皮、香蕉叶、甘蔗渣和麦麸等廉价物质都可作为木霉菌的固体培养基来生产分生孢子，且孢子产量都可达109CFU/克左右。国内外研究发现T.harzianum,T.viride,and G.virens等木霉菌株液体培养基中