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磷酸盐缓冲液配制方法

磷酸盐缓冲液配制方法
磷酸盐缓冲液配制方法

磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法

PBS

PBS (135 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1.5 mM KH2PO4, and 8 mM K2HPO4,pH

PBS缓冲液(~):NaCl 137mmol/L,KCl L,Na2HPO4 L, KH2PO4 L

称7.9g NaCl,0.2g KCl,0.24g KH2PO4(or 1.44g Na2HPO4)和1.8g K2HPO4,溶于800 ml 蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至,最后加蒸馏水定容至1 L。保存于4℃冰箱中即可。

需要注意的是,通常所说的浓度0.01 M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。

母液的配制:

0.2M Na2HPO4:称取 71.6g Na2HPO4-12H2O,溶于 1000ml 水

0.2M NaH2PO4:称取 31.2g NaH2PO4-2H2O,溶于1000ml 水

各种浓度PB(pH=的配制:

先配 0.2M PB (pH=,100ml):取19ml L的 NaH2PO4, 81ml L 的 Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=按相应比例适当稀释即可,如:

0.1M PB(PH=):取 500ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB (PH=):取50ml 0.2M PB,加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB (PH=):取100ml 0.2 M PB,加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCl的话,加入 NaCl 至%(g/100ml)即可。

另:其它各种另 PH值的 0.2M PB(100ml)配方:

pH 0.2M NaH2PO4(ml) 0.2M Na2HPO4(ml)

92 8 90 10

85 15

51 49

45 55

38 62

33 67

28 72

23 77

19ml 81ml

16 84

13 87

7 93

0.01M 磷酸盐缓冲液(PBS)配制方法

称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml蒸馏水中,用HCl调节溶液的pH值至,最后加蒸馏水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034×105Pa)高压下蒸气灭菌(至少20分钟),保存存于室温或4℃冰箱中。

需要注意的是,通常所说的浓度0.01M 指的是缓冲溶液中所有的磷酸根浓度,而非Na 离子或K 离子的浓度,Na 离子和K 离子只是用来调节渗透压的。如果是用于免疫组化的话,则需要在配置的时候分别加入100 u/ml青霉素和链霉素之后再调PH、定容、灭菌消毒。

PH

H2O 1000 1000 1000 1000

NaCl

Na2HPO4

NaH2PO4

根据经验来看,新鲜配置的PBS搅匀后其PH值约在之间,可是在温度的影响下,尤其在夏天,其电离常数发生了改变,在经过昼夜的时间后,PH值会明显改变(我亲自测过偏酸)。所以做实验的同学可要注意了,PH值可能会影响实验结果,甚至可能导致阴性。所以务必记得这个时候和天气,要加强实验条件控制问题。每次使用前最好用试纸测一下过夜了的PBS,如果发生偏酸或偏碱,注意重新换新液。PBS缓冲液

称取NaCl 8g,KCl 0.2g,Na2HPO4?12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g,溶于900ml双蒸水中,用盐酸调pH值至,加水定容至1L,常温保存备用。

PBST缓冲液

取300μl Tween-20 加入PBS 100ml中,混匀后即刻使用。现用现配。

如果是把所有固体加大十倍,配置为浓缩液,工作时候十倍稀释,那么,在刚配好浓缩液时,PH在左右,明显偏酸。不能用盐酸调。虽然可以用氢氧化钠颗粒调,但是有更方便的方法。

十倍稀释以后,PH自动升高到所需要的值。不需要其它任何处理。这个可以先取少量试一试,配好之后再测一次~

的PBS配方详细

1. NaCl 137mmol/L,KCl L,Na2HPO4 L, KH2PO4 L

2. 向烧杯中加入约800 ml的去离子水,充分搅拌溶解。

3. 滴加浓盐酸将pH值调节至,然后加入去离子水将溶液定容至1 L。

4. 高温高压灭菌后,室温保存。

注意:上述PBS Buffer中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充1 mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。

L PBS(磷酸缓冲液Phosphate Buffer Solution,PBS)的配制:

甲液:L Na2HPO4溶液:称取磷酸氢二钠9.465g 7.099g,加蒸馏水至1000ml ;

乙液:L KH2P04溶液: 称取磷酸二氢钾, 9.07g 6.803g,加蒸馏水至1000m1。

将甲乙液分装在棕色瓶内,于4℃冰箱中保存,用时甲、乙两液各按不同比例混合,即可得所需pH的缓冲液,见下表:

pH 甲液ml 乙液mI

你要配制pH=的PBS,可用甲、乙液各50ml混合即可。

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