血液病检验技术实验指导
实验一、活化凝血时间测定
【实验原理】同试管法CT测定。试验中加入白陶土-脑磷脂的悬液以充分激活因子Ⅻ和Ⅺ，并为凝血反应提供丰富的催化表面，故称为活化凝血时间（ACT）；还可以避免因接触激活阶段的不同结果带来的影响，从而提高了本试验的敏感性和重复性。
【试剂】
1．脑磷脂的制备脑磷脂是将兔脑粉中的组织凝血活酶除去参与外源凝血途径的蛋白部分后所得的磷脂，故又称部分凝血活酶。取干燥兔脑粉1.2g加25ml丙酮，放置2h后过滤，将此兔脑粉加氯仿25ml，连续震荡2h，以滤纸过滤，滤液蒸发后为淡黄色蜡状物，刮入玻璃研钵中，加12ml生理盐水研磨成均匀乳剂，以每安瓶0.25ml分装。
2．4%白掏土悬液白陶土2g加入50ml生理盐水中，室温保存，用前摇动。
3．4%白陶土-脑磷脂悬液将脑磷脂用巴比妥缓冲液作1：50稀释后，再加等量4%白陶土悬液混合而成。4οC可保存3天，用时充分混合。
4．巴比妥缓冲液巴比妥钠11.75g、NaCl14.67g、0.1mol/L的HCl430ml，加蒸馏水至2000ml。此缓冲液pH应为7.3，否则影响试验稳定性。
【操作方法】
1．在含4%白陶土-脑磷脂悬液0.2ml的试管中注入受检全血0.5，轻轻混匀。
2．其余操作同试管法CT测定。
【参考值】 1.70±0.76 (1.14～2.05)min。
【临床意义】
1．同试管法CT测定，但较其敏感，重复性也较好，可检出因子Ⅷ：C小于45%的亚临床型血友病。
2．是监测体外循环肝素用量的良好指标之一。
实验二、血浆游离血红蛋白测定（邻一甲联苯胺法）
【实验原理】邻一甲联苯胺在酸性溶液中和过氧化氢与血红蛋白共同作用生成氧化型联苯胺，产生绿色→蓝色→紫色，其颜色的深浅与血浆游离血红蛋白的含量呈正相关。
【试剂】
1．2g/L邻一甲联苯胺溶液称取邻一甲联苯胺0.2g，溶于冰醋酸60ml，加蒸馏水至100ml,置于棕色瓶内于冰箱保存，色变暗应重配。
2．1%过氧化氢溶液用30%过氧化氢原液新鲜配制。
3．10%冰醋酸溶液。取10ml冰醋酸，加蒸馏水至100ml。
4．血红蛋白应用标准液将血红蛋白贮存液用生理盐水稀释成10mg/100ml 备用。
5．抗凝试管取0.2ml 100U/ml肝素于试管内，在80℃以下烘干，每管可抗凝2ml全
血。
【操作方法】
1．将抗凝全血分离血浆。
2．取试管3支，分别标明测定、标准和空白，分别加入血浆、应用标准液，再向
各管中分别加入邻一甲联苯胺溶液及1%过氧化氢溶液各1.0ml，充分混匀，放置10min。
3．于上述3支试管内分别加入10%冰醋酸溶液10ml混匀，用435nm波长比色，以空白调“0”，读各管吸光度。
4．计算：
测定管吸光度
游离Hb( mg/L) = ________________________×100
标准管吸光度
【质量控制】
1. 一切容器均应避免血红蛋白污染，标本勿溶血，否则可引起假阳性。
2. 过氧化氢溶液浓度要准，新鲜配制。
3. 联苯胺醋酸的含水量不能低于15%和超过30%，否则均可引起吸光度降低。
4. 标准液的加入量一定要准。
【参考区间】 <40mg/L
【临床意义】血浆游离血红蛋白含量增加是血管内溶血的特征。血浆中血红蛋白含量超过与血清中结合珠蛋白的结合能力时，其含量即可升高。微血管内溶血时，血浆游离血红蛋白含量均明显升高。PNH为200～2500mg/L，输不合血型后为150～5000mg/L。温抗体型自身免疫性溶血性贫血、镰状细胞贫血及地中海贫血时血浆游离血红蛋白可轻度或中度增加。血管外溶血则正常。
实验三、血清结合珠蛋白测定（比色法）
【实验原理】血清结合珠蛋白（Hp）是肝脏产生的a2糖蛋白，它与游离的血红蛋白（Hb）具有特殊的亲合力，可形成稳定的Hb-Hp复合物，后者在弱酸性（pH4）条件下，具有过氧化物酶的活性，测其活性可间接反映Hp的含量。
【试剂】
1．乙酸缓冲液0.2mol/L（pH4）称取乙酸钠（NaAC·3H2O）2.8g,冰乙酸5.7ml溶解，加蒸馏水至500ml。
2．0.1%（V/V）愈创木酚溶液取1ml愈创木酚溶液于500ml乙酸缓冲液中，加蒸馏水至1000ml。
3．0.3%过氧化氢溶液临用前配制。
4．0.5g/L 高铁血红蛋白液。
【操作方法】
1．取静脉血分离血清，避免溶血。
2．取受检血清0.4ml，与等量高铁Hb 溶液混合。
3．取上述混合液0.2ml，加入于已预温（25℃）的愈创木酚5ml溶液中，再加入0.5ml 0.3%过氧化氢，于25℃水浴内作用8min，注意避光。每份标本均应双份同时测定。
4．用蒸馏水调“0”点，440nm处读取吸光度。
5．由校正曲线查出受检血清中Hp 含量。
【质量控制】
1．受检血清要避免溶血。
2．电泳时温度不能过高，应把电泳槽置于冷水中电泳。否则电泳效果差，区带不易区分。
3．电泳液应经常更换，防止因pH及离子强度改变对电泳效果的影响。
【参考区间】 0.2～1.9gHb/L。
【临床意义】 Hp可与Hb结合，以除去血循环中游离的Hb。各种溶血性贫血，无论血管内溶血还是血管外溶血，血清中Hp含量均明显降低，甚至测不出。Hp降低的程度与溶血程度呈正相关，即溶血越严重，血清Hp越低。如果血管内溶血超出Hp的结合能力，即可出现血红蛋白尿。动态监测表明，急性溶血开始，血循环中游离Hb即迅速增加，随着Hb-Hp 复合物的有效清除，血清Hp也随之恢复正常，因此血清Hp与游离Hb同时测定对溶血性贫血的诊断及疗效观察均具有重要意义。肝病、传染性单核细胞增多症和先天性无Hp血症，Hp亦降低，故诊断溶贫时应除外上述疾患。感染、创伤、肿瘤、肝外阻塞性黄疸及类固醇激素治疗时Hp可增加，这些情况下Hp正常也不能除外溶血。
醋纤膜电泳有助于区别血管内抑或血管外溶血。各种溶血性贫血患者Hp均显著减少，甚至缺如，故电泳后无Hb-Hp区带，而仅有一条未结合的Hb区带。但显著血管内溶血（如PNH）时，还出现一条高铁血红素白蛋白区带，而血管外溶血（如球形红细胞增多症）则无此区带。
实验四、尿含铁血黄素试验（R ou’s test）
【实验原理】含铁血黄素中的高铁离子（Fe3+）在酸性环境中与亚铁氰化钾作用，生成蓝色的低铁氰化铁，称为普鲁氏蓝反应。
【试剂】
1、20g/L亚铁氰化钾水溶液，用时新鲜配制。
2、3%盐酸。
【操作方法】取新鲜尿5ml离心沉淀，弃去上清，于沉淀中加入试剂①和②各1ml，混匀。置室温10min，再离心沉淀，取沉淀物显微镜检查。
【结果判断】如见到有分散或成堆蓝色颗粒（直径约1～3μm）即为阳性。存在于细胞内更为可信。
【质量控制】所用试管、玻片、试剂均应防止铁剂污染，否则出现假阳性。每次试验应做阴性对照。如两种试剂混合后即显深蓝色，提示试剂污染高铁，不宜使用。晨尿阳性率较高。
【临床意义】血浆游离血红蛋白经肾小球滤出后，被肾小管上皮细胞吸收、降解，最后形成含铁血黄素，贮存于细胞内。当细胞脱落随尿排出，即成为含铁血黄素尿。正常为阴性。阳性主要见于慢性血管内溶血，尤其以PNH为多见。即使无血红蛋白尿时也可呈阳性。但阴性结果也不能完全排除血管内溶血，因含铁血黄素颗粒的直径需>1μm时才能从镜下见到。急性血管内溶血时，虽可有血红蛋白血症和血红蛋白尿，但还不能形成足够大的含铁血黄素颗粒，需在数日后才阳性，并可持续数周。
实验五、红细胞渗透脆性试验
【实验原理】红细胞在低渗盐水中，水分透过细胞膜内渗，使之膨胀破坏而溶血。本试验是测定红细胞对不同浓度低渗盐水的抵抗力，以鉴别某些与红细胞形态有关的溶血性贫血。红细胞对低渗盐水的抵抗力与其表面积和体积的比值有关，厚度越大，该比值越小，即渗透脆性越大；反之，脆性越小。以浓度为横坐标，溶血度为纵坐标绘制曲线，找出50%溶血对应的盐浓度，即红细胞中间脆性（MCF），后者较敏感。
【试剂】 171mmol/L NaCl(10g/L)溶液：将100℃烘干的分析纯氯化钠1.0g置于100ml 容量瓶中加少量蒸馏水溶解后，再加蒸馏水至刻度处。
【操作方法】取12支试管，按5-1分别加入10g/L NaCl和蒸馏水。
表5-1红细胞渗透脆性试验操作表（国际单位制）
试管号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12
10g/L NaCl(ml) 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6
蒸馏水（ml） 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 NaCl SI g/L 6.8 6.4 6.0 5.6 5.2 4.8 4.4 4.0 3.6 3.2 2.8 2.4 制 mmol/L 116.3 109.4 102.6 95.8 88.9 82.1 75.2 68.4 61.6 54.7 47.9 41.0
浓度旧制（%） 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40 0.36 0.32 0.28 0.24 然后各管立即加入新鲜静脉血各1滴，并从低浓度到高浓度逐管颠倒混匀，室温静置。
【结果判断】静置室温2h，观察结果，从高浓度开始，上清液呈透明红色而管底有红细胞者为开始溶血管；溶液透明红色，管底完全无红细胞者为完全溶血管。
【质量控制】
1．NaCl溶液浓度要准确，故应干燥精称。
2．注射器和试管必须清洁干燥。
3．应用新鲜静脉血，忌用抗凝血，必要时可用去纤维蛋白血或肝素抗凝血。
4．结果不易判断时可离心后观察。
5. 黄疸病人开始溶血不易观察，严重贫血红细胞太少时均可用等渗盐水将红细胞
洗涤后再配成50%红细胞悬液进行试验。
6．每次试验均应做正常对照，与被检血相差0.4g/L，即有临床意义。
【参考区间】开始溶血：71.8～78.6mmol/L（4.2～4.6g/L）
完全溶血：47.8～54.7mmol/L（2.8～3.2g/L）
中间脆性：68.5～76.2mmol/L
【临床意义】患者比正常对照高6.8mmol/L或中间脆性>76.2mmol/L有诊断价值。
脆性增加：见于遗传性球形红细胞增多症，也见于自身免疫性溶血性贫血伴球形红细胞增多者。
脆性降低：见于缺铁性贫血，各型地中海贫血，HbC、D、E病，脾切除术后及阻塞性黄疸等。
实验六、酸溶血试验（H am’s test）
【实验原理】正常人红细胞在酸化（pH6.6～6.8）的自身新鲜血清中（内含补体和备解素），经37℃孵育1h不溶血。而阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）患者，因红细胞膜缺陷，对补体溶血效应敏感性增强，则发生溶血。
【试剂】
1．0.2mol/L HCl。
2．8.5g/L NaCl溶液。
【操作方法】
1．配制50%红细胞悬液取10ml离心管2支，标明患者、对照，均加入8.5g/L NaCl 溶液5～6ml，分别加入患者和对照者未梢血十几滴，混匀，离心后弃去上清，如此重复洗涤红细胞2次，最后配成50%红细胞悬液备用。
2．分离正常对照血清取与患者同型或AB型血3～5ml，待自然凝固后分离血清。
3．按表6-1操作。
表6-1 酸溶血试验操作表
正常对 50%红细胞 0.2mol/L
管别孵育
照血清悬液（ml） HCl(ml)
患者对照
试验管 0.5 0.025 0.05 37℃
对照管 0.5 0.025 0.05 水溶Ih
【结果判断】试验管溶血，对照管不溶血为阳性；试验管和对照管均不溶血为阴性。
【质量控制】
1．血清酸化后试管必须塞紧，否则CO2逸出使血清酸度降低。
2．抗凝剂中的Na、K可影响pH，故不宜用抗凝血，但可用脱纤维血。
3．为保证补体充足，最好用混合血清，但正常对照红细胞必须用“O”型血。
4．多次输血者，可因血中异常红细胞相对减少，本试验可呈弱阳性或阴性。
【临床意义】正常人为阴性。阳性见于PNH。遗传性球形红细胞增多症及自身免疫性溶血性贫血也可呈阳性。主要与红细胞球形化有关。血清加热破坏补体，若本试验转为阴性则更支持PNH。
实验七、蔗糖溶血试验
【实验原理】低离子强度的等渗蔗糖溶液，在温育条件下可促进补体与红细胞膜的
结合，使红细胞对补体损伤的敏感性增强而导致溶血。
【试剂】92.4g/L蔗糖溶液。
【操作方法】取新鲜抗凝血（枸橼酸盐或草酸盐抗凝）0.5ml加入4.5ml蔗糖溶液中，混匀，置37℃孵育箱内30min后离心，上清液呈红色为阳性，无色为阴性。
【质量控制】注射器、试管应清洁干燥，避免溶血。无蔗糖可用10%葡萄糖代替。
【临床意义】正常人为阴性。阳性见于PNH。本试验较Ham试验敏感，是PNH诊断的筛选试验，但特异性较差。再障-PNH综合征、巨幼红细胞性贫血、自身免疫性溶血性贫血也可呈阳性。本试验最好与Ham试验同时操作，用正常血清代替患者血清做试验，可除外患者补体异常所致的假阴性。
实验八、热溶血试验
【实验原理】利用患者的红细胞和自身新鲜血清（含补体），经37℃孵育后，由于葡萄糖分解产酸，使有内在缺陷的红细胞溶解而溶血。
【操作方法】抽取静脉血1-2ml，取下针头，沿管壁缓缓注入小试管内，避免产生气泡，置37℃孵育箱保温24h，取出后离心。上清呈红色（溶血）为阳性。
【质量控制】注射器要干燥，小试管要清洁，操作过程中避免溶血，防止出现假阳性。孵育24h血块未回缩者，可用小玻棒沿管壁轻轻分离，然后离心，观察结果。
【临床意义】正常人为阴性。阳性见于PNH，其他溶血性贫血亦呈阳性，但阳性率比PNH 为低。本试验用于PNH的筛选。
实验九、高铁血红蛋白还原试验
一、比色定量法
【实验原理】 6-磷酸葡萄糖脱氢酶（G6PD）在戊糖旁路中使6-磷酸葡萄糖转变为6-磷酸葡萄糖酸，同时催化氧化型辅酶II（NADP）形成还原型辅酶II（NADPH），再使氧化型谷胱甘肽（GSSG）形成还原型谷胱甘肽（GSH）。NADPH是高铁血红蛋白还原酶的辅酶，在递氢体美兰和高铁血红蛋白还原酶的作用下，使暗褐色的高铁血红蛋白还原为红色的血红蛋白。当红细胞内G6PD含量不足或缺乏时，高铁血红蛋白还原速度减慢，甚至不能还原。
【试剂】
1．12.5g/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液亚硝酸钠1.25g，葡萄糖5g，加蒸馏水至100ml。置棕色瓶内4οC下可保存1个月。
2．0.0004mol/L美蓝溶液美蓝15mg放乳钵中，加少量蒸馏水研磨后过滤，再加蒸馏水至100ml。室温可保存1～2个月。
3．0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）取Na2HPO4 229.5mg，KH2PO452.2mg，加蒸馏水至100ml。
【操作方法】
1．静脉采血1.5-2.0ml，加入含有38g/L枸橼酸钠抗凝剂的小瓶内（血：抗凝剂=9:1），再加葡萄糖20mg摇匀。
2．取血液1.0ml，加亚硝酸钠-葡萄糖溶液和美蓝溶液各0.05ml，颠倒混合12次，使与空气中的氧充分接触。加塞，37±0.5οC水浴（或孵箱）保温3h。
3．取出后摇匀，取0.1ml加于10ml磷酸盐缓冲液中溶解，2min后于波长635nm处（或红色滤光板）比色，用蒸馏水作空白，测其吸光度（A）。
4．另取原血液0.1ml，按上法加缓冲液溶解后比色，测其吸光度（B）。再于此液中加亚硝酸钠-葡萄糖液1滴，摇匀，5min后比色，测其吸光度（S）。
【计算】
A-B
高铁血红蛋白还原率%=（1- ———）×100
S-B
【参考区间】高铁血红蛋白还原率>75%（比色法）
【质量控制】
1．红细胞比积低于30%时，高铁血红蛋白还原率显著降低，必须调整红细胞与血浆的比例。
2．本试验抗凝剂若用ACD保养液时，该保养液与血液之比为0.15:1。该抗凝血可保存1周。因草酸盐具有还原性，不宜使用。
3．标本不应有凝块或溶血，以免影响测定结果。
4．测定吸光度时，分光光度计的波长应准确。一般要求S比B大8倍以上。
【临床意义】
本试验用于G6PD缺乏症的过筛检查，蚕豆病和伯氨喹啉型药物溶血性贫血患者，由于
临床免疫学检验 1、免疫：是机体识别和排斥抗原性异物的一种生理功能 2、免疫防御（对外）；免疫自稳（防自身免疫病）；免疫监视（防肿瘤）。 3、中枢免疫器官：骨髓、胸腺；外周免疫器官：淋巴结、脾脏（最大）、黏膜相关淋巴组织 4、 B 细胞：通过识别膜免疫球蛋白来结合抗原，介导体液免疫；B细胞受体=BCR=mIg 表面标志：膜免疫球蛋白（SmIg）、 Fc 受体、补体受体、EB 病毒受体和小鼠红细胞受体。 成熟 B 细胞： CD19、CD20、 CD21、 CD22 （成熟 B 细胞的 mIg 主要为 mIgM和 mIgD）同时检测 CD5分子，可分为 B1 细胞和 B2 细胞。 B 细胞功能检测方法：溶血空斑形成试验（体液免疫功能）。 5、T 细胞：介导细胞免疫。共同表面标志是 CD3（多链糖蛋白）；辅助 T 细胞的标志是 CD4；杀伤 T 细胞的标志是 CD8； T 细胞受体 =TCR。 T 细胞和 NK细胞的共同表面标志是CD2（绵羊红细胞受体）； CD3＋ CD4＋CD8－ =辅助性T细胞（Th） CD3＋ CD4－CD8＋ =细胞毒性T 细胞（ Tc 或 CTL）（ T 细胞介导的细胞毒试验） CD4＋ CD25＋ =调节性T细胞（Tr或Treg） T 细胞功能检测：植物血凝素（ PHA）刀豆素（ CONA）刺激 T 细胞增殖。增殖试验有：形态 法、核素法。 T 细胞亚群的分离：亲和板结合分离法，磁性微球分离法，荧光激活细胞分离仪分离法 *E 花环试验是通过检测SRBC受体而对T 细胞进行计数的一种试验； 6、 NK细胞：具有细胞介导的细胞毒作用。直接杀伤靶细胞（肿瘤细胞和病毒感染的细胞） 表面标志： CD16（ ADCC）、 CD56。 测定人 NK细胞活性的靶细胞多用K562 细胞株，而测定小鼠胞株。NK细胞活性则常采 用 YAC-1 细 7、吞噬细胞包括：单核 - 吞噬细胞系统（MPS，表面标志外周血中的单核细胞和组织内的巨噬细胞）和中性粒细胞。CD14，包括骨髓内的前单核细胞、（表达 MHCⅡ类分子） 8、人成熟树突状细胞（DC）（专职抗原呈递功能）：表面标志为CD1a、CD11c和CD83。 9、免疫球蛋白可分为分泌型（ sIg ，主要存在于体液中，具有抗体功能）及膜型（ mIg，作为抗原受体表达于 B 细胞表面，称为膜表面免疫球蛋白） 10、免疫球蛋白按含量多少排序：IgG＞IgA＞IgM＞IgD＞IgE五类（按重链恒定区抗原性（CH）排序） 免疫球蛋白含量测定：单向环状免疫扩散法、免疫比浊法。 11、免疫球蛋白的同种型抗原决定簇位于恒定区（CH、CL） 12、抗体由浆细胞产生。抗体分子上VH和 VL（高变区）是抗原结合部位。
1.造血：造血器官生成各种血细胞的过程。能够生成并支持造血细胞分化、发育、成熟的组织器官称为造血器官。 2.胚胎期造血分为：中胚叶造血、肝脏造血和骨髓造血；出生后的造血分为:骨髓造血和淋巴造血。 3.髓外造血（EH）：正常情况下，胎儿出生2个月后骨髓以外的组织如肝、脾、淋巴结等不再制造红细胞、粒细胞和血小板，但在某些病理情况下，如骨髓纤维化、骨髓增生性疾病及某些恶性贫血时，这些组织又可重新恢复其造血功能，称为髓外造血。 4.造血微环境（HIM）：由骨髓基质细胞、微血管、神经和基质细胞分泌的细胞因子构成，是造血干细胞生存的场所。 5.造血干细胞（HSC）：由胚胎干细胞发育而来，具有高度自我更新能力和多向分化能力，在造血组织中含量极少，形态难以辨认的类似小淋巴细胞样的一群异质性的细胞群体。 6.CFU-S：能形成脾结节的干细胞称脾集落形成单位。 7.造血祖细胞（HPC）：是指一类由造血干细胞分化而来，但部分或全部失去了自我更新能力的过渡性、增殖性细胞群。也称为造血定向干细胞。 8.骨髓间质干细胞（MSC）：是一种成体干细胞，具有多向分化潜能和高度自我更新能力等干细胞的共性，可在不同环境中分化成不同种类的细胞，如成骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞和血管内皮细胞。 9.细胞凋亡：是细胞死亡的一种生理形式，是调控机体发育、维护内环境稳定、由基因控制的细胞自主的有序死亡，又称为程序性细胞死亡。 10.无效造血：幼红细胞在骨髓内分裂成熟过程中发生的“原位溶血”，或红细胞进入循环后很快被破坏，称无效造血。 11.原始粒细胞：胞体直径10-20微米，圆形或类圆形，胞核较大，圆形或类圆形，居中或略偏位，约占细胞的2/3，核染色质呈细粒状染淡紫红色，排列均匀，平坦如一层薄纱，
医学检验免疫学检验归纳 总结
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验（RBC膜上的不完全抗原） 间接coombs试验（血清中的游离抗原） 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 方针滴定法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳 CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫：放射免疫：
免疫放射： 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定（方法）双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定（方法）双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术 P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA （方法）Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 竞争法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法 其他标记技术 化学发光免疫分析技术 CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素，亲和素放大技术
固相膜免疫测定免疫试验IFA 免疫层析试验 ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验 DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验 ELISPOT 免疫印迹法 IBT/EITB 放射免疫浊度试验 RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离 PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞和B 细胞的分离 E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲和板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测 T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞 T细胞 MTT比色法 CFSE（活细胞染料） T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞：B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞：..........
《临床血液学和血液检验》 实验教学大纲 (供五年制检验本科用) 医学检验系《临床检验基础》教学组 2007-01-01 前言 血液学和血液学检验是一门实验性很强的学科，是通过理学、化学、细胞遗传学、免疫学以及现代自动化仪器的方法，采用病人血液及骨髓标本进行定性或定量分析，以协助临床医生对疾病诊断、治疗和疗效观察。 实验课是以《临床血液学和血液检验》（谭齐贤主编）与《临床血液学和血液学检验实验指导》（潘恩潭主编）为参考教材，面向医学检验专业学生的必修课，课程安排共75学时，理论课35学时，实验课40学时。通过本实验课的学习，要求学生掌握正常骨髓血细胞形态学特征、临床常见血液病的细胞学诊断和临床常用细胞化学染色的方法，了解溶血、血栓与止血检验的基本实验方法。 实验教学内容安排表
[目的要求] 掌握红细胞系统各阶段正常骨髓血细胞形态特征。 [教学内容] 实验内容： 1．认真辩认红细胞系各阶段细胞形态特征； 2．用红蓝铅笔描绘红细胞系各阶段细胞； 3．书写实验报告。 重点难点：1．红系各阶段细胞划分标准； 2．正常骨髓片中原始红细胞与早幼红细胞的形态鉴别； 3．中幼红细胞与晚幼红细胞的区别 [学时] 3 实验二血细胞形态 [目的要求] 掌握粒细胞系统各阶段正常骨髓血细胞形态特征。 [教学内容] 实验内容： 1．认真辩认粒细胞系各阶段细胞形态特征； 2．用红蓝铅笔描绘粒细胞系细胞； 3．巩固练习：继续辩认红系细胞，同时注意与粒细胞的区别要点； 4．书写实验报告。 重点难点：1．粒系各阶段细胞划分标准； 2．粒细胞胞质中四种颗粒的鉴别要点。 [学时] 3 实验三血细胞形态 [目的要求] 1．掌握淋巴细胞系统各阶段正常骨髓血细胞形态特征。 2．掌握单核细胞系统各阶段正常骨髓血细胞形态特征。 3．熟悉骨髓非造血细胞（内皮细胞、成骨细胞等）的形态特征。[教学内容] 重点难点：1．淋巴细胞系统与单核细胞系统中原始细胞与幼稚细胞的形态鉴别；
《临床免疫学与检验》 第一章免疫学概论 一、选择题： 1．机体免疫稳定功能低下，可导致（）A．免疫缺陷病B．免疫增殖病 C．自身免疫病D．恶性肿瘤2．免疫监视功能异常可导致（） A．超敏反应B．自身免疫病 C．肿瘤D．免疫缺陷病3．在现代免疫学中，免疫的概念是指机体免疫系统具有（） A．发现并排除有毒因子的能力 B．识别和排除抗原性异物的能力 C．抵抗并清除传染性因子的能力 D．发现和消除恶变细胞的能力 4．免疫防御、免疫稳定和免疫监视是A．免疫学的三大内容 B．免疫细胞的三大功能 C．免疫器官的三大功能 D．免疫系统的三大功能 5．最早用人痘接种预防天花的国家是（）A．中国B．美国 C．英国D．俄罗斯 6．免疫自稳功能是指： A．抑制病原微生物在体内繁殖和扩散 B．防止自身免疫病的发生 C．清除体内病原微生物，防止感染 D．清除体内突变细胞，防止肿瘤发生 E．防止病毒的持续感染 7．人体内最大的免疫器官是： A．胸腺B．骨髓C．脾 D．淋巴结E．法氏囊 8．人类B细胞分化发育成熟的器官是：A．骨髓B．脾C．淋巴结 D．胸腺E．腔上囊 9．免疫应答反应的过程是： A．识别阶段B．活化阶段 C．活化和效应阶段 D．识别和效应阶段 E．识别、活化和效应阶段 10．CD4+T 细胞与CD8+T 细胞数的正常比是： A．2～2.5 B．1.5～2 C．＞2.5 D．＜0.5 E．0.5～1 11．可非特异直接杀伤靶细胞的是：A．NK 细胞B．TH 细胞 C．Ts 细胞D．Tc 细胞 E．TCRαβ＋细胞 12．与抗体包被的红细胞相结合形成EAC 玫瑰花环的物质是： A．CD32 B．CD35 C．CD21 D．CD40 E．CD80 13．T 淋巴细胞与绵羊红细胞结合形成E 花环的分子是： A．CD8 B．CD2 C．CD28 D．CD3 E．CD4 14．新生儿从初乳中获得的Ig主要是：A．IgE B．IgD C．IgG D．SIgA E．IgM 15．具有调理作用的主要Ig是： A．IgA B．IgM C．IgG D．IgD E．IgE 16．Ig 的生物学功能是： A．调理作用B．呈递作用 C．合成分泌细胞因子 D．细胞毒作用 E．参与T淋巴细胞在胸腺内的分化17．介导ADCC 的主要细胞是： A．T 淋巴细胞B．B 淋巴细胞 C．NK 细胞D．中性粒细胞 E ．嗜酸性粒细胞
临床血液学检验 1.骨髓造血:骨髓的造血细胞大部分来源于肝脏，部分来源于脾脏。骨髓是产生红细胞，粒细胞和巨核细胞的主要场所，骨髓也产生淋巴细胞和单核细胞，因此骨髓不仅是造血器官，同时也是一个中枢淋巴器官。 2.髓外造血:正常情况下，胎儿出生2个月后，骨髓以外的组织如肝、脾、淋巴结等不再制造红细胞、粒和血小板，但是在某些病理情况下，这些组织又可从头恢复其造血功能，称为髓外造血。 3.血细胞的分化是指分裂后产生新的子细胞在生物学性状上产生了新的特点，即通过特定基因的表达合成了特定的蛋白质，与原来的细胞有了质的例外。这种分化过程是不可逆的，是血细胞失去某些潜能同时又获得新功能的过程。 4.血象和骨髓象检验是诊断血液系统疾病、观察疗效及病情的严重手段之一。 5.粒细胞系统包括原始粒细胞、早幼粒细胞、中幼粒细胞、晚幼粒细胞、杆状粒细胞和分叶核粒细胞，粒细胞是由于胞质中常有许多颗粒而得名的。颗粒从II型原始粒细胞开始出现，称为非特异性颗粒（又称为A颗粒、嗜天青颗粒、嗜苯胺蓝颗粒），从中幼粒细胞开始出现特异性颗粒（即S颗粒），S可以有三种:中性颗粒、嗜酸性颗粒及嗜碱性颗粒。 6.早幼粒细胞其胞体直径12～25um,较原始粒细胞大。 7.骨髓穿刺:最为理想的穿刺部位是髂骨上棘（包括髂骨前、髂骨后上棘） 8.骨髓取材情况判断:（1）取材满意:a.抽吸骨髓液时，患者感到有瞬间的酸痛感（有的患者无这种感觉）；b.抽出的骨髓液中有较多的黄色小粒（多为骨髓小粒，有的是脂肪）；c.显微镜下涂片中可见较多骨髓特有细胞:稚童粒细胞、有核红细胞、巨核细胞、浆细胞、造骨细胞、破骨细胞、脂肪细胞、肥大细胞、组织细胞、吞噬细胞等；d.中性杆状核粒细胞/分叶核粒细胞比值大于外周血中性杆状核粒细胞/分叶核粒细胞比值，有核细胞数大于外周血有核细胞数。（2）取材失败（即骨髓稀释）:如抽吸骨髓液时混进血液，称为骨髓部分稀释；
一、名词解释第1章概论 1.免疫学： 2.免疫分子： 3.补体： 4.临床免疫学： 第2章抗原抗体反应 5.抗原抗体反应： 6.抗原抗体反应特异性 7.可逆性 8.比例性 9.抗原抗体反应的等价带（zoneofequivalence） 10.最适比（optimalratio） 带现象（11.zonephenomenon） 第3章免疫原和抗血清的制备 12.免疫原(immunogen) 半抗原 13.免疫佐剂14. 多克隆抗体15.(polyclonal antibody, pcAb) 凝集反应章5第 16.凝集反应 直接凝集反应 17.间接凝集反应18. 明胶凝集试验19.
第6章沉淀反应 20.沉淀反应 絮状沉淀试验 21. 免疫浊度测定 22.凝胶内沉淀试验23. 单项扩散试验24. 双向扩散试验 25. 免疫电泳技术26. 对流免疫电泳 27. 火箭免疫电泳28. 免疫电泳29. 免疫固定电泳30.第19章补体检测及应用31.补体 免疫溶血法32. 33.补体结合试验 第22章感染性疾病与感染免疫检测 34.感染 第23章超敏反应性疾病及其免疫检测35.超敏反应 Ⅰ型超敏反应 36. Ⅱ型超敏反应 37.Ⅲ型超敏反应38. Ⅳ型超敏反应 39. 第24章自身免疫性疾病及其免疫检测
40.自身耐受 自身免疫 41. 自身免疫病42. 自身抗体43. 抗核抗体44. 第25章免疫增殖性疾病及其免疫检测 45.免疫增殖性疾病 免疫球蛋白增殖病46. 47.本周蛋白 血清区带电泳 48.免疫电泳49. 免疫固定电泳 50.第26章免疫缺陷性疾病及其免疫检验51.免疫缺陷病 获得性免疫缺陷综合征 52. 第27章肿瘤免疫与免疫学检验 53.肿瘤免疫学 肿瘤抗原 54.肿瘤标志物55. 第28章移植免疫及其免疫检测 56.移植 主要组织相容性复合体 57.移植排斥反应58. 移植物抗宿主反应59.(GVHR) 血清学分型法60. 二、填空题。．
临床医学检验高级职称题-临床血液学 1、不符合温抗体型自身免疫性溶血性贫血的临床特征是（） A.贫血 B.黄疸 C.脾肿大 D.完全性抗体 E.抗体为IgG型 2、不符合恶性肿瘤所致贫血的是（） A.肿瘤未侵犯骨髓时，不会发生溶血 B.主要与出血有关 C.营养不良 D.造血功能减低 E.除贫血外，血象和骨髓象无特殊改变 3、最适宜用来鉴别急性单核细胞白血病和急性粒细胞白血病的细胞化学染色是（） A.过氧化物酶 B.糖原 C.碱性磷酸酶 D.α–丁酸萘酚酯酶和氟化钠抑制试验
E.酸性磷酸酶 4、有关含铁血黄素尿的说法，下列不正确的是（） A.慢性血管内溶血时少见 B.Rous试验可检出 C.急性溶血初期可阴性 D.Hb在肾小管上皮细胞内分解而成 E.阴性不能排除血管内溶血 5、血清结合珠蛋白测定，下列不正确的是（） A.电泳法 B.酶联免疫法 C.比色法 D.免疫电泳法 E.以上都是 6、血小板膜糖蛋白Ⅱb／Ⅲa（GPⅡb／Ⅲa）复合物与下列哪种血小板功能有关（） A.黏附功能 B.聚集功能 C.分泌功能 D.凝血功能
E.血块收缩功能 7、患者以皮肤黏膜出血为主要临床表现，应选下列哪一组筛选试验（） A.血小板计数，束臂试验，出血时间测定 B.血小板计数，凝血酶时间，出血时间测定 C.部分活化凝血活酶，凝血酶原时间测定及凝血酶时间测定 D.纤维蛋白原，血块收缩，血小板计数 E.血小板计数，部分活化凝血活酶时间测定，出血时间测定 8、对多发性骨髓瘤诊断具有决定性意义的检查是（） A.骨髓穿刺涂片形态学检查 B.外周血涂片检查 C.血沉测定 D.血清钙、磷和碱性磷酸酶测定 E.血清免疫电泳 9、不属再生障碍性贫血的发病机制是（） A.造血干细胞损伤 B.造血微环境损伤 C.免疫性造血抑制 D.DNA合成障碍
《临床血液学与检验》课程教学大纲 课程编号： 课程名称：临床血液学与检验 英文名称：clinical hematology and inspection 课程类型：专业课必修考试 总学时：122 学分：6.5 理论课学时：58 实验课学时：64 适用对象：医学检验专业本科学生 一、课程的性质和地位 临床血液学检验是临床医学中不可缺少的实验性学科，随着分子生物学、物理学、电子学等科学技术的迅速发展，新的检验技术促进了预防医学及临床医学不断前进。临床血液学检验是应用血细胞生理学、血液生化学、血液免疫学、遗传血液学、血液流变学、实验血液学等学科的科学方法，检查造血微环境、造血细胞、骨髓细胞及血栓与止血的各种凝血因子等。因此，临床血液学与检验是以血液学的理论为基础、以检验学的实验方法为手段、以临床血液病为工作对象，创造了一个理论－检验－疾病相互结合、紧密联系的新体系。是医学科学中不可缺少的应用学科，是医学检验专业学生的专业课之一。 通过临床血液学检验的学习，要求学生在理论上弄清实验原理，掌握基本理论和基本技能，以及各类造血细胞的生理、病理形态与各类常见血液病的临床基础及检验技术，能够理论联系实际。结合临床培养有解决问题和分析问题能力及具有初步科研工作能力的医学检验医师。 在临床血液学检验教学中重点讲授造血检验、细胞形态学、细胞组织化学染色、各类贫血、白血病、出凝血疾病等疾病的检查原理、操作方法、评价注意事项及临床意义等。 二、教学环节和教学方法 血液学检验的教学环节包括课堂讲授、实验、考试等。其中课堂是通过教师对指定教材部分章节的讲解，结合多媒体课件及细胞形态的图示以启发式方法教学。实验是教师在实验室里通过指导学生观察实验标本、挂图、图谱等，并结合电化教学、多媒体实验教学、要求学生细胞绘图等手段，强化记忆，并在教学过程中让学生尽早到医学检验室轮流进行实习，更好地配合理论教学。 三、教学内容及要求 第一篇绪论
《免疫学与免疫学检验》课程教学大纲 一、课程的性质和任务 《免疫学与免疫学检验》课程是高等职业院校医学检验技术专业的专业核心主 干课程是从事医学实验室工作专业技术人员的一门必修的专业课程。随着免疫学和 免疫学技术的发展免疫学检验技术成为医学检验中的一个重要组成部分。免疫学检 验技术以其特异性强、灵敏度高、结果稳定、方便快捷和成本低廉的特点应用范围 廷伸至医学检验专业的各个领域尤其是床旁检验POCT产品的应用当中发展成为一 种微量化学定性或定量分析方法。对疾病的病因、发病机制、诊断、治疗和特异性 预防起着重要的作用。 二、课程教学目标 1. 使学生掌握抗原、免疫球蛋白、抗原和抗体反应、补体和免疫应答等免疫学 基础知识和理论，熟悉免疫系统和免疫分子概念和知识。 2. 使学生能够熟悉免疫学检验的基本原理和设计方法，使学生掌握抗体制备技术、免疫比浊分析、酶免疫分析术和荧光免疫技术等基本检验方法。 3. 使学生掌握免疫学常规仪器的操作和维护，使学生熟悉免疫学实验室的一般 管理方法。 三、教学内容与要求 第一章绪论 【教学目的】通过本章学习，了解免疫学的主要成就及与医学的关系，理解免疫学研究的基本内容，掌握免疫学的基本概念 【教学重点与难点】本章重点是免疫学基本概念，难点是免疫系统。
【教学内容】 第一节免疫学和免疫学检验概况 一、免疫应答的类型和特征 二、免疫学发展简史 三、免疫学检验 第二节免疫系统 一、免疫器官 1、中枢免疫器官 2、外周免疫器官 二、免疫细胞 1、淋巴细胞 2、免疫辅佐细胞 三、免疫分子 【教学建议】课堂讲授 第二章免疫化学 【教学目的】通过本章学习，了解补体激活的三条途径，理解抗原抗体反应的基本原理、特点和影响因素，掌握抗原的基本性质、免疫球蛋白的结构和功能【教学重点与难点】本章重点是掌握抗原的基本性质、免疫球蛋白的结构和功能，难点是抗原抗体反应的基本原理、特点和影响因素。 【教学内容】 第一节抗原 一、抗原的性质 1、异物性 2、理化特性 3、其他因素 二、抗原的特异性 1、抗原决定簇 2、共同抗原和交叉反应
第六章常见血液病的检验 A1/A2型题 1．慢性感染性贫血与缺铁性贫血的鉴别要点是（）。 A．血清铁测定 B．红细胞内游离原卟啉测定 C．小细胞低色素性贫血 D．骨髓细胞外铁 E．骨髓红细胞内铁 【答案】D 2．下列属于小细胞低色素性贫血的是（）。 A．MCV105fL，MCH36pg，MCHC410g/L B．MCV100fL，MCH34pg，MCHC380g/L C．MCV82fL，MCH29pg，MCHC350g/L D．MCV71fL，MCH27pg，MCHC340g/L E．MCV31fL，MCH22pg，MCHC300g/L 【答案】E 3．血清铁降低，见于（）。 A．缺铁性贫血 B．溶血性贫血 C．再生障碍性蛋白 D．铁粒幼细胞性贫血
E．铁剂治疗过量 【答案】A 4．缺铁性贫血与铁粒幼细胞贫血鉴别主要选择的检查是（）。 A．MCV、MCH、MCHC测定 B．血清铁饱和度 C．骨髓铁染色 D．红细胞内游离原卟啉测定 E．血清总铁结合力 【答案】C 5．中度贫血血红蛋白含量为（）。 A．100～120g/L B．80～100g/L C．60～120g/L D．60～90g/L E．30～60g/L 【答案】E 6．不属于贫血的实验室检查的是（）。 A．血常规 B．网织红细胞数量 C．红细胞形态检查 D．骨髓细胞形态检查 E．珠蛋白变性检查
【答案】E 7．贫血患者血片示红细胞大小不等、中心淡染；血清铁饱和度16％。最可能的诊断是（）。 A．铁幼粒细胞贫血 B．缺铁性贫血 C．巨幼细胞贫血 D．再生障碍性贫血 E．自身免疫性溶血性贫血 【答案】B 8．下列属大细胞性贫血的疾病是（）。 A．缺铁性贫血 B．巨幼细胞性贫血 C．溶血性贫血 D．PNH E．珠蛋白生成障碍性贫血 【答案】B 9．红细胞形态偏小，中心淡染区扩大，受色浅淡，骨髓铁染色又能发现细胞内、外铁均消失，为进一步确定贫血的病因，宜首选的检查为（）。 A．血清叶酸、维生素B12测定 B．Coombs试验 C．Ham试验 D．铁代谢检查 E．红细胞寿命测定
临床检验血液学配套试题及答案
第二章造血基础理论 一、选择题 A 型题 1. 血细胞由原始向成熟发育演变规律不正确的是 A. 胞体由大到小 B. 巨核细胞由小到大 C. 核染色质由紧密粗糙到疏松细致 D. 胞浆由少到多 E. 胞质内颗粒从无到有 2. 人体内具有多项分化能力的最早的造血细胞是 A. 红系祖细胞 B. 造血干细胞 C. 粒系祖细胞 D. 巨核系祖细胞 E. T淋巴系祖细胞 3. 成人在正常情况下产生红细胞、粒细胞和血小板的唯一器官是： A. 肝脏 B. 脾脏 C. 骨髓 D. 胸腺 E. 淋巴结 4. 关于造血祖细胞下述哪项是正确的 A. 具有多项分化能力 B. CD34+ CD38- C. CD34+ Lin- D. 分化能力较局限 E. 高度的自我更新能力 5. 胚胎期造血下列错误的是 A. 卵黄囊壁上的血岛是人类最初的造血中心 B. 肝脏造血是由卵黄囊血岛的造血干细胞迁移到肝脏而引起的 C 胚胎第五个月以后骨髓成为造血中心 D. 淋巴结不参与胚胎期造血 E. 胎肝的造血干细胞经血流入脾，在此增殖、分化和发育 6. 参与造血正向调控的细胞因子是 A. 干细胞因子和转化生长因子 B. 干细胞因子和趋化因子 C. 干细胞因子和集落刺激因子 D. 集落刺激因子和转化生长因子 E. 干细胞因子和干扰素 7. 正常成人骨髓造血分布区域下列不符合的是 A. 胸骨 B. 肋骨 C. 下肢股骨远心端 D. 脊椎骨 E. 颅骨 X 型题 8. 关于红骨髓下列正确的是 A. 含大量发育的各阶段血细胞而呈现红色 B. 18岁后红骨髓仅存在于扁骨、短骨及长管骨的近心端 C. 红骨髓约各占骨髓总量的50%左右 D. 红骨髓是脂肪化的骨髓 E. 在正常情况下不再参与造血，但仍保留造血潜能 9. 血细胞分化是指 A. 分化过程是不可逆的 B. 分裂后产生新的子细胞在生物学性状上产生了新的特点 C. 通过特定基因的表达合成了特定的蛋白质 D. 血细胞失去某些潜能，转变为具有新功能细胞的过程 E. 分化后的新细胞与原来的细胞有了质的不同 10. 造血干细胞出现的表面标志是 A. Lin- B. CD38+ C. CD38- D. CD34- E. CD34+ 11. 造血干细胞的基本特征是 A. 对称分裂能力 B. 高度自我更新能力 C. 定向分化能力 D. 多向分化能力 E. 有明显的形态特征 12. 造血微环境包括： A. 网状细胞 B. 造血细胞 C. 基质细胞和基质细胞分泌的细胞因子 D. 骨髓微血管系统 E. 造血岛 13. 胚胎期参与造血的器官有： A. 骨髓 B. 肝脏 C. 胸腺 D. 脾脏 E. 淋巴结 14 髓外造血可发生在下述哪些情况： A. 婴幼儿严重贫血 B. 急性再障 C. 骨髓硬化症 仅供学习与交流，如有侵权请联系网站删除谢谢35
临床血液学检验考试题 姓名：学号：班级： 一、单项选择题 A型题（每题1分，共10分） 1、带3蛋白是红细胞膜中含量最多的一种（D） A、锚蛋白 B、收缩蛋白 C、肌动蛋白 D、跨膜糖蛋白E肌球蛋白 2、影响DNA合成的常见因素（ E ） A、丙酮酸激酶缺乏 B 、铁缺乏 C 、维生素C缺乏 D 、微量元素缺乏E、叶酸和维生素B12(vitamin B12)缺乏 3、早期诊断缺铁性贫血的主要指标是（ A ） ` A、血清铁蛋白降低 B 、血清铁降低 C 、转铁蛋白饱和度降低 D 、总铁结合力升高 E 、铁粒幼细胞增多 4、PAS染色对下列哪项最有意义: （A） A、巨贫与红血病的鉴别 B、急淋与急非淋的鉴别 C、PNH与再障的鉴别 D、外周血象检查 E、以上均不正确 5、活化蛋白C可灭活下列哪些因子（C） A、因子Ⅹa、Ⅺa B、因子Ⅶa、Ⅹa C、因子Ⅴa、Ⅷa D、因子Ⅹa、Ⅸa E、AT、HCⅡ 6、关于NAP的临床意义，哪项是错误的（ C ） A、慢性粒细胞白血病时NAP活性降低，而类白血病反应时则增强 B、{ C、化脓性感染时NAP活性增加，而病毒感染时则无变化 D、急性淋巴细胞白血病时NAP活性降低，而急性粒细胞白血病时则增强 E、慢性粒细胞白血病患者急性变时NAP活性增强 F、再生障碍性贫血患者NAP活性增强，PNH时则降低 7、下列哪项符合血管外溶血的实验室指标（ B ） A、血浆中出现高铁血红素 B、血浆血红素结合蛋白下降 C、尿中含铁血黄素试验阴性 D、尿中出现游离血红蛋白 E、血浆游离血红蛋白增高 8、急性粒细胞白血病与急性淋巴细胞白血病的鉴别依据是（D） A、巨核细胞受抑、血小板减少 B、原始细胞形态差别显著 C、骨髓增生明显活跃 [ D、POX染色 E、胞质中可见Auer小体 9、由可溶性纤维蛋白单体形成交联性纤维蛋白的过程中，参与的凝血因子有（ C ） A、因子ⅩⅢ B、因子ⅩⅢa C、因子ⅩⅢa 、Ca2+ D、因子Ⅹ E、因子Ⅹa、Ca2+ 10、下列检查哪项改变与溶血无关（ B ）
三大免疫结合反应 直接凝集反应玻片凝集反应 试管凝集反应 间接凝集反应间接血凝试验 胶乳凝集试验 凝集反应 P47 明胶凝集试验 自身细胞凝集试验 抗球蛋白试验直接coombs试验(RBC膜上的不完全抗原) 间接coombs试验(血清中的游离抗原) 液体内沉淀试验絮状沉淀试验抗原稀释法 抗体稀释法 免疫浊度测定 沉淀反应凝胶内沉淀试验单向扩散试验 双向扩散试验 免疫电泳技术对流免疫电泳CIEP 火箭免疫电泳RIE 免疫电泳IEP 免疫固定电泳 交叉免疫电泳 三大标记技术 一、放射免疫:放射免疫: 免疫放射: 二、荧光免疫技术P81 荧时间分辨荧光免疫测定(方法) 双抗体夹心法 光 免固相抗体竞争法 疫 分固相抗原竞争法 析 类 型 荧光偏振免疫测定测定 荧光酶免疫测定(方法) 双抗体夹心法 双抗原夹心法 固相抗原竞争法 三、酶免疫技术P95 酶免疫技术分类均相酶免疫测定 EMIT 克隆酶测定分析 异相酶免疫测定异相液相酶免疫测定 固相酶免疫测定 酶联免疫吸附试验ELISA (方法)Ab 双抗体夹心法 双位点一步法 Ag 间接法 双抗体夹心法 竞争法 捕获法
其她标记技术 化学发光免疫分析技术CLIA 直接化学发光免疫分析CLIA P109 类型化学发光酶免疫分析CLEIA 电化学发光免疫分析ECLIA 生物素,亲与素放大技术 固相膜免疫测定免疫试验IFA 免疫层析试验ICA 膜免疫测定的种类斑点酶免疫吸附试验DOT-ELISE 酶联免疫斑点试验ELISPOT 免疫印迹法IBT/EITB 放射免疫浊度试验RIPA 免疫细胞 1、分离方法外周血单个核细胞分离PBMC P161 淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱滤过法 磁铁吸引法 Percoll分离液法 T细胞与B 细胞的分离E花环沉降法 尼龙毛柱分离法 T细胞亚群分离亲与板结合分离法 磁性微球分离法 荧光激法细胞分离仪分离法 2、免疫细胞表面标志的检测方法抗体致敏细胞花环法 P174 免疫细胞化学法 免疫荧光法 FCM 3、功能检测T 细胞增殖试验方法形态学 P178 3H-TdR掺入法 淋巴细胞T细胞MTT比色法 CFSE(活细胞染料) T细胞分泌功能检测 T细胞介导的细胞毒性试验 体内试验 B细胞:B细胞增殖试验、溶血空斑实验、ELISPOT、体内试验 NK细胞:、、、、、、、、、、 吞噬细胞、、、、、、、、、、、、、、、
抗原抗体反应：是指抗原与相应抗体在体内或体外发生的特异性结合反应。 抗原抗体间的结合力涉及静电引力、范德华力、氢键和疏水作用力，其中疏水作用力最强，它是在水溶液中两个疏水基团相互接触，由于对水分子的排斥而趋向聚集的力。 亲和性（affinity）：是指抗体分子上一个抗原结合点与一个相应抗原表位（AD）之间的结合强度，取决于两者空间结构的互补程度。 亲合力（avidity）：是指一个完整抗体分子的抗原结合部位与若干相应抗原表位之间的结合强度，它与亲和性、抗体的结合价、抗原的有效AD数目有关。 抗原抗体反应的特点：特异性、可逆性、比例性、阶段性。 带现象（zone phenomenon）：一种抗原-抗体反应的现象。在凝集反应或沉淀反应中，由于抗体过剩或抗原过剩，抗原与抗体结合但不能形成大的复合物，从而不出现肉眼可见的反应现象。抗体过量称为前带，抗原过量称为后带。 免疫原（immunogen）：是指能诱导机体免疫系统产生特异性抗体或致敏淋巴细胞的抗原。免疫佐剂（immuno adjustvant）：简称佐剂，是指某些预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对该抗原的免疫应答或改变免疫应答类型的物质。 半抗原（hapten）：又称不完全抗原，是指仅具有与抗体结合的能力(抗原性)，而单独不能诱导抗体产生（无免疫原性）的物质。当半抗原与蛋白质载体结合后即可成为完全抗原。 载体（carrier）：结合后能给予半抗原以免疫原性的物质。 载体效应：初次免疫与再次免疫时，只有使半抗原结合在同一载体上，才能使机体产生对半抗原的免疫应答，该现象称为~。 单克隆抗体（McAB）：将单个B细胞分离出来，加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生的针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，即~。 多克隆抗体（PcAb）：天然抗原分子中常含多种不同抗原特异性的抗原表位，以该抗原物质刺激机体免疫系统，体内多个B细胞克隆被激活，产生含有针对不同抗原表位的免疫球蛋白，即~ 基因工程抗体（GEAb）：是利用DNA重组及蛋白工程技术，从基因水平对编码抗体的基因进行改造和装配，经导入适当的受体细胞后重新表达的抗体。 凝集反应（agglutination reaction）：是指细菌和红细胞或红细胞等颗粒性抗原或表面包被可溶性抗原（或抗体）的颗粒性载体与相应抗体（或抗原）特异性结合后，在适当电解质存在下，出现肉眼可见的凝集现象。 ①直接~：在适当电解质参与下，细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原直接与相应抗体结合后出现肉眼可见的凝集现象，称为~。 ②间接~：可溶性抗原（或抗体）先吸附于适当大小的颗粒性载体（如正常人O型红细胞、细菌、胶乳颗粒等）的表面，然后与相应抗体（抗原）作用，在适宜的电解质存在条件下出现特异性凝集现象，称为~。其敏感度高于直接凝集反应和沉淀反应。 正向间接凝集反应：用可溶性抗原致敏载体以检测标本中的待检抗体。 反向间接凝集反应：用特异性抗体致敏载体以检测标本中的待检抗原。 间接凝集抑制反应：用抗原致敏的载体颗粒及相应的抗体作为诊断试剂，检测标本中是否存
《免疫学检验》教学大纲 课程编码：10272042 课程名称：免疫学检验 英文名称：Immunological detection technique 开课学期：7 学时学分：40/2.5 课程类型：专业课 开课专业：预防医学专业 选用教材：《免疫学检验》人民卫生出版社2006年8月第一版 主要参考书：1. 《免疫学检验》吕世静主编人民卫生出版社2003年2月第 2版 2. 《临床免疫学和免疫检验》王兰兰主编2004年1月第3版 3. 《简明免疫学技术》朱正美主编科学出版社2002年7月第 1版 4. 《免疫学常用实验技术》柳忠辉主编科学出版社 执笔人：黎明兰 一、课程性质、目的与任务 免疫学检验是研究免疫学技术在医学领域中应用的一门学科，是预防医学专业（卫生检验方向）一门重要的专业课。免疫学检测技术因其特异性强、敏感性高、稳定、简便和快速的优势，现已广泛应用于生物学、临床医学、预防医学及其他有关领域。 通过对该课程的学习，掌握各类免疫学检验技术的原理、类型、技术要点、实际应用及方法学评价，更好的为防病治病服务。 二、教学基本要求 1.掌握免疫学检验常用技术的原理、技术要点、应用及方法学评价。 2.掌握免疫学检验常用技术的测定方法。 3.掌握免疫学技术在免疫预防计划免疫、动植物检疫、健康相关产品免疫 功能评价中的应用。 4.了解免疫学技术的最新进展及与其他学科的关系。 三、各章节内容及学时分配 第一章抗原抗体的纯化（2学时） 教学目的与要求 掌握抗原和抗体纯化方法的基本原理、方法评价和应用。了解抗原抗体各种纯化方法的程序及分离物的选择。 教学内容 第一节盐析法 一、原理 二、常用中性盐 三、操作步骤 四、影响因素 五、方法评价与应用 第二节凝胶层析法
血液检验 红细胞检验 （一）再生障碍性贫血（AA） 简称再障，是因为化学、物理、生物因素及不明原因使骨髓造血组织减少导致骨髓造血功能衰竭，引起外周血全血细胞减少的一组造血干细胞疾病。 特征是造血干细胞功能障碍和（或）造血微环境功能障碍，造血红髓被脂肪组织所替代（红髓脂肪变），导致全血细胞减少的一类贫血。临床表现为进行性贫血、出血和感染（伴发热），罕有淋巴结核肝脾肿大。 【分型】 国内根据其病程及临床表现和血象、骨髓象特征将AA分为急性和慢性。国外主要注重实验室特征，将AA依据严重程度分为重型（I 型、II 型）和轻型（I 型、II 型） ①急性AA：起病急、进展迅速、病程短。贫血呈进行性（加重），常伴有严重出血，出血部位广泛并常有内脏出血；半数病例起病时即有感染，严重者可并发败血症。治疗效果差，预后不佳，常在一年内死亡。此型又称重型再障- I 型。 ②慢性AA：起病缓慢、病程进展慢、病程较长（一般在4年以上）。以贫血为主，出血和感染较轻，经恰当的治疗，病情可缓解或治愈，预后较好。此型又称轻型再障。慢性AA病情恶化，血象和骨髓象转变为急性AA的表现，称为重型AA- II 型。 【检验】 1、血象：以全血细胞减少，网织红细胞绝对值降低为主要特征，三系减少的程度各病例有所不同。贫血多为正常细胞性，少数为轻、中度大细胞性。网织红细胞绝对值明显减少。各类白细胞都减少，其中以中性粒细胞减少尤为明显，而淋巴细胞比例相对增多
血小板不仅数量减少，而且体积小、颗粒减少。急性AA时，网织红细胞＜1%，绝对值＜15×10^9/L；中性粒细胞绝对值常＜0.5×10^9；血小板＜20×10^9/L；慢性再障血红蛋白下降速度较慢，网织红细胞、中性粒细胞和血小板减低，但各指标叫急性再障指标为高，达不到急性再障的程度。 2、骨髓象 ①.急性再障：红髓脂肪变是AA的特征性病理改变，骨髓涂片可见脂肪滴明显增多。多部位穿刺结果均显示有核细胞增生减低。造血细胞（粒/红/巨核系细胞）明显减少，早期阶段细胞减少或不见，巨核细胞减少或缺如，无明显的病态造血。非造血细胞（包括：淋巴/浆/肥大细胞等）相对增多，非造血细胞比例增高，大于50%，淋巴细胞比例可增高达80%。如有骨髓小粒，染色后镜下为空网状结构或为一团纵横交错的纤维网，其中造血细胞极少，大多为非造血细胞。 ②.慢性再障：病程中骨髓呈向心性损害，骨髓拥有代偿能力仍可有残存散在的增生灶，常因不同的穿刺部位，骨髓象表现不一致，需多部位穿刺或进行骨髓活检，才能获得较明确的诊断。多数患者骨髓增生减低，三系或两系减少，巨核细胞减少明显。非造血细胞比例增加，常＞50%。如穿刺到增生灶，骨髓可表现为增生良好，红系代偿性增生，以核高度固缩的“炭核”样晚幼红细胞多见，粒系减少，主要为晚期及成熟粒细胞。骨髓小粒中非造血细胞增加，以脂肪细胞较多见。
免疫学简介 一、免疫学概念与免疫应答 免疫应答过程：抗原的识别、处理、信息传递、免疫细胞的激活、增值、分化以及产生一系列的免疫效应分子 免疫应答分为识别阶段、活化阶段、效应阶段 1、识别阶段：是巨噬细胞等抗原呈递细胞对外来抗原或自身变性抗原进行识别、摄取、降解和递呈抗原信息给T副主席报及相关淋巴细胞的阶段 2、活化阶段：是T、B淋巴细胞在接受抗原信号后，在一系列免疫分子的参与下，发生活化、增值、分化的阶段。B细胞接受抗原信息分化为浆细胞，T细胞接受抗原刺激和协同刺激双信号后分化为效应细胞 3、效应阶段：是浆细胞分泌特异性抗体，执行体液免疫功能。T细胞中的Th细胞分泌细胞因子等效应分子，T杀伤细胞执行细胞毒效应功能。另外有少量T、B细胞在增值分化后，不直接执行效应功能，而成为记忆细胞 免疫应答效应多为生理性，是机体对外来抗原或自身变性抗原的清楚效应 二、免疫组织与器官 免疫系统由免疫器官、免疫细胞和免疫分子构成 免疫器官按功能不同，分为中枢免疫器官和外周免疫器官。中枢免疫器官是免疫细胞产生、分化和成熟的场所，由骨髓和胸腺组成；外周免疫器官是免疫应答的场所，有淋巴结、脾及扁桃体等组成。单核细胞核淋巴细胞经血液循环及淋巴循环进出于外周淋巴组织及淋巴器官，形成机体免疫系统的免疫网络。 （一）中枢免疫器官 1、骨髓 2、胸腺：是一级淋巴上皮组织，是T细胞发育的重要中枢器官，胸腺由胸腺基质细胞（TSC）和胸腺细胞组成。 （二）外周免疫器官及组织 1、淋巴结：分为皮质区及髓质区。皮质区主要的细胞是B淋巴细胞又称为非胸腺依赖区。淋巴结的中心是髓质区，由淋巴索和淋巴窦组成，淋巴索为之谜聚集的淋巴细胞，包括B 细胞、浆细胞、T细胞及巨噬细胞 淋巴结主要功能：是共淋巴细胞栖息和增值的场所；是适宜于淋巴细胞增值分化发挥免疫应答的基地；是淋巴液运行中监视清除病原体异物的过滤监控站 2、脾：是富含血管的最大外周淋巴器官。 3、黏膜伴随的淋巴组织：有B细胞、T细胞、浆细胞及巨噬细胞，受局部侵入的病原体激活执行固有和适应性的免疫应答，使B淋巴细胞活化分化为浆细胞，产多种Ig类别的看那个题，其中最主要的是IgA及分泌型IgA，执行体液免疫及局部特异免疫作用 （三）淋巴细胞再循环与归巢 三、免疫细胞 （一）淋巴细胞：是免疫系统的主要细胞，包括T细胞、B细胞核NK细胞 1、T细胞外周血中T细胞约占淋巴细胞的70%-75%。 （1）、T细胞受体（TCR）：是T细胞特有的表面标志，可表达于所有的成熟T细胞表面。T细胞识别抗原和转导信号是由TCR特异识别MHC分子递呈的抗原肽，CD3分子转导T 细胞活化的第一信号，TCR与CD3分子通过盐桥结合形成稳定的复合物，TCR识别抗原的这一特点构成MHC限制性的基础 （2）簇分化抗原（CD）：是区分T淋巴细胞的重要标志，T细胞发育不同阶段的亚群存在
临床医学检验技术（师）-临床血液学(B1型题) 1、卵黄囊造血期 A.胚胎第2～9周 B.胚胎第6周～7个月 C.胚胎第8个月开始 D.胚胎第6～7周 E.胚胎第3个月开始 2、肝脏造血期 A.胚胎第2～9周 B.胚胎第6周～7个月 C.胚胎第8个月开始 D.胚胎第6～7周 E.胚胎第3个月开始 3、骨髓开始造血 A.胚胎第2～9周 B.胚胎第6周～7个月 C.胚胎第8个月开始 D.胚胎第6～7周 E.胚胎第3个月开始
4、人体最大的造血器官 A.卵黄囊 B.肝脏 C.骨髓 D.脾脏 E.淋巴结 5、3～6个月胚胎体内最主要的造血场所 A.卵黄囊 B.肝脏 C.骨髓 D.脾脏 E.淋巴结 6、人体最早的造血干细胞来源于 A.卵黄囊 B.肝脏 C.骨髓 D.脾脏 E.淋巴结
7、自身免疫性溶血性贫血 A.红细胞渗透脆性试验 B.酸溶血试验 C.抗人球蛋白试验 D.高铁血红蛋白还原试验 E.血红蛋白电泳分析 8、珠蛋白生成障碍性贫血 A.红细胞渗透脆性试验 B.酸溶血试验 C.抗人球蛋白试验 D.高铁血红蛋白还原试验 E.血红蛋白电泳分析 9、G-6-PD缺乏症 A.红细胞渗透脆性试验 B.酸溶血试验 C.抗人球蛋白试验 D.高铁血红蛋白还原试验 E.血红蛋白电泳分析 10、遗传性球形细胞增多症
A.红细胞渗透脆性试验 B.酸溶血试验 C.抗人球蛋白试验 D.高铁血红蛋白还原试验 E.血红蛋白电泳分析 11、尼曼-匹克病为 A.常染色体隐性遗传 B.常染色体显性遗传 C.常染色体不完全显性遗传 D.伴性隐性遗传 E.伴性显性遗传 12、戈谢病为 A.常染色体隐性遗传 B.常染色体显性遗传 C.常染色体不完全显性遗传 D.伴性隐性遗传 E.伴性显性遗传 13、血友病为 A.常染色体隐性遗传