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Dehydrogenation of n-butane over vanadia catalysts supported on silica gel

Dehydrogenation of n-butane over vanadia catalysts supported on silica gel
Dehydrogenation of n-butane over vanadia catalysts supported on silica gel

Journal of Natural Gas Chemistry18(2009)88–93

Dehydrogenation of n-butane over vanadia catalysts supported

on silica gel

Yuebing Xu,Jiangyin Lu?,Mei Zhong,Jide Wang

Key Laboratory of Oil&Gas Fine Chemicals,Ministry of Education,Xinjiang University,14#,Shengli Road,Urumqi830046,Xinjiang,China

[Manuscript received October17,2008;revised November18,2008]

Abstract

VO x/SiO2catalysts prepared by impregnation method were used for catalytic dehydrogenation of n-butane to butenes and characterized by X-ray diffraction,FT-IR,UV-vis,Raman,and BET measurements.The effects of VO x loading and the reaction temperature on the VO x/SiO2 catalysts and their catalytic performances for the dehydrogenation of n-butane were studied.When the VO x loading was12%g/g cat and reaction temperature was between590?C and600?C,n-butane conversion and butenes yields reached the highest value under H2flux of 10ml/min and n-butane flux of10ml/min.Product distribution,such as the ratio of2-butene to1-butene and the ratio of cis-2-butene to trans-2-butene,was mainly influenced by the reaction temperature.

Key words:n-butane;catalytic dehydrogenation;butene;VO x supported SiO2

1.Introduction

Presently,the output of C4fraction is approximately150-200million tons every year around the world.The C4fraction

is mainly produced from catalytic cracking and steam pyrol-ysis.The C4fraction is used in chemical industries mainly

as olefins,and recently,C4alkanes are primarily used as fuel. n-Butane is one of the main components of C4alkanes and is often used for selective oxidation to maleic anhydride[1,2],

cracking to light olefins[3],dehydrogenation and isomeriza-tion to produce isobutene[4],aromatization[5],and dispro-portionation[6],etc.

Recently,it is estimated that butenes will be another valu-able petrochemical material that could be well used after eth-ylene and propylene.Significant attention has been paid to the study on the n-butane dehydrogenation process because of the growing demand for butene.So,several researchers have studied various dehydrogenation catalysts for n-butane and made effort to develop novel catalysts with high-activity and high-selectivity.

VO x-based catalysts are widely used in light alkanes dehydrogenation,which included oxidative dehydrogenation with oxidant,such as oxygen[7-9],carbon dioxide[10],and nitrous oxide[11],and catalytic dehydrogenation without ox-idant.Several studies have reported that VO x-supported cata-lysts can be used for n-butane oxidative dehydrogenation,for instance,VMgO catalysts[7-14],VO x/SiO2catalysts[15,16], VO x/USY catalyst[17],and VO x/SBA-15catalyst[18],and also some researchers[19-24]have used VO x-supported cat-alysts for n-butane catalytic dehydrogenation,for example, VO x/θ-Al2O3catalysts[19-21],VN catalysts[22],and VC catalysts[23].Murgia et al.[15]synthesized V2O5-SiO2 catalysts with tetraethoxysilane,Si(OC2H5)4and vanadium acetylacetonate,and V(CH3COCH=COCH3)3by sol-gel method for the oxidative dehydrogenation of n-butane and ob-tained less than15%of butene yield.Santacesria et al.[16] prepared V/TiO2-SiO2catalysts by grafting method in oxida-tive dehydrogenation of n-butane and showed that more CO x products can be produced by the oxidative dehydrogenation (ODH)of n-butane.

In this study,the VO x/SiO2catalysts are prepared by im-pregnation and used for n-butane catalytic dehydrogenation process.The results showed that the catalysts have good cat-alytic activity and selectivity for n-butane dehydrogenation after activity test and some physical characterization.

2.Experimental

2.1.Catalyst preparation

The VO x/SiO2catalysts were prepared by impregnation method.SiO2with40-60mesh was used and impregnated

Journal of Natural Gas Chemistry V ol.18No.1200989

with a given concentration of NH4VO3solution.The amounts

of VO x loading(in V2O5basis)were0.00,0.03,0.06,0.09, 0.12,0.15,0.18,and0.21g/g cat,respectively.The impregna-

tion period lasted for6h at70?C and then dried at120?C for

10h and finally calcined at550?C in air for10h.After com-pleting the preparation of this series of catalysts,they were

marked as0#,1#,2#,3#,4#,5#,6#,and7#according to the different amounts of VO x loading.

2.2.Catalyst characterization

X-ray diffraction(XRD)patterns were obtained on a DX-

2000X-ray powder diffractometer coupled to a copper anode tube.The Kαradiation was the light source with applied volt-

age of40kV and current of30mA.2θranged from10o–50o

with a speed of5o per minute was recorded using step scan-ning and long counting times to determine the composition

peaks.

Infrared spectra were recorded between4000cm?1and

400cm?1with a Bruker Equinox55on samples dispersed in

KBr and pressed in thin wafers.

Raman spectroscopy was performed with a Bruker Ver-

tex70equipment.The spectral resolution was4cm?1,and the spectra acquisition consisted of three accumulations of20s for each sample.

UV-Vis absorption spectra of the samples were performed

on a spectrophotometer(Hitachi U-4100)equipped with the

integration sphere diffuse reflectance attachment.

BET surface areas were measured by a Micromeritics

ASAP2000adsorption apparatus.The samples were evac-uated under a vacuum of5×10?3Torr at350?C for15h. Specific total surface areas were calculated by the BET equa-tion.

2.3.Reaction tests

The catalytic reaction was carried out in a fixed-bed flow

reactor with a6mm i.d.quartz tube by passing a gaseous n-butane(10ml·min?1,99.9%)in a H2flow at a total flow rate of20ml·min?1over300mg catalyst(total pressure:1atm). The reactants and reaction products were analyzed online by a gas chromatograph(SP-3420)equipped with a50m KB-Al2O3/Na2SO4capillary column and FID detector.Blank tests on the same reactor showed low activity for dehydro-genation under the described conditions.

3.Results and discussion

3.1.Characterization of catalysts

XRD patterns of the samples are presented in Figure1.

The intensity diffraction lines at20.36o,26.18o,and31.06o,

corresponding to vanadium species with crystalline structure of V2O5,were observed in Figure1(1).These lines were al-most not detected at low VO x loadings because of the char-acteristic of amorphous silica,and it indicated the vanadium species were well dispersed on silica gel surface.Neverthe-less,with increasing the amount of VO x loading,the intensity of these lines intensified,such as the samples5#and

6#.Figure1.XRD patterns of the samples.(1)V2O5,(2)2#sample,(3)3# sample,(4)4#sample,(5)5#sample,(6)6#sample

Infrared spectra of the VO x/SiO2samples in the4000-400cm?1region are presented in Figure2.For sample 0#,namely SiO2,the following absorption bands were ob-served:3445cm?1assigned to?OH group of silica surface, 1639cm?1attributed to physisorbed water,1099cm?1and the shoulder at1216cm?1due to asymmetric stretching vibra-tions of the three-dimensional Si?O?Si network;969cm?1 corresponding to the presence of surface Si?O?groups in sil-ica gels;808cm?1assigned to symmetric stretching vibra-tions of the Si?O?Si network,and469cm?1attributed to bending deformation

[15].

Figure2.FT-IR spectra.(1)0#sample(SiO2),(2)1#sample,(3)2#sample, (4)3#sample,(5)4#sample,(6)5#sample,(7)6#sample

Adsorption bands at1400cm?1and669cm?1around which corresponded to residual ammonia did not appear in the FT-IR spectra for samples1#to6#,and it indicated that

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Yuebing Xu et al./Journal of Natural Gas Chemistry V ol.18No.12009

ammonia had decomposed and emerged completely from cat-alysts at 550?C calcination temperature.In other studies,bands at 930cm ?1were attributed to Si ?O ?V stretching mode [25].Band at 980cm ?1was assigned to vibration of Si ?O ?H groups [26].It was also connected to asymmet-ric stretching mode of SiO 4tetrahedrons connected to V-ions,for instance,band at 960cm ?1for V-silicalites [27]and at 950cm ?1for V-silica xerogels [28].

IR spectra of samples 1#to 6#were similar to sample 0#.Some bands shifted slightly to lower wavenumbers,and it was attributed to the interaction of vanadia species and silica support.The band at 969cm ?1corresponding to the pres-ence of surface Si ?O ?groups disappeared,and the bands at approximate 935cm ?1assigned to Si ?O ?V stretch mode were detected in samples 1#to 6#,but the bands were too weak to be detected because of a possible overlapping with the silanols group of SiO 2.The Si ?O ?V bonds were formed with Si ?O ?H bonds and vanadia species,but the intensity of the bands at 3445cm ?1,assigned to ?OH bonds,did not weaken.The reason may be that the V ?OH bonds were generated.

Raman spectra of V 2O 5,SiO 2,and samples 3#to 5#are shown in Figure 3.The intensity of the V 2O 5band had been reduced 40times in Figure 3.Bands at 723cm ?1and 801cm ?1were observed for SiO 2.The spectra of the V 2O 5crystallites showed the bands at 142,285,406,701,and 995cm ?1.For the samples 3#to 5#,the bands of V 2O 5were detected and intensified with the increase in the load-ing.A broad band at 1044cm ?1assigned to the stretching mode of the terminal V =O bond was observed for these cat-alysts [15].The band at 775cm ?1attributed to symmetric stretching modes of V ?O ?V polyvanadates species was not detected,and it indicated that only monovanadate groups were present for these

catalysts.

Figure 3.Raman spectra.(1)0#sample (SiO 2);(2)V 2O 5;(3)5#sample;(4)4#sample;(5)3#sample

UV-vis spectra of the VO x /SiO 2catalysts are presented in Figure 4.It could be seen that only the characteristic ab-sorption bands of V 5+ion were observed between 280and

500nm.The bands between 280and 340nm could be related to the highly dispersed tetrahedral species of V 5+ion.The bands between 350and 500nm were assigned to the octahe-dral species of V 5+ion [15,16].

When the amount of VO x loading was low,such as the samples 1#and 2#,the tetrahedral species were predominant in these catalysts.But the octahedral species would then in-crease with the higher VO x loading.The two kinds of V 5+species coexisted in high loading

catalysts.

Figure 4.UV-vis spectra.(1)1#sample,(2)2#sample,(3)3#sample,(4)4#sample,(5)5#sample,(6)6#sample,(7)7#sample

Table 1shows the data of the catalysts of BET surface area,BJH average pore diameters,and volumes.It could be seen from Table 1that the BET surface area and the BJH aver-age pore volumes were reduced with the increase in the VO x loading,but the BJH average pore diameters changed slightly.When the VO x loading was increased,the BET surface area decreased from 340.0m 2/g of SiO 2to 302.7m 2/g of sample 6#.

Table 1.BET surface area,BJH average adsorption and desorption

pore diameters and volumes of catalysts

BET surface Pore volumes (cm 3/g)a

Pore diameters (nm)b

SiO

340.0

0.940

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Table2.Catalytic activity and the selectivity of VO x/SiO2for the dehydrogenation of n-butane

Conversion Selectivity(%)

C~C a1-Butene cis-2-butene trans-2-butene isobutylene1,3-butadiene Others b

None c 5.1584.77 2.71 2.33 1.79 1.830.11

6.46

Figure5.Product yields and n-butane conversion as a function of VO x loading

In Figure5,the vertical distance between the lines of n-butene yield and C4H8yield could be designated as isobuty-lene yield,and the vertical distance between the lines of C4H8 yield and C=4yield could be designated as1,3-butadiene yield.It indicated that the reactions also included dehydroisomeriza-

tion of n-butane and further dehydrogenation of butenes over

VO x/SiO2catalyst.It can also be seen from Table2that the C1~C3selectivity dropped from28.02%to around13.5%in samples4#~7#compared with sample1#,which showed that

the catalysts could also restrain the cracking reaction with the increase of VO x loading.

To gain more information on the VO x/SiO2catalysts with the regard to the functions of other factors,we chose sample 4#for further investigation.The effects of reaction tempera-ture on the reactivity and the selectivity of sample4#are listed in Table3,and their relations are plotted in Figure

6.

Figure6.Product yields and n-butane conversion as a function of reaction temperature

It could be seen from Figure6that n-butane did not un-dertake dehydrogenation below about450?C,but then the catalytic activity of sample4#increased notably with the in-crease in reaction temperature.The products of C1~C3and 1,3-butadiene were scarcely produced below540?C,whereas the yield of C1~C3increased rapidly over540?C.When the reaction temperature was at600?C,the yield of butenes reached the highest value of32.19%.In addition,the yield of butenes was31.06%at590?C and31.25%at610?C,respec-tively,which were all somewhat less than32.19%at600?C.

92Yuebing Xu et al./Journal of Natural Gas Chemistry V ol.18No.12009

Table3.Catalytic activity and selectivity of sample4#for the dehydrogenation of n-butane Temperature Conversion Selectivity(%)

C~C a1-Butene cis-2-butene trans-2-butene isobutylene1,3-butadiene Others b

435 1.14 5.7211.2817.6812.939.450.00

42.94

Figure7.Ratio of2-butene to1-butene as functions of reaction temperature and VO x loading

It could be seen from Figure7that the ratio of2-butene to1-butene descended from2.71to1.94with the increase in temperature from435?C to620?C but kept around2.02all the time with change in VO x loading from3wt%to21wt%. The ratio of cis-2-butene to trans-2-butene which did not plot in Figure7was similar to the previous tendency.It was also found that the selectivity of butenes including2-butene and 1-butene was highest of88.63%at540?C from Figure7,but the conversion of n-butane was only12.9%from the Figure6, which was very low.These results showed that the reac-tion temperature affected the selectivity of n-butene notably and influenced the distribution of1-butene,cis-2-butene,and trans-2-butene simultaneously.

4.Conclusions

The VO x/SiO2catalysts prepared by impregnation method had good catalytic activity and selectivity for n-butane dehydrogenation to butenes.The V=O bond,V?O?Si bond,and V?O?H bond existed in catalysts according to FT-IR characterization.There were two kinds of V5+struc-ture including octahedral and tetrahedral species in catalysts. When catalyst was impregnated12%g/g cat VO x and cal-cined at550?C,n-butane conversion and yield of butenes reached the highest value under the reaction temperature of 590~600?C,H2flux of10ml/min,and n-C4H10flux of 10ml/min.When more VO x loading was added,more V2O5 species were yielded on SiO2surface,and resulted in the de-crease of BET surface area of catalysts.When the VO x load-ing exceeded12%g/g cat,many octahedral V5+species were produced,which would adversely affect the catalyst activity according to the catalytic tests.

Acknowledgements

This project is supported by the Program for New Century Ex-cellent Talents in University(Grant No.NCET-04-0987)and the Doctor Fund of Science Research of Xinjiang University(Grant No. BS060101).

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第21章 核酸的降解和核苷酸代谢

核酸的降解和核苷酸代谢 核酸的生物功能 DNA 、RNA 核苷酸的生物功能 ①合成核酸 ②是多种生物合成的活性中间物 糖原合成,UDP-Glc 。磷脂合成,CDP-乙醇胺,CDP-二脂酰甘油。 ③生物能量的载体ATP 、GTP ④腺苷酸是三种重要辅酶的组分 NAD 、FAD 、CoA ⑤信号分子cAMP 、cGMP 食物中的核酸,经肠道酶系降解成各种核苷酸,再在相关酶作用下,分解产生嘌呤、嘧啶、核糖、脱氧核糖和磷酸,然后被吸收。 吸收到体内的嘌呤和嘧啶,大部分被分解,少部分可再利用,合成核苷酸。 人和动物所需的核酸无须直接依赖于食物,只要食物中有足够的磷酸盐,、糖和蛋白质,核酸就能在体内正常合成。 核酸的分解代谢: 第一节 核酸和核苷酸的分解代谢 一、 核酸的酶促降解 核酸是核苷酸以3’、5’-磷酸二酯键连成的高聚物,核酸分解代谢的第一步就是分解为核苷酸,作用于磷酸二酯键的酶称核酸酶(实质是磷酸二脂酶)。 根据对底物的专一性可分为:核糖核酸酶、脱氧核糖核酸酶、非特异性核酸酶。 根据酶的作用方式分:内切酶、外切酶。 1、 核糖核酸酶 只水解RNA 磷酸二酯键的酶(RNase ),不同的RNase 专一性不同。 牛胰核糖核酸酶(RNaseI ),作用位点是嘧啶核苷-3’-磷酸与其它核苷酸间的连接键。 核糖核酸酶T1(RNaseT1),作用位点是3’ -鸟苷酸与其它核苷酸的5’-OH 间的键。 核酸 核酸酶 核苷酸 核苷酸酶 核苷 + 磷核苷磷酸化酶 碱基 + 戊糖-1-磷

2、脱氧核糖核酸酶 只能水解DNA磷酸二酯键的酶。DNase牛胰脱氧核糖核酸酶(DNaseI)可切割双链和单链DNA。产物是以5’-磷酸为末端的寡核苷酸。 牛胰脱氧核糖核酸酶(DNaseⅠ),降解产物为3’-磷酸为末端的寡核苷酸。 限制性核酸内切酶:细菌体内能识别并水解外源双源DNA的核酸内切酶,产生3ˊ-OH和5ˊ-P。 图 PstⅠ切割后,形成3ˊ-OH 单链粘性末端。 EcoRⅠ切割后,形成5ˊ-P单链粘性末端。 3、非特异性核酸酶 既可水解RNA,又可水解DNA磷酸二酯键的核酸酶。 小球菌核酸酶是内切酶,可作用于RNA或变性的DNA,产生3’-核苷酸或寡核苷酸。 蛇毒磷酸二酯酶和牛脾磷酸二脂酶属于外切酶。 蛇毒磷酸二酯酶能从RNA或DNA链的游离的3’-OH逐个水解,生成5’-核苷酸。 牛脾磷酸二脂酶从游离的5’-OH开始逐个水解,生成3’核苷酸。 二、核苷酸的降解 1、核苷酸酶(磷酸单脂酶) 水解核苷酸,产生核苷和磷酸。 非特异性磷酸单酯酶:不论磷酸基在戊糖的2’、3’、5’,都能水解下来。 特异性磷酸单酯酶:只能水解3’核苷酸或5’核苷酸(3’核苷酸酶、5’核苷酸酶) 2、核苷酶 两种: ①核苷磷酸化酶:广泛存在,反应可逆。 ②核苷水解酶:主要存在于植物、微生物中,只水解核糖核苷,不可逆 核糖核苷+ H2O 核苷水解酶 碱基+ 核糖 核苷+ 磷酸核苷磷酸化酶 碱基+ 戊糖-1-磷酸

三羧酸循环总结

真题回顾 【2002 - 22 生物化学A 型题】在三羧酸循环中,经底物水平磷酸化生成的高能化合物是 A. ATP B. GTP C. UTP D. CTP E. TTP 题目解析 在糖的无氧酵解和三羧酸循环中一共有三个底物水平磷酸化: 1,3-二磷酸甘油酸+ ADP →3-磷酸甘油酸+ ATP; 磷酸烯醇式丙酮酸+ ADP →丙酮酸+ ATP; 琥珀酰辅酶A + GDP →琥珀酸+ GTP。 故该题正确选项为B。 考点讲解 【2015 年西综大纲,生物化学,(二)物质代谢及其调节,2. 糖的有氧氧化(三羧酸循环)的过程、意义及调节】

一、三羧酸循环的过程 1. 在柠檬酸合酶的催化下乙酰辅酶A + 草酰乙酸缩合→柠檬酸。 2. 柠檬酸→顺乌头酸→异柠檬酸。 3. 在异柠檬酸脱氢酶的作用下异柠檬酸氧化脱羧→α-酮戊二酸。 4. 在α-酮戊二酸脱氢酶复合体的作用下α-酮戊二酸氧化脱羧→琥珀酰辅酶A。 5. 琥珀酰辅酶A 合成酶催化下琥珀酰辅酶A 经底物水平磷酸化→琥珀酸。 6. 琥珀酸脱氢酶作用下琥珀酸→延胡索酸。 7. 延胡索酸酶作用下延胡索酸→苹果酸。 8. 苹果酸脱氢酶作用下苹果酸→草酰乙酸。 二、总结 1. 反应5 为一次底物水平磷酸化产生GTP。

2. 每个循环消耗一分子乙酰辅酶A。 3. 反应3、4 两次脱羧,体内CO2 的主要来源。 4. 反应1、3、4 中三个关键酶柠檬酸合酶、异柠檬酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶。 5. 反应3、4、8 脱氢由NAD+ 接受,反应6 脱氢由FAD 接受,共4 次脱氢。 6. 反应于线粒体内进行,乙酰辅酶A 起始产生10 ATP,丙酮酸起始产生12.5 ATP,葡萄糖起始产生30 / 32 ATP。 7. 三大营养物资的代谢通路,糖、脂肪、蛋白质联系的枢纽。 8. 反应1、3、4 为不可逆反应,其他为可逆反应。 三、三羧酸循环的意义 1. 三羧酸循环是三大营养物资的最终代谢通路 (1)糖、脂肪、氨基酸生物氧化后都会生成乙酰辅酶A,然后,其进入三羧酸循环进行降解。

血清乳酸脱氢酶同工酶测定

血清乳酸脱氢酶同工酶测定 (醋酸纤维素薄膜电泳法) [原理] 先将血清在醋酸纤维素薄膜进行电泳使乳酸脱氢酶的同工酶分离,然后在薄膜上进行酶反应,显色试剂中包括有底物(乳酸)、NAD+、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)和碘硝基四唑蓝(INT),NAD+和PMS起递氢作用,INT最后接受氢被还原生成紫色的甲臜类化合物。其反应如下: LD 乳酸+NAD+丙酮酸+NADH2 NADH2+PMS NAD++PMSH2 PMSH2 +INT PMS+INTH2 [试剂] 1.PH8.6巴比妥缓冲液(离子强度0.05):称取巴比妥钠10.3g,巴比妥1.84g,溶于热的蒸馏水中,冷后加蒸馏水至1L。 2.0.1mol/LpH7.5磷酸缓冲液:称取磷酸二氢钾2.16g,磷酸氢二钠 (Na2 HPO4.2H2O)30.13g, 溶于蒸馏水中,并稀释至1L。 3.0.5mol/L乳酸钠溶液:吸取60%DL—乳酸钠溶液9.25ml,加蒸馏水至100ml。 4.显色试剂:临用前配制下列试剂: (1)1mg/ml吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)水溶液; (2)辅酶Ⅰ(NAD+)10mg,溶于pH7.5磷酸缓冲液1ml; (3)碘硝基四唑蓝[氯化2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基四唑](INT)12mg,溶于pH7.5磷酸缓冲液3ml中; (4)0.5 mol/L乳酸钠溶液1ml。 其中(2)、(3)、(4)混合后为甲液,(1)为乙液;用时以甲液∶乙液=20∶1混合。应用前,将上述溶液充分混和;但PMS水溶液加入量为0.2ml,且应待其他三种溶液混和后再加。 4.洗脱液:正丙醇9份与二甲亚砜1份混匀即可。

保健食品中脱氢表雄甾酮

保健食品中脱氢表雄甾酮(DHEA)的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中脱氢表雄甾酮(DHEA)含量的测定方法。 本方法适用于添加在片剂、胶囊等试样类型中功效成分脱氢表雄甾酮(DHEA)含量的测定。 本方法的最低检出量6.00mg/kg。本方法的最佳线性范围:0.0400~10.0mg/mL。 2 原理 将粉碎的胶囊和片剂试样使用流动相进行提取和稀释,根据高压液相色谱紫外检测器定性定量检测。 3 试剂 (1)甲醇:优级纯 (2)脱氢表雄甾酮(DHEA)标准溶液:准确称量脱氢表雄甾酮(DHEA)标准品(Sigma公司,纯度99%)0.0100g,加入检测用流动相并定容至10mL。此溶液每mL含1mg脱氢表雄甾酮(DHEA)。 4 仪器设备 (1)高效液相色谱仪:附紫外检测器(UV)。 (2)超声波清洗器。 (3)离心机。 5 分析步骤 (1)试样处理:取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀,准确称取试样(精确至0.001g)于容量瓶中,加入流动相定容至10.0mL,使浓度为每mL中含脱氢表雄甾酮(DHEA)1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。准确取2.0mL试样溶液于试管中,加入流动相定容至5.0mL,摇匀。经0.45μm滤膜过滤后,备用。 (2)液相色谱参考条件 a 色谱柱:C18柱4.6×250nm。 b 柱温:室温。 c 紫外检测器:检测波长215nm。 d 流动相:甲醇:水=80:20 e 流速:0.6mL/min。 f 进样量:10μL。 g 色谱分析:取10μ L 标准溶液及试样溶液注入色谱仪中,以保留时间定性,以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 h 色谱图(图略):在上述色谱条件下,脱氢表雄甾酮(DHEA)的保留时间为 7.40。 (3)标准曲线制备:分别配制浓度为0.0、0.0400、0.200、1.00、5.00、10.0mg/mL 脱氢表雄甾酮(DHEA)标准溶液,在给定的仪器条件下进行液相色谱分析,以峰高或峰面积对浓度作标准曲线。 (4)分析结果表示

糖酵解 三羧酸循环最全总结

在高等植物中存在着多条呼吸代谢的生化途径,这是植物在长期进化过程中,对多变环境条件适应的体现。在缺氧条件下进行酒精发酵和乳酸发酵,在有氧条件下进行三羧酸循环和戊糖磷酸途径,还有脂肪酸氧化分解的乙醛酸循环以及乙醇酸氧化途径等(图5-2)。 图5-2 植物体内主要呼吸代谢途径相互关系示意图 一、糖酵解 己糖在细胞质中分解成丙酮酸的过程,称为糖酵解(glycolysis)。整个糖酵解化学过程于1940年得到阐明。为纪念在研究这一途径中有突出贡献的三位生物化学家:G.Embden,O.Meyerhof和J.K.Parnas,又把糖酵解途径称为EmbdenMeyerhofParnas途径,简称EMP途径(EMP pathway)。糖酵解普遍存在于动物、植物、微生物的细胞中。 (一)糖酵解的化学历程 糖酵解途径(图5-3)可分为下列几个阶段:

图5-3糖酵解途径 1.己糖的活化(1~9)是糖酵解的起始阶段。己糖在己糖激酶作用下,消耗两个ATP逐步转化成果糖-1,6二磷酸(F-1,6-BP)。 如以淀粉作为底物,首先淀粉被降解为葡萄糖。淀粉降解涉及到多种酶的催化作用,其中,除淀粉磷酸化酶(starch phosphorylase)是一种葡萄糖基转移酶外,其余都是水解酶类,如α-淀粉酶(α-amylase)、β-淀粉酶(β-amylase)、脱支酶(debranching enzyme)、麦芽糖酶(maltase)等。 2.己糖裂解(10~11)即F-1,6-BP在醛缩酶作用下形成甘油醛-3-磷酸和二羟丙酮磷酸,后者在异构酶(isomerase)作用下可变为甘油醛-3-磷酸。 3.丙糖氧化(12~16)甘油醛-3-磷酸氧化脱氢形成磷酸甘油酸,产生1个ATP和1个NADH,同时释放能量。然后,磷酸甘油酸经脱水、脱磷酸形成丙酮酸,并产生1个ATP,这一过程分步完成,有烯醇化酶和丙酮酸激酶参与反应。

先天性肾上腺皮质增生症新生儿筛查共识

【标准?方案?指南】先天性肾上腺皮质增生症新生儿筛查共识 【标准·方案·指南】先天性肾上腺皮质增生症新生儿筛查共识 作者:中国医师协会青春期医学专业委员会临床遗传学组 中华医学会儿科学分会内分泌遗传代谢学组 先天性肾上腺皮质增生症(congenital adrenal hyperplasia, CAH)为常染色体隐性遗传代谢病,由于类固醇激素合成过程中某种酶(如21-羟化酶、11β-羟化酶、3β-羟类固醇脱氢酶等)的先天性缺陷,导致肾上腺皮质功能减退,部分患儿伴有电解质紊乱及性腺发育异常。21-羟化酶缺乏症(21-hydroxylase deficiency, 21-OHD)为CAH最常见的病因,占90%~95%[1,2];国内外报道发病率1/10 000~1/20 000[1,3,4]。部分患儿在新生儿期可因肾上腺皮质功能危象而危及生命。 国际上新生儿CAH筛查(即21-OHD筛查)起始于1977年,至今已有30多个国家开展了新生儿CAH筛查[1]。我国CAH筛查起步于20世纪90年代初,目前全国有近百家新生儿筛查中心开展了CAH筛查。因新生儿筛查成效显著,可降低新生儿死亡率、减少女婴外生殖器男性化而造成性别误判,改善生长发育[3],因此,在全国普及CAH新生儿筛查已成为必然趋势。为了规范筛查流程、诊断及早期治疗,由中华预防医学会出生缺陷预防与控制专业委员会新生儿筛查学组、中国医师协会青春期医学专业委员会临床遗传学组及中华医学会儿科学分会内分泌遗传代谢学组组织专家进行讨论,就新生儿CAH筛查的规范达成以下共识。 【CAH筛查】 一、CAH筛查的原理及21-OHD分型 21-羟化酶缺乏引起肾上腺皮质合成皮质醇及醛固酮障碍,导致肾上腺皮质功能减退;酶缺乏导致其前体代谢物17-羟孕 酮(17-hydroxyprogesterone)增多,经旁路代谢导致肾上腺雄激素及睾酮产生增多;皮质醇合成障碍反馈性促使垂体促 肾上腺皮质激素(adrenocorticotropin,ACTH)分泌增加,刺激肾上腺皮质增生。临床上21-OHD分为经典型(包括失盐型 及单纯男性化型)与非经典型(轻型或迟发型)[2,5]。新生儿CAH筛查是通过测定干滤纸血片中17-羟孕酮浓度进行21-OHD 筛查,该筛查方法约能检出70%经典型21-OHD患儿[6,7],而非经典型21-OHD难以通过筛查发现[5]。 1.失盐型: 21-羟化酶完全缺乏型(严重型),占75%[3,4]。患儿出生1~4周左右出现呕吐、腹泻、体重不增、脱水、皮肤色素沉着、 难以纠正的低血钠、高血钾、代谢性酸中毒、甚至休克,病死率4%~11.3%[6,8];该型患儿雄激素增高及男性化程度严 重[9]。 2.单纯男性化型: 21-羟化酶活性为正常人的1%~11%[4,8],约占25%。该型患儿体内有失盐倾向,代偿性醛固酮增高使临床无失盐症 状,仅表现为雄激素增高[9,10]。男婴出生时外生殖器多正常,少数阴茎增大,睾丸大小正常;女婴出生时多伴有外生殖 器不同程度男性化(阴蒂肥大,阴唇融合);随着年龄增大,生长加速、骨龄超前,最终矮小。 3.非经典型: 21-羟化酶活性达20%~50%[1,4],中国少见;患儿在儿童后期或青春期出现雄激素增多的体征。

α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒说明书 紫外分光光度法

α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDH)活性检测试剂盒说明书紫外分光光度法 注意:正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。 货号:BC0710 规格:50T/48S 产品内容: 试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存; 试剂二:液体0.6mL×1支,-20℃保存; 试剂三:液体55mL×1瓶,4℃保存; 试剂四:粉剂×1支,4℃保存; 试剂五:粉剂×1支,4℃保存; 试剂六:粉剂×1支,-20℃保存; 试剂七:粉剂×1支,-20℃保存; 试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入2mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。 工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。 产品说明: α-KGDH(EC1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。 α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。 需自备的仪器和用品: 紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。 操作步骤: 一、α-KGDH的提取

称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4℃11000g离心10min,取上清,置冰上待测。 二、测定步骤 1.分光光度计预热30min以上,调节波长到340nm,蒸馏水调零 2.空白管: 取1mL工作液加入1mL石英比色皿,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL 蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。 3.测定管: 取1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。 三、α-KGDH活性计算 1.按样本蛋白浓度计算 单位的定义:每mg组织蛋白在反应体系中每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 α-KGDH活性(U/mg prot)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(Cpr×V样)÷T =1473.7×(ΔA测定-ΔA空白)÷Cpr 2.按样本鲜重计算 单位的定义:每g组织在反应体系中每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 α-KGDH(U/g鲜重)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×W)÷T =1488.5×(ΔA测定-ΔA空白)÷W 3.按细菌或细胞密度计算 单位的定义:每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。 α-KGDH活性(U/104cell)=[(ΔA测定-ΔA空白)÷(ε×d)×V反总×109]÷(V样÷V样总×500)÷T

6生物化学习题(答案)

5 糖类分解代谢 一、名词解释 1、糖酵解途径:是在无氧条件下,葡萄糖进行分解,形成2分子丙酮酸并伴随着ATP生成的一系列反应。 2、柠檬酸循环:是用于乙酰CoA中的乙酰基氧化生成CO2的酶促反应的循环系统,该循环的第一步反应是由乙酰CoA和草酰乙酸缩合形成柠檬酸。 3、糖的有氧氧化:糖的有氧氧化指葡萄糖或糖原在有氧条件下氧化成水和二氧化碳的过程。是糖氧化的主要方式。 4、磷酸戊糖途径:是指机体某些组织(如肝、脂肪组织等)种一个葡萄糖-6-磷酸经代谢产生NADPH和核糖-5-磷酸的途径。该途径包括氧化和非氧化两个阶段,在氧化阶段,葡萄糖-6-磷酸转化为核酮糖-5-磷酸和CO2,并生成两分子的NADPH;在非氧化阶段,核酮糖-5-磷酸异构化生成核糖-5-磷酸或转化为酵解中的两个中间代谢物果糖-6-磷酸和甘油醛-3-磷酸。 5、发酵:厌氧有机体把糖酵解生成NADH中的氢交给丙酮酸脱羧后的产物乙醛,使之生成乙醇的过程称之为乙醇发酵。如果将氢交给丙酮酸生成乳酸则叫乳酸发酵。 二、填空 1、糖酵解过程中有3个不可逆的酶促反应,这些酶是磷酸果糖激酶、己糖激酶和丙酮酸激酶。 2、3-磷酸甘油醛脱氢酶酶催化的反应是EMP途径中的第一个氧化反应。 3、糖酵解中催化作用物水平磷酸化的两个酶是磷酸甘油酸激酶和丙酮酸激酶。 4、在糖酵解中提供高能磷酸基团,使ADP磷酸化成A TP的高能化合物是1,3-二磷酸甘油酸和PEP。 5、糖酵解在细胞的细胞质中进行,该途径是将葡萄糖转变为丙酮酸,同时生成ATP和NADH的一系列酶促反应。 6、丙酮酸还原为乳酸,反应中的NADH来自于3-磷酸甘油醛的氧化。 7、TCA循环的第一个产物是柠檬酸。由柠檬酸合酶,异柠檬酸脱氢酶,和α-酮戊二酸脱氢酶所催化的反应是该循环的主要限速反应。 8、TCA循环中有二次脱羧反应,分别是由异柠檬酸脱氢酶和α-酮戊二酸脱氢酶催化。脱去的CO2中的C原子分别来自于草酰乙酸中的C1和C4。 9、TCA循环中大多数酶位于线粒体基质,只有琥珀酸脱氢酶位于线粒体内膜。 10、丙酮酸脱氢酶系由丙酮酸脱氢酶、二氢硫辛酰转乙酰基酶和二氢硫辛酸脱氢酶组成。三羧酸循环过程中有4次脱氢和2次脱羧反应。三羧酸循环过程主要的关键酶是柠檬酸合酶;每循环一周可生成1个A TP。 11、磷酸戊糖途径可分为2阶段,分别称为氧化脱羧和非氧化的分子重排,其中两种脱氢酶是6-磷酸葡萄糖脱氢酶和6-磷酸葡萄酸糖脱氢酶,它们的辅酶是NADP+。 12、在磷酸戊糖途径中催化由酮糖向醛糖转移二碳单位的酶为转酮醇酶,其辅酶为TPP(焦磷酸硫胺素);催化由酮糖向醛糖转移三碳单位的酶为转醛醇酶。转酮醇酶(transketolase)就是催化含有一个酮基、一个醇基的二碳基团(羟乙酰基)转移的酶。其接受体是醛,辅酶是TPP。转醛醇酶(transaldolase)是催化含有一个酮基、二个醇基的三碳基团(二羟丙酮基团)转移的酶.其接受体是醛,但不需要TPP. 13、植物中淀粉彻底水解为葡萄糖需要多种酶协同作用,它们是α-淀粉酶,β-淀粉酶,脱支酶,麦芽糖酶。 14、淀粉的磷酸解过程通过淀粉磷酸化酶降解α–1,4糖苷键,靠转移酶和脱支酶降解α–1,6糖苷键。 三、单项选择题 1、丙酮酸脱氢酶系是个复杂的结构,包括多种酶和辅助因子。下列化合物中哪个不是丙酮酸脱氢酶组分? A、TPP B、硫辛酸 C、FMN D、Mg2+ E、NAD+ 2、丙酮酸脱氢酶系受到哪些因素调控? A、产物抑制、能荷调控、磷酸化共价调节 B、产物抑制、能荷调控、酶的诱导 C、产物抑制、能荷调控 D、能荷调控、磷酸化共价调节、酶的诱导 E.能荷调控、酶的诱导 3、下述那种情况可导致丙酮酸脱氢酶系活性升高? A、ATP/ADP比值升高 B、CH3COCoA/CoA比值升高 C、NADH/ NAD+比值升高 D、能荷升高 E、能荷下降 4、三羧酸循环中有底物水平磷酸化的反应是: A、柠檬酸→α-酮戊二酸 B、琥珀酰CoA→琥珀酸(琥珀酸硫激酶) C、琥珀酸→延胡索酸 D、延胡索酸→草酰乙酸 E. 苹果酸→草酰乙酸 5、糖代谢中间产物中含有高能磷酸键的是: A、6-磷酸葡萄糖 B、6-磷酸果糖 C、1,6-二磷酸果糖 D、3-磷酸甘油醛 E、1,3-二磷酸甘油酸 6、1分子葡萄糖酵解时净生成多少个ATP? A、1 B、2 C、3 D、4 E、5 7、磷酸果糖激酶的最强变构激活剂是: A、AMP B、ADP C、ATP D、2,6-二磷酸果糖 E、1,6-二磷酸果糖 8、糖的有氧氧化的最终产物是: A、CO2+H2O+ATP B、乳酸 C、丙酮酸 D、乙酰CoA A、磷酸戊糖途径 B、糖异生 C、糖的有氧氧化 D、糖原合成与分解 E、糖酵解 10、三碳糖、六碳糖与七碳糖之间相互转变的糖代谢途径是: A、糖异生 B、糖酵解 C、三羧酸循环 D、磷酸戊糖途径 E、糖的有氧氧化

关键酶

糖酵解的关键酶——己糖激酶Hexokinase ,磷酸果糖激酶-1 PFK-1,丙酮酸激酶regulative factor:Insulin promotes the synthesis of three key enzymes 磷酸果糖激酶-1 PFK-1: 1)6- 磷酸果糖、1,6-二磷酸果糖、2,6-二磷酸果糖、ADP、AMP是变构激活剂。 2)ATP、柠檬酸及长链脂肪酸是变构抑制剂。 丙酮酸激酶: 1)1,6-二磷酸果糖、ADP是变构激活剂 2)ATP,乙酰CoA及长链脂肪酸是变构抑制剂。 丙酮酸氧化脱酸的关键酶——丙酮酸脱氢酶复合体 E1 TPP VitaminB1 E2 硫辛酸硫辛酸 coenzyme A 泛酸 E3 FAD Vitamin B2 NAD+ Vitamin PP Regulation:受催化产物ATP、乙酰CoA的抑制。AMP 、CoA 、NAD+增加乙酰CoA减少,酶激活 三羧酸循环的关键酶—— 1)柠檬酸合酶 2)异柠檬酸脱氢酶(高能状态-ATP多-的情况下受抑制,and vice verse ), 3)α-酮戊二酸脱氢酶(类似丙酮酸脱氢酶复合体,3,5形式) 产物堆积抑制TCA,主要是ADP 、ATP 的变化。 Ca+ 可促进TCA 磷酸戊糖的关键酶——6-磷酸葡萄糖脱氢酶 受NADPH 的反馈抑制性调节 糖异生的关键酶——G-6-P酶,果糖二磷酸酶,磷酸烯醇式丙酮酸激酶(草酰乙酸磷酸烯醇丙酮酸)、丙酮酸羧化酶(丙酮酸草酰乙酸) 途径Ⅰ:果糖二磷酸酶(1,6二磷酸果糖G-6-P)G-6-P酶(G-6-P Glucose )2,6-二磷酸果糖和AMP激活G-6-P酶,而抑制果糖二磷酸酶的活性而抑制糖异生 途径Ⅱ:丙酮酸激酶(磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸) 1,6二磷酸果糖是丙酮酸激酶的变构激活剂 增强糖异生,必要抑制糖酵解。 原料增加可促进糖异生,乙酰CoA可加强糖异生 丙酮酸羧化酶,辅基:生物素。需要Mg2+ 和Mn2+ 磷酸烯醇式丙酮酸有能量最高的高能磷酸键 糖原合成的关键酶——糖原合酶

(完整版)生物化学试题及答案(4)

生物化学试题及答案( 4) 第四章糖代谢 【测试题】 一、名词解释 1.糖酵解( glycolysis ) 2.糖的有氧氧化 3.磷酸戊糖途径 4.糖异生( glyconoegenesis) 5.糖原的合成与分解6.三羧酸循环( krebs 循环) 7.巴斯德效应(Pastuer 效应) 8.丙酮酸羧化支路 9.乳酸循环( coris 循环) 10.三碳途径 二、填空题 21.葡萄糖在体内主要分解代谢途径有22.糖酵解反应的进行亚细胞定位是在23.糖酵解途径中仅有的脱氢反应是在底物水平磷酸化反应分别由 11.糖原累积症 12.糖酵解途径 13.血糖(blood sugar) 14.高血糖(hyperglycemin) 15.低血糖 (hypoglycemin) 16.肾糖阈 17.糖尿病 18.低血糖休克 19.活性葡萄糖 20.底物循环 、和 ,最终产物为。酶催化下完成的,受氢体是酶和酶催化。 24.肝糖原酵解的关键酶分别是、和丙酮酸激酶。 25.6—磷酸果糖激酶—1最强的变构激活剂是,是由6—磷酸果糖激酶— 2 催化生成,该酶是一双功能酶同时具有和两种活性。 26.1 分子葡萄糖经糖酵解生成分子ATP,净生成分子ATP,其主要生理意义在于。 27.由于成熟红细胞没有,完全依赖供给能量。 28.丙酮酸脱氢酶复合体含有维生素、、、和。 29.三羧酸循环是由与缩合成柠檬酸开始,每循环一次有次脱氢、 - 次脱羧和次底物水平磷酸化,共生成分子ATP。 30.在三羧酸循环中催化氧化脱羧的酶分别是和。 31.糖有氧氧化反应的进行亚细胞定位是和。1 分子葡萄糖氧化成CO2和H2O 净生 成或分子ATP。 32.6—磷酸果糖激酶—1有两个ATP结合位点,一是ATP 作为底物结合,另一是与 ATP亲和能力较低,需较高浓度ATP才能与之结合。 33.人体主要通过途径,为核酸的生物合成提供。 34.糖原合成与分解的关键酶分别是和。在糖原分解代谢时肝主要受的调控, 而肌肉主要受的调控。 35.因肝脏含有酶,故能使糖原分解成葡萄糖,而肌肉中缺乏此酶,故肌糖原分解增强时,生 成增多。 36.糖异生主要器官是,其次是。 37.糖异生的主要原料为、和。 38.糖异生过程中的关键酶分别是、、和。 39.调节血糖最主要的激素分别是和。

乳酸脱氢酶

乳酸脱氢酶 科技名词定义 中文名称:乳酸脱氢酶 英文名称:lactate dehydrogenase;LDH 定义:广泛存在的催化乳酸和丙酮酸相互转换的酶。L-乳酸脱氢酶(编号:EC 作用于L-乳酸; D-乳酸脱氢酶(编号:EC 作用于D-乳酸,两者均以NAD+为氢受体。在厌氧酵解时,催化丙酮酸接受由3-磷酸甘油醛脱氢酶形成的NADH的氢,形成乳酸。 应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科);酶(二级学科) 本内容由全国科学技术名词审定委员会审定公布 求助编辑百科名片 催化机理 乳酸脱氢酶是一种糖酵解酶。乳酸脱氢酶存在于机体所有组织细胞的胞质内,其中以肾脏含量较高。乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶,几乎存在于所有组织中。同功酶有五种形式,即LDH-1(H4)、LDH-2(H3M)、LDH-3(H2M2)、LDH-4(HM3)及LDH-5(M4),可用电泳方法将其分离。LDH同功酶的分布有明显的组织特异性,所以可以根据其组织特异性来协用诊断疾病。正常人血清中LDH2,〉LDH1。如有心肌酶释放入血则LDH1〉LDH2,利用此指标可以观察诊断心肌疾病。 目录 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 血清乳酸脱氢酶(LDH)同工酶测定及意义 乳酸脱氢酶高的原因 乳酸脱氢酶偏低的原因 乳酸脱氢酶(LDH)实验 基本信息 临床意义 乳酸脱氢酶及其同工酶的简介

编辑本段基本信息 英文名称:LDH(lactate dehydrogenase) 序列信息:1 gsgcnldsar frylmg 长度:16 aa{物种来源:Homo sapiens (human)} 正常范围:血清~L; 尿560~2050U/L; 脑脊液含量为血清的1/10。 编辑本段乳酸脱氢酶及其同工酶的简介 乳酸脱氢酶[1](LD)分子量为135~140KD,由两种亚单位组成:H(表示heart)和M(表示muscle)。它们按不同的形式排列组合形成含4个亚基的5种同工酶,即:LD1(H4)、LD2(H3M1)、LD3(H2M2)、LD4(HM3)、LD5(M4)。 LD催化丙酮酸与乳酸之间还原与氧化反应,在碱性条件下促进lactic acid向pyruvic acid方向的反应,而在中性条件下促进pyruvic acid向lactic acid的转化(为逆反应)。LD是参与糖无氧酵解和糖异生的重要酶。 由于LD几乎存在于所有体细胞中,而且在人体组织中的活性普遍很高,所以血清中LD的增高对任何单一组织或器官都是非特异的。在AMI时升高迟、达峰晚,故对早期诊断价值不大。由于半寿期长(10~163小时),多用于回顾性诊断,如对人院较晚的AMI病人、亚急性MI的诊断和病情监测医学教育`网搜集整理。 LD在组织中的分布特点是心、肾以LD1为主,LD2次之;肺以LD3.LD4为主;骨骼肌以LD5为主;肝以LD5为主,LD4次之。血清中LD含量的顺序是LD2>LD1>LD3>LD4>LD5.

保健食品中脱氢表雄甾酮DHEA的测定

保健食品中脱氢表雄甾酮DHEA的测定Determination of dehydroepiandrosterone in heath food 1 范围 本方法规定了保健食品中脱氢表雄甾酮(DHEA)含量的测定方法。 本方法适用于添加在片剂、胶囊等试样类型中功效成分脱氢表雄甾酮(DHEA)含量的测定。 本方法的最低检出量6.00mg/kg。 本方法的最佳线性范围:0.0400~10.0mg/mL。 2 原理 将粉碎的胶囊和片剂试样使用流动相进行提取和稀释,根据高压液相色谱紫外检测器定性定量检测。

3 试剂 3.1 甲醇优级纯。 3.2 脱氢表雄甾酮(DHEA)标准溶液准确称量脱氢表雄甾酮(DHEA)标准品(Sigma公司,纯度99%)0.0100g,加入检测用流动相并定容至10mL。此溶液每mL含1mg脱氢表雄甾酮(DHEA)。 4 仪器设备 4.1 高效液相色谱仪:附紫外检测器(UV)。 4.2 超声波清洗器。 4.3 离心机。 5 分析步骤 5.1 试样处理:取20粒以上片剂或胶囊试样进行粉碎混匀,准确称取试样(精确至0.001g)于容量瓶中,加入流动相定容至10.0mL, 使浓度大约为每mL中含脱氢表雄甾酮(DHEA)1mg。超声提取5min后以3000rpm/min离心3min。

准确取2.0mL试样溶液于试管中,加入流动相定容至5.0mL,摇匀。经0.45μm滤膜过滤后,备用。 5.2 液相色谱参考条件 5.2.1 色谱柱: C18柱 4.6×250mm。 5.2.2 柱温:室温。 5.2.3 紫外检测器:检测波长 215nm。 5.2.4 流动相:甲醇:水=80:20。 5.2.5 流速:0.6mL/min。 5.2.6 进样量:10μL。 5.2.7色谱分析:取10μL标准溶液及试样溶液注入色谱仪中,以保留时间定性,以试样峰高或峰面积与标准比较定量。 5.2.7 色谱图

生化名词解释

生化名词解释1 1.氨基酸的等电点:当溶液在某一特定的pH值时,氨基酸以两性离子的形式存在,正电荷数与负电荷数相等,净电荷为零,在直流电场中既不向正极移动也不向负极移动,这时溶液的pH值称为该氨基酸的等电点,用pI表示。 2.肽键:是指键,是一个氨基酸的α–COOH基和另一个氨基酸的α–NH2基所形成的酰胺键。 3.多肽链:由许多氨基酸残基通过肽键彼此连接而成的链状多肽,称为多肽链。 4.肽平面:肽链主链的肽键具有双键的性质,因而不能自由旋转,使连接在肽键上的六个原子共处于一个平面上,此平面称为肽平面。 5.蛋白质的一级结构:多肽链上各种氨基酸残基的排列顺序,即氨基酸序列。 6.肽单位:多肽链上的重复结构,如Cα–CO–NH–Cα称为肽单位,每一个肽单位实际上就是一个肽平面。 7.多肽:含有三个以上的氨基酸的肽统称为多肽。 8.氨基酸残基:多肽链上的每个氨基酸,由于形成肽键而失去了一分子水,成为不完整的分子形式,这种不完整的氨基酸被称为氨基酸残基。 9.蛋白质二级结构:多肽链主链骨架中,某些肽段可以借助氢键形成有规律的构象,如α–螺旋、β–折叠和β–转角;另一些肽段则形成不规则的构象,如无规卷曲。这些多肽链主链骨架中局部的构象,就是二级结构。 10.超二级结构:在球状蛋白质分子的一级结构顺序上,相邻的二级结构常常在三维折叠中相互靠近,彼此作用,从而形成有规则的二级结构的聚合体,就是超二级结构。 11.结构域:在较大的蛋白质分子里,多肽链的三维折叠常常形成两个或多个松散连接的近似球状的三维实体,即是结构域。它是球蛋白分子三级结构的折叠单位。 12.蛋白质三级结构:指一条多肽链在二级结构(超二级结构及结构域)的基础上,进一步的盘绕、折叠,从而产生特定的空间结构。或者说三级结构是指多肽链中所有原子的空间排布。维系三级结构的力有疏水作用力、氢键、范德华力、盐键(静电引力)。另外二硫键在某些蛋白质中也起着非常重要的作用。 13.蛋白质四级结构:由相同或不同的亚基(或分子)按照一定的排布方式聚合而成的聚合体结构。它包括亚基(或分子)的种类、数目、空间排布以及相互作用。 14.二硫键:指两个硫原子之间的共价键,在蛋白质分子中二硫键对稳定蛋白质分子构象起重要作用。 15.二面角:在多肽链中,Cα碳原子刚好位于互相连接的两个肽平面的交线上。Cα碳原子上的Cα–N和Cα–C都是单键,可以绕键轴旋转,其中以

生物化学试题及答案(4)

生物化学试题及答案(4) 第四章糖代谢 【测试题】 一、名词解释 1.糖酵解(glycolysis)11.糖原累积症 2.糖的有氧氧化12.糖酵解途径 3.磷酸戊糖途径13.血糖(blood sugar) 4.糖异生(glyconoegenesis)14.高血糖(hyperglycemin) 5.糖原的合成与分解15.低血糖(hypoglycemin) 6.三羧酸循环(krebs循环)16.肾糖阈 7.巴斯德效应(Pastuer效应) 17.糖尿病 8.丙酮酸羧化支路18.低血糖休克 9.乳酸循环(coris循环)19.活性葡萄糖 10.三碳途径20.底物循环 二、填空题 21.葡萄糖在体内主要分解代谢途径有、和。 22.糖酵解反应的进行亚细胞定位是在,最终产物为。 23.糖酵解途径中仅有的脱氢反应是在酶催化下完成的,受氢体是。两个 底物水平磷酸化反应分别由酶和酶催化。 24.肝糖原酵解的关键酶分别是、和丙酮酸激酶。 25.6—磷酸果糖激酶—1最强的变构激活剂是,是由6—磷酸果糖激酶—2催化生成,该酶是一双功能酶同时具有和两种活性。 26.1分子葡萄糖经糖酵解生成分子ATP,净生成分子A TP,其主要生理意义在于。 27.由于成熟红细胞没有,完全依赖供给能量。 28.丙酮酸脱氢酶复合体含有维生素、、、和。 29.三羧酸循环是由与缩合成柠檬酸开始,每循环一次有次脱氢、 - 次脱羧和次底物水平磷酸化,共生成分子A TP。 30.在三羧酸循环中催化氧化脱羧的酶分别是和。 31.糖有氧氧化反应的进行亚细胞定位是和。1分子葡萄糖氧化成CO2和H2O净生成或分子ATP。 32.6—磷酸果糖激酶—1有两个A TP结合位点,一是ATP作为底物结合,另一是与ATP亲和能力较低,需较高浓度A TP才能与之结合。 33.人体主要通过途径,为核酸的生物合成提供。 34.糖原合成与分解的关键酶分别是和。在糖原分解代谢时肝主要受的调控,而肌肉主要受的调控。 35.因肝脏含有酶,故能使糖原分解成葡萄糖,而肌肉中缺乏此酶,故肌糖原分解增强时,生成增多。 36.糖异生主要器官是,其次是。 37.糖异生的主要原料为、和。 38.糖异生过程中的关键酶分别是、、和。 39.调节血糖最主要的激素分别是和。 40.在饥饿状态下,维持血糖浓度恒定的主要代谢途径是。 三、选择题

乳酸脱氢酶细胞毒性检测

产品简介: 产品编号产品名称产品包装产品价格 C0016 100次176.00元碧云天的乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒(LDH Cytotoxicity Assay Kit),也称乳酸脱氢酶检测试剂盒(LDH Assay Kit)或乳酸脱氢酶释放检测试剂盒(LDH Release Assay Kit),是一种基于diaphorase催化的INT显色反应,通过比色法检测细胞毒性时释放的乳酸脱氢酶活性或检测其它样品中的乳酸脱氢酶活性的试剂盒。 本试剂盒可以用于常规的乳酸脱氢酶活性的检测,更常用于以LDH释放为指标的细胞毒性检测。同时,基于细胞总乳酸脱氢酶活性的检测,本试剂盒也可以用于检测细胞增殖和细胞毒性检测。 细胞凋亡或坏死而造成的细胞膜结构的破坏会导致细胞浆内的酶释放到培养液里,其中包括酶活性较为稳定的乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)。通过检测从质膜破裂的细胞中释放到培养液中的LDH的活性,就可以实现对细胞毒性的定量分析。LDH释放被看做细胞膜完整性的重要指标,并被广泛用于细胞毒性检测。LDH释放被认为是以前使用放射性的51Cr标记细胞,随后通过51Cr释放进行细胞膜完整性检测的安全有效的替代方法。 本试剂盒的基本原理是,在乳酸脱氢酶的作用下,NAD+被还原生成NADH,NADH和INT (2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脱氢酶(diaphorase)催化反应生成NAD+和强生色物甲臜(formazan),在490nm波长下产生吸收峰,从而可以通过比色来定量乳酸脱氢酶的活性。吸光度与乳酸脱氢酶活性成线性正相关。该酶联反应原理的示意图如下: 可检测细胞培养液、细胞裂解液等样品中乳酸脱氢酶的活性。一个试剂盒可进行100次检测。 包装清单: 产品编号产品名称包装 C0016-1 LDH释放试剂 1.5ml C0016-2 乳酸溶液2ml C0016-3 酶溶液1ml×2 C0016-4 INT溶液(10X) 0.2ml C0016-5 INT稀释液2ml —说明书1份 保存条件: -20℃保存,一年有效。C0016-3需注意避免反复冻融。C0016-4需避光保存。试剂盒解冻后可以短期4℃存放,2-3天内有效。 注意事项: 冷冻会使样品中部分乳酸脱氢酶失活,4℃可放置2-3天。建议样品准备好后尽量当天完成测定。 如果检测细胞培养液中的乳酸脱氢酶,由于血清含有乳酸脱氢酶,建议血清的使用浓度不要超过1%,并最好使用热灭活血清。如果一定需要使用10%血清,在检测时一定要设置没有细胞,但加入了相同体积培养液的对照孔,以用于消除背景。 细胞过度生长、密度过高、离心速度过大、培养箱内外温差过大,都会造成细胞释放乳酸脱氢酶增加。

甘草酸及其苷元甘草次酸的盐皮质激素样作用研究进展_张明发

甘草酸及其苷元甘草次酸的盐皮质激素样作用研究进展 张明发,沈雅琴 上海美优制药有限公司,上海 201422 摘 要:甘草酸在体内水解成甘草次酸,甘草次酸的化学结构类似于甾体激素,因此甘草酸是甘草次酸的前体药物。甘草酸和甘草次酸是甾体激素代谢失活酶(尤其是Ⅱ型11β-羟化甾体脱氢酶)抑制剂,可提高内源性和外源性皮质激素的活性。甘草酸和甘草次酸又可作为配体,与皮质激素受体结合呈现出糖皮质激素、盐皮质激素样作用。因此长期使用甘草或甘草酸类药物产生的盐皮质激素样作用可用于艾迪生病的治疗,但用于其他疾病治疗时,盐皮质激素样作用就有可能成为不良反应(主要表现为假性醛固酮增多症或高血压),约占甘草和甘草酸类药物不良反应的50%以上;并对其引起假性醛固酮增多症或高血压的机制进行了讨论。 关键词:甘草酸;甘草次酸;盐皮质激素样作用;假性醛固酮增多症;高血压 中图分类号:R282.71 文献标志码:A 文章编号:1674 - 5515(2011)06 - 0448 - 05 Advances in stu d ies on mineralocorticoid-like effect of glycyrrhizic acid and its aglycone glycyrrhetic acid ZHANG Ming-fa, SHEN Ya-qin Shanghai Meiyou Pharmaceutical Co., Ltd., Shanghai 201422, China Abstract: Glycyrrhizic acid is hydrolyzed to glycyrrhetic acid in vivo, so glycyrrhizic acid is a prodrug of glycyrrhetic acid. Chemical structure of glycyrrhetic acid is similar to steroid hormone. Glycyrrhetic acid and glycyrrhizic acid are the inhibitors of enzymes (especially 11β-hydroxy-steroid dehydrogenase type 2) in steroid hormone metabolism, therefore they can enhance effects of inactivation endogenic and exogenic corticosteroids. Glycyrrhetic acid and glycyrrhizic acid, as ligands, can combine with corticoid receptor, and show glucocorticoid-like and mineralocorticoid-like effects. Mineralocorticoid-like effect induced by long-term application of licorice or glycyrrhizic acid derivatives can be used for treatment of Addison’s disease. But, for the treatment of other diseases , this effect may become the side effect (major manifestations: pseudoaldosteronism or hypertension), the incidence was more than 50% of their all adverse reactions, and their mechanisms of pseudoaldosteronism or hypertension were discussed in this paper. Key words: glycyrrhizic acid; glycyrrhetic acid; mineralocorticoid-like effect; pseudoaldosteronism; hypertension 甘草酸(glycyrrhizic acid)是甘草中含量最高的苷类化合物,也是甘草的主要甜味成分。天然甘草酸主要由顺式甘草酸(18β-甘草酸)和少量反式甘草酸(18α-甘草酸)组成,其在体内水解成苷元——甘草次酸(glycyrrhetic acid),产生广泛的药理作用[1-10]。甘草酸本身也具有生物活性,但一般较甘草次酸弱。甘草酸及其盐或酯(如甘珀酸,carbenoxolone)作为药品、药用辅料和食品添加剂被广泛应用,因此研究甘草酸的不良反应非常重要。 早在20世纪60年代就发现甘草有盐皮质激素样作用,即醛固酮样作用。实验和临床研究都证明甘草酸和甘草次酸均能使人和实验动物尿量及钠排 出减少、钾排出增多,可治疗轻症艾迪生病(Addison′s disease),与氢化可的松合用治疗重症艾迪生病,也可治疗糖尿病选择性醛固酮过少引起的高钾血症[11]。持续应用于其他疾病可引起高血压、水肿、低血钾、肌无力等,这些占甘草酸类药物不良反应的50%以上[12]。 1 抑制盐皮质激素代谢 甘草酸和甘草次酸的化学结构与皮质激素颇为相似,能与其竞争肝脏Δ4-5β-甾体还原酶、3-酮基甾体还原酶和20-酮基甾体还原酶,减少盐皮质激素失活代谢,加之它们的促皮质激素样作用可延长和提高内源性及外源性盐皮质激素的有效血浓度和 收稿日期:2011-05-25 作者简介:张明发,研究员,研究方向为中药药理。Tel: (021)68928846 E-mail: zhmf_my@https://www.doczj.com/doc/317458896.html,

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