目录
绪论 (1)
第一章地中海贫血定量检测质量控制方案与筛查方案的建立 (6)
1.1 实验材料 (8)
1.1.1 主要仪器 (8)
1.1.2 主要试剂 (9)
1.1.3 实验样本 (10)
1.2 实验方法 (11)
1.2.1 Automated D-10TM Dual HbA2/F/A1c Program定量HbA2/F与条件优化
(11)
1.2.2 经典检测方法 (11)
1.2.3 血液学指标的测定 (13)
1.2.4 地中海贫血的基因型检测 (13)
1.3 实验结果 (15)
1.3.1 Gap-PCR与RDB检测结果 (15)
1.3.2 不同地贫基因型的统计 (18)
1.3.3 优化后的HPLC定量结果的比较 (19)
1.3.4 HPLC法与经典方法的定量检测结果比较 (20)
1.3.5 ROC对HbF、HbA2的统计分析及其实验切值的确立 (24)
1.3.6 血液学常规指标相关参数的测定结果与选择 (27)
1.3.7 HPLC法定量测定HbF、HbA2的质控分析 (28)
V
1.3.8 不同联合筛查方案的效率比较 (31)
1.4 讨论 (32)
1.4.1 HPLC定量检测法优于经典检测方法 (32)
1.4.2 质量控制方案的建立及重要性 (35)
1.4.3 联合筛查方案的确定和重要意义 (36)
第二章长三角地区儿童群体的流行病学调查 (39)
2.1 实验材料 (40)
2.1.1 主要仪器 (40)
2.1.2 主要试剂 (41)
2.1.3 实验样本 (42)
2.2 实验方法 (43)
2.2.1 血液学指标的测定后的初次筛查 (43)
2.2.2 HPLC定量检测HbF和HbA2水平的二次筛查 (43)
2.2.3 对整体样本的筛查 (43)
2.2.4 珠蛋白基因变异的分析 (43)
2.3 实验结果 (43)
2.3.1基因诊断结果 (43)
2.3.2外周血样本中的不同地贫基因型的分布 (44)
2.3.3 采用选定的联合筛查方案的筛查结果 (46)
2.3.4 不同地贫类型对应的保留时间的比较 (49)
2.3.5 不同地贫基因型与HbF、HbA2水平的检出范围 (50)
2.3.6 不同地贫基因型血液学参数的特征 (51)
VI
2.4 讨论 (53)
2.4.1 江浙沪地区儿童地中海贫血基因型的分布 (53)
2.4.2 选用的联合筛查方案能够提高筛查和诊断的效率 (54)
2.4.3 根据组分HbF、HbA2保留时间的差异可以初步推测地贫类型 (55)
2.4.4 评估不同基因型与血液学相关指标、HbF、HbA2表达水平的关系 .. 56 总结 (60)
参考文献 (62)
附录1 研究论文 (70)
致谢 (78)
攻读学位期间录用和发表的学术论文目录 (80)
VII
图表目录
表1 实验样本信息 (10)
表2 模板DNA的PCR反应程序1 (14)
表3 模板DNA的PCR反应程序2 (15)
表4 β-珠蛋白基因的突变类型与位点 (18)
表5 200例地中海贫血病例的基因型 (19)
表6 不同的样本处理方式对定量结果的影响 (20)
表7 地贫组与对照组HbF、HbA2百分含量定量结果的比较 (22)
表8 两种定量HbF的百分含量的测定结果 (22)
表9 两种定量HbA2的百分含量的测定结果 (22)
表10 三例HbH病的定量检测结果 (23)
表11 三例HbE病的定量检测结果 (23)
表12 三例HbH病和三例HbE病的经典实验检测结果 (23)
表13 三种检测方法与金标准的比较 (23)
表14 两种定量方法对应指标的AUC、最佳临界值及该处灵敏度、特异度 (25)
表15 β-地贫组对应的两种定量HbA2在推荐值、临界值处的评价指标 (25)
表16 血液学相关参数与金标准的比较 (27)
表17 HPLC法的检测范围 (29)
表18 质量控制警告出现前后数据比对 (30)
表19 HbF、HbA2两个水平质控品的室内质控数据 (30)
表20 联合方案的符合率、灵敏度和特异度的比较 (32)
表21 491例筛查样本信息 (42)
VIII
表22 整体样本的基因检测结果与地域分布 (44)
表23 380例地中海贫血病例的基因型 (45)
表23（续）380例地中海贫血病例的基因型 (46)
表24 不同筛查方案与金标准的符合率、灵敏度和特异度比较 (47)
表25 质量控制警告出现前后数据比对 (48)
表26 HbF、HbA2两个水平质控品的室内质控参数 (48)
表27 HbF、HbA2组分保留时间的比较 (50)
表28 不同地贫基因型样本对应的HbF、HbA2水平的范围统计 (51)
表29 不同基因型的血液学指标和HbF、HbA2水平的分析 (52)
图1 α-珠蛋白基因缺失型的gap-PCR检测结果 (16)
图2 α地中海贫血gap-PCR电泳结果 (17)
图3 β-地贫样本与α-地贫样本的RDB结果 (17)
图4 两种定量测定β-地贫组HbF的ROC分析 (26)
图5 两种定量测定β-地贫组HbA2的ROC分析 (26)
图6 HbF的Levey-Jennings质量控制图 (30)
图7 HbA2的Levey-Jennings质量控制图 (31)
图8 HbF的Levey-Jennings质量控制图 (49)
图9 HbA2的Levey-Jennings质量控制图 (49)
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