考马斯亮蓝染色的原理和方法
在蛋白质染色方法中，目前以考马斯亮蓝染色最为常用。因为它既克服了氨基黑染色灵敏度不高的限制，又比银染简便易操作。
考染的历史
考马斯亮蓝染色最早由Fazekas等在1963年用于醋酸纤维素膜电泳，并认为同样可用于纸电泳，琼脂糖电泳和淀粉凝胶电泳。1965年Meyer等将此方法应用于聚丙烯酰胺凝胶电泳。考染的灵敏度
考马斯亮蓝染色可以达到0.2~0.5 μg（200~500 ng），最低可检出0.1 μg蛋白；银染的灵敏度比考染高将近100倍，最低可以检出2 ng蛋白。
通过考染条带的深浅粗细，可以大致判断该条带有多少蛋白，如在8.6×6.8 cm（W×L）?.75 mm厚的胶上15~20 μg蛋白大约是下面这样的条带：
考马斯亮蓝染料的种类
考马斯亮蓝分为R-150、R-250、R-350、G-250等。其中R-350最为灵敏，R为红蓝色，G 为绿蓝色。R-250即三苯基甲烷，每个分子含有两个SO3H基团，偏酸性，与氨基黑一样也是结合到蛋白质的碱性基团上。G-250即二甲花青亮蓝，是一种甲基取代的三苯基甲烷。推荐一种考染的方法
⑴电泳后的凝胶立即浸泡在固定液（500 ml 乙醇，100 ml 冰醋酸，400 ml 蒸馏水）中至少30 min，如有必要可在固定液中浸泡过夜；
⑵将固定后的凝胶在热的染色液（0.29 g 考马斯亮蓝溶解在250 ml 脱色液中，在使用前边搅拌边加热至60℃）中浸泡10min，然后用蒸馏水将凝胶淋洗一次；
⑶多次变换脱色液（250 ml 乙醇，80 ml冰醋酸，加蒸馏水至1 L），直至凝胶背景脱净为止，为加快脱色，可略加温度；以上各步最好用振荡器（摇床）震荡染色皿。
⑷为了防止凝胶干燥后的龟裂，脱去背景色的凝胶在保存液（25 ml 87% 甘油加225 ml 脱色液）中浸泡30min。然后将凝胶放在玻璃板上，再用保存液浸湿玻璃纸包住凝胶在室温下晾干。
需要声明一点，考马斯亮蓝染色的方法不是唯一的，你可以参考几种之后总结一个适合自己的方案出来。
实验报告 学院：第二临床医学院专业：临床医学年级：2013级班级：1班姓名：学号：日期：2014,3,8 得分：实验课程：生物化学实验 实验名称：蛋白质的定量测定（五）——考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 【实验目的】 掌握考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量的原理和方法。 【实验原理】 考马斯亮蓝G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质—考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595n处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质—考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析尤其适合于稀有蛋白质的微量分析。考马斯亮蓝G-250试剂呈色反应颜色稳定、灵敏度高，最低测试蛋白质量在1ug左右。 【试剂与器材】 试剂： 考马斯亮蓝试剂：考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml质量浓度为0.85g/ml 的磷酸，用蒸馏水稀释到1000ml。 标准蛋白质溶液：结晶牛血清清蛋白，预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量，然后根据该蛋白的纯度用0.15mol/LNacl配制成1.0mg/ml蛋白溶液。
器材： 试管和试管架 722型分光光度计 吸量管 移液枪 【实验步骤】 一、制作标准曲线 各管混匀后，静置3min，以0号管为空白管调零，在595nm波长下分别测定各管溶液的吸光度值（A595）. 以A595值为纵坐标，蛋白质浓度为横坐标，绘制标准曲线。 二、待测蛋白质浓度测定 测定方法同上，1ml待测蛋白质家5ml考马斯亮蓝试剂，。用上述0号管调零，测出血清的A595值。 【实验结果】
考马斯亮蓝染色 推荐选用前三种染色方法，另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验，染色效果不好，不推荐使用，仅供参考。（见后页比对照片） 操作步骤： 1、取出SDS-PAGE凝胶，经超纯水漂洗；（以下每步操作皆在摇床上进行。） 2、固定：将凝胶放入相应的固定液中，固定1小时； 3、染色：取出凝胶，放入相应的染色液中，过夜染色；（也可依实际情况缩短时间） 4、脱色（胶体法&改良法）：凝胶放入纯水中洗脱，换液数次； 脱色（Neuhoff法）：取出凝胶，用0.1 M Tris-H3PO4缓冲液（pH6.5）漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗＜1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。 试剂的配制： 1、胶体考马斯亮蓝染色法（colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：1.6%磷酸、8%硫酸铵、0.02% CBB-G250、20%乙醇 脱色液：H2O 2、改良考马斯亮蓝染色法（modified Coomassie brilliant blue，mCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、0.12% CBBG250、20%乙醇（着色1小时即可）。 脱色液：H2O 3、Neuhoff染色法： 固定液：12%三氯醋酸 染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、0.02% CBB-G250、使用前振摇。染色时，取一定体积的染色液，加入1/4体积的甲醇。 脱色所需：0.1 M Tris-磷酸缓冲液（pH6.5）、25%乙醇、10%醋酸
4、传统考马斯亮蓝染色法： 固定液：45.4%甲醇、4.6%乙酸 染色液：45.4%甲醇、4.6%乙酸、0.1% CBB-G250 脱色液：5%甲醇、7.5%乙酸 5、网上方法： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：30%甲醇、10%乙酸、0.125% CBB-G250 脱色液：30％甲醇，10％乙酸 比对照片：每块胶左道是Marker（质量原因，未跑开( ˇ?ˇ )）上样量5μl，右道是BSA（分子量68kDa），上样量为3μg. Neuhoff法 传统法胶体法改良法网上法
考马斯亮蓝染色套装使用说明 货号：P1305 保存：室温保存，至少一年有效。 规格：100ml+500ml 产品简介： 本考马斯亮蓝染色套装(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的 考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝G-250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western 转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 产品内容： 考马斯亮蓝染色液100ml 考马斯亮蓝脱色液500ml 说明书1份 使用方法： 1、电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中(至少5倍胶体积)，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、将凝胶置于摇床上缓慢摇动，室温染色至少2小时，低丰度蛋白染 色需4小时以上。 3、染色结束后移除染色液，染色液通常可重复利用2-3次，但染色效
果会略有影响。 4、将凝胶浸泡于和染色液等量体积的脱色液中，摇床上脱色4-8小时，期间更换3-5次脱色液。 注意事项： 1.染色时间4小时以上效果最佳。 2.脱色可根据目的蛋白丰度和脱色效果随时终止，或延长脱色时间。 3.脱色越彻底，检测的蛋白量越低，脱色24小时一般可以检测出0.1ug蛋白量。 4.脱色后，将凝胶保存在水中，拍照或扫描保存图像。或制成干胶保存。 相关试剂： P1300-500考马斯亮蓝蛋白胶快速染色液 PC0020BCA蛋白浓度测定试剂盒 PR1400低分子量蛋白MARKER PR1700预染次高分子量蛋白MARKER I1020IPTG溶液(50mg/ml) A101030%丙烯酰胺(29:1) T10705×Tris-甘氨酸电泳缓冲液 P1300SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
考马斯亮蓝法测定可溶性蛋白质含量 原理： 考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blue G-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色，在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内（1-1000μg），蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。 考马斯亮蓝G-250于蛋白质结合反应十分迅速，2min左右即达到平衡。其结合物在室温下1h内保持稳定。此法灵敏度高，易于操作，干扰物质少，是一种比较好的定量法。其缺点是在蛋白质含量很高时线性偏低，且不同来源蛋白质与色素结合状况有一定差异。 材料、仪器设备及试剂 1、材料 小麦叶片、马铃薯块茎、或其他植物材料 2、仪器设备 分光光度计、研钵、烧杯、移液管 3、试剂 （1）标准蛋白质溶液：100μg·Ml-1牛血清白蛋白：称取牛血清白蛋白25mg，加水溶解并定容至100ml,吸取上述溶液40ml，用蒸馏水稀释至100ml即可。（2）考马斯亮蓝G-250溶液：称取100mg考马斯亮蓝G-250，溶于50ml90%乙醇中，加入100ml85%（W/V）的磷酸，再用蒸馏水定容到1L，贮于棕色瓶中，常温下可保存一个月。 方法： 1、标准曲线的绘制 取6支具塞试管，按表加入试剂。混合均匀后，向各管中加入5ml考马斯亮蓝 G-250溶液，摇匀，并放置5min左右，在595nm下比色测定吸光度。以蛋白质浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 管号 1 2 3 4 5 6 标准蛋白质（ml） 0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 蒸馏水量（ml） 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0 蛋白质含量（μg） 0 20 40 60 80 100 2、样品测定 （1）样品提取：取鲜样0.5g，加入2ml蒸馏水研磨，磨成匀浆后用6ml蒸馏水冲洗研钵，洗涤液收集在同一离心管中，在4000r/min下离心10min，弃去沉淀，上清液转入容量瓶，以蒸馏水定容至10ml，摇匀后待测。 （2）吸取样品提取液0.1ml，放入具塞试管中（每个样品重复2次），加入5ml 考马斯亮蓝G-250溶液，充分混合，放置2min后在595nm下比色，测定吸光度，并通过标准曲线查得蛋白质含量。 （3）结果计算（单位mg/g）样品中蛋白质含量=（C·VT）/(1000 VS·WF) 式中：C—查的标准曲线值（μg）
蛋白质浓度的测定──考马斯亮蓝染色法 目的要求 学习考马斯亮蓝（Coomassie Brilliant Blue）法测定蛋白质浓度的原理和方法。 实验原理 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。 考马斯亮蓝G―250存在着两种不同的颜色形式，红色和蓝色。它和蛋白质通过范德华力结合，在一定蛋白质浓度范围内，蛋白质和染料结合符合比尔定律（Beer’s law）。此染料与蛋白质结合后颜色有红色形式和蓝色形式，最大光吸收由465nm变成595nm，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。 蛋白质和染料结合是一个很快的过程，约2min即可反应完全，呈现最大光吸收，并可稳定1h，之后，蛋白质―染料复合物发生聚合并沉淀出来。蛋白质―染料复合物具有很高的消光系数，使得在测定蛋白质浓度时灵敏度很高，在测定溶液中含蛋白质5μL/ml时就有0.275光吸收值的变化，比Lowry法灵敏4倍，测定范围为10－100μg蛋白质，微量测定法测定范围是1－10μg蛋白质。此反应重复性好，精确度高，线性关系好。标准曲线在蛋白质浓度较大时稍有弯曲，这是由于染料本身的两种颜色形式光谱有重叠，试剂背景值随更多染料与蛋白质结合而不断降低，但直线弯曲程度很轻，不影响测定。 此方法干扰物少，研究表明：NaCl，KCl，MgCl2，乙醇，（NH4）2SO4无干扰。强碱缓冲液在测定中有一些颜色干扰，这可以用适当的缓冲液对照扣除其影响。Tris，乙酸，2―巯基乙醇，蔗糖，甘油，EDTA及微量的去污剂如Triton X―100，SDS，玻璃去污剂有少量颜色干扰，用适当的缓冲液对照很容易除掉。但是，大量去污剂的存在对颜色影响太大而不易消除。 试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G―250 100mg溶于50ml95%乙醇中，加入100ml85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000ml，滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G―250，4.7%(W/V)乙醇。 二、标准和待测蛋白质溶液 1．标准蛋白质溶液 结晶牛血清蛋白，预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量，根据其纯度用0.15mol/LNaCl配制成1mg/ml，0.1mg/ml蛋白溶液。 2．未知蛋白质溶液。 三、器材 试管及试管架，移液管（0.1ml及5ml），UV－2000型分光光度计。 操作方法
考马斯亮蓝法测蛋白质含量 一、原理 考马斯亮蓝G-250（Coomassie G-250）是一种甲基取代的三苯基甲烷，分子中磺酸基的蓝色染料，在465nm处有最大吸收值。考马斯亮蓝G-250能与蛋白质通过范得华相互作用形成蛋白质—考马斯亮蓝复合物蓝色溶液，引起该染料的最大吸收λmax的位置发生红移，在595nm处有最大吸收值。由于蛋白质—考马斯亮蓝复合物在595nm处的光吸收远高于考马斯亮蓝在465nm处的光吸收，因此，可大大地提高蛋白质的测定灵敏度。蛋白质—考马斯亮蓝复合物溶液颜色的深浅与蛋白质的浓度成正比。利用溶液颜色的差异进行比色测定，适合于蛋白质类的定量分析，尤其适合于稀有蛋白质的微量分析。考马斯亮蓝G-250试剂呈色反应颜色稳定、灵敏度高，最低测试蛋白质量在1ug左右。 二、操作步骤 1. 标准曲线测定法 分别取六只试管，其中一只加入 1.0ml蒸馏水做空白，5只分别加入不同体积的浓度为100ug/ml牛血清清蛋白标准液，补充水到1.0ml。然后每只试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀放置5min，在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。以A595吸光值为纵坐标，牛血清清蛋白的ug数量为横坐标绘制标准曲线。具体操作见下表。 蛋白质标准曲线测定加样 试剂空白1 2 3 4 5 100ug/ml牛血清清蛋白/ml 1.0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 牛血清清蛋白/ug 0 10 20 40 60 80 去离子水/ml 0 0.9 0.8 0.6 0.4 0.2 考马斯亮蓝G-250试剂/ml 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 吸光值A595 2. 蛋白样品 配制浓度约100ug/ml的待测蛋白质溶液。取一只试管加入1.0ml蒸馏水做空白，一支加入0.5ml待测蛋白质溶液，补充水到1.0ml。然后每支试管加入5.0ml考马斯亮蓝G-250试剂，摇匀放置5min后，在紫外-可见分光光度计595nm处测定吸光值。用测得的吸光值从标准曲线上查得相当于牛血清清蛋白的ug数量，计算出待测蛋白质的含量。 在标准蛋白质和蛋白质样品的测定时，为了减小误差，每一个浓度的蛋白质做3支平行管。 3.试剂配置 a.牛血清清蛋白标准液结晶牛血清清蛋白或酪蛋白，预先经微量凯氏定氮法标定该蛋白质的百分含量或者根据牛血清清蛋白的消光系数是6.6来计算其百分含量。然后根据该蛋白的纯度配置成浓度为100 ug/ml的蛋白溶液。 b.考马斯亮蓝G-250溶于50ml95%乙醇，加入100ml质量浓度为0.85g/ml的磷酸，作为母液保存，使用时用水稀释到1000ml。试剂的最终浓度为0.01%考马斯亮蓝G-250、质量浓度为0.085g/ml磷酸。
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 蛋白质浓度测定的方法有很多，考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的 一种方式，它利用比色法和色素法混合方法、操作简便，下文介绍了考马斯亮 蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。 实验原理 考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质― 染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质 测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方 法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收 峰(lmax)的位置，由465nm变为 595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通 过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主 要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。 考马斯亮蓝染色法的突出优点是： (1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高 的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。 (2)测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分 钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可 以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而 完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。 (3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、 糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。 此法的缺点是： (1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮 蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。 (2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、 Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等。 试剂与器材 一、试剂
常规考马斯亮蓝染色液 简介： 考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的常规染色或Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。采用常规染色方法需至少1h ，采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)常规染色脱色方法 1、PAGE 电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用次。 4、加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。Leagene 推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸馏水。 5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色。期间更换脱色液2～4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1～2h 后即可出现。 6、完成脱色后把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 (二)快速染色脱色方法 1、PAGE 电泳结束后取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 2、随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用2～3次。 编号 名称 PT0018 PT0018 Storage Commassie Blue Staining Solution 100ml 500ml RT 使用说明书 1份
考马斯亮蓝法（Bradford法）测定蛋白质浓度 一、实验原理 双缩脲法（biuret法）和folin—酚试剂法（lowry法）的明显缺点和许多限制，促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。 1976年由bradford建立的考马斯亮兰法（bradford法），是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰g-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰的位置（lmax），由465nm变为595nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认为，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）和芳香族氨基酸残基相结合。在595nm下测定的吸光度值A595，与蛋白质浓度成正比。 bradford法的突出优点是： 1. 灵敏度高，据估计比lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质－染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的多。 2. 测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像lowry法那样费时和严格地控制时间。 3. 干扰物质少。如干扰lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、edta等均不干扰此测定法 此法的缺点是： 1. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。 2. 仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污 剂、triton x-100、十二烷基硫酸钠（sds）和0.1n的naoh。（如同0.1n的酸干扰lowary法一样）。 3. 标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用beer 定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。 1、试剂： （1）考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G—250 100mg溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85% H3PO4，用蒸馏水稀释至1000ml, 滤纸过滤。最终试剂中含0.01%（W/V）考马斯亮蓝G—250, 4.7%（W/V）乙醇，8.5%（W/V）H3PO4。 （2）标准蛋白质溶液： 纯的牛血清血蛋白，根据其纯度配制成100 ug/ml蛋白溶液 2. 器材： （1）可见光分光光度计（2）旋涡混合器 3、标准曲线的制作 试管编号0 1 2 3 4 5 6
最优考马斯亮蓝染色 P r o t o c o l Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】
考马斯亮蓝染色 推荐选用前三种染色方法，另有传统考马斯亮蓝染色法和网上经验，染色效果不好，不推荐使用，仅供参考。（见后页比对照片） 操作步骤： 1、取出SDS-PAGE凝胶，经超纯水漂洗；（以下每步操作皆在摇床上进行。） 2、固定：将凝胶放入相应的固定液中，固定1小时； 3、染色：取出凝胶，放入相应的染色液中，过夜染色；（也可依实际情况缩短时间） 4、脱色（胶体法&改良法）：凝胶放入纯水中洗脱，换液数次； 脱色（Neuhoff法）：取出凝胶，用 M Tris-H3PO4缓冲液（）漂洗2分钟。再用25%乙醇淋洗＜1 min。然后再用10%乙酸中在室温脱色2小时即可。 试剂的配制： 1、胶体考马斯亮蓝染色法（colloidal Coomassie brilliant blue，cCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：%磷酸、8%硫酸铵、% CBB-G250、20%乙醇 脱色液：H2O 2、改良考马斯亮蓝染色法（modified Coomassie brilliant blue，mCBB）： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：10%磷酸、10%硫酸铵、% CBBG250、20%乙醇（着色1小时即可）。 脱色液：H2O 3、Neuhoff染色法： 固定液：12%三氯醋酸
染色液：2%磷酸、10%硫酸铵、% CBB-G250、使用前振摇。染色时，取一定体积的染色液，加入1/4体积的甲醇。 脱色所需： M Tris-磷酸缓冲液（）、25%乙醇、10%醋酸 4、传统考马斯亮蓝染色法： 固定液：%甲醇、%乙酸 染色液：%甲醇、%乙酸、% CBB-G250 脱色液：5%甲醇、%乙酸 5、网上方法： 固定液：40%甲醇、10%乙酸 染色液：30%甲醇、10%乙酸、% CBB-G250 脱色液：30％甲醇，10％乙酸 比对照片：每块胶左道是Marker（质量原因，未跑开( ˇˇ )）上样量5μl，右道是BSA（分子量68kDa），上样量为3μg.
经验交流 一种简便的考马斯亮蓝G250蛋白质染色方法* 江南1)吴开力黄强潘苏华 (中山医科大学中山眼科中心,广州510060) 摘要介绍一种快速、简便、几乎无背景的考马斯亮蓝G250(CBB G250)染色方法.该方法所用试剂仅为稀盐酸和CBB G250,CBB G250的工作浓度为010015%,灵敏度达0102L g/带,染色2h达70%,4h以上或染色过夜即可充分染色.与以往的考马斯亮蓝染色方法相比,该方法有经济方便、灵敏度高、几乎无背景等优点,便于推广应用. 关键词电泳,染色方法,考马斯亮蓝G250 学科分类号Q5-33 蛋白质电泳后染色方法有多种:氨基黑染色、考马斯亮蓝染色和银染色等.其中考马斯亮蓝染色克服了氨基黑染色灵敏度较低,和银染法操作复杂、假阳性率高的缺点,是最常用的染色方法.但它仍然存在一些问题,如考马斯亮蓝R250 (CBB R250)背景深、耗时长;CBB G250灵敏度不高;二者所耗试剂均较多.近几年,人们对考马斯亮蓝染色法作了许多改进,不同程度地改善了某些方面的问题,但仍未尽善.本文介绍一种经济快速,灵敏度高,几乎无背景的CBB G250染色方法. 1材料和方法 111材料 11111蛋白质样品:牛血清白蛋白(BSA)购自Bio-Rad公司;小牛晶状体的alpha晶体蛋白由Sephadex G200sf两次柱层析(100cm@116cm和40cm@116cm)分离获得. 11112染色液配制:1mol/L盐酸溶液(A), 1g/L CBB G250溶液(B);应用时用1ml A液和15ml B液混合加水至1L,搅拌混匀. 11113仪器:Bio-Rad Model1000/500电泳仪; Bio-Rad(M in-i Proteanò)电泳槽.DY-1500A型高压电泳仪;Pharmacia Biotech(M ultiphorò)电泳槽. 112方法 11211电泳:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、常规聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)、等电聚焦(IEF)参照郭尧君等[1]方法操作. 11212染色程序:a1电泳完毕,取出凝胶浸于5mmol/L盐酸溶液中,振荡1h;b1弃去盐酸溶液,重复步骤a;c1将胶置于染色液中,染色2~ 16h,连续振荡;d1弃去染色液,将胶置于1mmol/L盐酸溶液中脱色数小时(换液3~5次).最后对凝胶进行观察和照相,并将凝胶保存于1mmol/L盐酸溶液中. 11213凝胶染色图象分析:在染色和漂洗过程中应用Alphaimag e2000Documentation&Analysis System对凝胶照相(同一照相条件及参数)并作蛋白质条带染色强度分析;观察染色的强度变化时,以同一参照点分别测定蛋白质条带和凝胶背景的染色强度;测定漂洗时染色强度变化则以蛋白质条带的强度减去背景强度后作为该蛋白质条带的染色强度;染色强度和加样量的相关性分析采用Video DensitometeròSystem(USA Biomed Instrument.Inc),扫描每条蛋白质条带的染色强度并计算其与加样量的依存关系;染色的灵敏度通过加样不同浓度(\10ng)的BSA,染色后以肉眼能观察到的最低浓度的条带为标准. *广东省自然科学基金项目(970084)部分工作. 1)通讯联系人. Tel:(020)87330395,E-mail:yunj uyan@https://www.doczj.com/doc/3816314527.html, 收稿日期:1999-08-15,修回日期:2000-01-04 # 560 #生物化学与生物物理进展Prog.Biochem.Biophys.2000;27(5)
考马斯亮蓝染色 一产品简介： 本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法，以考马斯亮蓝R250为染料，可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色，或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 使用本试剂盒，采用常规染色脱色方法累计时间达到2-3小时后可以观察到蛋白条带；采用快速染色脱色方法20分钟左右即可观察到蛋白条带。观察到最清晰的蛋白条带则需染色脱色更长时间。 本试剂盒中的染色液和脱色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。二保存条件：室温保存，至少一年有效。 注意事项： 可以使用枪头盒或适当大小的培养皿作为染色和脱色的容器。 本染色液呈酸性，有轻微腐蚀性，使用时请作必要防护。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 三使用说明： 1. 常规染色脱色方法： a. 电泳结束后，取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 b. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。 注：具体的染色时间取决于凝胶的厚度和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2-4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 c. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。 e. 置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4-24小时。期间更换脱色液2-4次，直至蓝色背景基本上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1-2小时后即可出现。 注：脱色期间可以在脱色液中加入一片吸水纸，可以使部分染料吸附在吸水纸上，加快脱色。脱色时间过长也会导致蛋白条带的颜色变浅。 f．完成脱色后，可以把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保 存在含20%甘油的水中。长期保存可以制备干胶。 2. 快速染色脱色方法： a. 电泳结束后，取胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。通常对于胶浓度大于10％的胶比较坚韧，在发生煮沸时不易破损；对于胶浓度小于10%的胶，宜尽量避免煮沸，以免出现胶碎裂的情况。 b. 随后在染色液温度较高的情况下，在室温摇床上摇动5-10分钟。 c. 倒出染色液。染色液可以回收重复使用至少2-3次。 d. 加入适量考马斯亮蓝染色脱色液，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 e. 微波炉加热至接近沸腾或刚刚沸腾，立即停止加热。 f. 随后在脱色液温度较高的情况下，在摇床上摇动5-10分钟。此时通常可以观察到比较清楚的蛋白条带。 g. 更换新鲜的脱色液，重复步骤e和步骤f，直至蓝色背景基本上全部被脱去，蛋白条带染色效果达到预期。
考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度的具体方法及步骤 蛋白质浓度测定的方法有很多，考马斯亮蓝测定蛋白质是实验室最常见的一种方式，它利用比色法和色素法混合方法、操作简便，下文介绍了考马斯亮蓝测定蛋白质浓度的原理、优缺点、操作以及注意事项。 实验原理 考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度，是利用蛋白质―染料结合的原理，定量的测定微量蛋白浓度的快速、灵敏的方法。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点，因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。 考马斯亮兰G-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，使染料的最大吸收峰(lmax)的位置，由465 nm变为595 nm，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。通过测定595 nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。研究发现，染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸(特别是精氨酸)和芳香族氨基酸残基相结合。考马斯亮蓝染色法的突出优点是： (1)灵敏度高，据估计比Lowry法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1 mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，蛋白质-染料复合物有更高的消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。 (2)测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要5分钟左右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在
1小时内保持稳定，且在5分钟至20分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间。 (3)干扰物质少。如干扰Lowry法的K+、Na+、Mg2+离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法。 此法的缺点是： (1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此考马斯亮蓝染色法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用g—球蛋白为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。 (2)仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污剂、Triton X-100、十二烷基硫酸钠(SDS)等。 试剂与器材 一、试剂 考马斯亮蓝试剂： 考马斯亮蓝G―250 100 mg溶于50 mL 95%乙醇中，加入100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至1000 mL。 二、标准和待测蛋白质溶液 1. 标准蛋白质溶液
实验考马斯亮蓝法测定 蛋白质含量 集团文件发布号：（9816-UATWW-MWUB-WUNN-INNUL-DQQTY-
实验五考马斯亮蓝法测定蛋白质含量 一、实验目的 1.掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质含量的原理与方法 2.熟练分光光度计的使用和操作方法。 二、实验原理 考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种，它与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。它在酸性溶液中呈棕红色，最大光吸收峰在465nm，当它与蛋白质结合形成复合物时，其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G-250—蛋白质复合物呈蓝色，在一定范围内，595nm下光密度与蛋白质含量呈线性关系，故可以用于蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝结合法是近年来发展起来的蛋白质定量测定法，本方法具有操作方便、快速、干扰因素少的特点。 离心机的使用说明： 1.要离心的离心管和管套要称重，重量不等时将水加在管套里。 2．离心管的放置是对角线放置，要求必须对称。 3. 先将离心机转速旋钮恢复到零刻度后，再定时间，定好时间后缓慢旋转转速旋钮，使离心机均匀的提速到预定转速。 分光光度计的使用说明： 1.接通电源开关，预热20min后，再选择须用的单色光波长。 2.放入已加入溶液的比色皿，盖上样品室盖，推动试样架拉手，使对照比色皿（溶液装入4／5高度，置第一格）置于光路上，调节100％透射比按钮，使吸光度值A=0.00。 3.推动试样架拉手，使样品比色皿置于光路上，读出吸光度值。 4.测量完毕，取出比
色皿，洗净后置于乙醇溶液中浸泡脱色。 5.电源开关置于“关”，拔下电源插头。 三、试剂与器材： 1.试剂： （1）0.9％NaCl：9g NaCl溶解在1L的容量瓶中。 （2）标准蛋白质：称取50mg结晶牛血清蛋白定溶于50ml容量瓶里。（3）染液：考马斯亮蓝G-250 0.5g，溶于250mL95%乙醇，再加入 500mL85％(W／V)磷酸，保存于棕色瓶中，称为母液。取150 mL然后加蒸馏水定容到1000mL，保存于棕色瓶中，备用。 2.器材： 试管；吸管10mL、l5mL、lmL、0.1mL；722分光光度计 四、操作方法 1.标准曲线的制备 取6支试管，按下表加入各：
考马斯亮蓝快速染色液 简介： 考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考马斯亮蓝G250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE 等蛋白电泳胶的快速染色，亦可用于Western 转膜后PAGE 胶上残余蛋白的检测。 Leagene 考马斯亮蓝快速染色液采用Leagene 自主研发的技术，在传统考马斯亮蓝快速染色液的基础上进行改良，是一种无毒的染色液，快速染色液，可以检测低达蛋白电泳条带。其核心优点在于：无需对凝胶进行固定，无需煮沸，无需脱色，染色时间短，操作更加简单。 组成： 自备材料： 1、 水平摇床或侧摆摇床 2、 蒸馏水 3、 (可选)加热装置 4、 20%甘油水溶液 操作步骤(仅供参考)： 1、PAGE 电泳结束后取凝胶放入约蒸馏水中，在摇床上摇动，弃液，重复上述步骤1次。 2、弃蒸馏水，加入Commassie Blue Fast staining solution ，使染色液能盖住凝胶。 3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中，在水浴锅或微波炉内加热至95～100℃，立即从加热装置中取出。(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程，亦可省略。) 4、在摇床上摇动染色，蛋白量大的条带10～15min 左右会出现，大部分蛋白条带会在30～60min 左右出现。一般情况下，5h 能获得极佳效果。 5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色，弃染色液。 6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。亦可以在摇床上摇动脱色，以便减少背景干扰。 7、把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 编号 名称 PT0013 PT0013 Storage 考马斯亮蓝快速染色液 100ml 500ml 4℃ 使用说明书 1份
. 法）测定蛋白质浓度法（Bradford考马斯亮蓝一、实验原理的明显缺点和许多限制，和biuret法）folin—酚试剂法（lowry法）双缩脲法（促使科学家们 去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。，是根据蛋白质与染料1976年由bradford 建立的考马斯亮兰法（bradford法）因相结合的原理设计的。这种蛋白质测定 法具有超过其他几种方法的突出优点，而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。使染料的最大吸收峰的位考马斯亮兰g-250染料，在酸性溶液中与蛋白质结合，，溶液的颜色也由棕黑色变为兰色。经研究认lmax），由465nm变为595nm置（和芳香族氨基酸残基染料主要是与蛋白质中的碱性氨基酸（特别是精氨酸）为， A595，与蛋白质浓度成正比。相结合。在595nm下测定的吸光度值法的突出优点是： bradford。这1mg灵敏度高，据估计比lowry 法约高四倍，其最低蛋白质检测量可达1. 蛋白质－染料复合物有更高的是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大，消光系数，因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比lowry法要大的多。分钟左52. 测定快速、简便，只需加一种试剂。完成一个样品的测定，只需要1右。由于染料与蛋白质结合的过程，大约只要2分钟即可完成，其颜色可以在分钟之间，颜色的稳定性最好。因而完全不5分钟至20小时内保持稳定，且在 lowry法那样费时和严格地控制时间。用像缓冲液、糖和蔗离子、tris干扰物质少。如干扰3. lowry法的K+、Na+、Mg2+ edta等均不干扰此测定法糖、甘油、巯基乙醇、此法的缺点是： 法bradford1. 由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同，因此—球蛋白g用于不同蛋白质测定时有较大的偏差，在制作标准曲线时通常选用 为标准蛋白质，以减少这方面的偏差。仍有一些物质干扰此法的测定，主要的干扰物质有：去污2. 的）和0.1n的naoh。（如同0.1ntriton 剂、 x-100、十二烷基硫酸钠（sdsbeerlowary法一样）。3. 标准曲线也有轻微的非线性，因而不能用酸干 扰定律进行计算，而只能用标准曲线来测定未知蛋白质的浓度。 1、试剂： 试剂：（1）考马斯亮蓝，用乙醇，加入250 100mg100ml 85% H3PO4溶于50ml 95%G —蒸馏水考马斯亮蓝4.7%250, W/V）考马斯G—过滤。稀释至1000ml, 最终试剂中含0.01%（亮蓝滤纸）H3PO4。（（W/V）乙醇，8.5%W/V （2）标准蛋白质溶液：蛋白溶液 100 ug/ml纯的牛血清血蛋白，根据其纯度 配制成 2. 器材： （1）（2）旋涡混合器可见光分光光度计 3、的制作标准曲线试管编号 0 1 2 3 4 5 6 1 / 2 . 0.60.40.50.10.20.30100ug/m标准蛋白m）0.4 0.5 0.8 0.7 0.6 0.9 蒸馏水 1 5
仅供科研版本号：170818 考马斯亮蓝快速染色液 【产品组成】 【保存条件】 4℃,12个月 【产品概述】 考马斯亮蓝快速染色液(Commassie Blue Fast staining solution)是以考马斯亮蓝G250为染料可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳胶的快速染色，亦可用于Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。 考马斯亮蓝快速染色液采用自主研发的技术，在传统考马斯亮蓝快速染色液的基础上进行改良，是一种无毒的染色液，快速染色液只需1h，可以检测低达100ng的蛋白电泳条带。其核心优点在于：无需对凝胶进行固定，无需煮沸，无需脱色，染色时间短，操作更加简单。 【使用方法】 1、PAGE电泳结束后取凝胶放入约50～100ml蒸馏水中，在摇床上摇动5min，弃液，重复上述步骤1次。 2、弃蒸馏水，加入3～5倍体积以上的Commassie Blue Fast staining solution，使染色液能盖住凝胶。 3、(可选)凝胶置于考马斯亮蓝快速染色液中，在水浴锅或微波炉内加热至95～100℃，立即从加热装置中取出。(此步骤可以使染色提高灵敏度或加快染色进程，亦可省略。) 4、在摇床上摇动染色，蛋白量大的条带10～15min左右会出现，大部分蛋白条带会在30～60min左右出现。一般情况下，5h能获得极佳效果。 5、出现清晰的目标蛋白条带即可停止染色，弃染色液。 6、加入适量的蒸馏水停止染色反应。亦可以在摇床上摇动脱色5～10min，以便减少背景干扰。 7、把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。 【注意事项】 1、PAGE电泳后凝胶采用蒸馏水清洗的目的在于去除凝胶中的SDS等干扰物质。如果丌能充分去除SDS 会导致背景较高。如果凝胶很厚，洗涤时间应适当延长、洗涤次数应适当增加。蒸馏水洗涤去除凝胶中的杂质时，如果使用经过加热或沸腾的蒸馏水，每次洗涤时间可以缩短至1～2min。 2、染色时如果把凝胶和染色液一起放置在微波炉中适当加热，可以大大加快染色速度。但加热时宜尽量避免沸腾，以免出现因暴沸而导致的凝胶碎裂。 3、如果希望染色的背景更低，希望获得更加清晰的蛋白条带，可以加入适量的室温蒸馏水进行洗涤。通过蒸馏水洗涤可以进一步降低背景。在4℃蒸馏水中浸泡过夜可以获得背景更低，条带更清晰的条带。在次日对4℃蒸馏水浸泡过夜的已经进行了染色的凝胶再同前一天一样进行染色和洗涤可以进一步改善染色效果，获得更好的染色蛋白条带。 南京森贝伽生物科技有限公司网址：https://www.doczj.com/doc/3816314527.html,/ 第1页
常规考马斯亮蓝染色液 货号：P1310 规格：100mL/500mL 保存：室温保存，有效期12个月。 产品说明： 考马斯亮蓝染色液(Commassie Blue Staining Solution)是以考马斯亮蓝R250为染料可用于SDS-PAGE 或非变性PAGE等蛋白电泳胶的常规染色或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检测。采用常规染色方法需至少1h，采用快速染色方法一般数分钟即可。本染色液经过改良，不含有毒的甲醇，但含有刺激性气味的乙酸。 自备材料： 水平摇床或侧摆摇床、蒸馏水、20%甘油水溶液、(可选)加热装置 操作步骤(仅供参考)： (一)常规染色脱色方法 1、PAGE电泳结束后取凝胶放入适量考马斯亮蓝染色液中，确保染色液可以充分覆盖凝胶。 2、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温染色1小时或更长时间。具体的染色时间取决于凝胶的厚度 和染色时的温度。凝胶较厚，温度较低，则染色时间宜适当延长。凝胶较薄，温度较高，则染色时间可以适当缩短。通常染色至凝胶的颜色和染色液的颜色非常接近，在染色液中几乎看不清凝胶时，可以认为已染色充分。染色2～4个小时或更长时间不会对最终的染色效果产生负面影响。 3、倒出染色液。染色液可以回收重复使用2～3次。 4、加入适量脱色液，确保脱色液可以充分覆盖凝胶。推荐脱色液的配方是：40%乙醇，10%乙酸，50％蒸馏 水。 5、置于水平摇床或侧摆摇床上缓慢摇动，室温脱色4～24h。期间更换脱色液2～4次，直至蓝色背景基本 上全部被脱去，并且蛋白条带染色效果达到预期。通常蛋白条带在脱色1～2h后即可出现。 6、完成脱色后把凝胶保存在水中，用于后续的拍照等。保存在水中的凝胶会发生溶涨。如需避免溶涨，可 以把胶保存在含20%甘油水溶液中，长期保存可以制备干胶。