仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定
仔猪黄痢病是出生仔猪常发的急性、致死性肠道传染病，多在仔猪出生后几天内发病，发病率高、死亡率高。临床症状主要以腹泻、排黄色稀粪、急性死亡为主要特征，剖检有肠炎和败血症变化，是危害哺乳仔猪的重要传染病之一，严重影响仔猪的生长发育，对养猪业危害极大。2015年3月，北京顺义某猪场突发仔猪腹泻，排黄白色或黄色水样稀便，根据流行病学、临床症状和病理剖检，并结合细菌病原分离、生化鉴定，致病性试验，药敏试验，确诊为仔猪黄痢大肠杆菌病。对分离的菌株进行了药敏试验，筛选出了3种敏感药物，根据诊断及药敏试验结果采取了相应的控制措施，效果显著经治疗，病情得到了有效控制。现报告如下。
1 发病情况北京顺义某猪场于2015年3月，5日龄仔猪突然发病，仔猪腹泻不止，患猪粪便呈黄白色或黄色水样，仔猪迅速消瘦、全身衰弱，很快死亡。
2 临诊症状患猪腹泻黄色水样、顺肛门流下。精神沉郁，停止吃乳，脱水，迅速消瘦。
3 病理变化心包增厚，心包膜外面覆盖纤维素性渗出物，心外膜小点出血。肝表面覆盖一层灰黄色纤维素膜，肝肿大呈土黄色，表面有细小的灰白色坏死点。脾肿大出血。十二指肠出血。
4 实验室诊断
4.1 细菌分离培养将采集的2份肝脏组织分别接种马丁琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，观察菌落形态。挑取可疑菌落涂片、革兰氏染色、镜检、纯培养。
4.2 生化试验参照BioMerieux VITEK32全自动细菌鉴定及药敏仪鉴定操作说明进行。取纯化的单菌落接于0.45% NaCL基物安培管，用比浊仪制备混浊度相当于1个麦氏单位的菌悬液，接种于VITEK革兰氏阴性菌鉴定卡（GNI+），放入读数器中鉴定读取结果。
4.3致病性试验
将上述生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的菌株，分别取纯化的单菌落接种普通营养肉汤，37℃培养24h，将每个菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠
各2只，每只注射0.2mL，同时用无菌肉汤以同样途径接种2只小白鼠作为对照，观察、记录试验结果。对死亡小白鼠剖检，并从肝、脾取样接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，观察结果。挑取单个菌落用革兰氏染色法染色、镜检。
4.4 药敏试验采用纸片法进行。15种抗菌药物纸片: 氟苯尼考、庆大霉素、氟哌酸、氧氟沙星、恩诺沙星、强力霉素、卡那霉素、阿莫西林、四环素、链霉素、环丙沙星、林可霉素、新霉素、金霉素、红霉素。
5 结果
5.1 细菌分离培养2份样品经培养后生长良好，马丁琼脂培养基上可见灰白色、圆形、光滑、湿润的菌落，在麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落，革兰氏染色为阴性小杆菌。符合大肠杆菌的培养及形态特征。
5.2 生化试验将从病料中分离纯化的菌落经BioMerieux VITEK32全自动细菌鉴定仪鉴定得到极好鉴定结果，36株菌株均能发酵葡萄糖、麦芽糖、阿拉伯糖、乳糖、木糖、鼠李糖、甘露醇、山梨醇，产酸产气；不发酵棉子糖、肌醇、侧金盏花醇；多数不能发酵蔗糖，少数发酵产酸；鸟氨酸脱羧酶、氧化酶均为阴性；甲基红试验阳性，V.P.试验阴性。符合大肠杆菌的生化特性。
5.3致病性试验将生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的2株菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠各2只，24h内全部发病死亡，对照组均健活。对死亡小白鼠剖检，并从肝、脾取样接种于麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，结果在麦康凯琼脂培养基上形成红色、圆形隆起、光滑湿润、边缘整齐的小菌落。挑取单个菌落用革兰氏染色法染色、镜检，可见革兰氏阴性小杆菌。结果表明，分离纯化的2株大肠杆菌均为致病性大肠杆菌。
5.4药敏试验经鉴定，15种抗生素中氟苯尼考和新霉素高度敏感，庆大霉素中度敏感，其余12种均耐药。
6 小结与讨论
6.1 根据菌株形态染色镜检观察、培养特性、生化特性等结果，可以确定所分离的菌株为大肠杆菌。
6.2 从药敏试验结果来看，从此猪群分离的大肠杆菌的耐药性很强，15种抗生
素中只有2种高度敏感，这可能与临床中不合理使用抗生素有关。此猪场采用氟苯尼考、新霉素高敏药物治疗，同时采用合理的相应综合防治措施，效果显著，病情得到了有效控制。
6.3 目前，猪大肠杆菌病仍然是我国规模化猪场的重要多发病，随着集约化养猪业的发展，由致病性大肠杆菌引起的仔猪腹泻是目前最严重的仔猪传染病之一，也是引起仔猪死亡的重要原因，其造成的经济损失日益严重。近年来，在我国，由致病性大肠杆菌引起的仔猪黄白痢有明显上升趋势，终年发生，仔猪死亡率增高，成活率降低，断奶窝重降低，如果仔猪黄白痢与其他猪病混合感染，其死亡率更高。发病猪场经过敏感药物治疗后，虽然能够一定程度上降低仔猪的死亡率，但耐过猪大多生长发育迟缓、饲料报酬率降低。因此，采取有效的措施预防和控制仔猪腹泻，提高仔猪成活率己成为目前养猪业生产的一项重要任务。
6.4 仔猪大肠杆菌病的发生受多种因素的影响，大肠杆菌的病原学特性、饲养管理、营养状况及环境因素对本病的发生都有着重要影响。因此，防治本病除了有针对性地免疫接种、使用敏感药物外，还应该搞好饲养管理及环境卫生，保证优质饲料和全价营养，使仔猪有充足的营养，舒适的生活环境，尽可能减少应激，提高仔猪的抵抗力。同时，注意制定科学合理的针对整个养殖场的消毒程序,坚持执行行之有效的疫病综合防治技术措施。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/407686064.html, 仔猪黄痢的流行病学、临床症状、诊断和防治措施 作者：谭艳王桂香 来源：《现代畜牧科技》2018年第07期 摘要：仔猪黄痢也叫早发性大肠杆菌病，是初生仔猪容易发生的一种急性、致死性传染病，主要是由于感染致病性大肠杆菌而导致。仔猪感染该病后，往往会扩散至整窝仔猪，使其存活率降低，增加饲养成本，即使能够耐过也会呈现生长发育迟缓，饲料报酬率下降，严重损害养猪业的经济效益，必须采取有效防治措施。 关键词：仔猪；黄痢；流行病学；临床症状；剖检变化；实验室诊断；药物治疗；饲养管理 中图分类号：S858. 28 文献标识码：B 文章编号：2095-9737（2018）07-0078-01 1 流行病学 该病通常在炎热夏季、寒冷冬季多雨潮湿季节发生，而在春、秋季节较少发生。易感性最高的是新生仔猪，通常在出生后的3天内出现发病，最晚会在7天出现发病。一般来说，初产母猪产出的后代仔猪患病后症状最为严重，而经产母猪产出的后代产仔猪症状相对较轻，这主要是由于母猪长时间感染大肠杆菌而导致机体逐渐产生了对该菌的免疫力。另外，新猪场相比于老猪场发病更加严重。 该病的发生原因比较复杂，不同猪场具有不同病因。母猪自身携带大肠杆菌，并通过粪便排出病菌，污染母猪的皮肤，特别是乳房，在仔猪吮乳时就会被感染；外界环境较差，如阴雨潮湿、圈舍污秽、温差较大等，会造成仔猪自身的抵抗能力降低，从而引起发病；另外接种疫苗不及时，或母猪饲养管理不当，也可能导致该病。 2 临床症状 一般来说，一窝仔猪中最初只有1～2头出现发病，但很快就会扩散至整窝以及周围仔栏内的仔猪，有时也会全窝仔猪一起发病。仔猪发病后的主要临床表现是在2～3 h内发生腹 泻，腹泻时排出黄色的稀粪，并污染肛门周围，逐渐引起发炎、形成结痂，症状严重的病猪会在腹泻时直接排出水样粪便，有些仔猪还伴有呕吐症状，腹泻严重时会引起脱水，另外，患病
实验1：大肠杆菌的培养和分离 一、教学要求 二、基本内容 培养 无菌技配制培养基的原 的培养基的配制计算→称量→溶化→调pH 实配制培养基的方法→分装→加棉塞→灭菌→倒验平板 室平板划线法培分离、纯化大肠杆菌 养稀释涂布法系列稀释平板涂布 1．培养基的种类和化学成份 培养基的种类有很多划分标准，按物理性质分：固体培养基和液体培养基（加入琼脂多少）。液体培养基用于扩大培养和工业生产，固体培养基用于菌种分离，鉴定，计数（菌落数量）。 培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。按照微生物的同化作用类型是自养还是异养，碳源不同，自养微生物为无机碳源，如硝化细菌是二氧化碳或碳酸盐，异养微生物为有机碳源，如大肠杆菌是葡萄糖等有机物。 2．常见微生物类群 原核生物（如细菌大肠杆菌――二分裂、革兰氏阴性、异养兼性厌氧性肠道杆菌、蓝藻、支原体、衣原体、放线菌等）、原生生物（草履虫、变形虫等）、真菌（酵母菌――出芽生殖.异养兼性厌氧性微生物、霉菌、食用菌）、病毒等。 细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。 3．无菌技术 对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。 灭菌方法： 。灼烧灭菌法①接种环、接种针、试管口等使用
2011 养猪SWINE PRODUCTION (6)其他粪中PEDV 检测诊断方法包括反转录聚 合酶链式反应（RT-PCR ）（Ishikawa 等，1997；Kubota 等，1999）、原位杂交（Kim 和Chae ，2000 ）。建立的RT-PCR 用于病猪小肠和粪便样品TGEV 和PEDV 的鉴别诊断（Kim 等，2001 ）。使用ELISA 、阻断ELISA 、间接IF 、阻断IF 和Vero 细胞培养物的血清中和试验可以检测自然或者人工感染猪血清中的特异性抗体（Callebaut 等，1982；Hofmann 和Wyler ，1989，1990；Prager 和Witte ， 1981；Shibata 等，2000；Witte 和Prager ，1987 ）。对PEDV 阳性猪小肠冷冻切片或细胞培养物进行间接IF 和阻断IF 试验可检测PEDV 抗体。在接种7d 后，用阻断ELISA 可检测到抗体（Carvajal 等， 1995b ）。所有检测抗体的方法，都应检查双份血清样本。 康复期血清样品的采集不早于腹泻开始后2周。7预防与控制 感染PED 的哺乳仔猪应让其自由饮水，以减少脱水的发生。对于育肥猪，建议停止喂料。由于PEDV 传播相对较慢，可采取一些预防措施暂时防止病毒进入分娩舍而侵害新生仔猪，这种方法有利于推迟仔猪的感染而减少死亡损失。同时，将妊娠母猪暴露于病毒污染的粪便或者肠内容物，激发母猪产生乳汁免疫力，缩短本病的流行时间。 若连续数窝的断奶仔猪中均存在病毒，则可将 仔猪断奶后立即移至别处至少饲养4周。 同时，暂停从外引进新猪。 新生仔猪口服鸡蛋黄或者含有PEDV 免疫球蛋白的牛初乳具有预防作用，可预防疾病或者降低死 亡率（Kweon 等，2000；Shibata 等，2001 ）。在欧洲，没有足够的经济意义促使人们研发该 病的疫苗。然而， 该病在亚洲暴发如此严重，所以正在研制弱毒疫苗。 Bernasconi 等 （1995）报道适应细胞的CV777病毒株，其基因序列明显改变。此外，这种适应细胞培养的病毒对剖腹产新生仔猪毒力很低，并且组织病理变化显著减少。韩国KPEDV-9毒株在Vero 细胞上传93代后对新生仔猪的致病率降低，对妊娠母猪安全，因而建议用该细胞适应毒株作为疫苗（Kweon 等，1999 ），尽管其实际效率还需要测定。在日本，从1997年开始使用一种经济的、 减毒的、适应细胞培养的PEDV （P-5V ）活疫苗对母猪进行预防接种。该疫苗被认为是有效的，但不是在所有母猪中都可产生可靠的乳汁免疫力（Usami 等，1998 ）。（转自Barbara E Straw,Jeffery J Zimmerman,Sylvie D'Allaire,et al .猪病学[M].第9版.北京： 中国农业大学出版社，2008：399-403. ）仔猪黄痢的诊断与防治 郭全海，赵耀光 （商丘职业技术学院动物工程系，河南商丘476000） 中图分类号：S858.285.1 文献标志码：B 文章编号:1002-1957(2011)06-0084-03 摘要：仔猪黄痢是由埃希氏大肠杆菌引起的一种急性高度致死性肠道传染病，临床症状多表现 为部分初生仔猪先排黄色稀粪，后拉半透明有腥臭味的黄色液体，通过流行病学调查、临床症状、病理变化和实验室诊断等可确诊。采取合理的防治措施及用氟苯尼考、庆大霉素、土霉素等药物治疗，能得到有效控制。关键词：仔猪；黄痢；大肠杆菌；诊断与治疗收稿日期：2011-10-25作者简介：郭全海（1980-），男，河南淮阳人，讲师，硕士，主要从事分子生物学及免疫学方面的研究.E-mail ：guohan611@https://www.doczj.com/doc/407686064.html, 仔猪黄痢又称早发性大肠杆菌病，是由埃希氏大肠杆菌引起的哺乳仔猪常见肠道传染病之一。仔猪黄痢对仔猪的危害非常大，发病率高时能达90%以上，病死率高达100%。如果没有合理的防治措施，常常会给猪场带来巨大的经济损失。 1流行病学 笔者在临诊中发现，仔猪常在出生后数小时至 7日龄内发病，以2~4日龄最常见，5~6日龄仔猪也 见有零星发病，1周龄以上很少见有发病。 大肠杆菌通过仔猪的口腔或脐带进入肠道得以传染。仔猪出生后从外界环境中吃了被污染的东西才能感染。这种污染常来自母猪或分娩区内清洁不彻底的积粪。在正常情况下，该病传播不快，产房内的发病数慢慢!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 84DOI:10.13257/https://www.doczj.com/doc/407686064.html,ki.21-1104/s.2011.06.039
仔猪黄痢大肠杆菌的分离鉴定 仔猪黄痢病是出生仔猪常发的急性、致死性肠道传染病，多在仔猪出生后几天内发病，发病率高、死亡率高。临床症状主要以腹泻、排黄色稀粪、急性死亡为主要特征，剖检有肠炎和败血症变化，是危害哺乳仔猪的重要传染病之一，严重影响仔猪的生长发育，对养猪业危害极大。2015年3月，北京顺义某猪场突发仔猪腹泻，排黄白色或黄色水样稀便，根据流行病学、临床症状和病理剖检，并结合细菌病原分离、生化鉴定，致病性试验，药敏试验，确诊为仔猪黄痢大肠杆菌病。对分离的菌株进行了药敏试验，筛选出了3种敏感药物，根据诊断及药敏试验结果采取了相应的控制措施，效果显著经治疗，病情得到了有效控制。现报告如下。 1 发病情况北京顺义某猪场于2015年3月，5日龄仔猪突然发病，仔猪腹泻不止，患猪粪便呈黄白色或黄色水样，仔猪迅速消瘦、全身衰弱，很快死亡。 2 临诊症状患猪腹泻黄色水样、顺肛门流下。精神沉郁，停止吃乳，脱水，迅速消瘦。 3 病理变化心包增厚，心包膜外面覆盖纤维素性渗出物，心外膜小点出血。肝表面覆盖一层灰黄色纤维素膜，肝肿大呈土黄色，表面有细小的灰白色坏死点。脾肿大出血。十二指肠出血。 4 实验室诊断 4.1 细菌分离培养将采集的2份肝脏组织分别接种马丁琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，37℃培养18～24h，观察菌落形态。挑取可疑菌落涂片、革兰氏染色、镜检、纯培养。 4.2 生化试验参照BioMerieux VITEK32全自动细菌鉴定及药敏仪鉴定操作说明进行。取纯化的单菌落接于0.45% NaCL基物安培管，用比浊仪制备混浊度相当于1个麦氏单位的菌悬液，接种于VITEK革兰氏阴性菌鉴定卡（GNI+），放入读数器中鉴定读取结果。 4.3致病性试验 将上述生化试验鉴定为大肠杆菌阳性的菌株，分别取纯化的单菌落接种普通营养肉汤，37℃培养24h，将每个菌株的营养肉汤培养物分别经腹腔接种小白鼠
鸡致病性大肠杆菌的分离培养及药敏实验 实验基本步骤：样品→肝、脾触片革兰氏染色镜检→普通琼脂平板、麦康凯琼脂平板分离培养→革兰氏染色镜检、生化实验鉴定→普通肉汤培养基增殖培养→药敏实验。 1 病料采集 1.1 准备材料：试管、载玻片、手术刀、手术剪、结扎绳、记号笔、冰块、泡沫箱、口罩、手套（该灭菌的都进行高压蒸汽灭菌）、冰箱。 1.2 取材部位：血液、肝脏、脾脏、肠内容物，若有鸡胚感染则去鸡胚及卵黄物。 1.3 操作方法：将病死鸡浸泡在消毒剂溶液中，打开腹腔，无菌采集肝脏、脾脏放于事先准备好的灭菌试管内，将带有肠内容物的肠管两端结扎放于灭菌是试管内。将有明显病变的脏器入肝、脾进行触片，做好标记。都贴上标签，标示采集样品，来源地，采集时间，采集人。将装有病料的试管放在放有冰袋的泡沫箱中，及时返回实验室，置于4℃冰箱待检。 2 菌的分离培养及鉴定 2.1 准备材料：光学显微镜、革兰氏染色液、载玻片、手术刀、接种环、平皿、恒温箱、高压锅、摇床、酒精灯、葡萄糖、甘露醇、乳糖、蔗糖等微量生化发酵管，蛋白胨水（蛋白胨(或胰蛋白胨)20g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL pH7.4），葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL蛋白胨水中加入葡萄糖1g）、甲基红试剂、吲哚试剂、乙醚、VP指示剂、超净台。 培养基： A. 普通琼脂培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、琼脂 20g、蒸馏水1000ml，ph7.3±0.1）， B. 麦康凯琼脂培养基（蛋白胨20g、牛胆盐5g、氯化钠5g、琼脂15g，乳糖10g、结晶紫0.001g、中性红0.025g，ph7.2±0.2。）， C. 营养肉汤培养基（牛肉粉 3g、蛋白胨 10g、氯化钠 5g、蒸馏水1000ml，ph7.2±0.2）。 2．2 样品触片镜检 涂片镜检：取触片,进行革兰氏染色镜检。 2.2.1在玻片上滴加草酸铵结晶紫染色液，作用1min，水洗。 2.2.2 加革兰氏碘液于玻片上媒染，作用1min，水洗。
大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定方案 实验原理： 1、大肠杆菌的性质： 大肠杆菌是G--无芽孢直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。MR试验，吲哚试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H2S，不能利用枸椽酸盐。半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、沙门氏杆菌的性质： 沙门氏杆菌是G-直杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H2S。能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌醇，MR阳性，VP阴性，不产吲哚，不分解尿素。 实验材料： 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SC）、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油） 实验内容及操作程序： 一、培养基制备： 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法见附1.二、标本制备： （1）取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。 （2）用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 （3）用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37°C恒温培养24小时。 三、细菌分离培养： （1）取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37°C 恒温培养24小时。 （2）取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37°C恒温培养24小时。 四、细菌的鉴定纯化： （1）检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上（葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H2S），并做穿刺实验于三糖铁上。37°C恒温培养24小时后观察结果。若实验结果满足预期效果，则可判定为大肠杆菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 （2）检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌，染色镜检，看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种于生化培养基上，并作穿刺实验于三糖铁上，37°C恒温培养24小时后观察结果，若结果满足于沙门氏菌的生化特性，则可判定为沙门氏菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。
实验原理： 1、大肠杆菌的性质: 大肠杆菌是G无芽抱直杆菌，在大多数培养基上表现出不同的特性。在麦康凯琼脂平板上是凸起光滑湿润的粉红菌落，革兰氏染色镜检为红色短杆菌。三糖铁琼脂上的反应为斜面和底部都变黄，产气，不产生硫化氢。生化特性为发酵葡萄糖、乳糖、甘露醇、麦芽糖，不发酵蔗糖。MR试验，口引噪试验为阳性，VP试验为阴性，不产生H 2S,不能利用xx酸盐。 半固体中沿穿刺线向四周生长。 2、沙门氏杆菌的性质： -沙门氏杆菌是G直杆菌。在麦康凯平板上为细小半透明、圆形、无色小菌落，三糖铁斜面下层变黄色，上层仍为红色，穿刺处为变黑产生H 2S。能发酵葡萄糖产酸产气，能利用枸椽酸盐，不发酵乳糖不利用蔗糖肌 醇，MR阳性，VP阴性，不产呵噪，不分解尿素。 实验材料： 含有大肠杆菌和沙门氏菌的猪肝脏、培养基（琼脂平板培养基、三糖铁琼脂斜面培养基、麦康凯琼脂、生化培养基、SQ、器械（剪刀、记号笔、接种环、酒精灯、显微镜、试管、玻片、培养皿）、药品（消毒酒精、结晶紫、碘液、酸酒精、品红、松柏油） 实验内容及操作程序： 一、培养基制备： 制备普通琼脂培养基、麦康凯平板、SC增菌培养基、生化培养基，制备方法
见附 1. 二、标本制备： (1) 取新鲜猪肝脏一小块，火焰表面消毒。 (2) 用浸过消毒液的剪刀剪开一个小口于消过毒的猪肝脏。 (3) 用接种环在剪开的肝脏小口沾取肝脏液，分别画线于麦康凯培养基和接种于SC中，37 C恒温培养24小时。 三、细菌分离培养： (1) 取出培养了24小时的麦康凯平板。挑选麦康凯平板上的凸起光滑湿润的粉红菌落染色镜检，看是否为红色短杆菌，若是，即疑似为大肠杆菌，则取其接种于另一麦康凯平板，37 C恒温培养24小时。 (2) 取出培养了24小时的SC增菌培养基，染色镜检，看是否有疑似沙门 氏菌，有则取其中细菌画线接种于麦康凯平板上，37 C恒温培养24小时。 四、细菌的鉴定纯化： (1) 检查疑似大肠杆菌的培养基是否长满了粉红色菌落，染色镜检。并取其分别接种于生化培养基上(葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、蔗糖、肌醇、枸椽酸盐、尿素、MR、VP、H 2S),并做穿刺实验于三糖铁上。37 C恒温培养24小时后观察结果。若实验结果满足预期效果，则可判定为大肠杆菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。 (2) 检查疑似沙门氏菌的平板上是否长满细菌，染色镜检，看是否满足于沙门氏菌的染色特性。并取其接种于生化培养基上，并作穿刺实验于三糖铁 上，37 C恒温培养24小时后观察结果，若结果满足于沙门氏菌的生化特性，则可判定为沙门氏菌，则将其接种于普通琼脂培养基上传代培养。
几种常见猪病诊断与防治
目录 猪瘟 (1) 猪口蹄疫 (2) 猪伪狂犬病 (3) 猪繁殖与呼吸综合征 (4) 猪流行性感冒 (5) 猪丹毒 (6) 猪肺疫 (7) 猪链球菌病 (8) 仔猪黄痢 (9) 猪水肿病 (10) 猪气喘病 (11) 猪传染性萎缩性鼻炎 (12) 猪附红细胞小体病 (13) 猪弓形体病 (14) 猪应激综合症 (15)
食盐中毒 (16) 黄曲霉毒素B1中毒 (17) 赤霉菌毒素中毒 (18) 仔猪铁缺乏症 (19) 猪疥癣病 (20) 猪瘟 猪瘟俗称“烂肠瘟”一种急性、高热、接触性传染病，急性呈败血症，慢性以坏死肠炎为其主要特征，有高度的发病率和死亡率。 流行特点：在自然情况下，本病仅发于猪（包括野猪），不同年龄、性别和品种的猪对猪瘟病毒的敏感性无差异，但常流行猪瘟的地区，年龄大的猪比小猪的抵抗力强，天然感染的途径主要是消化道，也可以通过呼吸道、眼结膜和伤口感染。 症状分三型： （1）最急性型，此类型比较少见，偶尔发生在流行开始的猪群，病猪体温升至 41℃以上常无其他病状，一夜过去，已死在猪舍内，病程仅1-2天，死亡率100% （2）急性型，此类型常见，病猪体温升至40.5-41℃，吃食减少或全废：吃两 三口后就去睡觉，眼结膜发炎并有脓性分泌物、鼻镜干燥，病初便秘，粪便干粟状，带血或黏液，以后拉稀，粪便恶臭，公猪的包皮常有积尿，挤压时流出恶臭浊白色的液体。病后期，病猪耳朵发绀，四肢内侧、腹下、会阴等处的皮肤有小出血点。病猪精神委顿，不活动，病程1-2周，死亡率70-80%。 （3）慢性型，病状极不规则，体温时高时低，食欲也时有时无，喜饮水，便秘 与腹泻交替，病猪低头垂尾，常挤卧在一起。极度消瘦，行动无力，摇晃，病程常拖延一个月以上，最后衰竭而亡。 剖检：死猪外观消瘦，有眼屎，耳朵发绀，四肢内侧，肛门等处皮肤常有出血点。剖检喉头、心脏、膀胱、肾脏有明显的出血点。全身淋巴结尤其是肠系膜淋巴结边缘出血，切面红白相间，呈大理石样。肾脏色淡，表面有散在的针尖状。出血点。脾不肿大，边缘有许多深红的点状突起，称梗塞病变。脾脏边缘梗塞状尤为严重。胆囊和胃黏膜常有出血斑。回盲瓣上部出血坏死或有纽扣状溃疡。 防治： 1.平时预防措施 （1）用兔化猪瘟弱毒冻干苗进行预防注射。对猪群必须作到定期防疫， 一头不漏，这是预防猪瘟的首要环节。以后每月对出生仔猪和购进的猪只进行补打疫苗。 （2）实行自繁自养，尽可能不要到猪市场购猪，必须引进种猪时，应到 无病场及有正规防疫制度的猪场购买。买回来的只猪必须隔离观察半个月以上，无病才能混养。 （3）经常保持猪舍清洁卫生，加强饲养管理。 2.紧急预防，一旦猪群发生猪瘟，应采取以下措施： （1）初步确诊后立即用3-4倍剂量的兔化猪瘟弱毒冻干苗对假设健康 猪群紧急预防注射（每猪换针头）。 （2）免疫原则：先健康猪后可疑猪。病猪不处理，一定要换针头。
河南农业大学 本科生毕业论文(设计) 题目鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验学院牧医工程学院 专业班级2011届动物医学专升本3班学生姓名王张凡 指导教师许兰菊(教授) 撰写日期：2011年5月10 日
鸡大肠杆菌的分离鉴定与药敏试验 王张凡 （2011届动物医学专升本3班） 摘要：为了对巩义某鸡场疑似鸡大肠杆菌病的鸡群进行确诊，并为有效防治提供依据，本研究利用细菌学检验方法对采集的典型病料进行细菌分离鉴定和细菌药敏试验。通过细菌分离培养、形态学观察、生化试验、动物试验和血清学试验。结果表明：该鸡群中分离到的病原菌为鸡大肠杆菌。动物攻毒试验结果表明：分离的鸡大肠杆菌具有明显的致病作用，雏鸡发病率为100%(5/5)，死亡率达60%(3/5)。血清学鉴定结果显示，该分离菌血清型为O1。药敏试验结果表明：该细菌对头孢曲松、头孢唑林、阿米卡星、复方新诺明（磺胺甲恶唑）、环丙沙星、诺氟沙星、氧氟沙星、氨苄西林、米诺环素和庆大霉素均敏感，对阿莫西林和阿奇霉素为中度敏感;但对罗红霉素和四环素耐药。本研究结果对准确诊断和有效防治该病提供了依据和条件。 关键词：鸡；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验 Isolation, Identification and Antibiotic Sensitivity Test of Chicken Escherichia Coli wang zhangfan (Class 3 of Veterinary Medicine, Graduated in 2011) Abstract:In order to make a definite diagnosis for the suspend Chicken Escherichia Coli about chicken house from Gongyi and provide a reference for effective prevention and treatment. The bacteria was isolated and identified from typical samples and antibiotic sensitivity test was also adopted. By bacterial separate cultures, morphological observation, biochemical tests, animal experiment and serological tests, the pathogen of this chickens is pathogenic E.coli bacteria. The result of animal experiment showed: this Escherichia coli had obviously pathogenic; the morbidity of chicklings was 100%(5/5) and the mortality was 60%(3/5).Serological testing results indicated: the serotype of this strain was O1. The antibiotic sensitivity test results illuminated: the sensitivity of the strain to ceftriaxone、cefazolin and other 8 kinds of drug were sensitive; and the drug sensitivity to amoxicillin and azithromycin are intermediate;but the strain were drug resistant to roxithromycin and acheomycin. This research provided a scientific basis and qualification for exact diagnosis and effective prevention and treatment to Escherichia coli. Key word:Chicken,Escherichia Coli, Isolation and Identification, Antibiotic Sensitivity Test 鸡大肠杆菌病是由禽致病性大肠杆菌(avian pathgenicity E．coli，APEC)引起的急性或慢性细菌性传染病，各种日龄的鸡均可发病，但雏鸡和产蛋鸡更易发病，其常与其他疾病混合
仔猪黄痢诊治新法 仔猪黄痢是由致病性大肠埃希氏杆菌引起的以感染1周龄以内的初生仔猪为主的急性肠道传染病。1周龄以上的仔猪很少见。 1、主要临床症状 仔猪吃初乳后，先后5头猪发病，表现为严重腹泻，粪便成浆液状，黄白色，在尾部，会阴和后肢等处玷污粪液，并粘：结成痂。病猪排粪时拱背，表现排便失禁，精神委靡，消瘦，脱水，眼球下陷。 2、剖检变化 病猪肠道粘膜呈卡他性炎症，其中十二指肠充血、出血，结肠炎症较轻，肠道充气膨胀，有多量黄色液体；肠系膜淋巴结肿大、多汁色淡，有弥漫性点状出血，质脆软；肝肾有凝固性坏死灶。 3 、实验室诊断 3.1 镜检可见肠上皮组织显著膨胀，细胞内见有气泡，肠粘膜细胞膨胀，肠内绒毛脱落，腺体萎缩。 3.2 微生物学检查取十二指肠.内容物划线接种于麦康凯平板培养基上，作溶血试验及生化试验。将分离的病原型大
肠杆菌攻毒2头哺乳仔猪，于24h后发生黄痢。于是确诊该综合养殖厂哺乳仔猪患仔猪黄痢。 4、防治措施 4.1 加强饲养降低日粮中的抗原物质，减轻肠道免疫反应，断奶仔猪日粮的豆粕含量不宜超过25%，降低粗蛋白水平，以限制性氨基酸强化日粮，断奶仔猪日粮粗蛋白含量不宜超过19%：饲料中添加柠檬酸、甲酸钙等有机成，分；加入乳清粉等生成乳酸的物质；也可在料中加入调痢生、益生素等微生态制剂。 4.2 改善管理适度通风换气，降低圈舍温度，增强仔猪抵抗力。搞好环境卫生，彻底清扫消毒。猪场每天清扫一次，然后用3%来苏水与0.2%～0.5%过氧乙酸交替消毒，地面通道遍撒生石灰。 4.3 应用药物对于腹泻脱水仔猪，口服补液盐，方法是10%葡萄糖盐水10mL，地塞米松2mL，10%维生素C2mL。 4.4化学治疗
高中生物《大肠杆菌的培养和分离》学案1 浙 教版选修1 一、大肠杆菌细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核，细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同，细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无害，但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的受体细胞。 二、培养基配置微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物，但不一定需要外界补充，有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤：
1、称量：准确称取各成分。蛋白胨0、5g，酵母提取物0、25g，氯化钠0、5g，加水50ml。配置LB固体培养基时还需加1g 琼脂。 2、溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3、调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4、灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 5、倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。 三、灭菌和消毒
河南科技学院2010届本科毕业论文（设计） 一起猪源性大肠杆菌病的诊治 学生姓名：汤鹏 所在院（系）：动物科学学院 所学专业：动植物检疫 导师姓名：王宪文 完成时间：2014年5月
一起猪源性大肠杆菌病的诊治 摘要 大肠杆菌病是由病原大肠埃希氏菌所引起的一种急性、多型性、肠道型传染病，严重影响仔猪的存活率。主要临床表现有仔猪黄痢、仔猪白痢、猪水肿病。为了弄清养猪场大肠杆菌病的主要血清型、抗药性等特点，以便采取合理的防治措施，采集病料60份，进行大肠杆菌病的分离培养鉴定、生化试验、耐药性试验等，大肠杆菌的分离鉴定包括病原菌的分离培养、生化试验、毒理试验，在伊红美蓝上挑出略带金属光泽、紫黑色的菌落接种在麦康凯上经过培养后，轻摇显云雾状的菌环，在营养琼脂上培养形成菌落，进行试验找出菌落的特性，以及致病力。耐药性实验结果表明（），治疗试验中------，试验结论--。（方法为培养基的制备、琼脂纸片扩散法，氟哌酸、磺胺、四环素对大肠杆菌不太有效，大肠杆菌对头孢类药物较为敏感，对卡那霉素、庆大霉素不敏感）（删除） 关键词：仔猪、大肠杆菌、分离鉴定、药敏试验、中草药制剂
Abstract Escherichia coli disease is an acute, polymorphism, intestinal infectious diseasescaused by pathogenic Escherichia coli, seriously affect the survival rate of piglets. The main clinical manifestations of yellow scour of newborn piglets, white scour of piglets, edema disease of swine. In order to understand the swinecolibacillosis serotype, drug resistance, in order to take reasonable measures of prevention and cure disease, collecting material is 60, separation of Escherichia coli culture identification, biochemical test, resistance test, isolation, isolation and identification of pathogenic bacteria Escherichia coli include biochemical test,toxicity test, in eosin methylene blue was inoculated with metallic luster, pick out the purple black at mark Kang Kai. After training, annulus rocked the explicitcloud like, culture form colonies on nutrient agar, find out the characteristics ofcolony, and pathogenicity. Methods drug sensitivity test for the preparation of culture medium, agar disk diffusion method, norfloxacin, tetracycline andsulfonamide, less effective against Escherichia coli, E. coli sensitive tocephalosporins, not sensitive to kanamycin, gentamicin, Key words: Piglet, Escherichia coli, isolation and identification, drug sensitive test, micro ecological preparation
一、大肠杆菌的培养和分离 用__________扩大培养，再用__________分离，形成一个个单独的菌落。 __________培养基是细菌通用培养基；__________培养基是植物组织培养通用培养基2.细菌分离方法比较 __________分离法---方法简单； __________分离法—单菌落易分离，操作复杂 3.灭菌操作 ①灭菌操作的首要条件是各种器皿必须是无菌的 ②各种培养基必须是无菌 4.培养和分离步骤 __________→__________→__________培养__________分离→培养保存 5.灭菌与消毒 二、分离以尿素为唯一氮源的微生物 1.实验原理 （1）利用尿素的细菌含有__________，通过降解_______作为其生长的氮源，其反应式如下：（NH2）2C=O+H2O----脲酶→____________________2 （2）利用指示剂（______）颜色变化检验脲酶所催化的反应，若酚红由__________色变为__________色，证明尿素以被脲酶水解产生__________ 2实验步骤 制备__________培养基和以______为唯一氮源固体培养基→制备细菌__________，并稀释至10-3、10-4、10-5、10-6→__________分离→培养保存 注意：在恒温箱中培养时，培养皿要__________—防止凝结的蒸馏水滴到培养基上 3预测结果： ①LB全素固体培养基上__________； ②以尿素为唯一氮源固体培养基__________； ③一定时间内，菌落周围出现__________区域； ④用浓度为10-4和10-5土壤稀释液接种，__________土壤稀释液更容易形成单菌落。 高考及高考模拟题
实验1 大肠杆菌的培养和分离 ——基础知识和操作过程梳理一、大肠杆菌 细菌是单细胞的原核生物。细菌细胞的结构有细胞壁、细胞膜、细胞质等。细菌无成型的细胞核，细胞壁由肽聚糖组成。由于细菌细胞壁结构不同，细菌可分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。革兰氏阳性菌细胞壁厚，无荚膜，多产生外毒素；革兰氏阴性菌细胞壁薄，有荚膜，多产生内毒素。革兰氏阳性菌对青霉素更为敏感。 大肠杆菌是革兰氏阴性、异养兼性厌氧型肠道杆菌。在肠道中一般对人无害，但任何大肠杆菌进入人的泌尿系统，都会对人体产生危害。大肠杆菌在基因工程技术中被广泛的应用，它的质粒是最常用的运载体，它也是基因工程中常用的受体细胞。 二、培养基配置 微生物生命活动过程中需要的化合物有碳源、氮源、生长因子、无机盐和水。有的化合物既是碳源又是氮源、能源。生长因子是微生物生长不可缺少的微量有机物，但不一定需要外界补充，有的微生物可以自身合成。在提供上述几种主要营养物质的基础上，培养基还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。 我们一般用LB液体培养基来扩大培养大肠杆菌，培养后可在LB固体培养基上划线分离。以下为本实验中培养基配置步骤： 1．称量：准确称取各成分。蛋白胨0.5g，酵母提取物0.25g，氯化钠0.5g，加水50m l。配置LB固体培养基时还需加1g琼脂 2．溶化：加热熔化，用蒸馏水定容到50mL。配置LB固体培养基时还需加琼脂，整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。 3．调pH：用1mol/L NaOH溶液调节pH至偏碱性。 4．灭菌：在两个250ml的三角瓶中分别装入50ml LB液体培养基和50ml LB固体培养基，加上棉塞。将培养皿用牛皮纸包好，放入灭菌锅内，1kg压力灭菌15min。 5．倒平板：灭菌后，待固体培养基冷却至60℃左右时在酒精灯火焰附近操作进行。其过程是：①将灭过菌的培养皿放在火焰旁，右手拿装有培养基的三角瓶，左手拔出棉塞；②右手拿三角瓶，使三角瓶的瓶口迅速通过火焰；③用左手将培养皿打开一条稍大于三角瓶口的缝隙，右手将培养基倒入培养皿，立刻盖上皿盖；④待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置。 倒过来放置的目的是防止培养基冷却过程中形成的水滴落到培养基表面。向培养皿中转移已灭菌的培养基时，也不要把培养基沾在皿壁上。否则，空气中杂菌会在这些粘附培养基上繁殖，并污染皿内培养基。 三、灭菌和消毒 1．无菌技术：①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行；④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒方法：①日常生活经常用到的是煮沸消毒法；②对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法；③对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒；④实验操作者的双手使用酒精进行消毒3．灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；③表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。 4．比较消毒和灭菌：
仔猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验 程子兵1 董春霞2石国界3沙里塔那4 马长丽1 （1. 塔城地区动物疾控与诊断中心新疆塔城834700；2. 重庆市武隆县畜牧兽医局重庆市武隆县408500；3. 塔城市畜牧兽医工作站新疆塔城834700；4. 额敏县兽医工作站新疆额敏县834600） 摘要:对塔城地区一农户饲养猪群中仔猪发生的临床症状以水肿病、白痢、黄痢为特征的病例进行了样品采集，后经麦康凯、伊红美蓝分离培养，糖发酵生化试验、动物试验等结果显示均为大肠杆菌，同时通过药敏试验筛选出敏感抗生素。 关键词：仔猪；大肠杆菌；分离鉴定；药敏试验 Abstract：Specimens with dropsy and dysentery clinical symptoms were isolated from one household raises pig group in Tacheng area. By bacteria culture, biochemical test and animal test, the results indicate the bacterium is pathogenic Escherichia Coli. Meanwhile, we ascertain sensitive antibiotics to this E coli by medicine test. Key words:pig; Escherichia Coli; isolate indentify; medicine test 仔猪大肠杆菌病是由大肠杆菌引起的肠道传染病，主要表现为仔猪白痢、黄痢和水肿病，其中黄痢多发生于1周内哺乳仔猪，病猪主要表现为排黄色糊状粪便；白痢多发于10～30日龄，病猪主要表现为排乳白色或灰白色腥臭糊状粪便；水肿病多发于断奶仔猪，主要有神经症状、胃壁、肠黏膜等组织水肿，四季均可发生，发病率和致死率
鸡大肠杆菌的分离与鉴定 摘要：**市某鸡场5600只240日龄罗曼蛋鸡陆续发病，产蛋率迅速下降，病死率约为6%。病鸡多呈精神沉郁、食欲减退，腹部膨大，粪便呈灰绿色或黄色，多经2~3周死亡，初步诊断为大肠杆菌病。采集2只病鸡的肝和卵巢，通过细菌的分离培养，获得2株革兰氏阴性杆菌。糖发酵试验、三糖铁琼脂试验、尿素分解试验、硫化氢产生试验、药敏试验、IMVIC试验确定其为大肠杆菌。玻板凝集 ；选用10种临床常用的抗菌药进行药敏试验，结果表试验鉴定其O抗原型为O 2 明分离菌株对先锋V、多粘菌素、呋喃妥因敏感，而对四环素、林可霉素耐药。关键词：鸡，大肠杆菌病，分离，鉴定 论文试验 鸡大肠杆菌病是由某些血清型的致病性大肠埃希氏菌引起的鸡的非肠道传染性疾病的总称。尽管近几年养鸡业发展迅速，但随着规模养殖的不断增加和产品流通的日益频繁，鸡大肠杆菌病越来越普遍，已经成为影响养鸡业快速发展的主要疫病之一。通过对大肠杆菌的分离、鉴定，对该病有着非常重要的意义。通过药敏试验测定大肠杆菌对药物的敏感，可为合理用药提供指导。本论文通过微生物学方法，对**市某鸡场罗曼蛋鸡的疑似大肠杆菌病进行了确诊。 1 材料 1.1 病料来源 2008年3月17日，**市某鸡场5600只240日龄罗曼蛋鸡陆续发病，产蛋率迅速下降，病死率约为6%。病鸡多呈精神沉郁、食欲减退，腹部膨大，粪便呈灰绿色或黄色，多经2~3周死亡。采集2只病鸡的肝和卵巢作为病料。 1.2 培养基 1.2.1 麦康凯琼脂（Mackonkey agar，蛋白胨20g，乳糖10g，氯化钠5g，牛胆盐5g，中性红0.025g，琼脂粉20g，加蒸馏水1000mL，pH7.3）。 1.2.2 三糖铁琼脂（蛋白胨20g，牛肉浸膏5g，乳糖10g，蔗糖10g，葡萄糖1g，氯化钠5g，硫代硫酸钠0.2g，硫酸亚铁0.2g，琼脂粉20g，0.4%酚红水溶液6.3mL，蒸馏水1000mL，除酚红指示剂外，各成分加热溶解，调至pH7.4，然后加入酚红指示剂，分装于试管；115℃高压蒸气灭菌15min后，制成底层较深的斜面）。 1.2.3 胰蛋白胨水溶液（蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，蒸馏水250mL，溶解后调pH为7.6，分装于试管，每管4~5mL，121℃高压蒸气灭菌15min）。 1.2.4葡萄糖蛋白胨水溶液（每100 mL pH7.6的邓亨氏蛋白胨水中加入葡萄糖1g，溶解后分装于试管，每管1mL，121℃高压蒸气灭菌15min）。