当前位置:文档之家› 加味聚精食疗汤对少精弱精症大鼠曲细精管结构改善的实验研究_陈慰填

加味聚精食疗汤对少精弱精症大鼠曲细精管结构改善的实验研究_陈慰填

加味聚精食疗汤对少精弱精症大鼠曲细精管结构改善的实验研究_陈慰填
加味聚精食疗汤对少精弱精症大鼠曲细精管结构改善的实验研究_陈慰填

第11卷 第9期 2009 年 9 月

辽宁中医药大学学报

JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM

Vol. 11 No. 9

Sep .,2009

采用二次多项式逐步回归(门限值、剔除值均为0.1),得回归方程:

Y=1.36913+1.601556×10-2×X(1)×

X(4)-1.663975×10-2×X(1)×X(5)+1.489053×10-2×X(2)×X(4)-0.1751671×X(3)×X(5),r=0.99978,显著(P<0.05),故将此回归方程输入计算机,采用JYSYSJ 软件的数据优化模块处理,结果贴剂基质最佳配比为:明胶:2.8058g, PVA:4.3535g,CMC-Na:2.5039g,甘油:14.8711% ,氧化锌:0.1391g,加蒸馏水至100 g。

按照优化的处方配比,制备3批样品,分别进行体外透皮实验,按前法测量单位面积累计渗透量,其平均值为(2.4440±0.0513)mg/cm2,渗透速率为0.6332mg/cm2h1/2,透皮吸收率较高,24h 内其释放过程满足Higuchi模型方程。可见均匀设计优选出的结果可靠,样品的24h单位面积累积渗透量优于均匀设计中的各处方,重现性较好。

3 讨 论

以凝胶剂为载体的透皮给药系统,由于制备工艺简单,成本低廉而具有较大的生产优势,但其中以以琼脂、淀粉、羧甲基纤维素钠等凝胶为载体的透皮给药系统,一般均存在制剂成品成型性差或韧弹性不够等缺点。笔者通过预实验发现PVA 溶液经冷冻再解冻成形工艺后可形成表而光滑、韧弹性好的凝胶。因此初步选择PVA作为贴剂的骨架材料。本实验以不同基质组合制备成5种凝胶贴剂,以贴剂的物理性质为指标,筛选适合本制剂的辅料种类。结果发现PVA+明胶+ CMC-Na组合制成的贴剂,具有较好的成型性、弹性、韧性、粘附性和脱模性。由于PVA本身无毒无刺激性,且PVA凝胶为载体的透皮给药系统,具有较高含水量,对于皮肤的水合作用以及药物的释放渗透有利,所以这种水凝胶为透皮给药系统提供了一种新的有实用价值的载体形式,有很强的潜在开发力。

本实验以盐酸川芎嗪24h单位面积累计透皮量为指标,用U6(65)均匀设计表安排试验,确定了该制剂的最佳基质配比。验证实验表明该结果可靠,重现性较好。为盐酸川芎嗪水凝胶透皮贴剂的开发奠定了基础。◆

参考文献

[ 1 ] 刘淑芝,费红,郭春燕,等.均匀设计法优选中药巴布剂基质配方[ J ] .中国实验方剂学杂志,2001,7 ( 1 ):17-20.

[ 2 ] 王晖,高莉莉,许卫铭,等. 磷酸川芎嗪的体外透皮吸收[ J ] .

中草药,2000,31 ( 2 ):118-119.

[ 3 ] 杜洪光,张恩宏,王丽,等.可乐定透皮贴剂体外透皮性能研究[ J ] .中国新药杂志,2004,13 ( 8 ):713-714.

[ 4 ] 张立昆,皱安庆,陈新旺.高效液相色谱法测定复方制剂中阿魏酸和川芎嗪[ J ] .中草药,1996,27 ( 4 ):213-214.

[ 5 ] 兰顺. 高效液相色谱法测定复方川芎胶囊中川芎嗪的含量[ J ] .

中国实验方剂学杂志,2004,10 ( 5 ):1.

加味聚精食疗汤对少精 弱精症大鼠曲细精管结构改善的实验研究

陈慰填1,陈德宁1,覃 湛2,冯德勇3,洪志明3

(1.深圳市中医院男科,广东 深圳 518033;2.广东省中医院珠海分院男科,广东 珠海 519015;

3.广州中医药大学硕士研究生,广东 广州 510140)

摘 要:目的:探讨加味聚精食疗汤对少精、弱精症大鼠曲细精管结构改善的作用机理。方法:用雷公藤多甙造模少精、弱精症大鼠模型,并进行分组对照研究,了解治疗前后大鼠睾丸曲细精管组织结构的变化情况;结果:加味聚精食疗汤和五子衍宗片对少精、弱精症大鼠曲细精管均有良好的改善作用,但加味聚精食疗汤较五子衍宗片更明显,更能改善少弱精子症大鼠曲细精管组织结构的受损状态。结论:加味聚精食疗汤能够更好的改善少精、弱精症大鼠睾丸曲细精管,提高临床疗效。

关键词:少精症;中药疗法;弱精症;中药疗法;食疗;加味聚精食疗汤;治疗运用;大鼠

中图分类号:R247.1文献标识码:B文章编号:1673-842X (2009)09- 0178- 03

Study of the Effect of the Jiaweijujingshiliaotang on Contorted

Seminiferous Tubules in Rats with Oligospermatism

CHEN Wei-tian1, CHEN De-ning1, QIN Zhan2, FENG de-yong3, HONG Zhi-ming3

(1.Shenzhen Hospital of TCM, Shenzhen 518033,Guangdong,China;2.Zhuhai Branch

Hospital of Guangdong Province Hospital of TCM,Zhuhai 519015, Guangdong,China;3.

Guangzhou University of TCM,Guangzhou 510140,Guangdong,China)

Abstract:Objective:To Study of the Effect of the Jiaweijujingshiliaotang on contorted seminiferous tubules in Rats with oligospermatism. Method: Use GTW to make rats oligospermatism models, observe the change of the contorted seminiferous tubules after the healing .Result: Both Jiaweijujingshiliaotang and wuziyanzongpian have correct curative effects on oligospermatia rat models which were made by GTW. but the forward one has better effect. Conclusions:the Jiaweijujingshiliaotang has good effect on improving the

收稿日期:2009-05-02

基金项目:深圳市科技局科研课题(200603231)

作者简介:陈慰填(1980-),男,广东揭阳人,医师,硕士研究生,主要从事男科临床研究。

178

11卷辽宁中医药大学学报

加味聚精食疗汤是深圳市中医院陈德宁教授的食疗验方。临床上运用此方治疗男性少精、弱精子症,取得了较好的临床疗效[1]。为了进一步探讨加味聚精食疗汤在精子生成上的作用机理,进行了动物实验,现报道如下。

1 资料和方法

1.1动物来源

实验用的SD大鼠购买于广州中医药大学动物实验室,体重在180~200g之间。

1.2脱落标准

动物在实验过程中不明原因死亡。

1.3动物造模与分组

50只大鼠适应性饲养1周后,按体重随机抽出10只作为正常组,正常饲养。其余40只予雷公藤多苷(GTW)(浙江家园药业有限公司产品)20mg/(kg·d)灌胃,26天后,随机抽取10只作为造模组,立即处死。余30只再按体重随机分成3组:即鱼鳔组、五子组和对照组,每组10只。

1.4治疗方法

①鱼鳔组:予加味聚精食疗汤(深圳市中医院制剂室制备)20ml/(kg·d)灌胃26天(大鼠的生精周期为13天[2],用药两个生精周期了解其变化情况),并给予正常饮食。②五子组:予五子衍宗片(磨成粉后制成水剂,北京同仁堂产品)1.2g/(kg·d)灌胃26天,并给予正常饮食。③对照组:仅予正常饮食,不予任何药物。大鼠实验期间,除了实验药物不同外,食物、饮水、实验环境等均相同。

1.5观察指标

1.5.1 安全性观测 所有大鼠处死后行肝、肾组织活检,了解肝小叶及肾小球变化情况。

1.5.2 疗效性观测 大鼠精子发生功能评价:①睾丸病理学检查:将新鲜组织固定在福尔马林液中。常规石蜡包埋,3μm厚连续切片5张,以保证得到大部分精曲小管的截面,苏木精-伊红染色。②精子发生功能评价:每个病理切片在400倍的显微镜下观察20个横切面的曲细精管,了解睾丸组织结构及每个曲细精管中的精子数量。睾丸组织结构损害评分:正常睾丸:基底膜上精原细胞分布均匀,间质细胞和支持细胞大小、形状及分布正常,生殖细胞排列整齐有序,结构层次分明,精子发生完全,可见大量成熟精子;轻度受损:生殖细胞排列较正常不规则,结构较松散,精原细胞较正常较减少50%以下;中度受损:生殖细胞排列紊乱,结构松散,精原细胞及精子较正常减少50%以上,并可见部分生精细胞脱落;重度受损:生殖细胞及支持细胞结构层次缺如,大部分曲细精管仅见初级精母细胞,极少见精原细胞或精子,甚至无精原细胞及精子,呈生精停滞状态,生精小管基底膜增厚,与增生的纤维性间质融合;间质细胞减少或缺失。曲细精管中精子数量评分:正常:曲细精管中可见大量形态正常的成熟精子;轻度减少:曲细精管中精子数量减少50%以下;中度减少:曲细精管中的精子较少50%以上;重度减少:曲细精管中极少见或未见成熟精子[3-4]。

1.6统计学处理

实验数据采用SPSS10.0统计软件进行分析,多组计量资料用方差分析进行比较,等级资料用Ridit 分析进行比较。

2 结 果

2.1脱落病例分析

五子组中的一只大鼠在治疗过程中不明原因

死亡。

2.2药物对大鼠体重的影响

实验前后大鼠体重明显增重,但与正常喂养组相比较差异无统计学意义(P>0.05),说明实验药物对大鼠体重无影响。见表1。

表1 实验后大鼠体重的比较

正常组(10) 鱼鳔组(10) 五子组(9) 对照组(10)

体重(g) 467.8±29.9 478.1±42.1 468.0±45.6 491.6±28.0因造模组比其他4组先处死26天,体重比较无实际意义,其他4组体重进行方差分析,P=0.4612>0.05,差异无统计学意义。

2.3药物安全性检测

将处死后大鼠的肝脏和肾脏制成病理切片,在400倍的光镜下观察各组大鼠肝脏以及肾脏的变化情况。结果发现对照组大鼠肝脏肝小叶中央静脉周围瘀血,并出现小空泡型,轻度脂肪肝,肾小管中可见到蛋白管型,余3组大鼠的肝脏和肾脏均未见到明显的损伤,与正常组大鼠比较无明显差异。说明雷公藤多苷片对大鼠的肝脏和肾脏有一定的损害作用,加味聚精食疗汤和五子衍宗片均有恢复肝脏及肾脏功能的作用。

2.4实验后各组大鼠疗效的比较

造模组与正常组曲细精管中的精子密度及曲细精管组织结构损害程度分别进行比较,差异有统计学意义(P<0.05),见表2、表3。造模组与对照组曲细精管中的精子密度及曲细精管组织结构损害程度分别进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。鱼鳔组与对照组曲细精管中的精子密度及曲细精管组织结构损害程度分别进行比较,差异有统计学意义(P<0.05)。五子组与对照组曲细精管中的精子密度及曲细精管组织结构损害程度分别进行比较,差异无统计学意义(P>0.05)。鱼鳔组与五子组曲细精管中的精子密度及曲细精管组织结构损害程度分别比较,差异有统计学意义(P<0.05)

见图1。

正常组 鱼鳔组 五子组

对照组 造模组

图1 实验后各组大鼠疗效比较

表2 曲细精管中精子的密度比较

精子数量 正常 轻度减少 中度减少 重度减少

正常组(10) 10* 0 0 0

鱼鳔组(10) 3* 5 1 1

五子组(9) 1△ 1 2 5

对照组(10) 0△ 1 2 7

造模组(10) 1 3 3 3注:*:P<0.05,△:P>0.05。

2.5不良反应观察

实验过程中所有大鼠均无不良反应。

3 讨 论

曲细精管是精子生成的地方,精子发生过程起

quality in Rats with oligospermatism.

Key words:oligospermatism; traditional Chinese drug; Quality of sperm;Rats

179

辽宁中医药大学学报11卷

始于干细胞的分化,终止于成熟的精子形成,曲细精管中生殖细胞按照精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和精子有序的排列,并在间质细胞和支持细胞等的协同下源源不断的产生精子[5],其结构的正常与否充分的体现了大鼠生精功能的强弱。有资料报道,GTW直接抑制睾丸的生精细胞,以精子细胞和精子最为敏感,其次为精母细胞,受损最轻的是精原细胞。其作用机制可能与GTW非选择性抑制更新组织有丝分裂有关[6],它对睾丸生精上皮损伤的严重程度与投药量的大小和投药的时间长短成正比[7]。GTW大剂量时精子细胞和精母细胞变性坏死,使睾丸组织造精功能丧失,失去生育能力[8]。GTW对雄性大鼠睾丸生精上皮损伤的作用非常明显,它不仅仅是抑制细胞分裂,更重要的是引起精母细胞的变性甚至死亡及精子细胞的形态结构异常。GTW作用于雄性生殖系统的靶细胞主要是精母细胞和精子细胞[9]。本实验发现GTW不仅导致曲细精管中生殖细胞结构紊乱、脱落甚至缺如,还导致间质细胞和支持细胞不同程度的损伤,甚至对肝脏及肾脏均有一定的损害,并且所造成的损害是不可自行修复的。

表3 曲细精管组织结构评分比较

组织结构评分 正常 轻度损害 中度损害 重度损害

正常组(10) 10* 0 0 0

鱼鳔组(10) 2* 5 2 1

五子组(9) 0△ 2 2 5

对照组(10) 0△ 1 2 7

造模组(10) 0 4 3 3

注:*:P<0.05,△:P>0.05。

加味聚精食疗汤是陈德宁教授在古方聚精丸的基础上,结合多年治疗男性不育症的经验,总结出来的食疗验方,由鱼鳔胶(花胶)、龟板胶、枸杞子、高丽参、瘦肉组成,主要是针对脾肾两虚型或肾虚型少精子症不育患者。其中,鱼鳔胶、高丽参,《本草新编》云:

“鱼鳔,味甘,气温,入肾经。专补精益阴,更能生子。近人多用此为种子之方,然而过于润滑,必须同人参补阳之药同用为佳。鱼鳔胶,绝似人之精,其入肾补精,不待言矣。恐其性腻滞,加入人参,以气行于其中,则精更易生,而无胶结之弊也”。药理学研究,人参的主要成分人参皂苷及其单体Rb1可使垂体前叶的促性腺激素释放增加,可使雄性幼年大鼠睾丸及附睾重量增加,输精管直径扩大;对去势大鼠也可出现交尾现象,还能明显增加老年患者血浆睾酮的浓度[10]。龟板胶,《本草逢原》认为:

“能通任脉,故取其腹以补心、补肾、补血,皆养阴也。观龟板所主之病皆属阴虚精弱,腰脚酸痿,可心解矣”。枸杞子,《本草征要》谓其:

“味甘、性微温,无毒。入肝、肾二经。益肝以养营,强筋明目。补肾而填精,止渴除烦。精不足者,补之以味,枸杞子是也”。药理学研究,枸杞的主要成分是枸杞多糖(LBP),研究证实LBP能够减轻高温引起的小鼠睾丸损伤,增加附睾质量[11]。摘除小鼠半侧睾丸后,LBP可以提高性激素水平,增加副性腺质量,提高精子活力[12]。LBP能恢复己烯雌酚(DES)对仓鼠睾丸氧化的损伤,增加睾丸质量,并改善睾丸组织结构[13]。猪肉为血肉有情之品,入脾、胃二经,食之能润肠胃,生津液,丰肌体,泽皮肤。李时珍指其为“补肉补形之要味”。本食疗汤方药味虽少,但组方严谨,脾肾同治,且口感颇佳,大大提高了患者的依从性。临床运用时,还可因人而宜,加入适量生姜片、盐和黄酒,以促进吸收,有助于更好地提高临床疗效。

本实验研究证实,造模组与正常组比较,其曲细精管中的精子数量明显减少、曲细精管组织结构损害较严重,但造模组与对照组比较,其差异不明显,说明少精子症大鼠造模成功,且其对睾丸曲细精管的损害是不可逆的。鱼鳔组分别与对照组和五子组比较,其曲细精管中的精子数量均有明显的增加,曲细精管组织结构损害明显减轻;而五子组与对照组比较,其差异虽无统计学意义,但从实际病理切片上看两者还是有一定的区别,其原因可能是五子衍宗片先修复其超微结构及代谢功能,最后才表现出组织结构的改变,这也解释了为什么五子组与对照组组织结构差异无统计学意义,而附睾中精子密度差异有统计学意义(附睾中精子密度的比较在其他文章发表)。说明加味聚精食疗汤和五子衍宗片均可以恢复曲细精管中精子的数量和曲细精管组织结构的损害,且加味聚精食疗汤较五子衍宗片疗效更加明显。另外加味聚精食疗汤和五子衍宗片还能修复受损的肝脏及肾脏,造模组之所以肝肾未出现明显形态结构损害,可能是因为造模组造模后即处死大鼠,雷公藤多苷仅损害大鼠的睾丸的代谢功能,而尚未完全破坏其组织结构,在光镜下形态结构改变不明显,但其功能可能已经受到损害,如果采用较好的蛋白指标,应可以反映其损害情况,对照组肝肾组织结构出现损伤也印证了这一点。

五子衍宗(丸)片有“天下种子第一方” 的美称,本实验用其与加味聚精食疗汤进行比较,结果显示两者均能够明显地提高附睾中精子的数量,同时还能修复受损的肝脏及肾脏,但加味聚精食疗汤较五子衍宗片疗效更加明显。加味聚精食疗汤全方位地影响精子生成的全过程,提高大鼠精子的数量和质量的确切的作用机理尚有待进一步研究。◆

参考文献

[ 1 ] 陈德宁,覃湛.加味聚精食疗方对少精子症患者精子质量的影响[ J ] .南京中医药大学学报,2007,23 ( 3 ):184-185.

[ 2 ] 郭应禄,辛钟成.男子生殖医学[ M ] .北京:北京大学出版社,2002:20

[ 3 ] JohnsenSG.Testicular biopsy score count-a method for registration of spermatogenesis in human teste s:normal values and results in

335 hypogonadal males [ J ] .Hormones,1970,1 ( 1 ):2-25.

[ 4 ] Yoshida A,.Miura .K,Shirai.M,Evaluation of seminiferous toustubule scores obtained through testicular biopsy examinations

of nonbstructive azoospermic men[ J ] .FertilSteril,1997,68 ( 3 ):514-518

[ 5 ] 郭应禄,辛钟成.男子生殖医学[ M ] .北京:北京大学出版社,2002:21-22

[ 6 ] 杨静娴,徐红,韩国柱,等.“五子四物瓜石汤”对雷公藤多苷所致雄性大鼠生殖系统毒性的对抗作用及其机制研究[ J ].中

草药,2002,33 ( 7 ):632-634.

[ 7 ] 许桦,王士民,钟昌奇,等.雷公藤多苷抗生育作用的可逆性研究[ J ] .药学通报,1998,23 ( 1 ):22.

[ 8 ] 王琴,张红莺.雷公藤毒副反应的病理学基础[ J ] .中草药,1997,28 ( 3 ):181-183.

[ 9 ] 李德忠,李晓明.补肾毓麟汤对雷公藤多苷致伤大鼠睾丸生殖细胞的修复作用[ J ] .中国中医基础医学杂志,2006,12 ( 7 ):522-525

[ 10 ] 方文贤,宋崇顺.医用中药药理学[ M ] .北京:人民卫生出版社,1998:523

[ 11 ] LUOQ,LI Z,HUANG X L,et al.Lycium barbarum polysaccharides;

Protective effects against heat-induced damage of rat testes

and H2O2-induced DNA damage in mouse testicular cells and

beneficial effect on sexual behavior and reproductive function of

hemi-castrated rats[ J ] . J Ethnopharmacol,2002,82:169-175 [ 12 ] HENDRY W J, SHEEHAN D M, KHAN S A, et al. Developing a laboratory animal model for perinatal endocrine disruption; The

hamster chronicles [ J ] .Exp Biol Med,2002,227:709-723

[ 13 ] 马爱团,陈耀星.枸杞多糖对DES诱导的仓鼠睾丸氧化损伤的保护作用[ J ] .畜牧兽医学报,2008,39 ( 5 ):652-657

180

相关主题
相关文档 最新文档