畜牧与兽医2012年第44卷增刊·265·
未出现4级损伤细胞。结果说明，不同暴露时间和暴露剂量的镉均可致发育期小鼠出现肺细胞DNA损伤，且这种损伤具有明显的时间—剂量—效应关系。
4-22 MTT法绘制肝细胞的生长曲线和LPS
诱导肝细胞凋亡的研究
刘凤娟，杨国宇，王艳玲，江青东，王月影，查光明，朱河水，钟凯
（农业部动物生化与营养重点实验室；河南农业大学牧医工程学院，河南郑州450002）
取对数生长期HepG2细胞，0.25%胰酶消化成单细胞悬液接种至96孔板（104个/孔），每24 h 取样6孔，每孔加入甲基噻唑基四唑（MTT）液50 μL，37℃培养4 h，吸出培养基加150 μL DMSO，37℃孵育器上400 g混匀10 min，用酶标仪于492 nm处测得OD值，以OD值的均值为纵坐标，时间为横坐标绘制细胞生长曲线。结果显示HepG2细胞在第2 d生长速度较快，这为进一步研究肝细胞凋亡提供了实验基础。为了掌握肝细胞凋亡的研究方法，我们以HepG2细胞为研究对象，分别在培养基中加入0、40和60 μg/mL 的LPS，处理24 h，在显微镜下观察细胞凋亡情况，同时利用Annexin V-FITC法对肝细胞凋亡进行了检测。结果发现，对照组有少量细胞发生凋亡，随着LPS的添加，肝细胞凋亡数目增加，且凋亡细胞数目与LPS的剂量呈正相关。
4-23 IL-21对巨噬细胞分泌功能的影响及机制
李苏楠，李洋，李志强，薛文静，付守鹏，杨占清，陈巍，王玮，柳巨雄
（吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春130062）
白细胞介素21（IL-21）是新近发现的γ链（γc）家族中的一种调节性细胞因子，主要由活化的CD4+T细胞、NK T细胞分泌，能够激活T细胞并促进其分泌细胞因子，从而参与调节机体免疫应答。巨噬细胞具有很强的吞噬能力，是机体固有免疫的重要组成细胞，同时又是一类主要的抗原递呈细胞，在机体固有免疫和获得性免疫应答、炎症反应以及组织修复和重建中发挥重要的作用，并能通过分泌大量的细胞因子参与机体炎症反应。IL-21是否能通过影响巨噬细胞的分泌来参与机体免疫应答，涉及哪些信号转导途径，目前尚未见有关报道。
为了研究IL-21对巨噬细胞分泌功能的影响及其作用机制，本实验通过分离BALB/C小鼠腹腔巨噬细胞，用LPS（100 ng/ml）和不同浓度IL-21（20、100、500 ng/ml）处理24 h后，通过RT-PCR 和ELISA方法检测细胞中iNOS mRNA水平以及细胞上清中IL-6、TNF-α和IFN-γ蛋白水平的表达变化；并通过免疫印迹方法，检测巨噬细胞经IL-21和/或LPS处理5、20和60 min后炎症相关细胞内信号分子ERK、JNK、P38和STAT3等的蛋白表达和磷酸化水平变化。结果表明，与对照组相比，不同浓度IL-21处理巨噬细胞后细胞中iNOS mRNA表达水平差异显著，在IL-21的浓度为100