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RNA Pull down实验相关问题解答

RNA Pull down实验相关问题解答
RNA Pull down实验相关问题解答

RNA Pull down实验相关问题解答

长链非编码RNA(longnoncodingRNA,lncRNA)是一类不编码蛋白的RNA分子,长度在200bp以上;研究表明,lncRNA具有保守的二级结构,可以与蛋白、DNA和RNA相互作用,参与多种生物学过程的调控。随着高通量测序技术的发展,越来越多的lncRNA被注释,但是绝大多数的lncRNA的功能仍然不清楚,因此lncRNA的研究是一片非常广阔的未知领域,具有极大的科研价值和意义。其中RNA Pull-down技术为lncRNA生物学功能的验证起到了至关重要的作用。

RNA Pull-down结合了体外转录与生物素标记、质谱技术,是研究非编码RNA与蛋白质相互作用的一大利器。由于实验程序较多、RNA的易降解性,加上一些不可预知的变量,因此实验存在一些难度,常常导致实验的失败。对于试验中常常出现的棘手的问题,金开瑞经过实践,总结了一套行之有效的应对方策,现在就和我们一起来看看吧!

lncRNA实验问答

1、RNA Pull-down拉下蛋白PAGE电泳银染条带颜色浅且模糊?

①选取的组织或细胞样品其中互作蛋白表达量很低;

②体外转录得到的RNA降解或者不是全长;

③Pull-down实验孵育时间不长。

④其他

2、PAGE电泳银染背景深?

①样品杂蛋白太多;

②银染显色时间过长。

③其他

3、RNA Pull-down拉下蛋白银染后看不到互作蛋白:

①选取的RNA序列不对;

②样品中没有表达互作的蛋白质。

③互作蛋白浓度低,银染图肉眼观察不到差异条带。

④其他

更多建议:

①lncRNA序列前期验证要完善;

②选择相应蛋白质表达量较高的组织或细胞样品;

③体外转录选择转录质量高的试剂盒,操作过程避免Rnase的污染;

④保证RNA Pull-down实验中探针标记以及探针与蛋白的结合充分进行(依据体外转录RNA 的量,样品裂解液蛋白浓度);

⑤尽可能多将洗脱的蛋白电泳(同时可以避免显色时间过长)

好啦,这次就和大家分享这么多啦,如果您在RNA Pull-down实验中遇到困惑,可以随时与我们取得联系哦,我们将及时帮您解决!

最后,祝大家实验顺利!生活愉快!

经纬仪,全站仪操作步骤

电子经纬仪操作步骤 经纬仪是测量工作中的主要测角仪器,由照准部、度盘、基座等部分组成。经纬仪根据度盘刻度和读数方式的不同,分为游标经纬仪,光学经纬仪和电子经纬仪。目前我国较为普遍使用的是电子经纬仪,游标经纬仪和光学经纬仪已逐渐淘汰。 下图为经纬仪各部件组成名称:

经纬仪的安置: 1 、架设仪器: 三脚架调成等长并使架头高度与观测者身高适宜,打开三脚架,使架头大致水平,将经纬仪固定在三脚架上,拧紧连接螺旋,置于测站点之上。 2 、对中: 对中就是使仪器的中心与测站点位于同一铅垂线上。用双手各提一条架脚前后、左右摆动,同时使架头大致保持水平状态,眼观对中标志(激光或十字丝交点)与测站点重合,同时使架头大致保持水平 状态,放稳并踩实架脚。

3 、整平: 整平的目的是使仪器竖轴铅垂,水平度盘水平。根据水平角的定义,是两条方向线的夹角在水平面上的投影,水平度盘一定要水平。(1)粗平:伸缩脚架腿,使圆水准气泡居中。同时检查对中标志是否偏离地面测站点。如果偏离了,旋松三角架上的连接螺旋,平移仪器基座使对中标志精确对准测站点的中心,拧紧连接螺旋并使圆水准气泡居中。 (2)精平:旋转照准部,使其水准管与基座上的任意两只脚螺旋的连线方向平行(图a)。双手同时相向转动两只脚螺旋,使水准管气泡居中;然后将照准部旋转90°(图b),旋转第三只脚螺旋,使气泡居中;如此反复进行,直到水准管在任何方向,气泡均居中为止。 4 、瞄准与读数: 首先将望远镜对向明亮的背景或天空,旋转目镜使十字丝变清晰;然后旋转照准部和望远镜,通过望远镜上的粗瞄准器大概瞄准目标,并将照准部和望远镜制动螺旋制紧;再旋转照准部和望远镜的微动螺旋照准目标,注意检查并消除视差。最后进行读数。

重结晶和过滤实验

重结晶和过滤实验 一、实验目的 1、学习重结晶法提纯固态有机化合物的原理和方法; 2、掌握抽滤和热过滤操作的方法。 二、基本原理 固体有机物在溶剂中的溶解度一般是随温度的升高而增大。若把固体溶解在热的溶剂中达到饱和,冷却时由于溶解度降低,溶液变成过饱和而析出结晶.利用溶剂对被提纯物质及杂质的溶解度不同,可以使被提纯物质从饱和溶液中析出,而让杂质全部或大部分仍留在溶液中(或被过滤除去),从而达到提纯目的。 重结晶的一般过程:使待重结晶物质在较高的温度(接近溶剂沸点)下溶于合适的溶剂里;趁热过滤以除去不溶物质和有色杂质(可加活性炭煮沸脱色);将滤液冷却,使晶体从过饱和溶液里析出,而可溶性杂质仍留在溶液里,然后进行减压过滤,把晶体从母液中分离出来;洗涤晶体以除去附着的母液;干燥结晶. 三、实验装置 热过滤装置减压过滤装置干燥装置 回流装置 四、实验仪器、器材及药品 1、仪器、器材: 250ml三角烧瓶球形冷凝管保温漏斗短颈玻璃漏斗 200ml烧杯表面皿玻璃棒布氏漏斗 吸滤瓶酒精灯电热套乳胶管 滤纸剪刀台秤药勺 2、药品: 乙酰苯胺水活性炭 五、实验步骤 称取 3。0g粗乙酰苯胺加到250mL三角烧瓶中,加入100mL水,安装回流冷凝管,加热至沸,保持沸腾2—3min,取下稍冷,加入0.2g活性炭,再加热5-10min,用热漏斗趁热过滤,

滤液用干净的200mL烧杯接收,静止自然冷却,乙酰苯胺充分结晶后进行冷的减压过滤(抽滤),压实滤饼。彻底抽干水分,干燥,称重。 六、注意事项 1.可在补加20%的水时,一同加入活性炭。 2。热过滤时保温漏斗中的水一定要尽可能热,动作要快。 3。减压过滤滤纸事先要润湿,铺好滤纸后不能减压太大。在倒入滤液之前滤纸要紧贴漏斗底部,防止滤纸被压穿. 4。如果滤液已经冷却到室温,长时间静止仍然没有结晶出现,可以用玻璃棒搅拌之。 七、思考题 1。重结晶包括哪几个步骤?每一步的目的是什么? 答:(1)溶剂的选择 目的:以保证在高温时被提纯的物质在溶剂中的溶解度较大,而在低温时则很小。 (2)样品的溶解 目的:将粗产物用所选溶剂加热溶解制成饱和或近饱和溶液。【为了避免趁热过滤的困难,一般可比需要量多加15~20%的溶剂】 (3)活性炭脱色 目的:活性炭脱色,趁热过滤除去不溶性杂质及活性炭。【活性炭的用量应视有色杂质的多少而定,一般为干燥粗品的1~5%】 (4)滤液的冷却 目的:冷却过滤液使结晶慢慢析出,而杂质留在母液中.【将热滤液静置使其慢慢冷却至析出晶体,然后可再用冷水冷至室温,这样所得的晶体纯度高。】 (5)抽滤晶体 目的:使晶体与母液分离,过滤时尽量抽干。 (6)洗涤晶体 目的:以除去晶体表面的母液。【母液中含有可溶性杂质】 (7)晶体的干燥 目的:以除去晶体表面的溶剂。【晶体干燥时,可根据晶体的性质选择合适的方法进行干燥。】 (8)熔点的测定 目的:确定重结晶所得产品是否合乎要求.若不合格,应进行第二次重结晶。 2。怎样选择重结晶的溶剂? 答:(1)需查阅文献、化学手册;(2)需要采用实验的方法。 若杂质溶解度很大,可以留在溶液中,若杂质溶解度很小,可以留在残渣中。要求被提纯的物质在选择的溶剂中的溶解度随温度变化大,溶剂沸点不宜太高或太低,如果没有适合的单一溶剂时,可以选用混合溶剂。混合溶剂一般由两种能以任何比例互溶的溶剂组成,其中一种易溶解被提纯物质,另一种则难溶解。 3。重结晶的溶剂应符合什么条件? 答:在重结晶时选择合适的溶剂是非常重要的。否则,达不到纯化的目的,作为适宜的溶剂,要符合以下条件: (1)与被提纯的有机化合物不起化学反应; (2)在高温时被提纯的物质在溶剂中的溶解度较大,而在低温时则很小;

经纬仪的使用方法(免费)

第三节经纬仪的使用 一、安臵仪器 安臵仪器是将经纬仪安臵在测站点上,包括对中和整平两项内容。对中的目的是使仪器中心与测站点标志中心位于同一铅垂线上;整平的目的是使仪器竖轴处于铅垂位臵,水平度盘处于水平位臵。 1.初步对中整平 (1)用锤球对中,其操作方法如下: 1)将三脚架调整到合适高度,张开三脚架安臵在测站点上方,在脚架的连接螺旋上挂上锤球,如果锤球尖离标志中心太远,可固定一脚移动另外两脚,或将三脚架整体平移,使锤球尖大致对准测站点标志中心,并注意使架头大致水平,然后将三脚架的脚尖踩入土中。 2)将经纬仪从箱中取出,用连接螺旋将经纬仪安装在三脚架上。调整脚螺旋,使圆水准器气泡居中。 3)此时,如果锤球尖偏离测站点标志中心,可旋松连接螺旋,在架头上移动经纬仪,使锤球尖精确对中测站点标志中心,然后旋紧连接螺旋。 (2)用光学对中器对中时,其操作方法如下: 1)使架头大致对中和水平,连接经纬仪;调节光学对中器的目镜和物镜对光螺旋,使光学对中器的分划板小圆圈和测站点标志的影像清晰。 2)转动脚螺旋,使光学对中器对准测站标志中心,此时圆水准器气泡偏离,伸缩三脚架架腿,使圆水准器气泡居中,注意脚架尖位臵不得移动。 2.精确对中和整平

(1)整平 先转动照准部,使水准管平行于任意一对脚螺旋的连线,如图3-7a 所示,两手同时向内或向外转动这两个脚螺旋,使气泡居中,注意气泡移动方向始终与左手大拇指移动方向一致;然后将照准部转动90°,如图3-7b 所示,转动第三个脚螺旋,使水准管气泡居中。再将照准部转回原位臵,检查气泡是否居中,若不居中,按上述步骤反复进行,直到水准管在任何位臵,气泡偏离零点不超过一格为止。 (2)对中 先旋松连接螺旋,在架头上轻轻移动经纬仪,使锤球尖精确对中测站点标志中心,或使对中器分划板的刻划中心与测站点标志影像重合;然后旋紧连接螺旋。锤球对中误差一般可控制在3mm 以内,光学对中器对中误差一般可控制在1mm 以内。 对中和整平,一般都需要经过几次“整平—对中—整平”的循环过程,直至整平和对中均符合要求。 二、瞄准目标 (1)松开望远镜制动螺旋和照准部制动螺旋,将望远镜朝向明亮背景,调节目镜对光螺旋,使十字丝清晰。 (2)利用望远镜上的照门和准星粗略对准目标,拧紧照准部及望远镜制动螺旋;调节物镜对光螺旋,使目标影像清晰,并注意消除图3-7 经纬仪的整平

GST_pull_down试验方法(自己总结)

12.GST蛋白的表达和纯化 12.1 GST蛋白的表达 (1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。 (2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中,37℃摇菌过夜,获得种子液。(3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中,使起始OD600为0.1。(4) 28℃,220rpm摇菌培养2小时。 (5) 加入50μl 100mM IPTG,16~27℃摇菌培养1~8小时。 (6) 收菌,将菌液倒入大离心管,2管/50ml菌液,4℃ 5krpmx5min离心,弃上清。 (7) 加入10ml PBS/管,重悬细胞,5krpm离心5min,弃上清。 (8) 加入2ml PBS/管,重悬细胞。转移至5ml离心管。 (9) 超声破壁 破壁前,在细胞悬液中加20μl 10mg/ml PMSF,80μl蛋白酶抑制剂(100x)。 破壁参数:Frequency:100~200w 60s, pause 20s run 40s,5cycles破至菌体由浑浊变为澄清。 加100μl 20% TritonX-100,冰上放置30min。 (10) 将裂解液分入1.5ml离心管中,4℃离心12krpm×10min,取上清。(11) 吸取少量上清,加入蛋白电泳上样缓冲液,在沸水中煮3min。离心(12krpm,1min),取上清作SDS-PAGE电泳,检测表达情况。 12.2 准备50%GST Sepharose 4Bslurry (1) 将原75%Glutathione Sepharose 4B的slurry弹至混匀。 (2) 取677μl原液/管,3krpm离心5min,弃上清。 (3) 加500μl PBS,颠倒混匀,3krpm离心5min,弃上清。反复5次。 (4) 加500μl PBS,颠倒混匀,配成50%Glutathione Sepharose 4B备用。 12.3 GST融合蛋白的纯化 (1) 在新鲜制备的细胞裂解液上清中加入20μl 50%Glutathione Sepharose 4B,4℃,摇床上摇,反应30min~60min。 (2) 3krpm离心5min,弃上清。该Sepahrose上即结合了GST融合蛋白,(如果仅仅是做纯化效果检测或者蛋白表达量很高,可以只接合一次,如果要结合更多则接着往下做) (3) 在管中加入离心后的 1.5ml新鲜制备的细胞裂解液的上清,4℃,反应

粗盐提纯实验操作步骤

粗盐提纯实验操作步骤文档编制序号:[KK8UY-LL9IO69-TTO6M3-MTOL89-FTT688]

实验:除去硫酸铜粉末中的沙子 一、实验目的 1.掌握、过滤、蒸发等实验的操作技能. 2.理解过滤法分离混合物的化学原理. 3.体会过滤的原理在生活生产等社会实际中的应用. 二、实验仪器和药品 药品:CuSO 4,蒸馏水 器材:托盘天平(含砝码),量筒,烧杯,玻璃棒,药匙,漏斗,滤纸,铁架台(带铁圈),蒸发皿,酒精灯,坩埚钳,胶头滴管,若干一样的小纸片,滤纸 三、实验原理 四、粗盐中含有泥沙等不溶性杂质,以及可溶性杂质如:CuSO4等.不溶性杂质可以用溶解、过滤的方法除去,然后蒸发水分得到较纯净的精盐. 五、实验操作步骤 1.溶解 2.用托盘天平称取2克CuSO 4 混合物(精确到0.1克).用量筒量取5毫升水倒入烧杯里.用药匙取一匙粗盐加入水中,观察发生的现象.用玻璃棒搅拌,并观察发生的现象(玻璃棒的搅拌对粗盐的溶解起什么作用).接着再加入粗盐,边加边用玻璃棒搅拌,一直加到粗盐不再溶解时为止.观察溶液是否浑浊. 3.2.过滤 4.按照化学实验基本操作所述方法进行过滤.仔细观察滤纸上的剩余物及滤液的颜色.滤液仍浑浊时,应该再过滤一次.如果经两次过滤滤液仍浑浊,则应检查实验装置并分析原因,例如,滤纸破损,过滤时漏斗里的液面高于滤纸边缘,仪器不干净等.找出原因后,要重新操作.

注意:一贴二低三靠 ①“一贴”是指滤纸折叠角度要与漏斗内壁口径吻合,使湿润的滤纸紧贴漏斗内壁而无气泡,因为如果有气泡会影响过滤速度. ②“二低”是指滤纸的边缘要稍低于漏斗的边缘,二是在整个过滤过程中还要始终注意到滤液的液面要低于滤纸的边缘。这样可以防止杂质未经过滤而直接流到烧杯中,这样未经过滤的液体与滤液混在一起,而使滤液浑浊,没有达到过滤的目的。 ③“三靠”一是指待过滤的液体倒入漏斗中时,盛有待过滤液体的烧杯的烧杯嘴要靠在倾斜的玻璃棒上(玻璃棒引流),防止液体飞溅和带过滤液体冲破滤纸;二是指玻璃棒下端要轻靠在三层滤纸处以防碰破滤纸(三层滤纸一边比一层滤纸那边厚,三层滤纸那边不易被弄破);三是指漏斗的颈部要紧靠接收滤液的接受器的内壁,以防液体溅出。 3.蒸发 把得到的澄清滤液倒入蒸发皿.把蒸发皿放在铁架台的铁圈上,用酒精灯加热(图16).同时用玻璃棒不断搅拌滤液.等到蒸发皿中出现较多量固体时,停止加热.利用蒸发皿的余热使滤液蒸干.

经纬仪使用及操作的步骤(光学对中法)

经纬仪使用及操作的步骤(光学对中法) 1、架设仪器: 将经纬仪放置在架头上,使架头大致水平,旋紧连接螺旋。 2、对中: 目的是使仪器中心与测站点位于同一铅垂线上。可以移动脚架、旋转脚螺旋使对中标志准确对准测站点的中心。 3、整平: 目的是使仪器竖轴铅垂,水平度盘水平。根据水平角的定义,是两条方向线的夹角在水平面上的投影,所以水平度盘一定要水平。 粗平:伸缩脚架腿,使圆水准气泡居中。 检查并精确对中:检查对中标志是否偏离地面点。如果偏离了,旋松三角架上的连接螺旋,平移仪器基座使对中标志准确对准测站点的中心,拧紧连接螺旋。 精平:旋转脚螺旋,使管水准气泡居中。 4、瞄准与读数: ①目镜对光:目镜调焦使十字丝清晰。 ②瞄准和物镜对光:粗瞄目标,物镜调焦使目标清晰。注意消除视差。精瞄目标。 ③读数: 调整照明反光镜,使读数窗亮度适中,旋转读数显微镜的目镜使刻划线清晰,然后读数。 现在很多都是使用全站仪,全站仪的使用(以拓普康全站仪为例进行介绍)介绍: (1)测量前的准备工作

1)电池的安装(注意:测量前电池需充足电) ①把电池盒底部的导块插入装电池的导孔。 ②按电池盒的顶部直至听到“咔嚓”响声。 ③向下按解锁钮,取出电池。 2)仪器的安置。 ①在实验场地上选择一点,作为测站,另外两点作为观测点。 ②将全站仪安置于点,对中、整平。 ③在两点分别安置棱镜。 3)竖直度盘和水平度盘指标的设置。 ①竖直度盘指标设置。 松开竖直度盘制动钮,将望远镜纵转一周(望远镜处于盘左,当物镜穿过水平面时),竖直度盘指标即已设置。随即听见一声鸣响,并显示出竖直角。 ②水平度盘指标设置。 松开水平制动螺旋,旋转照准部360,水平度盘指标即自动设置。随即一声鸣响,同时显示水平角。至此,竖直度盘和水平度盘指标已设置完毕。注意:每当打开仪器电源时,必须重新设置和的指标。 4)调焦与照准目标。 操作步骤与一般经纬仪相同,注意消除视差。 (2)角度测量 1)首先从显示屏上确定是否处于角度测量模式,如果不是,则按操作转换为距离模式。 2)盘左瞄准左目标A,按置零键,使水平度盘读数显示为0°00′00〃,顺时针旋转照准部,瞄准右目标B,读取显示读数。

pulldown实验方法

P u l l D o w n实验流程 1. 混合两种预测相互作用的蛋白。(Protein-A-GST & Protein-B-HIS,下面实验用GST 树脂 IP,用Western Blot检测HIS;反之亦然。如果是纯化后的蛋白,需要进行偷袭或者使用超滤离心管为蛋白更换溶液,之后才能继续Pull Down。) 2. 加入1 mL Binding Buffer。 Binding Buffer:50 mM (.) 100 mM NaCl % Triton-X 100 35 mM β-Me(巯基乙醇) 3. 将混合蛋白在4℃条件下旋转结合2-4 h。 4. 加入20-30 μL GST-Bind TM Resin结合2-4 h。 5. 4 ℃,150-200 g 离心2 min,吸弃上清(小心!不要吸弃底部沉淀)。第一次弃去的上清样品记为Washing- Protein-A/ Protein-B,用于SDS-PAGE电泳时的对照。 6. 加入1 mL Binding Buffer,4 ℃条件下旋转混匀5-10 min,4 ℃,150-200 g 离心2 min,吸弃上清。 7. 重复步骤6,用1 mL Binding Buffer 清洗5-6次。 8. 最后一次清洗后留有20-30 μL 液体,加入适量的 Loading Buffer,95℃金属浴5-10 min,150-200 g 离心5 min,样品记为上样跑SDS-PAGE电泳。 电泳样品顺序: Marker,Protein-A-GST,Protein-B-HIS,Washing- Protein-A/ Protein-B,Pull Down- Protein-A/ Protein-B 此次电泳的目的,一是初步检测两个蛋白是否互作,二是可以为后面正式实验所需蛋白量提供参考。 用于正式检测两个蛋白是否互作电泳顺序如下: (input,蛋白量为后两者的1/10) Marker,Protein-B-HIS , GST+ Protein-B-HIS, Protein-A-GST+ Protein-B-HIS Marker,Protein-A-GST , HIS+ Protein-A-GST, Protein-B-HIS+ Protein-B-GST 9. 转PVDF膜,350 mA 恒流,2 h 左右。(PVDF膜用之前,用甲醇泡2 min) 10. 做Western Blot 过程: 预杂交1 h 以上;杂交一抗1 h 以上;洗膜三次,每次10 min ;杂交二抗1 h 以上;洗膜三次,每次10 min。 11. 显影: 用1 mL 发光液A + 1 mL发光液B浸润PVDF膜,然后固定,显影液显影1 min(时间可以适当调整),水洗,定影1 min。 12. 扫描杂交胶片结果。

经纬仪的操作步骤

经纬仪的操作步骤 1、HR—右旋(顺时针)水平角,HL—左旋(逆时针)水平角。 2、经纬仪的操作步骤(光学对中法) 1 、架设仪器: 将经纬仪放置在架头上,使架头大致水平,旋紧连接螺旋。 2 、对中: 目的是使仪器中心与测站点位于同一铅垂线上。可以移动脚架、旋转脚螺旋使对中标志准确对准测站点的中心。

3 、整平: 目的是使仪器竖轴铅垂,水平度盘水平。根据水平角的定义,是两条方向线的夹角在水平面上的投影,所以水平度盘一定要水平。 粗平:伸缩脚架腿,使圆水准气泡居中。 检查并精确对中:检查对中标志是否偏离地面点。如果偏离了,旋松三角架上的连接螺旋,平移仪器基座使对中标志准确对准测站点的中心,拧紧连接螺旋。 精平:旋转脚螺旋,使管水准气泡居中。 4 、瞄准与读数: ①目镜对光:目镜调焦使十字丝清晰。 ②瞄准和物镜对光:粗瞄目标,物镜调焦使目标清晰。注意消除视差。

精瞄目标。 ③读数: 调整照明反光镜,使读数窗亮度适中,旋转读数显微镜的目镜使刻划线清晰,然后读数。 现在很多都是使用全站仪,全站仪的使用(以拓普康全站仪为例进行介绍)介绍: (1)测量前的准备工作 1)电池的安装(注意:测量前电池需充足电) ①把电池盒底部的导块插入装电池的导孔。 ②按电池盒的顶部直至听到“咔嚓”响声。

③向下按解锁钮,取出电池。 2)仪器的安置。 ①在实验场地上选择一点,作为测站,另外两点作为观测点。 ②将全站仪安置于点,对中、整平。 ③在两点分别安置棱镜。 3)竖直度盘和水平度盘指标的设置。 ①竖直度盘指标设置。 松开竖直度盘制动钮,将望远镜纵转一周(望远镜处于盘左,当物镜穿过水平面时),竖直度盘指标即已设置。随即听见一声鸣响,并显示出竖直角。 ②水平度盘指标设置。

pull-down试验方法(自己总结)

pull-down试验方法(自己总结) 12、GST蛋白的表达和纯化 12、1 GST蛋白的表达(1) 将表达GST融合蛋白的质粒转入BL21大肠杆菌菌株中。(2) 挑单克隆于3ml LA(LB+Amp)培养基中,37℃摇菌过夜,获得 种子液。(3) 将种子液稀释于50ml2XYTA(YTG+Amp)培养基中,使起始 OD600为0、1。(4) 28℃,220rpm摇菌培养2小时。(5) 加入50μl100mM IPTG,16~27℃摇菌培养1~8小时。(6) 收菌,将菌液倒入大离心管,2管/50ml菌液, 4℃5krpmx5min离心,弃上清。(7) 加入10ml PBS/管,重悬细胞,5krpm离心5min,弃上清。(8) 加入2ml PBS/管,重悬细胞。转移至5ml离心管。(9) 超声破壁破壁前,在细胞悬液中加20μl10mg/ml PMSF,80μl 蛋白酶抑制剂(100x)。破壁参数:Frequency:100~200w 60s,pause 20s run40s,5cycles破至菌体由浑浊变为澄清。加 100μl20%TritonX-100,冰上放置30min。(10) 将裂解液分入 1、5ml离心管中,4℃离心12krpm10min,取上清。(11)

吸取少量上清,加入蛋白电泳上样缓冲液,在沸水中煮 3min。离心(12krpm,1min),取上清作SDS-PAGE电泳,检测表 达情况。 12、2 准备50%GST Sepharose4Bslurry(1) 将原75%Glutathione Sepharose4B的slurry弹至混匀。(2) 取677μl原液/管,3krpm离心5min,弃上清。(3) 加500μl PBS,颠倒混匀,3krpm离心5min,弃上清。反复 5次。(4) 加500μl PBS,颠倒混匀,配成50%Glutathione Sepharose4B备用。 12、3 GST融合蛋白的纯化(1) 在新鲜制备的细胞裂解液上清中加入20μl50%Glutathione Sepharose4B,4℃,摇床上摇,反应30min~60min。(2) 3krpm离心5min,弃上清。该Sepahrose上即结合了GST融 合蛋白,(如果仅仅是做纯化效果检测或者蛋白表达量很高,可 以只接合一次,如果要结合更多则接着往下做)(3) 在管中加入离心后的 1、5ml新鲜制备的细胞裂解液的上清,4℃,反应30min~ 60min。3krpm离心5min,弃上清。重复该步骤多次,就可以使Sepahrose上结合6~10ml 裂解液中的GST融合蛋白。(4)

过滤实验教案

安国市小营中学导学案 九年级学科化学设计人使用人使用日期 过滤浑浊天然水 实验目标: 1.了解过滤是使不溶性固体和液体分离的一种常用方法,了解过滤的适用范围和主要操作。 2.学习过滤操作步骤,分析过滤操作过程中应注意的问题,培养学生动手实验的能力。 重点:用过滤分离混合物的一般原理。 难点:过滤分离的操作方法及步骤。 实验过程: 引言:在生产生活中,人们所接触到的物质很多都是混合物,为了适应各种不同的需要,常常要把混合物里的几种物质分开,得到较纯净的物质,这叫做混合物的分离,过滤是最常用的混合物分离的方法。 讲授新课: 一、过滤 1.定义:过滤是把溶于液体的固态物质跟液体分离的一种方法。 2.原理:过滤时,液体穿过滤纸上的小孔,而固态物质留在滤纸上, 从而使固体和液体分离。 3.实验仪器:铁架台(带铁圈),烧杯,漏斗,玻璃棒. 演示实验:浑浊天然水的过滤.

4.实验装置图: 5.注意事项: 一贴:滤纸紧贴漏斗内壁; 二低:滤纸低于漏斗边缘(0.5cm)滤液低于滤纸边缘; 三靠:漏斗下端紧靠烧杯内壁;玻璃棒靠在三层滤纸处; 烧杯紧靠在玻棒上倾倒液体. 讨论: 滤液浑浊的原因?

安国市小营中学学案 达标测评 1.过滤操作的要点:“一贴”“二低”;“三靠;; 2.活学活用:如图所示。 (1)该图进行的是操作。 (2)在此操作中玻璃棒的作用是, 滤纸的边缘要液面(填“高于”或“低于”),这主要是因为。 (3)该操作用于净水,可除水中杂质,如需要进一步使水净化,则可继续进行(填“吸附”或“蒸馏”)。 (4)操作过程中,他发现过滤速度太慢,产生的原因可能是 (5)过滤后,滤液仍然浑浊,其原因有哪些? (6)改进后过滤,得到了澄清透明的水,他兴奋地宣布:我终于制得了纯水!对此,你有无不同看法?,理由是。若要制取纯水,还需采用的净化方法是3.某化学科技小组在实验室中对一烧杯浑浊的河水进行了简单净化。请完成操作中的有关问题: (1)先向烧杯中加入适量明矾粉末,这是利用明矾溶于水后生成的胶状物对杂质的________,使杂质________来达到净水的目的。 (2)再进行过滤液体: ①过滤操作所必需的仪器:________。 A.烧杯 B.酒精灯 C.铁架台(带铁圈) D.试管 E.玻璃棒 F.漏斗 G.托盘天平 H.蒸发皿 ②玻璃棒的作用是________________________________,玻璃棒下端接触的部分是________层滤纸处。 ③若滤液仍然浑浊,你认为其原因可能是_____________ _____________。 (3)再用活性炭除去水中的异味,这是利用了活性炭的________作用。 (4)最后进行蒸馏: ①蒸馏时加入沸石的目的是________________________;加热烧瓶,注意不要使液体沸腾得太剧烈,以防________________________________________。 ②所得蒸馏水是_____(填“硬水”或“软水”),检验的简单方法是_________

水准仪经纬仪使用方法详细图解

水 准 测 量 基本知识 1.水准测量原理 工程上常用的高程测量方法有几何水准测量、三角高程测量、GPS 测高及在特定对象和条件下采用的物理高程测量,其中几何水准测量是目前高程测量中精度最高、应用最普遍的测量方法。 如图2-1所示,设在地面A 、B 两点上竖立标尺(水准尺),在A 、B 两点之间安置水准仪,利用水准仪提供一条水平视线,分别截取A 、B 两点标尺上读数a 、b ,显然 A B H a H b +=+ A 、 B 两点的高差h AB 可写为 AB h a b =- A 点高程H A 已知, 求出 B 点高程 B A AB H H h =+ 我们规定A 点水准尺读数a 为后视读数,B 点水准尺读数b 为前视读数。 图 2-1 如果A 、B 两地距离较远时,可以用连续水准测量的方法。中间可设置转点TP (临时高程传递点,须放置尺垫),如图2-2所示 11h a =, 333h a b =-,……, n n n h a b =-。 123......AB n i h h h h h h =+++=∑

于是,可以求得A 、B 之间的高程差 AB i i h a b =-∑∑ B 点高程 B A AB H H h =+. 图 2-2 2.水准仪介绍: 水准仪是提供水平视线的仪器,按精度分,水准仪通常有DS 05、DS 1、DS 3等几种。其中“D ”和“S ”分别为“”和“水准仪”首字汉语拼音的首字母,而下标是仪器的精度指标,即每千米测量中的偶然误差(以mm 为单位)。目前常用的水准仪从构造上可分为两大类:利用水准管来获得水平视线的“微倾式水准仪”和利用补偿器来获得水平视线的“自动安平水准仪”。此外,还有一种新型的水准仪——“电子水准仪”,它配合条形码标尺,利用数字化图像处理的方法,可自动显示高程和距离,使水准测量实现了自动化。 水准仪主要由望远镜、水准器、基座三部分组成。 (1) DS 3微倾式水准仪 1.仪器介绍

GST-Pull-Down原理

分子克隆第三版有详细介绍,结合其中的示意图很容易理解 GST融合蛋白沉降技术利用了GST对谷胧甘肤偶联球珠的亲和性,从非相互作用蛋白的溶液中纯化相互作用蛋白。GST融合的探针蛋白从细菌中表达和纯化,并平行制备细胞裂解液(可被35S标记或非标记),再将GST融合蛋白探针和细胞裂解液在谷胧甘肤琼脂糖球珠存在下混合并孵育,以使蛋白结合。GST融合探针蛋白和任何结合分子被离心收集,获得的混合物经洗涤后,用过量游离的谷胧甘肤洗脱或直接在SDS-PAGE上样缓冲液中煮沸。蛋白质经SDS-PAGE分离后进行下一步的western印迹、放射自显影及蛋白质染色分析。GST沉降技术对探测蛋白在溶液中的相互作用特别有用,而这种相互作用在膜的分析中可能是检测不到的。 GST沉降实验通常有两种应用:确定融合(或探针)蛋白与未知(或靶)蛋白间 新的相互作用(Kaelin et al. 1991, Grlinick and Chao 1996),以及证实探针蛋白与已知蛋白质间可疑的相互作用(例子请见Posern et al. 199$, Grgureaich et al. 1999, Hunteret al. 1999, Sun et al. 1999)。这两种实验的设计和实施都有所不同。

GST pull down 是一种在体外研究蛋白质相互作用的方法,基本原理是这样的:假定A蛋白和B 蛋白可能有相互作用,我们就将其中一个蛋白比如A蛋白融合GST标签,然后将GST-A和B以及能特异结合GST的Sephrose 4B beads 孵育一定时间,然后充分洗涤未结合的蛋白,煮沸beads进行SDS-PAGE电泳,然后进行放射自显影(如果两个蛋白通过体外翻译并且S35标记的话),就可以看见GST-A和B分别对应的条带,表明GST-A和B因相互作用而被GST-A pull down,如果没有相互作用,就只有GST-A相对应的一条带。我们实验室就是这么做的,当然也有细菌表达GST-A蛋白,而B蛋白通过细胞裂解液中得到,电泳后直接western blot检测。 1、首先你的目的是“要检测这两种蛋白是否与寄主细胞之间存在相互作用”,也即是说要寻找这两种蛋白的相互作用蛋白---在寄主细胞表面,也就是说你要寻找的相互作用蛋白是膜蛋白,对吗?pulldown似乎不是达到你目的的最佳办法,因为你首先要提膜蛋白。而膜蛋白一般都疏水,量少,好像难以pulldown----缓冲液系统不适合。我想,你真正的目的是检测寄主细胞表面是否有你这两个蛋白的受体或配体,细胞ELISA应该可以胜任这个目的。其他方法你可以在查查看? 2、如何保证你融合蛋白(细胞提取物)的尽可能大的活性,只有一条:快速、低温纯化。即,要保证你纯化过程尽量低温,时间尽量短,得到蛋白后立刻冻纯-70。当然,你还是有必要做下你蛋白活性到底丧失有多快。 3、如果你还是执意要做pulldown,最好还是直接买珠子,试剂盒太贵了,不划算。

化学实验基本操作之一 过滤

教学设计方案1 教学重点:用过滤和结晶分离混合物的一般原理。 教学难点:利用结晶方法,分离几种可溶固体物质的混合物的原理。 教学过程: 引言:在生产生活中,人们所接触到的物质很多都是混合物,为了适应各种不同的需要,常常要把混合物里的几种物质分开,得到较纯净的物质,这叫做混合物的分离,过滤和结晶是最常用的混合物分离的方法。 (板书)第四节过滤和结晶 一、过滤 1.定义:过滤是把溶于液体的固态物质跟液体分离的一种方法。 2.原理:过滤时,液体穿过滤纸上的小孔,而固态物质留在滤纸上,从而使固体和液体分离。 3.操作方法: 例如:粗盐提纯(请学生设计实验步骤)展示粗盐,让学生看到粗盐上的沙子等不溶性固体物质,以利于学生思考。 (演示实验)粗盐提纯 归纳出: (1)步骤: ①在烧杯中溶解粗盐 ②过滤 (2)注意事项: 一贴:滤纸紧贴漏斗内壁 二低:滤纸低于漏斗边缘0.5cm 滤液低于滤纸边缘 三靠:漏斗下端紧靠烧杯内壁 玻璃棒靠在三层滤纸处

烧杯靠在玻棒上倾倒液体 (3)玻璃棒的作用 溶解——加速溶解 过滤——引流 让学生总结过滤作为分离物质的一种方法的适用范围。 过滤是用于分离不容性固体和可溶性固体的一种方法。 设问过渡:如果要分离硝酸钾和氯化钠固体能用过滤的方法吗?如果不能,想一想能用什么方法来分离它们? 二结晶 1.定义:溶质以一定几何形状的晶体从溶液中析出的过程叫做结晶。 2.原理:几种可溶性固态物质的混合物,根据它们在同一种溶剂里的溶解度不同,用结晶的方法加以分离。 (讲述)常用的结晶方法主要有两种,对于溶解度受温度影响不大的固态溶质,一般用蒸发溶剂的方法得到晶体;对于溶解度受温度影响较大的固态溶质,一般可以用冷却的热饱和溶液的方法,使溶质结晶析出。 例如:硝酸钾中混有少量氯化钠,应怎样分离? (演示实验)在烧杯中加入10g和NaCl混合物,注入15mL水,加热使混合物完全溶解,然后冷却,观察的析出,再进行过渡,晶体留在滤纸上,NaCl溶解在滤液中。 (讲述)我们已经知道,的溶解度受温度变化的影响较大(80℃时,的溶解度是169g,20℃时为31.6 g),因此较高温度下的饱和溶液降温时,部分从溶液里结晶析出。而NaCl的溶解度受温度变化的影响较小(80℃时,NaCl的溶解度是38.4g,20℃时为36g),降温时大部分NaCl仍溶解在溶液里。过滤时,晶体留在滤纸上,大部分NaCl仍留在滤液里(这种滤液叫做母液)。 小结: 作业:课本142页习题1、2、3 教学设计方案2 [教学方法] 实验讨论法。 [教学用具] 仪器:烧杯、漏斗、玻璃棒、试管、试管夹、铁架台、铁环、滤纸、酒精灯、药匙。

经纬仪操作步骤

经纬仪的基本操作为:对中、整平、瞄准和读数。 (一)对中 对中的目的是使仪器度盘中心与测站点标志中心位于同一铅垂线上。操作步骤为: 张开脚架,调节脚架腿,使其高度适宜,并通过目估使架头水平、架头中心大致对准测站点。 从箱中取出经纬仪安置于架头上,旋紧连接螺旋,并挂上锤球。如锤球尖偏离测站点较远,则需移动三脚架,使锤球尖大致对准测站点,然后将脚架尖踩实。 略微松开连接螺旋,在架头上移动仪器,直至锤球尖准确对准测站点,最后再旋紧连接螺旋。 (二)整平 整平的目的是调节脚螺旋使水准管气泡居中,从而使经纬仪的竖轴竖直,水平度盘处于水平位置。其操作步骤如下: 1.旋转照准部,使水准管平行于任一对脚螺旋[如图3-7A ]。转动这两个脚螺旋,使水准管气泡居中。

2.将照准部旋转90°,转动第三个脚螺旋,使水准管气泡居中[如图3-7B] 图3-7 整平 3.按以上步骤重复操作,直至水准管在这两个位置上气泡都居中为止。使用光学对中器进行对中、整平时,首先通过目估初步对中(也可利用锤球),旋转对中器目镜看清分划板上的刻划圆圈,再拉伸对中器的目镜筒,使地面标志点成像清晰。转动脚螺旋使标志点的影像移至刻划圆圈中心。然后,通过伸缩三脚架腿,调节三脚架的长度,使经纬仪圆水准器气泡居中,再调节脚螺旋精确整平仪器。接着通过对中器观察地面标志点,如偏刻划圆圈中心,可稍微松开连接螺旋,在架头移动仪器,使其精确对中,此时,如水准管气泡偏移,则再整平仪器,如此反复进行,直至对中、整平同时完成。 瞄准 瞄准目标的步骤如下: 1.目镜对光:将望远镜对向明亮背景,转动目镜对光螺旋,使十字丝成像清晰。

pull-down 实验技术

GST pull-down实验介绍 本帖引用网址:https://www.doczj.com/doc/496975348.html,/thread-30095-1-1.html GST pull-down实验是一个行之有效的验证酵母双杂交系统的体外试验技术,近年来越来越受到广大学者的青睐。其基本原理是将靶蛋白-GST融合蛋白亲和固化在谷胱甘肽亲和树脂上,作为与目的蛋白亲和的支撑物,充当一种“诱饵蛋白”,目的蛋 白溶液过柱,可从中捕获与之相互作用的“捕获蛋白”(目的蛋白),洗脱结合物后通过 SDS-PAGE电泳分析,从而证实两种蛋白间的相互作用或筛选相应的目的蛋白,“诱饵蛋白”和“捕获蛋白”均可通过细胞裂解物、纯化的蛋白、表达系统以及体外转录翻译系统等方法获得。此方法简单易行,操作方便。 GST:谷胱甘肽巯基转移酶(glutathione S-transferase) GST pull down 和 Coimmunoprecipitation关系问题 啥叫GST pull down , Coimmunoprecipitation呢? 学过生物的地球人都知道. 这是研究蛋白质相互作用的两种方法. 简单通俗的打个比方, GST pull down 就像把一男一女放在孤岛上, 除非蜂马牛不相及, 同类男女之间该发生的一般都会发生. 这种关系是直接的, 西方的. Coimmunoprecipitation, (Co-IP) 则是, 众里寻他千百度, 那人却在灯火阑珊处. 研究一群男女间的自由恋爱问题. 一个蛋白在本性上可以同时喜欢很多其他的蛋白, 但是最终还是会有个最喜欢的, 而在Co-ip中就能发现他的喜好. 这种关系可能是直接的, 也可能是间接的, 是更接近于东方的. 两个蛋白可能在生物体内素昧平生, 一个在头上, 一个在脚上. 也许两者之间或许很合辙, 生来却天各一方. 在GST pull down 的环境中, 他们可能相遇, 吸引在一起. 但在现实生活中, 这样的浪漫关系可能是不现实的. 脚上的蛋白若是跑到头上与情人幽会, 人就要出大问题. 还有的情况是, 两个蛋白即使独处在一起, 也可能不会互相吸引, 但是到了生物系统的大环境中, 在其他蛋白, 各种因素适当的辅助下, 却有可能形成稳定的搭档关系. 所以, 随缘, 就是像蛋白一样单纯, 却不简单. 有关Control和多方取证. 我们做试验, 都要有实验组, 阴性对照, 阳性对照. 即使体外生化实验都达成了, 还要通过多方取证来确定两个蛋白之间确定的生理关系. 这也是我们生理学家所关心的, 若是没有生理意义, 那还空谈什么关系. 尤其在蛋白实验里, 假阴性, 假阳性泛滥. 以为是真的东西, 实际是假的; 以为是假的东西, 实际上却是真的. 如何披沙捡金, 去伪存真? 就得靠缜密的阴性, 阳性对照组来帮助我们辨别. 要把蛋白和已知不相干的蛋白放在一起, 和已知相干的放在一起, 以此来检验实验手段是

经纬仪操作方法步骤图解

在这里经纬仪操作方法步骤详解图解添加日志标题 经纬仪操作方法步骤详解图解 步骤图解 1、连接螺旋:旋紧连接螺旋, 将仪器固定在三脚架上。 2、调节三脚架:将三脚架打开, 调节高度适中,三条架腿分别 处于测站周围。如果地面松软, 应将架腿踩实。 3、光学对中器:调节光学对中 器的目镜和物镜,使地面清晰 成像。

4、脚螺旋:调节脚螺旋,将仪器精确整平。 5、水平制动螺旋:旋紧水平制动螺旋,照准部被固定。望远镜无法在水平方向内转动。 6、水平微动螺旋:水平制动螺旋旋紧后,旋转水平微动螺旋,照准部在水平方向内微微转动。 7、竖直制动螺旋:旋紧竖直制动螺旋,望远镜被固定在支架上无法转动。

8、目镜调焦螺旋:转动目镜调焦螺旋,使十字丝清晰。 9、水平度盘反光镜:调整水平度盘反光镜,读书窗内数字明亮。 10、竖直度盘反光镜:调整竖直度盘反光镜,使读数窗内读数明亮。 11、读数显微镜:调节读数显微镜,使读书清晰。

12、配盘手轮:调整配盘手轮, 改变水平度盘读数。 水准仪操作步骤方法详解图解 发布: 2009-10-06 09:32 | 作者: admin | 查看: 4次水准仪操作步骤方法详解图解 步骤图解 1、安放三角架:调节三脚架腿至适当 高度,尽量保持三脚架顶面水平。如 果地面松软,应将架腿踩入土中。 2、连接螺旋:旋紧连接螺旋, 将水准仪和三脚架连接在一 起。

3、脚螺旋:调节脚螺旋,使圆水准气泡居中。 4、制动螺旋:旋紧制动螺旋,望远镜被固定。 5、水平微动螺旋:在制动螺旋旋紧后,调节水平微动螺旋,望远镜在水平方向内微小转动。 6、目镜调焦螺旋:调节目镜调焦螺旋,使十字丝清晰成像。

GST pull down的原理以及具体操作流程

实验目的:体外检测蛋白质与蛋白质之间相互作用。用于验证两个已知蛋白的相互作用,或者筛选与已知蛋白相互作用的未知蛋白。 实验原理:利用重组技术将探针蛋白与GST(Glutathione S transferase)融合,融合蛋白通过GST与固相化在载体上的GTH(Glutathione)亲和结合。因此,当与融合蛋白有相互作用的蛋白通过层析柱时或与此固相复合物混合时就可被吸附而分离. 试剂:NaCl,KCl,Na2HPO4,KH2PO4,Triton-100,IPTG(Merck分装),PMSF(Amersco),Cocktaier(Merck 539134),Immobilized Glutathione(PIERCE 15160) 实验操作程序: 材料及试剂 探针蛋白与GST融合的原核蛋白,裂解的细胞蛋白,或者组织蛋白提取物 细胞蛋白裂解液,洗脱液: PBS及PBS+1%Triton-100 PBS (1L) NaCl:8g KCl:0.2g Na2HPO4: 1.44g KH2PO4:0.24g 加入800ml蒸馏水,用HCl调节溶液的pH值至7.4,最后加蒸馏水定容至1L即可,高温高压灭菌!4℃保存备用! PMSF(苯甲基磺酰氟) MW:174.19 工作浓度0.1-1mM,这里使用1mM,储存浓度100mM,将0.174g PMSF溶于10ml无水乙醇混匀即可!保持于-20℃或者4℃ (以下流程仅供研究已知原核蛋白A和真核过表达蛋白B相互作用) 1:原核融合蛋白A的获得 1.1:将编码蛋白A与GST的重组质粒化转BL21(DE3)菌株 1.2:挑取单个克隆到含有5mlLB(+100ug/mlAmp)的10ml试管里,37℃培养过夜 1.3:将培养菌液转移到含有500ml LB(+100ug/mlAmp)的1L锥形瓶中,37℃,225rpm培养至OD600≈1.0-1.5左右,加入适当浓度的IPTG,在适当温度下培养适当时间(诱导条件需要根据不同的蛋白做调整).6000g,10分钟,4℃离心收集细菌,去尽上清,将菌体至于-20℃放置O/N 1.4:室温冻融菌体,马上置于冰上,每500ml培养液加入10-20ml细菌裂解液(PBS+1%Triton-100+PMSF),吹打混匀 1.5:冰上超声破碎,开2秒,停9秒,总40-60分钟。至裂解液充分清凉 1.6:11000rpm,15分钟,4℃离心分离上清,-80℃保存备用 2:真核融合蛋白B的获得 2.1:将编码B蛋白的碱基序列克隆到编码标签蛋白(如HA,或者myc)的真核表达载体上,进行细胞转染xq 3:48小时后,取适量融合蛋白GST-A冰上冻融 4:取50-70ulGST-Beads(Immobilized Glutathione)到EP管中,用800ul PBS+1%Triton-100润洗一次,将冻融融合蛋白GST-A与之混匀,4℃层析柜旋转结合1小时。 5:PBS+1%Triton-100洗3次,PBS洗3次。留取20ul(PBS+Beads)作Offer。 6:同时,裂解真核融合蛋白B,去尽培养基,用PBS(RT)洗一次,加入300ul裂解液(以6well为例,PBS+1%Triton-100+ Cocktaier),4℃放置30分钟。

实验三 :过滤综合实验

实验三 过滤综合实验 —— 恒压(板框)过滤实验 本实验设备由过滤板、过滤框、旋涡泵等组成,是一种小型的工业用板框过滤机。本套装置可进行设计型、研究型、综合型实验。由于设备接近工业生产状况,通过实验可培养学生的工程观念、实验研究能力、设计能力以及解决生产实际问题的能力。 一、实验任务 根据教学大纲要求和各实验小组的准备情况,从下列实验任务中选择其中1-2项实验。 1.测定恒压过滤参数K 和过滤介质参数qe 、θe ; 2.改变压力,测定滤饼压缩性指数S 和滤饼物料特性常数k ; 3.研究不同过滤压力对过滤机生产能力的影响; 4.研究在相同压力下,不同滤浆浓度对过滤机生产能力的影响。 二、实验基本原理 滤饼过滤是液体通过滤渣层(过滤介质与滤饼)的流动。无论是生产工艺还是工艺设计,过滤速率的计算都要有“过滤常数”作依据。由于滤渣厚度随着时间而增加,所以,恒压过滤速度随着时间而降低。不同物料形成的悬浮液,其过滤常数差别很大,即使是同一种物料,由于浓度不同,滤浆温度不同,其过滤常数也不尽相同,故要有可靠的实验数据作参考。 根据恒压过滤方程: ()()e e K q q θθ+=+2 (1) 式中: q ─ 单位过滤面积获得的滤液体积 [ m 3/m 2 ] e q ─ 单位过滤面积的虚拟滤液体积 [ m 3 /m 2 ] θ ─ 实际过滤时间 [ s ] e θ ─ 虚拟过滤时间 [ s ] K ─ 过滤常数 [ m 2 /s ] 将(1)式微分可得: e q K q K dq d 2 2+=θ (2) 当各数据点的时间间隔不大时, dq d θ 可以用增量之比 q ??θ 来代替,即: e q K q K q 22+=??θ (3) 上式为一直线方程。试验时,在恒压下过滤要测定的悬浮液,测出过滤时间θ及滤液累计量q 的数据,在直角坐标纸上标绘 q ??θ 对 q 的关系,所得直线斜率为 K 2,截距为 e q K 2 ,从而求出 K 和 e q 。

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