植物组织中还原糖含量的测定
(3，5–二硝基水杨酸法)
一、实验目的
通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作。
二、实验原理
3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色物质（即3–氨基–5–硝基水杨酸)，
该物质在540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质
的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。
三、实验仪器、试剂和材料
1.仪器：25ml刻度试管、离心管或漏斗、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、离心机、分光光度计等。
2.试剂：1mg/ml葡萄糖标准液、3，5–二硝基水杨酸
3.材料：食用面粉
四、实验操作步骤
1、葡萄糖标准曲线的制作
取7支干燥洁净的25ml刻度试管或大试管，编号，按下表准确加样：
将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，
再以蒸馏水定容至25ml，加塞后颠倒混匀。在540nm波长下，用0号管为参比管调零
，分别读取各管的吸光度(A540nm)。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标绘制标准曲线。
2、样品中还原糖的提取
准确称取1.5g食用面粉，放在小锥形瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，
然后加25ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，然后将锥形瓶中内容物转入一个50mL
容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。充分混合，过滤，滤液即为还原糖待测液。3、样品含糖量的测定
分别取2ml还原糖待测液于两支刻度试管或大试管中，
然后各加3，5–二硝基水杨酸1.5ml。其余操作与制作葡萄糖标准曲线时相同。测定各管吸光度。
五、实验结果处理
以上述还原糖待测液的吸光度平均值，在标准曲线上
查出相应的还原糖毫克数。按下式计算样品中还原糖的百分含量。
提取液总体积
还原糖%= (测定时取用体积/样品质量
(mg))×100
六、实验注意事项：
标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
3，5-二硝基水杨酸比色法测量还原糖含量 一．实验目的 1、掌握用制作标准曲线的方法来测量还原糖的含量. 2、学会使用721精密型分光光度计。 3、熟练容量瓶、移液管等简单仪器的使用方法。 二．原理 1、还原糖是指含有醛基或者酮基的糖类，单糖都是还原糖，多糖中有乳糖和麦芽糖等是还原糖，而淀粉和蔗糖是非还原糖。DNS即3，5-二硝基水杨酸中含有的硝基使其有较强的氧化性，与醛基在加热的条件下发生氧化还原反应，生成红色物质3-氨基-5硝基水杨酸。反应方程式如下： 2、不同浓度的还原糖液与DNS反应时，生成的3-氨基-5硝基水杨酸的浓度不同，导致反应后液体颜色深浅不同。在分光光度计下测量标准梯度浓度的葡萄糖溶液与DNS反应后液体的OD540（波长为540nm条件下样液的光密度值），做出OD540——还原糖含量标准曲线，对于未知样品的测量，只需将OD540带入图像，找到相应的还原糖含量值即可。 3、本实验总糖的测量步骤中，因为样品（面粉）主要由淀粉构成不能与DNS直接反应，所以需要用酸水解法将淀粉降解为单糖进行测量。淀粉由单糖缩合产生，在降解过程中会引 入水分子，所以计算总糖的质量时，应除去水的质量。M葡萄糖=180，M水=18，由于淀粉的 =0.9倍。碳链极长，忽略链末端本身含有的一个水分子，则淀粉的质量为还原糖质量的180?18 180 三．试剂（配制方法） 提前配制试剂 DNS（3,5-二硝基水杨酸试剂）：6.3g 3,5-二硝基水杨酸和262ml 2mol/L NaOH加到热酒石酸钾钠的热溶液中（182g酒石酸钾钠溶液溶于500蒸馏水中），再加5g重结晶酚和 5g亚硫酸氢钠于其中，搅拌溶解，冷却后定容到1000ml，储存于棕色瓶中。 碘化钾—碘试剂：称取5g碘10g碘化钾溶于100ml蒸馏水中。 酚酞试剂：0.1g酚酞溶于250ml 85%的乙醇中，棕色瓶储存。 6mol/L HCl 溶液 10% NaOH 溶液 面粉样品 0.5mg/mL葡萄糖溶液：精确称取105℃烘至恒重的葡萄糖0.5g，用水定容到1000ml。 四. 实验仪器 （一）每组配置
实验2 还原糖的测定方法 食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。 一、高锰酸钾滴定法 1.原理 样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚铜含量，再查表得还原糖量。 2.适用范围 GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。 3.仪器 （1） 滴定管 （2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 （3） 真空泵 （4） 水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。 4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。 4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。 4.5碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 4.6精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜乙液浸泡数小时，用水洗净。再以3mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。然后加水振摇，使成微细的浆状软纤维，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。 4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。 4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。 4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。 4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理： 5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50ml水，摇匀。加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及 4ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液滤液备用。（注：此步骤目的是沉淀蛋白） 5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250ml容量瓶中。加50 ml水，混匀。以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操
《生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定》导学提纲 一、还原糖的鉴定 1、什么是还原糖？常见的还原糖有哪些？ 还原性糖指含有醛基或酮基的糖，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。 2、实验原理是什么？ 斐林试剂由质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液和质量浓度为0.05g/ml的CuSO4溶液配制而成的淡蓝色Cu (OH) 2 沉淀的悬浊液，葡萄糖溶液在加入斐林试剂后，在加热条件下还原为砖红色的沉淀，而葡萄糖氧化成葡萄糖酸。其反应式为：CH2OH－（CHOH）4－CHO＋2Cu（OH）2 = CH2OH－（CHOH）4－COOH＋Cu2O＋2H2O 3、用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液颜色变化过程是怎样的？ 浅蓝色、棕色、砖红色沉淀 4、为什么斐林试剂要现配现用，不能放置太久？ 时间一长，Cu（OH）2沉淀在溶液底部无法充分发生反应 5、为什么选择白色或接近白色的植物组织？ 因为颜色过深的植物组织中的色素会对颜色反应起掩盖作用。 6、研磨小块苹果时，为什么要加少许石英砂？ 使研磨更充分，否则还原糖少，颜色不明显。 7、为什么必须将斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后再注入苹果组织液中，而不能分别加入？ 如分别加入，组织液中的有机酸会与NaOH迅速反应，导致Cu (OH) 2不足。 8、为什么最终的颜色中有时会出现红褐色，甚至黑色？ Cu (OH) 2对热不稳定，易脱水生成黑色氧化铜CuO。 9、还可以用什么方法鉴定还原糖？ 班氏试剂（A液：硫酸铜溶液，B液：柠檬酸纳和碳酸溶液）或用银镜反应。 10、如何鉴定淀粉？ 滴加碘液，淀粉遇碘变蓝。 二、蛋白质的鉴定 1、实验原理是什么？ 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而缩合成双缩脲。 双缩脲试剂的成分是质量浓度为0.1g／mL的氢氧化钠溶液(A)和质量浓度为0.01g／mL的硫酸铜溶液(B)。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫做双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质可与双缩脲试剂发生颜色反应。 2、使用蛋清作实验材料，为什么要先稀释？ 如果不稀释，反应后产生的化合物会吸附在试管壁，导致反应不彻底。 3、样液加入双缩脲试剂A液后，溶液什么颜色？之后加入双缩脲试剂B液，振荡后溶液什么颜色？ 加双缩脲试剂A后，溶液仍透明（或白色）；加入B液振荡均匀后，变紫色或紫红色。 4、为什么加入的双缩脲试剂B液不能过量？ 会生成大量蓝色Cu (OH) 2，遮蔽产生的紫色。 5、斐林试剂与双缩脲试剂的主要不同点？ （1）溶液浓度不同。斐林试剂中CｕSO4的浓度为0.05g/mL，双缩脲试剂中CｕSO4的浓度为0.01 g/mL。 （2）使用原理不同。斐林试剂实质是新配制的Cu(OH)2溶液，双缩脲试剂实质是碱性条件下的Cu2＋。 （3）使用方法不同。斐林试剂使用时，先把Na0H溶液和CｕSO4溶液混合，而后立即使用。双缩脲试剂使用时，先加入Na0H溶液，然后再加入CｕSO4溶液。 三、脂肪的鉴定 1、实验原理是什么？在制作临时装片的过程中用什么试剂洗去浮色？ 2、为什么要取浸泡过的花生种子，而浸泡的时间又不宜过长？ 浸泡的种子易切片，而浸泡时间过长，组织较软，切下的薄片不易成形。 3、有些橘黄色的小颗粒并不在细胞之内，而在细胞的周围，你认为是什么原因呢？ 用刀片切取种子子叶薄片时，切破了细胞，细胞中的脂肪分子游离到细胞之间。 4、切取花生子叶薄片，要求实验技能较高，此步骤如何改进可以更便于操作？ 改成刮取花生子叶泥制作临时装片，易做，效果又好。
实验一还原糖和总糖含量的测定 （3,5-二硝基水杨酸比色法） 一．目的 1.掌握还原糖定量测定的基本原理； 2.学习比色定糖法的基本操作； 3.熟悉分光光度计的使用方法。 二．原理 在碱性的条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸共热，3,5-二硝基水杨酸被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸（棕红色物质）,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系，在540nm波长下测定棕红色物质的消光值，查对标准曲线并计算，便可分别样品中还原糖和总糖的含量。 三．仪器.试剂和材料 1.仪器： （1）25ml刻度试管（2）玻璃漏斗（3）三角瓶（4）100ml容量瓶3个（5）刻度吸管（1ml,2ml,3ml）（6）恒温水浴（7）沸水浴（8）电子天平（9）分光光度计2.试剂； （1）1mg/ml葡萄糖标准液（2）3,5-二硝基水杨酸试剂（3）碘碘化钾溶液（4）酚酞指示剂（5）6ml/L HCI （6）6ml/L NaOH 3.材料：食用面粉 四．操作步骤 将各管摇匀，在沸水中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温，再以蒸馏水定容至25min，用试管塞塞住试管口，颠倒混匀。在540nm波长下，用0号试管调零，分别读取1~6号管的吸光度。以吸光度为纵坐标，葡萄样毫克数为横坐标，绘制标准曲线。
2.样品中还原糖和总糖含量的测定 （1）样品中还原糖的提取：准确称取3g使用面粉，放在100ml三角瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状，然后加50ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水中保温20min，使还原糖浸出。过滤，用20ml蒸馏水定容至刻度，混匀，作为还原糖待测液。 （2）样品中总糖的水解和提取：准确称取1g使用面粉。放在100ml的三角瓶中，加入10ml 6mol/L HCI及15ml蒸馏水，置于水浴中加热水解30min。待三角瓶中水解液冷却后，加入1滴酚酞指示剂。以6mol/LNaOH中和至微红色，过滤，再用少量蒸馏水冲洗三角瓶及滤纸，将滤纸全部收集砸100ml的容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，混匀。精确吸取10ml 定容过的水解液，移入另一100ml的容量瓶中，以水稀释定容，混匀，作为总糖待测液。 六、结果处理 （1）由管○1、○2吸光度平均值在葡萄糖标准曲线查出相应的还原糖毫克数为：0.167mg
《检测生物组织中还原糖、脂肪和蛋白质》教案 讲课人：曾永昌 一、实验原理 （1）鉴定实验设计的理念： 某些化学试剂+ 生物组织中有关有机化合物产生特定的颜色反应。 （2）具体原理： ①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。 ②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。 ③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色反应。 二、目标要求 初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 三、重点、难点 1.重点 ①初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 ②通过实验的操作和设计培养学生的动手能力，掌握探索实验设计技巧，从而培养创新思维能力。 2.难点 根据此实验方法、原理，设计实验来鉴定常见食物的成分。 四、实验材料 1.可溶性还原糖的鉴定实验:选择含糖量较高、颜色为白色或近白色的植物组织，以苹果、梨为最好。
2.脂肪的鉴定实验:选择富含脂肪的种子，以花生种子为最好(实验前浸泡3h～4h)。 3.蛋白质的鉴定实验:可用浸泡1d～2d的黄豆种子(或用豆浆、或用鸡蛋蛋白)。 五、仪器、试剂 1.仪器:剪刀,解剖刀,双面刀片,试管,试管架,试管夹,大小烧杯,小量筒,滴管,玻璃漏斗,酒精灯,三脚架,石棉网,火柴,研钵,石英砂,纱布,载玻片,盖玻片,毛笔,吸水纸,显微镜。 2.试剂:①斐林试剂(0.1g/L的NaOH溶液+ 0.05g/mL的CuSO4溶液)；②苏丹Ⅲ染液；③双缩脲试剂；④体积分数为50%的酒精溶液；⑤蒸馏水。 六、教学过程 新课引入：我们在化学中学习过物质的鉴定，其原理是被鉴定的物质与所用的化学试剂要么发生颜色反应，要么产生沉淀，我们生物学上也采用此原理，在生物学中物质鉴定的理念是：某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。 新课教学：（具体原理） ①可溶性还原糖+ 斐林试剂→砖红色沉淀。（水浴加热） ②脂肪小颗粒+ 苏丹Ⅲ染液→橘黄色小颗粒。（要显微镜观察） ③蛋白质+ 双缩脲试剂→紫色反应。（要先加A液NaOH 溶液再加B液CuSO4溶液） 今天，我们学习鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 （一）、还原糖的鉴定
检测生物组织中的脂肪、糖类、蛋白质和淀粉实验改进 广东省罗定中学李稚虹 一、实验目的 1.尝试用化学试剂检测生物组织中的脂肪、糖类、蛋白质和淀粉。 2.掌握实验的操作技能。 3.认识到脂肪、糖类、蛋白质和淀粉是生物组织的重要成分。 二、实验原理 某些化学试剂能够使生物组织中的有关有机化合物产生特定的颜色反应。脂肪可以被苏丹III染液染成橘黄色。糖类中的还原糖，与斐林试剂发生作用，产生砖红色颜色。蛋白质与双缩脲试剂发生作用，产生紫色反应。淀粉遇碘变蓝色。 三、材料与器具 1.实验材料：新鲜猪的皮下结缔组织，雪梨，鸡蛋清，马铃薯。 2.仪器：解剖刀，滴管，小烧杯，培养皿，载玻片，盖玻片，吸水纸，显微镜，酒精灯。 3.试剂：苏丹III染液，体积分数为50％的酒精溶液，蒸馏水，斐林试剂，双缩脲试剂，碘液。 四、方法步骤 1．脂肪颗粒的检测 ①取材 取新鲜的肥猪肉（富含脂肪），切成小块放入培养皿中备用。从中间将肥肉切开两半，用解剖刀刀面在肥肉内侧轻刮几下，把刀面上附有粘稠物的一端，均匀涂抹在载玻片的中央。 ②染色 在载玻片的粘稠物上滴加苏丹III染液滴2～3滴，染色5min；用吸水纸吸掉染液。倾斜载玻片，并在染色的部位缓慢滴加3～4滴50％的酒精，洗去浮色；然后，用吸水纸吸掉粘稠物周围的酒精。滴一滴蒸馏水于粘稠物上，盖上盖玻片，制成临时装片。 ③观察
使用显微镜观察临时装片。先在低倍显微镜下观察，并选择最理想的观察对象（肉末层的较薄、染色均匀且橘黄色明显的区域）。将目标移至视野中央，转换高倍镜观察被染色后的脂肪细胞。 2．还原糖的检测 ①取材 新鲜雪梨去皮后切成小块放入培养皿中备用。用解剖刀在雪梨组织上轻刮几下，把刮下的组织涂抹到载玻片的中央。 ②染色 向有组织处滴加两滴菲林试剂（甲乙液等量混合）。 ③加热观察 用试管夹夹着载玻片的一端，把载玻片在酒精灯外焰末端来回移动烘烤，观察雪梨组织颜色变化。 3．蛋白质的检测 ①向试管内注入稀释的蛋清2mL。 ②向试管内注入双缩脲试剂A液1mL，摇匀。 ③向试管内注入双缩脲试剂B液4滴，摇匀。 ④可见组织液颜色变化。 4．淀粉颗粒的检测 ①取材 马铃薯切成小块放入培养皿中备用。用解剖刀在马铃薯组织上轻刮几下，把刮下的组织涂抹到载玻片的中央。 ②染色 向马铃薯组织处滴加两滴碘液，盖上盖玻片，用吸水纸吸去多余的染液制成临时装片。 ③观察
实验八食品(炼乳)中还原糖含量的测定
一、实验目的 1、了解食品中还原糖的含量； 2、学习直接滴定法测定还原糖的原理，并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果的分析，了解影响测定准确性的因素。 二、原理， 食品中的还原糖主要指具有还原性的葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等，还原糖之所以具有还原性，是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖的经典化学方法都是以其能被多种试剂氧化为基础的。在这些方法中，以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法的应用最广。本实验就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂的直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成的天蓝色Cu(OH)2沉淀后，立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色的酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时，二价铜即被还原糖还原为一价的红色氧化亚铜沉淀，氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应，生成可溶性化合物，达到终点时，稍微过量的还原糖将蓝色的次甲基蓝还原成无色，溶液呈淡黄色而指示滴定终点，根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖的质量，以及测定样品液所消耗的体积，计算还原糖含量。反应式如下： CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │CHO COOH │ CHO ││CHOH │Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││CHOH │CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液：称取15.00 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0.05g次甲基蓝，溶于蒸馏水中并稀释至1000 ml。
淀粉、总糖、还原糖的测定方法 淀粉的测定方法---蒽酮法 一( 原理 用乙醇将烟叶中可溶性糖浸出并分离出去，而后烟叶中淀粉用适量Hcl，因淀粉在稀酸作用下被水解成葡萄糖，再按葡萄糖测定进行。根据葡萄糖的含量从而算出淀粉含量。二( 仪器设备 三角瓶50ml 容量瓶100ml 移液管10ml、1ml 漏斗圆底烧瓶1000ml 离心管和离心机水浴锅温度计烘箱滤纸天平分光光度计 三( 试剂 盐酸乙醇氢氧化钠蒽酮 四、试剂的配制和标准曲线的绘制 1. 葡萄糖标准液的配制称取无水葡萄糖(AR级)0.1g溶于蒸馏水中，定容至100毫升，用前取此液10毫升，再用水稀释至100毫升。 2. 标准曲线的绘制取6支干洁刻度试管，依次移入葡萄糖标准液 (100μg/ml)0，0.20，0.40，0.60，0.80，1.00ml后，再从1至6试管依次补加1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0ml蒸馏水后，再分别加入蒽酮试剂5毫升，于沸水中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色，记录OD值，以吸光值为纵坐标，糖含量为横坐标，绘出标准曲线 3. 80%乙醇的配制取400毫升乙醇加水定容至 500ml 4. 1当量的盐酸配制 43毫升浓盐酸加水定容至500ml 5. 10%氢氧化钠配制 10g氢氧化钠溶于100ml水中 6. 蒽酮试剂:1克蒽酮溶于72%的HSO1000ml(98%的HSO+240的蒸馏水)，棕色瓶冰箱2424
保存2,3周。 五实验步骤 1. 分离出水溶性糖 0.1g样置于离心管中加入8毫升80%乙醇 80?水浴浸 提30分钟冷却后离心(3600转)5分钟残渣再加入 8ml80%乙醇。重复三次 2. 水解 残渣用1当量的盐酸15ml洗入50ml三角瓶，摇匀后烘箱105度加热3.5小时，冷却后加10%氢氧化钠6ml中和，过滤，蒸馏水定容100ml。 3. 测定 取滤液1ml(空白用1ml蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5ml，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色 六结果的计算与表述 C=AN*0.9/W C—样品淀粉含量(μg/g) W—样品重量(g) A—标准曲线查得的糖量(μg) N—样品提取液占样品反应液的倍数 蒽酮比色法测总糖: 实验步骤: 1、可溶性糖的提取:准确称取烟叶样品0.100克，置于离心管中，加入8毫升80%乙醇，于80?水浴浸提30分钟，冷却后于4000转离心5分钟，收集上清液，残渣再加入8毫升80%乙醇，再次浸提，重复两次，将三次提取的上清液合并于100毫升容量瓶中并定容至100毫升。 2、总糖的测定:取提取液1毫升于试管中(空白中用1毫升蒸馏水代替)，加入蒽酮试剂5毫升，摇匀，于沸水浴中加热10分钟，冷却后在620nm波长处比色。
生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 概述 高中生物新教材中增加了“生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的鉴定”实验。这是一个生物化学方面的验证性定性实验，方法简单易操作，但对实验技能有一定要求。通过本实验，为后面的学习奠定知识与技能的基础。教师要注重培养学生的观察能力、科学精神与严谨学风。 文本对这个实验提供了“教师教学设计指导”，包括：教学设计、实验准备工作、实验过程与结果、开放实验室、练习与评价。 教学设计 （一）学习内容分析 1．实验目的 初步学会鉴定生物组织中可溶性糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 2．实验重点难点 由于这是高中生物课第一个实验，也是人教版新教材新增加的实验。总体说来本实验是一个验证性实验，这是最基本的要求。当然鼓励有条件的学校改为探究性实验。 重点： 1.掌握三种物质与各自检验试剂反应所发生的现象，学会对实验现象的分析； 2.生物学实验的要求以及规章制度 难点： 1.学生的实验操作技能关系这次实验的结果是难点之一。 2.由于本实验要用到显微镜，而本实验是高中生物的第一个实验，此时大部分学生已经 有2年没有进生物实验室了，显微镜的使用已经淡忘了。所以在鉴定脂肪时如何指导 学生正确使用显微镜是一个难点。 3.让学习者认真按照规范操作按照规定格式实事求是地记录实验结果。这要求教师有很 好的组织能力。
（二）学习者分析 1.这是高中生第一次进入生物学实验室。多数学生会比较兴奋，这本来是好事。但有一部 分学生不注意操作要领以及规章制度。 2.而那些对生物学不感兴趣和不太了解的学生会对实验不积极甚至旁观。 3.本实验要用酒精灯加热水浴，常出现的问题： 试管中液体过满（超过1/3） 学生使用酒精灯不当，吹灭火，盖盖儿灭火后不提起来再放下，使得下次拔不下来 4.高中实验学生第一次做切片，他们的花生切片可能较厚，显微镜下看不清；可以将两个 刀片并起来切，这样可以切出较薄的切片。另一种方法是：左手三指捏住材料并使其突出在手指之上，以免伤到手指。右手持双面刀片，平放在食指上，刀口向内。以大臂带动小臂和手，自左前方向右后方均匀滑行切片。（媒体使用：用录像演示正确的切片姿势，边放边讲解） 5.显微镜的使用 1．显微镜的操作虽然不复杂，但还是有相当的学生操作不熟练，不规范，他们最易出现的错误操作是： 掌握不好对光的方法（主要是显微镜的反光镜角度），视野不够明亮。 教室光线不好时，不会调节反光镜寻找光源。 调焦的操作常不协调。 被检物比较小、比较透明时，常常错过焦点。 不理解换高倍镜时不必上升镜筒，因怕出问题，总是先升高镜筒再换高倍镜。 2．装片制作中常出现的问题： 取材部位与方法不对 取材的大小掌握不好 水滴的大小掌握不好 （三）教学目标： 分别说明三种物质鉴定方法及试剂； 大致说出检测反应的基本原理；
实验八食品(炼乳)中还原糖含量得测定 一、实验目得 1、了解食品中还原糖得含量; 2、学习直接滴定法测定还原糖得原理,并掌握其定糖方法。 3、通过对实验结果得分析,了解影响测定准确性得因素。 二、原理, 食品中得还原糖主要指具有还原性得葡萄糖、果糖、戊糖、乳糖、麦芽糖等,还原糖之所以具有还原性,就是由于其分子中含有游离醛基(-CHO)或酮基(>C=O)。 测定还原糖得经典化学方法都就是以其能被多种试剂氧化为基础得。在这些方法中,以各种根据碱性酒石酸铜溶液氧化作用改进方法得应用最广。本实验就就是采用使用碱性酒石酸铜作为氧化剂得直接滴定法。 碱性酒石酸铜溶液A、B二液等体积混合时生成得天蓝色Cu(OH)2沉淀后,立即与酒石酸钾钠起反应生成深蓝色得酒石酸钾钠铜络合物。此络合物与还原糖共热时,二价铜即被还原糖还原为一价得红色氧化亚铜沉淀,氧化亚铜沉淀与亚铁氰化钾反应,生成可溶性化合物,达到终点时,稍微过量得还原糖将蓝色得次甲基蓝还原成无色,溶液呈淡黄色而指示滴定终点,根据还原糖标准溶液标定碱性酒石酸铜溶液相当于还原糖得质量,以及测定样品液所消耗得体积,计算还原糖含量。反应式如下: CuSO4＋2NaOH→Cu(OH)2↓＋Na2SO4 COOK COOK ││ CHOH CHO │＋Cu(OH)2→│Cu＋2H2O CHOH CHO ││ COONa COONa COOK COOK │CHO COOH │ CHO ││CHOH │Cu＋(CHOH)4 →(CHOH)4 ＋│＋Cu2O↓ CHO ││CHOH │CH2OH CH2OH │ COONa COONa 三、仪器与试剂 1、仪器 (1)容量瓶100 ml、250 ml (2)三角瓶250 ml (3)碱式滴定管50 ml或25 ml (4)烧杯100m1 (5)吸管5 ml、50 ml (6)分析天平 (7)电炉1KW可调 (8)恒温水浴锅 2、试剂 (1) 碱性酒石酸铜溶液A液:称取15、00 g硫酸铜(CuSO4·5H2O)(AR)及0、05g次甲基蓝,
【实验一】生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 一、教学目的 初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 二、教学建议 教材中本实验安排为验证性实验，有条件的学校可以改为探索性实验，安排在讲课之前，或与讲课同步进行。 本实验难度并不大，但内容较多，实验时间较长，因此，必须作周密安排，才能按时完成。实验中应注意以下几点。 1.增设教师演示实验。上课之前，教师应该准备好做演示实验所需的实验材料、用具、仪器和试剂等。同时，逐项完成还原糖、脂肪、蛋白质3类有机物的鉴定实验。在实验课上，将3个实验的正确结果分别展示在讲台上，并作扼要的介绍，以便使学生将自己的实验结果与教师的演示实验作比较。 2.实验中学生应分工合作。在“还原糖的鉴定”实验中，当每组两个学生中的一个制备生物组织样液时，另一个学生可以用酒精灯将水煮开，以便缩短实验的等待时间。在“脂肪的鉴定”实验中，一个学生制作临时装片时，另一个学生则可以调试显微镜。另外，在完成前两个实验时，一个学生洗刷试管、清洗玻片和整理显微镜，另一个学生则可以进行后一个实验的操作。 3.关于鉴定还原糖的实验，在加热试管中的溶液时，应该用试管夹夹住试管上部，并放入盛开水的大烧杯中加热。注意试管底部不要接触烧杯底部，同时试管口不要朝向实验者，以免试管内溶液沸腾时冲出试管，造成烫伤。如果试管内溶液过于沸腾，可以上提试管夹，使试管底部离开大烧杯中的开水。 4.做鉴定还原糖和蛋白质的实验时，在鉴定之前，可以留出一部分样液，以便与鉴定后的样液的颜色变化作对比，这样可以增强说服力。 5.斐林试剂的甲液和乙液混合均匀后方可使用，切勿将甲液和乙液分别加入组织样液中。 三、参考资料 还原糖的鉴定原理生物组织中普遍存在的还原糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。它们的分子内都含有还原性基团（游离醛基或游离酮基），因此叫做还原糖。蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原性糖，不具有还原性。本实验中，用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原性糖。 斐林试剂由质量浓度为0.1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0.05g／mL的硫酸铜溶液配制而成，二者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身则氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： CH2OH—(CHOH)4—CHO＋2Cu(OH)2→CH2OH—(CHOH)4—COOH＋Cu2O↓＋2H2O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色棕色砖红色(沉淀)。 蛋白质的鉴定原理鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲
6.2.2 DE值 6.2.2.1 试剂 a) 次甲基蓝指示液10g/L：称取1.0 g次甲基蓝(C16H18ClN3S·2H2O)，溶解于水并稀释至100ml； b) 葡萄糖标准溶液2g/L：称取于100±2℃烘干至恒重的无 水葡萄糖0.5000g，称准至0.0001g,加水溶解，洗入250 ml容量 瓶中并稀释至刻度，摇匀，备用。 C)费林溶液：按GB603配制。 标定：预滴定时，先吸取费林试剂Ⅱ，再吸取费林试剂Ⅰ各5.0ml于150ml三角瓶中，加水20ml，加入玻璃珠3粒，用50ml 滴定管预先加入24ml葡萄糖标准溶液(b)，摇匀，置于铺有石棉网的电炉上加热，控制瓶中液体在120s±15s内沸腾，并保持微沸，加2滴次甲基蓝指示液(a)，继续以葡萄糖标准溶液滴定， 直至蓝色刚好消失为其终点，整个滴定操作应在3min内完成。正式滴定时，预加入比上述滴定消耗的葡萄糖标准溶液少1ml，作平行试验，记录消耗葡萄糖标准溶液的总体积。取其算术平均值。 RP=m1×v1/250 式中：RP——斐林溶液Ⅱ、Ⅰ各5ml相当于葡萄糖的质量，g； m1——称取基准无水葡萄糖的量，g v1 ——消耗葡萄糖标准溶液的总体积，mL 250——配制葡萄糖标准溶液的总体积，mL。 6.2.2.2 测定 a) 样液的制备 称取一定量的样品，称准至0.0001g（取样量以每100ml样液中含有还原糖量125-200mg为宜），置于50ml小烧杯中，加热水溶解后全部移入250ml容量瓶中，冷却至室温，加水稀释至刻度，摇匀，备用。 b) 预滴定 按标定费林溶液操作，先吸取费林试剂Ⅱ，再吸取费林试剂Ⅰ各5.0ml于150ml三角瓶中，加水20ml，加入玻璃珠3粒，用50ml滴定管预先加入一定量的样液(a)，将锥形瓶置于铺有石棉网的电炉上加热至沸，控制在120s±15s内沸腾，并保持微沸，以样液继续滴定（滴加样液的速度约为每两秒1滴），至溶液蓝色即将消失时，加入2滴次甲基蓝指示液，再继续滴加样液直至蓝色刚好消失为其终点，记录消耗样液的总体积。
还原糖的测定方法（1） 食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。 一、高锰酸钾滴定法 1.原理 样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。 2.适用范围 GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。 3.仪器 （1）滴定管 （2）25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 （3）真空泵 （4）水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。 4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。 4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至5 00ml，用精制石棉过滤。 4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。 4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。 4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。 4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。 4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理： 5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4 ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置3 0min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注：此步骤目的是沉淀蛋白） 5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250 ml容量瓶中。加50 ml水，混匀。以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。 5.1.3 含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃水浴中加热1 h，并时时振摇。（注意：此步骤是使还原糖溶于水中，切忌温度过高，因为淀粉在高温条件下可糊化、水解，影响检测结果。）冷却后加水至刻度，混匀，静置。吸取200 ml上清液于另一250 ml容量瓶中，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。 5.1.4 含有脂肪的食品：称取2～10 g样品，先用乙醚或石油醚淋洗3次，去除醚层。加入50ml水混匀，以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。 5.1.5 汽水等含有二氧化碳的饮料：吸取100 ml样品置于蒸发皿中，在水浴上除去二氧化碳后，移入250 ml容量瓶中，并用水洗涤蒸发皿，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀后，备用。 5.2 样品测定： 吸取50ml处理后的样品溶液，于400ml烧杯中，加入25ml碱性酒石酸铜甲液及25ml乙液，于烧杯上盖一表面皿，加热，控制在4min内沸腾，再准确煮沸2min，乘热用铺好石棉的古氏坩埚或G4垂融坩埚抽滤，并用60℃热水洗涤烧杯及沉淀，至洗液不成碱性为止。（注：还原糖与碱性酒石酸铜试剂的反应一定要在沸腾状态下进行，沸腾时间需严格控制。煮沸的溶液应保持蓝色，如果蓝色消失，说明还原糖含量过高，应将样品溶液稀释后重做。）将古氏坩埚或垂融坩埚放回原400ml烧杯中，加25 ml硫酸铁溶液及25ml水，用玻棒搅拌使氧化亚铜完全溶解，以0.1mol/ L高锰酸钾标准液滴定至微红色为终点。 同时吸取50ml水，加与测样品时相同量的碱性酒石酸铜甲、乙液，硫酸铁溶液及水，按同一方法做试剂空白实验。 6. 计算： X1=（V-V0）×N×71.54 （1） 式中：X1--样品中还原糖质量相当于氧化亚铜的质量，mg；
实验一生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的鉴定 一、实验原理： 该实验中，对三类化合物的鉴定都是根据它们的特定颜色反应进行的。当质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(氢氧化钾溶液亦可)与质量浓度为 0.05g／m1的硫酸铜溶液混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。 Cu(OH)2与葡萄糖等可溶性还原糖共热，能够生成砖红色的Cu2O沉淀。因此，利用该反应，可证明样液中含可溶性还原糖。 苏丹Ⅲ是可以对脂肪染色的试剂，因此，当含有大量油滴的植物细胞用苏丹Ⅲ染色后，在显微镜下可看到细胞内橘黄色的颗粒。 蛋白质分子中含有很多肽键，因而能与双缩脲试剂发生反应生成紫色的络合物。若在组织样液中加入双缩脲试剂后，有紫色反应，则证明其中含有蛋白质。 二、实验目的： 初步掌握鉴定生物组织中可溶性还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 三、实验材料： 1、做可溶性还原糖的鉴定实验，还原糖的含量、生物组织中有色素会影响实验结果及其观察的最重要因素。因此要选用可溶性还原糖含量高、白色或近于白色的植物组织，其中以苹果、梨最好。也可用白色的甘蓝叶、白萝卜替代(不能选西瓜)。 2、做脂肪的鉴定实验时，所用材料一要脂肪含量高，二要有一定大小才能做徒手切片，花生种子符合该实验的要求。将花生种子经过3～4小时的浸泡使其变软，有利于切成薄片；但浸泡时间也不宜过长，否则切片时易碎裂，切不成薄片。 3、做蛋白质的鉴定实验，一般选用蛋白质含量较高的大豆（豆浆）或鸡蛋清。 四、试剂配制： 1、斐林试剂：甲液——质量浓度为0.1 g／ml的氢氧化钠溶液(10克的氢氧化钠加水至100ml即成)；乙液——质量浓度为0.05g／ml的CuSO4溶液
还原糖的测定方法 食物中还原糖的测定方法：高锰酸钾滴定法和直接滴定法。 一、高锰酸钾滴定法 1.原理 样品经除去蛋白质后，其中还原糖在碱性环境下将铜盐还原为氧化亚铜，加硫酸铁后，氧化亚铜被氧化为铜盐，以高锰酸钾溶液滴定氧化作用后生成的亚铁盐，根据高锰酸钾消耗量计算氧化亚同含量，再查表得还原糖量。 2.适用范围 GB5009.7-85，本法适用于所有食品中还原糖的测定以及通过酸水解或酶水解转化成还原糖的非还原性糖类物质的测定。 3.仪器 （1）滴定管 （2） 25ml古氏坩埚或G4垂融坩埚 （3）真空泵 （4）水浴锅 4.试剂 除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。 4.1 6 mol/L盐酸：量取50ml盐酸加水稀释至100 ml。 4.2 甲基红指示剂：称取10mg甲基红，用100ml乙醇溶解。 4.3 5 mol/L氢氧化钠溶液：称取20g氢氧化钠加水溶解并稀释至100ml。 4.4 碱性酒石酸铜甲液：称取34.639g 硫酸铜（CuSO4·5H2O），加适量水溶解，加0.5ml硫酸，再加水稀释至500ml，用精制石棉过滤。 4.5 碱性酒石酸铜乙液：称取173g酒石酸钾钠与50g氢氧化钠，加适量水溶解，并稀释至500ml，用精制石棉过滤，贮存于橡胶塞玻璃瓶中。 4.6 精制石棉：取石棉先用3mol/L盐酸浸泡2～3天，用水洗净，再加2.5mol/L氢氧化钠溶液浸泡2～3天，倾去溶液，再用热碱性酒石酸铜已液浸泡数小时，用水洗净。再以3 mol/L 盐酸浸泡数小时，以水洗至不呈酸性。然后加水振摇，使成微细的浆状软县委，用水浸泡并贮存于玻璃瓶中，即可用做填充古氏坩埚用。 4.7 0.1000mol/L高锰酸钾标准溶液。 4.8 1mol/L氢氧化钠溶液：称取4g 氢氧化钠，加水溶解并稀释至100ml。 4.9 硫酸铁溶液：称取50g硫酸铁，加入200ml水溶解后，慢慢加入100ml硫酸，冷却后加水稀释至1L。 4.10 3mol/L盐酸：量取30ml盐酸，加水稀释至120ml。 5. 操作方法 5.1 样品处理： 5.1.1 乳类、乳制品及含蛋白质的食品：称取约0.5～2 g固体样品（吸取2～10 ml液体样品），置于250 ml容量瓶中，加50 ml水，摇匀。加入10 ml碱性酒石酸铜甲液及4 ml1mol/L氢氧化钠溶液，加水至刻度，混匀。静置30min，用干燥滤纸过滤，弃去初滤液，滤液备用。（注：此步骤目的是沉淀蛋白） 5.1.2 酒精性饮料：吸取100 ml样品，置于蒸发皿中，用1 mol/L氢氧化钠溶液中和至中性，在水浴上蒸发至原体积1/4后（注：如果蒸发时间过长，应注意保持溶液pH为中性），移入250 ml容量瓶中。加50 ml水，混匀。以下按5.1.1自"加10ml碱性酒石酸铜甲液"起依法操作。5.1.3 含多量淀粉的食品：称取2～10 g样品，置于250 ml容量瓶中，加200 ml水，在45℃
植物组织中还原糖含量的测定 (3，5–二硝基水杨酸法) 一、实验目的 通过本实验，掌握还原糖定量测定的基本原理，学习比色定糖法的基本操作。 二、实验原理 3，5–二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原成棕红色物质（即3–氨基–5–硝基水杨酸)， 该物质在540nm波长处有最大吸收。在一定浓度范围内，还原糖的量与棕红色物质 的光吸收值成正比例关系，利用比色法可定量测定样品中的含糖量。 三、实验仪器、试剂和材料 1.仪器：25ml刻度试管、离心管或漏斗、三角瓶、容量瓶、刻度吸管、离心机、分光光度计等。 2.试剂：1mg/ml葡萄糖标准液、3，5–二硝基水杨酸 3.材料：食用面粉 四、实验操作步骤 1、葡萄糖标准曲线的制作 取7支干燥洁净的25ml刻度试管或大试管，编号，按下表准确加样： 将各管摇匀，在沸水浴中加热5min，取出后立即放入盛有冷水的烧杯中冷却至室温， 再以蒸馏水定容至25ml，加塞后颠倒混匀。在540nm波长下，用0号管为参比管调零 ，分别读取各管的吸光度(A540nm)。以吸光度为纵坐标，葡萄糖毫克数为横坐标绘制标准曲线。 2、样品中还原糖的提取 准确称取1.5g食用面粉，放在小锥形瓶中，先以少量蒸馏水调成糊状， 然后加25ml蒸馏水，搅匀，置于50℃恒温水浴中保温20min，然后将锥形瓶中内容物转入一个50mL
容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。充分混合，过滤，滤液即为还原糖待测液。3、样品含糖量的测定 分别取2ml还原糖待测液于两支刻度试管或大试管中， 然后各加3，5–二硝基水杨酸1.5ml。其余操作与制作葡萄糖标准曲线时相同。测定各管吸光度。 五、实验结果处理 以上述还原糖待测液的吸光度平均值，在标准曲线上 查出相应的还原糖毫克数。按下式计算样品中还原糖的百分含量。 提取液总体积 还原糖%= (测定时取用体积/样品质量 (mg))×100 六、实验注意事项： 标准曲线制作与样品含糖量测定应同时进行，一起显色和比色。
(1) 提取液的制备 常用的提取剂有水和乙醇溶液，提取液的制备方法要根据样的性状而定，但应遵循以下原则：①取样量和稀释倍数的确定，要考虑所采用的分析方法的检测围。一般提取经净化和可能的转化后，每毫升含糖量应在0.5~3.5mg之间，提取10克含糖2%的样品可在100毫升容量瓶中进行；而对于含糖较高的食品，可取5~10克样品于250毫升容量瓶中进行提取。 ②含脂肪的食品，如乳酪，巧克力，蛋黄酱及蛋白杏仁糖等，通常需经脱脂后再以水进行提取。一般以石油醚处理一次或几次，必要时可以加热。每次处理后，倾去石油醚层（如分层不好，可以进行离心分离），然后用水提取。 ③含大量淀粉和糊精的食品，如粮谷制品，某些蔬菜，调味品，用水提取会使部分淀粉，糊精溶出，影响测定，同时过滤也困难，为此，宜采用乙醇溶液提取。乙醇溶液的浓度应高到足以使淀粉和糊精沉淀，通常用70~75%的乙醇溶液。若样品含水量较高，混合后的最终浓度应控制在上述围。提取时可加热回流，然后冷却并离心，倾出上清液，如此提取2~3次，合并提取液，蒸发除去乙醇。用乙醇溶液作提取剂时，提取液不用除蛋白质，因为蛋白质不会溶解出来。 ④含酒精和二氧化碳的液体样品，通常蒸发至原体积1/3~1/4，以除去酒精和二氧化碳。但酸性食，在加热前应预先用氢氧化钠调节样品溶液至中性，以防止低聚糖被部分水解。 ●⑤提取固体样品时，为提高提取效果，有时需加热，加热温度一般控制在。40~50℃， 一般不超过80℃，温度过高时右溶性多糖溶出，增加下步澄清工作的负担，用乙醇做提取剂，加热时应安装回流装置。 （2）提取液的澄清 作为澄清剂必需具备以下几点要求 ：①能较完全地除去干扰物质②不吸附或沉淀被测糖分，也不改变被测糖分的理化性质③过剩的澄清剂应不干扰后面的分析操作，易于除掉。 常用三种澄清剂： 中性醋酸铅[Pb（CHCOO)2?3H2O] 乙酸锌和亚铁氰化钾溶液 硫酸铜和氢氧化钠溶液 澄清剂的用量 样液除铅 2食品中还原糖的测定 直接滴定法、 3高锰酸钾法、 4萨氏法、 5碘量法 ● 2.1 直接滴定法 ●(1) 原理 ●(2) 适用围 ●(3) 试剂 ●(4) 测定方法 ●(5) 结果计算