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Rhodol类生物活性小分子荧光探针的构建以及应用研究

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摘要……………………………………………………………………………………………………………………….IAbstract………………………….…………………………………………………….…………………………………III第一章绪论…………………………………………………………………………………11.1研究背景……………………………………………………………………………11.2荧光分子简介………………………………………………………………………11.2.1罗丹明类荧光探针……………………………………………………………1

1.2.2荧光素类荧光探针……………………………………………………………2

1.2.3Rhodol等其它类型氧杂蒽类染料……………………………………………31.3次氯酸根荧光探针的研究进展……………………………………………………41.3.1氧化脱肟基反应………………………………………………………………4

1.3.2氧化对甲氧基苯酚和对甲氧基苯胺反应……………………………………5

1.3.3氧化酰肼反应…………………………………………………………………7

1.3.4氧化不饱和双键反应…………………………………………………………8

1.3.5氧化硫族化合物(硫、硒、碲元素)反应…………………………………9

1.3.6氧化脱氢反应………………………………………………………………..101.4硫化氢荧光探针的研究进展…………………………………………………….111.4.1亲核加成反应………………………………………..,………………………11

1.4.2叠氮基还原反应……………………………………………………………..121.4.3硫化铜沉淀反应……………………………………………………………一131.5本课题的研究内容………………………………………j……………………….14第二章基于新型氧杂蒽类荧光团的超灵敏次氯酸根荧光探针的合成及生物应用研究17

2.1引言………………………………………………………………………………………………………….172.2实验部分………………………………………………………………………….192.2.1实验仪器……………………………………………………………………..192.2.2实验试剂……………………………………………………………………..19

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第四章基于新型RhodoI荧光团的高灵敏硫化氢荧光探针的合成及研究……………454.1引言……………………………………………………………………………….454.2实验部分………………………………………………………………………….464.2.1实验仪器……………………………………………………………………..464.2.2实验试剂……………………………………………………………………..474.2.3探针R0587的合成步骤及表征……………………………………………474.2.4分析实验方法………………………………………………………………..484.3实验结果与分析………………………………………………………………….484.3.1pH的检测效果的影响……………………………………………………….484.3.2动力学研究…………………………………………………………………..494.3.3阳离子选择性研究………………………………………………………….504.3.4荧光配体R0587的Cu2+荧光滴定研究……………………………………514.3.5Job§曲线测定………………………………………………………………..514.3.6配合物R0587.Cu2+对S2-的响应研究………………………………………524.3.7配合物R0587.Cu2+的选择性研究…………………………………………544.3.8反应机理研究………………………………………………………………..554.4本章小结………………………………………………………………………….56全文总结……………………………………………………………………………………..57参考文献……………………………………………………………………………………..59附‘图………………………………………………………………………………………一7l攻读硕士期间取得的成果…………………………………………………………………..81致谢……………………………………………………………………………………………………………………..83

VII

第一章绪论

1.1研究背景第一章绪论弟一早殖比

荧光是广泛存在于自然界中的一种光致发光现象,具体是指处于基态的荧光分子吸收能量(光能、电能、化学能等)后,电子由基态跃迁至激发态,然后再以辐射衰减方式发射出光子并发出荧光的现象【lJ。分子识别可以具体解释为利用化学、物理等方面的技术手段捕捉分子事件发生时所产生的物理信号的过程,它在生命过程中起着极其重要的作用[2,31。荧光探针正是建立在以上两者密切结合的基础上,在荧光母体上引入特定的受体结构,特异性识别目标分子,进而将这种分子识别带来的微环境改变通过相应的荧光信号传导机制转变成易于检测的荧光信号,实时原位检测单个目标分子。荧光探针在对目标分子的分析和检测中具有巨大的优势:(1)灵敏度高,检测范围可以达到纳摩尔级别,甚至能够检测单个分子;(2)荧光强度以及体系颜色的变化可以直观体现目标分子的存在;(3)通过使用成本较低的,简单、可靠的仪器就可以进行测量荧光强度的改变;(4)结合荧光成像技术,荧光探针能用于生物体系中目标分子的实时原位无损伤检测,最终实现活细胞与活体中生物分子及其生理活动过程的监测【4J。因此,荧光探针已经逐渐成为现代生命科学及医疗诊断等领域不可或缺的研究手段,荧光探针的设计、合成及其生物成像应用也已经成为当前学科交叉的前沿研究领域。

1.2荧光分子简介

一些有机小分子具有很好的荧光特性,被广泛的应用于细胞染色、环境分析检测、和临床医疗诊断等方面,逐渐成为生物学、化学、环境科学和医学研究等领域必不可少的工具【5{】。因此,开发具有各种功能的实用型荧光染料分子已成为当前炙手可热的研究课题。目前,有机荧光团经常被分为内源性荧光分子【9】和化学荧光探针两种,而化学荧光探针包括氧杂蕙类及其衍生物‘111、香豆素类荧光染料【lo】、氟硼吡咯类荧光染料【旧、菁与部花菁类荧光染料【13J等,它们在应用研究中各有优缺点,本章主要论述了氧杂蒽类荧光探针分子的研究发展历程。

1.2.1罗丹明类荧光探针

罗丹明类荧光探针是一类碱性咕吨染料,此类分子以氧杂蒽结构为母体,苯环间由

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