试卷1
《植物组织培养技术》试题(一)
一、填空题(每空1分,共20分，)
1、一般培养室控制的温度是__20-30℃____，培养基常选用的pH 值是__5.6-5.8___。
2、在组织培养中，培养基常用___高压蒸汽____法灭菌，不耐热物质用_过滤____法灭菌。
3、非洲菊的叶片__丛生___,故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用__花蕾外植体____法繁殖。
4、1962年，Murashige 和Skoog为培养烟草细胞设计了_MS__培养基，其特点是_无机盐__浓度较高，且为较稳定的__溶液__。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历__脱分化、_分裂_和
＿再分化＿期。
6、6-BA / NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时__诱导芽形成____，
比值低时___诱导根形成____。
7、脱毒苗培养的常用两种方法是_茎尖培养脱毒__和_愈伤组织培养脱毒__。
8、菊花在生产实践中常用_脚芽扦插__法繁殖，在组织培养可用_茎尖、花蕾__作为
外植体进行培养。
.9、草莓属于_____科植物，用微尖培养草莓主要使其＿＿＿＿，从而
提高产量和质量。
二、判断题（每题2分,共10分，）
（×）1、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。
（×）2、菊花属于球根花卉，而兰花属于宿根花卉。？P53 （×）3、诱导愈伤组织重新脱分化出各种不同的器官和组织，这个过程
称为脱分化。
（×）4、MS0培养基是没有激素的培养基。
（×）5、受精卵和体细胞都具有全能性。?（动物体细胞的核）
三、名词解释（每题2分，共10分）
1、细胞全能性答：每个细胞都拥有该物种的所有遗传信息，并在条件合适的情况下能够发挥该物种的各种功能和有发育成为一个正常和完整的独立个体的能力。
2、灭菌
答：采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施，称为灭菌。
3、玻璃化现象
答：当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会出现半透明状和水渍状，这种现象成为玻璃化，玻璃化是试管苗的一种生理失调症状。
4、指示植物
答：指示植物即接种某种病毒后表现特有症状的植物。主要植物种类有：苋色藜、昆诺阿藜、大灰藜、巴西牵牛和千日红等。
5、驯化
答：植物组织经长期培养，会发生一些变化。开始继代培养要加入生长调节物质，其后加入少量或不加入生长调节物质就可以生长，这种现象成为驯化。
四、选择题（每题1分,共10分）
（D）1、下列哪种不是原生质体分离所用的酶
A纤维素酶B半纤维素酶C果胶酶D淀粉酶（）2、下列哪种不是组织培养常用的维生素
A：维生素B2、B：维生素B1、C：维生素B6、D：维生素C
（C）3、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。
A营养细胞发育途径B生殖细胞发育途径
C胚状体发育途径D花粉均等分裂途径
（③）4、下列哪种激素不属于生长素类
①IAA②IBA③6-BA④NAA
（）5、在未成熟胚胎培养中下列哪种不常见的生长方式
A“胚性”生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化
（B）6 、适于花粉培养的最佳时期是＿＿
A双核期B单核期C多核期D无核期
（A）7、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂
A硫酸镁B硫酸亚铁C硫酸锌D硫酸铜（D）8、下列哪种不是在MS培养基起作用的有机物
A氨基酸B肌醇C维生素D琼脂
（C）9、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③
（A）10、和组织培养相似的代名词是
A克隆B有性生殖C孤雌生殖D单性生殖
五、简答题（共50分）
1、6-BA在组织培养中有何作用？(6分)
细胞分裂素类激素是腺嘌呤的衍生物，常见的有6-BA、KT、ZT、2-ip等。其活性强弱为2-ip > ZT > 6-BA > KT。
作用：在植物组织培养中，细胞分裂素的主要作用是抑制顶端优势，促进侧芽的生长。当组织内细胞分裂素／生长素的比值高时，有利于诱导愈伤组织或器官分化出不定芽；促进细胞分裂与扩大，延缓衰老；抑制根的分化。因此，细胞分裂素多用于诱导不定芽的分化和茎、苗的增殖。
由于6-BA具有高效、稳定、廉价和易于使用等特点,因而被广泛采用,并且是组织培养者最喜爱的细胞分裂素。BA的主要作用是促进芽的形成,也可以诱导愈伤组织发生。可用于提高茶叶、烟草的质量及产量；蔬菜、水果的保鲜和无根豆芽的培育，明显提高果品及叶片的品质。
2、述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)
在植物组织培养中经常要用到活性炭。活性炭加入培养基中的目的1）主是利用其吸附能力，减少一些有害物质、生长抑制剂的影响，2)活性炭使培养基变黑，给培养物创造了暗环境，有利于某些植物生根
3）对形态发生和器官形成有良好的效应，但活性炭对物质吸附无选择性，既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5%。
3.什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)
花粉看护培养：是将诱导频率较高的一种植物裂开的花药接种在培养基上作为看护组织，再将另一种植物或同种植物的单花粉粒接种在花药里进行滋养培养，或在花药上放一小片滤纸，再让花粉粒接种在滤纸上培养，或将一种植物的愈伤组织作为看护组织，再接花粉粒培养。由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
4.茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？
感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点(约0.1～1.0mm区域)则几乎不含或含病毒很少。这是因为病毒运转速度慢，加上茎尖分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。
在切取茎尖时越小越好，但太小则不易成活，过大又不能保证完全除去病毒。剥离茎尖时，应尽快接种，茎尖暴露的时间应当越短越好，以防茎尖变干。
5、移栽驯化香石竹时怎样选用基质和搭配基质？(6分)
适合于栽种试管苗的基质要具备透气性、保湿性和保肥的特点，且容易灭菌处理，一般可选用珍珠岩、蛭石、砂子等。为了增加粘着力和一定的肥力可配合草炭土或腐殖土。配制混合基质时需按比例搭配，一般用珍珠岩，蛭石，草炭土或腐殖土比例为1：1：0.5。也可用砂子：草炭土或腐殖土为1：1。此外，要根据不同植物的栽培习性来进行配制，这样才能获得满意的栽培效果。移栽驯化香石竹时就可按上述比例选用和搭配基质进行筛选，选出最适合的基质。
6.接种室有哪些技术要求？(6分)接种室：接种室又称无菌室，是分离和移接菌种的小房间，实际上是扩大的接种箱。在构造和设置上要求如下：
①接种室应分里外两间，里面为接种间，面积5~6m2；外间为缓冲间，约2~3m2。两间门不宜对开，出入口要求装上推拉门，以减少开关门时的空气扰动。高度均为2~2.5m。接种室不宜过大，不易保持无菌状态。②房间里的地板、墙壁、天花板要平整、光滑，以便擦洗消毒。③门窗要紧密，关闭后与外界空气隔绝。④接种室的主要设备及用具有(1)接种箱(2)超净台(3)解剖镜(4)无菌操作用的器具如酒精灯、常用接种工具。
⑤工作台上方和缓冲间天花板上安装能任意升降的紫外线杀菌灯和日光灯。
因接种室面积大，所以紫外线消毒的时间需30min左右。为提高接种成功率，进入接种室要穿戴经过消毒的衣、帽。菌种制作大多采用接种箱操作。
7.用湿热法进行高压灭菌的大致步骤有哪些？(7分)
湿热灭菌法是指用饱和水蒸气、沸水或流通蒸汽进行灭菌的方法，由于蒸汽潜热大，穿透力强，容易使蛋白质变性或凝固，是药物制剂生产过程中最常用的灭菌方法。
培养基用高压灭菌。打开锅盖，加水至水位线。把已装好培养基的三角瓶，连同蒸馏水及接种用具等放入锅筒内，装时不要过分倾斜培养基，以免弄到瓶口上或流出。然后盖上锅盖，对角旋紧螺丝，接通电源加热，当升至0.05MPa时，打开放气阀放气，回“0”，后关闭放气阀。当气压上升到0.10MPa时，保压灭菌20min，到时停止加热。当气压回“0”后打开锅盖，取出培养基，放于平台上冷凝。灭好的培养基不要放置时间太长，最多不能超过1周。
8、怎样用指示植物法鉴定草莓是否含有病毒？(7分)
指示植物法：将一些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物作为指示植物（又称鉴别寄主），利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这种方法条件简单，操作方便，为一种经济而有效的鉴定方法，
鉴别草莓是否含病毒常用的是小叶嫁接法。具体方法是取被鉴定草莓生长成不久的新叶，除去两边小叶，中央小叶带1～1.5厘米长的叶柄，削成锲形做成接穗，指示植物（林丛草莓、深红草莓）则除去中间的小叶，在叶柄一侧用刀切入1～1.5厘米，接入接穗，用毛线包扎好，涂上少量的白色凡士林以防干燥。若带有病毒，嫁接后1～2个月在新展开的二叶片、匍匐茎或老叶上，会出现病斑，若无则说明被鉴定苗是无病毒苗。
试卷2
一、填空题(每空1分,共20分)
1、在分离原生质体酶溶液内，需加入一定渗透稳定剂，其作用是保持原生质体膜的稳定，避免破裂。
2、花药是植物的生殖器官，用其进行组织培养可培养出完整单倍体植物。
3、选用驯化基质主要考虑透气性和保湿性问题
4、组织培养的特点包括培养材料经济、培养条件人为控制，周年生产和生长周期短，繁殖率高三个方面。
5、从单个细胞或外植体形成的愈伤组织，大致要经历启动期（诱导期）、分裂期和分化期。
6、非洲菊的叶片_丛生______故没有直立的茎，在组织培养的继代过程中用
__？___法繁殖。
7、脱毒培养的常用两种方法是热处理脱毒和微茎尖培养脱毒。
8、6-BA /NAA 的高低决定着外植体的发育方向，其比值高时诱导愈伤组织或器官分化出不定芽，比值低时诱导根分化。
9、草莓属于蔷薇科植物，组织培养草莓主要使其____？_____。
10、矮牵牛属于十字花科植物，组织培养中常用花药或花粉作外植体。
二、判断题：
（）1、非洲菊常用茎尖作为外植体接种
（）2、湿热灭菌时灭菌时间与培养容器的关系是：容器越大灭菌时间
应越长。
（）3、愈伤组织就是由伤口处产生的愈合组织
（）4、MS0培养基是没有激素的培养基。
（）5、升汞靠氯气灭菌，次氯酸钙靠汞离子来灭菌。
1、错（花托是非洲菊组织培养中较为合适的外植体材料）
2、错
3、错
4、错
5、错
三、名词解释
1、细胞全能性：植物每一个具有完整细胞核的体细胞，都含有植物体的全部遗传信息，在适当条件下，具有发育成完整植株的潜在能力。
2、灭菌：用理化方法杀死物体表面和孔隙内一切微生物或生物体。
3、White培养基：由White为培养番茄根尖而设计，无机盐量较低，但提高了MgSO4的浓度和增加了硼素，使用广泛，适合生根培养、胚胎培养等的一种培养基。
4、指示植物：一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。
5、驯化：根据试管苗与自然苗、试管苗的生存环境与自然环境的差异，人为创设从试管苗生存环境逐渐向室外环境转化的过渡条件，以确保试管苗的移栽成活率。
四、选择题：
（）1、下列哪种激素示属于生长素类
①IAA②IBA③6-BA④NAA
（）2、通过酶解法提取的原生质体，影响其活性的主要因素有A：pH值、B：温度、C：所用酶的浓度、D：渗透稳定剂（）3、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂
A硫酸镁B硫酸亚铁C硫酸锌D硫酸铜
（）4、在剥离微茎尖或幼胚时，必须应用的仪器是A低倍显微镜B高倍显微镜C解剖镜D放大镜
（）5、常见的组织培养程序包括①取材②接种③灭菌④做培养基
A①②③④B①④③②C①③②④D①④②③
（）6、适于花粉培养的最佳时期是＿＿
A双核期B单核期C多核期D无核期
（）7、在花药培养中下列哪种不是花粉的发育过程。
A营养细胞发育途径B生殖细胞发育途径
C胚状体发育途径D花粉均等分裂途径
（）8、下列哪种在MS培养基不起促进生长作用
A氨基酸B肌醇C维生素D琼脂
（）9、和组织培养相似的代名词是
A克隆B有性生殖C孤雌生殖D单性生殖在未成熟胚胎培养中
（）10、下列哪种是不常见的组织培养生长方式
A胚状生长B早熟萌发C先胚根后胚芽D先形成愈伤组织再分化
1—5 AB(这题答案不确定)ACB 6—10 BCDAB(这题答案也不确定)
五、简答题（共50分）
1、简述活性炭在组织培养中有哪些作用及使用注意事项？(6分)
1.作用：具吸附作用；茎尖初代培养可防褐化；促进新梢增殖（浓度0.1 －0.2%）；促进生根；减轻组培苗玻璃化（浓度0.3%）；有利于胚胎培养。活性炭对形态发生和器官形成有良好的效应，在失去胚状体发生能力的胡萝卜悬浮培养细胞中加入1%~4%活性炭可使胚状体的发生能力得以恢复。在培养基中加入0.3%的活性炭可降低玻璃苗的产生频率，对防止产生玻璃化有良好作用。
2.注意：活性炭吸附性无选择性。既吸附有害物质，也吸附有利物质，因此使用时应慎重考虑，不能过量，一般用量为1%~5%
2、什么是玻璃化现象？解决玻璃化现象的方法主要有哪几点？(6分)
1.玻璃化现象：当植物材料不断地进行离体繁殖时，有些培养物的嫩茎、叶片往往会呈半透明水渍状，这种现象通常称为玻璃化(也称为超水化现象)。发生玻璃化的试管苗称为玻璃化苗
2.解决方法：
(1)适当提高培养基中蔗糖和琼脂的含量水平，降低培养基的水势。
(2)选择合适的激素种类和浓度，适当减少细胞分裂素用量或适当增加生长素比例。
(3)适当延长光照时间或增加自然光照，提高光强。
(4)调整培养温度，培养室要有降温和增温设施，防止温度突然变化。
(5)使用透气性好的封口材料。如牛皮纸、棉塞、滤纸、封口纸等，尽可能降低培养内空气湿度，加强气体交换。
(6)尽量选用玻璃化轻或无玻璃化的植物材料。
(7)适当提高培养基中的无机盐的含量，减少铵态氮而提高硝态氮的用量。
(8)在培养基中适当添加活性炭、间苯三酚、根皮苷、聚乙烯醇(PVA)均可有效控制玻璃化苗的发生。
3、NAA有什么特点？在组织培养中有何作用？(6分)
答：萘乙酸是广谱型植物生长调节剂，能促进细胞分裂与扩大，诱导形成不定根增加坐果，防止落果，改变雌、雄花比率等。可经叶片、树枝的嫩表皮，种子进入到植株内，随营养流输导到全株。
应用：1、能促进各种类型酚类化合物的形成及组织生长，如在茶树组织中
2、促进叶分化，促进生根，过高浓度则抑制根的生长，如菘蓝叶片组织培养
4、什么叫花粉看护培养法？原理是什么？(6分)
答：花粉看护培养法
在装有50ml液体培养基的小培养皿中，?用解剖针撕开花药释放出花粉，形成花粉悬浮液，最后稀释至0.5ml培养基中，含有10个花粉粒的细胞悬浮液。?看护培养时，把花药放在琼脂培养基表面上，然后在每个花药上覆盖一小块圆片滤纸。用移液管吸取1滴已准备好的花粉粒悬浮液，滴在每个小圆片滤纸上。?培养在25℃和一定光照强度下，大约一个月长出细胞群。?由于完整的花药发育过程释放出有利于花粉发育的物质，并通过滤纸供给花粉，促进了花粉的发育。
原理：把花粉从花药中分离出来，?以单个花粉粒作为外植体进行离体培养，即诱导花粉细胞发育成单倍体细胞，最后发育成单倍体植株。在合成培养基上，?改变其发育机能，即不经过受精发生的细胞分裂，?由单个花粉粒发育成完整植物。由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的植株都是单倍体植株，?且不受花药的药隔、药壁、花丝等体细胞的干扰。
5、茎尖培养脱毒的原理是什么？接种时应注意什么？(6分)
原理：感染病毒植株的体内病毒的分布并不均匀，病毒的数量随植株部位及年龄而异，越靠近茎顶端区域的病毒的感染深度越低，生长点（约0.1-1MM区域）则几乎不含或含病毒很少。因为病毒在植物体内通过维管束和胞间连丝传播，而分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分裂和活跃的生长速度。所以顶端分生组织带毒少，病毒含量低。
接种时应注意：无菌操作：接种用的工具要在酒精灯火焰上灼烧。应尽量使外植体切口接触培养基。锥形瓶口应斜向火焰，在酒精灯火焰附近操作。接种员双手不能离开工作台，不能说话、走动和咳嗽等；6、接种室有哪些技术要求？(6分)
接种室宜小：密闭光滑，配置拉动门。
接种室要求干爽。吊装紫外线灭菌灯，最好安装一小型空调，
接种室应设有缓冲间，面积2 m2为宜。
7、愈伤组织形态怎样，什么条件可以诱导其形成？(7分)
答1）愈伤组织形态上是没有分化但能进行活跃分裂的一团细胞，细胞排列疏松无序，多为薄壁细胞。
2）诱导产生愈伤组织，首先使细胞失去原有的状态，恢复分裂能力，变成分生细胞，即经过脱分化的过程。主要通过培养基中添加外源激素的刺激，迫使培养的植物组织细胞改变原有的代谢途径，为启动分裂做准备。
8、简述无菌接种的大致过程？
答（1）在接种前20min，打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯进行灭菌。
（2）将外植体用自来水冲刷干净
（3）接种员洗净双手，上工作台，用乙醇棉球擦拭双手，并擦拭工作台面。
（4）将初步洗涤及切割的材料放入烧杯，带入超净台上，用消毒剂灭菌，再用无菌水冲洗，最后沥去水分，取出放置在灭过菌的纱布上或滤纸上。
（5）材料吸干后，一手拿镊子、一手拿剪刀或解剖刀，对材料进行适当的切割。如叶片切成0.5cm平方的小块；茎切成含有一个节的小段。微茎尖要剥成只含1-2片幼叶的茎尖大小等。在接种过程中要经常灼烧接种器械，防止交叉污染。（6）用灼烧消毒过的器械将切割好的外植体插植或放置到培养基上。
具体操作过程（以试管为例）是：解开包口纸，使试管口靠近酒精灯火焰，灼烧数秒钟。然后用镊子夹取一块切好的外植体送入试管内，轻轻插入培养基上。若是叶片直接附在培养基上，以放1-3块为宜。至于材料放置方法除茎尖、茎段要正放（尖端向上）外，其他尚无统一要求。
（7）接种完后，将管口在火焰上再灼烧数秒种。并用棉塞，塞好后，包上包口纸，包口纸里面也要过火。做好标记，注明接种植物、处理名称和接种日期。
试卷3
《植物组织培养技术》试题(三)
一、填空题(每空1分,共20分，)
1、配制培养时，一般先配制母液，其目的在于_提高工作效率__和__提高试验精度_______。
2、压力单位中1kg/cm2相当于__0.1_______MPa，在0.1 MPa 时锅内温度为
_____121℃____。
3、微量元素母液可配成___200_____倍，配制培养基时移取
___5_____毫升。
4、ＭＳ培养基是______无机盐____浓度较高，为较稳定__满足培养物生存_的溶液。
5、高压灭菌可以对__培养基________及工作服______、玻璃器皿______、橡胶物品______等进行灭菌。
6、凡是暴露在空气中_____的物体，接触自然水源______的物体，其表面都有菌。
7、细胞的全能性是植物的每个细胞都具有该植物的全部__遗传基因_______和
发育成完整植株的能力。
8、愈伤组织除了可植株再生培养外。可进行悬浮培养而__产生次代谢物__________。
9、危害植物的病毒主要是靠_无性繁殖_________的作物
10、分生区域内无维管束，病毒只能通过_附近细胞_________传递。?
11、花序轴应选取具该品种典型特征的、其上生长的饱满充实的__花瓣__。（这题找不到正确答案，求助）
二、选择题（每题1分,共10分）
1、微量元素母液的配制浓度（2）
①10倍②100倍③1mg/ml④
10mg/ml
2、接种工具灭菌常采用（1）
①灼烧②高压③过滤④熏蒸
3、下列哪种不是组织培养常用的维生素A
A：维生素B2B：维生素B1C：维生素B6、D：维生素C 4、下面哪种是MS培养基大量元素所用药剂A
A硫酸镁B硫酸亚铁C硫酸锌D硫酸铜
5、下列哪种不是使甲醛挥发的方式C
A 加高锰酸钾
B 加热
C 加水
6、下面哪种基质具有一定的肥力C
A 珍珠岩B蛭石C 草炭土D河砂
7、愈伤组织是一种＿A＿＿＿组织
A淡黄色且能分裂，B绿色不能分裂，C有一些变形的组织D是一种成熟组织
8、下面哪一个是分化期的明显表现?D
A细胞增加B细胞增大C细胞变形D细胞在结构上变化
9、下列那种不是无性繁殖的器官C
A块茎B枝条C种子D块根
10、下列那种方法脱毒效果较好D
A微茎尖B热处理C愈伤组织D化学药剂
11、菊花的果实是下列哪一种B
A 浆果B瘦果C 核果D蒴果
12、下面哪些不是菊花植物所含有的花B
A舌状花；B漏斗状花；C管状花；D轮状花
三、名词解释（每题2分，共10分）
1、母液
为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。
2、初代培养是指在组培过程中，最初建立的外植体无菌培养阶段，即无菌接种完成后，外植体在适宜的光、温、气等条件下被诱导成无菌短枝(或称茎梢)、不定芽(丛生芽)、胚状体或原球茎的过程。因此，也称为诱导培养。由于外植体的来源复杂，又携带较多杂菌，因此初代培养一般比较困难。
3、松散型愈伤组织（ppt和Word上都找不到）
所谓愈伤组织是指在人工培养基上经诱导后外植体表面上长出来
的一团无序生长的
4、抗血清鉴定
植物病毒是由蛋白质和核酸组成的核蛋白，是一种较好的抗原，给动物注射后会引起抗体产生。抗体是动物受外来抗原的刺激产生的一种免疫球蛋白，主要存在于血清中。有抗体存在的血清叫抗血清。不同病毒引起的抗血清有各自的特异性。病毒作为抗原与其相对应抗体的抗血清之间会发生沉淀反应，即免疫反应，因而抗血清可作为病毒检测的高度专化的试剂。用被鉴定的组培苗的汁液作为抗原，加入已知病毒的抗血清中，观察其反应，可判知被鉴定植物有无病毒和病毒种类，此法称为抗血清鉴定法
5、直接分化（未找到定义）
无胚胎形态，分生中心直接分化器官（未找到定义，只搜到了这句）
四、判断题（每题2分,共10分，）
1、MS0培养基是没有激素的培养基。
2、琼脂只起固化作用，本身并不提供任何营养。
3、熏蒸灭菌适于空气和物体表面的灭菌。
4、生根培养可采用1/2或者１／４MS培养基。
5、500～600目金钢砂起传播病毒的作用。
6、隔虫网的网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，可以防止蚜虫进入。
7、非洲菊可用茎尖接种，但容易污染。
8、矮牵牛花冠不呈喇叭状，而是辐射状。
9、由于花粉已是单倍体细胞，诱发它经愈伤组织或胚状体发育成的
植株都是单倍体植株。
10、微滴培养法将有原生质体的悬浮液以小滴接种在无菌且清洁
干燥的培养皿上进行培养。
F T F T F T F T F F
五、简答题（每题10分，共50分）
1、为什么要配制母液，配制时要注意什么?
答：配制母液不但节省配制时间，而且能够保证配制的准确性和配制时的快速移取，极大提高了工作效率。此外，也便于培养基的低温保藏。
注意：1.配制母液所需药品应采用分析纯或化学纯试剂。
2.配制母液用水为蒸馏水或去离子水，试剂可以通过加热或置于磁力搅拌器上加速溶解。
病毒可扩展到植株非接
另一类是只产生局部病斑，
取被鉴定植物的1~3g幼叶置于研钵0.1 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），研碎后加入少量500~600目金钢砂作为摩擦剂，制成匀浆，用手指(戴上手套)或纱布或棉球蘸取匀浆在指示植物叶片上轻轻涂抹2～3次，以汁液进入叶表皮细胞又不损伤叶片为度，或用喷枪喷射进行接种。5min后用清水清洗叶面多余匀浆及金刚砂。接种后将指示植株置于室内或防虫网室内，在半遮荫、温度15~25℃的条件下培养，2~6d后可视其病症的有无，来判断被鉴定植物是否脱毒。
(2)嫁接法将被鉴定植物的芽或幼叶嫁接在指示植物上，4~6周后根据指示植物的症状来判断是否脱毒。
《植物组织培养技术》试题 (四) 一、填空题(每空1分,共20分，)
植物。只有在较短的日照下才能开花。
在冰箱__ __下保持3～
_诱变期、分裂期、分化期_等三
?____细胞可塑性大__和_容__愈伤组织___，然后再由此产
%__，蔗糖加入浓度大约是__3%____ 。__、__核苷酸__等的组成成分。
__经高温灼烧或一定时间
)，高层大气、岩石内部、健
___0.05_MPa，在0.1MPa时锅内温
二、判断题（每题2分,共10分，）
1、若用花托接种时，将花托切成2~3mm见方的小块。错（3—5mm）
2、花药培养属细胞培养，花粉培养属器官培养。错（花药—器官，花粉—细胞）
3、电子显微镜才能分辨0.5μm大小的病毒颗粒。对
4、愈伤组织诱导原理是抵消阻碍DNA的复制，让其基因打开，能够复制。对
5、驯化时初期保持温室的大湿度，后期可以直接恢复到自然条件下的湿度。错（不同时期湿度要求不同）
6、叶块培养首先是叶块开始增厚肿大，进而形成愈伤组织。错
7、植物克隆即是无性繁殖。错
8、对于二倍体生物来说，体细胞含有二倍的染色体。错（两个染色体组）
9、对外植体材料用酒精消毒目的只是灭菌。错
10、紫外线灭菌物体表面的灭菌对
三、名词解释（每题2分，共10分）第四、五题自己归纳总结的。
1、宿根植物指个体寿命超过两年，可持续生长，多次开花、结实，且地下根系或地下茎形态正常，不发生变态的一类多年生草本花卉。依其落叶性不同，宿根花卉又有常绿宿根花卉和落叶宿根花卉之分。常见的宿根植物有芍药、秋海棠、君子兰等。【宿根植物可以采用分蘖、根插等无性繁殖方法加以培育。由于宿根植物不需经常更换，因此往往成为园林布置中的理想植物】
2、微室培养法即将细胞培养在很少量的培养基中。在培养过程中可以连续进行显微观察，将一个细胞的生长、分裂和形成细胞团的全部过程记录下来。【（1）微室内不能有气泡。（2）最好微室的厚度不要超过20微米，盖玻片的厚度要在0.17～0.18毫米左右。（3）观察时要保持温度和培养时的一致。】
3、指示植物一定区域范围内能指示生长环境或某些环境条件的植物种、属或群落。有普遍指示植物和地方指示植物之分。按指示对象可分为：①土壤指示植物。②气候指示植物。③矿物指示植物。④环境污染指示植物。⑤潜水指示植物。如气候指示植物椰子，它的开花是热带气候的标志。
4、诱导期一般指在一定条件下，诱导外植体细胞脱分化，改变原来的发育途径，逐步逆转其原有的分化状态，转变为具有分生能力的胚性细胞即愈伤组织的时期。
5、诱导培养基用于不同植物和外植体诱导愈伤组织的培养基。一般以MS培养基母液为基础，添加对愈伤组织诱导有影响的外源激素，且在适当湿度条件、温度条件、光照条件等培养条件下诱导愈伤组织的培养基。
四、选择题（每题1分,共10分）1、D 2、B 3、C 4、A 5、A 6、
C 7、
D 8、③9、D 10、B
1、下面哪个不是常见的自然无性繁殖方法
A扦插；B嫁接；C压苗；D播种、
2、选择花药应选择什么时期
A双核期B 单核期C三核期D成熟期
3、下列那种不是无性繁殖的器官A块茎B枝条C种子D块根
4、下面哪一个是分化期的明显表现?
A细胞增加B细胞增大C细胞变形D细胞在结构上变化
5、下面哪个不是胚发育过程所经历的状态：
A受精卵、B胚分裂、C幼胚、D成熟胚。
6、下面哪个不是离体叶培养所包括的范围
A叶原基、A叶柄、C子叶、D叶缘
7、下面哪个不是氮构成的物质
A、蛋白质
B、核酸
C、ATP
D、脂肪
8、下列哪种激素属于细胞分裂类
①IAA②IBA③6-BA④NAA
9 、下列哪种不是涂擦灭菌的对象
A 双手
B 台面C工具D空间
10、下列哪种不是使甲醛挥发的方式
A 加高锰酸钾
B 加热
C 加水
五、简答题（每题10分共50分）
1、怎样用指示法鉴定菊花是否脱毒?
2、用微茎尖组织脱毒的原理是什么？
3、愈伤组织的分化期细胞有什么特点？
4、简答出一般茎段是怎样选材消毒和接种的？
5、细胞分裂素有何作用？
1.菊花病毒病 (1)菊花B病毒chrysanthemum B virus(CVB)菊花B 病毒归属为香石竹潜隐病毒属，患病菊花在菊花叶片上表现为轻型花叶症或不表现症状，在菊花感病品种上，可以形成明显的花叶症状或坏死斑，严重感病的产生褐色枯斑。菊花B病毒由汁液、扦插条、桃蚜和马铃薯传播，(2)番茄不孕病毒tomato aspermy virus （TAV）番茄不孕病毒归属为黄瓜花叶病毒属，患病菊花病时出现花叶、扭曲，植株萎缩，花色不正常。汁液、桃蚜和其他一些蚜虫作非持久性传播。汁液、桃蚜和其他一些蚜虫作非持久性传播。(3)菊花矮化类病chrysanthemum stunt virus(CSVD)菊花矮化类病毒归属为马铃薯纺锤块茎类病毒属。患病菊花子叶变小、畸形、植株矮花、丛生和扭曲。一些品种出现碎色花。汁液传播，嫁接用刀具可以传播，菟丝子也可以传播，少数能种传。(4)脉斑驳病菊花叶片上出现脉纹状黄色斑驳，使叶片失去应有的生机，呈萎靡不振状、花朵小，有时不能开放。其病原为菊花脉斑驳病毒。该病毒主要通过汁液、嫁接以及菊长管蚜等进行传播。
鉴定方法
(1)汁液涂抹法取被鉴定植物的1~3g幼叶置于研钵中，加入10ml水和等量的0.1 mol/L的磷酸缓冲液（pH7.0），研碎后加入少量500~600目金钢砂作为摩擦剂，制成匀浆，用手指(戴上手套)或纱布或棉球蘸取匀浆在指示植物叶片上轻轻涂抹2～3次，以汁液进入叶表皮细胞又不损伤叶片为度，或用喷枪喷射进行接种。5min后用清水清洗叶面多余匀浆及金刚砂。接种后将指示植株置于室内或防虫网室内，在半遮荫、温度15~25℃的条件下培养，2~6d 后可视其病症的有无，来判断被鉴定植物是否脱毒。若汁液带病毒即出现可见病症(表5-3)。
表5-3 几种马铃薯病毒的指示植物及其症状(引自潘瑞炽等，
2000)
汁液涂抹法主要用于草本植物的脱毒鉴定，适用于鉴定通过汁液传播的病毒。利用指示植物法鉴定时，一般以早春为宜，因为早春刚萌发嫩叶或花瓣，接种成功率较高，5月份以后接种较难成功，从而影响检测结果的正确性。
2、原理是植物体内病毒分布不均匀，其生长点（约0.1～1.0mm区域）几乎不含病毒。这是因为分生区域内无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，?其传递速度不如细胞不断分裂和活跃的生长速度。因此，切取茎尖时越小越好，?但太小则不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。
3、生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色，有光泽；也有浅绿色或绿色；老的愈伤组织多变为黄色或者褐色。
4、茎段培养
1.取材与消毒
取生长健壮无病虫的幼嫩枝条或鳞茎盘，如果是木本植物则取当年生嫩枝或一年生枝条,去掉叶片，剪成3～4cm的小段。用肥皂水擦洗茎段，于操作台用75%乙醇灭菌10-60s，再用饱和漂白粉溶液浸泡10-20min，（如果材料表面有绒毛应在消毒剂中滴加1~2
滴吐温-20或吐温-80。注意根据材料的老嫩和蜡质的多少来确定消毒时间。）最后用无菌水冲洗数次，以彻底冲洗掉材料表面残留的药剂，否则植物材料会受残留灭菌剂的危害。
2.接种
采用灭过菌的器械在无菌条件下进行操作。首先消毒好的茎段去除两端被消毒剂杀伤的部位，将茎段切成0.5-1cm的带节的茎段，若是鳞茎则采取带小段鳞片底盘，再切开底盘，使每块底盘上都带有腋芽。然后接种到培养基上。
5.细胞分裂素（CTK）
一、促进细胞分裂
细胞分裂素的主要生理功能就是促进细胞的分裂。生长素、赤霉素和细胞分裂素都有促进细胞分裂的效应，但它们各自所起的作用不同。细胞分裂包括核分裂和胞质分裂两个过程，生长素只促进核的分裂(因促进了DNA的合成)，而与细胞质的分裂无关。而细胞分裂素主要是对细胞质的分裂起作用，所以，细胞分裂素促进细胞分裂的效应只有在生长素存在的前提下才能表
现出来。而赤霉素促进细胞分裂主要是缩短了细胞周期中的G1期(DNA合成准备期)和S期(DNA合成期)的时间，从而加速了细胞的分裂。
二、促进芽的分化
促进芽的分化是细胞分裂素最重要的生理效应之一。1957年斯库格和米勒在进行烟草的组织培养时发现，细胞分裂素(激动素)和生长素的相互作用控制着愈伤组织根、芽的形成。当培养基中［CTK］/［IAA］的比值高时，愈伤组织形成芽；当［CTK］/［IAA］的比值低时，愈伤组织形成根；如二者的浓度相等，则愈伤组织保持生长而不分化；所以，通过调整二者的比值，可诱导愈伤组织形成完整的植株。
三、促进细胞扩大
细胞分裂素可促进一些双子叶植物如菜豆、萝卜的子叶或叶圆片扩大，这种扩大主要是因为促进了细胞的横向增粗。由于生长素只促进细胞的纵向伸长，而赤霉素对子叶的扩大没有显著效应，所以CTK这种对子叶扩大的效应可作为CTK的一种生物测定方法。
四、促进侧芽发育，消除顶端优势
CTK能解除由生长素所引起的顶端优势，促进侧芽生长发育。如豌豆苗第一真叶叶腋内的侧芽，一般处于潜伏状态，但若以激动素溶液滴加于叶腋部分，腋芽则可生长发育。
五、延缓叶片衰老
如在离体叶片上局部涂以激动素，则在叶片其余部位变黄衰老时，涂抹激动素的部位仍保持鲜绿。这不仅说明了激动素有延缓叶片衰老的作用，而且说明了激动素在一般组织中是不易移动的。
细胞分裂素延缓衰老是由于细胞分裂素能够延缓
叶绿素和蛋白质的降解速度，稳定多聚核糖体(蛋白质高速合成的场所)，抑制DNA酶、RNA酶及蛋白酶的活性，保持膜的完整性等。此外，CTK还可调动多种养分向处理部位移动，因此有人认为CTK延缓衰老的另一原因是由于促进了物质的积累，现在有许多资料证明激动素有促进核酸和蛋白质合成的作用。例如细胞分裂素可抑制与衰老有关的一些水解酶(如纤维素酶、果胶酶、核糖核酸酶等)的mRNA的合成，所以，CTK可能在转录水平上起防止衰老的作用。
由于CTK有保绿及延缓衰老等作用，故可用来处理水果和鲜花等以保鲜、保绿，防止落果。如用
400mg·L-1的6-BA水溶液处理柑橘幼果，可显著防止第一次生理脱落，对照的坐果率为21%，而处理的可达91%，且果梗加粗，果实浓绿，果实也比对照显著增大。
六、打破种子休眠
需光种子，如莴苣和烟草等在黑暗中不能萌发，用细胞分裂素则可代替光照打破这类种子的休眠，促进其萌发。
病毒种类指示植物症状
…………号… 座………………线………… 号… 学………………………封级 班…………………………别… 系…密………………名… 姓………植物组织培养在花卉生产上的应用 摘要： 植物栽培技术虽然发展比较晚，但是在经过20世纪后的几十年，经过众多科学家的努力与奋斗，这项技术越来越完善，越来越成熟。尤其近40年以来，植物组培技术已渗透到植物生理学、病理学、遗传学、药学、育种以及生物化学等各个研究领域，为快速繁育优良品种，培育无毒苗木，进行突变筛选培育，药用植物工厂化生产，种质保存和基因库建立等方面开辟了新途径，成为生物学科中的重要研究技术和手段之一。现如今，植物组织培养技术具有保持花卉优良性状、培育脱毒苗木、保存种质资源等优质，根据这些优势，植物栽培技术也被广泛应用于花卉的种苗繁殖与生产之中。 关键字： 植物组织培养；快繁；花卉 1花卉产业介绍 在我国随着人民生活水平和文化素养提高，花卉消费这一时尚已逐步进入家庭，这是一个巨大的消费市场。全国各地兴起许多花卉交易市场，对这种发展趋势又起着推波助澜的作用。组培苗具有无杂菌、优质、均匀、分蘖性强、繁殖率高、批量生产、周年供应、便于运输等优点。 2花卉领域中组织栽培优势
2.1脱毒及快繁 植物生长在自然环境下，十分容易受到病毒的感染。植物感染病毒后，虽然未必死忙，但却会引起产量下降，品质变劣，观赏价值下降。采用无性繁殖的植物，在繁殖过程中病毒可通过营养体进行传递，逐代积累，使病毒病的危害更为严重。 为保持植物体原有的优良晶质和经济价值，达到无病源菌化，其前提就是使无病无菌植物体再生。最有效的方法就是使用植物组织培养法之一的茎尖生长点培养法。这种培养技术最先应用于花卉。宿根性茬卉有康乃馨、菊、大丁草、丝石竹、补血草;球根性花卉有百合、小苍兰、唐葛蒲、茸尾、柱顶红;还有花木类的蔷薇、杜鹃花等都已广泛应用。 作为无病无菌植物体再生的手段，主要有两方面: (1)培养茎尖生长点，获得一顶一芽一株植物体; (2)由茎尖长成愈伤组织再分化形成大量植物体。 由于后者有出现植物体变异的可能性，不应考虑克隆。茎尖生长点就是芽顶端直径为 0.6一 0.1毫米的半球形组织。在这部分，病源体(病毒、病菌)含有的浓度比其他任何部位都低。无病毒植物体和无病无菌植物休再生的优点在于可以避免因病害造成的生产量和品质的损失.，提高经济效益，具体表现在: (1)花卉色泽鲜艳; (2)每一花茎的着花数增加; (3)植株生长的速度和能力增加; (4)栽培管理的劳动量减少;伍)单位面积产量增加等等。这些优点在受到病害的植物体是不存在的，因此很有价值。 2.2大量快速繁殖
植物组织培养报告内部编号：（YUUT-TBBY-MMUT-URRUY-UOOY-DBUYI-0128）
大蒜茎尖的组织培养 谢婷婷江宋青万嫣文吕凌宇一、实验目的 掌握植物组织培养的相关理论知识及操作方法； 通过自行设计并完成实验，提高动手能力和思维能力； 利用植物细胞的全能性，使大蒜茎尖经过脱分化作用形成愈伤组织，再分化为有结构的组织和器官，最终增殖培育出大量品质优良的大蒜试管苗。二、实验原理 植物组织培养是利用植物细胞的全能性原理。植物组织培养是在无菌环境下，将离体的植物器官、组织以至单个细胞，在人工配置的培养基上培养，使其能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。这一过程称为“脱分化”。已经脱分化的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化”。 三、实验材料、试剂和器材 1 供试材料 以购于府前菜场的大蒜为实验材料，实验在丽水学院生态学院组培实验室进行。 2 仪器与设备 超净工作台、培养事、电子天平、烧杯、容量瓶、玻璃棒、量筒、移液
管。 3 试剂 70%酒精、95%酒精、0.1%升汞、蔗糖、琼脂条、6-BA（1.5 mg/L；2.0 mg/L）、2,4-D（2.0 mg/L）、NAA（1.0 mg/L；）、IBA（2.0 mg/L）、10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物。 四、实验步骤 1.培养基的配制及灭菌 诱导培养基：MS+6-BA 2.0 mg/L+2,4-D 2.0 mg/L 出芽培养基：MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L 生根培养基：MS+IBA 2.0 mg/L （1）将MS母液（10倍的大量元素、100倍的微量元素、100倍的铁盐、100倍的有机物）按顺序排列、检查是否失效。 （2）在装有3/4蒸馏水的容器中加入0.7%琼脂和3%蔗糖，加热溶化。（3）依次吸取适量各种母液移到容器中。 （4）用蒸馏水定容到相应体积。 （5）调节pH值(用0.1M的NaOH或HCl调节)至5.8-6.0。 （6）向培养基中加入适量激素。 （7）将配制好的培养基进行分装（20-30ml/瓶）。 （8）用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃下灭菌 20 min 。取出三角烧瓶放在台子上，冷却后备用。接种操作所需的一切用具（烧杯、培养皿、灭菌水等），需同时灭菌。 （9）将灭菌后的培养基于常温下放置一星期，观察有无污染。
论植物组织培养学习心得 摘要：经过大三一个学期，我有幸选修了一门有关丁植物组织培养的课程，作为一个人文院法学学生，我对丁理科，尤其是农学方面了解甚浅。我怀着无比激动和忐忑的心情上了这门课，毕竟对我来说这就像是开启了一个新世界的大门，所有一些知识都对我来说是新鲜的。经过一个学期的学习，我也掌握了一些植物组织培养方面的知识，虽然说并不是太多，但是我觉得这都对我以后的发展和开阔视野都提供了很大的帮助。 关键词：植物培养；植物组织与法学的关系；对自己的帮助 一、植物组织培养的学习内容 1、组织培养 植物组织培养，主要的原因有两个，第一个是为了基因转化做基础，还有一点是为了开发药用植物。 植物组织培养概念乂叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织。器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。植物组织培养概念（狭义） 指用植物各部分组织，如形成层、薄壁组织、叶肉组织、胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 它的作用大致分为三点：①组织培养是研究植物生长和分化规律的重要手段组织培养是在人工控制条件下培养外植体再生器官或植株的技术，可以在不受植株体其它部分干拢下研究被培养部分生长和分化的规律，并可以利用各种培养条件影响它们的发育进程。②组织培养是开展生物工程的基本技术各种基因转移和基因重组技术是组织培养基础上建应的。③组织培养可快速繁殖植物种苗目前组织培养在无性系的快速繁殖、无病蠹种苗培育、新品种的选育、人工种子和种
质保存、药用植物和次生物质的工业化生产等方面的应用已十分广泛。 2,马铃薯的脱蠹 脱蠹种薯是指马铃薯种薯经过一系列技术措施活除薯块体内的病蠹后, 获得 的无病蠹或极少有病蠹侵染的种薯，它具有早熟、产量高、品质好等优点。马铃薯 的产量和质量与种薯密切相关。种薯不行，产量和质量就会大打折扣，病蠹一旦侵 入马铃薯植株和块茎，就会引起马铃薯严重退化，并产生各种病症，导致马铃薯产 量大幅下降。因此，要经过一系列物理、化学、生物等技术活除薯块体内病蠹的种薯。这项技术我国早在6年前就在马铃薯主产区推行，通过这项技术可以实现大田 平■均增产30吩50% 那么到底是怎么脱蠹的呢？首先，应该做的是取材与消蠹。将欲脱蠹的品种块茎催芽，芽长4?5cm时，剪芽并剥去外叶，自来水下冲洗40min, 丁无菌室内用漂白粉溶液消蠹后，无菌水冲洗2?3次。其次第二个就是应该剥离和接种：在无菌室内，丁40倍的解剖镜下,剥取带1个叶原基的茎尖，接种丁M*尖培养基的试管中。试管中的M弘尖培养基包括大量元素、微量元素、有机成分和生长素、细胞分裂素、蔗糖和琼脂,pH值为5.8,经高压灭菌后使用，每试管接种1个茎尖。再次是有一个合适的培养条件，接种的茎尖培养丁25C、1500?3000lx光照条件下培养室内，3个月则长成3?4片叶的小植株。在无菌条件下，进行切段扩繁1 次，取部分苗进行病蠹检测。最后是病蠹检测，病蠹检测是茎尖脱蠹不可缺少的步骤，常用鉴别寄主即指示植物或血活学方法进行检测。经多次检测，及时淘汰血活学阳性反应或在指示植物上有症状的茎尖苗，无任何反应的茎尖苗即脱蠹苗用作繁殖。 3,植物组织培养应用在哪几个方面？第一点是植物组织培养是转基因技术不可或缺的技术。在我们现代科技，转基因技术是现代科技必不可缺的一项技术， 它应用丁现代生活的各个领域。尤其在植物组织培养方面很需要转基因技术。第二点，染色体不同倍性的多倍体植物产生。第三点是杂交离体培养可以克服受精前的 障碍，比如说对丁幼胚的培养，体细胞的融合。第四点是对植物进行的脱蠹。对植 物进行一系列的活除措施来使植物能大幅度的提高产量和植物的等级，让植 物长得更加健康。例如马铃薯，草莓，苹果，橘子都可以进行脱蠹。第五点是节约 地面积，并不受季节的限制。在我们学习过植物组织培养之后，我们通过技术的学习，可以对植物的种植面积进行更好的分配，而且也可以种植一些耐寒植物等都可
植物组织培养技术 植物组织培养是指将植物体的一部分接种在合成培养基上，使其按照预定目标生 长发育成新植株。近年来，花卉组织培养及快繁脱毒技术越来越多地应用于花卉种苗 繁殖生产中。 一、组织培养在花卉产业中的应用 1.快速、大量繁殖优良品种组织培养技术已成为种苗生产的主要技术之一。经组织 培养，可增加繁殖系数，加快繁殖速度，可生产出种性纯、品质好、产花量高的生产 性用苗。在花卉育种过程中，不断的杂交、选种极大地扩展了花卉的花形与颜色，使 得花卉在各方面都越来越接近人们的需求。但在同时，也造成了花卉基因类型的高度 异质化———子代不易有均一表现。而组培苗是在母株器官、组织或细胞的基础上发展起来的，可以保持母株的全部特性（花形、花色、株形、开花习性、抗逆性等）， 因而可以根据需要来选择集多种优良性状于一体的植株加以分生，从而得到大量与母 株一模一样的植株。 2.培育脱毒苗木采用组织培养技术，利用植株的分生组织不易感染病毒的原理，可 以对花卉植株的分生组织进行组织培养来繁殖苗木，防止亲代植株的病害传递给子代，从而达到脱毒的目的。 病毒病对长期应用营养繁殖（分株、扦插等）的观赏植物及其生产的危害相当严重。由于观赏植物多采用营养繁殖，如嫁接、分株、压条等方法繁殖时，病毒（及类 病毒）则通过营养体及刀具、土壤传递给后代，大大加速了病毒病的传播与积累，导 致病毒病的危害越来越严重。据统计，观赏植物的病毒已多达100多种，并且逐年有 新增病毒的报道。观赏植物因病毒病大大影响其观赏价值，表现在康乃馨、菊花、百合、风信子等的鳞茎、球茎与宿根类花卉及兰科植物等严重退化，花少且小，花朵畸形、变色，大大影响观赏价值，严重者甚至导致某些品种的灭绝，严重制约观赏植物 生产的发展，这也是我国切花品种跨不出国门的原因之一。组培快繁技术已应用到蝴蝶兰的栽培中非洲菊也可以通过组培快繁技术进行繁殖 植物组织培养脱毒的原理主要是利用茎尖分生组织不带毒或少带毒。感病植株体内的病毒分布不均匀，其数量随植株部位和年龄而异，越靠近茎尖顶端的区域，病毒 的浓度也越低。分生区域无维管束，病毒只能通过胞间连丝传递，赶不上细胞不断分 裂和活跃的生长速度，因此生长点含有病毒的数量极少，几乎检测不出病毒。因此， 茎尖培养时，切取茎尖的大小对脱毒效果有很大影响，茎尖越小效果越佳，但太小时 不易成活，过大则不能保证完全除去病毒。不同种类的植物和不同种类的病毒在茎尖
植物组织培养的应用及 发展前景 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]
植物组织培养技术应用及进展 摘要：本文综述了植物组织培养理论的发展，重点论述其再脱毒、快繁、育种与有机化合物工业生产以及种质资源的保存等方面的应用，并对应用的前景作简单的展望。 关键词:植物组织培养；应用；进展 中图分类号： 1.理论起源 19世纪30年代，德国家施莱登和德国动物学家创立了细胞学说，根据这一学说，如果给细胞提供和生物体内一样的条件，每个细胞都应该能够独立生活。1902年，德国植物学家哈伯兰特在的理论是植物组织培养的理论基础。1958年，一个振奋人心的消息从传向世界各地，美国植物学家斯等人，用韧皮部的细胞进行培养，终于得到了完整，并且这一植株能够开花结果，证实了哈伯兰特在五十多年前关于细胞全能的预言。 植物组织培养的简单过程如下：剪接植物器官或组织——经过（也叫去分化）形成愈伤组织——再经过形成组织或器官——经过培养发育成一颗完整的植株。 植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、根尖或花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，使之露出原生质体，然后放在适当的人工上进行培养，这些器官或组织就会进行，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，只是一团薄壁细胞，叫做。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。 植物组织培养即植物无菌培养技术，又称离体培养，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株的学科 2.植物组织培养发展简史 植物组织培养是20世纪30年代初期发展起来的一项生物技术。它是在人工配制的培养基上，于无菌状态下培养植物器官、组织、细胞、原生质体等材料的方法。 植物细胞的全能性是植物组织培养的理论基础。20世纪初，曾有人提出能否将植物的薄壁细胞培养成完整植株研究者从胡萝卜根的韧皮部取下一块组织，并在液体培养基中培养，使其分化出了愈伤组织，从愈伤组织又得到胚状体，胚状体转移到固体培养基上继续培养后，获得了完整的胡萝卜试管植株。经过栽培，此植株能够正常生长并开花结果，其种子繁衍出来的后代与正常植株的种子所繁衍出的后代别无二致。根据此实验可以得出以下结论：即不经过有性生殖过程也能将植物的薄壁细胞培养出与母体一样的完整植株。由于植物的每个有核细胞都携带着母体的全部基因，故在一定条件下，它们均能发育成完整植株，这就是所谓的植物细胞全能性。
第一章植物组织培养的基础理论与基本知识 第一节植物组织培养的基本概念及类型 一、教学目标： 通过对植物组织培养的概念和植物组织培养的类型的学习,使同学们对植物组织培养技术有大概的了解和认识,让同学们建立起对该学科学习兴趣。 二、教学效果目标： 1、理解、掌握植物组织培养的概念； 2、掌握植物组织培养的类型。 三、教学重点： 1、理解、掌握植物组织培养的概念； 2、掌握植物组织培养的类型。 四、教学难点： 1、理解、掌握植物组织培养的概念； 2、掌握植物组织培养的类型。 五、教学效果评价： 1、为了激发学生的学习积极性和主动性，不宜采用百分制的方法进行评价，而是采用A、B、C、D四个评价等级进行评价。 2、评价标准： A、能用自己的语言对植物组织培养的概念和类型等几个基本概念进行正确的描述，能熟练的判断植物组织培养的类型。能按时按量甚至超量完成
作业，并且无误。 B、能基本用自己的语言植物组织培养的概念和类型等几个基本概念进行正确的描述，能基本会判断植物组织培养的类型。能按时按量完成作业，基本无误。 C、在老师的指引下或参照课本基本用自己的语言对植物组织培养的概念和类型等几个基本概念进行正确的描述，能基本判断植物组织培养的类型。能按时按量完成作业，但错误较多。 D、基本不认真听课，课堂很随意，基本不听老师教导，对所学内容基本不懂，很少作作业。 六、采用理论教学。 七、教学时数： 2学时 教学过程 一、新课导入：约（10分钟） 以同学们感兴趣的动物克隆技术人手，向同学讲述克隆技术基础技术，然后转到植物组织培养技术上来。 二、新课：（约80分钟） 板书： 第一章植物组织培养的基础理论与基本知识
国内外植物组织培养技术的差距 姓名：*** 学号：********* 指导教师：*** 专业班级：生物工程2009级1班 完成日期：2012-06-05
摘要 植物组织培养技术是农业生物技术中最早实现产业化并取得显著经济效益和社会效益的领域，在理论研究和生产实践中具有广泛的应用价值。通过对国内外植物组培的发展概况以及技术差距的分析，指出了我国植物组织培养技术的发展现状、目前存在的主要问题和应采取的措施，并对植物组织培养技术的发展作了展望。 关键词：组织培养概况差距展望 Abstract The plant tissue culture technology is agricultural biotechnology as the first realized industrialization and get a remarkable economic and social benefits of the field, in the theoretical research and production practice has wide application value. Through the domestic and international plant tissue and the development situation of the technology gap analysis, and pointed out the plant tissue culture technology's development present situation, the existing problems and the measures should be taken, and the development of plant tissue culture technology are discussed. Key words：Tissue culture situation gap looking
组培的应用工厂化育苗 摘要：组织培养快速繁殖由于种苗在培养瓶中生长，立体摆放，所需要的空间小，节省土地。生产可按一定的程序严格执行,生产过程可以微型化、精密化，能最大限度发挥人力、物力和财力,取得很高的生产效率。 关键词：组织培养工厂化育苗 植物的组织培养是根据植物细胞具有全能性这个理论，近几十年来发展起来的一项无性繁殖的新技术。植物的组织培养又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。 植物组织培养的大致过程是：在无菌条件下，将植物器官或组织（如芽、茎尖、花药）的一部分切下来，用纤维素酶与果胶酶处理用以去掉细胞壁，然后放在适当的人工培养基上进行培养，这些器官或组织就会进行细胞分裂，形成新的组织。不过这种组织没有发生分化，叫做愈伤组织。在适合的光照、温度和一定的营养物质与激素等条件下，愈伤组织便开始分化，产生出植物的各种器官和组织，进而发育成一棵完整的植株。 植物组织培养是在一定的场所和环境下，人为提供一定的温度、光照、湿度、营养、激素等条件，极利于高度集约化和高密度工厂化生产，也利于自动化控制生产。它是未来农业工厂化育苗的发展方向。它与盆栽、田间栽培等相比省去了中耕除草、浇水施肥、防治病虫等一系列繁杂劳动，可以大大节省人力、物力。 组织培养的特点：1占用空间小，不受地区、季节限制2培养脱毒作物 3培养周期短 4可用组培中的愈伤组织制取特殊的生化制品 5可短时间大量繁殖用于拯救濒危植物6可诱导之分化成需要的器官7解决有些植物产种子少或无的难题，8不存在变异，可保持原母本的一切遗传特征9投资少，经济效益高而组培在时间生活中应用最广泛的是工厂化生产。 随着我国市场经济的进一步发展和人民生活水平的不断提高，对各类苗木的数量、质量和纯度的要求也越来越高，一般常规的苗木繁殖技术已难以保证大规模迅速发展的需求。于是应用现代高新技术——植物组织培养快速繁育优良品种
植物组织培养的基本步骤 成熟细胞离体——（脱分化）——分生细胞——（分裂）——愈伤组织——（再分化）——形态建成————完整植株。 培养基的主要成分 【水分】 【无机盐】1.大量元素：N，P，K，Ca，Mg，S（由相关的无机盐提供） 2.微量元素：Fe，B，Cu，Mn，Mn，Zn，Co 【有机营养成分】1.糖类 2.维生素 3.氨基酸 4.肌醇 5.天然有机物【植物生长调节剂】1.生长素 2.细胞分裂素 3.其他生长调节剂 【凝固剂】琼脂 【其他物质】1.活性炭 2.抗生素 3.抗氧化物质 4.硝酸银 培养基和组织培养用具的灭菌方式 【培养基，无菌水】高压蒸汽灭菌，0.105MPa灭菌15~30分钟 【移栽基质】曝晒，甲醛熏蒸或高压蒸汽灭菌0.14MMPa灭菌1~2h 【接种室，缓冲室】紫外线灯照射30min，或气雾消毒剂 【超净工作台】紫外线灯30min，之后打开风机过滤除菌 【外植体】不同的化学消毒剂浸泡消毒 【接种工具】70%乙醇浸泡或擦拭，之后用火焰灼烧灭菌 【培养室】3%来苏尔喷雾，或甲醛，气雾消毒熏蒸 【皮肤】先用肥皂洗手，接种前用70%乙醇擦拭 【瓶口，管口】70%乙醇擦拭，用火焰封口
【培养瓶表面】70%乙醇擦拭 【台面，桌面】70%乙醇擦拭或喷雾消毒 植物外植体的灭菌方式 【茎尖，茎段，叶片】1. 用70%乙醇浸泡30秒，再用无菌水冲洗1次。 2.用2%次氯酸钠浸泡15min或0.1%升汞浸泡5~10min。 3.若材料有绒毛，最好在消毒液中加入几滴吐温。 4.消毒时要不断震荡，使植物材料与消毒剂充分接触。 5.最后用无菌水冲洗3~5次。 【果实】1.用乙醇迅速漂洗一下，再用无菌水冲。 2.用2%次氯酸钠浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【种子】用10%次氯酸钠浸泡20~30min，或0.1%升汞消毒5~10min，然后再用无菌水冲洗3~5次。 【花蕾】1.用70%乙醇浸泡10~15秒，无菌水冲洗一次。 2.在漂白粉中浸泡10min，用无菌水冲洗2~3次。 【根及地下部器官】用0.1%升汞浸泡5~10min 或用次氯酸钠浸泡10~15min，再用无菌水冲洗3~5次。 【消毒后的外植体应及时按照无菌操作技术接种在适宜的培养基上】
1.（2014广东卷）（16分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下： 在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图17所示，请回答下列问题： ⑴选用新生营养芽为外植体的原因是，诱导外植体形成PLBs的过程称。 ⑵与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在，，。 ⑶脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基后按比例加入。②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs（2分）；细胞的脱分化（2分）（2）生长起始快（2分），快速生长时间较长（2分）；PLBs产量较高（2分）；（3）①灭菌、冷却（2分）；②75（2分）；③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大（3分） 【解析】（1）新生营养芽分裂能力强，全能性容易表达；根据题干可知，PLBs类似愈伤组织，外植体形成愈伤组织的过程是脱分化。（2）据图分析，光照下PLBs的重量高于黑暗条件下，原因可能是光照有利于细胞增殖、叶绿体的形成和进行光合作用制造有机物。（3）①由于ABA受热易分解，所以各种液体培养基灭菌后，冷却，再加入不同浓度的ABA ②根据题干可知，实验50天完成，每10天取样，需要取样5次，4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复，因此每次取样需要记录15个样品中的数据，共需要测定样品数75 ③适量的ABA可提高生物碱产量，当样品的平均值最大时，所对应的ABA浓度和时间为最适。 2.（2014江苏卷）（9分）为了获得植物次生代谢产物，先用植物外植体获得愈伤组织，然后在液体培养基中悬浮培养。请回答下列问题： （1）外植体经诱导后形成愈伤组织的过程称为。 （2）在愈伤组织悬浮培养时，细胞干重、蔗糖浓度和pH的变化如右图所示。细胞干重在12d后下降的原因有；培养液中蔗糖的作用是、。 （3）多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。二倍体愈伤组织细胞经处理，会产生染色体加倍的细胞。为检测愈伤组织细胞染色体数目，压片前常采用纤维素酶和酶解离愈伤组织。若愈伤组织细胞（2n）经诱导处理后，观察到染色体数为8n的细胞，合理的解释是、。 （4）为了更好地获得次生代谢产物，生产中采用植物细胞的固定化技术，其原理与酵母细胞固定化类似。下列说法正确的有（填序号）。 ①选取旺盛生长的愈伤组织细胞包埋②必须在光照条件下培养
课题1 菊花的组织培养 ★课题目标 （一）知识与技能 1、熟悉植物组织培养的基本过程 2、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化 3、通过联系农业生产实际，培养学生活学活用，理论联系实际的能力[来源:学|科|网] （二）过程与方法 归纳MS培养基的配制方法，并设计表格比较微生物培养基与MS培养基的配方的异同。 （三）情感、态度与价值观 通过阅读植物组织培养技术的发展史，课下查阅植物组织培养技术在生产实践中应用的资料，关注学生科学态度的教育，拓展学生视野，感受科学技术在生产实践中的重要价值。★课题重点 植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★课题难点 植物组织培养过程中使用的无菌技术 ★教学方法 启发式教学 ★教学工具 多媒体课件 ★教学过程 （一）引入新课 上节课我们探讨学习了如何从土壤中分离出尿素分解菌和纤维素分解微生物及其计数方法。这节课我们来学习研究植物的组织培养技术。
（二）进行新课 1．基础知识 知识回顾：联系“植物细胞工程”，回答下列问题： 1．1具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。但在生物体的生长发育过程中并不表现出来，这是因为在特定的时间和空间条件下，通过基因的选择性表达，构成不同组织和器官。 1．2植物组织培养技术的应用有：实现优良品种的快速繁殖；培育脱毒作物；制作人工种子；培育作物新品种以及细胞产物的工厂化生产等。 活动1：阅读“植物组织培养的基本过程”，讨论并完成以下问题： 1．3细胞分化：个体发育中细胞在形态、结构和生理功能上出现稳定性差异的过程。 〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？ 使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。 1．4愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。 〖思考2〗填表比较根尖分生组织和愈伤组织的异同： 1．5植物组织培养的过程可简单表示为： 活动2：阅读“影响植物组织培养的条件”，讨论并完成以下问题： 1．6材料：植物的种类、材料的年龄和保存时间的长短等都会影响实验结果。菊花组织培养一般选择未开化植物的茎上部新萌生的侧枝作材料。
植物组织培养的应用 一、增加遗传变异性，改良作物 单倍体育种：通过花药培养，从小孢子获得单倍体植株，染色体加倍后获得正常二倍体植株，这是一条育种的新途径。单倍体育种可以缩短育种年限，节约人力物力，较快地获得优良品种，目前已有四十多种植物获得了单倍体植株。我国在水稻、小麦、烟草、柏树、橡胶、辣椒等植物的单倍体育种的工作上，处于领先地位。 胚培养、子房培养、胚珠培养：为了克服远缘杂交的不亲和性，可采用胚、子房、胚珠培养和试管受精等手段。最早成功的例子是两个栽培种亚麻的杂交胚发生败育，利有杂种胚培养克服了一些障碍，得到种子。现在在棉花、黄麻上也获得成功。从玉米的离体子房培养，经体外受粉可以得到种子。 突变体的选择和应用：由于植物的单细胞培养成功，可以用这个方法诱发单细胞进行突变，通过筛选所需要的突变体，然后使细胞分化成植株，再通过有性世代使遗传性稳定下来，这是从细胞水平来改造植物的一种途径。除细胞外，愈伤组织、花药、原生质体都可诱发突变。70年代以来，世界各国在这方面已有不少成功的例子，如：已选育出抗花叶病毒的甘蔗无性系，抗1-2%NaCl的野生烟草细胞株，抗除草剂的白三叶草细胞株等。 体细胞杂七杂八交和遗传工程：自1960年以来用酶法获得大量有活力的植物原生质体，现已从四十多种植物的原生质体产生出再生植株。通过异种原生质体的相互融合（即体细胞杂交）为植物育种工作开阔新的途径。原生质体融合的工作自1972年Carlson在两个烟草种间成功以来，现在除种内与种间能获得杂种植株外，在属间甚至不同科的植物间亦做了许多工作，如烟草与大豆、烟草与天仙子、矮牵牛与小花矮牵牛、番茄与矮牵牛等都得到了杂种植株。 此外，通过原生质体融合，并以选择胞质链霉素抗性做手段以转移烟草的雄性不育性状，或通过原生质体融合转移胞质的抗林可霉素因子都得到成功。 原生质体没有胞壁，容易接受外来的引入物质。由于致癌农杆菌可以使多种植物形成肿瘤，以及已发现它所带的Ti质粒可以有效的插入植物细胞的基因组中，所以一些研究者也设想能否以Ti质粒作为载体，与固氮基因重组后转入植物的细胞中，如能实现将固氮基因转到非豆科植物如水稻、小麦、玉米等作物中，则遗传工程在创新植物类型上的前景，无疑是非常广阔的。 二、繁殖植物 组织培养中从一个单细胞，一块愈伤组织，一个芽（或其它器官）都可以获得无性系。无性系就是用植物体细胞繁殖所获得的后代。用植物组织培养技术繁殖的无性系可概括为五个类型： 原球茎：细胞或组织培养经原球茎途径分化成植株。大部分兰花属于这一类型，即兰花的各个部分的离体组织都能诱导形成原球茎，再经培养分化形成植株。 器官发生型：即从细胞或愈伤组织培养通过不定芽形成植株，如烟草愈伤组织培养分化所得的植株。 胚状体发生型：从细胞或愈伤组织通过胚状体途径，即由球形期、鱼雷期、心形期、子
第2章植物组织培养技术 第二节植物组织培养概述 一、授课章节 第二节植物组织培养概述。 二、学时安排 2学时。 三、教学目标 1．掌握植物组织培养的含义。 2．了解植物组织培养的类型划分。 3．理解植物组织培养的应用原理。 4．掌握植物组织培养的特点和应用。 四、教学重点、难点分析 重点： 植物组织培养的含义、特点和应用。 难点： 植物组织培养的应用原理。 五、教具 电化教学设备，植物组织培养试管苗。 六、教学方法 讲授法，多媒体课件。 七、教学过程 Ⅰ.导入 前面我们学习了有关植物育种的一些知识，今天，请看我给同学们看一样东西(教师拿出试管苗)，问同学们这是什么呢？这就是我们要学的植物组织培养。 II.新课
一、植物组织培养的含义 植物组织培养是指在无菌条件下，将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体培养在人工培养基上，给予适宜的培养条件，使其长成完整植株的过程。由于培养物脱离母株在试管内培养，故又称离体培养、试管培养。 二、植物组织培养的类型 植物组织培养由于分类依据不同可划分为不同的类型。 三、植物组织培养的应用原理 （一）植物细胞全能性 植物细胞全能性，是指植物体上每个具有完整细胞核的植物细胞，都具有该植物体的全部遗传信息和产生完整植株的能力。植物的体细胞一旦脱离所在器官或组织的束缚成为离体状态时，在一定的营养、激素和外界条件作用下，就可能表现出全能性，而生长发育成为完整的植株。
（二）细胞的分化和形态建成 （三）植物的再生功能 四、植物组织培养的特点 （一）研究材料来源单一，无性系遗传信息相同 （二）试验经济，管理方便，工作效率高 （三）培养条件人为控制，可周年连续进行试验或生产 （四）生长快，周期短，繁殖率高 五、植物组织培养的应用 （一）优良品种的快速繁殖 （二）脱毒及脱毒苗的再繁育 （三）植物新品种的培育 （四）种质资源的保存和交换 （五）有用次生代谢产物的生产 III.作业 1.简述植物组织培养的概念和培养类型。 2.植物组织培养技术有哪些特点？ 3.植物组织培养在生产上有哪些方面的应用？ 4.通过学习，你对植物组织培养技术是怎样理解的？ 第二节植物组织培养厂房的设计与构建一、授课章节 第二节植物组织培养厂房的设计与构建。 二、学时安排 2学时。
植物组织培养的一些注意事项 一、常用培养基主要特性 1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。 2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。 ①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐 酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。 ③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 ( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。 3 、中等无机盐含量的培养基 ①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。适于花药培养。 ②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比 H 培养基高10 倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种: ①改良怀特培养基(White 1963 ) ②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966) ③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot 1934) ⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/ 2 克诺普( Knop ) 液稍多, 微量元
第一章 1、植物组织培养：是指在离体条件下，利用人工培养基对植物的器官、组织、细胞、原 生质体等进行培养，使其长成完整植株 2、外植体：在植物组织培养中，由活体（in vivo）植物上提取下来的、接种在培养基上的 无菌细胞、组织、器官等均称为外植体。 3、愈伤组织：指在人工培养基上由外植体长出来的一团无序生长的薄壁细胞。 4、应用 一、农业上的应用 1. 种苗快速繁殖(rapid propagation) 2.无病毒苗(virus free)的培养 3.在育种上的应用(breeding) （1）倍性育种，缩短育种年限，杂种优势明显； （2）克服远缘杂交的不亲合性和不孕性（胚培养）； （3）保存种质 （4）创造变异 二、在遗传学、分子生物学、细胞生物学、组织学、胚胎学、基因工程、生物工程等方面的应用。用于基因工程技术创造植物新种质。用于植物生长发育理论研究，包括生理学、病理学、胚胎学和细胞与分子生物学等。 三、利用组织培养材料作为植物生物反应器 第二章 1、细胞全能性（Totipotency）：指任何具有完整的细胞核的植物细胞都拥有形成一个完整植 株所必须的全部遗传信息和发育成完整植株的能力。 2、细胞分化（cell differentiation）：指导致细胞形成不同结构，引起功能或潜在的发育方式 改变的过程。 3、脱分化（Dedifferentiation）：指离体条件下生长的细胞、组织或器官逐渐失去原来的结构 和功能而恢复分生状态，形成无组织结构细胞团或愈伤组织 的过程。 4、再分化（Redifferentiation）：指脱分化的细胞重新恢复分化能力，形成具有特定结构和功 能的细胞、组织、器官甚至植株的过程。 5、植物组织培养中常遇到的问题以及解决措施 一、污染及防治： 1、真菌污染后，如果已形成孢子，则必须经高压灭菌后扔掉。但若是细菌污染，只 要及时发现，将材料上部未感菌的部分剪下转接，材料仍可使用。 2、用抗生素等杀菌药剂的处理，会影响植物材料正常生长。 二、褐变及防止 （1）选择合适的外植体 （2）合适的培养条件 （3）使用抗氧化剂 （4）连续转移 三、玻璃化问题及其防止
植物组织培养 作者 摘要 关键字 植物组织培养既是一种基础性研究，又是一种极具普及意义的生物技术。它具有 耗费母株材料少，繁殖速度快，繁殖率较高，用嫩茎组织培养法可以得到无病毒植株， 减轻病毒对花卉的影响，以及定向培养植物优良品种等方面的优势。植物组织培养的 基础是植物细胞的全能性理论，它从诞生到现在经历了4个时期，即理论准备和实验 开创期;研究发展时期;生产应用时期;“克隆”生物时期(肖杰，2004)。如今植 物组织培养技术已经成为农林业中极具普及意义的生物技术之一，而芍药组织培养目 前处于理论准备和实验开创期。但是对芍药进行组织培养，应用植物激素控制分化过 程及分化数量可达到繁殖目的，并节省人力物力，是芍药批量生产的最佳方法(胡映 泉，2003)。 近年来中外学者对芍药的组织培养进行了大量的研究工作，主要集中在以种子为 外植体的组织培养方面(BrukhinvB，一994;KimYS，1995年;BuchheimJAT，1994)，也利用花药(LeeB，1992)培养诱导形成单倍体植株或胚状体。众所周知，常规方法育种周期长、见效慢，极大地限制了新品种的研制与开发。 而利用植物组织培养中的花粉、花药进行单倍体育种结合温室育苗技术，可以大大缩 短育种年限，实现早期选择、提高选择效率。利用体细胞来培育新品种已成为当今育 种领域的趋势之一，对于无法结实的多倍体花卉来说，采用组织培养技术则能为其提 供一条具体的繁殖途径。对于那些产生芽变的种类来说，由于变异部位太小，难以进 行传统的扦插或嫁接繁殖，无法使这些新出现的宝贵种质保留下来;如果将发生变异 的细胞进行分离，并培养成苗则可以选育出许多新的品种，这无疑为花卉新品种的培 育提供了广阔的空间。 影响外植体污染的因素较多，除要求操作人员严格按照无菌操作程序操作外，还 与外植体的种类、取材季节、预处理方法、消毒方法、杀菌剂的使用等因素有关。在 植物组织培养中，造成污染的病原主要是霉菌、细菌和酵母菌三大类，霉菌和酵母菌 引起的污染很容易观察到，初代培养就能在外植体周围或培养基表面形成明显的菌 落，而细菌污染则存在一定的潜伏期。如果外植体培养3一5d内未表现污染症状，而 以后不断出现污染现象，表明污染主要由内生菌引起(Leifert，1990;柴向华，周俊 辉，2003)。抗生素抑菌在动物细胞培养中早己被广泛应用，在植物组织培养中尚处于开始阶 段。近年随着植物基因工程的开展，转基因过程中的除菌和抑菌越来越离不开抗菌素 所以使用抗菌素逐渐成为植物组织培养中的灭菌技术之一。在抗菌素的使用上， Falkiner(1990年)提出3个条件，即必须弄清楚要抑制菌的种类，使用的抗生素是否 对培养的植物组织有不良影响，还要确立抗生素的使用浓度、处理时间的长短。因 没有一种抗生素能对所有引起污染的微生物都有效，所以抗生素也不能完全代替灭菌 技术，最好加在培养基中，作为一种辅助防止污染的措施。 植物组织培养中外植体种类的选择以污染少、易启动为原则。带芽的外植体，如 茎尖、侧芽、带芽茎段，培养成功率高，变异率小，容易保持材料的优良特性。其中， 顶芽芽体饱满，营养丰富，侧芽较瘦弱，所以顶芽启动快，分化率高;继代培养中由 于顶端优势的作用，腋芽的生长受到抑制，生长势弱于带芽茎段。因此，用顶芽作为 外植体时，培养基中常加入细胞分裂素打破顶端优势作用，促进腋芽大量萌发，提高 繁殖系数(裘文达，1986)。据分析，外植体取材的季节以材料积累了较丰富的营养
植物组织培养知识点总结第一、二章 1植物组织培养概念、分类、应用、创始人、奠基人 2实验室各分室名称、主要设备、主要功能 3无菌操作技术流程 4表面消毒剂种类及作用效果 5培养基成分及各成分的作用 6植物组织培养三大难题 7那些成分要抽滤灭菌 第三、四章 8植物细胞全能性原理 9名词解释：愈伤组织、脱分化、体细胞胚、人工种子 10体细胞胚的特点 11愈伤组织形成发育的三个时期，两种类型，良好愈伤组织的特点 12植物离体微繁，一般过程，各阶段注意事项 13褐变，影响褐变的因素，克服褐变的措施；玻璃化，无糖培养技术第五、六、七章 14植物脱毒方法、原理 15脱毒率包括两种方面含义 16人工诱导单倍体的三种途径 17花药培养得到的再生植株倍性如何，为什么 18花药培养的应用，花药培养力，一般培养过程。 19离体幼胚培养，胚发育有几种类型各有何特点 20离体授粉离体受精 21简述胚乳培养的意义
第八、九章 22原生质体概念，两种分离方法，纯化方法。 23酶法分离植物原生质体的酶液组成及作用 24简述植物原生质体培养基的特点 25原生质体融合，融合的主要方法 26体细胞杂交过程 27融合产物的种类及特点 28植物细胞无性系变异，特点 29提高植物细胞无性系变异频率的方法 30细胞突变体的类型及对应的筛选方法 植物组织培养知识点总结 第一、二章 1植物组织培养概念、分类、应用、创始人、奠基人 概念：是一种将植物的器官、组织或细胞在适当的培养基上进行无菌培养，并重新再生细胞或植株的技术。 分类：（1）按外植体来源和特性分：植株培养胚胎培养器官培养组织或愈伤组织培养细胞或原生质体培养；（2）按培养方法分：固体培养液体培养固体液体两相培养 应用：（1）克服远缘杂交中杂种不育性，种子无活力或配发育不全的植物获得后代，一年多代育种（2）培育三倍体（3）单倍体育种（4）提高突变频率，筛选变异类型（5）经过细胞融合得到体细胞杂种（6）种质资源保存 2实验室各分室名称、主要设备、主要功能 化学实验室（准备室）