第一节植物快速繁殖技术
课前预习（10分钟）凡事预则立，不预则废。
一、课题目标
1、说明植物组织培养的基本原理。
2、列举影响植物组织培养的各种因素。
3、尝试利用植物组织培养完成植物的快速繁殖。
德育目标：对学生进行生动的科学、技术、社会的教育，并激发学生动手实践的兴趣。
难点：植物组织培养过程中的无菌技术。
二、自主学习
一．背景知识
植物组织培养———植物快速繁殖技术
1．原理：植物细胞的全能性
概念：高度分化的植物细胞仍然有的潜能。
基础：生物体的每一个细胞都含有本物种的，都有发育成完整个体的潜能。
实现条件：、、和其他适宜条件。
2．过程：
3．应用：快速繁殖，培育无病毒植物，人工种子，生产药物等。
二．实践案例——月季快速繁殖
1．材料用具：略。2．活动程序：
（1）配置培养基，并灭菌。
（2）外植体消毒（3）接种（无菌、酒精灯火焰旁）（4）培养（注意温度、光照、更换培养基）
（5）驯化试管苗（6）移栽
3．结果分析
（1）统计移栽试管苗的成活率（2）各过程经历多长时间，采取了怎样的无菌操作
三．探究活动
1．选取一种植物进行快速繁殖（选取植物）
2．探究组织培养过程中植物激素的作用（设计对照实验自变量是）
课堂互动学习情境导入
1958年，英国科学家Steward 等用胡萝卜根的愈伤组织细胞进行悬浮培养，成功诱导出胚状体并分化为完整的小植株，不但使细胞全能性理论得到证实，而且为组织培养的技术程序奠定了基础。
学导结合
活动1：阅读“背景知识”，结合必修所学内容，讨论并完成以下问题：
1．细胞分化：个体发育中细胞在、和上出现的过程。
〖思考1〗细胞分化是一种持久性的变化，它有什么生理意义？
2．愈伤组织是通过形成的，其细胞排列，高度呈状态的细胞。
〖思考2〗填表比较根尖分生组织和愈伤组织的异同：
3.植物组织培养的过程可简单表示为：
4.影响植物组织培养的条件：
①激素：在培养基中需要添加和等植物激素，其浓度、使用的先后顺序、用量的比例等都影响结果。
②营养：常用的培养基是MS培养基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、Cl、Ni、I、Co，有机物有甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等。除此之外，在外植体不同发育阶段还需要配制、、。
③环境条件：、、等外界环境条件。
探究深化
实践案例：月季的快速繁殖
1、配制培养基
①配制各种母液：将各种成分按配方比例配制成的浓缩液。使用时根据母液的浓缩倍数，计算用量，并加稀释。
②配制培养基：应加入的物质有琼脂、、大量元素、微量元素、有机物和植物激素的母液，并用定容到1000毫升。
③灭菌：采取的灭菌方法是。
2、外植体消毒：
［思考4］在此消毒过程中，是不是强度越大越好，为什么？
3、接种：
①前期准备：用70％的酒精消毒工作台，点燃酒精灯。注意所有接种工作都必须在酒精灯旁进行，器械使用前后都要用灭菌。
②接种操作：接种过程中插入外植体时朝上，每个锥形瓶接种7～8个外植体。
〖思考5〗外植体接种与细菌接种相似之处是。
4、培养：培养过程应该放在无菌箱中进行，并定期进行消毒，保持适宜的和。
［思考6］外植体在培养过程中可能会被污染，你认为造成污染的原因有哪些？
5、驯化：将试管苗培养瓶的瓶口敞开一半，放置在℃的遮阴环境中，适应 d.
6、移栽
总结反思巩固提高
1.在一个多细胞生物体内，存在形态、结构和生理功能上具有稳定性差异的细胞，是因为
A.细胞失去全能性B．不同的细胞，基因是不同的
C.不同细胞中基因选择性表达的结果D．变异一般是不定向的
2.细胞具有全能性的原因是
A.生物体细胞具有使后代细胞形成完整个体的潜能
B.生物体的每一个细胞都具有全能性
C.生物体的每一个细胞都含有个体发育的全部基因
D.生物体的每一个细胞都是由受精卵发育来的
3．植物组织培养是指……………（）
A．离体的植物器官或细胞培育成愈伤组织B．愈伤组织培育成植株
C．离体细胞培育成植株D．愈伤组织形成高度液泡化的组织
4．植物组织培养过程中的脱分化是指……………（）
A．植物体的分生组织通过细胞分裂产生新细胞B．未成熟的种子经过处理培育出幼苗的过程
C．植物的器官、组织或细胞通过离体培养产生愈伤组织的过程
D．取植物的枝芽培育成一株新植物的过程
5．愈伤组织的细胞最突出的特征是（）
A．细胞大，排列整齐、分裂能力强B．细胞高度液泡化，处于无定形状态
C．代谢活跃，形状呈正方形D．分裂能力强，易形成根和芽
6．可以成为植物组织培养条件的是………（）
①CO2②有机物③生长素④细胞分裂素⑤水⑥矿质元素
A．①③⑤⑥B．②③⑤⑥C．②③④⑤⑥D．①②⑤⑥7．用植物组织培养技术不能培育或生产出……………（）
A．杂交水稻B．无病毒植物C．人工种子D．食品添加剂
8．某名贵花卉用种子繁殖会发生性状分离，为了防止性状分离并快速繁殖，可以利用该植物体的一部分器官或组织进行离体培养，发育出完整的植株。进行离体培养时不应采用该植株的……（）
A．茎尖B．子房壁C．叶片D．花粉粒
9．愈伤组织细胞在一种包含有必需物质的培养基中培养了几个小时，其中一种化合物具有放射性（氘标记）。当这些细胞被固定后进行显微镜检测。利用放射自显影技术发现放射性集中于细胞核、线粒体和叶绿体。可以有理由地步定被标记的化合物是……………（）A．一种氨基酸B．尿嘧啶核苷C．胸腺嘧啶脱氧核苷酸D．葡萄糖10．植物组培对材料部位的选择原则是……………（）
A．生理年龄老的B．生理年龄幼的C．生长年龄老的D．生长年龄幼的11．下列关于植物组织培养中灭菌操作的叙述，错误的是( )
A．外植体可以用酒精灭菌
B．镊子等器械需酒精灭菌
C．操作前手需酒精消毒
D．培养基需高压蒸汽灭菌
12．在制备MS固体培养基过程中有误的是( )
A．在使用提前配制的母液时,应在量取各种母液之前轻轻摇动盛放的瓶子，如发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰，重新配制
B．配制母液时，无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍
C．配制培养基时，琼脂要及早加热熔化
D．MS培养基的pH要求不太严格．可控制在5～7之间
13．关于接种时应注意的事项全部正确的为( )
①接种室要消毒②无菌操作③接种时可以谈话④外植体如茎段、茎尖可随机放人培养基⑤接种时要防止交叉污染⑥接种完立刻盖好瓶口
A．①②③④ B．①②③④⑤⑥
C．③④⑤⑥ D．①②⑤⑥
14．下列关于消毒效果的论述，正确的是( )
A．70％酒精对外植体消毒效果好，但用时长，去除易
B．O．1％氯化汞对外植体消毒效果最好，用时较短，去除也易
C．10％过氧化氢对外植体消毒效果最好，但易挥发、用时长，去除最易
D．抗菌素对外植体消毒效果较好，消毒时间较长，去除难易程度适中
15．某同学在进行组织培养过程中，发现只分裂而不分化出芽和根，可能原因是( )
A．未见阳光
B．培养时间不到
C．培养基营养过多
D．细胞分裂素和生长素配比不对
16．月季组织培养选材部位最佳的是( )
A．幼嫩的花瓣 B．枝条基部的芽
C．枝条中部的芽 D．幼嫩的叶
17．下面是植物组织培养的简略有示。请据此回答：
脱分化再分化
①
②③④
（1）①表示，它能被培养成为④的根本原因是。
（2）②表示，它与①相比分化程度，全能性。
（3）若想制作人工种子，应该选用（填编号）。
（4）若①是花药，则④是，继续对其使用处理可获得正常植株，该过程称为。
（5）若①是胡萝卜根尖细胞，则培养成的④的叶片的颜色是，这说明根尖细胞。
（6）若利用此项技术制造治疗烫伤．割伤的药物—紫草素，培养将进行到（填编号）。18．植物组织培养要用植物激素诱导，下表是烟草组织培养的实验结果，请据此回答：
（1）6-BA属于类植物激素，其作用是。IBA属于，其作用是。
（2）实验1和3表明植物激素使烟草组织，2和4表明植物激素使愈伤组织。
（3）整个实验表明植物组织培养是。
（4）设计实验步骤验证上述表格所示的结果。
19．紫草素是紫草细胞的代谢产物，可作为生产治疗烫伤药物的原料。用组织培养技术可以在生物反应器中通过培养紫草细胞产生紫草素。图3—1—1记录了生物反应器中紫草细胞产量，紫草素产量随培养时间发生的变化。
(1)在生产前，需先加入紫草细胞作为反应器中的“种子”。这些“种子”是应用组织培养技术，将紫草叶肉细胞经过__________________而获得的。这项技术的理论基础是__________________。
(2)从图中可以看出：反应器中紫草细胞的生长呈现__________________规律；影响紫草素产量的因素有__________________、__________________。
(3)在培养过程中，要不断通入无菌空气并进行搅拌的目的是__________________ 和__________________。
第一节植物快速繁殖技术参考答案
学导结合
1、形态、结构和生理功能稳定性
思考1：使多细胞生物体中细胞结构和功能趋向专门化，有利于提高各种生理功能的效率。
2愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。
3、脱分化再分化
4、生长素和细胞分裂素
脱分化培养基，生芽培养基，生根培养基酸碱度温度光照
探究深化
1、蒸馏水蔗糖蒸馏水高压蒸汽灭菌
2、思考4：不是。对外植体进行表面消毒时，既要考虑到药剂的消毒效果，又要考虑到植物的耐受力。
3、火焰灼烧形态学上端操作步骤相同，而且都要求无菌操作
4、温度光照
思考6：外植体消毒不彻底；培养基灭菌不彻底；接种中被杂菌污染；锥形瓶密封性差等。5、20--25℃ 7—14d 巩固提高
一．选择题
1.C
2.C3．C 4．C 5．B 6．C 7．A 8．D 9．C 10．B
11．B解析：植物组织培养需要严格的无菌操作，包括：培养基需要用高压蒸汽灭菌；操作前手需用酒精消毒．夕卜植体应浸泡在酒精中杀菌；整个操作过程在酒精灯火焰旁进行，同时对镊子等器械灼烧灭菌。
12．D解析：在使用提前配制的母液时，应在量取各种母液之前轻轻摇动盛放的瓶子，如发现瓶中有沉淀、悬浮物或被微生物污染，应立即淘汰，重新配制。MS培养基的pH直接影响到对离子的吸收，过酸或过碱都对植物材料生长影响很大，所以pH应严格控制在5．8左右。13．D解析：整个接种过程必须在无菌条件下进行，不能谈话，防止呼吸产生污染，因此操作过程应禁止谈话，并戴口罩；接种的外植体放入培养基时注意形态学下端插入，而且分布均匀，不能随机放入，以保证必要的营养面积和光照条件。
14．D解析：70％酒精对外植体消毒效果好，外植体放入其中摇动2～3次，持续6～7 s，去除易；O．1％氯化汞有剧毒，消毒效果最好，时间较短，但消毒后难以去除残余的汞，10％过氧化氢消毒效果好，且易分解成无毒化合物，用时5～15 min；抗菌素对外植体消毒较好，用时30～60 min，去除难易程度适中。
15．D解析：愈伤组织产生根或芽，取决于生长素和细胞分裂素的浓度比值，当细胞分裂素／生长素的比值低时，诱导根的分化；两者比值处于中间水平，愈伤组织只生长不分化；两者比值高时，诱导芽的形成。
16．C解析：月季芽在茎段上的位置对嫩茎的增殖、生根及移栽成活率有影响，接近枝条顶端的芽和紧挨着枝条基部的芽发育最慢，而枝条中部的芽发育比较快；幼嫩花瓣和幼嫩的叶具有分裂能力，但不如芽的强。
17．（1）离体的植物器官或组织；植物细胞具有全能性（2）愈伤组织；低；高（3）③（4）单倍体植株；秋水仙素；纯合体；单倍体育种（5）绿色；含有表达叶绿体的基因（6）②18：（1）细胞分裂素；促进细胞分裂；生长素；促进生长，促进生根（2）脱分化（去分化）；再分化（3）多种激素共同作用的结果（4）略
19．（1）脱分化（或脱分化形成愈伤组织）；细胞的全能性
（2）S型增长；细胞数量；细胞所处的生长期
（3）保证氧气供应充足使细胞与培养液充分接触
扦插是植物繁殖的一种重要方法，利用植物的一部分茎、根或叶，扦插在排水良好的壤土、砂土或基质中，长出不定根和不定芽，从而长成完整、独立的新植株，具有生长快、开花早、繁殖数量大及保持植物优良性状等特点。 应用扦插繁殖在植物中主要有枝插和根插两类。枝插又根据插枝的性质不同，分为硬枝扦插（休眠期扦插）和软枝扦插（嫩枝扦插、生长期扦插）。 一、扦插生根的原理 植物的细胞具有全能性，每个细胞都具有相同的遗传物质。在适宜的环境条件下，具有潜在的形成相同植株的能力。同时，植物体具有再生机能，即当植物体的某一部分受伤或被切除而使植物整体受到破坏时，能表现出弥补损伤和恢复协调的功能。 在插枝扦插后的生根过程中，枝插与根插的生根原理是不同的。其中枝插生根是在枝条内的形成层和维管束鞘组织，形成根原始体，从而发育生长出不定根，并形成根系；而根插是在根的皮层薄壁细胞组织中生长不定芽，而后发育成茎叶。 插枝扦插后，通常是在插枝的叶痕以下剪口断面处，先产生愈合组织，而后形成生长点。在适宜的温度和湿度条件下，插枝基部发生大量不定根，地上部萌芽生长，长成新的植株。 按插枝生根的部位来分，有三种生根类型：一是愈合组织生根类型，包括大部分树种；二是皮部生根类型，三是两者兼有类型。 二、扦插成活的条件
扦插后插枝能否生根成活，决定于插枝本身的内在条件和外界环境条件。 1．插枝的内在条件 植物不同种或同一种植物的不同种，扦插成活率不同， 如扦插容易生根的有: 侧柏、杉木、大叶黄杨、夹竹桃、杨、柳、红杉、悬铃木、珊瑚树、榕树、石榴、橡皮树、巴西铁、富贵竹、菊花、大丽花、万寿菊、矮牵牛、香石竹及秋海棠等； 扦插较易生根的有: 山茶、桂花、雪松、火棘、南天竹、龙柏、茉莉、丁香、棕竹、槭及木兰等；扦插难生根的有松、榆树、山毛榉、桃、蜡梅、栎类、香樟、海棠、鹅掌楸、鸡冠花、矢东菊、虞美人、百合、美人蕉及大部分单子叶植物花卉。 植物的不同生育特性，对扦插成活的难易有影响，如灌木比乔木容易生根，匍匐类型比直立类型容易生根；地理分布在高温、多湿地区的树种比低温、干旱地区的树种容易生根；幼龄树上的插枝比老龄树上的扦枝容易生根；根茎上的萌蘗枝比树冠上部的一年生枝容易生根；枝条生长健壮、组织充实、叶芽饱满比营养物质不足的细小枝容易生根等。 此外，扦插用插枝的粗度、长度、生长期、扦插时的留叶量、插枝内部的抑制物质等，对生根与成活率都有一定的影响。 2．外界环境条件
扦插技术 扦插是营养体繁殖的主要方法之一，有繁殖速度快、方法简单、操作容易等优点，扦插多用于双子叶植物，有些单子叶植物也可以进行扦插繁殖，如百合科天冬属植物、鸭跖草种植物等。 一、扦插繁殖的机理 扦插繁殖用的插条、叶片、地下茎和根段能发芽，长叶、生根是由于植物的生活器官具有再生能力，而且构成植物器官的生活细胞都具有发育成一株完整植株的潜能。当植物的部分器官脱离母体时，只要条件适合，其再生能力和细胞的全能性就会发生作用，分化出新的根、茎，叶，而且总是在植物形态学下端生根。但不同植物的离体器官的生根部位不同，有些植物从下部切口的形成层先产生愈伤组织，再由愈伤组织形成根，如桂花、银杏、红豆杉等；有些植物直接由离体器官插入基质中的皮部先产生根，插条下部的切口形成的愈伤组织也形成不定根，这类植物扦插较易成活，如杨属植物、柳属植物、连翘类、迎春类植物等。并不是所有植物的营养器官都能形成新的植株，不同植物的再生能力不同，有些很容易生根，如栀子花、夹竹桃、小叶黄杨、大叶黄杨和金钟花等；有些很难生根，如玉兰类、泡桐和松属植物等。除此之外，母树的年龄，枝条的生长部位、生长状况等都影响插条生根。再者植物能否生根与环境条件、扦插季节、管理等都有很大关系，条件适合，插条易于生根；条件不适合，插条不能生根，甚至死亡。 二、扦插类型及基质的选择 扦插基质对插条生根影响很大，根据扦插基质不同可分为壤插(基质扦插)、水插和喷雾扦插(气插)。壤插又称基质扦插，是应用最广的扦插方式，其扦插基质主要有珍珠岩、泥炭、蛭石、沙等材料，有些园艺企业使用炉渣。有的直接扦插于土壤中,对有些植物是适宜的。在国外，泥炭、珍珠岩和黄沙是主要的扦插基质，根据不同植物对基质湿度和酸碱度的要求按不同比例配制扦插基质，酸性植物如杜鹃、山茶等植物用泥炭的比例大，珍珠岩的比例适当减少，否则珍珠岩的比例可大一些。泥炭可以保持水份，同时，泥炭中含有大量的腐质酸，可促进植物生根。要选择半腐质化、较粗糙的泥炭再配上粗沙和大颗粒的珍珠岩为好，配制的基质有利于通气和排水，也有利于根系的形成。水插即用水作为扦插基质，将插条基部约1-2厘米插入水中。水必须保持清洁，且需经常更换，水插产生的不定根要脆，当它长到2-3厘米时就可移栽或上盆，常用于水插的植物有栀子、桃叶珊瑚等。喷露扦插(气插)也称无机质扦插。适用于皮部生根类型的植物，方法是本质化或半木质化的枝条固定十插条目定架上，定时向插条喷雾。能加速生根和提高生根率．但在高温高湿条件下易于感病发霉.
第二章植物离体繁殖 植物离体繁殖: 利用组织培养技术对外植体进行离体培养，短期内获得遗传性一致的大量再生植株。也叫快繁或微繁。 和传统方法突出特点： 1、繁殖效率高:增值率高，生长速度快，可周年生产，在一个短暂的时间，由单一个体开始，能产生出大量的遗传组成相同的植株。（如苹果矮化砧木茎尖8个月可繁殖6万株，石刁柏一个腋芽一年可繁殖７万株） 2、培养条件可控性强：人为提供培养基及小气候，便于对环境进行控制，省去田间栽培繁杂劳动。 3、便于管理、占地面积小：30m2可存放1万多培养瓶，约10万多苗木。 4、利于种质资源的保存及交换。 快速繁殖的应用 （1）短期内获得大量形状优良、整齐一致的种苗群体。加快引进新种、新育良种的繁殖，促进优良品种推广和应用。（2）大量繁育原来常规方法不能进行无性繁殖、难繁殖和繁殖速度慢的一些植物，尤其对一些珍、稀、濒危的植物的繁殖有更重要的意义。 （3）作为培育新品种的有效手段，繁殖和保存育种材料。如远缘杂种、多倍体、突变体。 （4）通过茎尖培养等技术脱毒，扩增脱毒苗，达到提纯复壮良种的目的。 一、植物快繁的器官形成方式 由于植物种类不同，器官再生及快速繁殖的方式也不同。 1、短枝发生型：外植体为带叶单芽茎段，培养为完整植株。 特点：一次成苗，培养过程简单，容易移栽成活，遗传性状稳定。例如：葡萄、红薯等试管苗繁殖。 2、器官型：外植体带有顶芽或腋芽。培养后形成丛生芽，转入生根培养基，诱导生根成苗，扩大繁殖。 特点：由单芽到丛芽，繁殖速度快，遗传性状稳定，多数花卉、苗木的快繁属于此类。 3、器官发生型：直接由外植体上或从愈伤组织产生不定芽，经过脱分化与再分化成苗。 特点：繁殖速度快，由愈伤组织再生植株，遗传不稳定。烟草、水稻、小麦、番茄等。 4、胚胎发生型：外植体脱分化产生愈伤组织或细胞团，再分化为胚状体产生小植株（球形期、心形期、鱼雷期、子叶期）特点：发生数量大，速度快，结构完整，人工种子繁殖，遗传变异。 5、原球茎发生型：兰科。 茎尖或腋芽外植体通过形成原球茎，而发育为完整植株。 二、植物快繁的程序和关键技术 离体无性繁殖的程序包括：无菌母株的制备，继代芽的增殖，芽苗生根培养，再生植株的锻炼和移栽。 1、无菌母株的制备 初代培养：在无菌条件下，制备无菌繁殖的材料称为无菌母株，或繁殖母株。 选取遗传性状优良、稳定，生长健壮、无病虫害植株上的外植体，经适当有效灭菌处理后，接种在培养基上，诱导其产生芽（腑芽或不定芽）和愈伤组织。 注意:培养基激素配比，取材的年龄、大小和生理状态。 初代培养的启动生长方式:腋芽被刺激后生长;茎段、叶片、其它器官伤口处产生不定芽；外植体切口产生愈伤组织。此阶段一般需要4-6周。 ↗愈伤组织 2、继代芽的增殖 无菌母株再次切割继代培养，芽分化增殖成丛芽，加快繁殖速度。 在快速繁殖过程中，随培养时间和继代次数增加，芽分化和生长速率降低，称为驯化现象，与内源激素和恒定培养条件有关，故可以调节激素配比或变温处理，提高繁殖速度。 3、芽苗生根培养 诱导无根苗生根的方法有两种：试管内生根和试管外生根。 1）试管内生根：将无菌小枝条转入生根培养基中进行培养。 提高生根率的措施： ①降低无机盐和有机物含量（如1/2MS或1/4MS培养基）
花卉苗木扦插繁殖技术 一、扦插繁殖的的概念、意义 扦插繁殖是用植物营养器官的一部分（如枝、芽、根、叶等）作为插穗、插在土、沙或其它基质中，使其生根发芽、成为完整独立的新植株。这是繁殖观赏灌木、多年生缩根草本、落叶及常绿阔叶及针叶树种的一种最重要的方法。花卉在温室生产中繁殖时也广泛地采用扦插法。 扦插繁殖可以经济利用繁殖材料，可进行大量育苗和多季育苗（如菊花、香石竹1平方米可扦插繁育400—600苗），既经济又简单，不存在嫁接繁殖中砧木影响接穗的的问题；可以保持母体的优良性状：而且成苗迅速根系比实生苗理想；开始结实时间比实生苗早：对不结实的或结实稀少的名贵园林树种是一种切实可行的繁殖方法。如紫薇的播种苗花色混杂，只能靠扦插繁殖保持母本优良性状。如某些月季、葡萄品种、重瓣黄刺玫、不结实或结实很少或不产生有效种子。亦只能用扦插繁殖。扦插繁殖目前不仅在生产上广泛应用，而且在实践中不断积累了许多经验，采用了许多先进技术，解决了许多繁殖困难树种的繁殖问题，对加速花卉苗木的育苗工作起了很大的作用。 二、扦插生根的机理 在扦插育苗时，插条基部切断面上的受伤细胞由于原生质的分解而产生一种创伤激素，并且被内层未受伤的细胞所吸收，使健全细胞的细胞膜木栓化，而将死伤细胞同健全细胞隔离开来。在切口处的创伤激
素和插穗上部由叶、芽转移来的生长激素以及其他生根诱导物质的作用下，切口内层的健全细胞与切断面相平行的分裂，于是形成形成愈伤组织。这种愈伤组织在形成层和筛管部位特别发达，对切口可起一定保护作用。由于植物激素的不断增加，更促进了愈伤组织的细胞分裂，愈伤组织薄壁细胞逐渐开始分化，形成愈伤组织木质部。它先同插穗中水分和养分的通道输导组织连通，再同愈伤组织木质部的外侧相连，而发展成为根原始体，最后长出根来。 三、扦插生根类型 1．潜伏不定根原基生根型离体枝条在脱离母体之前，即已经形成了不定根原基，只要给予适当条件，根原基即可萌发为不定根。如沙地柏、杨树类等。从生理解剖上讲，凡是具有根原基的植物，绝大多数为易生根类型。 2．皮部生根型也是一种易生根类型。有的在1—2周内不定根就可以从皮孔内生出，这些不定根可以暂时维持离体枝，叶的水分代谢，保证离体的存活。待基部不定根形成后，上部的皮部根可逐渐衰退，消失，如一些品种的月季、玫瑰、扶芳藤、地锦等。3．侧芽、潜伏芽基部分生组织生根型这种生根型几乎普遍存在于各种植物中。芽的基部分生组织非常活跃，再生能力强，容易形成根原始体。生产上调整插穗时，下剪口都要选择在侧芽的基部（节间下部）就是缘自于此。 4．愈伤组织生根型离体扦插后，为了生存下来，首先要保护好伤口，形成愈伤组织。在适宜的生根条件下进一步分化，形成根
第5章植物的组织培养技术第1节植物快速繁殖技术学业达标测评 一、选择题 1．下列关于植物组织培养中的消毒灭菌操作，错误的是( ) A．外植体可以用酒精消毒 B．镊子等器械需酒精灭菌 C．操作前手需进行酒精消毒 D．培养基需高压蒸汽灭菌 【解析】植物组织培养需严格的无菌操作，包括：培养基需用高压蒸汽锅灭菌；操作前手需进行酒精消毒，外植体应浸泡在酒精中消毒；整个操作过程在酒精灯火焰旁进行，同时对镊子等器械灼烧灭菌。 【答案】 B 2．在离体的植物器官或组织片段脱分化形成愈伤组织的过程中，下列哪项条件是不需要的( ) A．消毒灭菌 B．适宜的温度 C．充足的光照 D．适宜的养料和激素 【解析】在植物组织培养过程中，对外植体及操作装置都要消毒灭菌，在培养过程中，外植体从培养基上获取养料，激素可诱导细胞分化，适宜的温度促进新陈代谢，但在脱分化过程中是不需要光照的，产生了幼苗后才需要光进行光合作用。 【答案】 C 3．植物细胞表现出全能性的必要条件是( ) A．给予适宜的营养和外界条件 B．导入其他植物细胞的基因 C．脱离母体后，给予适宜的营养和外界条件 D．将成熟筛管的细胞核移植到去核卵细胞中 【解析】在生物体内，细胞没有表现出全能性，而是分化成为不同的组织、器官，这是基因在特定的时间和空间条件下选择性表达的结果。当植物细胞脱离母体后，在一定的营养物质、激素和其他外界条件的作用下，就可以表现出全能性。 【答案】 C 4．进行植物组织培养的基本流程是( ) A．配制培养基→取外植体消毒→接种→培养→移栽→栽培
B．配制培养基→取外植体消毒→接种→栽培→移栽→培养 C．配制培养基→取外植体消毒→接种→移栽→培养→栽培 D．取外植体消毒→配制培养基→接种→培养→ 移栽→ 栽培 【解析】进行植物组织培养的一般流程是：配制培养基并灭菌，再取植物幼嫩的部分(外植体)并消毒，然后接种到培养基上进行培养，形成愈伤组织后移栽长出试管苗，最后栽种在土壤中。 【答案】 A 5．我国西北地区由于过度且无序的开发使甘草的数量锐减，以至于在某些地方几乎绝迹。为了快速恢复甘草数量，有关部门除了限制采摘之外，还进行了微型繁殖，下列有关叙述不正确的是( ) A．甘草的微型繁殖技术的原理为植物细胞的全能性 B．微型繁殖技术可以在短时间内大量繁殖植物 C．微型繁殖只能繁殖植株微小的草本植物 D．微型繁殖需要在无毒无菌条件下进行 【解析】微型繁殖技术利用了植物组织培养的方法，可以在短时间内大量繁殖植物，其原理是植物细胞的全能性，条件需要无菌无毒。但是它并不是只繁殖微小的草本植物。 【答案】 C 6．关于接种时应注意的事项全部正确的为( ) ①接种室要消毒 ②无菌操作 ③接种时可以谈话 ④外植体如茎段、茎尖可随机放入培养基 ⑤接种时要防止交叉污染 ⑥接种完立刻盖好瓶口 A．①②③④B．①②③④⑤⑥ C．③④⑤⑥ D．①②⑤⑥ 【解析】整个接种过程必须在无菌条件下进行，不能谈话，防止呼吸产生的污染，并戴口罩；接种的外植体放入培养基时注意从形态学下端插入，并且分布均匀，不能随机放入，以保证必要的营养面积和光照条件。 【答案】 D 7．某兴趣小组拟用组织培养技术繁殖一种名贵花卉，其技术路线为“取材→消毒→愈伤组织培养→出芽→生根→移栽”。下列有关叙述，错误的是( ) A．消毒的原则是既能杀死材料表面的微生物，又能减少消毒剂对培养材料的伤害 B．在愈伤组织培养过程中，加入促进细胞融合的诱导剂，可获得染色体加倍的细胞
园艺植物离体培养学的基本含义 1.植物离体培养 指通过无菌操作，使植物体的各类结构材料（外植体）接种于人工配制的培养基上，在人 工控制的环境条件下，进行离体培养的一套技术与方法，通常称之为植物组织培养式植物 的细胞与组织培养。 2.离体培养技术体系 胚胎培养及以胚胎为基础的培养技术 器官及器官原基培养 组织培养 细胞培养 原生质培养及以原生质体为基础的培养技术 3.离体培养的应用 多种的繁育与脱毒 种质资源的贮存 细胞次生代谢物质的生产 细胞工程和基因工程的生物技术育种 遗传学和生物学基础的研究 ?园艺植物离体培养学的形成与发展 （一）、植物离体培养的渊源及其早期的实践 1902年、haber landt提出了细胞全能性的观点，并首次进行植物细胞培养实验。 （二）、植物离体培养基本技术体系的形成 1934年white首次建立了番茄的无性繁殖系 1937年white发现b族微生物素和吲保乙酸对离体培养的作用 1934—1939年white等人初步建立起植物离体培养的基本方法 1943年white发表了第一部植物离体培养专著《植物组织培养手册》又重新提出了细胞全能性。 1957年skaog建立了器官分化的激素配比模式。 1953年muir报道了细胞悬浮培养法。 （三）园林植物离体培养学科的建立 1、完善离体培养技术、探索理论基础 1964—1966年诱杀未成熟花粉形成单位体植株。 1960年分离番茄动根原生质体获得成功， 1978年首先获得了体细胞杂种——“potamato”. 植物细胞全能性为基因转化提供方便。 2、开拓应用研究 生产上应用最广泛，最成功的领域是离体快速繁殖。 ?植物离体培养学与园艺科学的关系 （一）、离体培养与园艺植物良种繁育学 （二）、离体培养与园艺植物育种学 （三）、离体培养与园艺植物基础学科 第一章离体培养的基本操作方法 通过学习，理解和掌握离体培养的基本操作方法包括：一般的材料选取、无菌技术、培养基配置和环境条件调控为园林植物快繁技术打下基础。
实训六药用植物的扦插繁殖技术（金银花） 一、实训目的要求 1.了解药用植物扦插繁殖的理论基础。 2.掌握药用植物枝插、叶插及根插的繁殖技术。 二、实训材料用品 （一）实验材料 根插材料：地下跟，选择一年生充实饱满的根，不宜选择不易发芽的老根和新生根。 枝插材料：植株的半成熟的枝条。 叶插材料：植株生长健壮、充分成熟的叶片。 （二）仪器与用品 枝剪、刀片、育苗盘、移植铲、标签、遮阳网、塑料薄膜。 （三）试剂 萘乙酸、酒精、石蜡 三、实训内容方法 （一）营养土的消毒盒装盘 可选择轻质壤土、江沙、苔藓等作栽培基质。用高压锅进行湿热灭菌 1.5小时，用福尔马林熏蒸或紫外灯对育苗盘进行。将基质平铺于育苗盘上，约10cm 厚，打透底水备用。 （二）生长调节剂溶液的配制 1.500ppm萘乙酸粉剂将1g萘乙酸混于2000g滑石粉中备用。 2.500ppm萘乙酸溶液 1g萘乙酸先溶于少量95%乙醇后，再加水稀释至所需浓度。（三）插穗的剪切 剪插穗的枝剪在每剪一个新插穗前用70%左右的酒精消毒处理。 1.根插穗的剪切 2.枝插穗的修剪 3.叶插穗的修剪 （四）插穗的扦插
将根插法和枝插法及片叶插法的插条各分成6组，每组15枝插穗，分别为：不处理的对照组、上切面不处理及下切面沾500ppm萘乙酸粉剂处理组、上切面不处理及下切面沾500ppm萘乙酸溶剂处理组、上切面封蜡及下切面不处理组、上切面封蜡及下切面沾500ppm萘乙酸粉剂处理组、上切面封蜡及下切面沾500ppm萘乙酸溶液处理组。将处理好的各组插穗分别扦插于铺好扦插基质的育苗盘中，挂好标签，标签上写明扦插时间、扦插方式、处理方式。 将全叶插的插穗分成2组，每组15枝插穗，分别为：不处理的对照组、表面喷洒500ppm萘乙酸溶液的处理组。将处理好的叶片平放于铺好扦插基质的育苗盘中，使叶片背部的叶脉紧贴扦插基质，并在叶脉处用消过毒的小刀划开小切口。之后同样挂好标签，标签上写明扦插时间、扦插方式、处理方式。 （四）插穗苗的管理 （五）插穗苗成活率的调查 插穗半个月后调查插穗的成活率。 各处理的成活率可以按照以下公式计算。 扦插苗成活率=（扦插苗成活株数/扦插苗总株数）x100% 四、实训作业思考 1.书写扦插观察日志。 2.列举三种日常所见的自然营养繁殖实例。 3.人工营养繁殖的意义。
目录 摘要 (1) 关键词…………………………………………………………………………………………… 1 Abstract…………………………………………………………………………………………… 1 Keywords (1) 1 污染 (2) 1.1 污染的种类 (2) 1.2 污染的因素 (2) 1.2.1 外植体本身 (2) 1.2.2 外植体灭菌 (2) 1.2.3 接种和培养环境 (3) 2 褐化 (3) 2.1 褐化原因 (3) 2.2 影响褐变的因素 (3) 2.3 防止褐变的方法 (4) 2.3.1 外植体的选择 (4) 2.3.2 适宜的培养基和培养条件 (4) 2.3.3 加入抗氧化剂和吸附剂 (4) 2.3.4 反复转接 (4) 3 玻璃化 (4) 3.1 玻璃化苗的特点与发生原因 (4) 3.1.1 玻璃化苗的特点 (4) 3.1.2 发生原因 (4) 3.2 影响玻璃化苗的因素 (5) 3.2.1 生长调节剂 (5) 3.2.2 温度 (5) 3.2.3 湿度 (5) 3.2.4 消毒方法 (5) 3.2.5 光照时间 (5) 3.2.6 培养基 (5) 3.2.7 继代次数 (5) 4 其他常见问题及其解决措施 (5) 4.1 初始培养阶段 (5) 4.2 继代培养阶段 (6) 致谢 (7) 参考文献 (7)
浅析植物离体快繁过程中常见的问题 摘要 探讨了影响了植物组织培养的主要因素，分析了污染、褐变、玻璃化及其他常见问题，并提出了解决措施。认为：污染主要是由灭菌不彻底和环境不洁造成的，加强外植体和培养基的灭菌，对培养环境及其用具彻底消毒，可大大降低污染率。植物品种、取材部位及环境条件与褐变的发生密切相关，选择适宜的外植体，进行外植体，调价抗氧化剂和吸附剂等可有效控制褐变。培养基的种类、温度、通气状况等会影响玻璃苗的发生，选择适当培养基，降低温度，增强光照，改善通风等可使玻璃化率降低。 关键词 组织培养；污染，褐化，玻璃化 According to the rapid propagation process of in vitro in common problem Abstract Discusses the influence of the main factors of plant tissue culture, this paper analyzes the pollution, Browning, vitrification and other common problems, and proposes the measures. Think: pollution is mainly composed of sterilization is not complete and the environment caused by the unclean, strengthen the explant and culture medium sterilization for training environment and its appliance disinfection, can greatly reduce the rate of pollution. Plant variety, based site and environment and the occurrence of Browning closely related, the choice of appropriate explant, explant, introduce antioxidants and adsorbent, etc can effectively control the Browning. The kinds of culture medium, temperature and ventilation situation will influence the occurrence of glass seedlings, choose proper culture medium, reduce the temperature, and enhance the illumination, improve ventilation can make glass transition rate to decrease. Keywords Tissue culture; Pollution, Browning, vitrificatio
植物快速繁殖技术 植物快速繁殖就是应用组织培养技术，快速繁殖名优特新品种，使其在较短时间内繁衍较多的植株；快速繁衍珍稀濒危植物，使物种得以保存。快速繁殖是当前植物细胞工程中应用最广泛，又最有效的方法之一。 除了一部分豆类作物外，种子是不会传递病毒的。植物病毒是通过无性繁殖传递的，而快速繁殖是建立在无性繁殖的基础上，病毒在母体内逐代积累，危害越来越严重。目前在生产上尚无特效药物可彻底除去病毒，而快速繁殖却可以，因此，快速繁殖脱毒显得非常重要。 一、植物快速繁殖的途径和方法 以植物的根、茎、叶柄和花等片段以及孢子作为外植体，或者切取茎尖、腋芽进行离体培养，可以直接诱导器官分化，产生芽、根，也可以诱导改变原有的分化状态，脱分化形成愈伤组织，再经过不同的细胞分化途径重建形成不同的器官，直到完整植株。(P86 L.1~L.16) 植物快速繁殖的类型与方式可归纳如下表： 器官型 芽，扩大繁殖系数稳定，是快速繁殖的主 要方式 丝石竹等可获得与母株相同的
快速繁殖中茎尖培养脱毒 无病毒苗的获得： （一）材料的培养和灭菌 为了获得无菌的茎尖，应把供试植株种在无菌的盆土中，放在温室栽培。浇水要浇在土中，不要浇在叶片上。如材料取自田间，可切取插条，在实验室内进行溶液培养。由这些插条的腋芽长成的枝条，其污染程度比直接从田间植株取来的枝条少得多。自外，定期喷施内吸杀菌剂（如0.1%多菌灵和0.1%链霉素）也十分有效。 （二）茎类剥离 取幼苗茎尖2~3cm小段，剥去可见的大叶，放在烧杯内用自来水冲洗1h左右，移入无菌室进行严格消毒。先用95%酒精快速浸泡一下，再放入5%的漂白粉溶液内消毒7~10min （也可用市场上出售的次氯酸钠溶液稀释为5%），然后用无菌水冲洗3~4次，在双筒解剖镜下一手用细镊子将茎芽按住，另一手用解剖针仔细地将幼叶剥去，最后露出圆滑的生长点，用注的针头侧刃或自制的解剖针，仔细地切取带有1~2个叶原基的生长点，随即接种到试管培养基上进行培养。这样外植体（生长锥带1~2个原叶基）的培养，严格来说，应称为分生组织培养。 以上操作必须严格在无菌条件下的超净工作台中进行，所用器具都应浸泡于70%的酒精中，使用前要在究竟灯上烧灼灭菌，注意不使解剖针、刀太烫，以免损伤组织。解剖镜台应垫载玻片，每剥离一个茎尖应以酒精棉团擦拭，手也应经常用70%酒精擦试。茎尖很幼嫩，暴露时间越短约好。因为超净台的气流和酒精灯发出的热都会使茎尖迅速变干。 （三）茎尖培养 目前常使用的的基本培养基是MS培养基或White培养基，它有较高浓度的无机盐，对促进组织分化和愈伤组织生长是有利的。在培养基中可酌情添加5%~10%椰乳，0.1~1.0mg/L 的吲哚乙酸、萘乙酸、苄基腺嘌呤等，有的还需添加活性炭。根据培养种类不同，添加的生长调节剂可适当调整。（P92~P93 L.11） 茎尖培养的生长可能有4种类型：①组织不增大，不久变褐死亡，这可能是生长点受伤所致。②组织渐变绿，但体积增大缓慢，可把组织转到NAA浓度高于0.05mg/L的培养基上，并提高温度以加速其生长。③组织基部不产生或少量产生愈伤组织，而生长点发育正常，一个月内可形成无根的小植株，这是最理想的情况。当长有2~3片西欧啊叶时，应把
植物组织培养：是指在无菌和人工控制的环境条件下，利用人工培养基，对离体的植物胚胎、器官、组织、细胞及原生质体进行培养，使其再生细胞或完整植株的技术。又称为植物离体培养 离体生态学：是指研究离体培养环境条件控制的科学，其研究对象是培养基、植物材料和人工环境条件 外植体：用于离体培养的那部分植物器官、组织或细胞 愈伤组织（callus）：是指外植体因受伤或在离体培养时，其细胞进行活跃的分裂增殖而形成的一种无特定结构和功能的组织 植物组织培养的特点 1.组培技术是无菌操作技术。 2.组培材料处于完全的异养状态。 3.组培材料可以是离体状态的器官、组织、细胞或原生质体。 4.组织培养物可以形成克隆（clone，无性繁殖系），也可以进行茎芽增殖或生根 5.组培容器内的气体和环境气体可通过封口材料进行交换，相对湿度通常是几乎100％，因此，组培苗叶片表面一般都无角质层或蜡质层，且气孔保卫细胞功能缺乏，气孔始终都是张开的。 6.组培的环境温度、光照强度和时间都是人为设定的，其参数可调 植物组织培养的研究类型 组织培养 器官培养 胚胎培养 细胞培养 原生质体培养 植物组织培养的研究任务 研究离体培养条件下，细胞、组织或器官所需营养条件和环境条件，细胞、组织或器官的形态发生和代谢规律，植物脱毒方法和机理，植物特别是一些难繁植物的大量快速繁殖方法，细胞融合方法和机理，再生个体的遗传和变异，种质资源的离体保存机理和方法等 德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann于1838-1839年提出的细胞学说 德国植物学家Haberlandt于1902年提出了植物细胞具有全能性 李继侗和沈同1933年成功培养了银杏的胚。 1952年，Morel和Martin提出了植物脱毒（virus free）技术 Guha和Maheshwari等——花药培养 Cocking等-原生质体培养
最全的植物快速育苗扦插生根繁殖技术 1】.全光照喷雾扦插快速育苗技术；全光照喷雾扦插 育苗技术是近代发展最快的先进快速育苗技术，已成为植物无性繁殖和工厂化育苗的重要组成部分。 、全光照喷雾扦插育苗技术的概述 植物无性繁殖可以使繁殖的植株保持其母本的全部遗 传性状，因此无性繁殖方法被广泛应用于林木、果树、花卉和蔬菜等生产中。无性繁殖方法有扦插、嫁接、压条、分株和组织培养等。其中扦插育苗最为方便，成苗快，成本低，所以能扦插繁殖的植物一般不采用其他无性繁殖方法。 硬枝扦插繁殖是最为传统和简便的无性繁殖方法，能满 足大规模工业化生产的需要。但硬枝扦插育苗只使用于少数容易生根的树种，而大部分树种生根困难。然而，嫩枝扦插方法的出现大大提高了难生根树种的扦插成活率，逐渐成为扦插研究的方向。嫩枝扦插是在生长季节采取木质化程度较低（半木质化）的带叶嫩枝进行扦插，因为嫩枝扦插穗条比较幼嫩，内源生长促进物质较多，制物质较少，细胞分生能力强，所以生根容易；带叶扦插不仅能进行光合作用，提供生根所需的碳水化合物，而且可以合成内源生长素刺激生根；另外生长季节气温较高，利于插穗迅速生根。 带叶嫩枝扦插对环境条件要求很高，必须创造一个适宜 的高湿环境，才能保证插穗在生根前不失水萎蔫和腐烂。创造环境有多种方法，为了控制插条失水保持水分平衡，以前生产中带叶嫩枝扦插一般在塑料大棚或小拱棚内进行，保湿效果较好，但在生长季节这种密闭的插床温度很高，容易灼伤插穗，这就需要遮荫和经常地通风、浇水，遮荫后的低光照减弱了插条的光合作用，而高温下插条的呼吸强度却很高，碳水化合物积累很少，这就影响了生根速度。另外，高温高湿、低光照和通风不良易造成霉菌滋生，影响扦插成活。利用这种方法进行带叶嫩枝扦插虽然不需特殊的设备，但管理上稍不注意就会造成失败，而且育苗工作量大，培育时间长，效率低，
植物快繁技术/植物克隆技术/植物傻瓜克隆技术/植物非试管高效快 繁技术 减小字体增大字体作者：本站来源：本站整理发布时间： 2008-1-1 18:33:32 植物快繁技术简介 所谓植物非试管高效快繁技术也就是植物克隆技术，也有人称之为植物非试管快繁技术、植物快繁技术、植物全光照喷雾育苗技术、全光雾插技术、微材料或微组织扦插育苗技术，喷雾育苗技术、喷雾扦插育苗技术、傻瓜克隆。无论叫做植物快繁还是植物克隆其原理和方法是一样的。 植物克隆技术（植物快繁技术）的关键是喷雾，十几年前就有权威单位推广全光照喷雾育苗技术，实际上也就是后来有人称之为植物非试管高效快繁技术，而现今更多被称为植物克隆、傻瓜克隆等时髦词汇。过去开发的喷雾全套设备是机械式，成本高达数万元，且容易锈蚀和损坏，一段时间后就没人再使用，而自从引进以色列微喷（头）技术后，微喷雾问题顺利以低成本形式解决，于是植物克隆技术（植物快繁技术）得以在全国迅速推广普及。 植物快繁技术（植物克隆技术）的推广的另一障碍就是自动控制仪的问题，进口的温湿控制设备好用但价格高，所谓的农业智能化计算机系统除了价格更高之外还总是不能成熟，使用起来问题百出，经常造成育苗的失败，笔者使用两年后才不得已开发了国产育苗仪，其低廉
的价格和丰富实用的功能很快被全国同行赏识。 植物克隆技术（植物非试管高效快繁技术）现在的投入只需2000余元，大力推广植物克隆技术、植物快繁技术利国利民。 植物非试管高效快繁技术的起源、应用和进展 植物傻瓜克隆技术是20年前从国外引进，又经过我国众多农业专家花费二十余年时间，逐步完善并成熟运用于规模生产一个系统配套，用于多种经济植物大规模无性快繁产业化生产的实用技术，又称非试管快繁技术、喷雾快繁技术等。此技术是一项崭新经济植物苗木快繁技术体系，它将植物组织培养快繁苗从试管培养基中解放到田间大地，是一场无性繁殖快速育苗的革命！是现代农业生物技术研究的一大创举！ 该技术育苗生产成本低，适用于国内外苗木交易市场和经济植物种苗繁殖工程。绿色快繁产业是一个永久性高效益产业，它可以带动制药产业、林纸产业、林草产业、园林绿化等其它产业，进而促进农业产业化、林业产业化、制药产业化和农业现代化的快速发展。还有利于生态城市、园林城市、森林公园、自然保护区的建设、生态环境改善、城市生态系统的改变、无性系造林、天然林保护工程、城市绿化工程以及与人们生活息息相关的如粮食作物、花卉、蔬菜、无公害蔬菜、野生蔬菜、濒危野生植物、果树、山野菜、药用植物、珍稀植物等高效经济植物以及新经济资源的开发利用。 植物快繁技术是古今中外人们十分关注的问题。从传统的扦插繁
《花卉扦插繁殖方法与技术》教案 【课题】花卉扦插繁殖方法与技术 【课型】实践课 【教学目标】 1、掌握各种类的扦插繁殖方法与技术 2、了解影响扦插成活的因素 【教学重点】扦插繁殖方法与技术 【教学难点】影响扦插成活的因素 【教学方法】任务驱动法 【课时安排】1课时 【补缺补漏或联系与本节课有关的知识】花卉繁殖的种类 【新授课过程】 一、提出任务： 上次课我们已经学习了扦插的概念，扦插技术的种类与方法。现在我们简单复习一下，这节课的主要任务是通过具体实践来掌握扦插繁殖方法与技术，并共同分析影响扦插成活的因素。 二、执行任务、完成任务： 【分析讨论】、【探究质疑与操作】 （一）让学生分别完成下列操作，然后教师点评。 操作一：用月季、或玫瑰进行绿枝插。 要求：切取生长健壮的当年生枝条10~15cm、带3~5个芽,上切口在芽上方1 cm左右平截，下剪口在基部芽下0.3 cm左右斜切，切面要平滑。枝条上部保留2~3枚片叶，以利光合作用，若叶大可剪去1/3,以减少蒸发。扦插深度为插
条的1/3~1/2，斜插为宜。喷水压实。注：插穗插入前可先用插条相当粗细的木棒插一孔洞，避免基部插入时被磨破皮层。 操作二：用黄树梅进行嫩枝扦插。 要求：切取5~10cm长度的细嫩茎、带3~4个芽,剪去插穗下部叶片,保留顶部的叶芽,下切口在芽下斜切，基部削面平滑，扦插深度为插条的1/3~1/2。注：插穗插入前可先用插条相当粗细的木棒插一孔洞，避免基部插入时被磨破皮层。 操作三：用落地生根进行叶片插。（平置法） 要求：即将去叶柄的叶片平铺基质（最好是沙面）上，加针或竹针固定，使叶片下面与沙面密接。落地生根的离体叶，叶缘周围的凹处均可发生幼小植株(起源于所谓的叶缘胚)。 操作四：拓展部分。学生自主操作硬枝插、叶柄直插法、芽叶插法、根插。（没有相应的花卉，拿其他种类代替，要求掌握操作方法即可） （二）分析讨论影响扦插成活的因素 影响扦插能否成活的因素很多，而主要有温度、水分、阳光、通气和基质等。三、布置作业 加强扦插后的管理，确保扦插成活。 【反馈与小结】
植物组织培养：离体条件下利用人工培养条件在无菌情况下培养、生长、发育再生出完整植株的过程。外植体：由活体植物体上提取下来的，接种在培养基上的无菌细胞、组织、器官等。植物细胞的全能性：植物细胞具有该植物体全部遗传的可能性，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。脱分化：将来自已分化组织的已停止分裂的细胞从植物体部分的抑制性影响下解脱出来，恢复细胞的分裂活性。再分化经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可有转变为各种不同细胞类型的能力。 第二章设备与培养条件 实验室组成：化学实验室、洗涤菌室、无菌操作室、培养室、细胞学实验室。1化学实验室：完成所使用的各种药品的贮备、称量、溶解、配制、培养基分装等。主要设备：药品柜、防尘橱（放置培养容器）、冰箱、天平、蒸馏水器、酸度计及常用的培养基配制用玻璃仪器. 2 洗涤、灭菌室：完成各种器具的洗涤、干燥、保存、培养基的灭菌等。主要设备：水池、操作台、高压灭菌锅、干燥灭菌器（如烘箱）等。3无菌操作室（接种室）：主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的转移、试管苗的继代、原生质体的制备以及一切需要进行无菌操作的技术程序。主要设备：紫外光源、超净工作台、消毒器、酒精灯、接种器械（接种镊子、剪刀、解剖刀、接种针）等。4培养室：培养室是将接种的材料进行培养生长的场所。主要设备：培养架（控温控光控湿）、摇床、培养箱、紫外光源等。5细胞学实验室：用于对培养物的观察分析与培养物的计数等。主要设备：双筒实体显微镜、显微镜、倒置显微镜等。6其他小型仪器设备：分注器、血球计数器、移液枪、过滤灭菌器、电炉等加热器具、磁力搅拌器、低速台式离心机等。 第三章培养基及其制备 培养基的成分主要可以分水、无机盐、有机物、天然复合物、培养体的支持材料等五大类。常用的培养基及特点如下：(1)MS培养基特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。(2)B5培养基其主要特点是含有较低的铵，这可能对不少培养物的生长有抑制作用。(3)White培养基其特点是无机机盐数量较低，适于生根培养。（4）N6培养基其特点是成分较简单，KNO3和（NH4）2SO4含量高。(5)KM —8P培养基其特点是有机成分较复杂，它包括了所有的单糖和维生素，广泛用于原生质融合的培养。水是植物原生质体的组成成分，也是一切代谢过程的介质和溶媒。1无机营养--①大量元素，指浓度大于0.5mmol／L的元素等。其作用是：(1)N 是蛋白质、酶、叶绿素、维生素、核酸、磷脂、生物碱等的组成成分，是生命不可缺少的物质。(2)P 是磷脂的主要成分。在植物组织培养过程中，向培养基内添加磷，不仅增加养分、提供能量，而且也促进对N的吸收，增加蛋白质在植物体中的积累。(3)K 对碳水化合物合成、转移、以及氮素代谢等有密切关系。K增加时，蛋白质合成增加，维管束、纤维组织发达，对胚的分化有促进作用。但(4)Mg、S和Ca、Mg 是叶绿素的组成成分，又是激酶的活化剂；S 是含S氨基酸和蛋白质的组成成分。Ca是构成细胞壁的一种成分，Ca对细胞分裂、保护质膜不受破坏有显著作用，铁是一些氧化酶、细胞色素氧化酶、过氧化氢酶等的组成成分。同时，它又是叶绿素形成的必要条件。培养基中的铁对胚的形成、芽的分化和幼苗转绿有促进作用。也是植物组织培养中不可缺少的元素，缺少这些物质会导致生长、发育异常现象。②微量元素，作为酶的辅助因子或激活剂参与代谢的调节③缺素症④稀土元素，对试管苗的生长分化生根愈伤组织诱导生长体细胞胚的发生以及提高次生代谢物的产量有促进作用2有机营养成分①碳源，对细胞增殖起作用也影响细胞分化②维生素类，对生长分化等有很好促进作用③肌醇，糖类的转化中其重要作用，是细胞壁的构建材料④氨基酸，可直接被细胞吸收⑤天然复合物，对细胞的增殖与分化有明显的促进作用，但对器官的分化作用不明显3培养材料的支持物4活性炭吸附培养基及培养物分泌物中的抑制物质，抑制外植体褐变防止玻璃苗的产生促进培养物生长和分化促进生根5抗生素防止外植体内生菌造成的污染6抗氧化物，作用抑制外植体的褐变7硝酸银促进愈伤组织器官发生或体细胞胚胎发生的作用，使原再生困难的物种分化再生植株母液的配置与保存：①大量元素母液，即含N.P.K.Ca.Mg.S等六种盐类的混合溶液，一般配成浓度10倍或20倍母液。②微量元素母液，含有除Fe以外的B.Mn.Cu.Zn,Mo.CL等盐类的混合溶液，因含量低，一般配成100倍或200倍母液。③铁盐母液④有机物母液⑤植物生长调节物质母液1生长素类，作用促进细胞伸长和分裂，促进生根抑制器官脱落，性别控制，延长休眠，顶端优势，单性结实等作用2细胞分裂素类作用，促进细胞分裂和分化，诱导胚状体和不定芽的形成，延缓组织的衰老并增强蛋白质的合成。3赤霉素作用，加速细胞的伸长生长，促进细胞分裂。脱落酸具有抑制细胞分裂和伸长促进脱落和衰老促进休眠和提高抗逆等能力4多胺作用，调控部分植物外植体不定根不定芽画押体细胞胚发生发育以及延缓原生质体衰老促进原生质体分裂及细胞克隆形成方面具有明显的效果5多效唑作用，控长矮化，促进分枝，分嶪促进生根成花坐果，延缓衰老，提高叶绿素含量，增强植物抗逆性等培养基的配置准备工作1实验用具的准备2试剂药品的准备3 Vo=V1/t 或Vo=(C1*V1)/Co Vo=吸取母液体积（mL）V1=配置培养基体积（mL）Co=母液浓度（mg/L）C1=配置培养基的浓度（mg/L）T=母液扩大倍数①取规定数量的糖源和凝固剂置于烧杯内，加蒸馏水至培养基最终体积的3/4在恒温水浴中加热使之溶解，加热过程应不断搅拌，防治结块。②根据计算所需量一次加入大量元素微量元素铁盐有机物生长调节物质母液及其他特殊附加物，搅拌均匀。③加水定容至规定体积，搅拌均匀。④调整培养基的PH值。⑤分装⑥封口 第四章植物材料 植物材料幼年期特点：植物生长快，呼吸强，核酸代谢和蛋白质合成快。成年期：代谢和生理活动慢，光合速率和呼吸速率下降。外植体的选择：1植物的种质选择2外植体的增值能力3外植体的大小4外植体的年龄和着生部位5取外植体的季节和时间6木本材料的特殊性灭菌的常用化学药品:1乙醇2升汞3次氯酸钠4漂白剂5过氧化氢6其他用于外植体体表灭菌的化学药品①茎尖茎段以及叶片等材料的灭菌流水冲洗，70％乙醇浸泡，冲洗，取0.1％升汞。最后用无菌水洗涤干净，备用。②果实和种子的灭菌冲洗20min 再用70％乙醇灭菌30s，用无菌水洗涤3次，取出果实内种子进行培养。如暴露了，用10％次氯酸钙溶液浸泡30min。
第一节植物快速繁殖技术 一、植物组织培养简介 1．理论基础：植物细胞的全能性。 (1)愈伤组织的特点：细胞是一种高度液泡化的薄壁细胞，呈无定形状态，排列疏松而无规则，具有很强的分生能力。 (2)脱分化：由高度分化的细胞重新恢复到未分化的状态。 (3)再分化：愈伤组织在适当的人工培养基上继续培养又可以重新分化成芽、根等器官，进而发育成一棵完整的植株。 3．培养基 (1)成分：除含外植体所需的各种营养物质外，还需添加生长素和细胞分裂素两种植物激素。 (2)类型：据外植体在不同发育阶段的要求，需配制“脱分化培养基”、“生芽培养基”、“生根培养基”。 4．无菌条件：培养基的灭菌要彻底、外植体的消毒要充分、接种时的无菌操作要严格。 二、月季的快速繁殖程序 1．配制培养基 先将各种营养成分按比例配制成MS 培养基母液，再利用母液配制所需的三种培养基。 (1)脱分化培养基：母液中加入质量浓度为0.1 mg/L 的6－BA 和IAA 。 (2)生芽培养基：去掉脱分化培养基中的IAA 即可。 (3)生根培养基：无机盐浓度为MS 的12 ，另外添加质量浓度均为0.1 mg/L 的NAA 和IAA 。 2．外植体消毒 清水洗净→体积分数为70%的酒精浸5 s→质量分数为2%的次氯酸钠溶液中浸泡6 min ～10 min→用无菌水清洗至少3次，漂净消毒液→用无菌滤纸吸干。 3．接种：将已消毒的月季嫩茎接种到脱分化培养基上，使嫩茎的形态学下端接触培养基。
4．培养：接种后的锥形瓶放在恒温培养箱中培养，将愈伤组织接种到生芽培养基上，每天用日光灯光照12 h ，培养10 d 左右长出小芽，小芽继续长成枝条。待枝条长到3 cm 左右时，将它切下后插在生根培养基上诱导生根。 5．驯化试管苗 6．移栽 预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中 问题1 问题2 问题3 问题4 一、植物组织培养 1．原理——细胞的全能性 (1)原因：生物体的每个细胞都含有本物种生长、发育、遗传和变异的全部遗传信息。 (2)实现全能性的条件：离体状态和适宜的环境条件(如营养物质、激素、温度等)。 2．过程 植物组织(外植体)或细胞――→脱分化 愈伤组织 ――→再分化 根芽―→植物体 3．培养基 (1)脱分化培养基：生长素与细胞分裂素比例适中。 (2)生芽培养基：生长素与细胞分裂素比例偏低。 (3)生根培养基：生长素与细胞分裂素比例偏高。 二、试管苗的培养过程中应注意的问题 1．培养一株完整的试管苗，必须先进行生芽培养，然后进行生根培养，如果顺序颠倒，先诱导生根，就不好诱导生芽了。