第三章第一节黑木耳常用三级菌培养基配方
季占军
黑木耳三级菌包也就是我们常说的出耳棒，三级菌是直接用来出耳的，所以在制作过程中的
每一个细节都能直接影响到后期木耳的产量，而且在出耳期的很多病害也是菌棒制作期留下
的隐患，所以菌棒制作至关重要，广大种植户一定要认真对待。一句话菌壮耳肥，具体操作
细节如下：
一、常用三级菌培养基配方
因黑木耳属木腐菌所以常用的培养基配方多为木屑配方，但因各地资源不一样，加之近年来
天然林禁伐政策的实施，所以在零八年开始我们进行了黑木耳代料培养基的筛选实验，下面
我把具体的培养基配比介绍一下：
1. ⑴木屑培养基，木屑86%，麦麸10%，豆粕2%，石膏1%，石灰0.5%-1%。
⑵木屑81%，麦麸5%，稻糠10%，石膏1%，豆粕2%，石灰0.5%-1%。
以上木屑培养基配方中求大片不添加防腐剂，稻糠要求用磨米下来的精糠，石灰的添加
量应以PH值为标准，要求拌完料后PH值7.5-8之间，石膏应该用食用菌专用石膏粉。
2.木屑加玉米芯配方：木屑：58%，玉米芯30%，麦麸8%，豆粕2%，石膏1%，磷酸二氢钾
0.1%，石灰1%。
木屑：56%，玉米芯30%，稻糠10%，豆粕2%，石膏1%，磷酸二氢钾0.1%，石灰1%。
以上配方中要求玉米芯大小不超过0.6CM，木屑应为粗细各一半为好，特别注意两点：1，
玉米芯使用前要充分预湿。2，PH值在拌料后应在8左右，而且料要现拌现用。
3.木屑加棉壳配方：木屑48%，棉籽壳40%，麦麸10%，石膏1%，石灰0.5%-1%。
木屑43%，棉籽壳40%，麦麸5%，稻糠10%，石膏1%，石灰0.5%-1%。
在以上配方中，棉壳要求用中壳中绒的而且要提前预湿，因棉绒吸水性强所以在拌料过程中
要格外注意含水量。
4.木屑加豆秸配方：木屑58%，豆秸30%，麦麸8%，豆粕2%，石膏1%，石灰0.5%-1%，磷酸
二氢钾0.1%。
木屑53%，豆秸30%，麦麸5%，稻糠8%，玉米面2%，石膏1%，石灰
扫码查看本文高清电子版0.5%-1%，磷酸二氢钾0.1%。
以上配方豆秸要求粉碎成0.6CM以下的颗粒，最好在使用前6天进行
拌水闷堆，使其充分软化，防止装袋过程中刺破菌袋。
常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin）（100mg/ml） 溶解1g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin）（50mg/ml） 溶解0.5g羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以25ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin）（100mg/ml） 溶解1g甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin）（10mg/ml） 溶解100mg卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol）（25mg/ml） 溶解250mg氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以12.5ug/ml～25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin）（50mg/ml） 溶解0.5g链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml。分装成小份于-20℃贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline）（10mg/ml） 溶解100mg四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20℃贮存。常以10ug/ml～50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 常用培养基 LB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨10g 酵母提取物5g 氯化钠10g 如果需要用1N NaOH（～1ml）调整pH至7.0，再补足水至1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。(实验室一般都不调PH) SOB培养基 将下列组分溶解在0.9L水中： 蛋白胨20g 酵母提取物5g 氯化钠0.5g 1 mol/L 氯化钾2.5ml
。 细菌培养基：肉膏蛋白胨培养基是一种广泛用于培养细菌的一． 培养基,肉膏蛋白胨培养基的主要成分是牛肉膏、蛋白胨和NaCl。 肉膏蛋白胨培养基 1.药品比例： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～20g，水1000mL， PH7.4～7.6 2.实验器材： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、可溶性淀粉、葡
萄糖、孟加拉红、链霉素、 1mol/L NaOH、lmol/L HCl、KNO、NaCl、K HPO·3HO、MgSO·7HO、222434 FeSO·7HO、4.5mL 无菌水6 管，10%酚液，49.5mL 无菌水( 带玻璃珠)124 瓶。土壤样品、试管、培养皿、移液管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、称量纸、牛角匙、pH试纸、棉花、报纸、记号笔、线绳、纱布、酒清灯。电炉、高压蒸气灭菌锅、超净工作台 . 3.配置方法 （1）称药品：按实际用量计算后，按配方称取各种药品放入大烧杯中。牛肉膏可放在小烧杯中称量，用热水溶解后倒入大烧杯。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 （2）加热溶解：在烧杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉网上，小火加热，并用玻棒搅拌，待药品完全溶解后再补充水分至．
所需量。若配制固体培养基，则将称好的琼脂放入己溶解的药品中， 再加热融化，此过程中，需不断搅拌，以防琼脂糊底或溢出，最后补 足所失的水分。 （3）调pH：检测培养基的pH，若pH 偏酸，可滴加lmol/L NaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸检测，直至达到所需pH 范围。若偏碱，则用lmol/L HCl 进行调节。pH 的调节通常放在加琼脂之前。应注意 pH值不要调过头，以免回调而影响培养基内各离子的浓度。 （4）过滤：液体培养基可用滤纸过滤，固体培养基可用4 层纱 布趁热过滤，以利培养的观察。但是供一般
常用缓冲液及培养基配方 LB液体培养基： Bacto-蛋白胨10g 酵母抽提物5g 氯化钠10g 加950ml蒸馏水溶解，用5N氢氧化钠调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。LB固体培养基： 每升LB液体培养基中加入12g琼脂粉，高压灭菌后保存。 SOB液体培养基 Bacto-蛋白胨20g 酵母抽提物5g NaCl 0.5g 加950 ml水溶解，加入250mmol/L KCl 溶液10ml，用5 N NaOH调pH至7.0，定容至1000 ml，高压灭菌后保存。使用前加入5ml经灭菌的2mol/LMgCl2。 SOC液体培养基 SOB中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为20mmol/L。 麦康凯固体培养基 每1000ml水中加52g培养基粉，煮沸溶解后分装，高压灭菌。 NA固体培养基 牛肉浸膏3g 酵母浸膏1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加950ml蒸馏水溶解，调pH至7.0，定容至1000ml，高压灭菌后保存。 TB培养基： 将下列组分溶解在0.9L水中： Bacto-蛋白胨12g 酵母抽提物24g 甘油4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60℃，再加100ml灭菌的170mmol/L KH2PO4/ 0.72 mol/L K2HPO4的溶液。高压灭菌或用0.22um的滤膜过滤除菌。 溶液Ⅰ 葡萄糖2.25 g 50mmol/L 1mol/L Tris·Cl(pH8.0) 6.25ml 20mmol/L 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml 10mmol/L 调pH至8.0后，用水定容至250 ml，高压灭菌后保存。 溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至100 ml，现配现用。 溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾60ml
光合细菌（Photosynthetic bacteria，简称PSB）是具有原始光能合成体系的原核生物的总称，它广泛存在于自然界的水田、湖泊、江河、海洋、活性污泥及土壤内，是一类以光作为能源、能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用自然界中的有机物、硫化物、氨等作为供氢体兼碳源进行光合作用的微生物。 第一节光合细菌的生物学和营养价值 一、光合细菌的生物学 光合细菌包括产氧光合细菌（蓝细菌）和不产氧光合细菌两大部分，在实际中应用的大部分是不产氧型光合细菌。不产氧光合细菌包括紫细菌、绿细菌和日光杆菌属、红色杆菌属等总共 27个属 66个种。不产氧光合细菌是代谢类型复杂、生理功能最为广泛的微生物类群。各种光合细菌获取能量和利用有机质的能力不同，它们的代谢途径随环境变化可以发生改变。光合细菌从营养类型看包括光能自养型、光能异养型及兼性营养类型；从呼吸类型看包括好氧、厌氧和兼性厌氧型。 光合细菌是革兰氏阴性菌，在10～45℃范围内均可生长繁殖，最佳温度在30～40℃。绝大多数光合细菌的最佳pH值范围在7～8.5之间。钠、钾、钙、钴、镁和铁等是光合细菌生理代谢中的必需元素。 二、光合细菌的营养价值 光合细菌的菌体无毒，营养丰富，蛋白质含量高达65%，而且氨基酸组成齐全，含有机体需要的8种必需氨基酸，各种氨基酸的比例也比较合理。PSB还含有丰富的B族维生素，尤其是B12、叶酸、生物素的含量相当高是啤酒酵母和小球藻的20到60多倍。PSB 菌体内含有较高浓度的类胡萝素，而且种类繁多，迄今已从光合细菌中分离出80种以上的类胡萝卜素。除此之外，细胞内还含有碳素储存物质糖原和聚β一羟基丁酸、辅酶Q、抗病毒物质和生长促进因子，具有很高的营养价值。 光合细菌在虾、贝类的幼体培育中应用非常广泛，其一方面能净化水质，改善幼体的环境条件，另一方面作为饵料被幼体摄食（贝类幼体相对虾幼体的蚤状阶段都能直接摄食光合细菌），对促进幼体生长、变态和提高成活率有明显效果。 第二节光合细菌的培养方法 一、培养方式 光合细菌的大量培养通常采用全封闭式厌气光照培养和开放式微气光照培养两种方式。 （一）全封闭式厌气光照培养 全封闭式厌气光照培养是采用无色透明的玻璃容器或塑料薄膜袋，消毒后装入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，使整个容器均被液体充满，加盖（或扎紧接口）， 造成厌气的培养环境，置于有阳光的地方或用人工光源进行培养，定时搅动，在适宜的温度下，一般经过5～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时可采收或进一步扩大培养。 （二）开放式微气光照培养 开放式微气光照培养一般采用容量为l00～200升的塑料桶为培养容器。在桶底部装一气石，培养时微充气、使桶内的光合细菌呈上下缓慢翻动。在桶的正上方距捅面30厘米左有装一有罩的白炽灯泡，使被面照度达2000 lx左右。培养前先把容器消毒，加入消毒好的培养液，接入20％～50％的菌种母液，照明，微充气培养。在适宜的温度下，一般经7～10天的培养，即可达到指数生长期高峰，此时，进行采收或近一步扩大培养。 两种培养方式相比，以厌气培养方式较为理想，微气培养方式虽然设备比较简单，易于大量培养，但杂菌污染程度大，培养达到的菌细胞密度低。 二、菌种分离、保藏 培养光合细菌首先要有菌种。目前，应用于水产养殖业的光合细菌，主要是红螺菌科即紫色非硫细菌中的一些种类。它们共同的特征是具鞭毛，能运动，不产生气泡，细胞内不积累硫磺。光合细菌分离成功的关键在于选择适宜的富集、分离培养基，和提供适于光合细菌生长需要的厌气环境及适宜的温度、光照条件。 （一）采样 红螺菌科细菌可用有机物作为光合作用的供氢体兼碳源，广泛分布在被有机物污染的地方，如河底、湖底、海底、水田、沟渠和污水塘的泥土以及豆制品厂、淀粉厂和食品工业 等废水排水沟处呈橙黄色或粉红色的泥土中。浅水处直接用杯舀取少量泥土作样品，深水处借用采水器和采泥器采样。 （二）富集培养 富集培养均采用液体培养基。将采回的样品(土壤或水)装入玻璃圆筒或大型试管或具塞的磨口玻璃瓶中，倒入配制好的培养液，充分搅拌。为造成厌气环境，在玻璃圆筒或大型
光合细菌的分离、培养和鉴定 摘要：从南湾水库大坝下层水域取水样获得一株光合细菌。采用多种培养基分离方法分离出纯培养物。进行了菌落形态学观察和亚显微观察。于不同条件下培养后分别测定光密度和生长曲线。实验证实分离到的菌种为沼泽红假单胞菌。 关键词：生长曲线；沼泽红假单胞菌；光合细菌 The separation and culture and identified of photosynthetic bacteria Abstract:A strain sample of photosynthetic bacteria was got from the lower water in South Bay Reservoir. using a variety of separation methods to get pure cultures. It was cultured with various medium to culture the pure strains. Transmission election micrographs and microscope were observed of the strain. The optical density (OD) and the growth curve were measured under different conditions. The results suggested that the strain was Rhodopseudomonas palustris. Keywords:Colony and cell; Growth curve; Rhodopseudomonas palustris; Photosynthetic bacteria 引言 光合细菌由于碳、氮代谢途径和光合作用机制的独特性和其生理类群的多样性, 而被大量关注。多年来, 光合细菌一直被作为研究光合作用以及生物固氮作用机理的重要材料。经过研究发现光合细菌在环保、农业、医药等方面均有较高的应用价值。下面就光合细菌目前的开发应用研究近况作一概述。 光合细菌细胞营养价值极高。首先，光合细菌细胞干物质中蛋白质含量高达60%以上, 比目前生产的单细胞蛋白酵母中蛋白质的含量还高。而且其蛋白质氨基酸组成齐全, 是一种优质蛋白源。其次，光合细菌细胞含有多种维生素, 特别是B族维生素, VB12、叶酸、泛酸、生物素的含量远远高于酵母菌。另外, 光合细菌细胞还含有大量的类胡萝卜素、辅酶Q等活性物质。因此, 光合细菌具有很高的营养价值。在水产养殖中, 光合细菌可被用于饵料或饲料添加剂。光合细菌促进鱼虾的生长, 无论是成活率或是产量的提高均可达10%-40%以上。同时，光合细菌还具有防治鱼虾疾病,净化养殖场所水质等方面的功能。使用光合细菌喂养的家禽, 成活率可提高5%-7%, 料肉比降低33%左右，肉鸡增重15%-17%, 产蛋率提高12.7%。而且所产
146种培养基配方 1、牛肉膏蛋白胨培养基（培养细菌用） 牛肉膏3g 蛋白胨5g 氯化钠10g 琼脂15~20g pH 7.0~7.2 水1000mL 2、2、高氏（Gause）1号培养基（培养放线菌用） 可溶性淀粉20g 硝酸钾1g 氯化钠0.5g 磷酸氢二钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 琼脂20g 水1000mL pH 7.2～7.4 配制时，先用少量冷水将淀粉调成糊状，倒入煮沸的水中，在火上加热，边搅拌边加入其他成分，溶化后，补足水分至1000mL。121℃灭菌20min。 查氏（Czapek）培养基（培养霉菌用） 硝酸钠2g 磷酸氢二钾1g 氯化钾0.5g 硫酸镁0.5g 硫酸亚铁0.01g 蔗糖30g 琼脂15~20g 水1000mL pH 自然 121℃灭菌20min。
4、马丁氏（Martin）琼脂培养基（分离真菌用） 葡萄糖10g 蛋白胨5g 磷酸二氢钾1g 七水合硫酸镁0.5g 1/3000孟加拉红 100mL （rose bengal，玫瑰 红水溶液） 琼脂15—20g pH 自然 蒸馏水800mL 112℃灭菌30min。 临用前加入0.03%链霉素稀释液100mL，使每毫升培养基中含链霉素30μg。 5、马铃薯培养基（简称PDA）（培养真菌用） 马铃薯200g 蔗糖（或葡萄糖）20g 琼脂15—20g pH 自然 培养基的配制：马铃薯去皮，切成块煮沸30min，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，熔化后补足水至1000mL。121℃灭菌30min。 6、麦芽汁琼脂培养基 培养基的配制： (1)、取大麦或小麦若干，用水洗净，浸水6—12小时，至15℃阴暗处发芽，上面盖纱布一块，每日早、中、晚淋水一次，麦根伸长至麦粒的两倍时，即停止发芽，摊开晒干或烘干，贮存备用。 (2)、将干麦芽磨碎，一份麦芽加四份水，在65℃水浴中糖化3—4小时，糖化程度可用碘滴定之。加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (3)、将糖化液用4—6层纱布过滤，滤液如混浊不清，可用鸡蛋白澄清，方法是将一个鸡蛋白加水约20mL，调匀至生泡沫时为止，然后倒在糖化液中搅拌煮沸后再过滤。 (4)、将滤液稀释到5—6波美度，pH约6.4，加入2%琼脂即成。121℃灭菌30min。 7、无氮培养基（自生固氮菌、钾细菌）
芽孢杆菌常用培养基配方 （按理说，该实验的所有培养基都在这了，后红字更为清楚些。。。摘自百度） 一、肉汤琼脂培养基：蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸 馏水1000ml ，琼脂18g 。调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL 液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。 2、或是（J-琼脂培养基：胰蛋白胨5g,酵母膏15g, 磷酸 氢二钾3g,葡萄糖2g, 琼脂20g, 蒸馏水1000ml。调节 PH7.3—7.5Mpa 30min灭菌。） 二、过氧化氢酶测定 1、试剂：3-10%过氧化氢 2、接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下 培养1-2天。 3、试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水， 挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出 现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧 化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。 三、需氧性测定
1、培养基：酪素水解物20g,葡萄糖 10g, ,NACL5g,HOCH2SO3Na1g,HSCH2COONa2g,琼脂15g,蒸馏水1L。调节PH7.2，分装试管，0.06Mpa，30min灭菌，培养基不摆斜面。 2、接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中 （穿刺管底），一般与30 度培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。四、酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的 特点） 1、培养基 （1）脱脂牛奶制备取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。（2）牛奶平板的制备取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时， 速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。 2、接种与观察 将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
填空题： 1.在所有卤虫品系的脂肪酸组成中几乎没有_DHA__，所以对卤虫必须进行营养强化。 2.微藻藻种保藏的基本条件是_低温和弱光__。 3.光合细菌培养基灭菌的方式有_常压蒸汽灭菌和过滤灭菌__和高压蒸汽灭菌。 4.“绿水育苗”是指在育苗过程中利用__微藻___的育苗方式。 5.微藻基因工程育种是引入__外源基因__在微藻内表达以改良微藻遗传品质的方法。 6._褶皱臂尾_轮虫在海水鱼虾蟹苗种培育过程中应用最为广泛。 7.在开放式培养螺旋藻时，施用__碳酸氢铵__可以杀死藻液中的轮虫和原生动物，还可以作为肥料。 名词解释： 1.营养强化:指针对生物饵料的营养缺陷，有意识地通过其摄食特定食物进行改善和补偿，达到营养平衡和满足鱼虾幼体发育的 需求。 2.诱变育种: 是指人为地利用物理的或化学的因素，诱发微藻产生遗传变异，通过对突变体的选择和鉴定，培育出有利用价值 的新品种或新的种质资源 3.单种培养: 指在培养过程中不排除细菌存在的一种培养方式 4.生物饵料:指经过筛选的优质饵料生物，进行人工培养后投喂给养殖对象食用的活的饵料。 5.指数生长期: 指微藻细胞迅速地生长繁殖，细胞数目以几何级数增加的时期. 判断题: 1、所有卤虫卵都是在低盐度下有较高的孵化率。 X 2、小新月菱形藻的最佳培养生态条件和应用途径与三角褐指藻相似。√ 3、角毛藻在低盐度下比高盐度下生长好。√ 4、褶皱臂尾轮虫对低氧含量甚至短时间缺氧的耐受力很强，因此，在高密度培养时，不需要充氧。X 5、微藻对二氧化碳的需要量大，但给微藻培养液过量通入二氧化碳，会对微藻产生毒害作用。√ 6、实验室小型培养微藻，海水的消毒通常采用有效氯消毒。X 7、不同光合细菌体内的颜色在固定的培养条件下具有特征性，因此，每个菌种的颜色不会随着培养条件的变化而发生变化。X 8、刚产出的卤虫休眠卵就具有较高的孵化率。X 9、目前培养的桡足类主要是隶属于猛水蚤目和哲水蚤目的种类。√ 10、轮虫的营养价值与所摄食的饵料有关。√ 选择题: 1、标准的血球计数板盖上盖玻片后，一个大格所在区域的体积是__C_____。 A: 1mm3B: 10mm3C: 0.1mm3D: 0.1mL 2、敌害生物对微藻培养的危害作用主要有_D___。 A:掠食 B:通过分泌有害物质对微藻起抑制和毒害作用 C:竞争营养盐 D: A+B 3、土池培养浮游动物饵料时，采用施放___C______肥料培育浮游植物较佳。 A:无机肥B:有机肥C:无机肥+有机肥D:粪肥 4、红螺菌科光合细菌的获能方式有__D__。 A:光合磷酸化B:氧化磷酸化 C:呼吸作用D: A+B+C 5、用藻类二次强化培养轮虫所需的时间一般至少要在_A___以上。 A:6-12小时B:24-36小时 C:36-48小时D:1-3小时 6、分布于咸水中的枝角类是__A__。 A:蒙古裸腹溞 B:大型溞 C:多刺裸腹溞 D:鸟喙尖头溞 7、在轮虫培养过程中，若以酵母为饵料进行培养，则适宜的轮虫接种量是_C___。 A:0.1个/ml～0.5个/ml B:1个/ml C:14个/ml～70个/ml D:200个/ ml 8、采用酒精对皮肤和器皿表面进行消毒时，常采用的浓度是___C______。 A: 40-45‰B: 60-65‰C: 70-75‰D:80-85‰ 9、在下列藻类中，最佳培养条件为高温、强光和强碱性的是__A__。 A:极大螺旋藻 B:湛江等鞭金藻 C:中肋骨条藻 D:小球藻 10、生产上螺旋藻的培养方式是_A___。
光合细菌的分离培养 光合细菌（Photosynthetic Bacteria，略作PSB）是一大类能进行光合作用的原核生物的总称。除蓝细菌外，都能在厌氧光照条件下进行不产氧的光合作用。研究与应用的实践表明，光合细菌在高浓度有机废水处理与资源化、水产养殖的水质调控与促进健康生长、在农业生产中作为高效活性菌肥等方面，发挥着十分有益的和令人瞩目的作用。关于光合细菌的类群、形态与生理特征、在生态系统中的地位和作用等内容，请参考有关文献与专著。这里仅就光合细菌的分离、培养方法作一介绍。 1光合细菌的富集培养的一般方法 ①分离源 光合细菌四个科-红螺菌科(Rhodospirillaceae)、着色菌科(Chromatiaceae)、绿菌科(Chlorobiaceae)、绿色丝状菌科(Chloroflexaceae)的各种菌，广泛分布于地球生物圈的各处。作为光合细菌的分离源，一般可从富营养化的湖泊、池沼、海滩、以及水田、硫黄泉、灌水土壤、和污水厂活性污泥、畜牧场水沟等厌氧或缺氧环境采样。在较深的水体，可使用采水器采取厌氧层的水。在较浅的地方，可直接用吸管吸取带底泥的水。采样的同时记录水温、pH、有无H2S气味等项内容。将采集到的水样或泥样放在厌氧、低温条件下，带回实验室进行分离。 ②光合细菌富集培养基 用于光合细菌富集培养用的培养基有许多配方，这里仅介绍日本星野氏推荐的基本培养基I和基本培养基II。前者适合于红螺菌科的光合细菌，后者适用于着色菌科和绿菌科的菌。 基本培养基I： KH2PO4 0.5g K2HPO4 0.6g (NH4)2SO4 1.0g MgSO4·7H2O 0.2g NaCl 0.2g CaCl2·2H2O 0.05g酵母浸出汁 0.1g微量元素溶液（见后）1mL 生长因子溶液（见后）1mL蒸馏水1000ml以上配制成的培养基pH值约6.7 根据需要，可在上述培养基中添加一些成分，如富集的是缺少同化型硫酸还原系的菌种，则可在基本培养基I中加入0.01%硫代硫酸钠；如是海洋
光合细菌培养基配方 光合细菌是兼性厌氧的，不同的光合细菌用的培养基不一样我现在就在做关于光合细菌的问题，这几中细菌都是常见的细菌，培养基在许多微生物上后面都有，光合细菌的富集培养基是： NH4Cl0.1g NaHCO3 0.1g KH2PO4 0.02g CH3COONa 0.1-0.5g MgSO4.7HO2 0.02g NaCl0.05-0.2g 三生长因子１ml 微量元素溶液１ml 蒸馏水９７ml ＰＨ７.０ 生长培养基加氮源（谷氨酸钠）和碳源（乙酸．丙酸．丁酸盐等）及可．其他菌的分离只要选择不同的培养基就可以选择分离啊 光合细菌富集纯化详见网易网盘 光合细菌培养基配方 氯化氨1克，磷酸氢二钾0.5克，氯化镁0.2克，氯化钠2克，酵母膏0.1克，水900毫升。 各成份溶解后15磅灭菌20分钟，然后无菌的加入过滤的碳酸氢钠5.0克/50毫升水；50毫升过滤的乙醇。用过滤的0.1N 磷酸调PH=7.0即可。 响应面设计法优化光合细菌培养基配方。培养基成分中醋酸钠和蛋白胨对于光合细菌的生长影响最为显著，最优培
养基配方为：醋酸钠1．145g／L、蛋白胨0．055g／L、碳酸氢钠0．6g／L、硫代硫酸钠0．4g／L、氯化钠0．3g／L、硫酸镁0．1g／L、磷酸二氢钾0．05g／L。在此条件下，光合细菌生长最为良好，经过5d培养以后，培养液OD600可以达到0．5以上 光合细菌(含生产工艺) 优良的光合细菌菌种的外观质量是啥样？ 一般优良的光合细菌菌种和产品的外观质量有以下几点： 1、外观上看比较均匀，基本无上下分层。相反，市场上有许多光合细菌是上下分层的，包括我中心初期的产品也是这样，上层比较清淡，下层则比较深厚，上层颜色浅，下层颜色深，最底层可能还会有一层黑黑的沉淀。 而优秀的光合细菌菌种和产品，上下都是比较均匀的，没有较明显的分层，颜色比较均匀，外观看起来也悦目。（当然，除了培养基溶解时，会与硬水中的重金属离子反应产生的絮装沉淀除外） 这种上下无分层，颜色均匀，不是靠加悬浮剂，或增稠剂而造成的，而是自然培养出来的，不加任何修饰而成的。少数地方，由于水质的原因，可能会产生稍稍的差别。 2、没有粘壁现象。很多市场上的产品都有粘壁现象，即在容器的壁上形成一层红紫色的颜色层，就象是油漆一
146种培养基配方 ——2009年2月1日星期日by尛森蟲1. Acetobacter Medium (醋酸菌培养基) Glucose (葡萄糖) 100g Yeasst extract (酵母膏) 10g CaCO3 20g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) 1000ml Adjust (调) pH to 6.8 适用范围：恶臭醋酸杆菌混浊变种 2. Nutrient Agar (营养肉汁琼脂) Pepton (蛋白胨) 5g Beef extract (牛肉膏) 30g NaCl 5g Agar (琼脂) 15g Distilled water (蒸馏水) Adjust (调) pH to 7.0-7.2 [Note]：When cultivation of Bacillus，5mg of to MnSO4.H2O may be added . It is favorable to promote spore formation . 适用范围：产气气杆菌、粪产碱杆菌、蜡状芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌蕈状变种、地衣形芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、多粘芽孢杆菌、尘埃芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、嗜热脂肪芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌深黑变种、苏云金芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌蜡螟亚种(青虫菌)、苏云金芽孢杆菌戈尔斯德变种、苏云金芽孢杆菌猝倒亚种、产氨短杆菌、黄色短杆菌、谷氨酸棒状杆菌、北京棒杆菌、大肠埃希氏菌(大肠杆菌)、铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)、凸形假单胞杆菌、荧光假单胞菌、弯曲假单胞菌、恶臭假单胞菌、假单胞杆菌、藤黄八叠球菌、亚黄八叠球菌、尿素八叠球菌、金黄色葡萄球菌、运动发酵单孢菌 3. Azotobacter Medium (固氮菌培养基) KH2PO4 0.2g K2HPO4 0.8g MgSO4.7H2O 0.2g CaSO4.2H2O0.1ｇ Na2MoO4.2H2O Trace(微量) Yeast axtract(酵母膏) 0.5g Mannitol(甘露醇) 20g FeCl3 Tract(微量) Distilled water (蒸馏水) 1000ml Agar (琼脂) 15g Adjust (调) pH to 7.2 适用范围：固氮菌、胶质芽孢杆菌 4. Corn Meal Medium (玉米粉培养基) Maize flour (玉米粉) 5g Peptone (蛋白胨) 0.1g Glucose (葡萄糖) 1g Tap water (自来水) 1000ml [Note]:Boil the mixture in autoclave at 121℃for 1 hr. distribute the medium into 18ⅹ18 mm tubes , each contains 10 ml of the li quid , then autoclave at 121℃for 1 hr . again (15磅蒸煮1小时,分装入18ⅹ18毫米试管,每管深度达6厘米。15磅再次灭菌15小时。) 5. Lactic-bacteria Medium I (乳酸菌培养基I ) Yeast extract (酵母膏) 7.5g Peptone (蛋白胨) 7.5g Glucose (葡萄糖) 10g KH2PO4 2g Tomato juice (西红柿汁) 100ml Tween (吐温) 80 0.5ml Distilled water (蒸馏水) 900ml pH 7.0 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌)、嗜热乳酸链球菌 6. Lactic-bacteria Midium Ⅱ(乳酸菌培养基Ⅱ) Lacto-casein peptone (乳酪蛋白胨) 10g Beef extract (蛋白胨) 10g Yeast extract (酵母膏) 5g Glucose (葡萄糖) 5g Tween (吐温) 80 1g K2HPO4 2g Na-acetate (醋酸钠) 5g Diamine citrate (柠檬酸二胺) 2g MgSO4.7H2O 0.2g MnSO4.H2O 0.05g Distilled water (蒸馏水) 1000m pH 6.5-6.8 适用范围：植物乳杆菌(胚芽乳杆菌) 7. Peotone Glucose Yeast extract Medium PGY (蛋白胨、酵母膏、葡萄糖培养基)
1、Ampicillin□组份浓度100mg/ml Ampicillin （100mg/ml）□配制量50mL □配制方法1. 称量5g Ampicillin置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 2、IPTG □组份浓度24mg/mL IPTG （24mg/mL）□配制量50mL □配制方法1. 称量1.2g IPTG置于50mL离心管中。 2. 加入40mL灭菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 用0.22μm滤膜过滤除菌。 4. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 3、X- Gal□组份浓度20mg/mL X- Gal （20mg/mL）□配制量50mL □配制方法1. 称取1g X-Gal置于50mL离心管中。 2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。 3. 小份分装（1mL/份）后，-20℃保存。 4、LB培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone，0.5％（W/V）Yeast Extract，1％（W/V）NaCl □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g；Yeast Extract 5g ；NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 高温高压灭菌后，4℃保存。 5、LB/Amp培养基□组份浓度1％（W/V）Tryptone 0.5％（W/V）Yeast Extract 1％（W/V）NaCl 0.1mg/mL Ampicillin □配制量1L □配制方法1. 称量下列试剂，置于1L烧杯中 Tryptone 10g Yeast Extract 5g NaCl 10g 2. 加入约800mL的去离子水，充分搅拌溶解。 3. 滴加5N NaOH（约0.2mL），调节pH值至7.0。 4. 加去离子水将培养基定容至1L。 5. 高温高压灭菌后，冷却至室温。 6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均匀混合。 7. 4℃保存。 6、TB培养基□组份浓度1.2％（W/V）Tryptone
光合细菌的培养及应用技术 1 引言 光合细菌（photosynthetic bacteria,简称PSB）是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源，进行不放氧光合作用的细菌，广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中，依据《伯杰细菌鉴定手册》（第九版）可分为6 个类群，27 个属。不产氧光合作用的红螺菌目分为紫细菌（purple bacteria）、绿细菌（Greenbacteria）和日光杆菌属（Heliobacteria）、红色杆菌属（Erybrobacter）。其中紫细菌中包含有红螺菌科（Rhodolspirillaceae）、着色菌科（Chromatiaceae）、外硫红螺菌科（Eceothiorhodospiraceae），包含16属49种。其中在生产上有意义的红螺菌科包括红螺菌属、红假单胞菌属和红微菌属[1]。PSB 均为革兰氏阴性细菌，一般为球型、卵形、杆形、弧形、螺旋形、环形、半环形丝形，也可随培养条件和生长阶段而改变，大部分单个存在。PSB的一般菌体组成及营养成分见表1[2].表1 光合细菌菌体的组成与小球藻等比较Tab. 1 Components comparison betweenphotosynthetic bacteria and ChlorellaP S B 含有较高的优良蛋白质，粗蛋白含量为 65.45%，含有17 种氨基酸而且消化率较高；粗脂肪约7%；可溶性糖类约20%；粗纤维约3%[1]；维生素B12 含量是酵母的200 倍、小球藻的4 倍[2]，生物素含量也比较丰富；菌体的脂类成份含有大量的叶绿素、类胡萝卜素和辅酶Q(泛醌),迄今已从PSB中分离出80 种以上的类胡萝卜素。叶绿素和类胡萝卜素对养殖生物的健康生长，增强对疾病的抵抗力有很大的益处。辅酶Q4 是与生命活动有重大关系的生理活性物质，PSB 中的含量特高，是酵母的13 倍。以上特点决定了PSB 可做为畜禽、鱼虾的饲料。但PSB 中缺乏ω3 系列20 碳以上的高度不饱和脂肪酸，单独作为仔鱼的初期饵料时，需与其它富含高度不饱和脂肪酸的饵料同时使用。 2 光合细菌的培养 水产养殖市场对PSB 活体菌种的需求缺口很大，为了满足水产养殖对PSB 活体菌种的需求，PSB的生产方法有很多，但是到目前为止，还没有进行产业化生产PSB的报道。冯云等[3]用50L的塑料桶来厌氧培养PSB，使培养密度达到2.1 × 109 个/ml；杨绍斌[4]在塑料大棚内建大小2000～5000L 的水池使其厌氧发酵富集扩大培养，培养液中含PSB 活菌数可达5 × 106 个／毫升；鄂春宇[5]用塑料薄膜袋培养PSB，培养密度达到2.5～3×105个/ml,12个月生产50 多吨，但是在PSB的密度检测时，很容易染菌。由中科院开发的PSB 大规模生产工艺，产品含菌量达到5 × 1010个／毫升，保质期3 个月以上，并可根据客户要求，设计和建设不同规模的生产线[6]。 2.1 菌种 菌种可从采集的池塘底泥或海水中重复富集、分离纯化获得.若用保存下来的菌种，在培养前必须提纯复壮，才能有效地进行扩大培养。光合细菌的生产需要采用优良菌种，要求菌种活性高，菌液中菌体分布均匀、无下沉现象，目前养殖中使用的PSB多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株[7]。 2.2 培养基及培养条件 PSB 培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外，还需要一定量的镁、钙、钠和有关的微量元素，将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。本实验室采用酵母膏、蛋白胨培养基，基本配方为:CaCL2 0.3g，MgSO4·7H2O0.5g，酵母膏3g，蛋白胨3g，蒸馏水1000ml，pH: 6.8. 如需制固体培养基再加2%琼脂。培养温度：25℃～30℃最佳，光照强度：2000LX～5000LX，PH：7.5～8.5 最佳。
常用培养基配方（微生物学与微生物检验学部分） 渤海大学生物与食品科学学院 2006年3月
目录 01糖发酵管 02 ONPG培养基 03西蒙氏柠檬酸盐培养基 04缓冲葡萄糖蛋白胨水(MR和VP试验用) 05克氏柠檬酸盐培养基 06丙二酸钠培养基 07葡葡糖铵培养基 08Hugh－Leifson培养基(O/F试验用) 09 马尿酸钠培养基 10营养明胶 11苯丙氨酸培养基 12 氨基酸脱羧酶试验培养基 13蛋白胨水(靛基质试验用) 14 硫酸亚铁琼脂(硫化氢试验用) 15 尿素琼脂 16 氰化钾(KCN)培养基 17 氧化酶试验 18 硝酸盐培养基 19 细胞色素氧化酶试验 20 过氧化氢酶试验 21 过氧化物酶试验 22 磷酸盐缓冲液 23明胶磷酸盐缓冲液 24 乳酸－苯酚溶液 25 肉浸液肉汤 26肉浸液琼脂 27牛肉(或牛心)消化汤 28血消化汤 29豆粉琼脂 30血琼脂 31营养琼脂 32营养肉汤 33 乳糖胆盐发酵管 34乳糖发酵管 35 EC肉汤 36 缓冲蛋白胨水(BP) 37 氯化镁孔雀绿增菌液(MM) 38 四硫磺酸钠煌绿增菌液(TTB) 39 四硫磺酸钠煌绿增菌液(换用方法) 40 亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC) 41 GN增菌液
42 肠道菌增菌肉汤 43 亚硫酸铋琼脂(BS) 44 DHL琼脂 45 HE琼脂 46 SS琼脂 47 WS琼脂 48 麦康凯琼脂 49 伊红美蓝琼脂(EMB) 50三糖铁琼脂(TSI) 51 三糖铁琼脂(换用方法) 52 克氏双糖铁琼脂(KI) 53 克氏双糖铁琼脂(换用方法) 54 葡萄糖半固体发酵管 55 5%乳糖发酵管 56 CAYE培养基 57 Honda氏产毒肉汤 58 Elek氏培养基(毒素测定用) 59 氯化镁孔雀绿羧苄青霉素培养基 60 胰蛋白胨水 61 Rustigian氏尿素培养液 62 氯化钠结晶紫增菌液 63 氯化钠蔗糖琼脂 64 嗜盐菌选择性琼脂 65 3.5%氯化钠三糖铁琼脂 66 氯化钠血琼脂 67 3.5%氯化钠生化试验培养基 68 改良磷酸盐缓冲液(小肠结肠炎耶尔森氏菌专用) 69 CIN－1培养基 70 嗜盐性试验培养基 71 改良Y培养基 72 改良克氏双糖 73 快速硫化氢(H2S)试验琼脂 74 DNA酶甲基绿琼脂(DTA) 75 Cary－Blair氏运送培养基 76 Skirrow氏培养基 77 TTC琼脂 78 甘氨酸培养基 79 改良磷酸盐缓冲液 80 氯化镁孔雀绿肉汤 81 胰酪胨大豆肉汤 82 Baird－Parker氏培养基 83 7.5%氯化钠肉汤 84 匹克氏肉汤 85 甘露醇卵黄多粘菌素琼脂
光合细菌的优化培养和生长动力学 摘要:对光合细菌(PSB)培养的最适温度、光照、pH、溶解氧等条件进行了较系统的研究.通过正交试验,得出PSB生长的 最适条件为光照度3000 lx、微好氧、30℃、pH 7.0.在此基础上,建立了PSB在模拟味精废水条件下以乙酸钠为底物的生长 动力学模型,其参数为:饱和常数Ks=0.20-0.24 g·L-1,最大比生长速率Lmax=0.038-0.044 h-1,试验表明该模型能够较 好地描述PSB的生长情况. 关键词:光合细菌;正交试验;优化培养;动力学模型 Optimal cultivation and growth kinetics of photosynthetic bacteria Abstract: This paper gives a detail study on the optimal growth conditions of temperature, illumination, pH and dissolved oxygen for photosynthetic bacteria. With the orthogonal experiment, the optimal culture conditions for the growth of photosynthetic bacteria were determined: illumination intensity 3000 lx, faintly aerobic, 30℃, pH 7.0. Under the optimal cultivation and the simulated monosodium-glutmate wastewater conditions, a kinetics model on the growth of photosynthetic bacteria in the substrate of CH3COONa was set up. The parameters in the model are as follows: the saturation constantKs0. 20-0.24 g·L-1and the maximum specific growth rateLmax0.038-0.044 h-1. The experiment results showed that this model could describe the growth data of PSB very well. Key words: photosynthetic bacteria; orthogonal experiment; optimal cultivation; kinetics model 光合细菌(photosynthetic bacteria,简称PSB)是自然界中广泛存在,比较古老的细菌类群,是一大类能 进行光合作用的原核生物的总称[1].近年来,随着人们对PSB形态、结构、生理生化以及生态等特性研究 和认识的不断深入,发现PSB,特别是其中的红螺菌科能利用多种硫化物或有机物作为其光合作用的供氢 体和碳源,在厌氧光照、好氧光照、甚至好氧黑暗环境中都能很好地增殖,且能耐受很高盐度和浓度的有机 物,具有很强的分解、去除有机物的能力,显示其在高浓度、高盐度有机废水处理中的独特优势和广阔应用 前景,成为废水处理技术研究的一个新方向[2].同时,因其菌体富含蛋白质和胡萝卜素,可作为单细胞蛋白 应用于种植业、养畜业和渔业以及作为各种食用色素[3-5].PSB的上述特点,吸引着人们对其进行发掘、研 究和商品化生产.研究PSB的优化培养条件和生长动力学,对其规模化生产和资源化开发利用
光合细菌的培养及其在水产养殖中的应用 光合细菌简称, 是一群能在厌氧光照或好氧黑暗条件下利用有机物作供氧体兼碳源, 进行不放氧光合作用的细菌, 广泛分布于水田、湖沼、江河、海洋、活性污泥和土壤中近年来, 光合细菌应用于水产养殖业并取得显著效果。我所自年开始光合细菌的培养与应用研究, 在对虾和中华鳌养殖、对虾和泥蜡人工育苗中试用, 均取得较好的效果。 本文根据我们的研究实践, 综合国内外有关文献, 概述光合细菌的培养技术及其在水产养殖中的应用状况。 1. 光合细菌的培养 1.1 菌种菌种可从采集的池塘底泥中重复富集、分离纯化获得如用保存下来的菌种, 在培养前必须提纯复壮, 才能有效地进行扩大培养。目前养殖中使用的光合细菌多为红螺菌科和一部分着色菌科的复合菌株, 因为复合型菌株能利用多种碳源, 易于培养, 能更为广泛有效降解水中低分子有机物。 1.2 培养基光合细菌培养中除碳、氮、磷等主要营养元素外, 还需要一定的镁、钙、钠及有关微量元素, 将所需的营养元素按一定的比例配成适于菌体生长繁殖的培养基。基本配方为氯化铵0.2%、碳酸氢钠0.1%、醋酸钠0.3%、磷酸二氢钾0.03%、硫酸镁0.01%、酵母膏0.05%、蛋白胨0.05%、微量元素母液0.1%。如制固体培养基再加20%琼脂。 1.3 培养生态条件 1.3.1 pH值：光合细菌生长的酸碱度范围为微酸性到中性, pH值在6.5一7.5, 在培养过程中, 需要定时测定培养液的pH值变化。 1.3.2 光照室内用25一60W白炽灯作光源, 注意培养物不能离灯泡太近。光强度一般为1000-2000Lux。 1.3.3 温度光合细菌适温为10一35℃ , 最适25一28℃。据我们观察, 光合细菌能耐较高温度, 在40一42℃时仍生长正常。 1.4 培养方法光合细菌的生产性培养一般采用三级培养法。 一级培养采用试管或小型盐水瓶, 其生长培养基需先经高压灭菌（温度121℃、压力15磅、时间20分钟）, 然后在无菌条件下, 按规程进行接种, 接种量10%一20%, 接种后于适宜温度与光照条件下进行培养。 二级培养采用5000-20000毫升玻璃瓶, 生长培养基需煮沸消毒, 待冷却到25℃左右接种, 接种量10%一20%。 三级培养采用20一25公斤塑料桶或玻璃钢桶, 培养液用次氯酸钠消毒12一24小时, 再用硫代硫酸钠还原后接种培养。接种量一般为20%--30%。 1.5 培养场所一般在室内控温光照条件下培养, 一级试管种置于培养箱内。当自然温度适宜时, 可采用塑料薄膜大棚培养。