第三章细胞生物学研究方法
07级园艺生物技术1班（0602曹红霞，0603陈浩琴，0605陈玮）
一．填空题
1.在细胞生物学中核酸与蛋白质成分的分析和序列测定中，研究特异DNA、RNA
片段和特异蛋白质常用_________、_________、_________。
2.肉眼分辨率一般只有_______，光学显微镜的分辨率为_______，电子显微镜
则达_______。
3.相差显微镜与普通光学显微镜最主要的不同点是在____后装有一块相差板。
4.激光扫描共焦显微镜指___________和___________同时聚焦到同一点上。
5.超薄切片样品制备的步骤：__________、__________、切片、染色。
6.负染色是用__________对铺展在载网上的样品进行染色，吸去多余染料，样
品干燥后，整个载网上都铺上了一薄层重金属盐。
7.任何动物细胞培养的培养均需从_____________做起。
8.为了有利于动物细胞的贴壁生长，在进行各种细胞培养时，培养液中要加一
定量的___________。
9.根据细胞系的生长时长，可将细胞系分为___________，___________两种。
10.用悬浮法培养细胞最主要的优点是________________。
11.目前植物细胞培养的两种主要类型是_________，_________。
12.模式生物的一般特点是_____________________。
13.克隆羊的成功出世主要取决于________________技术。
14.模式生物中，被誉为“植物界的果蝇”的植物是_______________。
15.冷冻蚀刻电镜技术主要用来观察____________和____________。
16._______与_______相结合是当代细胞生物学研究中常常采用的试验方法。
17.密度梯度离心常用的介质有__________，__________，__________。
18.最常见的研究细胞内蛋白质分子定位的重要技术是__________和
___________，而对蛋白质进行体外分析定性则通常采用____________，____________，____________，____________等技术。
19.免疫染色就是_________________的过程。
20.免疫电镜技术可分为____________，____________，____________。
21.原位杂交技术主要用于_____________________________。
22.用________________技术研究生物大分子在细胞内的合成动态。
二．判断题
1.光学显微镜主要由光学放大系统、照明系统、机械和支架系统三部分组成。（）
2.相差显微镜的样品不需要染色，但不可以观察活细胞。（）
3.荧光共振能量转移用于检测两种蛋白之间的直接相互作用，两个蛋白的距离
越近CFP所发的荧光被YFP接收的量就越多，检测器所接收到的荧光就越少。
（）
4.电镜的分辨本领与他的分辨率等同。（）
5.冷冻蚀刻电镜技术可显示出镶嵌在膜脂中的蛋白颗粒。（）
6.两个细胞融合后产生的细胞是单核细胞.。( )
7.冷冻蚀刻电镜技术是对喷镀有金属及碳的样品进行电镜观察。（）
8.冷冻蚀刻电镜技术中样品进行断裂的部位往往是膜脂双分子层的亲水端。（）
9.扫描电子显微镜主要用来观察样品表面的形貌特征。（）
10.目前人们虽还不能用扫描电子显微镜来观察活的生物样品，但可以用它来观
察细胞的全貌。( )
11.在细胞匀浆物中，较小的细胞组分需要更大的离心力才能使其沉淀。（）
12.差速离心用于分离密度不同的细胞组分。（）
三．选择题
1.用于研究蛋白质之间相互作用的实验方法是（）
A.酵母双杂交技术
B.RNA干涉基因打靶技术
C. Southern技术
D.蛋白免疫印迹技术
2.对显微镜来说，最重要的性能参考数是（）
A.分辨率
B.放大倍数
C.结构组成
D.保护性
3.显微镜分辨率的高低与以下哪个因素无关（）
A.光波长
B.物镜镜口角
C.介质折射率
D.放大倍数
4.什么使细胞内DNA着色，从而特异性的显示细胞核所在部位（）
A.苏木精 B .伊红 C.锇酸
5.与普通光学显微镜不同的是荧光显微镜增加了两套（）
A.相差板
B.滤光片
C.胶卷
D.滤片
6.植物基因工程的基础是（）
A.转基因植物细胞的培养与分化的研究
B.细胞融合技术
C.细胞拆合技术
7.（1）以下各反应中可以特异显示DNA分布的反应是（）
（2）可确定多糖存在的反应是（）
A.PAS反应
B.米伦反应
C.福尔根反应
D.重氮反应
8.可作为电镜原位杂交的探针标记物的是（）
A.同位素
B.生物素
C.荧光素
四．简答题
1.电子显微镜与光学显微镜的基本区别是什么？
2.绿色荧光蛋白（GFP）的主要应用是什么？
3.简述连续细胞系的特点。
4.单克隆抗体技术最主要的优点是什么?
5.什么是密度梯度离心？它又可分为哪两种，各种又分别用于分离怎样的细
胞组分？
6.试举出三种能检测样品中蛋白质成分的方法，并说出它们各自所能检测的
部位。
7.免疫电镜技术中最关键的问题是什么？
8.什么是放射自显影技术？它包括哪两个主要步骤？
9.流式细胞仪的主要应用有哪些？
参考答案
一．1.A 2.A 3.D 4.A 5.B 6.A 7.（1）C（2）A 8.B
二．1.Southern杂交,Northern杂交,蛋白免疫印迹技术 2.0.2mm,0.2um,0.2nm 3.在物镜后 4.物镜,聚光镜 5.固定,包埋 6.重金属盐 7.传代细胞
8.小牛(胎牛)血清 9.有限细胞系,永生（连续）细胞系 10.可获得大量细胞
11.单倍体细胞培养,原生质体培养 12.个体较小,容易培养,操作简单,生长繁
殖快 13.细胞拆合与显微注射 14.拟南芥 15.膜断裂面的蛋白质颗粒,膜面
结构
16.形态学观察,细胞成分分析 17.蔗糖,多聚蔗糖,氯化铯 18.免疫荧光,免疫
电镜,免疫印迹,放射免疫沉淀,蛋白质芯片,质谱分析 19.抗原—抗体反应 20.
免疫铁蛋白技术,免疫酶标技术,免疫胶体金技术 21.细胞内特异核酸序列的定
位与定性 22.放射自显影技术
三．1.对 2.错 3.对 4.错 5.对 6.错 7.错 8.错 9.对 10.错 11.对 12.对
四．1.（1）电镜使用的光源是波长较短的电子束而光学显微镜用可见光；（2）
光学显微镜使用电磁透镜聚焦，而光学显微镜使用玻璃透镜；（3）电镜镜筒要求
搞真空而光学显微镜不需要；（4）电镜的图像用荧光屏显示或用感光胶片作记录，
利用样品对电子的散射形成明暗反差，光学显微镜利用样品对光的吸收形成明暗
反差和颜色变化。
2.GFP的主要应用: 对活细胞中的蛋白质进行准确定位及动态观察，如可实时原
位跟踪特定蛋白在细胞生长、分裂、分化过程中的时空表达。GFP基因与分泌蛋
白基因连接后转染细胞, 可动态观察该分泌蛋白分泌到细胞外的过程。GFP基因
与定位于某一细胞器特殊蛋白基因相连,就能显示活细胞中细胞核、内质网、高
尔基体、线粒体等细胞器的结构及病理过程。
3.答:细胞发生了遗传突变,并带有癌细胞的特点;染色体明显改变,一般呈亚二
倍体或非整倍体，失去接触抑制，易传代培养。
4.答：可以用不纯的抗原分子制备出针对某一抗原分子上特异抗原决定簇的单克隆抗体。
5.密度梯度离心是将要分离的细胞组分小心地铺放在密度逐渐增加的，高溶解性的惰性物质形成的密度梯度溶液表面，通过重力或离心力的作用使样品中不同组分以不同的沉降率沉降，形成不同的沉降带。它又可分为速度沉降和等密度沉降两种。速度沉降主要用于分离密度相近而大小不一的细胞组分；等密度沉降用于分离不同密度的细胞组分。
6.（1）米伦反应，氮汞试剂与组织中的蛋白质侧链上的酪氨酸残基反应，形成红色沉淀。（2）重氮反应，氢氧化重氮与酪氨酸，色氨酸，组氨酸反应形成有色的复合物。（3）蛋白质中的—SH基可用形成硫醇盐共价键的试剂进行检测。
7.免疫电镜技术中最关键的问题是既要保持样品中蛋白的抗原性，又要尽量保存样品的精细结构。
8.放射自显影技术是利用放射性同位素的电离辐射对乳胶的感光作用，对细胞内生物大分子进行定性，定位与半定量研究的一种细胞化学技术。它包括两个主要步骤：同位素标记的生物大分子前体的掺入和细胞内同位素所在位置的显示。
9.可以定量地测定某一细胞中的DNA，RNA或某一特异的标记蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞的数量；还可将某一特异染色的细胞从数以万记的细胞群体中分离出来，以及将DNA含量不同的中期染色体，甚至含X或Y 染色体的精子分离出来。
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