生物化学与分子生物学实验技术
实验安全与实验基本操作
2实验室安全规则
3实验室安全事故案例
●1995年9月香港科技大学化学系大四学生梁同学因吸入别的同学泼洒的酸
酐而不治身亡。
●1997年香港科技大学物理系访问学者因未按规定使用通风橱造成他人肺部
伤害而永不被香港各大学录用。
4推行实验室安全规则的目的
1.为了达到研究所研究学习安全之目的。
2.为了满足人性安全感的基本需要。
3.为了人性的尊严─生命是无价的。
4.减少工作中产生灾害，确保全教职工和学生之安全及健康。
5. 保护大家共同的环境。
5安全事故原因分类分析
天灾
占2％
凡不知、不顾、不理、不能、粗心、迟钝、疲劳、失检、情绪各种内在外在的行为
不安全行为
人为因素
占98%
工作场所中，工作环境、设备设施对人所产生之危险因素
不安全环境
6专业性实验室安全工作守则
●化学药品的操作
●放射性物质（另有专门培训）
●废料处理
●紫外线的接触
●化学药品溢泼的处理
7实验室常用化学试剂的使用安全
8二甲苯
●无色液体，有芳香气味，易挥发。用来制造、染料、塑料和药物。属低毒类，
对皮肤和黏膜有刺激作用，高浓度有麻醉作用。神经系统会受损害，还会使肾和肝受时性损伤。
●眼毒性：蒸气会刺激眼睛，液体导致严重刺激，发红肿胀和灼伤。通常影响
是暂时性的。皮肤毒性：产生灼伤感、干燥。可以用微温的缓慢流水冲洗至少20分钟，用无摩擦性的肥皂从皮肤上洗去二甲苯。
●易燃，有爆炸危险。属于甲类防火危险物质。用二氧化碳或干粉或泡沫灭火
剂，不宜用水。
9三氯甲烷
●无色透明易挥发液体，有特殊的香甜气味。沸点：61.2℃，医药上用作麻醉
剂。也用作萃取剂和溶剂。
●有很强的麻醉作用，在光的作用下，能被空气中的氧反应生成氯化氢和剧毒
的光气。通常加入1—2%乙醇，使生成的光气与乙醇作用而生成碳酸乙酯，以消除其毒性。
●吸入高浓度蒸汽时，开始刺激眼、口腔、鼻孔粘摸，发生流泪、感觉麻醉、
呕吐、痉挛、直到昏睡、不省人事。
●在空气、水分和光的作用下，酸度增加，因而对金属有强烈的腐蚀性
10乙醚
●透明、无色、易挥发有芳香刺激性气味的液体。沸点：34.6℃；对人体有麻
醉性能。当吸入含量为3.5%时，30~40分钟就可失去知觉。
●人体过量吸入，会引起严重的急性中毒。呼气中带醚味，并出现呕吐、出汗、
喷嚏、咳嗽、头痛、记忆力减退、无力、兴奋。
●微溶于水，易溶于盐酸，能与醇、醚、石油醚、苯、氯仿等有机溶剂混溶。
应储存于阴凉、干燥、通风的低温库房内，库温最好控制在25℃以下。远离热源、火种，避免阳光直射。
●本品易燃。与强氧化剂反应能起火爆炸。在空气中与氧长期接触或受光照会
生成不稳定的过氧化物，受热能自行着火爆炸。着火时，可用干粉、泡沫、二氧化碳、沙土灭火。用水灭火无效，但可用水保持火场容器冷却。
11乙醇
●无色有酒味，易挥发的澄清液体。沸点78.5℃：用于溶剂、清洗剂、分析
试剂等。属微毒类，对眼睛黏膜有轻微刺激作用。
●乙醇可使皮肤发干，长期受大剂量作用时，可使神经系统、消化器官等发生
严重的器质性疾病。
●易燃，手热或遇明火有燃烧爆炸危险，燃烧时，发出兰色火焰。蒸气能与空
气形成爆炸性混合物，在火场中，受热的容器有爆炸的危险。着火时，用二氧化碳、雾状水、干粉、1211或抗泡沫灭火。用水冷却火场中的容器，驱散蒸气，赶出溢出液体，使其稀释成为不燃性混合物
12冰醋酸
●有酸性气味的无色透明液体，沸点：118.1℃。用于制造氯乙烯塑料、醋酐、
有机醋酸酯、醋酸盐（铅、铝、铜等）及醋酸纤维；也可用于染料、制药、罐头食品、食品防腐、色素生产等工业。
●属低毒类，可经消化道、呼吸道、皮肤吸收，对眼、皮肤和上呼吸道有刺激
作用。眼睛接触：引起眼睑水肿、结膜充血；皮肤接触：轻者出现红斑，重者出现化学灼伤，有水泡和疼痛。
●吸入：当空气中蒸气浓度不明时，应佩带有黄色色标滤毒盒（罐）的防毒面
具。使用时应有良好的通风条件和有效的防护用品，如有醋酸的泄露或溅污，应以碱液中和，然后用水冲洗，经稀释的污水排入废水系统。
13盐酸
●透明或黄色冒烟液体，蒸气有强烈刺激味。易溶于水，用于油井活化剂、矿
石还原剂，食品处理剂、清洁剂、锅炉除垢剂及化学中间体。
●对皮肤和黏膜有较强刺激腐蚀作用。眼睛接触：导致刺激、严重灼伤和失明。
皮肤接触：浓溶液（大于38%）导致严重灼伤。
●与强碱类（如氢氧化钠）起激烈反应，与硫化物、磷化物、氰化物、乙酯基
化合物、氟化物、硅化物和碳化物起反应，释放出易燃和有毒的气体，与氧化剂（如过氧化物）能起激烈反应。
14注意
●实验过程中产生的废气、废液、废渣大多数是有害的，必须经过处理才能排
放。少量有毒气体可以通过排风设备排出室外，被空气稀释。毒气量大时，必须处理后再排出。如氧化氮、二氧化硫等酸性气体用碱液吸收。可燃性有机废液可于燃烧炉中通氧气完全燃烧。
●大家在实验室里，接触到的化学试剂多半都有危害性，所以每个人都应该
注意保护自己，注意规范操作，同时对别人也是一种保护，而不能因为图省事或者别的什么原因而放松对安全的注意。
15实验误差
16二者区别
●误差：在正确测量的前提下，所测得的数值和真实值之间的差异。
●特点：不可避免
●原因：例如人的眼睛不能对量筒的刻度线观察得十分精准
●错误：不正确的结果
●特点：可以避免
原因：不遵守测量仪器的使用规则，或读取、记录测量结果时粗心等原因造成的。
17误差的种类
●绝对误差及相对误差
●系统误差：方法误差，仪器/试剂误差，操作误差
●随机误差
181.绝对误差（absolute error）：
绝对误差是测量值与真实值之差。
δ= x?μ
(δ：绝对误差；x：测量值；μ：真实值）
绝对误差是以测量值的单位为单位，可以是正值，也可以是负值。测量值越接近真实值，绝对误差越小。
真实值是一个可以接近而不可达到的理论值。上式可以写成：
μ= x-δ
说明在已知绝对误差值的情况下，真实值可以从测定值减去绝对误差而求得。
19相对误差（relative error）：
反映误差在测量结果中所占的比例，分析工作中经常使用相对误差。相对误差是以真实值的大小为基础表示的误差值，没有单位。
δ/μ=(x-μ)/μ
通常以%，‰或 ppm表示。
例如：测定纯NaCl中Cl的百分含量为60.52%，而其真实含量（理论值）为60.66%。则
绝对误差=60.52%?60.66% = -0.14%
相对误差=[（60.52% ? 60.66%） / 60.66% ]×1000 ‰ = -2.3 ‰
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如果不知道真实值，而知道绝对误差值，则相对误差也可以表示为：
相对误差 = δ× 100%
x
例如：用分析天平称两个重量，一个是0.0021g，另一个是0.5432g，两个重量的绝对误差都是0.0001g，可是相对误差却大不相同，一个是（1/21 ）×100%，另一个是（1/5432 ）×100%。
可见，由于两个被测组分含量高低不同，即使绝对误差相同，相对误差也不同。对高含量组分测定的相对误差应当要小些，低含量组分测定的相对误差要求允许大些。
例如：用重量法和滴定法测量样品主要成分，相对误差需要达到千分之一，而用比色法测定样品重微量成分时，相对误差只要求达到百分之几即可。
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2. 系统误差
系统误差（systematic error）也叫“可定误差”，是由某种确定的原因引起的，
一般有固定的方向（正或负）和大小，重复测定时重复出现。根据系统误差的来源，可分为：
（1）方法误差
方法误差是由于不适当的实验设计或所选方法不恰当所引起的，通常影响较大。
（2）仪器或试剂误差
是由于仪器未经校准或试剂不合规格引起的。例如：天平砝码不准、容量仪器刻度不准或试剂不纯等，均能产生这种误差。
（3）操作误差
操作误差是由于分析者操作不符合要求引起的。
例如：分析者对滴定终点颜色改变的判断能力不够高，总是偏深或偏浅，便会产生误差。
由于系统误差是重复的以固定方向和大小出现，所以不能用增加平行测定次数的方法消除。
3.随机误差（accidental error ):
也称偶然误差，是由于偶然的原因，如测量条件、实验室温度、湿度等变动而未能得到控制的条件波动引起的，其大小和正负都不固定。
偶然误差的出现看起来似乎没有规律，但多次测量就会发现绝对值相同的正负偶然误差出现的概率大致相等，它们之间能完全或部分抵消。因此通过增加平行测定次数，就可以减免测定结果中这种误差。也可以通过统计学方法估计出偶然误差值，并在测定结果中予以正确表达。
系统误差和随机误差往往不能区分。比如：在观察滴定终点的颜色变化时，有人总是偏深，产生系统误差。但多次测定中偏深程度不一样，又必然有随机误差。
4.提高分析准确度的方法
（1）选择恰当的分析方法
不同方法的准确度和灵敏度不同。重量分析法和容量分析法灵敏度虽然不高，但对常量组分的测定可以获得比较准确的结果，一般相对误差不超过千分之几。但对于微量和痕量组分的分析，常常做不出来，谈不上精确度。
仪器分析法对测定常量组分无法准确，但对测定微量和痕量组分灵敏度很高，尽管相对误差较大，但绝对误差不大，能符合准确度的要求。
总之，必须根据分析对象，样品情况以及对分析结果的要求，选择恰当的分析方法。
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（2）减小测量误差
为了保证分析结果的准确度，必须尽量减小各步的测量误差。
例如：一般分析天平的称量误差为+0.0001g，用减重法称量两次，可能引起的最大误差是+0.0002g，为了使称量的相对误差小于0.1%，取样量就不能小于0.2g。
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（3）消除测量中的系统误差
A、校准仪器：对砝码、滴定管和移液管进行校准。
B、做对照实验：用含量已知的标准试样或纯物质当样品进行分析，由分析
结果和其已知含量的差值，确定分析的误差。
C、做空白实验：在不加样品的情况下，以与样品相同的方法、步骤进行分析，把所得的结果作为空白值从样品分析结果中减去。这样可以消除由于试剂不纯或容器不符合要求所带进的误差。
27基本操作
28pH值的测定
测定溶液pH值通常有两种方法，最简便但较粗略的方法是用pH试纸，分为广泛和精密pH试纸两种。
广泛pH试纸的变色范围是pH=1-14、9-14等，只能粗略确定溶液的pH值。
精密pH试纸，可以较精确地测定溶液的pH值，其变色范围是2-3个pH单位，例如有pH=1.4-3.0、5.4-7.0、9.5-13.0等许多种，可根据待测溶液的酸、碱性选用某一范围的试纸。
29pH值的测定
测定方法：将试纸条剪成小块，用镊子夹一小块试纸，用玻璃棒蘸少许溶液与试纸接触，试纸变色后与色阶板对照，估读出所测pH值。切不可将试纸直接放入溶液中，以免污染样品溶液。
30离心机操作的注意事项
离心机是利用转子高速旋转产生离心力，分离液体与固体颗粒或液体与液体的混合物中各组分的机械。
离心机是生化实验教学和生化科研的重要精密设备，因其转速高，产生的离心力大，使用不当或缺乏定期的检修和保养，都可能发生严重事故，因此使用离心机必须严格遵守操作规程。
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离心操作的注意事项
1.使用各种离心机时，必须事先在天平上精密地平衡离心管和其内容物，平衡时重量之差不得超过各个离心机说明书上所规定的范围，每个离心机不同的转头有各自的允许差值，转头中绝对不能装载单数的管子，当转头只是部分装载时，管子必须互相对称地放在转头中，以便使负载均匀地分布在转头的周围。
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离心操作的注意事项
2.离心过程中不得随意离开，应随时观察离心机上的仪表是否正常工作，如有异常的声音应立即停机检查，及时排除故障。离心时不准开盖，不准用手停止转头。
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离心操作的注意事项
3.装载溶液时，要根据各种离心机的具体操作说明进行，根据待离心液体的性质及体积选用适合的离心管，有的离心管无盖，液体不得装得过多，以防离心时甩出，造成转头不平衡、生锈或被腐蚀，而制备性超速离心机的离心管，则常常要求必须将液体装满，以免离心时塑料离心管的上部凹陷变形。每次使用后，必须仔细检查转头，及时清洗、擦干，转头是离心机中须重点保护的部件，搬动时要小心，不能碰撞，避免造成伤痕，转头长时间不用时，要涂上一层上光腊保
护，严禁使用显著变形、损伤或老化的离心管。
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移液器的使用
●
1 设定移液体积
l 从大体积调节到小体积时，为正常调节方法，逆时针旋转刻度即可；
l 从小体积调节至大体积时，可先顺时针调至超过设定体积的刻度，再回调至设定体积，这样可以保证最佳的精确度。
2 装配移液器吸头
l 单道移液器，将移液端垂直插入吸头，左右微微转动，上紧即可
用移液器反复撞击吸头来上紧的方法是不可取的，这样操作会导致移液器部件因强烈撞击而松散，严重的情况会导致调节刻度的旋钮卡住。
l 多道移液器，将移液器的第一道对准第一个吸头，倾斜插入，前后稍许摇动上紧，吸头插入后略超过O型环即可。
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●养护：
1、如液体不小心进入活塞室应及时清除污染物；
2、移液器使用完毕后，把移液器量程调至最大值，且将移液器垂直放置在
移液器架上；
3、根据使用频率所有的移液器应定期用肥皂水清洗或用 60 ％的异丙醇消
毒，再用双
蒸水清洗并晾干；
4、避免放在温度较高处以防变形致漏液或不准；
5、发现问题及时找专业人员处理。
☆注意事项
1、当移液器吸嘴有液体时切勿将移液器水平或倒置放置，以防液体流入活
塞室腐蚀移液器活塞；
2、正确使用移液器吸液、排液，以达高精准度。尤其注意排液的 2) 、 3)
操作；
3、平时检查是否漏液的方法：
吸液后在液体中停 1-3 秒观察吸头内液面是否下降；如果液面下降首先检
查吸头是否有问题，如有问题更换吸头，更换吸头后液面仍下降说明活塞组件有问题，应找专业维修人员修理。
4、移液管操作
●移液管的手持方法吸液调零读数放液
●放液完后要移液管停留15秒或绕管壁旋转三圈。
只有取全液的时候移液管才能放空！
45操作细节
●移液前应当把洗耳球内的空气尽量排尽，把洗耳球口对准移液管后部在吸取
少量液体時要留心不要吸入空氣，以免污染洗耳球完成吸取後，盡快以手指代替洗耳球阻塞移液管。请用食指释放液体時，应把試管侧放，让试管协助液体由移液管排放出來。释放时時，不应強行把有关液体排出。因为会影响所量度之結果。當把液体由移液管释放出來時，由于水份子的附著力，會有部份液体依附在移液管的管尖中，這是正常現象。
生物化学常用缓冲液
1.基本概念
⑴ Bronsted-Lowry酸碱理论（酸碱质子理论）:
1923年由丹麦化学家J.N.Brφnsted和英国化学家T.M.Lowry同时提出了酸碱质子学说，认为凡能释放质子的分子或离子（如：H2O，HCl，NH4+，HSO4- 等）称为酸，凡能接受质子的分子或离子（如：H2O，NH3，Cl-等）称为碱。因此，一种酸释放质子后即成为碱，称为该酸的共轭碱，同样一种碱与质子结合后，形成对应的酸，称为该碱的共轭酸。
如盐酸在水中的解离：
HCl Cl- ＋H+
HCl是酸，Cl-是它的共轭碱。
pH = pKa+log{[质子受体]/[质子供体]}
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⑵缓冲体系的设计：
1960年，N.E.Good和他的同事们提出，适合生命科学研究使用的缓冲体系应具有以下特性：
① pKa值在6-8之间；
②在水中的溶解度高；
③不易穿透生物膜；
④盐效应小；
⑤离子浓度、溶液组成和温度对解离的影响小；
⑥不与金属离子生成复合物或沉淀；
⑦该缓冲剂化学稳定；
⑧紫外和可见光波长范围内光吸收小；
⑨易制得高纯度的盐。
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（二）生物化学常用缓冲液
⑴磷酸盐缓冲液：
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲液，pH范围最宽：
NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21
Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32
配酸性缓冲液：用NaH2PO4，pH＝1-4，
配中性缓冲液：用混合的两种磷酸盐，pH＝6-8，
配碱性缓冲液：用Na2HPO4，pH＝10-12。
用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。
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磷酸盐缓冲液的优点为：
①容易配制成各种浓度的缓冲液；
②适用的pH范围宽；
③pH受温度的影响小；
④缓冲液稀释后pH变化小，如稀释十倍后pH的变化小于0.1。
其缺点为：
①易与常见的钙Ca++离子、镁Mg++离子以及重金属离子缔合生成沉淀；
②会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。
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⑵ Tris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液：
Tris缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用Tris缓冲液，而很少再用磷酸盐。 Tris缓冲液的常用有效pH范围是在“中性”范围，例如：
Tris-HCl缓冲液： pH＝7.5-8.5
Tris-磷酸盐缓冲液： pH＝5.0-9.0
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Tris-HCl缓冲液的优点是：
①因为Tris的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；
②对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
其缺点是：
①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；
②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很大，例如：4℃时缓冲液的pH＝8.4，而37℃时的pH＝7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能用于0℃-4℃。
③易吸收空气中的CO2，所以配制的缓冲液要盖严密封。
④此缓冲液对某些pH电极发生一定的干扰作用，所以要使用与Tris溶液具有兼容性的电极。
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⑶有机酸缓冲液：
这一类缓冲液多数是用羧酸与它们的盐配制而成，pH范围为酸性，即pH＝3.0-6.0，最常用的是甲酸、乙酸、柠檬酸和琥珀酸等。
有机酸缓冲液的缺点是：
①所有这些羧酸都是天然的代谢产物，因而对生化反应过程可能发生干扰作用；
②柠檬酸盐和琥珀酸盐可以和过渡金属离子（Fe3+、Zn++、Mg++等）结合而使缓冲液受到干扰；
③这类缓冲液易与Ca++离子结合，所以样品中有Ca++离子时，不能用这类缓冲液。
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⑷硼酸盐缓冲液：
常用的有效pH范围是：pH＝8.5-10.0，因而它是碱性范围内最常用的缓冲液，其优点是配制方便，只使用一种试剂，缺点是能与很多代谢产物形成络合物，尤其是能与糖类的羟基反应生成稳定的复合物而使缓冲液受到干扰。
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⑸氨基酸缓冲液：
此缓冲液使用的范围宽，可用于pH=2.0-11.0，例如最常用的有：
甘氨酸-HCl缓冲液：pH=2.0-5.0，
甘氨酸-NaOH缓冲液：pH=8.0-11.0，
甘氨酸-Tris缓冲液：pH=8.0-11.0，（广泛使用的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电极缓冲液），
组氨酸缓冲液：pH=5.5-6.5，
此类缓冲体系的优点是：为细胞组份和各种提取液提供更接近的天然环境。
其缺点是：
①与羧酸盐和磷酸盐缓冲体系相似，也会干扰某些生物化学反应过程，如代谢过程等。
②试剂的价格较高。
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5.有效数字
有效数字是指分析工作中实际测到的数字，允许最后一个数字是可疑数，反映测量值的准确度，要与测量的方法相适应。
一般分析数据保留4位有效数字，保留的位数太多无实际意义，反而增加计算的麻烦。要注意0.0052的有效数字只有2位，3个0是用于定位的无效数字。
修约有效数字的原则是四舍六入五成双。如23.455±0.546修约为23.46±0.55， 28.445±0.675修约为28.44±0.68，要避免出现0.00002±0.00001之类的数字，或3658.2543±0.0058之类的数字。
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滤纸的使用
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6.每个转头各有其最高允许转速和使用累积限时，使用转头时要查阅说明书，不得过速使用。每一转头都要有一份使用档案，记录累积的使用时间，若超过了该转头的最高使用限时，则须按规定降速使用。
2.离心前必须仔细检查转头各孔内有无异物。
3.若要在低于室温的温度下离心时。转头在使用前应放置在冰箱或置于离心机的转头室内预冷。
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实验室常用仪器及其使用 1.能区分和识别常用的仪器，了解化学实验常用仪器的主要用途 2.掌握常见反应器、加热仪器、计量仪器、分离仪器、干燥仪器的使用方法 3.能懂得选择合适的实验仪器进行实验，会绘制简单的仪器装置图 4.知道质谱仪、核磁共振仪、红外光谱仪等现代仪器在测定物质结构中的作用。 知识点1 反应器的使用方法 6.集气瓶
知识点2 计量仪器的使用方法 2.量筒 3.容量瓶 4.托盘天平 知识点3 加热、蒸发、蒸馏、结晶的仪器2.表面皿、蒸发皿
知识点4过滤、分离、注入液体的仪器 干燥管 干燥器 铁架台、 铁夹 试管夹 坩埚钳 二、质谱仪、核磁共振仪、红外光谱仪等现代仪器在测定物质结构中的作用 1.质谱仪 用途 。 2．核磁共振仪 用途 。 3．红外光谱仪
【例1】下列实验中所选用的仪器合理的是（） A. 用200mL量筒量取5.2mL稀硫酸 B. 用250mL容量瓶配制250mL0.2mol/L的氢氧化钠溶液 C. 用托盘天平称量11.7克氯化钠晶体 D. 用碱式滴定管量取25.1mL溴水 解析：这是一道考查称量仪器使用的题目。选用量筒时应注意选合适规格，量取5.2mL 稀硫酸要用10mL量筒，所以A不正确；滴定管量取液体时应精确到0.01mL，所以D不正确。 托盘天平可称量精确到0.1克，一般配制多大体积的溶液就选用多大体积的容量瓶。 答案：BC 【变式】准确量取25.00 mL高锰酸钾溶液，可选用的仪器是（ C ） A . 50 mL量筒 B. 10 mL量筒 C. 50 mL酸式滴定管 D. 50mL碱式滴定管【例2】一支40mL碱式滴定管注入苛性钠溶液后，液面正好在10mL刻度处，则苛性钠溶液体积为（） A . 10mL B. 大于10mL C. 30 mL D. 大于30 mL 解析：滴定管的0刻度线在上方，40mL刻度线下至尖嘴处仍有溶液，所以大于30 mL 答案：D 【变式】下列量器和温度计的刻度表示正确的是（CD） A.量筒的刻度值是由下向上增大，“0”刻度在下 B.250毫升容量瓶上一般刻有30℃250毫升的标记 C.滴定管的刻度值由上而下增大，“0”刻度在上 D.温度计的刻度是由下而上增大，“0”在有刻度标记区域 【例3】现有下列仪器或用品：①铁架台（含铁圈，各种铁夹）；②锥形瓶；③酸式滴定管与碱式滴定管；④烧杯（若干）；⑤玻璃棒；⑥胶头滴管；⑦天平（含砝码）；⑧滤纸；⑨量筒；⑩过滤漏斗。 （1）过滤时，应选用的上述仪器是（填编号）。 （2）配制一定物质的量浓度的溶液时，还缺少的仪器是。 （3）在中和滴定使用滴定管前，首先应。 解析这类试题的解题方法是首先看题目选项的具体操作。联想该操作的仪器、方法、注意事项等，对比题目中所给的仪器进行组合，看仪器是否完全具备进行某一项实验，这样才能得出正确结论，有时试题是给出一些仪器来完成某些实验操作，而所给的仪器不全，其解题方法与之类似，即通过联想完成。 答案（1）过滤所用的仪器有：铁架台、烧杯、玻璃棒、滤纸、过滤漏斗。 （2）配制一定物质的量浓度的仪器有：天平（含砝码）、容量瓶、烧杯、玻璃棒、胶头滴管。 （3）检查活塞是否漏水，在确保不漏水后方可使用。
实验一基因的PCR扩增技术 一、实验目的与原理简介 聚合酶链式反应（polymerase chain reaction）是体外克隆基因的重要方法，它可在几个小时内使模板分子扩增百万倍以上。因此能用于从微量样品中获得目的基因，同时完成了基因在体外的克隆，是分子生物学及基因工程中极为有用的研究手段。 常规PCR反用于已知DNA序列的扩增，具体可分为三个主要过程：一、变性。通过升高温度使DNA双链模板分子中氢断裂，形成单链DNA分子，温度为94℃，时间1min。二、复性。降低温度使DNA单链分子同引物结合。温度为55℃，时间1min。三、延深。升高温度，在DNA聚合酶最佳活性的条件下在引物3端加入dNTP，实现模板的扩增，温度为72℃，时间2min。同时第一步变性前要在94℃下预变性5分钟，使DNA双链完全解开。经过 25-35个循环之后，在72℃下继续延伸10分钟。 PCR反应包含的七种基本成分： 1）热稳定性DNA聚合酶：Taq DNA聚合酶是最常适用的酶，商品化Taq DNA酶的特异性活性约为80000单位/mg. 2）寡核苷酸引物：寡核苷酸引物的设计是影响PCR扩增反应的效率与特异性的关键因素。 3）脱氧核苷三磷酸（dNTP）：标准的PCR反应体系应包括4种等摩尔浓度的脱氧核苷三磷酸，即dATP、dTTP、dCTP和dGTP。每种dNTP的浓度一般在200-250μl之间，高浓度的dNTP对扩增反应会起抑制作用，可能是dNTP与Mg2+螯合有关。 4）二价阳离子：一般需要Mg2+来激活热稳定的DNA聚合酶，由于dNTP与寡聚核酸结Mg2+合，因而反应体系中阳离子的浓度一般要超过dNTP和引物来源的磷酸盐基团的摩尔浓度。Mg2+的最佳浓度为1.5mmol/L。 5）维持PH值的缓冲液：用Tris-Cl在室温将PCR缓冲液的PH值调至8.3-8.8之间，标准PCR缓冲液浓度在10mmol/L。在72℃温育时，反应体系的温度将下降1个多单位，致使缓冲液的PH值接近7.2。 6）一价阳离子：标准PCR缓冲液内含有50mmol/L的KCl，它对扩增大于500bp长度的DNA是有益的。 7）模板DNA：含有靶序列的模板DNA可以以单链或双链形式加入到PCR混合液中，闭环DNA的及增效率略低于线性DNA。 学习PCR反应的基本原理和基本技术。 了解引物设计的一般要求。 二、材料和试剂 10Х扩增缓冲液 4种dNTP贮存液（20mmol/L，PH 8.0） Tap DNA 聚合酶 5端引物（20μmol/L）及3端引物（20μmol/L） 模板DNA 琼脂糖凝胶 PCR仪（Bio-Rad公司）移液枪（0.5-10μL 5-50μL）枪头微量移液管 一、实验操作 1）按照以下次序，将各成分加到微量离子管内混合： 10Х扩增缓冲液2.5μl M g2+1.5μl 5端引物1μl
常用分析仪器知识 一、绪论 1.与我们制程产品相关，所使用的相对复杂一些的仪器包括以下： 1）原子吸收分光光度仪（AAS） 2）紫外-可见分光光度仪（UV-VIS） 3）循环伏安分析仪（CVS） 4）X射线能量色散光谱仪（EDX） 5）扫描电子显微镜（SEM） 6）X射线测厚仪（XRF测厚） 2.常用仪器综述 1）按仪器的通常分类，AAS、XRF测厚、EDX（其实也是属于XRF的一种）和UV都是属于光谱仪；CVS属于电化学仪器；SEM属于电镜仪器。 2）SEM通常可与XRF测厚和EDX联合使用，有些EDX机器也同时兼具XRF测厚功能，从相关常见的分析报告可同时看到样品的SEM图和分析 测量的结果图表。 3）AAS、UV、XRF测厚、EDX和CVS都是使用分析比较技术，要求进入仪器测试的标准样品和未知样品具有相似性和重现性，简而言之，样品测试 前需要作校正和样品处理。 二、AAS 1.AAS定量分析原理和仪器结构组成 1）分析原理：原子吸收的过程是当基态原子吸收某些特定波长的能量由基态到激发态。根据Lambert-Beer 定律，吸收值与浓度成正比关系，从标准溶 液作出校正曲线后，再读出未知溶液的浓度。原子吸收分光光度仪即是利 用原子化器将样品原子蒸气化后，吸收某一特定波长光，此光来自空心阴 极灯管，再经过光学系统分光经由单光器过滤仅有要测的波长光进入侦测 器。 2）仪器组成：A.放射光源(空心阴极管或EDL灯管)；B.样品导入装置-简易雾化器；C.火焰式原子化器；D.分光仪(Echell 分光系统)；E.侦测器(固态 半导体) 2.优缺点 1）优点：A.可做多种金属元素的定量分析（约70多个）.
有机实验室常用仪器设备与使用 一、有机化学实验常用仪器、设备和应用范围 现将有机化学实验中所用的玻璃仪器、金属用具、电学仪器及一些其它设备分别介绍如下： 1、玻璃仪器 有机实验玻璃仪器(见图2.1、图2.2)，按其口塞是否标准及磨口，而分标准磨口仪器及普通仪器两类。标准磨口仪器由于可以相互连接，使用是既省时方便又严密安全，它将逐渐代替同类普通仪器。使用玻璃仪器皆应轻拿轻放。容易滑动的仪器(如圆底烧瓶)，不要重叠放置，以免打破。
图2.1普通玻璃仪器 除试管、烧杯等少数玻璃仪器外，一般都不能直接用火加热。锥形瓶不耐压，不能作减压用。厚壁玻璃器皿(如抽滤瓶)不耐热，故不能加热。广口容器(如烧杯)不能贮放易挥发的有机溶剂。带活塞的玻璃器皿用过洗净后，在活塞与磨口间应垫上纸片，以防粘住。如已粘住可在磨口四周涂上润滑剂或有机溶剂后用电吹风吹热风，或用水煮后再用木块轻敲塞子，使之松开。 此外，不能用温度计作搅拌棒用，也不能用来测量超过刻度范围的温度。温度计用
后要缓慢冷却不可立即用冷水冲洗以免炸裂。 有机化学实验，最好采用标准磨口的玻璃仪器。这种仪器可以和相同编号的磨口相互连接，即可免去配塞子及钻孔等手续，也能免去反应物或产物被软木塞或橡皮塞所玷污。标准磨口玻璃仪器口径的大小，通常用数字编号来表示，该数字是指塞(或橡皮塞)所玷污。标准磨口玻璃仪器口径的大小，通常用数字编号来表示，该数字是指磨口最大端直径的毫米整数。常用的有10，14，19，24，29，34，40，50等。有时也用两组数字来表示，另一组数字表示磨口的长度。例如14/30，表示此磨口直径最大处为14mm，磨口长度为30mm。相同编号的磨口、磨塞可以紧密连接。有时两个玻璃仪器，因磨口编号不同无法直接连接时，则可借助不同编号的磨口接头(或称大小头)[见图2.2(9)]使之连接。 图2.2 标准口玻璃仪器
实验室常用器材使用方法及注意事项
实验室常见仪器使用方法及注意事项 一、常见的仪器 （一）初中化学实验常见仪器 反应容器可直接受热的：试管、蒸发皿、燃烧匙、坩埚等能间接受热的：烧杯、烧瓶、锥形瓶（加热时，需加石棉网） 常存放药品的仪器：广口瓶（固体）、细口瓶（液体）、滴瓶 （少量液体）、集气瓶（气体） 用加热仪器：酒精灯 计量仪器：托盘天平（称固体质量）、量筒（量液体体积） 仪分离仪器：漏斗 取用仪器：药匙（粉末或小晶粒状）、镊子（块状或较大颗粒）、胶头滴管（少量液体） 器夹持仪器：试管夹、铁架台（带铁夹、铁圈）、坩埚钳其它仪器：长颈漏斗、石棉网、玻璃棒、试管刷、水槽 不能加热：量筒、集气瓶、漏斗、温度计、滴瓶、表面皿、广口瓶、细口瓶等 1、试管 （1）、用途： a、在常温或加热时，用作少量试剂的反应容器。 b、溶解少量固体。 c、收集少量气体的容器 d、用于装置成小型气体的发生
器。 （2）、注意事项： a、加热时外壁必须干燥，不能骤热骤冷，一般要先均匀受热，然后才能集中受热， 防止试管受热不均而破裂。 b、加热时，试管要先用铁夹夹持固定在铁架台上（短时间加热也可用试管夹夹持）。 试管夹应夹在的中上部（或铁夹应夹在离试管口的1/3处）。c、加热固体时，试管口要略向下倾斜，且未冷前试管不能直立，避免管口冷凝水倒流 使试管炸裂。 d、加热液体时，盛液量一般不超过试管容积的1/3（防止液体受热溢出），使试管与桌面 约成45°的角度（增大受热面积，防止暴沸），管口不能对着自己或别人（防止液体喷出伤人）。反应时试管内的液体不超过试管容积的1/2。 2、烧杯用途：①溶解固体物质、配制溶液，以及溶液的稀释、浓缩 ②也可用做较大量的物质间的反应 注意事项：受热时外壁要干燥，并放在石棉网上使其受热均匀（防止受热不均使烧杯炸裂）， 加液量一般不超过容积的1/3（防止加热沸腾使液体外溢）。
生物化学实验报告 姓名：吴瑞 学号： 3120016004 专业年级： 2012级临床医学（妇幼保健) 组别：第四实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
一、实验室规则 1．实验前应认真预习实验指导，明确实验目的和要求，写出预实验报告。 2．进入实验室必须穿白大衣。严格遵守实验课纪律，不得无故迟到或早退。不得高声说话。严禁拿实验器具开玩笑。实验室内禁止吸烟、用餐。 3．严格按操作规程进行实验。实验过程中自己不能解决或决定的问题，切勿盲目处理，应及时请教指导老师。 4．严格按操作规程使用仪器，凡不熟悉操作方法的仪器不得随意动用，对贵重的精密仪器必须先熟知使用方法，才能开始使用；仪器发生故障，应立即关闭电源并报告老师，不得擅自拆修。 5．取用试剂时必须“随开随盖”，“盖随瓶走”，即用毕立即盖好放回原处，切忌“张冠李戴”，避免污染。 6．爱护公物，节约水、电、试剂，遵守损坏仪器报告、登记、赔偿制度。 7．注意水、电、试剂的使用安全。使用易燃易爆物品时应远离火源。用试管加热时，管口不准对人。严防强酸强碱及有毒物质吸入口内或溅到别人身上。任何时候不得将强酸、强碱、高温、有毒物质抛洒在实验台上。 8．废纸及其它固体废物严禁倒入水槽，应倒到垃圾桶内。废弃液体如为强酸强碱，必须事先用水稀释，方可倒入水槽内，并放水冲走。 9．以实事求是的科学态度如实记录实验结果，仔细分析，做出客观结论。实验失败，须认真查找原因，而不能任意涂改实验结果。实验完毕，认真书写实验报告，按时上交。 10．实验完毕，个人应将试剂、仪器器材摆放整齐，用过的玻璃器皿应刷洗干净归置好，方可离开实验室。值日生则要认真负责整个实验室的清洁和整理，保持实验整洁卫生。离开实验室前检查电源、水源和门窗的安全等，并严格执行值日生登记制度。
实验指导 目录 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用方法实验二质粒DNA的提取－碱裂解法 实验三琼脂糖凝胶电泳 实验四限制性内切核酸酶的酶切与鉴定 实验五大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 实验六动物组织细胞基因组 DNA提取 实验七 DNA的定量 实验八 PCR基因扩增 实验九琼脂糖凝胶电泳分离与纯化目的DNA 实验十 DNA重组 实验十一动物组织细胞总RNA的提取 实验一分子生物学实验室常用仪器及使用
事实证明，在科学飞速发展的今天，无论从事哪个领域的研究，要想突破，除了有良好的理论基础外，更重要的是依赖于先进的技术和优良的仪器设备以及良好的研究环境。一个标准的分子生物学实验室除了具有一般生物学实验室的常规仪器设备外，还具有一些特殊用途的仪器，这些仪器一般较精密，价格昂贵。下面介绍这些仪器的使用方法和注意事项。 一、冷冻离心机 低温分离技术是分子生物学研究中必不可少的手段。基因片段的分离、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物样品的分离制备实验中都离不开低温离心技术，因此低温冷冻离心机成为分子生物学研究中必备的重要仪器。在国内，有多个厂家生产冷冻离心机，本实验室的高速冷冻离心机为GL-20G-Ⅱ型（上海安亭），落地式。配有角式转头：6×50ml、12×10ml和12×1.5ml。极限转速20000rpm。 1. 安装与调试 离心机应放置在水平坚固的地面上，应至少距离10cm以上且具有良好的通风环境中，周围空气应呈中性，且无导电性灰尘、易燃气体和腐蚀性气体，环境温度应在0～30℃之间，相对湿度小于80%。试转前应先打开盖门，用手盘动转轴，轻巧灵活，无异常现象方可上所用的转头。转子准确到位后打开电源开关，然后用手按住门开关，再按运转键，转动后立即停止，并观察转轴的转向，若逆时针旋转即为正确，机器可投入使用。 2. 操作程序 （1）插上电源，待机指示灯亮；打开电源开关，调速与定时系统的数码管显示的闪烁数字为机器工作转速的出厂设定，温控系统的数码管显示此时离心腔的温度。 （2）设定机器的工作参数，如工作温度，运转时间，工作转速等。 （3）将预先平衡好的样品放置于转头样品架上，关闭机盖。 （4）按控制面板的运转键，离心机开始运转。在预先设定的加速时间内，其运速升至预先设定的值。 （5）在预先设定的运转时间内（不包括减速时间），离心机开始减速，其转速在预先设定的减速时间内降至零。 （6）按控制面板上的停止键，数码管显示dedT，数秒钟后即显示闪烁的转速值，这时机器已准备好下一次工作。 3. 注意事项 （1）离心机应始终处于水平位置，外接电源系统的电压要匹配，并要求有良好的接地线，机器不使用，要拔掉电源插头。
九基本实验仪器的使用和基本实验方法 命题趋势 一些基本仪器的原理、使用方法、注意事项和读数等，在近几年的高考试题中不断出现。长度和电学量的测量及相关仪器的使用是出题最频繁的知识点。如游标卡尺、螺旋测微器的读数在近十年的全国高考中就考了8次，往往是游标卡尺、螺旋测微器交替考查。电压表、电流表、欧姆表使用方法的考查几率则更高。另外，打点计时器、电阻箱、秒表的使用有时也出现。 高考中基本仪器的考察，用的比较多的题型是填空题和作图题，时而也有选择题。高考中常有连接电路实物图的题，这类题设置的目的就是考查电流表、电压表、滑动变阻器等器材的操作和使用方法。 关于实验方法的考查，预计是两种形式：一是以学过的分组或演示实验为背景，考查对实验方法的领悟情况；二是考查灵活运用学过的实验方法设计新的实验。 由于目前设计型实验是高考实验题的热点，而掌握一些有普遍意义的实验方法又是设计实验的基础，所以在复习已学过的实验时，有意识的、积极的提取、积累一些有价值的方法是很有意义的。 教学目标： 1．通过专题复习，掌握基本实验仪器的使用和基本实验方法，提高解答物理实验题的能力。 2．能根据要求灵活运用已学过的自然科学理论、实验方法和仪器，设计简单的实验方案并处理相关的实验问题 教学重点： 掌握基本实验仪器的使用和基本实验方法，，提高解答物理实验题的能力。 教学难点： 根据要求灵活运用已学过的自然科学理论、实验方法和仪器，设计简单的实验方案并处理相关的实验问题。 教学方法：讲练结合，计算机辅助教学 教学过程： 一、知识概要 （一）基本仪器的使用 基本仪器是指通用性强，在各种实验中经常用到的仪器。中学阶段，要求掌握的基本仪器如下：测量长度的仪器------刻度尺、游标卡尺、螺旋测微器 测量质量的仪器------天平 测量时间的仪器------打点计时器、秒表
小学科学实验仪器的使 用方法 文稿归稿存档编号：[KKUY-KKIO69-OTM243-OLUI129-G00I-FDQS58-
小学科学部分实验仪器的使用方法及实验操作过程 温度计的使用方法 方法一 1、测量前，观察所要使用的温度计，了解它的量程（测量范围）和分度值（每一小格对应的温度值）； 2、测量时使温度计的玻璃泡跟被测液体充分接触（要浸没在被测液体中）； 3、待示数稳定后再读数； 4、读数时温度计玻璃泡要留在被测液体中，不能取出来读数。 方法二 1 在测量之前要先估计被测液体的温度； 2 根据估计的温度选用量程合适的温度计。 3 温度计的玻璃泡要全部浸没在待测液体中，但不要碰到容器底和容器壁。 4 玻璃泡全部浸没在待测液体中要稍候一会儿。等它的示数稳定后再读数。 5 读数时，玻璃泡要继续留在被测量液体中。 6 视线要与温度计中液柱的上表面相平。正确记录测量结果要有数字和单位。 酒精灯的使用方法 使用酒精灯时，先要检查灯芯，如果灯芯顶端不平或已烧焦，需要剪去少许使其平整，然后检查灯里有无酒精，灯里酒精的体积应大于酒精灯容积的1／4，少于2／3。在使用酒精灯时，应注意，绝对禁止用酒精灯引烧另一盏酒精灯，而应用燃着的火柴或木条来引燃；用完酒精灯，必须用灯帽盖灭，不可用嘴去吹灭，否则可能将火焰沿灯颈压入灯内，引起着火或爆炸。不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，不要惊慌，应立即用湿抹布扑盖。
胶头滴管滴瓶的构造与使用方法 1.先排空再吸液； 2.悬空垂直放在试管口上方,以免污染滴管； 3.吸取液体后,应保持胶头在上,防止液体倒流,污染试剂或腐蚀胶头； 4.胶头用后应立即清洗干净,再去吸取其他药品,防止交叉污染. 出错点：中指与无名指没夹住橡皮胶头和玻璃管的连接处；将滴管尖嘴伸入接受器口内。 正确方法：夹持时：用无名指和中指夹持在橡皮胶头和玻璃管的连接处，不能用拇指和食指（或中指）夹持，这样可防止胶头脱落。吸液时：先用大拇指和食指挤压橡皮胶头，赶走滴管中的空气后，再将玻璃尖嘴伸入试剂液中，放开拇指和食指，液体试剂便被吸入，然后将滴管提起。禁止在试剂内挤压胶头，以免试剂被空气污染而含杂质。吸完液体后，胶头必须向上，不能平放，更不能使玻璃尖嘴的开口向上，以免胶头被腐蚀；也不能把吸完液体后的滴管放在实验桌上，以免沾污滴管。 试管的使用方法 方法一 普通试管的规格以外径（mm）×长度（mm）表示，如5×150、18×180、25×200等。 离心试管以容量毫升数表示。 主要用途：普通试管用作少量试剂的反应容器、收集少量气体、装配小型气体发生器。 使用注意事项： 普通试管可以直接加热。装溶液时不超过试管容量的1/2，加热时不超过试管的1/ 3。
生物化学实验报告 姓名：郭玥 学号： 3120100021 专业年级： 2012级护理本科 组别：第8实验室 生物化学与分子生物学实验教学中心
【实验报告第一部分（预习报告内容）：①实验原理、②实验材料（包括实验样品、主要试剂、主要仪器与器材）、③实验步骤（包括实验流程、操作步骤和注意事项）；评分（满分30分）：XX】 实验目的：1、掌握盐析法分离蛋白质的原理和基本方法 2、掌握凝胶层析法分离蛋白质的原理和基本方法 3、掌握离子交换层析法分离蛋白质的原理和基本方法 4、掌握醋酸纤维素薄膜电泳法的原理和基本方法 5、了解柱层析技术 实验原理：1、蛋白质的分离和纯化是研究蛋白质化学及其生物学功能的重要手段。 2、不同蛋白质的分子量、溶解度及等电点等都有所不同。利用这些性质的差别， 可分离纯化各种蛋白质。 3、盐析法：盐析法是在蛋白质溶液中，加入无机盐至一定浓度或达饱和状态，可 使蛋白质在水中溶解度降低，从而分离出来。蛋白质溶液中加入中性盐后，由 于中性盐与水分子的亲和力大于蛋白质，致使蛋白质分子周围的水化膜减弱乃 至消失。中性盐加入蛋白质溶液后由于离子强度发生改变，蛋白质表面的电荷 大量被中和，更加导致蛋白质溶解度降低，蛋白质分子之间聚集而沉淀。
4、离子交换层析:离子交换层析是指流动相中的离子和固定相上的离子进行可逆 的交换，利用化合物的电荷性质及电荷量不同进行分离。 5、醋酸纤维素薄膜电泳原理：血清中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。 它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血清中 各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电 泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α 2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白5条区带。 实验材料：人混合血清葡聚糖凝胶（G-25)层析柱 DEAE纤维离子交换层析柱饱和硫酸铵溶液 醋酸铵缓冲溶液 20%磺基水杨酸 1%BaCl 溶液氨基黑染色液 2 漂洗液 pH8.6巴比妥缓冲溶液 电泳仪、电泳槽 实验流程：盐析（粗分离）→葡聚糖凝胶层析（脱盐）→DEAE纤维素离子交换层析（纯化）→醋酸纤维素薄膜电泳（纯度鉴定） 实验步骤： （一）盐析+凝胶柱层析除盐：
组培实验操作 1、去组培室观察植物,确定实验方案,做哪种培养基,以及确定培养基的植物激素配方注意:去组培室时,进出组培室要及时关门,两成门都要关。 2、计算培养基中个成分的配比 3、称量药品 注意事项: ●称量药品注意精确度,例如称量 0.1g 的药品,精确到 0.100g ●注意量程 ●在量取物品过程中等待电子天平数字稳定的过程中, 保持电子天平密闭, 关掉四面的窗口。可以适当关闭室内风扇。 ●用完电子天平后要切断电源、清理干净天平里面、关闭打开的玻璃窗口! ●使用完毕后,即使切断电源。 4、煮琼脂 注意事项: ●琼脂粉适合一边搅拌一边慢慢倒,不要倒在烧杯壁上或者玻璃棒上。 ●关于配培养基加水的问题, 煮琼脂加的水量是所配置培养基体积的一半, 例如配一升应该用 500mL 的水煮琼脂。 ●安全使用万用电炉。若煮琼脂时,注意火力大小, 严禁煮琼脂时玩手机、看小说泡沫上溢距离烧杯口 4~5cm时及时端下来烧杯,防止烫伤。即使关掉电子炉,余热也会让泡沫溢出,很危险。
●使用完毕及时切断电源。当心烫伤。 5、使用灭菌锅灭菌 ●确定灭菌锅里没有物品或者灭菌锅内的物品已经灭菌完成再使用。 ●灭菌前, 要确定灭菌锅内水位与小孔平齐、压力阀紧闭、下面水箱水位在限制使用范围内, 放入要灭菌的物品, 关紧阀门, 打开电源, 确定灭菌时间 30min 和灭菌温度 121℃, 按 start 键开始灭菌。 ●要确定灭菌完全,并且压力降为零时再打开灭菌锅、取出灭菌物品。 ●取物品时要带手套,防止烫伤。取出物品后,灭菌篮放回原处。 ●晚上离开时要切断灭菌锅电源。 6、烘箱 ●烘箱使用前先检查温度设置, 再检查烘箱内容物品, 最后需要使用高温时取出易燃物品。●研钵、钵杵 180 ℃在烘箱内烘 6小时。 ●滤纸以及定容杯等物品烘干的温度一般在 65 ℃即可。 ●晚上离开时要切断烘箱电源。 7、超净工作台 ●使用前用紫外灯消毒 15~30min。打开紫外灯时,需放下报纸(遮挡紫外线 ,并且严禁在超净工作台附近逗留。 ●消毒结束后开始使用前,关掉紫外灯,打开灯管,打开风机通风 4~5min,再开始做实验。 ●实验结束后清理干净台面,关灯、关风机、关电源。
生物化学与分子生物学实验技术 实验安全与实验基本操作 2实验室安全规则 3实验室安全事故案例 ●1995年9月香港科技大学化学系大四学生梁同学因吸入别的同学泼洒的酸 酐而不治身亡。 ●1997年香港科技大学物理系访问学者因未按规定使用通风橱造成他人肺部 伤害而永不被香港各大学录用。 4推行实验室安全规则的目的 1.为了达到研究所研究学习安全之目的。 2.为了满足人性安全感的基本需要。 3.为了人性的尊严─生命是无价的。 4.减少工作中产生灾害，确保全教职工和学生之安全及健康。 5. 保护大家共同的环境。 5安全事故原因分类分析 天灾 占2％ 凡不知、不顾、不理、不能、粗心、迟钝、疲劳、失检、情绪各种内在外在的行为 不安全行为 人为因素 占98% 工作场所中，工作环境、设备设施对人所产生之危险因素 不安全环境 6专业性实验室安全工作守则 ●化学药品的操作 ●放射性物质（另有专门培训） ●废料处理 ●紫外线的接触 ●化学药品溢泼的处理 7实验室常用化学试剂的使用安全 8二甲苯 ●无色液体，有芳香气味，易挥发。用来制造、染料、塑料和药物。属低毒类， 对皮肤和黏膜有刺激作用，高浓度有麻醉作用。神经系统会受损害，还会使肾和肝受时性损伤。
●眼毒性：蒸气会刺激眼睛，液体导致严重刺激，发红肿胀和灼伤。通常影响 是暂时性的。皮肤毒性：产生灼伤感、干燥。可以用微温的缓慢流水冲洗至少20分钟，用无摩擦性的肥皂从皮肤上洗去二甲苯。 ●易燃，有爆炸危险。属于甲类防火危险物质。用二氧化碳或干粉或泡沫灭火 剂，不宜用水。 9三氯甲烷 ●无色透明易挥发液体，有特殊的香甜气味。沸点：61.2℃，医药上用作麻醉 剂。也用作萃取剂和溶剂。 ●有很强的麻醉作用，在光的作用下，能被空气中的氧反应生成氯化氢和剧毒 的光气。通常加入1—2%乙醇，使生成的光气与乙醇作用而生成碳酸乙酯，以消除其毒性。 ●吸入高浓度蒸汽时，开始刺激眼、口腔、鼻孔粘摸，发生流泪、感觉麻醉、 呕吐、痉挛、直到昏睡、不省人事。 ●在空气、水分和光的作用下，酸度增加，因而对金属有强烈的腐蚀性 10乙醚 ●透明、无色、易挥发有芳香刺激性气味的液体。沸点：34.6℃；对人体有麻 醉性能。当吸入含量为3.5%时，30~40分钟就可失去知觉。 ●人体过量吸入，会引起严重的急性中毒。呼气中带醚味，并出现呕吐、出汗、 喷嚏、咳嗽、头痛、记忆力减退、无力、兴奋。 ●微溶于水，易溶于盐酸，能与醇、醚、石油醚、苯、氯仿等有机溶剂混溶。 应储存于阴凉、干燥、通风的低温库房内，库温最好控制在25℃以下。远离热源、火种，避免阳光直射。 ●本品易燃。与强氧化剂反应能起火爆炸。在空气中与氧长期接触或受光照会 生成不稳定的过氧化物，受热能自行着火爆炸。着火时，可用干粉、泡沫、二氧化碳、沙土灭火。用水灭火无效，但可用水保持火场容器冷却。 11乙醇 ●无色有酒味，易挥发的澄清液体。沸点78.5℃：用于溶剂、清洗剂、分析 试剂等。属微毒类，对眼睛黏膜有轻微刺激作用。 ●乙醇可使皮肤发干，长期受大剂量作用时，可使神经系统、消化器官等发生 严重的器质性疾病。 ●易燃，手热或遇明火有燃烧爆炸危险，燃烧时，发出兰色火焰。蒸气能与空 气形成爆炸性混合物，在火场中，受热的容器有爆炸的危险。着火时，用二氧化碳、雾状水、干粉、1211或抗泡沫灭火。用水冷却火场中的容器，驱散蒸气，赶出溢出液体，使其稀释成为不燃性混合物
基本实验仪器 1、刻度尺： 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 （1）作用：。 （2）正确使用：使用前观察：①；②；③。使用过程中：①；②； ③；④。 2、温度计： 1、作用：。 2、原理：。 3、结构：。 4、量程：；分度值：； 5、单位：； 6、特殊值的规定：（1）； （2）；（3）。7、正确使用：使用前观察：①；②； 使用过程中：①；②；③； 3、体温计： 1、作用：。 2、原理：。 3、结构：。 4、量程：；分度值：； 5、单位：； 6、正确使用：①；②。 4、天平： 1、作用：。 2、原理：。 3、结构：。 4、量程：；分度值：； 6、正确使用：①；②；③； 7、使用注意点：：①；②；5、量筒或量杯： 1、作用：； 2、放置：。 3、量程：； 4、分度值：； 5、单位换算：。 6、刻度特点：； 7、视线：； 8、使用时装入适量的水，其中适量的含义：①； ②；6、弹簧测力计： 1、作用：。 2、原理：。 3、结构：。
4、量程：；分度值：； 6、正确使用：①；②；③； 7、压强计： 1、作用：； 2、结构：； 3、大小表示：。 8、气压计： 种类：（1）；（2）。 各自的优点： 各自的缺点： 9、密度计： 1、作用：。 2、原理：。 3、刻度特点：。 4、读数：； 10、电流表： 1、作用：。 2、量程及分度值：； ； 3、正确读数：。 4、正确使用：①；②；③；④。 11、电压表： 1、作用：。 2、量程及分度值：； ； 3、正确读数：。 4、正确使用：①；②；③； 12、滑动变阻器 1、原理：； 2、作用：。 3、结构：。 4、标值的含义：； ； 5、正确使用：； 6、使用的注意点：①；
知识精要?化学实验常用仪器及其使用 中学化学实验常用的仪器有20多种，对这些仪器应该在反复使用和训练规范操作的基础上，努力做到“三会”，即：会识别仪器的名称和能恰当地选用仪器(仪器的种类和必要的规格)；会正确地使用仪器进行实验；会画常用仪器的剖面图。 按照中学化学实验常用仪器的用途，大致可分为计量仪器、分离物质仪器、可加热的仪器、加热仪器、存放物质的仪器和其它仪器六类。现对这些仪器的名称、规格、用途和操作要领分述如下。 1．计量仪器 (1)量筒 量筒用于量度一定体积的液体。量筒的容积常见的有10mL、50mL、100mL等多种，其分度(最小刻度每格)依次为0.2mL、1mL、1mL。应该根据需要量取液体的体积大小，选用适当规格的量筒；量取液体时，以液面的弯月形最低点为准；量筒不能加热，不能作反应容器(量筒是有刻度的玻璃容器，温度的变化会使刻度不准确，且量筒受热可能引起炸裂，因此，量筒不能用做反应容器或用来稀释浓硫酸、溶解强碱，也不能量取过热的液体或用于加热等)。量取液体时，应先往量筒里注液体到接近刻度然后改用滴管，将液体逐滴加入，直到指定量。读数时量筒必须方平视线必须与量筒内液体凹液面最底处保持水平。俯视使读数偏高；仰视使读数偏低。如右图 (2)托盘天平
固体药品称量使用托盘天平，一般能精确到 0.1克。 使用步骤注意事项：①先调整零点；②称量物和砝码的位置为“左物右码”；③称量物不能直接放在托盘上，干燥的药品放在洁净的纸上称量，易潮解的和有腐蚀性的药品放在小烧杯等玻璃器皿里称量；④砝码用镊子夹取（“先大后小”）⑤称量结束后，应使游码归零，砝码放回砝码盒。 2．分离物质的仪器 漏斗漏斗内放滤纸用于过滤，也可通过漏斗向小口容器中转移液体。漏斗不能直接加热；过滤时应固定在铁架台的铁环上或固定在漏斗架上。 3．可加热的仪器 1)．试管用来盛放少量药品，常温或加热情况下进行少量试剂反应的容器，可用于制取或收集少量气体。 使用注意事项：①可直接加热,用试管夹夹在距试管口1/3管长处。 ②加热后不能骤冷，防止炸裂。③加热时试管口不能对着任何人；给固体加热时，试管要横放，管口略向下倾斜。 ④加入试管内的液体，不加热时不超过试管容积的l/2，加热时不超过l/3。 2)．烧杯用作配置溶液和加大试剂的反应容器，在常温或加热时使用。使用注意事项：①烧杯外壁擦干后方可用于加热，加热时应放置在石棉网上，使受热均匀，盛放液体的容量通常不超过容积的1/3。 ②溶解物质搅拌时，玻璃棒不能触及杯壁或杯底。
小学科学部分实验仪器的使用方法及实验操作过程 温度计的使用方法 方法一 1、测量前，观察所要使用的温度计，了解它的量程（测量范围）和分度值（每一小格对应的温度值）； 2、测量时使温度计的玻璃泡跟被测液体充分接触（要浸没在被测液体中）； 3、待示数稳定后再读数； 4、读数时温度计玻璃泡要留在被测液体中，不能取出来读数。 方法二 1在测量之前要先估计被测液体的温度； 2根据估计的温度选用量程合适的温度计。 3温度计的玻璃泡要全部浸没在待测液体中，但不要碰到容器底和容器壁。 4玻璃泡全部浸没在待测液体中要稍候一会儿。等它的示数稳定后再读数。 5读数时，玻璃泡要继续留在被测量液体中。 6视线要与温度计中液柱的上表面相平。正确记录测量结果要有数字和单位。 酒精灯的使用方法 使用酒精灯时，先要检查灯芯，如果灯芯顶端不平或已烧焦，需要剪去少许使其平整，然后检查灯里有无 酒精，灯里酒精的体积应大于酒精灯容积的1/4，少于2/ 3。在使用酒精灯时，应注意，绝对禁止用酒精灯引 烧另一盏酒精灯，而应用燃着的火柴或木条来引燃；用完酒精灯，必须用灯帽盖灭，不可用嘴去吹灭，否则可能将火焰沿灯颈压入灯内，引起着火或爆炸。不要碰倒酒精灯，万一洒出的酒精在桌上燃烧起来，不要惊慌，应立即用湿抹布扑盖。 胶头滴管滴瓶的构造与使用方法 1.先排空再吸液； 2.悬空垂直放在试管口上方，以免污染滴管； 3.吸取液体后，应保持胶头在上，防止液体倒流，污染试剂或腐蚀胶头； 4.胶头用后应立即清洗干净，再去吸取其他药品，防止交叉污染. 出错点：中指与无名指没夹住橡皮胶头和玻璃管的连接处；将滴管尖嘴伸入接受器口 内。 正确方法：夹持时：用无名指和中指夹持在橡皮胶头和玻璃管的连接处，不能用拇指和食指（或中指）夹持，这样可防止胶头脱落。吸液时：先用大拇指和食指挤压橡皮胶头，赶走滴管中的空气后，再将玻璃尖嘴伸 入试剂液中，放开拇指和食指，液体试剂便被吸入，然后将滴管提起。禁止在试剂内挤压胶头，以免试剂被空气污染而含杂质。吸完液体后，胶头必须向上，不能平放，更不能使玻璃尖嘴的开口向上，以免胶头被腐蚀；也不能把吸完液体后的滴管放在实验桌上，以免沾污滴管。
TYE—2000KN压力试验机操作规程 一．一般规定： （1）本机由本室指定的试验人员进行操作，非本室人员未经许可，不得随意摆弄，以防事故发生。 （2）试验操作人员在试验前必须对本机进行检查，看贮油是否足够，油管接头是否松动，如油不足应加油，松动的油管接头应拧紧。（3）每次试验完毕，应及时关闭油泵，切断电源后应清理试台上的渣物，并盖好防尘罩。 二．操作方法： （1）首次对试样的最大荷载，应有所估计，然后根据所估计的最大荷载，合理选择并悬挂应力弹簧，校正指针回零。 （2）将试件放在下压板中心，顺时针旋动上压板手轮直至上压板接触试件。 （3）接通电源开动油泵，关闭加油阀，打开送油阀，按要求速度加荷，至试件破坏后，立即徐徐松开回油阀，关闭送油阀，读取从动指针所指荷载值并记录之（大弹簧读取外圈值，小簧读取内圈值）。（4）反时针转动上压板手轮，取出已破坏的试件。
ZBSX-92型振筛机操作规程 一. 一般规定： 使用人员在使用前，仔细阅读使用说明书，了解本机的有关事项，方可使用。 二. 操作步骤： 2.1接通电源。 2.2先将装有试样的套筛固定在振筛机上； 2.3将旋扭转至要求定时位，即可开始工作，若中途停机，应切断电源开关，让定时片中自行停止位置，不可强行扭回。 2.4将筛好的试样分别称重。 三. 注意事项： 1.1开机前，加足润滑油至螺孔面。 3.2转动旋扭时，不应过快，过猛，以免损坏零件。 3.3每隔6个月更换机油一次，使用时注意避免盖板上脦根导杆变形。
101型电热恒温干燥箱 一. 一般规定 使用人员在使用前，仔细阅读使用说明书，了解本机的有关事项，方可使用。 二. 操作方法 1. 打开电源开关。 2. 将温控仪设定所需温度，温控仪绿灯灭，此时箱内开始升温，同时打开鼓风机开关，使鼓风机工作，并注意鼓风机运转状况是否正常。 3. 恒温时，可关闭辅助加热开关，只留一组工作，以免功率过大，影响恒温波动度。 三. 注意事项 1. 本箱装置时必须用导线连接通地。 2. 本箱非防爆型，故带腐蚀性及易燃性物品禁止放入箱内干燥，
有机实验室常用仪器与使用 旋转蒸发仪 旋转蒸发仪，主要用于在减压条件下连续蒸馏大量易挥发性溶剂。尤其对萃取液的浓缩和色谱分离时的接收液的蒸馏，可以分离和纯化反应产物。旋转蒸发仪的基本原理就是减压蒸馏，也就是在减压情况下，当溶剂蒸馏时，蒸馏烧瓶在连续转动。结构:蒸馏烧瓶可是一个带有标准磨口接口的梨形或圆底烧瓶，通过一高度回流蛇形冷凝管与减压泵相连，回流冷凝管另一开口与带有磨口的接收烧瓶相连，用于接收被蒸发的有机溶剂。在冷凝管与减压泵之间有一三通活塞，当体系与大气相通时，可以将蒸馏烧瓶，接液烧瓶取下，转移溶剂，当体系与减压泵相通时，则体系应处于减压状态。使用时，应先减压，再开动电动机转动蒸馏烧瓶，结束时，应先停机，再通大气，以防蒸馏烧瓶在转动中脱落。作为蒸馏的热源，常配有相应的恒温水槽。 催化氢化装置 催化氢化是有机化学实验中的一项重要内容之一。这一反应的具体内容是气态氢在催化剂存在下，与有机化合物进行加成或还原反应，从而生成新的有机化合物。它的优点是： （1）有些反应，如碳碳不饱和键的加氢，应用其他方法比较复杂和困难，而应用催化氢化反应，则可以方便的达到目的。 （2）它对醛酮，硝基及亚硝基化合物都能起还原作用，生成相应的醇和胺，不需要任何还原剂和特殊溶剂。氢气本身极其便宜，因而成
本低操作方便。 （3）反应完毕后，只需滤去催化剂，蒸发掉溶剂即可得到所需产物，后处理方便，产品纯度、收率都比较满意。 根据氢化时选用的压力不同，可将催化氢化分为常压氢化，低压氢化（4-5atm）及高压氢化（＞6atm）。而高压氢化则需要非常特殊的装置，（由于有较高压力），这些已超出本书的范围，但不论是在任何压力进行氢化，都不得使用明火，包括电火花。 催化氢化装置：主要包括氢化用的圆底烧瓶，气压计，量（贮）气管和平衡瓶。贮气管的体积一般在100mL到2L之间，可根据反应的规模大小选择合适的贮气量；在平衡瓶里所装的液体通常是水或汞。在反映过程中，氢气的压力大小可以通过平衡瓶的高度来调节。反应结束后，再通过平衡瓶来测量参加反应的氢气的体积。气压计可以保证在反应前后，氢气都在相同的压力下（一般为1atm）进行体积测量。 压缩气体钢瓶 在有机化学实验中，有时会用到气体来作为反应物。如氢气、氧气等，也会用到气体作为保护气，例如氮气、氩气等，有的气体用来作为燃料，例如煤气、液化气等。所有这些气体都需要装在特制的容器中。一般都是用的压缩气体钢瓶。将气体以较高压力贮存在钢瓶中，既便于运输又可以在一般实验室里随时用到非常纯净的气体。由于钢瓶里装的高压的压缩气体，因此在使用时必须严格注意安全，否则将会十分危险。
药理学实验动物的基本操 作实验心得 Revised by Jack on December 14,2020
这次是第一次药理学实验，我们学习了很多实验动物的基本操作方法。在做药理学实验之前我们就有做过人体解剖生理学实验，解剖过蟾蜍，小白鼠和家兔，这次的药理学实验更是一次对所学知识的巩固和深化，教给了我们很多在生理学实验中并没有学过的知识点。在刚做实验时，黄老师就向我们介绍了3R原则，即减少，优化，替代。动物是我们人类的朋友，首先我们应该尊重动物。它们用生命来换取人类的健康，推动着医学的进步，人类医学的发展离不开动物实验，动物为我们人类的健康做出了牺牲，我们应遵循“3R”原则。黄老师还通过视频给我们重点介绍了常用麻醉药及用法，实验动物的捉拿、麻醉、固定、给药、取血和处死方法。让我学到了很多实用性很强的东西。 之后便是分组自己做实验了，首先陈老师向我们讲解了小白鼠的标记方法，用中性品红表示十位数，苦味酸表示个位数，加上空白对照，一共可以标记一百支小白鼠。标记顺序为先左后右，从上至下。用苦味酸作为标记物的一个原因是它不容易被分解和弄掉，不会因为小鼠的活动而消失。其次是因为其有苦味，避免了被其他老鼠舔掉。之后讲解了小鼠的性别鉴定方法，除了书上说的方法外还可通过观察小鼠的乳房辨别。关于大鼠和家兔的捉持方法，大鼠在捉持前最好对其进行安抚，避免其急躁而咬人，而家兔则不可用手扯其双耳将其拉起。在给药方法方面，灌胃法要注意从口角插入口腔，用灌胃针抵住舌头，插入不可过深，一般入喉即可。腹腔注射时最好将其倒转，头部朝下，这样不容易刺入内脏。是否插入腹腔的判断方法：推注完后，轻微回抽，若有负压将注射器的推杆拉回，则已入腹腔。皮下注射时是否的入皮下的判断方法上同，皮下无负压，回抽不拉回。尾静脉注射时注意静脉在尾的两侧，不在上下，注射时用手捏住尾巴前段有利于暴露血管。 家兔的灌胃用木质开口器，使用时要想办法将其舌头压在开口器下，因为舌头会阻碍导尿管插入口腔，可以另外使用棉签配合，一边用棉签压住舌头，一边将开口器插入口腔。耳缘静脉注射时要注意选择小号针头，因家兔耳静脉较小，插入时应仔细谨慎。
实验一基本测量仪器的使用 【实验目的】 1．熟悉米尺、游标卡尺、螺旋测微计、测量显微镜的构造、测量原理及使用方法，练习使用分析天平进行精密称衡； 2．学习有效数字和不确定度的计算，掌握误差理论与数据处理方法，熟悉精密称衡中的系统误差补正． 【实验仪器】 米尺、游标卡尺，螺旋测微计，测厚仪，分析天平，球体，圆柱等，金属块、玻璃块、有机被璃块等． 【实验原理】 一、米尺 “米”是国际公认的标准长度单位，历史上由保存在巴黎国际标准度量衡局的米原器二刻线间的长度决定。1983年第十七届国际计量大会通过的“米”的新定义为：1m是光在真空中于1/299792458s的时间内所传播的距离。 常用米尺（包括各种常用直尺）的分度值是1mm毫米,因此用米尺测量长度时可以读准到毫米级,估计到0.1毫米级(1/10毫米位)。 用米尺测量物体长度的要领是紧贴、对准、正视。米尺自身有一定的厚度，若不贴紧待测物，观测者从不同角度看去，将产生读数的差异，测量时应尽量减少视差。为避免端边磨损带来的误差，也可以不用零刻度线，而以某一刻度线（如1.00cm）作为测量起点，考虑到刻度的不均匀,可以不同刻度线为起点作多次测量而取其中平均值。 二、游标卡尺 （1）游标卡尺构造 游标卡尺的构造如图1-4所示，卡钳E和E'同刻有毫米的主尺A相连，游标框W上附有游标B以及卡钳F和F'，推动游标框W可使游标B连同卡钳F、F'沿主尺滑动．当两对钳口E与F，E'与F'紧靠时，游标的零点（即零刻度线）与主尺的零点相重合．用游标卡尺测定物体长度时，用卡钳E F或E'F'卡着被测物体，显然此时游标零点与主尺零点间距离恰好等于卡钳E、F间或卡钳E'、F'的距离，所以从游标零点在主尺上的位置，根据游标原理就可测出物体的长度（卡钳E'F'部分是用来测量物体的内部尺寸，如管的内径等）．图中螺钉C是用来固定油标框的，防止游标框在主尺上滑动以便于读数．