气相色谱法测定种因1号中厚朴酚与和厚朴酚含量
更新日期： 07-07 王俊华 麦惠环
提要 用内标和非极性毛细管气相色谱法测定“种因1号”中厚朴的主要有效成分厚朴酚与和厚朴酚含量。结果表明：厚朴酚含量0.319%， RSD=1.5%( n=3)，平均回收率为97.3%， RSD=1.5%( n=3)；和厚朴酚含量0.264%， RSD=3.2%( n=3)，平均回收率为98.1%， RSD=1.8%( n=3)。方法精密度高，重现性好，操作简便。
关键词 种因1号； 厚朴酚； 和厚朴酚； 含量测定； 气相色谱法
The Determintion of Magnolol and Honokiol in Zhongying No.1 by GC
Wang Junhua(Wang JH), Mai Huihuan(Mai HH)
School of Chinese Materia Medica, Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405
Abstract Magnolol and Honokiol, the main components of Hou-po in Zhongying No.1, were quantitatively determinated by GC with glass capillary column and hexadecanol as internal standard. Results: Magnolol content and average recovery were 0.319%( n=3, RSD=1.5%) and 97.3%( n=3, RSD=1.5%) respectively; Honokiol content and average recovery were 0.264%( n=3， RSD=3.2%) and 98.1%( n=3, RSD=1.8%) respectively. The method is reliable and simple, and its result is accurate and reproducible.
Key words Zhongying No.1; Magnolol; Honokiol; Content determination; GC
厚朴(Magnolia officinalis Rehd.)具有燥湿消痰平喘、温中益气、消积和胃等功效。其主要成分厚朴酚与和厚朴酚具有抗菌抗溃疡及防龋齿作用［1］。“种因1号”是以厚朴为主要药材的醇提浸膏与其它辅料制成，开发用于腊制品的一种食品添加剂，具有改善色泽、风味、健胃抗菌抗病等作用。关于厚朴酚与和厚朴酚的测定方法，文献报道主要有薄层扫描、高效液相色谱和气相色谱法［2，3，4，5，6］。本文主要研究毛细管气相色谱法对“种因1号”中厚朴酚与和厚朴酚的分离和测定，旨在为产品的质量控制提供方法依据。
1 实验材料
厚朴酚与和厚朴酚对照品由中国药品生物制品检定所提供；“种因1号”试样由珠海天绿公司研制提供；十六醇(内标)、乙酸乙酯、乙醇等化学试剂均为分析纯。
2 仪器和色谱条件
2.1 仪器：岛津GC-14BF气相色谱仪；氢火焰离子化检测器(FID)；C-R7A数据处理机；电子天平AEG-220；CQ-200超声清洗器。
2.2 色谱条件：CBP-1(25 mm×0.25 mm ID)毛细管色谱柱；载气：氮气130 kPa(40 ml/min)，氢气65 kPa，空气50 kPa；柱温：；汽化室250℃；检测器280℃；分流进样，进样量：2.0 μl。在此条件下保留时间为：十六醇5.70 min，厚朴酚9.67 min，和厚朴酚11.83 min。
3 实验方法和结果
3.1 标准溶液配制：精密称取厚朴酚17.2 mg，和厚朴酚14.6 mg，分别置于5 ml容量瓶，用乙酸乙酯定容为厚朴酚(M)标准液与
和厚朴酚(H)标准液。分别准确移取1.50 ml厚朴酚(M)与和厚朴酚(H)标准液混合为C标准液；精密称取约0.1600 g十六醇于100 ml容量瓶，用乙酸乙酯定容为D内标液。
3.2 标准曲线绘制：准确移取0.20、0.30、0.40、0.50、0.60 ml C标准液于1、2、3、4、5号1 ml容量瓶中，分别准确移入0.20 ml D内标液，并用乙酸乙酯定容。按上述色谱条件进样，色谱图见图1。测定内标、厚朴酚与和厚朴酚的峰面积 A，计算Y1=A(M)/A(D)，Y2=A(H)/A(D)；平行测定3次，计算 Y1和 Y2的平均值，分别以Y1(平)及 Y2(平)对(M)及(H)的浓度 X作图，线性回归得：
结果表明，厚朴酚与和厚朴酚的峰面积比与浓度线性关系良好。
3.3 精密度测定：以3号标准液平行进样6次，测得 Y1 (平)=1.1638， RSD=0.61%( n=6)； Y2 (平)=1.0352， RSD=0.82%( n=6)。
3.4 供试品测定：精密称取5.0000 g编号为1号的“种因1号”粉末于50 ml蒸馏瓶。用乙酸乙酯40、30、30 ml分别回流提取各30 min，过滤，合并滤液，蒸馏浓缩约10 ml，移入25 ml容量瓶，加入5.0 ml内标液，乙酸乙酯定容，按上述色谱条件操作，色谱图见图2。平行测定3次，测得厚朴酚为15.851 mg，含量为0.317%；和厚朴酚13.174 mg，含量为0.264%。
3.5 重复性试验：按3.4操作方法以编号为1号的“种因1号”样品制得4个试样液，同样色谱条件下测定，结果：厚朴酚15.756 mg，15.974 mg，15.685 mg，15.862 mg，平均值15.819 mg， RSD=0.8% ( n=4)；和厚朴酚13.128 mg，13.037 mg， 13.326 mg，13.204 mg，平均值13.170 mg， RSD=1.0%( n=4)。
3.6 加样回收率试验：精密称取3.0000 g编号为1号的“种因1号”粉末3份，分别加入厚朴酚(M)与厚朴粉(H)标准液，按3.4操作方法，同样色谱条件下测定，结果见表1。
3.7 不同编号样品测定：按3.4操作方法测定3个编号样品，结果见表2。
表1 厚朴酚(M)与和厚朴酚(N)加样回收率测定结果
编号 厚朴酚 (M) 和厚朴酚 (H)
加入量 检出量 回收率 平均回 RSD 加入量 检出量 回收率 平均回 RSD <
(mg) (mg) (%) 收率(%) (%) (mg) (mg) (%) 收率(%) (%)
S1 1.72 1.644 95.6 1.46 1.401 96.0
S2 3.44 3.371 98.0 97.3 1.5 2.92 2.896 99.2 98.1 1.8
S3 5.16 5.075 98.4 4.38 4.336 99.0
表2 样品测定结果 (%)
编号 厚朴酚 和厚朴酚
含量 RSD( n=3) 含量 RSD( n=3)
1 0.317 0.5 0.271 0.6
2 0.324 0.8 0.6267 0.6
3 0.315 0.4 0.255 0.5
平均 0.319 1.5 0.264 3.2
4 讨论
选择分离厚朴酚与和厚朴酚的色谱柱，一般毛细管柱都可以完全分离，而填充柱除了OV-101固定相填充柱外，其它固定相填充柱分离效果不理想。在内标和柱温选择上，采用程序升温法，既使杂质峰与内标峰得到分离，又
保证被测成分完全分离和保留时间不太长；按“3.4”操作方法制备不含内标物的供试液，在相同色谱条件下测得的色谱图图3，与图2比较，可以看出杂质峰对内标峰的影响可以忽略。在提取方法上，用95%乙醇提取滤液浓缩后有凝胶状物(可能为糖类物质)沉出，溶液颜色深，色谱峰复杂，干扰成分多，对柱污染严重；而用乙酸乙酯提取的溶液较清透，干扰峰少。用超声波振荡提取，离心过滤，方法简便，测定结果与回流提取结果差异很小，两种方法都可以使用。由于进样和检测器响应各种因素，外标法精密度很差，不适宜采用，如果选择到适当的内标物和色谱条件，内标相对法可以明显改善测定方法的精密度和重现性。作为产品质量指标，建议厚朴酚含量≥0.30%，和厚朴酚含量≥0.25%。