芽孢染色及酵母菌的观察
作者：喻曙光学号：。。。。。。。。。。。。生院10级生命基地班组别：生北308周五第四组同组者：。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。
实验目的
1、学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。
2、观察酵母菌的形态及出芽方式，区分死酵母及活酵母细胞。
3、学习酵母子囊孢子的观察方法。
实验材料
菌种枯草芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，酿酒酵母。
溶液和试剂孔雀绿水溶液美蓝染液番红染液95%乙醇。
仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，载玻片夹子，滴管，无菌水，显微镜，接种环等。
实验原理
（一）细菌芽孢的染色及观察
简单染色法适用于一般的微生物菌体染色，而某些微生物具有一些特殊的结构，如芽孢、荚膜和鞭毛，对它们进行观察前需要进行针对性染色。
芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而便于区别。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦着色就难以被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两
者区别开来。
（二）酵母菌的观察
单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大多数采取出芽方式进行无性生殖，也可以通过结合产生子囊孢子进行有性生殖。由于细胞个体大，采取涂片的方法制片可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。同时采用美兰染液水浸片法还可以对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢活细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变成无色的还原型，染色后活细胞呈无色。死细胞或代谢能力较弱的衰老细胞内还原能力弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色。
实验步骤
（一）细菌芽孢的染色及观察
1、涂片：取一洁净载玻片，在其上选取两个合适位置并分别滴上一滴蒸馏水；在两滴蒸馏水中分别用接种环接种上少许枯草芽胞杆菌和梭状芽胞杆菌；
2、加热干燥固定
3、加热染色：木夹夹住孔雀绿水溶液覆盖涂菌部位，微火加热至染液冒蒸气并维持5min，加热时注意补充染液，切勿让玻片干涸。
4、脱色：冷却后水洗
5、复染：用番红水溶液复染2 min。
6、水洗干燥镜检
（二）酵母菌的染色观察
（1）美蓝浸片
1、涂片中央接种：在载玻片中央加一滴美蓝染液，接种上酵母菌。
2、盖玻片：用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在
菌液上。
3、放置、镜检：将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根
据颜色区别死活细胞。染色30min后再次观察，注意死活细胞数量的变化。
（三）子囊孢子观察
1、制片：取一干净载玻片，在中央滴一滴蒸馏水，接种上酵母菌。
2、染色：滴加孔雀绿染液染色2.5 min。
3、水洗: 清水冲洗多余孔雀绿染液
4、脱色：用95% 的乙醇脱色30s。
5、水洗
6、复染：用番红复染30s~1min。
7、水洗干燥镜检（子囊孢子呈绿色、菌体和子囊呈红色）
五、实验结果与分析
表（1）酵母菌美兰染色观察结果
绘图表示所观察到的芽孢形态
图1枯草芽孢杆菌芽孢染色图（10*100）芽孢放大图
图2梭状芽孢杆菌芽孢染色图（10*100）芽孢放大图
图3 酵母菌美蓝浸片死活细胞图3min（10*100）图4酵母菌的出芽生殖（10*100）
图5 酵母菌子囊孢子的染色观察（10*100）子囊孢子放大图
六、实验思考
1、为什么芽孢染色需要进行加热？能否用简单染色法观察到细菌芽孢?
答：芽孢是整个生物界中抗逆性最强的生命体，只有加热时芽孢的渗透性发生了变化，染液才能渗透进入芽孢，所以芽孢染色需要加热。简单染色不能观察到芽孢：因为简单染色法没办法给芽孢着色。芽孢壁厚、透性低，着色、脱色均较困难，芽孢染色一般是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲合力不同的原理，用不同染料进行着色，使芽孢和菌体呈不同的颜色而便于区别。
2、若在你的制片中仅看到游离芽孢，而很少看到芽孢囊和营养细胞，试分析原因。
答：芽孢染色涂片上仅看到游离芽孢的原因：因为该细菌的培养时间过长,已经达到生长的中后期。随着环境中营养物质的消耗以及细菌次级代谢产物的积累，对细菌来说，环境越来越不得于生长，所以必须产生芽孢以度过不良环境。因此也就会产生大量的芽孢，与此同时，芽孢囊也会解体。所以，在实验涂片上，就会出现大量的游离芽孢，而很少看见芽孢囊和营养细胞。
3、用孔雀绿初染芽孢后，为什么必须等玻片冷却后再用水冲洗?
答：脱色必须等玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。
4、根据你的观察结果，美蓝染液作用时间对酵母菌死、活细胞比例变化是否有关系？试分析原因。
答：有关系。
原因：①染色剂作用时间较慢，随时间的增加，被染的死细胞数目增多。
②染色剂逐渐导致菌体细胞脱水，随时间增加死亡数目增多。
③随染色时间增加，更多的代谢缓慢的老细胞被染色，从而观察时被当成了死细胞。讨论
本实验成功的关键
（1）选用适当菌龄的菌种，幼龄菌尚未形成芽孢，而老龄菌芽孢囊已破裂。
（2）加热染色时必须维持在染液微冒蒸汽的状态，加热沸腾会导致菌体或芽孢囊破裂，加热不够则芽孢难以着色。
（3）脱色必须等待玻片冷却后进行，否则骤然用冷水冲洗会导致玻片破裂。
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实验二酵母菌的死活染色及放线菌的形态观察 赵奕玲 121180169 一．实验目的 1.观察酵母菌的形态及出芽生殖。 2掌握酵母菌的死活细胞的鉴定方法。 3.掌握观察放线菌形态的基本方法，并观察放线菌的形态特征。 二．实验原理 1.酵母菌形态及出芽方式观察的基本原理：酵母菌的死活染色通过用美蓝染色制成水浸片，来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。 2.酵母菌子囊孢子观察的基本原理：子囊类酵母菌是以接合产生形成子囊和子囊孢子的方式进行有性繁殖的。它们一般通过邻近的两个形态相同而性别不同的细胞各自伸出一根管状的原生质突起相互接触、局部融合并形成一条通道，再通过质、核配和减数分裂形成4或8个子核，然后它们各自与周围的原生质结合在一起，再在其表面形成一层孢子壁，这些一个个子囊孢子就成熟了，而原有的营养细胞则成了子囊。能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需一定条件，其中麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 孢子壁厚不易着色，但是一旦着色就很难被脱色。因此先用强染色剂（孔雀绿）下染色，使染料进入菌体和孢子，水洗时菌体中染色被洗脱而孢子中染料保留。在用对比度大的复染色剂染色后，菌体染上复染色剂的颜色而孢子保留原来颜色，这样可将两者区别开来。 3.放线菌形态观察的基本原理：放线菌在固体培养基上呈辐射状生长而得名。放线菌是由不同长短的纤细的菌丝所形成的单细胞菌丝体。菌丝体分为两部分，即潜入培养基中的营养菌丝（或称基内菌丝）和生长在培养基表面的气生菌丝。有些气生菌丝分化成各种孢子丝，呈螺旋形、波浪形或分枝状等。孢子常呈圆形、椭圆形或杆形。气生菌丝及孢子的形状和颜色常作为分类的重要依据。
微生物实验报告 酵母菌的形态观察 一、目的要求： 1、掌握普通光学显微镜的使用方法和注意事项 2、观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别 3、学习鉴别死活酵母细胞的实验方法 二、器材和器皿： 1、酵母菌 2、生理盐水、美蓝染色液、 3、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种针、擦镜纸 三、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 四、操作步骤： （一）显微镜的主要构造： 普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。（二）显微镜的使用方法 1．低倍镜的使用方法 （1）取镜和放置： 显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。 （2）调节光源 （3）低倍镜观察 先将标本玻片置于载物台上，并将标本部位处于物镜的正下方，以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。 然后，两眼同时睁开，左眼看目镜，同时反时针方向慢慢旋转粗调节轮，当在视野内出现物象后，改用细调节轮，上下微微转动，直至视野内获得清晰的物象。然后认真观察标本各部位，确定并将需进一步要观察的部位移视野中央，准备用高倍镜观察。
酵母菌的死活细胞鉴别与镜检计数 一、实验目的 1.掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。 2.了解血球计数板的构造，掌握利用它进行酵母菌计数的方法。 二、实验步骤 1.酵母菌血球计数板镜检计数 1)取一块盖玻片，加盖在血球计数板中央计数室上方。 2)用滴管吸取菌悬液滴于盖玻片的边缘，通过毛细作用渗入计数室，注意不能有 气泡产生，然后放置于载物台，静止5min，使细胞全部沉降到其表面。 3)高倍镜镜检，数对角线上5个中方格中细胞的总数，再计算出菌悬液浓度。为 了减少误差，应注意对样品适当稀释，以每个小方格中平均4~6个细胞为佳； 另外，也可对同一样品重复计数，取其平均值。 附:计数板的结构及测定原理 利用血球技术板镜检技术是一种常用的计数方法。血球计数板是一块比普通载玻片厚的特质玻片，其上有四条凹槽，构成三个平台，中间比较宽，其中央又被一短横槽隔成两半，每半边各有一个计数区，其上有9个大方格，只有中央的一个大方格为计数室供计数用。这一大方格的长宽各为1mm。加盖盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的距离为0.1mm，因此计数室的容积为0.1mm3。 目前血球计数板常用的是25格×16格型，其计数室被分成25个中格，其中每个中格又分为16个小格，故计数室共有400 小格。 计数时，首先把适当浓度的菌悬液注入计数室，然后在显微镜下计数，一般数对角线上5个中方格（共80个小方格）中细胞总数再根据下式求得菌悬液的浓度 细胞个数=5000A×B 式中A---5个中方格中细胞总数 B---菌悬液的稀释倍数 三、实验结果
个数:30 37 11 25 21 24 17 27 28 25
实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别实验三酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴别 实验时间：2019-9-19 星期三 一、目的要求 ⑴. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式, 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法 ⑵. 掌握酵母菌一般形态特征及其与细菌的区别 二、基本原理 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至几十倍，大 多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。 本实验是通过美蓝染液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色，用美蓝对酵母的活细胞 进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的 氧化型变为无色的还原型，因此具有还原能力的酵母活细胞是无色的而死细胞或代谢作用 微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死细胞或活细胞进行鉴别，并可 计算其成活率。 三、实验器材 ⑴. 菌种：酿酒酵母培养约2d 的麦芽汁斜面培养物 ⑵溶液或试剂：0.05%和0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 革兰染色用碘液 ⑶仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片接种环、洒精灯等 四、操作步骤 美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检水-碘浸片观察 1. 美蓝浸片的观察 ⑴在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液, 然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中, 混合均匀。 ⑵用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。 ⑶将制片放置约3分钟后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。
实验一酵母菌的形态观察及死活细胞鉴别 预习内容： 1. 光学显微镜的使用（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，23-27页） 2. 酵母菌的美蓝染色观察（参见周德庆，微生物学实验教程第3版，91-95页）预习思考题： 1. 随着物镜放大倍数的增加，视野的亮度是增强还是减弱？应如何调节？视野范围是如何变化的？ 2. 制作水浸片时如何避免产生气泡？ 3. 影响活菌数目的因素有哪些？染液浓度、染色时间及染色时的pH等因素对死活细胞数目比例有什么影响？ 4. 如何测定酵母菌死亡率？简述其原理。 5. 标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它? 一、实验目的与要求 1. 了解普通光学显微镜的构造及原理，正确掌握使用显微镜的方法； 2. 观察酵母菌的形态及出芽生殖方式； 3. 学习区分酵母菌死活细胞的实验方法； 4. 掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 二、实验原理 1. 酵母菌 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比常见细菌大几倍甚至十几倍，不必染色即可用显微镜观察其形态。但由于细胞个体大，采用涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般通过美蓝染液水浸片或水-碘液浸片法来观察酵母细胞。 大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式，并对酵母细胞进行死活染色鉴别。
2. 美蓝染液 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 图1：酵母菌美蓝浸片观察3min（10×40）图2：酵母菌美蓝浸片观察30min（10×40） 三、实验设备及材料 1. 菌种酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae) 或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2 天左右的豆芽汁液体培养物(需稀释)。 2. 溶液或试剂：0.1%和0.05%吕氏碱性美蓝溶液(或0.01%美蓝水溶液)，革兰氏染色用碘液等。 3．器材：显微镜，擦镜纸，吸水纸，盖玻片、酒精灯、接种环、镊子、胶头滴管、小烧杯、洗瓶等等。 四、实验步骤与内容 1．美蓝浸片的观察 （1）在载玻片中央加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色液，然后按无菌操作接种环挑取少量酵母菌放在染液中，并用接种环将其混合均匀，酒精灯上灼烧清洗接种环。 注：染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡。用接种环将菌体与染液混合时，不要剧烈涂抹，以免破坏细胞。
【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于蒸馏水中，混合均匀。 2)干燥固定。将载玻片在酒精灯上方来回移动，注意不要让载玻片距离火焰过近，以免烫死酵母菌细胞，可用手背反复试温度。 3)染色。孔雀绿染色 1-2min；水洗后用95%的乙醇溶液脱色30s；水洗后用番红染液复染1min；水洗后干燥。 4)镜检。将制好的装片放在显微镜下镜检，由低倍镜到高倍镜，最后用油镜观察。
山东大学实验报告2009年11月日 姓名郑冲冲系年级08级生科一班组别同组者张健康于政达 学号200800140207题目酵母菌的培养、形态观察、死活鉴定和子囊孢子的观察 一、目的要求 1、掌握酵母培养基的配置和酵母菌的接种方法 2、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。 3、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。 4、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。 二、基本原理 1、培养基：酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。 2、酵母菌的形态：酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片和水-碘液来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。 3、美蓝染色液：美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。 4、水-碘液染色液：该染液将革兰氏染液用碘液用水稀释4倍后得到的，亦可用于酵母形态和出芽生殖的观察。 4、子囊孢子的观察：酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。 三、实验器材 1.菌种：酿酒酵母培养数天的酵母-麦氏培养基斜面 2.溶液与试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，0.5%沙黄、95%乙醇，水-碘染液 3.培养基：酵母液体培养基，麦氏培养基。 4.仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯、接种环等。 四、实验步骤 1、酵母培养基的配置：蛋白质2%，酵母膏1%葡萄糖2%，加冷水100Ml，自然PH，在115℃下高压蒸汽灭菌30min。 2、接种和培养：无菌操作下，在灭菌的培养基中倒入少许酵母菌液即可。在28℃下培养48h 左右。 3、美蓝染色操作： 1>在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌液，混合均匀； 2>用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，避免产生气泡； 3>将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。 4>染色开始到过30min期间，观察死活细胞数量的变化； 4、水-碘液浸片法：滴加一滴水-碘液在载玻片的中央，无菌操作挑取少许酵母菌液至于染
姓名班级13级生命基地班学号同组者： 科目微生物学实验题目酵母菌的形态观察组别3 【实验题目】 酵母菌的形态观察 【实验目的】 1.掌握酵母菌一般形态与细菌的区别 2.观察酵母菌的出芽生殖，区分酵母菌的死细胞和活细胞 3.学习酵母菌子囊孢子的观察方法 【实验器材】 1.菌种： 酿酒酵母2d麦芽汁斜面培养物 2.溶液和试剂： A) 0.1%吕氏碱性美蓝溶液、质量分数为95%的乙醇溶液、5%孔雀绿水溶液、0.5%番红水 溶液、蒸馏水 B）香柏油、二甲苯 3.仪器及其它用品： 普通光学显微镜、擦镜纸、绸布、酒精灯、载玻片、接种针、培养皿、双层瓶（内装香柏油和二甲苯）等 【实验原理】 1、单细胞的酵母菌个体是常见细菌的几倍甚至几十倍，大部分采取出芽方式进行无性繁殖，也可以通过接合产生子囊孢子进行有性繁殖。 2、由于细胞个体大，采取涂片的方法制片有可能损伤细胞，一般采用美蓝染液水浸片法或水-碘液浸片法来观察酵母菌形态及出芽生殖方式。 3、采用美蓝染液水浸法可以对酵母菌的活细胞和死细胞进行鉴别。美蓝对细胞无毒，其氧化型呈蓝色，还原型无色，由于新陈代谢，活细胞内有较强还原能力，使美蓝由蓝色氧化型转变为无色的还原型，而死细胞或衰老细胞胞内还原性弱，染色后细胞呈蓝色或淡蓝色，因此，用美兰染色后，活细胞呈无色，死细胞呈蓝色。 【实验内容及步骤】 1、酵母菌制片与简单染色--美蓝染液水浸片法 1)滴加一滴0.1%吕氏碱性美蓝染液于载玻片中央，无菌操作用接种环由酿酒酵母麦芽汁斜面培养物挑取少许菌体置于染液中，混合均匀。 2)用镊子取一盖玻片，将盖玻片一边与菌液接触，缓慢将盖玻片倾斜并覆盖在菌液上。 3)将制片放置3min后，用低倍镜及高倍镜观察酵母菌形态和出芽情况，并根据细胞颜色区分死细胞和活细胞。 4)染色30min后，再次观察，注意死活细胞的比例是否发生变化。 2、酵母菌子囊孢子的观察 1)涂片。先在洁净载玻片上滴一滴蒸馏水，用接种环无菌操作挑取适量酵母菌菌体于
实验六、酵母菌染色和细菌的革兰氏染色 一、实验目的 1、学习并掌握革兰氏染色法。 2、了解革兰氏染色原理 二、实验原理 革兰氏染色法可讲细菌分为革兰氏阳性和革兰氏阴性两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。前者细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘—结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘—结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。而后者细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘—结晶紫复合物容易洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂（番红）染色后又变为复染剂染色。 三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 2、溶液和试剂：草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液等。 3、仪器和其他用品：酒精灯、载玻片、显微镜、双层瓶、擦镜纸、接种环、 试管架、镊子、滤纸、滴管和无菌生理盐水等。 四、实验方法与步骤 (1)革兰氏染色步骤： 1、制片 取菌种按常规方法涂片（不宜过厚）、干燥、固定。 2、初染 滴加草酸铵结晶紫染液覆盖涂菌部位，染色1min后倾去染液，水洗至流出无色。 3、媒染 先用卢戈氏碘液冲去残留水迹象，再用碘液覆盖1min，倾去碘液 4、95%酒精脱色 在白色背景下用滴管流加95%乙醇脱色（一般25-30s），当流出液无色时立即用水洗去乙醇。 4、复染 将玻片上残留水用吸水纸吸去，用番红复染液染色1min，水洗，吸去残水晾干。 5、镜检 将制好的片在显微镜下观察。 6、混合涂片染色 在载玻片同一区域用大肠杆菌和枯草芽孢杆菌混合涂片，其他步骤同上，显微镜下观察。 （2）酵母菌的普通染色 1、制片
酵母菌形态观察实验报告单 班级日期姓名 实验目的 认识酵母菌的形态结构，掌握其观察方法。 实验内容 1．酵母菌菌落特征的观察 2．酵母菌细胞形态及芽殖方式 3．液泡的活体染色观察 4．肝糖粒染色观察 5．脂肪粒染色观察 实验原理 酵母菌是单细胞真菌，通常呈圆形、椭圆形或卵圆形，其菌落较大而厚， 湿润，较光滑，颜色多为乳白、灰黄、淡黄、灰褐色，少见粉红或红色，偶见黑色。酵母菌个体比细菌大几倍到十几倍， 在高倍镜下即能观察清楚。细胞内常有明显的细胞核及其内含物。无性繁殖以芽殖为主，在细胞的一端初生小突起如芽，逐渐增大，芽缢裂而与母细胞分离，形成独立的菌体。发生的芽如不立即脱离母细胞并继续出芽，则多数芽细胞集聚成芽簇。在陈旧培养中，芽簇细胞伸长成丝状，称假菌丝。 酵母菌的有性生殖形成子囊袍子，其过程由两个菌休细胞结合后，其中配合的细胞核分裂，形成2个、4个或8个子囊孢子。 实验器材 酿酒酵母培养物 显微镜、载玻片、盖玻片、接种针 0.1％美蓝液、中性红染色液、碘液 实验步骤 1．菌落特征的观察 取少量酿酒酵母划线接种在土豆平板培养基上，28—30℃养3—5d。用肉眼观察菌落特征，项目包括菌落表面湿润或干燥、有无光泽、隆起形状、边缘形状、大小、颜色等。 2．酵母菌细胞形态及芽殖方式 在洁净载玻片上滴加一滴无菌水或0.1%美蓝液一滴，用接种环取酵母菌菌台少许与无菌水或美蓝液混匀，盖上盖玻片，即成为水浸片。用高倍镜观察酵母细胞形态及出芽情况。 染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡 而影响观察。盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察 3．液泡的活体染色观察 在洁净的载玻片上滴加一滴中性红染色液，用接种环取少量酿洒酵母与染液混匀，染色4—5min后，盖上盖玻片在显微镜下观察。中性红是液泡的活体
酵母菌分类 根据荷兰Lodder&Kreger-vanRij所着“TheYeasts,ATaxonomyStudy” 分类主要依据是 1.形态 2.对硝酸盐或碳源的利用 3.对糖的发酵性 形态与大小：因酵母种类不同而不同，同一种也会因培养条件或发育时期不同而有异，一般直径约在5μm，显微镜40X及100X接物镜下皆可观察到。 cerevisiae型：球形与卵形(如啤酒酵母Saccharomycescereviisiae) ellipsoideus型：椭圆形(如葡萄酒酵母Saccharomycesellipsoideus) pastorianus型：香肠形 apiculatus型：柠檬形 trigonopsis型：三角形 增殖法：主要为营养增殖(即出芽生殖(budding))，偶而发生有性生殖时则行子囊胞子来增殖。 母细胞(mothercell)：原来的细胞 子细胞daughtercell)：增殖後的细胞 多极出芽(multilateralbudding)：同一个细胞上数个地方可以出芽者 两极出芽(bipolarbudding)：只有细胞两端才会出芽者(如Kloeckera spp.) 伪菌丝(pseudomycelium)：出芽後的细胞一直连成很长，呈菌丝状者(如Candida spp.) 真菌丝(truemycelium)：有些酵母会形成如同霉菌具有隔膜(septum)的真菌丝(如Endomycopsis spp.,Trichosporum spp.) 分裂酵母(fissionyeast)：非出芽，而是在细胞中央形成隔膜再分裂成两个细胞者(如Schizosaccharomyces spp.) 出芽分裂(budfission)：出芽後基部不缩小，在子细胞与母细胞之间直接分裂的酵母谓之(如Saccharomycodes spp.) 子囊孢子(ascospore)：在不利的环境下，在酵母的生活史中某一部分会形成子囊孢子 有孢子酵母(sporogenousyeasts)：能产生子囊孢子的酵母称之 无孢子酵母(asporogenousyeasts)：不形成子囊孢子之酵母 一倍体营养细胞(haploid)： 由二个一倍体细胞接合後再形成子囊胞子者(如Schizosaccharomyces) 出芽时分裂的二个核融合後在母细胞内形成子囊孢子者(如Debaryomyces) 母细胞与出芽细胞间融合後的核，移到另一个出芽细胞内形成子囊孢子者(如Nadsonia) 二倍体营养细胞(diploid)：环境不合适时，停止出芽生殖，直接减数分裂产生子囊胞子(如Saccharomycodes(孢子能在子囊内直接接合成两倍体)或Saccharomyces(发芽後的胞子间才接合成两倍体)) 子囊(ascus)内的孢子数，普通为2or4，多者可8or16，偶而会有奇数，其形状有：
微生实验报告 姓名：王晶晖 专业年级：2011级生物技术 学号：040312011032 实验四酵母菌的形态观察及细胞死活的鉴别，微生物细胞大小的测定 一、实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2．了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 . 3．了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、实验原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把10 mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的
实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微弱或死细胞，无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，不仅用此法可观察酵母细胞形态，也可用来鉴别酵母菌的死细胞和活细胞。 三、试剂与器材 1.材料酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)或卡尔酵母(Saccharomyces calsbergensis)培养2天左右的麦芽汁(或豆芽汁)液体培养物。 2.试剂0.05％和O.1％吕氏碱性美蓝染色液、革兰氏染色用的碘液。 3.器材显微镜、载玻片、盖玻片、接种环、洒精灯等。 四、实验内容 1.美蓝浸片观察酵母培养→制片→染色→镜检→30分钟后再镜检 2.水-碘浸片观察 五、关键步骤及注意事项 1.染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液溢出或出现大量气泡。 2.用镊子取一块盖玻片，先将一侧与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下，使其盖在菌液上，盖玻片不宜平着放下，避免气泡产生。 六、思考题 1.吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响?试分析其原因。 2.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌? 实验七酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定 一、实验目的 1.观察酵母菌的形态特征、出芽生殖方式，并掌握酵母菌与细菌形态特征的区别。 2.学习鉴别死活细胞的实验方法。 二、实验原理 酵母菌是单细胞的真核微生物，菌体比细菌大而且不运动。酵母菌的繁殖方式分为无性繁殖和有性繁殖两种，以无性繁殖为主。芽殖是酵母菌普遍的无性繁殖方式，少数为裂殖；有性繁殖是产生子囊和子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水一碘液水浸片来观察酵母的形态和芽殖方式。 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母活细胞染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型，而对代谢作用微
实验7酵母菌的形态观察、大小测定和直接计数 一、实验目的 酵母菌的形态及出芽生殖，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；学习并掌握用测微尺测定微生物大小和使用血球计数板进行微生物计数的方法。 二、实验原理 1.酵母菌形态观察 酵母菌个体较大，常规涂片方法可能损伤细胞，因此用美蓝染液水浸片法观察其出芽生殖。美蓝染液的氧化形式蓝色，还原形式无色。活细胞由于新陈代谢，细胞内还原性物质还原美蓝而呈现无色，死细胞或代谢能力弱的细胞不能将美蓝还原呈现蓝色。 2.细胞大小测量 微生物大小的测定需借助测微尺：目镜测微尺和镜台测微尺。镜台测微尺用于矫正目镜测微尺，总长1mm，分100个小格，每小格10μm。目镜测微尺是一块可放入目镜的圆形玻片，有50小格和100小格2种。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大倍数不同，目镜测微尺每小格代表的实际长度也不一样。因此，用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数的目镜和物镜下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微尺的格数，计算出细胞的实际大小。 3.细胞计数 血细胞计数板，大格1.0mm，体积0.1m3。 三、步骤 1.酵母菌观察 1)在载玻片中央加一滴0.05%吕氏碱性美蓝染色液，用滴管取1滴酵母菌菌液 于染液中，混合均匀。 2)加盖玻片。 3)将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母菌的形态和 出芽情况，并根据颜色区别死、活细胞。 4)染色约0.5h后再次进行观察，观察死细胞数量是否增加。 5)形态记录，计算0.5h后酵母菌的死亡率。 2.细胞大小测量 1)装目镜测微尺：把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒 内的格板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。 2)校正目镜测微尺：将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。校正：先 用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行。利用移动器移动镜台测微尺，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。换成高倍镜进行校正。计算：目镜测微尺每格长度（um）=两重合线间镜台测微尺格数x10 / 两重合线间目镜测微尺格数 3)菌体大小测定：目镜测微尺校正完毕后，取下镜台测微尺，换上酵母菌染色 制片。先在低倍镜下找到标本，换高倍镜测定酵母菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动载玻片，测出酵母菌的直径或宽和长所占目镜测
微生物实验报告 酵母菌的培养及观察实验 刘欣怡201100140057 生物科学基地班 组别：周一下午三组 同组者：曹平平，周楠， 刘艺，刘希伟 实验完成时间：2012年11月19号 一、实验目的 1、了解酵母菌的形态及出芽方式 2、学习区分酵母菌的死细胞和活细胞 3、掌握酵母菌子囊孢子的观察方法 4、巩固显微镜操作技术和无菌操作技术 二、实验器材 1．菌种： 酿酒酵母7d麦氏培琼脂（产孢培养基）斜面培养物，酿酒酵母2d YPD（酵母合成培养基）液体培养物。 2. 培养基： 酵母合成培养基，麦氏琼脂斜面 3、试剂： 0.01%美蓝水溶液，5%孔雀绿水溶液，0.5%番红水溶液，95%乙醇，蒸馏水、香柏油、去离子水等。 4. 仪器
试管，锥形瓶，酒精灯，显微镜，擦镜纸，酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶，接种环，滴管，滤纸，镊子、培养皿等。 三、实验原理 1、培养基： 酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。 2、酵母菌： 酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。 3、酵母菌的形态、大小、结构： 酵母菌是单细胞真菌，并非系统演化分类的单元； 酵母菌细胞的形态通常为圆形、卵圆形或椭圆形。也有特殊形态，如柠檬形、三角形、藕节状、腊肠形，假菌丝等； 比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米×5-20微米； 酵母菌无鞭毛，不能游动； 酵母菌具有典型的真核细胞结构，有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微体。
实验四酵母菌形态及菌落特征的观察 一、目的要求 1．观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。 2．观察酵母菌的菌落特征。 3. 学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。 二、基本原理 酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。 三、器材 1.活材料：酿酒酵母（Saccharomyces calsbergensis）2-3d培养物； 2.染液：吕氏碱性美蓝染液 3.器材：显微镜，载玻片，盖玻片等。 四、操作步骤 1．酵母菌落形态观察并记录。 2.美蓝浸片观察 (1)在载玻片中央加一滴碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取斜面上培养2-3d的酿酒酵母少许，放在碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。 (2)取盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。 (3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 2．水浸片观察 在载玻片中央滴一滴蒸馏水，取酿酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与水混匀，盖上盖玻片后镜检。可以适当将光圈缩小观察。 五、实验报告 绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。
芽孢染色及酵母菌的观察 作者：喻曙光学号：。。。。。。。。。。。。生院10级生命基地班组别：生北308周五第四组同组者：。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。 实验目的 1、学习芽孢染色法，了解芽孢的形态特征。 2、观察酵母菌的形态及出芽方式，区分死酵母及活酵母细胞。 3、学习酵母子囊孢子的观察方法。 实验材料 菌种枯草芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物,梭状芽胞杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，酿酒酵母。 溶液和试剂孔雀绿水溶液美蓝染液番红染液95%乙醇。 仪器和其他用品酒精灯，载玻片，盖玻片，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，载玻片夹子，滴管，无菌水，显微镜，接种环等。 实验原理 （一）细菌芽孢的染色及观察 简单染色法适用于一般的微生物菌体染色，而某些微生物具有一些特殊的结构，如芽孢、荚膜和鞭毛，对它们进行观察前需要进行针对性染色。 芽孢是芽孢杆菌属和梭菌属细菌生长到一定阶段形成的一种抗逆性很强的休眠体结构，也被称为内生孢子，通常为圆形或椭圆形。是否产生芽孢及芽孢的形状、着生部位、芽孢囊是否膨大等特征是细菌分类的重要指标。芽孢染色法是利用细菌的芽孢和菌体对染料的亲和力不同的原理，用不同的染料进行染色，使芽孢和菌体呈现不同的颜色而便于区别。与正常细胞或菌体相比，芽孢壁厚，通透性低而不易着色，但是，芽孢一旦着色就难以被脱色。利用这一特点，首先用着色能力强的染料（如孔雀绿或石炭酸复红）在加热条件下染色，使染料既可进入菌体也可进入芽孢，水洗脱色时菌体中的染料被洗脱，而芽孢中的染料仍然保留。再用对比度大的复染剂染色后，菌体染上复染剂颜色，而芽孢仍为原来的颜色，这样可将两
实验四酵母菌与霉菌的形态观察一.实验目的 1. 2. 3. 4.观察酵母菌的形态与结构并掌握其特征。 观察霉菌的菌落特征，学会霉菌的一般制作方法。 观察并掌握各种霉菌的个体形态及生长繁殖方式。 进一步熟悉xx的使用。 二.实验原理 酵母菌是一类单细胞真菌，一般呈圆形、椭圆形，无性繁殖以芽孢为主，也有少数是裂殖，有些酵母菌能产生囊孢子，有的能形成假菌丝。酵母菌的菌落似细菌菌落，但较大且厚，多呈白色，少数为红色。酵母菌在液体中生长可形成菌膜、菌环、沉淀和浑浊。酵母菌的细菌结构较完善，即有壁、膜、质、核等结构。酵母菌的细胞形态、繁殖方式和培养特征均为菌种鉴定的依据。 酵母活细胞新陈代谢旺盛，活力强，还原力也强，若无毒的染料进入细胞，既被还原脱色，但死细胞及代谢作用缓慢的老弱细胞无此还原力。美兰是无毒染料，且能被活细胞还原成无色，故可用来区别细胞的死活。 霉菌是一些小型丝状真菌、单细胞（根霉、毛霉）或多细胞（曲霉、青霉），其细胞结构与酵母类似，同属真核细胞。 霉菌形态较复杂，个体较大，具有分枝的菌丝体和分化的繁殖器官。其菌丝分为气生菌丝与营养菌丝（菌丝比放线菌粗得多）观察时请注意菌丝是否具有横膈膜、有无假根、无性繁殖时形成何种孢子，孢子着生方式以及孢子头的构造等，以区别各种不同霉菌的形态。 霉菌菌落由分枝状菌丝组成，较疏松，呈毛状、棉絮状、绒毛状或毡状。由于不同霉菌形成的孢子均有不同颜色、构造、性状，故菌落表面呈现出不同
的结构和色泽特征。菌丝一般呈白色或灰白色，菌落中心的菌丝较老，先产生孢子，故常形成同心圆。 三.实验器材 1.菌种： 面包酵母、根霉、曲霉、青霉。 2.仪器： xx。 3.其它： 生理盐水、乳酸酚棉兰染液、载玻片、盖玻片、接种环、酒精灯、美兰、镊子、大头针。 四.步骤与方法 1.酵母菌细胞形态观察 （1）制片： 用接种环挑取一环面包酵母菌种于载玻片上的一滴美兰染液中混匀，盖上盖玻片静置4~5分钟。盖时先将盖玻片的一边与液滴接触，然后慢慢放下，避免产生气泡。 （2）镜检： 用高倍镜观察，光线弱些，绘图表示个体细胞的大小、形状、芽孢或裂殖情况，并观察死活酵母情况。 2.霉菌的形态观察 （1）制片方法： 在洁净的载玻片加一滴乳酸酚棉兰染液，用大头针或镊子从
实验四酵母菌的形态观察, 死活细胞鉴别,微生物测量技术, 显微镜直接计数法 生物科学贺冰冰 040012010025 周二 9、0 节 一实验目的 1．观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法；掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。 2.了解目镜测微尺和镜台测微尺的构造及使用原理，掌握测定微生物细胞大小的方法 . 3. 了解血球计数板的构造和使用方法,学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二实验原理 美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色。 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体微小，只能在显微镜下测量。用于测量微主物细胞大小的工具有目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺是一块圆形玻片，在玻片中央把5mm长度刻成50等分，或把 10 mm长度刻成 100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上(此处正好与物镜放大的中间物像重叠)用于测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的专用载玻片，一般将lmm等分为100格，每格长10μm，每格长（0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将镜台测微尺放在载物台上，由于镜台测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经过物镜和目镜的两次放大成像进入视野，即镜台测微尺随着显微镜总放大倍数的放大而放大，因此从镜台测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小，所以用镜台测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的实际长度，然后移去镜台测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物细胞大小。
酵母菌的培养和形态观察 胡雪芳 201300261033 【实验目的】 1.了解酵母培养基的特点以及酵母的培养方法。 2.学习并掌握酵母制片方法，观察酵母的个体形态及死活细胞区分。 3.学习掌握观察酵母的出芽生殖方式。 4.学习掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。 5.学习和掌握酵母的菌落形态特征。 【实验原理】 1.酵母菌 酵母菌形态：是多形的、不运动的单细胞真核微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。 酵母菌繁殖：繁殖方式也比较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性生殖是通过质配、核配和减数分裂而产生的子囊孢子。 图1. 典型酵母（酿酒酵母）生活史
2.子囊孢子 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成。 3.美蓝染色 本实验通过美蓝染色浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。 美蓝为无 毒性染料，其 氧化型为蓝 色，而还原型 为无色。用它 对酵母菌染 色时，由于活 细胞的新陈 代谢作用，使 细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。
1.菌株 表1. 菌株。 2.培养基 表2. 培养基配方 3.实验试剂 表3.实验试剂及其配方。 4.其他 普通光学显微镜、吸水纸、载玻片、酒精灯、接种环等。