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分子生物学习题

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1.基因:指合成一种功能蛋白或者RNA分子所需要的全部DNA序列。

2.基因组:指一特定生物体的整套(单倍体)遗传物质的总和。

3.转录因子:一群能与基因5’端上有特定序列专一性结合,从而保证目的基因以特定的强度在特定的时间与空间表达的蛋白质分子。

4.转录单位:DNA链上从启动子直到终止子为止的长度称为一个转录单位。即可包含一个基因,也可包含几个基因。

5.复制子:DNA复制从起点开始双向进行直到终点为止,每一个这样的DNA单位称为复制子。

6.复制叉:双螺旋DNA两条亲本链分开使复制进行的部位。

7.单顺反子:只编码一个蛋白质的mRNA称为单顺反子mRNA.

8.多顺反子:可编码多个不同蛋白质的mRNA称为多顺反子mRNA.

9转座子:通过DNA复制而转移的转座元件。

10.分子伴侣:一类结构不同但功能相同的蛋白质,能帮助其他的蛋白质正确完成组装,而本身并不构成蛋白质执行功能时的结构组分。

11启动子:是DNA分子可以与RNA聚合酶特异结合的部位,也就是使转录发生的部位。

12.核心启动子:指保证RNA聚合酶II转录正常起始所必需的,最少的DNA序列。

13.增强子:DNA上能强化转录起始的序列,能够在启动子任何方向以及任何位置作用。

14.内含子和外显子:大多数真核基因都是由蛋白质编码序列和非蛋白质编码序列两部分所组成。编码的序列称为外显子;非编码的序列称为内含子。

15.终止子:存在于基因末端具有转录终止功能的一段特定序列。

16.SD序列;原核生物mRNA上起始密码子上游7-12个核苷酸的一个富含嘌呤的区域。

17起始因子:在蛋白质合成起始阶段特异性作用于核糖体小亚基的蛋白质。

18释放因子:识别终止密码子引起完整的多肽链和核糖体从mRNA上释放的蛋白质。

19.cDNA文库:以细胞的全部mRNA逆转录合成的cDNA组成的重组克隆群体称为cDNA文库。

20.顺式作用元件:指存在于DNA分子上的一些与基因转录调控有关的特殊顺序。

21.反式作用因子:指一些与基因表达调控有关的蛋白质因子。

22.操纵子:在原核生物中,若干结构基因串连在一起,其表达受到同一调控系统的调控,这种基因的组织形式称为操纵子。

23.基因家族:真核生物中,许多相关功能基因成套组合的形式。

24.DNA甲基化:一种表观遗传修饰,由DNA甲基转移酶将胞嘧啶装变为5--甲基胞嘧啶的反应。

25.葡萄糖效应:葡萄糖存在时,会抑制分解其他糖类的操纵子表达。

26.分子生物学:研究核酸、蛋白质等所有生物大分子的形态、结构特征及其重要性、规律性和相互关系的科学。它是人类从分子水平上真正揭开生物世界的奥秘,由被动的适应自然界转向主动地改造和重组自然界的基础学科。

27.DNA重组技术:将不同的DNA片段按照人们的设计定向连接起来,在特定的受体细胞中与载体同时复制并得到表达,产生影响受体细胞的新的遗传性状。28.冈崎片段:DNA合成过程中,随从链的合成是不连续进行的,先合成许多片段,最后各段再连接成为一条长链,这些小的片段叫冈崎片段。

29.半保留复制:DNA合成过程中,每个子代DNA的一条链来自亲代的DNA,另一条链则是新合成的,这种复制方式称为半保留复制。

30.半不连续复制:DNA复制过程中,前导链的连续复制和后随链的不连续复制是生物界的普遍现象,称为DNA的半不连续复制。

1、如何定义DNA一二三级结构?分别有何特点?

(1)DNA一级结构:指4中核苷酸的连接和排列顺序。有线性和环状之分;(2)DNA二级结构:指两条多核苷酸的链反向平行盘绕所生成的双螺旋结构。有左旋和右旋之分;

(3)DNA三级(高级)结构:指DNA双螺旋进一步盘旋形成的空间结构。有正负超螺旋之分。

2、试述DNA的二级结构特点(B型)

(1)两股反向平行的DNA链绕成同轴的右手双螺旋,双螺旋表面有大沟和小沟。(2)脱氧核糖和磷酸通过3’,5’磷酸二酯键相连,排列在外侧,碱基位于内测。

(3)两股DNA链遵循碱基互补配对原则,A-T(两个氢键),C-G(三个氢键)(4)双螺旋的直径为2nm,螺距3.4nm,每一个螺旋含10bp

3、真核生物基因组特点

(1)基因不连续,有内含子;

(2)存在大量的DNA多态性;

(3)基因转录产物为单顺反子;

(4)非编码序列占基因组的90%以上;

(5)基因组存在大量的重复序列;

(6)基因组具有端粒结构;

(7)基因组存在大量的顺式作用元件;

(8)基因组庞大,远高于原核生物

4、原核基因组的特点

(1)基因组通常由单一闭环双链DNA分子组成;

(2)基因组DNA只有一个复制起点;

(3)基因组所含基因数量较多,而且形成操纵子结构;

(4)基因组编码序列一般不重叠

(5)基因是连续的,无内含子;

(6)编码序列约占基因组的50%,高于真核生物;

(7)非编码序列主要是一些调控序列;

(8)多拷贝的基因很少;

(9)基因组中存在转座子;

5、DNA复制过程(原核)

DNA复制都是从固定的起点开始的,而DNA聚合酶只能延伸DNA不能从头合成DNA。复制前,先由RNA聚合酶在DNA模板上合成一段RNA引物。复制时,对于前导链,由引物引发复制,DNA聚合酶以RNA引物3;端为起点合成DNA.对于滞后链,由引发体引发复制,涉及冈崎片段的形成和DNA连接酶的连接过程。

DNA复制的终止:当复制叉前移遇到重复性终止子序列时,将阻挡复制叉的移动,等到相反方向的复制叉到达后停止复制,而后两条链解开。在DNA拓扑异构酶IV作用下,复制叉解体,释放子链DNA.

6、简述转录的过程

起始过程:RNA聚合酶与启动子DNA双链相互作用并与之结合,转录起始时,启动子附近的DNA双链分开形成转录泡,以促使核糖核苷酸与模板DNA的碱基配对,在RNA上合成第一个核苷酸键。

延伸过程:一旦RNA聚合酶成功合成9个以上的核苷酸并离开启动子区,转录就进行到正常的延伸阶段,RNA聚合酶沿着模板5’--3’方向不停的移动,合成RNA链,直到遇到终止信号。

终止过程:当延伸到终止位点时,RNA聚合酶不能形成新的磷酸二酯键,RNA-DNA 合成分开,DNA恢复双链,RNA聚合酶也从模板上释放出来。

原核生物与真核生物转录差异?

(1)原核基因产物为多顺反子,真核生物基因产物为不均一hnRNA.

(2)原核生物启动子具有高同源性,真核生物启动子差异较大。

(3)原核生物DNA聚合酶只有一种,真核生物DNA聚合酶有多种。

7、列出原核生物与真核生物mRNA的区别

(1)原核生物mRNA半衰期短,真核生物mRNA相对较长;

(2)原核生物mRNA多以多顺反子形式存在;真核生物mRNA多以单顺反子形式存在;

(3)原核生物mRNA5’短无帽子结构,3’端无ploy(A)尾;真核生物mRNA5’端有帽子结构,3’端有ploy(A)尾;

(4)原核生物起始密码子有AUG/GUG/UUG三种,真核生物起始密码子只有AUG 一种;

(5)原核生物起始密码子上游具有SD序列,真核生物则没有,依靠起始因子形成起始复合物来识别起始密码子。

(6)原核生物mRNA的转录和翻译几乎是同步进行的,真核生物mRNA转录和翻译在不同的时空下进行。

原核生物:-10:TATA序列真核生物:-35:TATA序列

-35:TTGA序列 -78---70:CCAA序列

-110:GC序列

8、蛋白质合成的生物学机制(原核为例)

(1)肽链的起始:a)核糖体小亚基(30S)首先与翻译起始因子结合,通过SD序列与mRNA模板相结合;b)在起始因子和GTP的帮助下,fMet--tRNAfMet进入小亚基的P位点,tRNA上的反密码子与mRNA上的起始密码子配对;c)带有tRNA、mRNA和三个翻译起始因子的小亚基复合物与大亚基(50S)结合,GTP水解,释放翻译起始因子。

(2)肽链的延伸、终止及释放:肽链的延伸包括:后续AA-tRNA与核糖体结合、肽键的生成、移位等三个过程。肽链延伸过程中,当终止密码子UAA/UAG/UGA 出现在核糖体的A位点时,没有相应的AA-tRNA能与之结合,而释放因子能识别这些密码子并与之结合,水解P位点上多肽链与tRNA之间的磷酸二酯键,然后,新生的肽链和tRNA从核糖体上释放,核糖体大、小亚基解体,蛋白质合成结束。

9、比较真核生物与原核生物翻译起始的区别

(1)翻译起始因子不同:

原核:IF1/IF2/IF3 真核:eF1/eF2/eF3

(2)mRNA模板不同:

原核mRNA5’无帽子结构,3’端无ploy(A)尾:真核则有

(3)核糖体不同;

原核:小亚基:30S 大亚基:50S

真核:小亚基:40S 大亚基:60S

(4)起始tRNA负载物不同;

原核:fMet--tRNA(fMet)

真核:Met--tRNA(Met)

10、真核生物翻译起始过程

核糖体小亚基40S首先与mRNA5’帽子结构结合,向3’端滑行,遇到AUG起始密码子时,与大亚基60S结合形成80S起始复合物,即扫描模式。

11、细胞通过哪些修复系统对DNA进行修复?各自的特点?

(1)错配修复--通过甲基化保留母链,切除并修复错配的子链;

(2)碱基切除修复--先切除突变碱基形成AP位点再移去包括AP位点在内的一段序列并重新合成;

(3)核苷酸切除修复--移去包括错误的核苷酸在内的一段序列后重新合成;(4)直接修复--通过直接的化学反应修复;

(5)SOS修复--在应急的情况下,对DNA进行修复,错误较高;

(6)重组修复--通过DNA重组对DNA进行修复,不能彻底修复。

12、密码子的特点

三联体/无逗号/密码子与反密码子的相互作用/通用性/简并性/具有方向性

13、什么是PCR技术,其原理是什么?

PCR即聚合酶链式反应,是一种在体外快速扩增特定基因或者DNA序列的技术,故又称基因的体外扩增技术。可以在试管中建立反应,经过数小时后,就能将极微量的目的基因或DNA片段扩增数十万乃至千百万倍,无需经过繁琐费时的基因克隆程序,就能得到足够数量的DNA拷贝。

基本原理:以拟扩增的DNA为模板,以一对分别与模板5’末端月3’末端相互补的寡核苷酸为引物,在DNA聚合酶的作用下,按照半保留复制的机制沿着模板连延伸知道完成新的DNA合成,重复这一过程,即可使目的基因片段得到扩增。

乳糖操纵子作用机制:

(一)乳糖操纵子的组成:大肠杆菌乳糖操纵子含Z/Y/A三个结构基因,分别编码半乳糖苷酶,半乳糖苷透过酶和半乳糖苷一线转移酶。此外,还有一个操纵序列O,启动子P,调节基因I.

(二)阻遏蛋白的负调控:(1)没有乳糖时,I基因编码的阻遏蛋白与操纵序列o结合,使乳糖操纵子处于阻遏状态,不能合成分解乳糖的三种酶。(2)有乳糖存在时,乳糖作为诱导物诱导阻遏蛋白发生变结,使之不能与操纵序列结合,操纵子被诱导产生分解乳糖的三种酶。所以,乳糖操纵子的调控机制为可诱导的负调控。

(三)CAP正调控:当大肠杆菌从以葡萄糖为碳源的环境转变为以

乳糖为碳源的环境时,cAMP的浓度升高,与CAP结合,使之发生变构,结合与乳糖操纵子启动子上游的CAP结合位点,对乳糖操纵子实行正调控,加速合

成分解乳糖的三种酶。

(四)协调调节:乳糖操纵子的I基因编码的阻遏蛋白的负调控与CAP的正调控互相协调,互相制约。

色氨酸操纵子的作用机制:

色氨酸操纵子的效应物分子是色氨酸,是由色氨酸操纵子所编码产生末端终产物,该系统属于阻遏操纵子。

(一)阻遏负调控:(1)当培养基中色氨酸含量较高时,他与游离的辅阻遏蛋白相结合,并使之与操纵区DNA紧密结合而使基因转录关闭,停止合成色氨酸;(2)当培养基中的色氨酸供应不足时,辅阻遏蛋白物失去色氨酸并从操纵区上解离,色氨酸操纵子去阻遏,启动转录,合成氨基酸。

(二)弱化作用:该理论认为mRNA转录的终止是通过前导肽基因的翻译来调节的。当培养基中的色氨酸的浓度很低时,负载有色氨酸的tRNA(trp)也就少,翻译通过两个相邻的色氨酸密码子就会很慢,当4区被转录完成时,核糖体才进入1区,这时前导肽结构是2-3配对,形成弱终止结构,造成通读,直到色氨酸操纵子的结构基因全部转录为止;当培养基中的色氨酸浓度很高时,核塘体可顺利通过两个相邻的色氨酸密码子,在4区被转录之前,核糖体就到达2区,所以1-2、3-4自由配对,形成含有茎环结构的强终止子,使转录停止,不再合成色氨酸。

(三)双重机制意义:负控阻遏与弱化作用对色氨酸操纵子的双重调控时,大肠杆菌对环境中的色氨酸浓度能做出灵敏迅速的反应。当色氨酸浓度低时,弱化子能快速的通过抗终止来增加结构基因的表达,而此时阻遏系统从有活性转变为无活性的状态速度较慢;当色氨酸浓度很高时,通过阻遏系统抑制结构基因的表达,组织非必需的前导mRNA合成,使调控更加经济。

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