微生物学实验复习
3、培养基的配置原则：
(1)目的要明确(根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成，生产用培养基内可加入化学成
分不明确的天然物质，而分类、鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。
(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。
(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌、放线菌和真菌的最适pH分别
为：6.5～7.5、7.5～8.5和5.0～6.0。
5、细菌培养基的配制过程？
答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2）【问题与探究】
（1）培养基灭菌后，为什么需要冷却到50 ℃左右时，才能用来搁置斜面或倒平板？你用什么办法来估计培养基的温度？
【提示】琼脂的凝固点为40 ℃，温度太高易使培养皿破裂，低于40 ℃，培养基已凝固，倒不出，所以培养基灭菌后，需冷却到50 ℃左右时才能用来倒平板，可以用手触摸盛有培养基的试管，感觉试管的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。
（2）为什么需要使试管口通过火焰？
【提示】通过灼烧灭菌，防止试管口的微生物污染培养基。
（3）为了能彻底灭菌，在操作过程中应注意哪些事项？
【提示】 使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力(100 kPa)、温度(121 ℃)和灭菌时间(20 min)。
6、无菌操作和接种技术 (1)接种
概念：在_无 菌 条件下将微生物接入 培养基____的操作过程。 工具：玻璃刮铲、接种针和接种环。
方法：穿刺接种、斜面划线接种和平板划线接种、涂抹平板等。 （2）无菌操作——微生物接种技术的关键
①培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要 灭菌_。 ②通常接种操作要在____酒精灯火焰__的附近进行。
【想一想】 在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？ 提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。
7、微生物的分离
（1）原理：根据微生物对_营养成分、氧气、pH 等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的必需条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到 选择分离 微生物的目的。 (2)方法
①据菌落形态特征初步分离 ②常用方法——平板分离法
分类?????_____________
混合平板法
______________
：是常用的平板分离法，有扇形划线、 连续划线、交叉划线和方格划线等
目的：在培养基上得到目的微生物的 单个 菌落 【归纳】无菌技术的具体内容
(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。
(3)实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。 (4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。
（5）在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。
8、平板分离法
①原理：大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落。平板分离法能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成便于移植的菌落。
②常用培养基：最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基。
③.方法：(1)涂抹平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂平板，用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀，细菌菌落常仅在平板表面生长。
(2)混合平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品与溶化的琼脂混合，将
与样品混合的琼脂倒入无菌平皿，细菌菌落出现在平板表面及内部。
(3)平板划线法：有扇形划线、连续划线、方格划线等。
涂抹平板法 平板划线法
4.目的：通过采用各种平板分离法在培养基上得到目的微生物的单个菌落。
(1)灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种，否则会杀死菌种。
(2)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。
(3)划线时用力大小要适当，防止用力过大使培养基划破。
9、菌落数目的统计方法
(1)显微镜直接计数法
①原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。
②方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻
片，其上有特定的面积为1 mm2，高为0.1 mm的计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。
③操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。
④计算公式
每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。
⑤缺点：不能区分死菌与活菌。
（2）间接计数法(活菌计数法)
①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。
②操作
⒈设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落
数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培
养，计算出菌落平均数。
2.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。
(3)滤膜法
①实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。
②过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红
菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。【特别提醒】
统计菌落数目的注意事项：
①一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。
②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。
③统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。
④设置对照，目的是排除实验组中无关因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。
实验探究：微生物的分离 【操作与实践】
微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。 1.稀释
用1 mL 无菌吸管吸取1 mL 大肠杆菌培养液，加入到盛有9 mL 无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1 mL 加入另一支盛有9 mL 无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。
2.划线或涂布
(1)平板划线分离法——在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种(如图)。平行划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。
特别提醒
平板划线法中的注意事项 ① 取菌种之前及每次划线之前都需要将接种环灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每
次灼烧目的 如下表：
②从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。
(2)涂布分离法——取3个平板，底面分别用记号笔写上10－4、10－5和10－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃刮铲在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10 min，使菌液吸附进培养基(如图)。
特别提醒
①将玻璃刮铲末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的玻璃刮铲在火焰上引燃。
②操作中一定要注意防火，不要将过热的玻璃刮铲放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。
3.培养
将划线或涂布接种的平板倒置于37 ℃培养箱
中，培养16～24 h，即可长出单菌落。
【问题与探究】
1.在涂布平板操作中，如何避免杂菌污染？
【提示】(1)酒精灯与培养皿的距离要适中。
(2)接种环、玻璃刮铲不能接触任何物体。
(3)接种环要用酒精灯灼烧。
(4)将沾有少量酒精的玻璃刮铲在火焰上引燃。
2.未接种的培养基表面有菌落生长，说明了什么？
【提示】如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2 d后有菌落生长，说明培养基灭菌失败，需要重新制备。
3.在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立菌落？
【提示】如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作符合要求；如果培养基上出现其他菌落，有其他杂菌混杂，可再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。
微生物学总结 绪论： 一、名词解释： 微生物：一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称。它们都是一些个体微小，构造简单的低等生物。 二、简答、论述： 1、微生物的五大共性： ⑴体积小，面积大；⑵吸收多，转化快；⑶生长旺，繁殖快；⑷适应强，易变异；⑸分布广，种类多。 2、巴斯德和科赫对微生物学的贡献： 巴斯德： ⑴彻底否定了“自生说”。（曲颈瓶实验） ⑵免疫学——预防接种。（鸡霍乱病） ⑶证明发酵是由微生物引起的。 ⑷发明巴氏消毒法。 科赫： ⑴证实炭疽病菌是炭疽病的病原菌。 ⑵发现了肺结核病的病原菌。 ⑷用固体培养基分离纯化微生物。 ⑸配制培养基。 原核生物： 根据外表特征把原核生物粗分为6种类型：细菌、蓝藻（蓝细菌）、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体 一、名词解释： 原核生物：指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作核区的裸露DNA的原始单细胞生物。 细菌：是一类细胞细短、结构简单、胞壁坚韧、多以二分裂繁殖和水生性较强的原核生物。 糖被：是包被与某些细菌细胞壁外的一层厚度不定的透明胶状物质。分为荚膜、微荚膜、粘液层和菌胶团。 芽孢：某些细菌在其生长发育后期，在细胞内形成的一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量低、抗逆性强的休眠构造，称为芽孢。 伴孢晶体：少数芽孢杆菌在形成芽孢的同时，会在芽孢旁形成一颗菱形、方形或不规则形的碱溶性蛋白质晶体，称为伴孢晶体。是毒性蛋白，苏云金芽孢杆菌可作为消灭昆虫的菌剂，就是利用了该性质。
菌落：将单个微生物细胞或一小堆同种细胞接种到固体培养基表面（有时在内层），当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下时，该 细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，即菌落。 放线菌：一类主要呈丝状生长和以孢子繁殖的革兰氏阳性细菌。 蓝细菌：一类进化历史悠久、革兰氏染色阴性、无鞭毛、含叶绿素a、藻胆素、类胡萝卜素（但不形成叶绿体）、能进行产氧性光合作用的 大型原核生物。 细菌L—型: 是细菌在某些环境条件下所形成的变异型，是遗传性稳定的细胞壁缺损细菌，在固体培养基上形成“油煎蛋”似的小菌 落。 细菌形成L型大多染成革兰阴性。 古生菌的细胞壁：古生菌如产甲烷杆菌、极端嗜盐菌、极端嗜热菌其细胞 壁含假肽聚糖。 中介体：是部分细胞膜内陷、折叠、卷曲形成的囊状物，多见于革兰阳性菌。其功能类似于真核细胞的线粒体，故亦称为拟线粒体 菌毛：许多革兰阴性菌和少数革兰阳性菌菌体表面存在着一种比鞭毛更细、更短而直硬的丝状物，与细菌的运动无关。 产生芽胞的都是革兰阳性菌。芽胞不是细菌的繁殖方式 支原体：一类无细胞壁、能独立生活的最小型原核生物。 支原体特点： 细胞很小，多数直径为250nm,故光镜下勉强可见，能通过细菌滤器。 无细胞壁，G-,形态易变，对渗透压敏感，对抑制细胞壁合成的抗生素不敏感。 细胞膜含甾醇，比其它原核生物的细胞膜坚韧。 菌落小，在固体培养基上呈特有的“油煎蛋”状。 以二分裂和出芽等方式繁殖 能在含血清、酵母膏和甾醇等营养丰富的加富培养基上生长。 对抑制蛋白质合成的抗生素（四环素、红霉素等）和破坏含甾体的细胞膜结构的抗生素（两性菌素、制霉菌素等）都很敏感。 衣原体：有细胞壁，但缺肽聚糖，对作用于肽聚糖的青霉素、溶菌酶等不敏感。G- 有核糖体。以二分裂方式繁殖 缺乏产生能量的酶系，须严格细胞内寄生，称“能量寄生物”。 不能用普通培养基培养，须在培养基中加入活的鸡胚等进行活体培养。 立克次氏体：细胞较大，光镜下清晰可见，不能通过细菌滤器。 有细胞壁，G-
一、名词解释： 1.温和噬菌体(temperate phage)：噬菌体基因与宿主染色体整合，不产生子代噬菌体，但噬 菌体DNA能随细菌DNA复制，并随细菌的分裂而传代。 2.溶原性：温和噬菌体这种产生成熟噬菌体颗粒（前噬菌体偶尔可自发地或在某些理化和生 物因素的诱导下脱离宿主菌基因组而进入溶菌周期，产生成熟噬菌体，导致细菌 裂解）和溶解宿主菌的潜在能力，称为溶原性。 3.溶原性细菌：带有前噬菌体基因组的细菌称为溶原性细菌。 4.荚膜：荚膜是一些细菌在其细胞表面分泌的一种黏性物质，把细胞壁完全包围封住，这层 黏性物质就叫荚膜。 5.菌胶团：有些细菌由于其遗传特性决定，细菌之间按一定的排列方式互相黏集在一起，被 一个公共荚膜包围形成一定形状的细菌集团，叫做菌胶团。 6. 芽孢:某些细菌遇到不良环境时，在其细胞内形成一个内生孢子叫芽孢。 7.酶的活性中心：是指酶的活性部位，是酶蛋白分子直接参与和底物结合，并与酶的催化 作用直接有关的部位。 8.生长因子：是一类调节微生物正常生长代谢所必需，但不能用简单的碳、氮源自行合成的 有机物。 9.培养基：根据各种微生物对营养的需要（如水，碳源，能源，氮源，无机盐及生长因子等）， 按一定的比例配制而成的，用以培养微生物的基质，称为培养基。
10.选择培养基：根据某微生物的特殊营养要求，或对各种化学物质敏感程度的差异而设计、 配制的培养基，称为选择培养基。 11.鉴别培养基：几种细菌由于对培养基中某一成分的分解能力不同，其菌落通过指示剂显 示出不同的颜色而被区分开，这种起鉴别和区分不同细菌作用的培养基， 叫鉴别培养基。 12.发酵：是指在无外在电子受体时，底物脱氢后所产生的还原力[H]不经呼吸链传递而直接 交给某一内源性中间产物接受，以实现底物水平磷酸化产能的一类生物氧 化反应。 13.好氧呼吸：是有外在最终电子受体（O2）存在时，对底物（能源）的氧化过程。 14.无氧呼吸*：无氧呼吸又称厌氧呼吸，是一类电子传递体系末端的受氢体为外源无机氧化 物的生物氧化。 15.土壤自净：土壤对施入一定负荷的有机物或有机污染物具有吸附和生物降解的能力，通 过各种物理、化学过程自动分解污染物使土壤恢复到原有水平的净化过程， 称土壤净化。 16.水体自净：天然水体受到污染后，在没有人为的干预条件下，借助水体自身的能力使之 得到净化，这种现象成为水体自净，其中包括生物学和生物化学的作用。17：水体富营养化（环化有） 18.硝化作用：氨基酸脱下的氨，在有氧的条件下，经亚硝酸细菌和硝酸细菌的作用转化为 硝酸的过程。
微生物重点总结 一．名词解释 （1）益生菌（probiotics）:某些细菌或真菌有利于宿主胃肠道微生物区系的平衡，能抑制对宿主有害的微生物的生长。 （2）无特定病原体动物（SPF）：是指不存在某些特定的具有病原性或潜在病原微生物的动物。 （3）灭菌（sterilization）:杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽孢、霉菌孢子在内的全部微生物和非病原微生物。 （4）消毒（disinfection）:杀灭病原微生物的方法，仅要求达到消除传染性的目的，而对非病原微生物及其芽孢、孢子并不严格要求全部杀死。 （5）消毒剂（disinfectant）:用于杀灭病原微生物的化学药品。（6）半数致死量（LD50）：是指能使接种的实验动物在感染后一定时限内死亡一半所需的微生物量或毒素量。 （7）半数感染量（ID50）：某些病原微生物只能感染实验动物、鸡胚或细胞，但不引致死亡，可用ID50来表示其毒力。 （8）毒力因子（virulence factor）:构成细菌毒力的物质称为毒力因子，主要有侵袭力和毒素。 （9）机会致病菌（opportunistic pathogene）:是指某些细菌通常并不主动入侵宿主，但当宿主的免疫屏障被打开或免疫功能异常时，这类细菌就会进入机体的血液或组织，造成感染并治病。 （10）质粒（plasmid）:是细菌染色体外的遗传物质，多为环状双螺
旋DNA分子。质粒可以自身复制，随宿主菌分裂传到子代菌体。（11）毒力岛（pathogenicity island）:PAI是指病原菌的某个或某些毒力基因群，分子结构和功能有别于细菌基因组，但位于细菌基因组之内，因此称之为“岛”。 （12）转化（transformation）:供体菌裂解游离的DNA片段被受体菌直接摄取，使受体菌获得新的遗传性状的过程称为转化。 （13）转导（transduction）:以温和噬菌体为媒介，把供体菌的DNA 小片段携带到受体菌中，通过交换与整合，使受体菌获得供体菌的部分遗传性状称为转导。 （14）微生物：（micro live）：是一类肉眼看不见，有一定形态结构，能在适宜环境中生长繁殖的细小生物的总称。 （15）菌落（colony）：细菌在适合生长的固体培养基或内部生长，形成一个肉眼可见的，有一定形态的独立群体称为菌落。 （16）培养基（culture medium）：是人工配制的基质，含有细菌生长繁殖必须的营养物质。 （17）虑过除菌（sterilization by filtration）：是通过机械、物理组留作用将液体或空气中的细菌等微生物除去的方法。但滤过除菌常不能除去病毒、支原体以及细菌L型等颗粒。 （18）感染（infection）：是指病原微生物在宿主内持续存在或增殖。（19）接合（conjugation）：是两个完整的细菌细胞通过性菌毛直接接触，由供体菌将质粒DNA转移给受体细菌的过程。 （20）侵袭力（invasiveness）:病原菌在机体内定殖，突破机体的
球菌总结
肠杆菌总结
肠杆菌科细菌的共同生物学特点： 1、形态结构 中等大小的G-菌，大多有菌毛、鞭毛，少数有荚膜，没有芽胞。 2、培养 兼性厌氧或无氧，营养要求不高 3、生化反应 乳糖发酵试验可初步鉴别志贺菌、沙门菌等致病菌和大部分非致病肠道杆菌，前二者不发酵乳糖。 4、抗原结构 ⑴O抗原：存在于细胞壁脂多糖(LPS)最外层，具有属特异性。 ⑵H抗原：菌体失去鞭毛后发生H-O变异。 ⑶荚膜抗原：具有型特异性。 5、抵抗力 对理化因素抵抗力不强 6、变异 最常见耐药性变异。 霍乱弧菌总结
幽门螺杆菌总结 第13章厌氧芽孢梭菌总结 1、厌氧=严格厌氧 2、芽孢=G+ =产生外毒素 3、梭菌=芽孢﹥菌体=抵抗力强 4、除产气荚膜梭菌等少数例外，均有周鞭毛、无荚膜 5、主要分布于土壤，人及动物肠道；多数为腐生菌，少数为致病菌。
第13章无芽孢厌氧菌总结 与人类致病有关的无芽孢厌氧菌寄生于人和动物体内，构成人体正常菌群，包括G+和G－的球菌和杆菌。在人体正常菌群中，厌氧菌占有绝对优势，是其他非厌氧菌10—1000倍。存在于肠道、皮肤、口腔、上呼吸道、泌尿生殖道。在某些情况下，可作为机会致病菌导致内源性感染。 第14章分枝杆菌属总结 一类细长略弯曲的杆菌，其显着特征为：⑴胞壁中含有大量脂质——抗酸性染色⑵无芽孢、无鞭毛，也不产生内、外毒素⑶种类多，引起人类疾病的主要有结核分枝杆菌、
牛分枝杆菌、麻风分枝杆菌⑷所致疾病多为慢性感染，长期迁延，并有破坏性的组织病变 第19、20、21章支原体Mycoplasma 立克次体Rickttsia 衣原体Clymamydiae
巴斯德效应：在有氧条件下。兼性厌氧微生物终止发酵，进行有氧呼吸，这种呼吸抑制发酵的现象称为巴斯德效应。即呼吸抑制作用。 巴斯德的贡献：1.证实了微生物活动和否定了微生物自然发生学说；2开创了免疫学——预防接种。3.发酵的研究 ；4.巴斯德消毒法，观察丁醇发酵时发现厌氧生命，提出好氧厌氧属于。 柯赫的贡献：1设计了分离和纯化细菌的方法：划线法、混合平板法。2.设计了培养细菌用的肉汁胨培养液和营养琼脂培养基。3.设计了细菌染色技术。4.提出柯赫法则：（证明某种生物是否为某种疾病的病原的基本原则）i.病原体微生物一定伴随着病害而存在; ii; 必须能自原寄主分理处这种微生物，并培养成为纯培养; iii. 分离培养出的病原体比能在实验动物身上产生相同的症状 iiii 必须自人工接种发病的寄主内，能重新分离出同一病原微生物并培养成纯培养。 3．试述染色法的机制并说明此法的重要性。 答：革兰氏染色的机制为：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌的细胞膜内可形成不溶于水的结晶紫与碘的复合物。G+由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次多和交联致密，故遇脱色剂乙醇处理时，因失水而使网孔缩小，在加上它不含类脂，故乙醇的处理不会溶出缝隙，因此能把结晶紫与碘的复合物牢牢留在壁内，使其保持紫色。反之，G-细菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄和交联度差，遇脱色剂乙醇后，以类脂为主的外膜迅速溶解，这时薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此细胞退成无色。这时，在经沙黄等红色染料复染，就使 G-细菌呈红色，而 G+细菌则仍保留最初的紫色。 此法证明了 G+和 G-主要由于起细胞壁化学成分的差异而引起了物理特性的不同而使染色反应不同，是一种积极重要的鉴别染色法，不仅可以用与鉴别真细菌，也可鉴别古生菌。 5. 试述几种细菌细胞壁缺损型的形成，特点和实际意义。 自发缺壁突变：L 型细菌 实验室中形成 彻底除尽：原生质体 人工方法去壁 部分去除：原生质球 自然界长期进化中形成：支原体 实际意义：原生质体和原生质球比正常有细胞壁的细菌更易导入外源遗传物质，故是遗传规律和进行原生质体育种的良好实验材料。 L 型细菌：细菌在某种环境条件下（如低浓度青霉素）因基因突变而产生的缺乏细胞壁的遗传性能稳定的变异类型。
《环境微生物学》复习重点 1、微生物是如何分类的？答：各种微生物按其客观存在 的生物属性（如个体形态及大小、染色反应、菌落特征、细胞结构、生理生化反应、与氧的关系、血清学反应等）及它们的亲缘关系，由次序地分门别类排列成一个系统，从大到小，按界、门、纲、目、科、属、种等分类。种是分类的最小单位，“株”不是分类单位。 2、微生物有哪些特点？答：（一）个体极小。微生物的个体极小，有几纳米到几微米，要通过光学显微镜才能看见，病毒小于0.2微米，在光学显微镜可视范围外，还需要通过电子显微镜才可看见。（二）分布广，种类繁多。环境的多样性如极端高温、高盐度和极端pH造就了微生物的种类繁多和数量庞大。（三）繁殖快。大多数微生物以裂殖的方式繁殖后代，在适宜的环境条件下，十几分钟至二十分钟就可繁殖一代。在物种竞争上取得优势，这是生存竞争的保证。（四）易变异。多数微生物为单细胞，结构简单，整个细胞直接与环境接触，易受外界环境因素影响，引起遗传物质DNA的改变而发生变异。或者变异为优良菌种，或使菌种退化。 3 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构有什么异同？各有哪些化学组成？答：革兰氏阳性菌细胞壁厚约20-80nm，结构较简单，含肽聚糖，革兰氏阴性菌细胞壁厚约10nm，结
构复杂，分外壁层和内壁层，外壁层又分三层：最外层是脂多糖，中间是磷脂层，内层是脂蛋白。内壁含肽聚糖，不含磷壁酸。化学组成：革兰氏阳性菌含大量肽聚糖，含独磷壁酸，不含脂多糖。革兰氏阴性菌含极少肽聚糖，含独脂多糖，不含磷酸壁。 4、叙述革兰氏染色的机制和步骤。答：将一大类细菌染上色，而另一类染不上色，一边将两大类细菌分开，作为分类鉴定重要的第一步。其染色步骤如下：1在无菌操作条件下，用接种环挑取少量细菌于干净的载玻片上涂布均匀，固定。2用草酸铵结晶紫染色1min，水洗去掉浮色。3用碘—碘化钾溶液媒染1min，倾去多余溶液。4用中型脱色剂如乙醇或丙酮酸脱色，革兰氏阳性菌不被褪色而呈紫色。革兰氏阴性菌被褪色而成无色5用蕃红染液复染1min，格兰仕阳性菌仍呈紫色，革兰氏阴性菌则呈现红色。革兰氏阳性菌和格兰仕阴性菌即被区分开。 5、何谓放线菌？革兰氏染色是何种反应？答:在固体培养基上呈辐射状生长的菌种，成为放线菌。除枝动菌属革兰氏阴性菌，革兰氏染色呈红色外，其余全部放线菌均为革兰氏阳性菌，革兰氏染色呈紫色。 6、什么叫培养基？按物质的不同，培养基可分为哪几类？按试验目的和用途的不同，可分为哪几类？答：根据各种微生物的营养要求，将水、碳源、氮源、无机盐及生长因子等
1细菌的L型：有些细菌在某些体内外环境及抗生素等作用下，可能部分或全部失去细胞壁，称为L型 2中介体：是细菌细胞膜内陷、折叠、卷曲形成的囊状结构，多见于革兰阳性细菌。中介体常位于菌体侧面或近中部位，可见一个或多个，参与细菌的分裂 3热原质：即细菌细胞壁的脂多糖，大多数由革兰阴性菌产生，注入人体内或动物体内可引起发热反应，故名热原质。耐高压耐热，除去热原质的最好办法是蒸馏 4细菌素：某些菌株产生的一种具有抗菌作用的蛋白质，仅对产生菌有亲缘关系的细菌具有杀伤作用 5缺陷病毒：因病毒基因组不完整或某一基因位点改变，病毒不能进行正常的增殖，不能复制出完整的有感染性的病毒颗粒，此病毒成为缺陷病毒 6顿挫感染：某些病毒进去宿主细胞后，如细胞不能为病毒提供所需要的酶，能量及必要成份，则病毒不能合成本身的成份，或者虽合成部分或合成全部病毒成份，但是不能组装和释放出有感染性的病毒颗粒 7干扰现象：两种病毒感染同一细胞时，一种病毒抑制另一种病毒增殖的现象 8感染：是微生物在宿主体内的生活中与宿主相互作用并导致不同程度的病理变化的过程，是微生物与宿主个体、细胞和分子的多层面相互作用的生物学现象 9侵袭力：病原菌突破宿主皮肤、黏膜生理屏障等免疫防御机制，进入机体内定居、繁殖和扩散的能力10毒血症：产生外毒素的病原菌 在局部组织生长繁殖，外毒素进 入血循环，并损伤特定靶器官、 组织所出现的特征性病毒性症 状。如白喉，破伤风 11菌血症：病原菌由局部侵入血 流，并在其中极少量繁殖，引起 轻微症状。如伤寒沙门菌的播散 过程 12败血症：病原菌侵入血液并在 其中大量繁殖、产生的毒性代谢 产物包括外毒素或内毒素等毒 力因子所引起的全身性严重总 督的症状，如高热、皮肤黏膜淤 血，肝脾肿大、脏器衰竭等 13致细胞病变作用：在病毒培养 的体外试验中，通过细胞培养和 接种杀细胞性病毒，经过一定时 间后可在显微镜下观察到细胞 变圆，坏死等现象，称为CPE 14垂直传播：病原体从宿主的亲 代到子代，主要通过胎盘或产道 传播，此种病毒传播方式以病毒 为多见 15水平传播：病原体在人群中不 同个体之间的传播，也包括从动 物再到人的传播 16质粒：细菌染色体以外的遗传 物质，是环状闭合双链DNA， 存在于细胞质中，具有自我复制 的能力，所携带的遗传信息能赋 予宿主菌某些生物学性状 17溶原性转换：当温和噬菌体感 染细菌时，宿主菌染色体中整合 了噬菌体的DNA片断，从而获 得新的遗传性状 18原生质体融合：将两种不同细 菌经溶菌酶或青霉素等处理，失 去细胞壁成为原生质体后进行 彼此融合的过程，融合后的双倍 体细胞可以短期生存，染色体之 间可以发生基因的交换和重组， 获得多种不同表型的重组融合 体 19转导：以温和噬菌体为载体， 将供体菌的一段DNA转移到受 体菌内，使受体菌获得新的性状 20条件致病菌：是来源于人体皮 肤和黏膜聚居的正常菌群只有 在机体免疫力低下，寄居部位改 变或菌群失调等特定条件下才 能引起机体的感染 21转化：供体菌裂解游离的 DNA片断被受体菌直接摄取， 使受体菌或得新的性状 22消毒：杀灭物体上或环境中的 病原微生物，但不一定能杀死细 菌芽孢和非病原微生物的方法 23灭菌：杀灭物体上的所有微生 物，包括病原微生物、非病原微 生物和细菌芽孢的方法 24卡介苗（BCG）：是将有毒力 的牛型结核杆菌在含胆汁、甘油 和马铃薯的培养基中国，经过 230多次的传代，历时13年所获 得的减毒活疫苗。预防接种后可 使人获得对结核分枝杆菌的免 疫力 25荚膜：某些细菌在细胞壁外有 一层较厚、性质稳定的结构，其 化学成分在多数细菌中为多糖， 少数为多肽。功能主要是抗吞噬 作用，黏附作用，抗有害物质损 伤作用。具有抗原性。 26鞭毛：有些细菌包括所有的弧 菌和螺旋菌、占半数的杆菌和极 少数的球菌，由细胞膜长出菌体 外细长的蛋白质丝状体。 27异染颗粒：见于白喉棒状杆 菌、鼠疫杆菌和结核分枝杆菌 等，在细胞质内呈颗粒状，主要 成分为RNA及嗜碱性的多偏磷 酸盐，美蓝染色时不同于菌体的 颜色 28芽孢：某些细菌繁殖体在不利 的外界环境中在菌体内形成有 厚而兼任芽孢壁和外壳圆形的 休眠小体
第一章绪论 微生物：个体微小、肉眼看不见，需借助显微镜才能进行观察的所有生物的总称。微生物的种类： 1真核生物:真菌（酵母菌、霉菌和蕈菌）藻类和原生动物 2原核生物:细菌、古菌、放线菌、蓝细菌、支原体、衣原体、立克次氏体 3非细胞生物：病毒、亚病毒(类病毒、拟病毒、朊病毒） 微生物的5大共同特点：○1体积小、面积大；○2吸收多、转化快；○3生长旺、繁殖快； ○4分布广、数量多；○5适应性强、易变异； 巴斯德和柯赫的贡献：微生物学的先驱——列文虎克， 微生物学的奠基人——法国巴斯德、德国柯赫。 三域分类系统：细菌域、古菌域和真核生物域。 在医药、环保、农业、食品业等领域，微生物与人类生命活动存在怎样的关系，举例说明。 第二章原核微生物 原核微生物：指一大类细胞核无核膜包裹，只存在称作核区的裸露DNA分子的原始单细胞生物。（包括真细菌和古菌） 原生质体：用溶菌酶人为除尽原有细菌细胞壁，或用青霉素抑制新细胞壁的合成后，而形成的仅由一层细胞膜包裹着的脆弱细胞。一般由革兰氏阳性菌形 成。 原生质球：用溶菌酶和青霉素处理革兰氏阴性菌得到的残留部分细胞壁（外膜层）的球形体，对外界环境有一定抗性。 核区（拟核）：指细菌所特有的无核膜结构，无固定形态的原始细胞核。 质粒：游离于细菌染色体之外，或附加在细菌染色体之上，具有独立复制能力的小型共价闭合环状DNA分子。 芽孢：通常指某些细胞在生长后期于细胞内形成的1一种圆形、椭圆形、或圆柱形的厚壁、折光性高、含水量极低、且抗逆性极强的内生休眠体。 伴孢晶体：某些芽孢杆菌，例如苏云金芽孢杆菌，在形成芽孢的同时，能在细胞内形成一个菱形或双锥型的碱性蛋白晶体。（即δ-内毒素） 菌落：在固体培养基的表面或深层，由单个或少数即细胞长出的肉眼可见的，具有一定形态特征的细胞群体。 异形胞：存在于丝状体蓝细菌中特有的一种较营养细胞，稍大，色浅，壁厚，位于细胞链中央或末端且数目不定的细胞。是蓝细胞的固氮部位。 储藏性颗粒;是一类由不同化学成分累积而成的不溶沉淀物质。 菌胶团：包裹在细胞群体上的胶状物质
微生物期末重点总结
微生物期末重要内容串讲1 1.比面值（P8）：把某一物体的单位体积所占有的表面积称为比面值。物体的体积越小，其比面值就越大。微生物是一个比面值大（小体积，大面积）的系统，因此拥有巨大的营养物质吸收面，代谢物质排泄面，环境信息交换面。现以球体的比面值为例： 比面值=表面积/体积= 2.菌落（P34）：将单个细菌细胞或（其他微生物）细胞或一小堆同种细胞接种到固体培养基表面（有时为内层），当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。如果菌落是一个单细胞繁殖成的，它就是一个纯种细胞或克隆。如果把大量分散的纯种细胞密集地接种在固体培养基的较大平面上，结果长出大量“菌落”已互相连成一片，这就是菌苔。 菌落特征：一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。 3.荚膜（P27）：荚膜是细胞的特殊结构，是某些细菌在细胞壁外包围的一层粘液性物质，一般由
糖和多肽组成。细菌不仅可利用荚膜抵御不良环境；保护自身不受白细胞吞噬；而且能有选择地粘附到特定细胞的表面上，表现出对靶细胞的专一攻击能力。 4.反硝化作用（P116）：反硝化细菌在缺氧条件下，还原硝酸盐释放出分子态氮（N2）或一氧化二氮（N2O）的过程。微生物和植物吸收利用硝酸盐有两种完全不同的用途：一是利用其中的氮作为氮源，称为同化性硝酸还原作用：NO3—NH4—有机态氮。许多细菌、放线菌和霉菌能利用硝酸盐做为氮素营养；另一用途是利用NO2-和NO3-为呼吸作用的最终电子受体，把硝酸还原成氮（N2），称反硝化作用或脱氮作用：NO3—NO2—N2。能进行反硝化作用的只有少数细菌（一般为兼性厌氧微生物），这个生理群称为反硝化细菌。 5.L型细菌（P23）：由英国学者李斯特（Lister）发现的细菌，它是一种典型的细胞壁缺陷型细菌，专指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株，在固体培养基上可以形成“油煎蛋”似的小菌落。 6.温和噬菌体（溶源性）（P77）：某些噬菌体侵染细菌后，将自身基因组整合到细菌细胞染色体
球菌 1,何谓SPA？简述其作用。 答:葡萄球菌A蛋白(staphylococcal protein A,SPA)：90％以上金黄色葡萄球菌细胞壁表面的蛋白质；可与人及多种哺乳动物的IgG分子的Fc段非特异性结合,结合后的IgG分子Fab段仍能与抗原特异结合。 体内作用：SPA与IgG结合后所形成的复合物具有抗吞噬、促细胞分裂、引起超敏反应、损伤血小板等多种生物活性。 体外作用：协同凝集试验,广泛应用于多种微生物抗原检测。 2 ,金黄色葡萄球菌和乙型溶血性链球菌引起化脓性炎症的特点有何不同,为什么? 答：金黄色葡萄球菌临床特点：脓汁黄而黏稠、病灶界限清晰、感染局限化。 乙型链球菌临床特点：脓液稀薄、病灶界限不清、易扩散。 原因：金黄色葡萄球菌含有凝固酶,可以抵抗吞噬细胞的吞噬；保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏;感染局限化和形成血栓。 而乙型链球菌含有侵袭性酶,均是扩散因子,包括： （1）透明质酸酶：分解间质内透明质酸,利于病菌扩散。 （2）链激酶（SK）：溶解纤维蛋白、阻止血浆凝固,利于病菌扩散。 （3）链道酶（SD）：降解脓液中DNA ,使脓液稀薄,促进病菌扩散。 3.对脑膜炎奈氏菌应如何进行分离培养（为何需要床边接种） 答：营养要求较高,常用巧克力（色）培养基,专性需氧。对理化因素抵抗力很弱。 4.根据涂片染色镜检可作出微生物学初步诊断的病原性球菌有哪些? 4.金黄色葡萄球菌的致病物质和所致疾病？
答：(1)凝固酶：抵抗吞噬细胞的吞噬；保护病菌不受血清中杀菌物质的破坏,感染局限化和形成血栓。(2)葡萄球菌溶素。损伤细胞膜的毒素(3)杀白细胞素攻击中性粒细胞和巨噬细胞,抵抗宿主吞噬细胞,增强细菌侵袭力(4)肠毒素引起急性肠胃炎（食物中毒）(5)表皮剥脱毒素引起金黄色烫伤样皮肤综合征,又称剥脱性皮炎(6)毒性休克综合征毒素-1引起多器官系统功能紊乱或毒性休克综合征 肠道杆菌 5.引起胃肠炎的大肠埃希菌有哪几种？简述ETEC的致病机制. 答: 肠产毒素型大肠埃希菌（ETEC）;肠侵袭型大肠埃希菌(EIEC);肠致病型大肠埃希菌（EPEC）;肠出血型大肠埃希菌（EHEC）;肠集聚型大肠埃希菌（EAEC）ETEC致病机制：不耐热肠毒素(LT)耐热肠毒素(ST) 激活腺苷酸环化酶激活鸟苷酸环化酶 cAMP浓度升高cGMP浓度升高 过度分泌小肠液 腹泻 6.大肠埃希菌最常见的肠道外感染有哪些？ 以化脓性感染和泌尿道感染最为常见 （1）化脓性感染：腹膜炎、手术创口感染、败血症（死亡率高）、新生儿脑膜炎 （2）泌尿道感染：尿道炎、膀胱炎、肾盂肾炎常见上行性感染,女性患病率高于男性,由尿路致病性大肠埃希菌（UPEC）引起 3. 归纳志贺菌致病的主要特点。 答：包括侵袭力和内毒素,有的菌株（痢疾志贺菌）产生外毒素（志贺毒素） (1).致病物质
牙菌斑生物膜 掌握：牙菌斑的定义、牙菌斑的基本结构、牙菌斑的形成和发育。 了解：牙菌斑的分类、牙菌斑的组成、牙菌斑的物质代谢、牙菌斑的致病性牙菌斑(dental plaque)：存在于牙面或牙周袋内的一个细菌生态环境，细菌在其中生长、发育和衰亡，并进行着复杂的物质代谢活动，在一定条件下，细菌及其代谢产物将会对牙齿和牙周组织产生破坏。 生物膜（biofilm）：各种细菌嵌于来自其自身和/或外界环境的胞外基质内，而在固相界面上结成的有着三维立体结构的微生态环境，牙菌斑就是一种经典的生物膜。 牙菌斑生物膜：牙菌斑生物膜是牙面上或牙周袋内的多种菌丛构成的生态系。细菌在内生长、发育和衰亡。其复杂的结构使它能包涵对氧不同敏感性的细菌，这些细菌嵌入在由多糖、蛋白质和矿物质组成的基质中。细菌在其中的代谢活动，影响着细菌与宿主之间或细菌菌属之间的动态平衡 生物膜的作用 ①节制细菌代谢活性和保护菌丛抵抗口腔苛刻环境，使细菌在不适合的条件中仍能存留。 ②膜内的多聚物基质起约束网络作用，摄取和收藏食物，控制基质成分的移动速度。 ③膜内高水平的巯基能中和氧基，保护菌细胞勉受氧化损伤。 ④浓缩从环境中来的营养物质和其它元素，保留一些细胞内遗漏出来的溶解物质（如eDNA）。 ⑤细菌耐药性
二、分类 （一）根据所在部位分类 龈缘为界: 龈上菌斑、龈下菌斑：附着菌斑，非附着菌斑。 1．龈上菌斑（supragingival plaque） 位于牙颈部龈缘以上牙面上的菌斑。包括窝沟菌斑、光滑面菌斑、邻面菌斑、颈缘菌斑。这种菌斑的结构比较完整，主要细菌是革兰阳性球菌、杆菌。随着菌斑成熟，革兰阴性球菌、杆菌和丝状菌的数量增多。 2．龈下菌斑(subgingival plaque) 位于龈缘以下，分布在龈沟或牙周袋内，分为附着龈下菌斑和非附着龈下菌斑。附着龈下菌斑 由龈上菌斑延伸到牙周袋内，附着于牙根面，其结构、成分与龈上菌斑相似，细菌种类增多，主要为格兰阳性球菌及杆菌、丝状菌，还可见少量格兰阴性短杆菌和螺旋体 非附着龈下菌斑 位于附着龈下菌斑的表面，为结构较松散的菌群，直接与龈沟上皮和袋内上皮接触，主要为格兰阴性厌氧菌，还包括许多能动菌和螺旋体。 龈上、龈下菌斑的主要特征： 生长环境：有氧、兼性厌氧；兼性、专性厌氧。 优势菌：G+需氧菌和兼性菌；G-厌氧菌和能动菌。 唾液清洁：+；-。 食物摩擦：+；-。 代谢底物：糖类；血清蛋白、氨基酸、糖。
食品微生物学检验GB 4789 系列知识点汇总 GB 4789.1-2016 食品卫生学检验总则 一、2016版总则变更内容 1.删除了标准中的英文名称、起草单位变更为中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局。 2.删除了规范性引用文件。 3.修改了实验室基本要求： 微生物专业教育或培训经历（如生物学、植 物学、医学、食品科学与工程、食品质量与安全等与微 生物有关的相关专业），具备相应的资质（应有岗位上岗 证、生物安全上岗证和压力容器上岗证），能够理解并正 确实施检验。 ①人员修改为检验人员实验室生物安全操作和消毒知识（相关标准及培训， 如GB 19489-2008 实验室生物安全通用要求、消毒技术 规范（2002））。 品。 确保自身安全。
有颜色视觉障碍的人员不能从事涉及辨色的实验（即无颜 色视觉障碍）。 ②环境与设施--突出温度、湿度和洁净度。 生物危害程度应与实验室生物防护水平相适应: 灭的微生物，如天花病毒。 间传播如霍乱弧菌。 病原微生物分类 沙门氏菌、单增李斯特氏菌。 第四类：通常不会引起人或动物疾病的微生物。 BSL-1）：操作第四类病原微生物（属于正压，适用 ） 实验室生物安全级别BSL-2）：操作第三类病原微生物（属于负压，适用 II级生物安全 ） BSL-3）：操作第二类病原微生物
四级（BSL-4）：操作第一类病原微生物 消毒：是杀死微生物的物理或化学手段，但不一定杀死其中的孢子。 灭菌：是杀死和去除所有微生物及其中孢子的过程。 蒸法消毒） 消毒剂表面消毒 微生物实验 高压灭菌 干热灭菌（180℃1h或170℃2h） 培养基和试剂灭菌 过滤除菌 紫外线消毒法：紫外灯管放射一定波长，破坏细菌或病毒的DNA和RNA，使他们丧失生存能力和繁殖能力，从而达到灭菌目的。紫外线的特点是对芽孢和营养细胞都能起作用，但细菌芽孢和霉菌芽孢对其抵抗力大，且紫外线穿透力极低，所以只能用于表面灭菌，对固体物质灭菌不彻底。
微生物学实验复习 3、培养基得配置原则： (1)目得要明确(根据微生物得种类、培养目得等)，如培养基可由简单得无机物组成，生产用培养基内可加入化学成 分不明确得天然物质，而分类、鉴定用培养基内必须加入已知化学成分得物质。 (2)营养要协调：注意各种营养物质得浓度与比例。 (3)pH要适宜：各种微生物适宜生长得pH范围不同，如细菌、放线菌与真菌得最适pH分别 为：6、5～7、5、7、5～8、5与5、0～6、0。
5、细菌培养基得配制过程？ 答：配制培养液→调节PH →分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面得长度不超过试管总长得1/2） 【问题与探究】 （1）培养基灭菌后，为什么需要冷却到50 ℃左右时，才能用来搁置斜面或倒平板？您用什么办法来估计培养基得温度？ 【提示】 琼脂得凝固点为40 ℃，温度太高易使培养皿破裂，低于40 ℃，培养基已凝固，倒不出，所以培养基灭菌后，需冷却到50 ℃左右时才能用来倒平板，可以用手触摸盛有培养基得试管，感觉试管得温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。 （2）为什么需要使试管口通过火焰？ 【提示】 通过灼烧灭菌，防止试管口得微生物污染培养基。 （3）为了能彻底灭菌，在操作过程中应注意哪些事项？ 【提示】 使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先得空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅得压力(100 kPa)、温度(121 ℃)与灭菌时间(20 min)。 6、无菌操作与接种技术 (1)接种 概念：在_无 菌 条件下将微生物接入 培养基____得操作过程。 工具：玻璃刮铲、接种针与接种环。 方法：穿刺接种、斜面划线接种与平板划线接种、涂抹平板等。 （2）无菌操作 ——微生物接种技术得关键 ①培养微生物用得试管、培养皿与微生物培养基等，在接种之前都需要 灭菌_。 ②通常接种操作要在____酒精灯火焰__得附近进行。 【想一想】 在微生物得培养过程中为什么要进行无菌操作？
微生物检验实习小结 1、微生物检验实习小结 在这次见习中，我和其他三位同学被一起分到了微生物科。在微生物科负责我们见习工作的是一位韩老师，他为人很随和，给我们布置的见习任务就是每个人跟踪一种类型的临床标本。他要求跟踪从标本被送到微生物科开始一直到得出最终的报告为止并把从中的所见所得记录下来，通过这样一个过程让我们能够对微生物科有尽可能多的了解。除此之外，韩老师还让我们了解一下里面的一些大型自动化仪器的用途及操作方法，为我们以后能更快的适应实习做准备。 见习的第一天，我们看的是标本的接种，我们看过那里的老师熟练的接种过程后深感自己平时做实验室的速度是如此之慢，如果以我们这种速度去完成每天要接种上百个标本的临床工作是根本不可能的。此外我们还看了临床上的革兰染色，发现它与我们做实验时有一些不同，主要区别是在染料上，临床上为了提高染色速度都用了快速染料。总之，这一天的见习让我们了解到的就是效率在临床上是十分重要的。 见习的第二、第三天，我们看的是临床标本的鉴定，对某些细菌，临床上有经验的老师只要通过观察菌落特征、气味及其他一些简单物理性状就可以初步判断出是何种细菌，让我们大感吃惊。科室里还有一位很热心的老师在她空闲的时候向我们详细的讲解了一番在临床上一些常见微生物的鉴定方法，听过之后让我们受益匪浅。见习的第四天，我们看的是临床标本的药敏反应。在这一天里，我们详细的了解了临床上是如何做药敏反应的，以及不同的微生物需要做哪些药敏反应，这些都是我们在课堂上所无法学到的宝贵知识。 最后一天，我们看的是微生物科是如何做质控的。通过这一天的见习，使我们深刻了解到质控对于检验科的重要性。之前，我们只是从书本上了解到其对于检验这一学科
1.菌体中带寡聚糖（LOS）致病的细菌——脑膜炎奈瑟菌、淋病奈 瑟菌、流感嗜血杆菌 2.诱发细菌L型形成的因素——溶菌酶、葡萄球菌溶素、补体、 抗体、胆汁、破环细胞壁肽聚糖的抗生素 3.荚膜为多肽组分的细菌——炭疽芽孢杆菌、鼠疫杆菌 4.能引起血凝现象的病原体——大肠埃希菌（I菌毛，P菌毛）、 流感病毒（HA） 5.菌毛由染色体编码者——霍乱弧菌，EPEC，淋病奈瑟菌 6.菌毛由质粒编码者——ETEC、性菌毛（F质粒） 7.特殊pH环境生长的的微生物——真菌（4～6）、解脲脲原体 （5.5～6.5）、结核杆菌（6.5～6.8）、布鲁氏菌（6.6-6.8）、百日咳杆菌（6.8-7.0）、幽门螺杆菌（6～8）、支原体（7.6～ 8.0）、霍乱弧菌（8.4～9.2） 8.初次分离需要5-10% CO2 的细菌——脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟 菌、布鲁氏菌、 9.培养需要CO2的细菌：幽门螺杆菌（需CO2方能生长），军团菌 （2.5-5 %CO 2促进生长）、空肠弯曲菌（10%CO 2 ），炭疽芽孢杆 菌（5% CO 2 下培养形成荚膜） 10.人类历史上第一个被发现的细菌——布氏杆菌 11.人类历史上第一个被发现的病原菌——炭疽芽孢杆菌（巴斯德）
12.人类历史上第一个被发现的病毒——烟草花叶病毒 13.人类历史上第一个基因组被完全测序的微生物——流感嗜血杆 菌 14.普通高压蒸汽灭菌法不能灭活的物质——热原质（250度干烤）、 朊病毒（134度>2h） 15.在液体培养基中呈菌膜生长的细菌——结核分枝杆菌、枯草芽 孢杆菌 16.以R型菌落（粗糙型）毒力更强的细菌——炭疽芽孢杆菌、结 核分枝杆菌 17.引起心内膜炎的微生物——甲链、凝固酶阴性葡萄球菌、柯萨 奇病毒、肠球菌 18.以人为唯一宿主的微生物——脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、霍 乱弧菌、梅毒螺旋体、麻疹病毒、腮腺炎病毒、风疹病毒、天花病毒、软疣病毒 19.引起食物中毒的微生物——副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、产 气荚膜杆菌、肉毒杆菌、沙门氏菌、大肠埃希菌、志贺氏菌、真菌 20.仅在感染局部繁殖，侵袭力较弱的细菌——志贺氏菌、破伤风 杆菌 21.产生尿素酶的微生物——解脲脲原体、变形杆菌、幽门螺杆菌、
微生物室的实习小结 病原微生物感染引起发病，院内感染不断增加。细菌由于人类不断婪用抗菌药物，耐药性不断增加，这些都严重危害人类健康。病原微生物在实验室潜在对实验室人员的威胁也日趋严峻。生物安全的宣教必不可少，怎样把只有基本微生物知识的学生，与临床实验室大量面对病人标本的采集、运送、接种、培养、观察、鉴定、药敏、报告等各个环节的实践结合起来，由基础知识向专业技能有效转化，把基础理论知识在实习中有效发挥，与实践相结合使之升华，是培养合格检验人才的关键。现就微生物室的实习带教体会总结如下。 1、重视标本送检前的质量控制。 微生物实验室每天都收到来自病房，门诊病人送检的大量标本，有痰、中段尿、伤口分泌物、生殖道拭子、血培养、脓液、术中临时所采集的标本等等。标本的采集、运输和处理是否得当及时对试验结论有直接影响。是分析前质量控制的重要环节，只有让学生全面认识标本采集与处理的全过程及影响因素，才能确保检验结论的准确性、有效性。 标本的采集 例如中段尿的采集，应告知学生尿道内是人体无菌的腔道，尿道外则是有菌的部位。所以采集中段尿时必须对外阴进行彻底消毒，排出前一段尿液，以便冲洗外尿道或外阴，
留取中段尿于无菌杯中送检。如痰标本的采集，应嘱病人于清晨嗽洗口腔，咳出深部的痰液于无菌杯中送检，如是支原体和衣原体的检测，则应留取女性宫颈拭子或男性尿道拭子，因为支原体和衣原体都只寄生在宫颈或者尿道的柱状上皮细胞内。 标本的处理 学生应知道，标本的及时处理接种对微生物的成活率至关重要，例如淋病奈瑟氏菌，需要保温，保湿送检，提倡床边接种，培养基应先预温，接种后放36℃温箱、5%co2环境，保湿培养。又如痰标本应接种在血平板，巧克力平板，沙基，嗜血流感巧克力平板上，血平板和巧克力平板主要观察病人痰标本里的基础菌群的生长状态。沙基主要观察是否有念珠菌生长，嗜血流感巧克力平板主要是观察是否有嗜血流感杆菌属的生长，此平板在配制时加入了针对性抗菌药物，能够抑制革兰氏阴性杆菌和革兰氏阳性球菌的生长，只适合于嗜血杆菌属的生长。学生应学会每一份标本，接种到相应有用、有目的、有选择的培养基中。 2、注重特征、综合分析 细菌的鉴定是运用所学知识，综合性判断的过程。它需要根据病人基本信息，标本来源、诊断、平板上形态特征，生长情况，氧化酶、触酶阴阳性状、革兰氏染色镜下形态，生化反应，药敏结果等进行综合性判断，最终得出鉴定结果。
名词解释 1.真核微生物：真核生物是一大类细胞核具有核膜，能进行有丝分裂，细胞质中含有线粒体或同时存在叶绿体等多种细胞器的生物。真菌、显微藻菌和原生动物等都是真核生物类的微生物，故称为真核微生物。 2.原生质体：指在人为条件下，用溶菌酶除尽原有细胞壁或用青霉素抑制新生细胞壁合成后，所得到的仅有一层细胞膜包裹的圆球状渗透敏感细胞，它们只能在等渗或高渗培养液保存或维持生长。 3.病毒：是一类由核酸和蛋白质等少数几种成分组成的超显微“非细胞生物”，其本质是一类含DNA或RNA的特殊遗传因子，病毒是一类能以感染态和非感染态两种形态存在的病原体，它们即可通过感染宿主并借助其代谢系统大量复制自己，又可在离体条件下，以生物大分子状态长期保持其感染活性。 4.霉菌：是丝状真菌的一个俗称，通常指那些菌丝体较发达又不产生大型肉质子实体结构的真菌。在潮湿气候下，它们往往在有机物上大量生长繁殖，从而引起食物、工农业产品的霉变或植物的真菌病害。 5.荚膜：某些细菌表面的特殊结构，是位于细胞壁表面的一层松散的粘液物质，荚膜的成分因不同菌种而异，主要是由葡萄糖与葡萄糖醛酸组成的聚合物，也有含多肽与脂质的。一般在动物体内或含有血清或糖的培养基中容易形成荚膜，在普通培养基上或连续传代则易消失。荚膜不易着色，可用特殊染色法将荚膜染成与菌体不同的颜色。如用墨汁作负染色，则荚膜显现更为清楚,先用染料染菌体，然后用墨汁将背景涂黑，即负染色法。 重点内容 1.产黄青霉 产黄青霉菌（Penicillium chrysogenum）是一种广泛存在于自然界中的霉菌，特别是在食物或者室内环境中最为常见。是生产青霉素的重要工业菌种。 霉菌形态和构造：霉菌营养体的基本单位是菌丝。有无隔菌丝和有隔菌丝两种。通过载片培养可以较清楚的观察菌丝的形态和构造。 菌丝体及其各种分化形态：当霉菌孢子落在适宜的基质上后，就发芽生长并产生菌丝，由许多菌丝相互交织而成的一个菌丝集团称为菌丝体。菌丝体分两类：密布在固体营养基质内部，主要执行吸取营养物功能的菌丝体，称营养菌丝体。伸展到空间的菌丝体，则称气生菌丝体。霉菌的繁殖能力很强，主要产生大量的无性孢子或有性孢子来完成。 霉菌的菌落：宏观上菌落形态较大、质地疏松、外观干燥、不透明，与培养基间的连接紧密，不易挑取，菌落正面与反面的颜色、构造，以及边缘与中心的颜色、构造不一致。霉菌的细胞呈丝状，在固体培养基上生长时又有营养菌丝和气生菌丝的分化。 2.革兰氏阳性细菌、阴性细菌
微生物期末重要内容串讲1 1.比面值（P8）：把某一物体的单位体积所占有的表面积称为比面值。物体的体积越小，其比面值就越大。微生物是一个比面值大（小体积，大面积）的系统，因此拥有巨大的营养物质吸收面，代谢物质排泄面，环境信息交换面。现以球体的比面值为例： 比面值=表面积/体积= 2.菌落（P34）：将单个细菌细胞或（其他微生物）细胞或一小堆同种细胞接种到固体培养基表面（有时为内层），当它占有一定的发展空间并处于适宜的培养条件下，该细胞就会迅速生长繁殖并形成细胞堆，此即菌落。如果菌落是一个单细胞繁殖成的，它就是一个纯种细胞或克隆。如果把大量分散的纯种细胞密集地接种在固体培养基的较大平面上，结果长出大量“菌落”已互相连成一片，这就是菌苔。 菌落特征：一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。 3.荚膜（P27）：荚膜是细胞的特殊结构，是某些细菌在细胞壁外包围的一层粘液性物质，一般由糖和多肽组成。细菌不仅可利用荚膜抵御不良环境；保护自身不受白细胞吞噬；而且能有选择地粘附到特定细胞的表面上，表现出对靶细胞的专一攻击能力。 4.反硝化作用（P116）：反硝化细菌在缺氧条件下，还原硝酸盐释放出分子态氮（N2）或一氧化二氮（N2O）的过程。微生物和植物吸收利用硝酸盐有两种完全不同的用途：一是利用其中的氮作为氮源，称为同化性硝酸还原作用：NO3—NH4—有机态氮。许多细菌、放线菌和霉菌能利用硝酸盐做为氮素营养；另一用途是利用NO2-和NO3-为呼吸作用的最终电子受体，把硝酸还原成氮（N2），称反硝化作用或脱氮作用：NO3—NO2—N2。能进行反硝化作用的只有少数细菌（一般为兼性厌氧微生物），这个生理群称为反硝化细菌。 5.L型细菌（P23）：由英国学者李斯特（Lister）发现的细菌，它是一种典型的细胞壁缺陷型细菌，专指那些实验室或宿主体内通过自发突变而形成的遗传性稳定的细胞壁缺损菌株，在固体培养基上可以形成“油煎蛋”似的小菌落。 6.温和噬菌体（溶源性）（P77）：某些噬菌体侵染细菌后，将自身基因组整合到细菌细胞染色体上，随寄主细胞分裂而同步复制，并不引起细菌裂解释放噬菌体，因而被称作温和噬菌体。这种噬菌体与细菌共存的特性称为溶原性，被侵染的细胞被称作溶原性细胞或溶原菌，整合到细菌细胞染色体上的病毒被称作前病毒或前噬菌体。 烈性噬菌体：这类噬菌体侵入细菌细胞后，会通过裂解作用摧毁细胞使病毒粒子释放。这类能在宿主细菌细胞内增殖，产生大量子噬菌体，并通过裂解细菌细胞而释放出来的噬菌体。 7.选择性培养基（P102）：一类根据某微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，具有使混合菌中劣势菌变成优势菌的功能，广泛用于菌种筛选等领域。 8.同化作用（P106）：又称合成代谢，是指在合成酶系的催化下，由简单小分子、ATP形式的能量和[H]形式的还原力一起，共同合成复杂的生物大分子的过程。异化作用又称分解代谢，是指复杂的有机分子通过分解代谢酶系的催化产生简单分子、能量（ATP）和还原力（或还原当量，以[H]表示）的作用。两者间关系为： 9.石炭酸系数(P.C.)（P177）:即在一定时间内，被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效的石炭酸的最高稀释度之比。一般规定处理时间为10min，供试菌为伤寒沙门氏菌。例如，某甲药剂以1:300的稀释度在10min内杀死所有的供试菌，而达到同效的石炭酸的最高稀释度为1：100，则该药剂的石炭酸系数等于3。计算方法： P.C.=300/100=3