实验十琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制
一、实验目的
1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。
2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。
二、实验原理
存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下：
草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。
本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。
三、实验仪器、材料和试剂
1、仪器：恒温水浴锅，研钵或组织匀浆机
2、材料和试剂
（1）新鲜兔肝
（2）0.10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）：0.1mol/L NaH2PO4 19 ml 加0.1mol/L Na2HPO4 81ml。（3）0.093 mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100 ml蒸馏水中。
（4）0.10 mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100 ml蒸馏水中。
（5）0.02%甲稀蓝溶液。
（6）液体石蜡。
四、实验操作
新鲜兔肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7.4的0.10 mol/L磷酸盐缓冲液，制备成200 g/L的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按下表配制反应体系：
将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置（此时不可摇动!），观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。
思考题:
1、抑制的分类及其特点？
2、本实验中液体石蜡起什么作用? 本实验需在无氧条件下进行,可加一层液体石蜡以隔绝空气。
3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动?
4、制备肝浆时用磷酸缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么？
实验十琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 一、实验目的 1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。 2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。 二、实验原理存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下：草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。这样，便可以显示琥珀酸脱氢酶的作用。 三、实验仪器、材料和试剂 1、仪器：恒温水浴锅，研钵或组织匀浆机 2、材料和试剂（1）新鲜兔肝（2） 0、10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7、4）：0、1mol/L NaH2PO419 ml 加0、1mol/L Na2HPO481ml。 （3）0、093 mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1、5g溶于100 ml蒸馏水中。
（4）0、10 mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1、5g溶于100 ml蒸馏水中。 （5）0、02%甲稀蓝溶液。 （6）液体石蜡。 四、实验操作新鲜兔肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7、4的0、10 mol/L磷酸盐缓冲液，制备成200 g/L的肝匀浆液备用。取五支试管分别编号，按下表配制反应体系：试剂管号0、093 mol/l琥珀酸钠0、10 mol/l丙二酸钠0、 10mol/l(pH7、4)磷酸缓冲液肝匀浆液0、02%甲烯蓝11ml2ml1ml3滴 21、5ml0、5ml1ml1ml3滴31ml1ml2ml3滴42ml1ml1ml3滴51ml1ml1ml1ml3滴将各管溶液混匀后加一薄层液体石蜡后静置（此时不可摇动!），观察各管中的颜色变化，并记录各管颜色完全变化的时间。思考题: 1、抑制的分类及其特点？ 2、本实验中液体石蜡起什么作用? 本实验需在无氧条件下进行,可加一层液体石蜡以隔绝空气。 3、各管中的反应体系配好后为什么不能再摇动? 4、制备肝浆时用磷酸缓冲液，可否换用蒸馏水，为什么？
第14卷第1期现代农药V ol.14 No.1 专论与综述 琥珀酸脱氢酶抑制剂类杀菌剂的研发进展(Ⅱ) 仇是胜1，柏亚罗2 （1. 江苏嘉隆化工有限公司，江苏徐州 221112；2. 江苏省农药研究所股份有限公司，南京 210024） 摘要：琥珀酸脱氢酶抑制剂类 (SDHI) 杀菌剂历经3代，有18个品种上市或即将上市。尤其是第3代8个吡唑酰胺类杀菌剂的问世，有力地带动了SDHI类杀菌剂市场的迅速发展。介绍了SDHI类杀菌剂的作用机理、构效关系和专利概况，逐个陈述了它们的应用与市场，总结了该类产品的抗性情况及产生机理，并展望了SDHI类杀菌剂的发展前景。 关键词：琥珀酸脱氢酶抑制剂；酰胺类杀菌剂；研究开发；应用；市场；抗性 中图分类号：TQ 455.4＋9文献标识码：A doi：10.3969/j.issn.1671-5284.2015.01.001 Progress on Research and Development of Succinate Dehydrogenase Inhibitor Fungicides (Ⅱ) QIU Shi-sheng1, BAI Ya-luo2 (1. Jiangsu Jialong Chemical Industry Co., Ltd., Jiangsu Xuzhou 221112, China; 2. Jiangsu Pesticide Research Institute Co., Ltd., Nanjing 210024, China) Abstract: Eighteen fungicides of succinate dehydrogenase inhibitors (SDHI) have launched or will launch soon through three-generation-development. Especially, the sales of eight carboxamide fungicides in the 3rd generation, promoted significantly the market development of SDHIs. The paper introduced the mechanism of action, structure- activity relationships and patent profiles of SDHIs. The uses and markets of the all active ingredients were described, their resistance and resistant mechanisms were summaried, and the futures of SDHIs were also prospected. Key words: succinate dehydrogenase inhibitor (SDHI); carboxamide fungicide; R&D; use; market; resistance （续上期） 5.4 呋喃酰胺类 (furan-carboxamides，1个) 甲呋酰胺 (fenfuram) 是由壳牌公司发现、安万特(现拜耳作物科学) 公司开发[2]。 甲呋酰胺是替代汞制剂、具内吸性的拌种剂[9]，可防治谷物上的腥黑穗病和黑粉病(Tilletia和Ustilago spp.)[2]。 甲呋酰胺的主要剂型有：DS和LS[2]。其开发代号为：WL 22361；主要商品名为：Pano-ram[2]。 截至2014年10月11日，甲呋酰胺尚未在欧盟、美国和中国登记[23-25]。 5.5 氧硫杂环己二烯酰胺类 (oxathiincar- boxamides，2个) 5.5.1 萎锈灵 (carboxin) 萎锈灵由美国有利来路(现科聚亚) 公司1966年报道，1969年引入市场[2]。 萎锈灵为内吸性杀菌剂，种子处理可用于大麦、小麦和燕麦等作物，防治黑粉病、腥黑粉病[特别是散黑穗病、黑穗病(Ustilago spp.)]，用药量为每100 kg种子50～200 g；还用于大麦、小麦、燕麦、水稻、棉花、花生、大豆、油菜、蔬菜、玉米、高粱和其他作物上防治种子和幼苗上的病害，如黑穗病、腐烂病和疫病等，特别是丝核菌(Rhizoctonia spp.) 引起的病害。萎锈灵不能与强碱或强酸性农药混配[2]。 萎锈灵可采用闷种、拌种和浸种等方法施用，亦可叶面喷雾防治小麦、豆类、梨等的锈病。其对作物生长具有一定的刺激作用，能使小麦增产[9]。 萎锈灵的主要剂型有：FS、SC、WP和WS等[2]。 萎锈灵的开发代号为：D 735；其单剂产品的 收稿日期：2014–10–13；修回日期：2014–10–18 作者简介：仇是胜 (1967—)，男，江苏省徐州市人，高级工程师，主要从事农药及有机合成工作。Tel：0516–85038670；E–mail：qiuss001@https://www.doczj.com/doc/8d8373196.html,
丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 竞争性抑制作用是指，当抑制剂在结构上与底物类似，能与底物竞争酶分子活性中心的结合基团，从而阻碍酶与底物结合。它是可逆的，抑制作用的强弱取决于抑制剂与底物的相对浓度。丙二酸对琥珀酸脱氢酶有竞争性抑制作用。丙二酸的结构和琥珀酸非常相似，可竞争性地与酶的活性中心结合，使其不能与琥珀酸结合。因此可通过研究不同浓度比例的丙二酸和琥珀酸，观察其对琥珀酸脱氢酶活性的影响。 1实验材料 1.1酶提取液实验室提供 1.2仪器滴管；玻璃棒；试管6支 1.3试剂0.2mol/L琥珀酸；0.02mol/L琥珀酸；0.2mol/L丙二酸；0.02mol/L丙 二酸；0.02％甲烯蓝；液体石蜡；蒸馏水 2实验方法 2.1实验原理 琥珀酸经琥珀酸脱氢酶催化，脱氢生成延胡索酸。在体外隔绝空气条件下，从琥珀酸上脱下的一对氢可由人工受氢体甲烯蓝（蓝色）接受后，被还原成甲烯白。抑制剂丙二酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心，阻碍底物与该酶的结合和催化反应，使甲烯蓝褪色的速度变慢。丙二酸对该酶的抑制程度取决于其与琥珀酸的相对浓度比例。 2.2实验设计 2.2.1竞争性抑制作用鉴定 取6支试管，按下表操作： 试剂\管号 1 2 3 4 5 6 酶提取液20 20 20 20 20 - 0.2mol/L琥珀酸10 10 10 - - 10 0.02mol/L琥珀酸- - - 10 10 - 0.2mol/L丙二酸- 10 - 10 - - 0.02mol/L丙二酸- - 10 - 10 - 蒸馏水10 - - - - 25 0.02％甲烯蓝 4 4 4 4 4 4 各管混匀 液体石蜡15 15 15 15 15 15 放置室温 不断观察各管甲烯蓝褪色置甲烯白（即呈肝匀浆色）的时间，比较各管顺序。 3实验结果 记录各管褪色顺序，得下表： 管号 1 2 3 4 5 6 顺序 1 3 2 5 4 6 1号管中无抑制剂（丙二酸），所以琥珀酸在酶的催化下脱氢，使甲烯蓝褪色速度最快。3号管中底物与抑制剂比例为10:1，所以褪色速度次之。2号管和
实验四酶的竞争性抑制作用 一、目的要求： 通过实验加深对酶的竞争性抑制作用的了解 二、实验原理： 与底物化学结构类似的抑制剂，能与底物竞争和酶活性中心的结合、抑制酶的活性，这种类型的抑制为竞争性抑制。竞争性抑制的程度由抑制剂与底物相对浓度决定。如果底物浓度不变，酶活性被抑制的程度随抑制剂的浓度增加而增强。反之，如果抑制剂浓度不变，则酶活性随底物浓度的增加而逐渐恢复。 本实验观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的影响。琥珀酸脱氢酶的活性，在隔绝空气的条件下，可从加入的甲烯蓝褪色情况来观察。 COOH COOH ︳︳ CH2 琥珀脱氢酶CH ︳+ 甲烯蓝——————→‖+ 甲烯白 CH2 CH ︳︳ COOH COOH 三、实验材料 1、试剂： （1）0.2 mol/L 琥珀酸：称取琥珀酸23.618g，用蒸馏水配成约600ml ,用5mol/L NaOH 调pH至7.4，再加水至1000ml （2）0.02mol/L琥珀酸：用0.2 mol/L 琥珀酸稀释10倍 （3）0.2 mol/L 丙二酸：称取丙二酸22.92g ，用蒸馏水配成约600ml ，5mol/L NaOH调pH 至7.4，再加水至1 000ml （4）0.02mol/L丙二酸：用0.2 mol/L丙二酸稀释10倍 （5）0.1mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：取0.2 mol/L Na2HPO4 19ml ，加蒸馏水至200ml (6) 0.02%甲烯蓝 （7）液体石蜡 2、器材 （1）小试管及试管架（2）吸量管（10ml *1）及滴管（8支）（3）研钵 四、实验方法 1、心肌匀浆的制备：取动物（鼠、猪等）心肌1g，置研钵中，剪碎，研磨成匀浆，再加入0.1mol/L 磷酸盐缓冲液10ml ，磨匀，备用 2、取小试管5支并编号，按下表操作：
琥珀酸脱氢酶的作用及丙二酸的抑制作用 【目的】 1 ．掌握琥珀酸脱氢酶作用及丙二酸抑制作用的实验技术与原理。 2 ．深化理解酶的竞争性抑制作用的特点。 【原理】 肌肉组织含有的琥珀酸脱氢酶是一种结合蛋白酶，以 FAD 为辅基。它能催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸， FAD 接受氢生成FAD·2H 。体外实验以美蓝 ( 甲烯蓝 ) 为受氢体，使美蓝还原生成美白 ( 甲烯白 ) 。其反应如下： 琥珀酸脱氢酶活性越高，美蓝脱色所需的时间越短，由于美白易被空气中的氧氧化成美蓝。故实验需在无氧条件下进行，可加一层液体石蜡以隔绝空气。 丙二酸与琥珀酸的化学结构很相似，能和琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酶结合，从而抑制琥珀酸的脱氢作用。其抑制程度与抑制剂和底物二者的浓度有关。本实验通过不同浓度的琥珀酸和丙二酸来观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用。 【器材】 1 ．研钵与剪刀 2 ．漏斗 3 ．纱布 4 ．恒温水浴 【试剂】 1 ． 0.2mol/L 琥珀酸溶液 2 ． 0.02mol/L 琥珀酸溶液 3 ． 0.2mol/L 丙二酸溶液
4 ． 0.02mol/L 丙二酸溶液 以上四种溶液均先用 5mol/L NaOH 溶液调至 pH7.0 ，再用 0.01mol/L NaOH 溶液调至 pH7.4 。直接用琥珀酸钠或丙二酸钠配制亦可。 5 ． 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液（ pH7.4 ） 1/15mol/L Na 2 HPO 4 80.8ml 与 1/15mol/L KH 2 PO 4 19.2ml 混匀即可。 6 ． 0.02% 美蓝溶液 7 ．液体石蜡 【操作】 1 ．肌肉提取液的制备 取用蒸馏水清洗过的新鲜动物肌肉组织约 10g ，置于研钵（或匀浆器）中，研磨成糜状，然后每克肌肉组织加 4 倍体积的冰冷的 pH7.4 1/15mol/L 磷酸盐缓冲液，混匀，用双层纱布过滤，取滤液备用。 2 ．酶促反应 取试管 5 支，编号，按下表操作。 将上述各试管液混匀后，沿各管壁加入液体石蜡 5 ～ 10 滴，使其在液面形成一薄层以隔绝空气。置于37 ℃ 水浴中保温，记录各管保温开始时间及美蓝开始脱色的时间。 3 ．计算并解释各管美蓝颜色变化原因。
－－第三章酶测试题－－ 一、单项选择题（在备选答案中只有一个是正确的） 1．关于酶的叙述哪项是正确的？ A．所有的酶都含有辅基或辅酶B．只能在体内起催化作用C．大多数酶的化学本质是蛋白质 D．能改变化学反应的平衡点加速反应的进行E．都具有立体异构专一性（特异性） 2．酶原所以没有活性是因为： A．酶蛋白肽链合成不完全B．活性中心未形成或未暴露C．酶原是普通的蛋白质 D．缺乏辅酶或辅基E．是已经变性的蛋白质 3．磺胺类药物的类似物是： A．四氢叶酸B．二氢叶酸C．对氨基苯甲酸D．叶酸E．嘧啶 4．关于酶活性中心的叙述，哪项不正确？ A．酶与底物接触只限于酶分子上与酶活性密切有关的较小区域B．必需基团可位于活性中心之内，也可位于活性中心之外C．一般来说，总是多肽链的一级结构上相邻的几个氨基酸的残基相对集中，形成酶的活性中心D．酶原激活实际上就是完整的活性中心形成的过程E．当底物分子与酶分子相接触时，可引起酶活性中心的构象改变 5．辅酶NADP+分子中含有哪种B族维生素？ A．磷酸吡哆醛B．核黄素C．叶酸D．尼克酰胺E．硫胺素
6．下列关于酶蛋白和辅助因子的叙述，哪一点不正确？ A．酶蛋白或辅助因子单独存在时均无催化作用B．一种酶蛋白只与一种辅助因子结合成一种全酶C．一种辅助因子只能与一种酶蛋白结合成一种全酶D．酶蛋白决定结合酶蛋白反应的专一性E．辅助因子直接参加反应 7．如果有一酶促反应其〔8〕=1/2Km，则v值应等于多少Vmax？ A．0．25 B．0．33 C．0．50 D．0．67 E．0．75 8．有机磷杀虫剂对胆碱酯酶的抑制作用属于： A．可逆性抑制作用B．竞争性抑制作用C．非竞争性抑制作用D．反竞争性抑制作用E．不可逆性抑制作用 9．关于pH对酶活性的影响，以下哪项不对？ A．影响必需基团解离状态B．也能影响底物的解离状态C．酶在一定的pH范围内发挥最高活性D．破坏酶蛋白的一级结构E．pH改变能影响酶的Km值10．丙二酸对于琥珀酸脱氢酶的影响属于： A．反馈抑制B．底物抑制C．竞争性抑制D．非竞争性抑制E．变构调节二、多项选择题（在备选答案中有二个或二个以上是正确的，错选或未选全的均不给分） 1．关于酶的竞争性抑制作用的说法哪些是正确的？ A．抑制剂结构一般与底物结构相似B．Vm不变C．增加底物浓度可减弱抑制剂的影响D．使Km值增大 2．关于酶的非竞争性抑制作用的说法哪些是正确的？ A．增加底物浓度能减少抑制剂的影响B．Vm降低C．抑制剂结构与底物无相似之处D．Km值不变
琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 [原理] 肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变成延胡索酸。反应中生成的FADH2可使蓝色的甲烯蓝还原为无色的甲烯白(还原型甲烯蓝)。丙二酸与琥珀酸的分子结构相似，是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，故能与琥珀酸竞争琥珀酸脱氢酶的活性中心。丙二酸与琥珀酸脱氢酶结合后，酶活性受到抑制，则不能再催化琥珀酸的脱氢反应。抑制程度的大小，随抑制剂与底物两者浓度的比例而定。 本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔绝空气的条件下，通过甲烯蓝的褪色程度来判断琥珀酸脱氢酶的活性，并籍此观察丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。 CH2COOH CH2 COOH FAD MB?2H（甲烯白） 琥珀酸 琥珀酸脱氢酶 CHCOOH HOOCCH FADH2MB（甲烯蓝） 延胡索酸 [试剂] 1．0.2mol/L琥珀酸: 取琥珀酸钠(MW:270.14)27克加水至500ml。 2．0.02mol/L琥珀酸: 取1液稀释10倍。 3．0.2mol/L丙二酸: 取丙二酸钠(MW:166.05)16.7克加水至500ml。 4．0.02mol/L丙二酸: 取3液稀释10倍。 5．1/15mol/L pH7.4磷酸盐缓冲: 1/15mol/LNa2HPO4溶液80.8ml与1/15mol/LKH2PO419.2ml 混合即成。 （1）1/15mol/LNa2HPO4溶液: 取Na2HPO4.12H2O （MW：358.14）23.876 克, 加水至1000ml。 （2）1/15mol/LKH2PO4溶液:取KH2PO4（MW：136.09）1.814克,加水至200ml. 6．0.02％甲烯蓝溶液 7．液体石蜡 [主要器材] 1．新鲜猪心 2．玻璃研钵 3．漏斗
实验八 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 【目的】 验证丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用。 【原理】 琥珀酸在琥珀酸脱氢酶催化下脱氢生成延胡索酸，脱下的氢被受氢体接受。本实验用亚甲蓝（MB ）作为受氢体，亚甲蓝接受琥珀酸脱下的氢由蓝色还原成无色的甲烯白（MBH 2）。丙二酸与琥珀酸分子结构相似，能竞争性抑制琥珀酸脱氢酶。通过观察亚甲蓝颜色消退的程度，可以判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制程度。 COOH CH CH + MB COOH CH 2CH 2+ MBH 2 琥珀酸 亚甲蓝（蓝色） 延胡索酸 还原性亚甲蓝（无色） 琥珀酸脱氢酶 【器材】 试管及试管架、滴管、剪刀、研钵或20ml 匀浆器、电热恒温水浴箱。 【试剂】 1. 0.1mol/L 磷酸缓冲液（PH7.4） 取0.1mol/L Na 2HPO 4溶液19ml 和0.1mol/L NaH 2PO 4溶液81ml 混合即可。 2. 1.5% 琥珀酸钠溶液 3. 1% 丙二酸钠溶液 4. 0.02% 亚甲蓝溶液 5.液状石蜡 【操作】 1. 取新鲜动物肌肉或肝5g 左右，放入研钵，用剪刀将组织剪碎，然后加入10ml 在冰箱中保存的PH7.4的磷酸缓冲液充分研磨均匀（或在匀浆器内进行匀浆，制备成20%匀浆液）。 2. 取4支试管，编号，按下表操作：
表3-11 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 加入物（滴） 1 2 3 4 匀浆10 10 －10 1.5%琥珀酸钠溶 10 10 10 20 液 1%丙二酸钠溶液－10 10 10 蒸馏水20 10 20 － 0.02%亚甲蓝溶液10 10 10 10 3. 各管混匀后，各加少量液状石蜡覆盖在液体上，置37℃水浴中保温，随时观察各管颜色变化，并记录各管亚甲蓝褪色时间。 【结果及分析】 比较各管亚甲蓝褪色情况，并对实验结果进行分析。 【思考题】 1. 什么是竞争性抑制作用，与非竞争性抑制作用有何不同。 2. 为什么要用石蜡油隔绝空气来进行实验？
实验五琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 【实验目的】 1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。 2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。 【实验原理】 存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下： 草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。 【实验用品】 1、试剂 （1）0.10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）:0.1mol/L NaH2PO419ml 加0.1mol/LNa2HPO481ml。 （2）0.093mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 （3）0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 （4）0.02%甲稀蓝溶液。 （5）液体石蜡。 2、器具 （1）0.10mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）：0.1mol/L NaH2PO419ml加0.1mol/LNa2HPO481ml。 （2）0.93mol/L琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 （3）0.10mol/L丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g溶于100ml蒸馏水中。 （4）0.02%甲烯蓝溶液。 （5）液体石蜡。 2、器具 （1）恒温水浴箱（2）研钵或组织匀浆机 【实验操作】
货号：MS2102 规格：100管/96样琥珀酸脱氢酶（Succinate Dehydrogenase，SDH）试剂盒说明书 微量法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定 测定意义： SDH（EC 1.3.5.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中。SDH是线粒体的一种标志酶，位于线粒体内膜上的一种膜结合酶，是连接呼吸电子传递和氧化磷酸化的枢纽之一。此外，为多种原核细胞产能的呼吸链提供电子。 测定原理： SDH催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的变化，测定2．6-DPIP 的还原速度，代表SDH酶活性。 自备实验用品及仪器： 可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。 试剂的组成和配制： 试剂一：100mL×1瓶，-20℃保存； 试剂二：20mL×1瓶，-20℃保存； 试剂三：1.5mL×1支，-20℃保存； 试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存； 试剂五：粉剂×1支，-20℃保存； 样本的前处理： 组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离： 1、称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一和10uL 试剂三，用冰浴匀浆器或研 钵匀浆。 2、将匀浆600g，4℃离心5min。 3、弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11000g，4℃离心10min。 4、上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的SDH（此步可选做）。 5、在步骤④的沉淀中加入200uL试剂二和2uL 试剂三，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W， 超声3秒，间隔10秒，重复30次），用于线粒体SDH活性测定。 测定步骤和加样表： 1、分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至600nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 （1）在试剂四中加入18mL蒸馏水充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； （2）在试剂五中加入1mL蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融； （3）在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL样本、10μL试剂五和180μL试剂四，混匀， 第1页，共2页
1.琥珀酸脱氢酶作用及竞争抑制的观察 2.紫外分光法测定核酸含量 本实验分组为15组，如果为16组，相应材料要增加。 需要的试剂 配制方法 注意事项 1.5%琥珀酸钠溶液 7.5g 琥珀酸钠→500ml →15小瓶 没有琥珀酸钠则用琥珀酸代替后用NaOH 调和至PH7.0 1%丙二酸钠 5g 丙二酸钠→500ml →15小瓶 没有丙二酸钠则用丙二酸代替后用NaOH 调和至PH7.0 0.02%甲稀蓝 0.1g 甲稀蓝→500ml →15小瓶（棕色瓶） 甲稀蓝别名亚甲酰蓝 1/15mol/L Na 2HPO 4 23.6g Na 2HPO 4 →2000ml →15大瓶 石蜡油 可以不用分装 每个房间在水浴锅前放1个 核酸 称一定量的小牛胸腺DNA 融入0.1%的NaOH 5-50ug/mL 浓度 羊的心脏 切碎成小块大约2g 左右 提前购买，将皮、脂肪处理掉分割后放在冰箱里 石英砂 均匀的撒在上面 注：每三个人一组，分为15组。如果人数多可以适当多分几瓶试剂。 胶头滴管 共77个 所需仪器 所需数量 40ml 试剂瓶 45 60ml 试剂瓶 15 试管 ○ 14x15 ○ 22x15 共90个 移液管（优先10ml 的本次用5ml 移液管） 15 研钵 15 种类 数量 心脏提取液 15 1.5%琥珀酸钠 15 1%丙二酸钠 15 0.02%甲稀蓝 15 蒸馏水 15 液体石蜡 2
紫外吸收法测定核酸含量 一、实验目的： 1.掌握紫外吸收法测定核酸含量的原理 2.掌握利用紫外线分光度计测定核酸含量 二、实验原理：DNA和RNA都有吸收紫外线的性质，最大吸收峰在260nm波长处紫外线吸收是嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统（－C＝C一C＝C 一），能够强烈吸收250~280nm 波长的紫外光。等书上112页 三、实验试剂与器材 DNA样品紫外分光光度计 四、实验步骤 1.取DNA样品5ml，于紫外分光光度计上测定260nm与280nm处的OD值按下式按下式计算核酸浓度 ○1计算核酸浓度 DNA的质量浓度(mg/l)=OD260nm/0.020xL x稀释倍数 ○2计算核酸纯度=OD260nm/OD280nm 2.取DNA样品5ml，沸水浴中加热5min于紫外分光光度计上，测260nm处的OD值比较DNA 前后吸光度OD的差异。 五、实验结果与分析 备注： 紫外光区：100-400nm 可见光区：400-700nm 红外光区：700-500um 比色杯：玻璃比色杯（glass,G）：仅用于可见光区 石英比色杯(silici,S)：用于可见、紫外光区。 比色杯清洗：不能用碱性试剂洗涤，用弱酸性试剂洗涤，或者去污剂洗涤。
琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 目的与要求：了解琥珀酸脱氢酶的作用及酶促反应中的竞争性抑制作用实验原理：肌肉组织中含有琥珀酸脱氢酶，能催化琥珀酸脱氢转变为延胡索酸（三羧酸循环，线粒体）。反应中生成的FADH2可使甲烯蓝还原为甲烯白。丙二酸是琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制剂，与琥珀酸的分子结构相似，与酶的亲合力高。丙二酸与酶结合后，酶活性受到抑制，则不能催化琥珀酸的脱氢反应。本实验以甲烯蓝为受氢体，在隔离空气条件下，以甲烯蓝褪色程度来观察、判断丙二酸对琥珀酸脱氢酶活性的抑制作用。操作步骤：酶提取液的制备酶促反应管的制备37℃酶促反应，观察甲烯蓝褪色程度实验结果：间隔10分钟，记录各管甲烯蓝褪色程度，解释结果。注意事项：充分碾磨家兔肌肉，碾磨器械、纱布要及时清洗。滴加液体石蜡时，倾斜试管，避免产生气泡。观察结果时不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。改良Mohum法测定谷-丙转氨酶活性目的与要求：了解Mohum法测定谷-丙转氨酶活性的原理及测定方法实验原理：利用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物，在转氨酶作用下生成丙酮酸和谷氨酸，再利用2 4-二硝基苯肼与丙酮酸反应，生成棕色的丙酮酸二硝基苯肼，在520nm波长测定其光密度，与经同样处理标准丙酮酸溶液比较，即可计算谷-丙转氨酶的活性。血清谷-丙转氨酶活性单位定义：每毫升血清在
pH值7.4，37℃保温条件下与底物作用30min后，每生成2.5ug 的丙酮酸为1谷-丙转氨酶单位，正常值为2-40单位/ml。实验步骤：见书Page 77酶活性测定表格。实验结果：谷丙转氨酶活性单位A测定管/A标准管标准管中丙酮酸含量 10/2.5。注意事项：保温温度和时间要精确，即谷丙转氨酶发挥催化作用环境。酶活性单位。微量移液器的使用。..
琥珀酸脱氢酶染色液(四唑盐法)使用说明 货号：G1910 有效期：6个月有效 名称规格Storage 试剂(A):NBT孵育液50ml4℃避光 试剂(B):NBT对照液10ml4℃避光 产品简介： 琥珀酸脱氢酶(succinate dehydrogenase，SDH)是此琥珀酸氧化酶系的第一个酶，位于线粒体内。琥珀酸脱氢酶是黄素蛋白酶，分子内含有-SH，决定着酶的活性，故封闭-SH者皆可作为抑制剂。此酶活性最适pH为7.6～8.5。此酶参与三羧酸循环，在组织化学上，常以此酶活性作为三羧循环的代表，亦作为线粒体的标志酶之一。含此酶活性高的组织为心肌、肾小管上皮和肝细胞。此酶对固定剂敏感，故需用新鲜组织切片。Leagene琥珀酸脱氢酶染色液(四唑盐法)以琥珀酸为底物，在酶作用下脱氢，硝基蓝四唑(nitro BT)为受氢体，接受氢后被还原为甲噁，呈蓝紫色，用以代表琥珀酸脱氢酶的活性。NBT孵育液含有特殊的中间递氢体，可使定位更加准确，染色更加清晰。 操作步骤(仅供参考)： 1、冰冻切片，厚6μm，无需固定。 2、切片人NBT孵育液中，置于37℃温箱，浸染约5～30min。 3、蒸馏水冲洗。 4、甘油明胶封固。 染色结果： 酶活性部位蓝紫色沉淀；线粒体蓝紫色颗粒。 阴性对照(可选)： 1、相同切片置于NBT对照液中，37℃温箱浸染约5～30min作为对照。其余步骤同正常步骤，结果为阴性。 2、(可选)相同切片经10%福尔马林浸泡30～60min，再入NBT孵育液，结果为阴性。
注意事项： 1、本染色液适用于冰冻切片。 2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
（六）酶的抑制实验 一、实验目的 理解两大类抑制反应的基本原理和主要特点，并掌握可逆抑制反应确定的原 理和方法。 二、实验原理 根据抑制剂与酶结合的特点可分为不可逆抑制和可逆抑制二种类型，其中可 逆抑制有可分为三种类型：竞争性抑制、非竞争性抑制和反竞争性抑制。 （1）竞争性抑制类型： 酶不能同时与底物和抑制剂结合。动力学特征为：表观米氏常数Km'增加， Vmax'不变。（Ki 为抑制剂常数，[I]为抑制剂浓度）。 ][)][1(][S K I K S V v i m m ++= )][1('i m m K I K K += （2）非竞争性抑制类型： 抑制剂、底物能同时与酶结合，但此复合物不能进一步分解为产物，Km ’不 变，Vmax’下降。 ])[)(][1(][S K K I S V v m i m ++= i m K I V V ][1'+= （3）反竞争性抑制类型： 抑制剂必须在酶和底物结合后方能与酶形成复合物，但此物不能分解为产物。 Km'、Vmax' 都发生变化。 ])[][1(][S K I K S V v i m m ++= i m K I V V ][1'+= )][1('i m m K I K K += 对于有抑制剂存在的酶促反应，也可采用1/v ～1/[S]作图法，求出Km'、Ki 、 Vmax'，并利用各种可逆抑制类型的动力学特点判断抑制类型。 三、实验材料 1、试剂： （1）0.05mol/L 柠檬酸缓冲液； （2）酸性磷酸酯酶原酶液：原酶液用0.05mol/l 柠檬酸缓冲液稀释25 倍左右，
使测定的第五管A405，在0.6-0.7之间； （3）1.2 mmol/L NPP； （4）0.3 mol/L NaOH； （5）10mmol/LKH2PO4 （6）3mmol/LNaF 2、仪器与玻璃器皿： （1）恒温水浴槽； （2）可见光分光光度计； （3）试管、刻度吸管。 四、方法步骤 按表中由上至下操作： 取20支试管按下表编号，1-5号为各不相同底物浓度的样品空白管。各空白管在加入NPP和缓冲液后，先加NaOH，后加酶液。其余各按下表操作。以1-5管中相应的底物浓度做空白，在可见光分光光度计上测A 。 405
第三章酶化学 （一）名词解释 1.米氏常数； 2.寡聚酶； 3.比活力(specific activity) 4.变构酶； 5.同工酶； 6.活性中心； 7. 竞争性抑制作用； 8. 非竞争抑制作用； 9. 反竞争性抑制作用10.酶的专一性；11. 酶原的激活；12. 别构效应；13. 正协同效应；14. 共价修饰调节；15. 酶活力；16. 不可逆抑制作用；17. 可逆抑制作用。 1.变构酶活性中心外还有___________，当以v对[S]作图时，它表现出______型曲线，而不是典型的米氏酶所具有的_______曲线。 2.酶活性的国际单位（I.U.）定义为在最适条件下，将底物转化为产物的速度为_______的酶量。 3.对于符合米氏方程的酶，v-[S]曲线的双倒数作图（Lineweaver-Burk作图法）得到的直线，在横轴的截距为___________，纵轴上的截距为____________。 4.若同一种酶有n个底物就有________个K m值，其中K m值最________的底物，一般为该酶的最适底物。 5.蛋白质磷酸化时，需要__________酶，而蛋白质去磷酸化需要_______酶。 6.当底物浓度等于0.25K m时，反应初速度与最大反应速度的比值是______。 7.酶催化反应的实质在于降低反应的______，使底物分子在较低的能量状态下达到______态，从而使反应速度______。 8.___ ____抑制剂不改变酶促反应V max，______抑制剂不改变酶促反应K m。 9.谷丙转氨酶属于___________酶类；它的系统名称是___________。 10.复合酶类有___________和___________两部分组成。 11.合成酶类催化由_______合成一种物质的反应,且必须有_______参加. 12.酶活性中心有两个功能部位,一是___________,一是___________. 13.天冬氨酸转氨甲酰酶的别构激抑活剂为________,别构抑剂_________. 14.对同一种酶来说,酶的比活力越___________,___________越高. 15.解释别构酶作用机理的两个重要模型是___________和___________. 16.磺胺类药物是___________,可干扰___________合成. 17.酶是生物催化剂,其化学本质属于___________或___________ （三）选择题 1.下面关于米氏常数K m的论述哪一个是正确的? 1)与ES复合物形成及分解的速度常数都有关系 2)在不同类型的抑制作用中，K m都改变
实验五琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）
实验五 琥珀酸脱氢酶的作用及其竞争性抑制 【实验目的】 1、掌握竞争性抑制概念及作用机理。 2、了解在无氧情况下观察脱氢酶作用的简单方法。 【实验原理】 存在于心肌、骨骼肌、肝脏等组织中琥珀酸脱氨酸，能使琥珀酸脱氢而成延胡索酸，脱下氢可使甲烯蓝退色，还原为甲稀白。反应如下： 草酸、丙二酸等在结构上与琥珀酸相似，可与琥珀酸竞争与琥珀酸脱氢酸的活性中心结合。若酶已与丙二酸等结合，则不能再与琥珀酸结合而使之脱氢，产生抑制作用，且抑制程度取决于琥珀酸与抑制剂在反应体系中浓度的相对比例，所以这种抑制是竞争性抑制。本实验通过观察在由不同浓度的琥珀酸与丙二酸组成的反应体系中使等量甲稀蓝退色反应时间，从而验证丙二酸对琥珀酸的竞争性抑制作用。 【实验用品】 1、试剂 （1）0.10mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）:0.1mol/L NaH 2PO 419ml 加 0.1mol/LNa 2HPO 481ml 。 （2）0.093mol/L 琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g 溶于100ml 蒸馏水中。 （3）0.10mol/L 丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g 溶于100ml 蒸馏水中。 （4）0.02%甲稀蓝溶液。 （5）液体石蜡。 2、器具 （1）0.10mol/L 磷酸盐缓冲液（pH7.4）：0.1mol/L NaH 2PO 419ml 加0.1mol/LNa 2HPO 481ml 。 （2）0.93mol/L 琥珀酸钠溶液：取琥珀酸钠1.5g 溶于100ml 蒸馏水中。 （3）0.10mol/L 丙二酸钠溶液：取丙二酸钠1.5g 溶于100ml 蒸馏水中。 （4）0.02%甲烯蓝溶液。 （5）液体石蜡。 2、器具 （1）恒温水浴箱 （2）研钵或组织匀浆机 【实验操作】 新鲜免肝立即剪碎，放于组织匀浆机中研碎，加入pH7.4的 0.10mol/L 磷酸盐缓冲液，制备成200g/L 的肝匀浆液备用。取五支试管
琥珀酸脱氢酶染色液(四唑盐法) 简介： 琥珀酸脱氢酶( succinate dehydrogenase ，SDH)是此琥珀酸氧化酶系的第一个酶，位于线粒体内。琥珀酸脱氢酶是黄素蛋白酶，分子内含有-SH ，决定着酶的活性，故封闭-SH 者皆可作为抑制剂。此酶活性最适pH 为7.6～8.5。此酶参与三羧酸循环，在组织化学上，常以此酶活性作为三羧循环的代表，亦作为线粒体的标志酶之一。含此酶活性高的组织为心肌、肾小管上皮和肝细胞。此酶对固定剂敏感，故需用新鲜组织切片。 Leagene 琥珀酸脱氢酶染色液(四唑盐法)以琥珀酸为底物，在酶作用下脱氢，硝基蓝四唑(nitro BT)为受氢体，接受氢后被还原为甲噁，呈蓝紫色，用以代表琥珀酸脱氢酶的活性。NBT 孵育液含有特殊的中间递氢体，可使定位更加准确，染色更加清晰。 组成： 自备材料： 1、 蒸馏水 2、 恒温箱或水浴锅 操作步骤(仅供参考)： 1、 冰冻切片，无需固定。 2、 切片人NBT 孵育液中，置于温箱，浸染。 3、 蒸馏水冲洗。 4、 甘油明胶封固。 染色结果： 阴性对照(可选)： 编号 名称 DE0065 60ml Storage 试剂(A): NBT 孵育液 50ml 4℃ 避光 试剂(B): NBT 对照液 10ml 4℃ 避光 使用说明书 1份 酶活性部位 蓝紫色沉淀 线粒体 蓝紫色颗粒
1、相同切片置于NBT对照液中，置于温箱，浸染，作为对照。其余步骤同正常步骤，结 果为阴性。 2、(可选)相同切片经福尔马林浸泡，再入NBT孵育液，结果为阴性。 注意事项： 1、本染色液适用于冰冻切片。 2、对冰冻切片染色时，应减少切片在室温暴露的时间。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：6个月有效。 相关： 编号名称 DC0032 Masson三色染色液 DE0001 碱性磷酸酶染色液(改良Gomori钙钴法) DF0135 多聚甲醛溶液(4% PFA) DG0005 糖原PAS染色液 DM0035 抗酸染色液(Kinyoun冷染法) IH0270 甘油明胶封固液 PT0001 BCA蛋白定量试剂盒 TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
生物化学实验四：酶的激活和抑制作用 指导教师：张继红 一、目的和要求： ①让学生初步认识酶的性质，了解酶促反应的激活剂与抑制剂； ②学习检定激活剂和抑制影响酶反应的方法和原理； 二、实验原理： 酶是具有高效专一催化活性的蛋白质，其活性常受温度PH及些物质的影响。某些物质可以增加其活性，称为激活剂；某些物质能降低其活性，称为抑制剂。很少量的激活剂或抑制剂就会影响酶的活性，而且这种作用常常具有特异性。但要注意的是激活剂和抑制不是绝对的，有些物质在低浓度时为某种酶的激活剂时却为另一种酶的抑制剂，而在高浓度时则为该酶的激活剂（如NaCl）。 三、实验材料及用具 1、1%淀粉溶液 2、1%氯化钠溶液 3、碘化钾-碘溶液：将碘化钾20g和碘10g溶解在100ml水中，使用前稀释10倍。 4、稀释100倍~200倍的新鲜唾液 5、0.1%硫酸铜溶液 6、0.1%Na2SO4溶液 四、主要步骤： 激活剂和抑制的认识：取4支试管，按下表加试剂： 管号 1 2 3 4 0.1%淀粉（ml） 1.5 1.5 1.5 1.5 1%CuSO4（ml）0.5 / / / 1%NaCl（ml）/ 0.5 / / 1%Na2SO4（ml）/ / 0.5 / 水/ / / 0.5 稀淀粉酶（ml）0.5 0.5 0.5 0.5 保温（37℃）10分钟后 KI-I22-3d 2-3d 2-3d 2-3d 现象 五、注意事项： 1、激活剂抑制剂实验中淀粉酶要最后加（为什么？）
2、加入淀粉时要小心，不要沾到试管壁；另外，摇匀时也不宜用力过猛， 使淀粉溶液或淀粉粒过多地沾在试管壁上，这样会影响结果的观察，误差较大。 六、作业： 1、试说明本实验第3号管的意义，并推出Cl-和Cu2+各是唾液酶的激活剂还是抑制剂？举例说明抑制与变性剂有何异同？ 2、为什么温度对酶的活性具有双重影响？
抑制剂对酶作用的影响 酶是蛋白质，凡使酶蛋白变性而引起酶活性丧失的作用称为失活作用（inactivation）。酶的催化作用也可被结合到酶分子上的专一性小分子或离子所抑制，这些物质并不引起酶的变性，但会使酶活性中心的结构和性质发生变化，从而引起酶活力下降或丧失，这种作用称为酶的抑制作用（inhibition）。酶的抑制作用可作为生物体内的主要调控机制，具有重要的生理意义。如许多药物的药理作用和许多毒素的毒理作用均是通过抑制某些酶活性来实现的。能引起酶抑制作用的物质称为酶的抑制剂（inhibitor）。这些物质包括药物、抗菌素、毒物和抗代谢物等。抑制剂对酶的作用有一定的选择性。一种抑制剂只能引起某一种酶或某一类酶的活性降低或丧失。而蛋白质变性剂对酶的作用没有选择性。 酶的抑制作用包括可逆抑制作用和不可逆抑制作用。 一、不可逆抑制作用 抑制剂通过共价键牢固地结合到酶分子上而使酶活性丧失，不能用透析或超滤的方法除去抑制剂而恢复酶活性。这种抑制作用称为不可逆抑制作用（irreversible-inhibition）。 有机磷化合物如二异丙基氟磷（DIPF）能与胰蛋白酶或乙酰胆碱酯酶活性中心的Ser 残基反应，形成稳定的共价键而使酶丧失活性。 乙酰胆碱是昆虫和脊椎动物体内传导神经冲动和刺激的化学介质。乙酰胆碱酯酶催化乙酰胆碱水解为乙酸和胆碱。若乙酰胆碱酯酶被抑制，则会导致乙酰胆碱的积累，因而引起一系列神经中毒症状，过度兴奋导致功能失调，最终导致死亡。这就是有机磷化合物的毒性原理。 另外重金属离子、有机汞、有机砷化物如Pb2+、Hg2+及含Hg2+、Ag+、As3+离子化合物可与酶活性中心的必需基团（如巯基）结合而使酶丧失活性。 氰化物和一氧化碳能与金属离子形成稳定络合物，而使一些需要金属离子的酶的活性受到抑制，如含铁卜啉辅基的细胞色素氧化酶。 有些不可逆抑制剂是重要的药物，如Pinicillin的作用通过共价修饰转肽酶，阻止细菌细胞壁的合成，杀灭细菌。 二、可逆抑制作用 抑制剂与酶以非共价键的方式结合，一般用透析、超滤等方法可除去抑制剂而恢复酶活性。此种抑制作用称为可逆抑制作用（reversible-inhibition）。主要包括两种类型1．竞争性抑制作用（competitive inhibition） 抑制剂与底物竞争同酶的活性部位结合，从而阻止了底物与酶的结合。即酶能结合底物形成ES，或者酶与抑制剂（I）结合形成EI，但酶不能同时结合底物和抑制剂形成EIS。 竞争性抑制作用可以通过增加底物浓度得以解除。在这种情况下，底物超过抑制剂竞争结合到活性部位。所以在竞争性抑制剂存在时，仍然能达到最大反应速度（Vmax）。但表观Km值（Km′）已被改变。这个新的表观Km的数值等于 Km′= Km（1+[I] / Ki） 这里[I]是抑制剂浓度，Ki是酶-抑制剂复合物的解离常数。当[I]增加时，Km′的值升高，而Vmax与无抑制作用相同。 2．非竞争性抑制作用（noncompetitive inhibition） 抑制剂和底物可同时结合到同一酶的不同部位。即抑制剂与酶结合后，并不防碍酶再与底物结合，底物仍然能结合到酶-抑制剂复合物上形成酶-抑制剂-底物三元复合物（EIS）。