液体菌种的几种接种方法
刘益清(415900)
湖南忠食农业有限公司
液体菌种具有方便快捷菌龄短而一致纯度高活力强等优点，越来越受科研工作者和广大食用菌生产者的重视，但如何正确使用液体菌种尚未见系统报道．液体菌种培养好后接种方法直接影响液体菌种优势的发挥，甚至关系到生产的成败．我们在规模应用液体菌种接种中使用过多种接种方法，各有特点，下面就几种成功的方法介绍给大家．
一料表面接种法：这是目前采用比较多的方法,采用这种接种方法时多为瓶装或袋装培养料，上端有一定的空间，如生产金针菇茶薪菇黑木耳杏鲍菇菌包以及生产香菇鸡腿菇平菇等各种菌种，接种时尽量将料表面喷淋上菌种，液种萌发生长快，封面早杂菌污染的机会很小，除破袋外菌袋污染的机会极低，甚至以万袋计算可以达到零污染．这种方法的菌球处于氧气充足的条件下生长很好．
二表面加枪头插入式接种法：因表面接种法接种时菌球易被培养料的过滤作用阻滞在料的上半部分，菌丝生长需要从上往下生长，不能在料内上下同时生长．如果将接种枪枪头做成管状插入料内接种，菌球在料内同时生长，可以缩短发菌时间一半左右，甚至更多．这种方法一要注意料内氧气的供应（不适应扎口袋），二要注意接种环境的无菌要求，避免菌种不萌发或枪头带入杂菌造成污染，成品率在98-100%,比固体菌种袋口接种缩短时间一半以上.
三袋表面扎孔接种法：长菌棒从两端接种不能缩短养菌时间，从袋的表面一面或两面）用枪头扎入３－５cm深并同时接种，扎孔间隔根据需要确定，如香菇每棒扎３－５个孔，这种方法调节接种量和孔间距离可以达到缩短养菌时间和减少杂菌污染的目的，缺点是用种量大，每个孔的接种量不少于１０ml,接种后不封口的应达到每孔２０ml以上．这种方法2007年大量生产香菇出菇菌棒,成品率高达99%以上
四袋壁内喷射接种法：长菌棒还可以采取从两端一则用枪头分别扎入到袋薄膜内，从料与塑料薄膜之间喷射菌种（要求液体压力达到１kg/cm２以上），喷射后用手按压分散菌种，使菌棒一则布满菌种，待菌丝生长１－３cm后可以扎孔增氧．这种方法可以覆盖较大的料表面，发菌快袋面微孔污染小，缺点是用种量大，每喷射一次用种多在１００ml左右．而且在配料时就要注意减少培养料的含水量．这种方法在香菇生产上应用比较成功．是我们在第三种方法的基础上改进的方法,期望今后适应开放接种的需要.
五接种后摇动接种法：颗粒菌种培养基接液体菌种最能发挥快速发菌的优势，液体菌种接入玻璃瓶后旋转或摇动使液体流动粘到每粒颗粒上，在适合温度下三天即可长满菌丝，继续培养几天让菌丝深入颗粒内部后即可用于生产．这种方法可以在急需用种时使用．六接种机接种法：食用菌瓶栽工厂化企业使用的方法，接种速度一般7000-8000
瓶／小时，菌液喷射在料面及孔洞中。
液体菌种对不良环境的抵抗力不如固体菌种（如耐缺氧能力不强），采用发酵料，生料栽培或塑料袋熟料开放式拌料栽培往往不易成功.液体菌种生产技术与食用菌栽培技术的很好结合才能发挥液体菌种的优势
以上方法可以灵活运用，如生产蛹虫草时由于培养液中含有大量由菌丝产生的孢子，接种时只要液体流到的地方都会有菌丝生长，无论是薄料生产子实体还是厚料生产菌丝体粉都可以朝料表喷一下液体菌种即可．
野鸡常用疫苗的使用及要求 （1）新城疫疫苗 1） 2系苗是一种新城疫弱病毒苗，对雏山鸡安全。通常对山鸡进行点眼或滴鼻，每只鸡1~2滴，接种7~10日龄的雏山鸡后，经7~9天便可产生免疫力。但其免疫力弱，免疫期较短，仅达20~30天左右。 2） 4系苗也是一种弱毒苗，但免疫力比2系强，可适用于各种年龄的山鸡。用4系苗给雏山鸡接种安全可靠，无不良反应。4系苗既可用基础免疫，也可用于加强免疫。给7~10日龄的雏山鸡点眼或滴鼻，也可用于饮水。免疫期达2~3个月。 3） 1系苗比前两种疫苗的毒力强，属中等毒力苗，一般接种60日龄以上的青年山鸡或成年山鸡。每只肌注0.1~0.2毫升,免疫期达6~12个月以上。 4）新城疫油乳剂灭活苗。可用于各种日龄的山鸡，1~3日龄雏山鸡可用背颈皮下注射，每只0.1毫升。成年山鸡每只注0.5毫升，免疫期可一年左右。舍温工作时，接种效果更好。油乳剂灭活苗安全、可靠，能使机体保持较高的抗体水平，如接种种山鸡，对其后代产生的免疫抗体能保持一段时间。缺点是接种比较麻烦，而且疫苗价格较高，所以不常采用。 （2）马立克苗一般用200毫升稀释液来稀释1000只剂量的马立克疫苗，在雏山鸡出雏24小时之内，背颈皮下注射0.2毫升，10~14天后产生免疫力，免疫期一年，如场内没有感染过此病，可以不接种。 （3）鸡传染性支气管炎疫苗分别为H120和H52，H120是一种弱毒疫苗，用于1~2月龄以内的山鸡；而H52为中等毒力，适用于40日龄以上的山鸡饮水。山鸡对传染性支气管炎疫苗有一定的抵抗力，也可不用。 （4）禽出败疫苗 1）禽出败灭活苗免疫期达3个月，免疫效果不太理想。 2）禽出败弱毒苗肌肉注射，每只注1~2毫升，免疫期3~6个月，接种后有反应。 3）口服禽出败疫苗（“1010活疫苗”）经饮水或拌料口服免疫。发病群应用后，可迅速扑灭此病，在健康群中使用无不良反应。此苗用时，需连用3次，每次间隔3天，免疫期至少达8个月以上。 禽霍乱油乳剂灭活菌苗广东生物药厂生产的此苗稳定，注射后反应小，安全性好。皮下注射后，14天后产生免疫力，免疫达6个月以上，疫苗可保存1年。
国家免疫规划疫苗（免费）种类及接种程序 年(月）龄接种疫苗 出生时乙肝疫苗（第1剂次）卡介苗 1月龄乙肝疫苗（第2剂次） 2月龄脊灰疫苗（第1剂次） 3月龄脊灰疫苗（第2剂次）（无细胞）百白破疫苗（第1剂次）4月龄脊灰疫苗（第3剂次）（无细胞）百白破疫苗（第2剂次）5月龄（无细胞）百白破疫苗（第3剂次）6月龄乙肝疫苗（第3剂次）流脑疫苗A群（第1剂次） 8月龄麻风疫苗乙脑减毒活疫苗（第1剂次） 1-1.5岁甲肝减毒活疫苗流脑疫苗A群（第2剂次） 1.5-2岁麻腮风疫苗（无细胞）百白破疫苗（第4剂次） 2岁乙脑减毒活疫苗（第2剂次） 3岁流脑疫苗A+C群（第1剂次） 4岁脊灰疫苗（第4剂次） 6岁白破疫苗流脑疫苗A+C群（第2剂次） 注：按照河南省统一安排，甲肝疫苗力争到2010年实施免费接种。
常用疫苗的接种部位途径和剂量（参考图例）
接种2剂次，儿童8月龄和2周岁各接种1剂次。乙脑灭活疫苗接种4剂次，儿童8月龄接种2剂次，2周岁和6周岁各接种1剂次。 9． 接种1剂次，儿童18月龄接种。甲肝灭活疫苗接种2剂次，儿童18月龄和24—30月龄各接种1剂次。 10．出血热疫苗出血热疫苗 接种3剂次，受种者接种第1剂次后14天接种第2剂次，第3剂次在第1剂次接种后6个月接种。 11．炭疽疫苗接种1剂次，在发生炭疽疫情时接种，病例或病畜的直接接触者和病人不能接种。 12．钩体疫苗钩体疫苗接种2剂次，受种者接种第1剂次后7—10天接种第2剂次。疫苗免疫程序见附表。 各接种1剂次，第1剂在出生后24小时内尽早接种。 2． 接种1剂次，儿童出生时接种。 3． 接种4剂次，儿童2月龄、3月龄、4月龄和4周岁各接种1剂次。 4． 接种4剂次，儿童3月龄、4月龄、5月龄和18—24月龄各接种1剂次。无细胞免疫程序与百白破疫苗程序相同。无细胞供应不足阶段，按照第4剂次至第1剂次的顺序，用无细胞百白破疫苗替代百白破疫苗；不足部分继续使用百白破疫苗。 5． 接种1剂次，儿童6周岁时接种。 6．麻腮风疫苗（麻疹（Measles）、（Mumps）、（Rubella））
1目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2实验说明 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3实验器材 3.1器械和用品 酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2菌种和培养基 菌种： 大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphyloccus aureus）。 培养基： 普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4实验流程 斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5操作步骤
5.1斜面接种法 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2液体接种法 多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下： 由斜面培养物接种至液体培养基： 用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。
鸡新城疫疫苗种类及其使用方法 鸡新城疫（ND）是一种具有高度传染性的病毒性疾病，各种品种、年龄、性别的鸡都易感，发病率和死亡率在90％以上，是严重危害养鸡生产的最主要疾病之一。近年来，西方发达国家采取以扑杀强毒感染群为主. 鸡新城疫（ND）是一种具有高度传染性的病毒性疾病，各种品种、年龄、性别的鸡都易感，发病率和死亡率在90％以上，是严重危害养鸡生产的最主要疾病之一。近年来，西方发达国家采取以扑杀强毒感染群为主的方法，已经基本控制疾病。在我国，由于经济发展水平的限制以及强毒感染的普遍存在，主要通过应用疫苗进行免疫接种来控制ND的发生。由于ND疫苗种类繁多，疫苗使用方法不一，往往会因疫苗的选择和使用不当造成免疫失败，给养鸡生产带来极大的经济损失。现将市售的几种ND疫苗及使用方法介绍如下： 1、疫苗的种类 1.1 中等毒力的疫苗 包括H株、Roakin株、Mukteswar株和Komorov株等，我国主要使用Mukteswar 株（即Ｉ系）。 Ｉ系疫苗使用后免疫产生快，一般注苗后3天产生免疫力，免疫持续时间长，免疫期为1~1.5年，保护力强。主要应用于有基础免疫的鸡群作加强免疫。Ｉ系疫苗多采用注射或刺种方法接种，也可采用饮水和气雾免疫。Ｉ系注苗后应激较大，对产蛋高峰鸡群有一定影响。由于Ｉ系使用后存在毒力返强和散毒的危险性，易使鸡群隐性感染，发生慢性ND，养鸡场要长期控制好ND，应慎用IV 系。 1.2 弱毒疫苗 包括Ⅱ系（B1株）、Ⅲ系（Ｆ株）、IV系（Lasota株）、V4和克隆株等。 1.2.1Ⅱ系疫苗安全，使用后无临床反应，适用于各种年龄鸡只免疫，特别是雏鸡免疫，接种后6~9天产生免疫力，免疫期3个月以上，但因多种因素影响，免疫期常达不到3个月。本疫苗可用滴鼻、点眼、饮水、气雾等方法免疫。Ⅱ系苗免疫原性较差，不能克服母源抗体的干扰，保护力不强，如遇强毒感染，对鸡群不能完全保护。据报道，在ND强毒流行的地区，1月龄雏鸡用Ⅱ系苗免疫其保护率仅为10%。 1.2.2 Ⅲ系疫苗其特点与Ⅱ系相似，主要用于雏鸡免疫，其免疫途径为滴鼻、点眼、饮水、气雾和肌肉注射，但可引起一过性的轻微呼吸道症状。 1.2.3 IV系疫苗毒力较II系、III系强，因其免疫原性好，可以突破母源抗体，抗体效价高，适用于各种年龄鸡只的免疫，目前世界各国广泛应用于雏鸡免疫。通常采用滴鼻点眼，饮水方式免疫，也可用作气雾免疫。由于其本身仍有一定的病原性，首免不能采用气雾免疫，否则会导致上呼吸道敏感细胞的病理损伤，增加病原菌的继发感染。对慢性呼吸道疾病存在的鸡群，采用气雾免疫易激发慢性呼吸道疾病的暴发。 1.2.4V4（耐高温株）具有良好的安全性、免疫原性和耐热性，可常温保存，在22~ 30℃环境下保存60天其活性和效价不变。V4苗可以通过饮水、滴鼻、肌肉注射等方式免疫。V4苗还具有自然传播性，能通过自然途径免疫在鸡群中迅速传播，产生的血清抗体较高，具备抵抗强毒攻击的能力，是防制ND的理想弱毒株。V4苗因使用效果较好，使用安全方便，目前在国外广泛应用，国内应用相对较少。 1.2.5克隆株疫苗目前市售的主要有进口的Clone-30、N-29和国产的Clone-83、N-88等几种，其中Clone-30应用较广。 Clone-30毒力低，安全性高，免疫原性强，不受母源抗体干扰，可用于任何日龄鸡。一般进行滴鼻、点眼、肌肉注射，免疫后7~9天即可产生免疫力，免疫持续期达5个月以上。
鸡免疫接种的九个方法 免疫接种是养鸡场必不可少的工作，免疫的成败事关养鸡效益的高低。实践证明：在相同条件下，选择有效的免疫方法，可获得较高的免疫效果。 1.滴鼻点眼法。将500只剂量的疫苗用25毫升灭菌生理盐水稀释摇匀，用标准滴管(眼药水塑料瓶也可)各在鸡眼、鼻孔滴一滴(约0.05毫升)，让疫苗从鸡气管吸入肺内、渗入眼中，比法适合雏鸡的鸡瘟Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ系疫苗和传支、传喉等弱毒疫苗的接种，它使鸡苗接种均匀、免疫效果较好，被养殖界称为弱毒苗的最佳方法。 2.浸头闷鼻法。按每只鸡0.5～1毫升的生理盐水稀释疫苗(幼雏0.5 毫升，1月龄以上用1毫升)盛在茶碗内，将鸡腿和翅膀捉住，由助手按住鸡头浸入疫苗(要设过眼部)中二秒种，迅速拿出，使鸡的眼鼻口中都沾上疫苗。此法适合鸡瘟Ⅱ、Ⅳ系或法氏囊等弱毒苗，经抗体监测，防疫效果比单独滴鼻、饮水、注射都好，很多养鸡户也反映操作容易，速度快。 3.肌肉注射法。按每只鸡0.5～1 毫升的剂量将疫苗用生理盐水稀释，用注射针注射在鸡腿、胸或翅膀肌肉内。注射腿部应选在腿外侧无血管处，顺着腿骨方向刺入，避免刺伤血管神经；注射胸部应将针头顺着胸骨方向，选中部并倾斜30度刺入，防止垂直刺入伤及内脏；2月龄以上的鸡可以注射翅膀肌肉，要选在翅膀根部肌肉多的地方注射。此法适合鸡瘟Ⅰ系疫苗、油苗及禽霍乱弱毒苗或灭活苗。 4.皮下注射法。此法适合鸡马立克疫苗接种。将1000 只剂量的疫苗稀释于200毫升专用稀释液中，在鸡颈部皮下注射0.2毫升，注射时要捏起皮肤刺入，防止伤及鸡颈部血管、神经。 5.翅内刺种法。将1000只剂量的疫苗，用25毫升生理盐水稀释，充分摇匀，用蘸笔(文具店有售)或接种针蘸取疫苗，在鸡翅膀内侧无血管处刺种，20日龄内雏鸡刺一针，大鸡刺2针，此法适用于鸡瘟Ⅰ系苗和鸡瘟疫苗的接种，但需三天后检查刺种部位，若者小肿块或红斑则表示接种成功，否则需重新刺种。 6.喷雾接种法。喷雾前先关通风孔，将1000只剂量的疫苗加蒸馏水150～300毫升稀释，用纱布过滤，用喷雾器(枪)喷于500只鸡的鸡舍空中，要求喷雾均匀，喷头离鸡1.5米，喷完20分钟打开通气孔，免疫后的饲料中添加抗菌素防止气囊炎。此法适合鸡瘟Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ系、传支疫苗接种。 7.擦刷肛门法。此法主要用于传喉疫苗接种。将1000 只剂量的疫苗加入30毫升生理盐水稀释，捉鸡倒提，用手捏腹使肛门粘膜外翻，用接种刷或棉球，刷擦肛门粉膜，使粘膜发红为止，每500只鸡换一把刷子。 8.饮水免疫法。在饮水免疫前3小时(夏季2小时)给鸡停水，将饮水器反复洗刷干净，再用凉开水冲洗一遍，确保无残留消毒剂或异物。将2倍于鸡释的疫苗，
微生物的接种技术 1 目的 1.1学习掌握微生物的几种接种技术 1.2 建立无菌操作的概念，掌握无菌操作的基本环节 2 实验说明 将微生物的培养物或含有微生物的样品移植到培养基上的操作技术称之为接种。接种是微生物实验及科学研究中的一项最基本的操作技术。无论微生物的分离、培养、纯化或鉴定以及有关微生物的形态观察及生理研究都必须进行接种。接种的关键是要严格的进行无菌操作，如操作不慎引起污染，则实验结果就不可靠，影响下一步工作的进行。 3 实验器材 3.1 器械和用品 酒精灯，玻璃铅笔，火柴，试管架、接种环、接种针、接种钩、滴管、移液管、三角型接种棒等接种工具。 3.2 菌种和培养基 菌种：大肠杆菌（Escherichia coli），金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）。 培养基：普通琼脂斜面和平板,营养肉汤,普通琼脂高层(直立柱)。 4 实验流程 斜面接种法→液体接种法→固体接种法→穿刺接种法。 5 操作步骤 5.1 斜面接种法 斜面接种法主要用于接种纯菌，使其增殖后用以鉴定或保存菌种。 通常先从平板培养基上挑取分离的单个菌落，或挑取斜面，肉汤中的纯培养物接种到斜面培养基上。操作应在无菌室、接种柜或超净工作台上进行，先点燃酒精灯。 将菌种斜面培养基(简称菌种管)与待接种的新鲜斜面培养基(简称接种管)持在左手拇指、食指、中指及无名指之间，菌种管在前，接种管在后，斜面向上管口对齐，应斜持试管呈45～0度角，并能清楚地看到两个试管的斜面，注意不要持成水平，以免管底凝集水浸湿培养基表面。以右手在火焰旁转动两管棉塞，使其松动，以便接种时易于取出。
右手持接种环柄，将接种环垂直放在火焰上灼烧。镍铬丝部分（环和丝）必须烧红，以达到灭菌目的，然后将除手柄部分的金属杆全用火焰灼烧一遍，尤其是接镍铬丝的螺口部分，要彻底灼烧以免灭菌不彻底。用右手的小指和手掌之间及无名指和小指之间拨出试管棉塞，将试管口在火焰上通过，以杀灭可能沾污的微生物。棉塞应始终夹在手中如掉落应更换无菌棉塞。 将灼烧灭菌的接种环插入菌种管内，先接触无菌苔生长的培养基上，待冷却后再从斜面上刮取少许菌苔取出，接种环不能通过火焰，应在火焰旁迅速插入接种管。在试管中由下往上做S形划线。接种完毕，接种环应通过火焰抽出管口，并迅速塞上棉塞。再重新仔细灼烧接种环后，放回原处，并塞紧棉塞。将接种管贴好标签或用玻璃铅笔划好标记后再放入试管架，即可进行培养。 5．2 液体接种法 多用于增菌液进行增菌培养，也可用纯培养菌接种液体培养基进行生化试验，其操作方法与注意事项与斜面接种法基本相同，仅将不同点介绍如下： 由斜面培养物接种至液体培养基：用接种环从斜面上沾取少许菌苔，接至液体培养基时应在管内靠近液面试管壁上将菌苔轻轻研磨并轻轻振荡，或将接种环在液体内振摇几次即可。如接种霉菌菌种时，若用接种环不易挑起培养物时，可用接种钩或接种铲进行。 由液体培养物接种液体培养基时，可用接种环或接种针沾取少许液体移至新液体培养基即可。也可根据需要用吸管、滴管或注射器吸取培养液移至新液体培养基即可（图4-5）。 接种液体培养物时应特别注意勿使菌液溅在工作台上或其他器皿上，以免造成污染。如有溅污，可用酒精棉球灼烧灭菌后，再用消毒液擦净。凡吸过菌液的吸管或滴管，应立即放入盛有消毒液的容器内。 5.3 固体接种法 普通斜面和平板接种均属于固体接种，斜面接种法已讲了，不再赘述。固体接种的另一种形式是接种固体曲料，进行固体发酵。按所用菌种或种子菌来源不同可分为： 用菌液接种固体料，包括用菌苔刮洗制成的菌悬液和直接培养的种子发酵液。接种时按无菌操作将菌液直接倒入固体料中，搅拌均匀。但要注意接种所用水容量要计算在固体料总加水量之内，否则会使接种后含水量加大，影响培养效果。 用固体种子接种固体料。包括用孢子粉、菌丝孢子混合种子菌或其他固体培养的种子菌。将种子菌于无菌条件下直接倒入无菌的固体料中即可，但必须充分搅拌使之混合均匀。一般是先把种子菌和少部分固体料混匀后再拌大堆料。
鸡免疫接种技术要点 由于饲养管理不善或免疫方法不当等方面的原因，鸡在免疫接种后，容易引起一些不良反应，导致鸡生产性能下降、体质虚弱，甚至出现死亡，给养鸡户带来不必要的损失。 一、常见不良反应及原因 1、呼吸道不良反应。雏鸡在接种传染性支气管炎疫苗发生呼吸道免疫反应，一般在寒冷的冬季易发生。因为养鸡场为保暖而紧闭门窗，致使鸡舍内空气污浊，有害气体增多，此时给鸡进行呼吸道病免疫接种，就会引起严重呼吸道免疫反应，常表现呼吸罗音、摇头和水样眼等症状。 2、头颈部不良反应。选择在颈背部皮下注射疫苗时，因注射部位不当，针头刺到肌肉或神经，或将疫苗注入颈部肌肉，引起颈部活动僵硬，表现为扭曲状。 3、腿部不良反应。选择在腿部肌肉注射疫苗时，因失手易造成血管或神经损伤，或注射疫苗的用量过大，或带菌免疫，引起腿部注射部位发炎，出现肿胀、跛行症状。 4、免疫后不良反应。出现鸡免疫接种后反而发病了，主要原因：⑴接种时鸡群内已潜伏有强毒病原微生物，只是未表现明显的临诊症状；⑵疫苗免疫剂量过大。例如雏鸡大剂量使用新城疫Ⅱ系疫苗或鸡新城疫Ⅳ系（Lasota株）疫苗会导致扭头、转圈等神经症状。大剂量使用传染性喉气管炎疫苗会出现流泪、喉头出血等传染性喉气管炎症状；⑶引起并发症状。例如鸡新城疫Ⅱ系（或Ⅳ系）疫苗、鸡传染性支气管炎疫苗、法氏囊病疫苗的接种，可能造成本来不明显的败血性支原体病的爆发；⑷不同种类疫苗间的相互干扰作用。一个养鸡场往往不止进行一种疫苗的免疫接种，往往几种疫苗同时使用，例如有的养鸡户同时接种鸡新城疫Ⅰ系疫苗和鸡痘疫苗，由于鸡新城疫Ⅰ系苗具有很强的干扰作用，可导致鸡痘疫苗免疫失败，从而有可能感染并发生鸡痘；⑸由于消毒不严，使鸡舍内漂浮大量的有害细菌或病毒，当进行接种时，易使细菌或病毒从伤口进入体内，发生疾病；⑹对无母源抗体或母源抗体水平较低的雏鸡，选用毒力较强毒株的疫苗免疫，使免疫的鸡群发病；⑺雏鸡在免疫前，由于母源抗体水平低，遭受外界环境中强毒的感染，免疫接种后激发已感染鸡发病。⑻在未发病的鸡场，使用毒力较强的疫苗免疫时，可引起鸡群发病；⑼鸡群体质较弱，接种疫苗后，易发生疾病；⑽接种疫苗后，因饲养管理不善，使鸡体质下降导致发病。 二、预防措施 1、保持良好环境。鸡舍应干净卫生、通风良好，日照充足，饲养密度合理，为鸡群生长提供良好的环境。 2、建立定期消毒制度。对孵化设备、鸡场饲养用具及环境进行定期消毒，防止有害病菌及其它强毒感染。对注射器械也要严格消毒。
养鸡场常用疫苗及使用 方法精选文档 TTMS system office room 【TTMS16H-TTMS2A-TTMS8Q8-
养鸡场常用疫苗及使用方法 实施程序化免疫接种，是预防家禽疫病最有效、最关键的措施之一，对规模化养鸡场来说，更应重视。每一个鸡场，都要有适合本场特点的免疫程序，一般在制订免疫程序时应考虑以下几方面的因素：当地家禽疾病的流行情况及严重程度；母源抗体的水平；上次免疫接种引起的残余抗体的水平；鸡的免疫应答能力；免疫的种类；免疫接种的方法；各种疫苗接种的配合；免疫对鸡健康及生产能力的影响等。以下是常用的疫苗及其使用方法。 H5N1高致病性禽流感疫苗目前，我国已经成功研制出用于预防H5N1高致病性禽流感的灭活疫苗，非疫区的养殖场应定期接种疫苗，以预防禽流感的发生。 使用高致病性禽流感灭活苗免疫时应注意：（1）首先应在家禽机体情况良好的情况下进行；（2）采用胸部肌肉接种，雏鸡注射剂量每只0.3毫升，成鸡每只0.5毫升；（3）在小日龄家禽作首次免疫时，应尽量避开母源抗体高峰期。 一般来说灭活疫苗注射后机体需14天才能产生免疫保护，疫苗的免疫期为4个月。在保证疫苗质量的前提下，疫苗须在2℃-8℃条件下保存；此外，免疫接种的时间、品种、母源抗体、接种途径及相应的综合防治措施是否到位，都对禽流感疫苗的免疫效果有决定性的影响。需要说明的是，如果在疫苗免疫保护力产生前已感染了禽流感病毒，尽管接种了疫苗，同样会发生禽流感。 鸡新城疫疫苗目前我国生产的鸡新城疫疫苗有I、II、III、IV等4个品系。I系疫苗毒力较强，IV系疫苗（Lasota系）毒力次之，II系疫苗（B1系）毒力较弱，III系疫苗（F系）毒力最弱。II、III、IV系苗适用于雏鸡和成鸡，I系苗只供两个月以上的鸡使用，接种后虽然引起的反应比较重，然而免疫效力坚强，适合于疫病严重流行的地区使用。不过为安全起见，在使用I系苗之前，要先用II或III系苗进行基础免疫。
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/8f3019525.html, 鸡球虫疫苗的合理使用及注意的问题 作者：仁措吉 来源：《农民致富之友》2016年第16期 [摘要] 随着人们生活条件的提升，肉类食品和蛋类食品逐渐成为人们的主要食品，其中 鸡肉、鸡蛋价格低廉、味道鲜美，受到人们的喜爱。虽然蛋鸡和肉鸡的市场环境较好，但很容易出现球虫病，继而致使鸡群死亡，给养殖户带来巨大的经济损失，因此养殖户加强对鸡球虫疫苗的应用。 [关键词] 鸡球虫疫苗使用方法注意事项 [中图分类号] S858 [文献标识码] A [文章编号] 1003-1650（2016）08-0239-01 鸡球虫病是指由于寄生性原虫引起的组织损伤，导致鸡的摄食、消化等出现紊乱，并出现失血情况，甚至导致鸡死亡，影响养殖户的经济效益[1]。如贵州省黔南布依族苗族自治州有 很多养鸡场，如果其不加强对鸡球虫的防范，注重正确使用鸡球虫疫苗，将会难以控制该病情。 1 鸡球虫疫苗的特性 鸡球虫疫苗可以分为死苗和活苗，其中死苗包含虫体表面蛋白疫苗、虫体内抗原疫苗和有性繁殖阶段的抗原疫苗等，能够一定程度阻止和消灭相应的病毒。活苗包含强毒苗和弱毒苗，该两种疫苗均至少需要在体内完成3个以上生活周期或，才能够起到保护作用。养殖户利用强毒苗进行免疫保护时，应当是在雏鸡能够准确采集球虫卵囊后，通过定期投料或更换垫料的方式，控制卵囊数量，保证鸡在健康范围内反复感染病菌，继而产生球虫病免疫力[2]。但由于 该种方式先要使鸡感染球虫病，因此如果使用不当，则会导致鸡因疫苗而发病，影响鸡的健康，甚至可能在鸡群爆发球虫病。弱毒苗相对于强毒苗而言，毒性较低，因此养殖户只需要常规使用即可，无需采用定期投料或更换垫料，即弱毒苗安全性较高。 2 鸡球虫疫苗使用注意问题 2.1 鸡球虫疫苗的使用条件 鸡球虫疫苗主要是利用狍子化卵囊使鸡反复感染疾病，从而使鸡对疫病产生抵抗力[3]。 虽然狍子化卵囊自身抵抗力较强，但养殖户也需要注意对疫苗的保护，尤其疫苗必须保存在溶液中。由于活卵囊需要氧气，养殖户避免长期密封处理，同时控制好保存温度，即温度过低会致使卵囊破裂，温度过高会致使卵囊代谢旺盛，均会对疫苗效用产生巨大的影响，保存温度条件一般为2至8℃。
微生物接种 1、平板倾注法 1）、以无菌操作，将检样25g（或25ml）剪碎放于含有225ml灭菌生理盐水的广口瓶内（瓶内置有适量玻璃珠）或灭菌研钵内，经充分振摇或研磨用成1：10的均匀稀释液。 2）、用1.0ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1.0ml，沿管壁徐徐注入含有9.0ml灭菌生理盐水的试管内（注意吸管尖端不要触及管内液面），振摇试管混合均匀，作成1：100的稀释液。 3）、另取1.0ml灭菌吸管，按上述操作作10倍稀释，如此每递增稀释一次，即换1支1.0ml 吸管。 4）、根据食品卫生要求或对标本污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释液的吸管移1.0ml稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 5）、稀释液移入平皿后应及时将凉至46℃营养琼脂（可放于46×1℃水浴保温）注入平皿约15ml，并移动平皿使混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1.0ml灭菌生理盐水的平皿内作空白对照。 6）、待稀释液入平皿后，翻转平板，置36×1℃温箱内培养24±2h（肉、水产品、乳和蛋品为48±2h）取出，计算平板内菌落数，乘以稀释倍数，即得每克（或ml）样品所含菌落总数。 2、平板表面涂布法 将营养琼脂制成平板，经50℃l一2小时或35℃18—20小时干燥后，于其上滴加检样稀释液0．2ml，用L捧涂布于整个平板的表面，放置片刻(约lO分钟)，将平板翻转，移至36±1℃温箱内培养24±2小时(水产品用30℃培养48±2小时)，取出，按前述方式进行菌落计数，然后乘以5(由O．2m1换算为1m1)，再乘以样品稀释的倍数，即得每g或m1 检样所含菌落数。此法较上述倾注法为优，因菌落生长在表面，便于识别和检查其形态，虽检样中带有食品颗粒也不会发生混淆，同时还可使细菌不必遭受融化琼脂的热力，不致因此而使菌细胞受到损伤而不生长，从而可避免由于检验操作中的不良因素而使检样中细菌菌落数降低。但是本法取样量较倾注法为少(仅倾注法的五分之一)，代表性将受到一定的影响。 3、平板表面点滴法与涂布法相似。所不同者，只是用标定好的微量吸管或注射器针头按滴(使每滴相当于0．025mi)将检样稀释液滴加于琼脂平板上固定的区域(预先在平板背面用标记笔划成四个区域)，每个区域滴1滴，每个稀释度滴两个区域，作为平行试验。滴加后，将平板放平片刻(约5～10分钟)，然后翻转平板，如前移入温箱内培养6～8小时后进行计数，将所得菌落数乘以40(由o.025ml换算为1ml)，再乘以样品稀释的倍．数，即得每g 或ml检样所含菌落数。李兆普等利用此方法，与倾注法进行对比试验，经过六种食品，1536
养鸡场常用疫苗及使用方法 实施程序化免疫接种，是预防家禽疫病最有效、最关键的措施之一，对规模 化养鸡场来说，更应重视。每一个鸡场，都要有适合本场特点的免疫程序，一般在制订免疫程序时应考虑以下几方面的因素：当地家禽疾病的流行情况及严重程度；母源抗体的水平；上次免疫接种引起的残余抗体的水平；鸡的免疫应答能力；免疫的种类；免疫接种的方法；各种疫苗接种的配合；免疫对鸡健康及生产能力的影响等。以下是常用的疫苗及其使用方法。 H5N1高致病性禽流感疫苗目前，我国已经成功研制出用于预防H5N1高致病性禽流感的灭活疫苗，非疫区的养殖场应定期接种疫苗，以预防禽流感的发生。 使用高致病性禽流感灭活苗免疫时应注意：（1）首先应在家禽机体情况良好的情况下进行；（2）采用胸部肌肉接种，雏鸡注射剂量每只0.3毫升，成鸡每只0.5毫升；（3）在小日龄家禽作首次免疫时，应尽量避开母源抗体高峰期。 一般来说灭活疫苗注射后机体需14天才能产生免疫保护，疫苗的免疫期为4个月。在保证疫苗质量的前提下，疫苗须在2℃-8℃条件下保存；此外，免疫接种的时间、品种、母源抗体、接种途径及相应的综合防治措施是否到位，都对禽流感疫苗的免疫效果有决定性的影响。需要说明的是，如果在疫苗免疫保护力产生前已感染了禽流感病毒，尽管接种了疫苗，同样会发生禽流感。 鸡新城疫疫苗目前我国生产的鸡新城疫疫苗有I、II、III、IV等4个品系。I 系疫苗毒力较强，IV系疫苗（Lasota系）毒力次之，II系疫苗（B1系）毒力较弱，III系疫苗（F系）毒力最弱。II、III、IV系苗适用于雏鸡和成鸡，I系苗只供两个月以上的鸡使用，接种后虽然引起的反应比较重，然而免疫效力坚强，适合于疫病严重流行的地区使用。不过为安全起见，在使用I系苗之前，要先用II 或III系苗进行基础免疫。 近年来，我国已在推广使用鸡新城疫油乳剂灭活苗，其用法是：1日龄雏鸡用II系苗滴鼻、点眼或气雾免疫；到10日龄时，可皮下注射半剂量的油乳剂灭活苗；到120日龄上笼时，再注射1个剂量的油乳剂灭活苗。雏鸡在10~120日龄期间，如果体内抗体水平降至保护线以下时，还需进行1次IV系苗的气雾免疫。 鸡新城疫I系弱毒疫苗：适用于两个月以上幼鸡及成年鸡，又叫成鸡苗，对雏鸡反应大，不宜使用。应用时将疫苗用蒸馏水稀释100倍（冻干苗可按瓶签注明稀释，摇匀后使用）。接种时可用钢笔尖蘸取疫苗，在翅膀内侧无血管处刺种2~3次（约0.1毫升），或稀释1000倍肌肉注射1毫升。接种后3~4天即可产生免疫力，并能保持一年左右。 鸡新城疫II系弱毒疫苗：毒力比I系苗弱，多用于两个月以内的幼雏，对其他年龄的鸡（幼鸡、成鸡）亦可使用，常用滴鼻法或滴眼法接种。将疫苗稀释10倍每次给雏鸡滴入鼻孔或眼结膜内1~2滴（约0.03~0.04毫升）即可，接种后7~9天即可产生免疫力，效力可达3~5个月。接种本苗两个月后，再接种一次I 系疫苗，免疫力更佳。 将II系苗用蒸馏水稀释25~50倍，每毫升（克）疫苗可免疫80只雏鸡。喷雾时，将鸡舍门窗关紧，手持喷头均匀地喷雾。喷后让鸡群在舍内停留20~30分钟，然后再打开门窗。
鸡群的六种疫苗接种方法 接种疫苗是提高鸡体抵抗传染病的主要途径，也是当前生态养鸡生产中重要的卫生防疫措施。疫苗接种方法在生态养鸡过程中常用的疫苗接种方法有以下几种。 1、滴鼻、点眼免疫法 这是使疫苗从呼吸道进入体内的方法。新城疫、传染性支气管炎、法氏囊病等很多弱毒苗均采用此种方法。雏鸡应用此方法可避免疫苗被母源抗体中和，此法逐只接种，确实可靠，是较好的接种方法。其具体操作方法是：先将疫苗溶于稀释液或灭菌生理盐水中；使用标准滴管，将一滴溶液自1厘米高处，垂直滴进雏鸡眼睛或一侧鼻孔(用手按住另一侧鼻孔)，应确定疫苗溶液被吸入才能够放鸡。 2、浸喙法 可以用于各种弱毒活疫苗的接种。方法是按照疫苗使用说明进行稀释，稀释后的疫苗盛放在小碗内，把需要免疫的雏鸡用手抓住后，将其喙部浸入疫苗中(疫苗水要淹没雏鸡的鼻孔)，当雏鸡鼻孔处冒出气泡后将雏鸡放下。这种方法操作比较快，而且效果更可靠。 3、气雾免疫法 用专门的气雾枪或气雾器操作，使疫苗形成雾化粒子，均匀地浮游于空气中，随鸡的呼吸进入体内，达到免疫的效果。此方法省时省力，适用于群体免疫，特别是某些对呼吸道有亲嗜性的疫苗，如新城疫、传染性支气管炎等疫苗效果较好。 注意事项：疫苗必须于清凉而不含铁质或氯的清水中溶解，并在水中打开瓶盖，水的用量参见有关疫苗使用说明书。中农翎翔提醒您喷雾免疫前，关闭门窗和通风设备，气雾喷嘴朝上，将疫苗溶液均匀地喷向鸡群的头顶部，喷洒距离为30～40厘米，操作结束后约经20分钟打开门窗或风扇。最好在夜间免疫，如果白天进行则需要关上窗帘使舍内处于昏暗状态，昏暗条件下进行气雾免疫有助于保持鸡群的安静。当鸡群有潜在的慢性呼吸道病时，不能使用，以免激发该病。散养鸡群最好在晚上鸡群回到鸡舍后，关掉电灯并把鸡群相对集中在鸡舍内的某些区域，再进行此操作。 4、饮水免疫法 本方法对于大群鸡较适用，方便省力，还可避免因抓鸡而造成的应激因素的不良影响。但易造成免疫剂量不均一，免疫水平参差不齐，多能素，此外，饮水法产生的免疫力也较小，往往不能抵抗较强毒力毒株的侵袭。
微生物的培养方法 实验目的：学习掌握无菌操作技术；学习接种方法；学习常用的分离、纯化菌种的方法。 一、接种 将微生物接到适于它生长繁殖的人工培养基上或活的生物体内的过程叫做接种。 １、接种工具和方法 在实验室用得最多的接种工具是接种环、接种针。由于接种要求或方法的不同，接种针的针尖部常做成不同的形状，有刀形、耙形等之分。有时滴管、吸管也可作为接种工具进行液体接种。在固体培养基表面要将菌液均匀涂布时，需要用到涂布棒。（图1） 图1 接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 常用的接种方法有以下几种： １）划线接种这是最常用的接种方法。即在固体培养基表面作来回直线形的移动，就可达到接种的作用。常用的接种工具有接种环，接种针等。在斜面接种和平板划线中就常用此法。 ２）三点接种在研究霉菌形态时常用此法。此法即把少量的微生物接种在平板表面上，成等边三角形的三点，让它各自独立形成菌落后，来观察、研究它们的形态。除三点外，也有一点或多点进行接种的。 ３）穿刺接种在保藏厌氧菌种或研究微生物的动力时常采用此法。做穿刺接种时，用的接种工具是接种针。用的培养基一般是半固体培养基。它的做法是：用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。
４）浇混接种该法是将待接的微生物先放入培养皿中，然后再倒入冷却至45°C左右的固体培养基，迅速轻轻摇匀，这样菌液就达到稀释的目的。待平板凝固之后，置合适温度下培养，就可长出单个的微生物菌落。 ５）涂布接种与浇混接种略有不同，就是先倒好平板，让其凝固，然后再将菌液倒入平板上面，迅速用涂布棒在表面作来回左右的涂布，让菌液均匀分布，就可长出单个的微生物的菌落。 ６）液体接种从固体培养基中将菌洗下，倒入液体培养基中，或者从液体培养物中，用移液管将菌液接至液体培养基中，或从液体培养物中将菌液移至固体培养基中，都可称为液体接种。 ７）注射接种该法是用注射的方法将待接的微生物转接至活的生物体内，如人或其它动物中，常见的疫苗预防接种，就是用注射接种，接入人体，来预防某些疾病。 ８）活体接种活体接种是专门用于培养病毒或其它病原微生物的一种方法，因为病毒必须接种于活的生物体内才能生长繁殖。所用的活体可以是整个动物；也可以是某个离体活组织，例如猴肾等；也可以是发育的鸡胚。接种的方式是注射，也可以是拌料喂养。 ２、无菌操作 培养基经高压灭菌后，用经过灭菌的工具（如接种针和吸管等）在无菌条件下接种含菌材料（如样品、菌苔或菌悬液等）于培养基上，这个过程叫做无菌接种操作。在实验室检验中的各种接种必须是无菌操作。 实验台面不论是什么材料，一律要求光滑、水平。光滑是便于用消毒剂擦洗；水平是倒琼脂培养基时利于培养皿内平板的厚度保持一致。在实验台上方，空气流动应缓慢，杂菌应尽量减少，其周围杂菌也应越少越好。为此，必须清扫室内，关闭实验室的门窗，并用消毒剂进行空气消毒处理，尽可能地减少杂菌的数量。 空气中的杂菌在气流小的情况下，随着灰尘落下，所以接种时，打开培养皿的时间应尽量短。用于接种的器具必须经干热或火焰等灭菌。接种环的火焰灭菌方法：通常接种环在火焰上充分烧红（接种柄，一边转动一边慢慢地来回通过火焰三次），冷却，先接触一下培养基，待接种环冷却到室温后，方可用它来挑取含菌材料或菌体，迅速地接种到新的培养基上。（图2）然后，将接种环从柄部至环端逐渐通过火焰灭菌，复原。不要直接烧环，以免残留在接种环上的菌体爆溅而污染空间。平板接种时，通常把平板的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。在向培养皿内倒培养基或接种时，试管口或瓶壁外面不要接触底皿边，试管或瓶口应倾斜一下在火焰上通过。
常用的几种微生物接种方法 接种细菌应用接种针（环）来沾取细菌标本，进行接种。接种环与接种针为用白金丝或合金丝所制，亦可用电炉丝代替，因它能耐高热且散热快，便于接种前后通过火焰灭菌（整个接种环烧红即达到灭菌目的）。在使用接种环时一般用右手持笔式较为方便，左手可持培养基进行配合，其接种程序可分为：灭菌接种环→稍冷→沾取细菌样品→进行接种（包括：启盖或塞、接种划线、加盖或塞）→进行接种环灭菌等五个程序。不同培养基，接种方法也不同，分述如下： 一、平板划线接种法（分离培养法） 是将细菌分离培养的常用技术，其目的是将混有多种细菌的培养物，或标本中不同的细菌（病原菌与非病原菌）使其分散生长，形成单个菌落或分离出单一菌株，便于识别鉴定。平板划线接种方法较多，其中以分段划线法与曲线划线法较为常用。 （一）分段划线法 平板分段划线(左)及培养后菌落分布图 本法多用于含菌量较多的标本。方法是以接种环沾取少许样品先涂布于平板培养基表面一角作为第一段划线（划线时接种环与培养基表面呈45度角），然后将接种环置火焰上灭菌，俟冷（可接触平板试之，如不融化琼脂，即已冷却），于第二段处再作划线，且在开始划线时与第一段的划线相交接数次，以后划线不必再相接，待第二段划完时，再如上法灭菌，接种划线，依次划至最后一段，灭菌接种环。这样每一段划线内的细菌数逐渐减少，即以获得单个菌落，划线接种完毕，盖好平皿盖，倒置（平板底部向上）于37℃温箱中培养。 （二）连续划线法：此法多用于接种材料中含菌数量不太多的样品或培养物。方法是先将样品或培养物涂于平板表面的一角，然后用接种环自样品涂擦处开始，向左右两侧划开并逐渐向下移动，连续划成若干条分散的平等线。
微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤 微生物实验中的接种、分离和培养操作步骤 一、目的要求 1、掌握各种分离、接种方法。 2、掌握无菌操作基本环节。 二、实验说明 微生物在自然界中呈混杂状态存在，要获得所需菌种，必需从中把它们分离出来。在保存菌种时不慎受到到污染也需予以分纯。微生物分离和纯化的方法很多，但基本原理却是相似的，即将待分离的样品进行一定的稀释，并使微生物的细胞（或孢子）尽量以分散状态存在，然后使其长成一个个纯种单菌落。然而上述工作又离不开接种，即将一种微生物移到另一灭过菌的培养基上的过程。 三、实验材料 1、恒温培养箱。 2、接种环、玻璃棒、吸管、酒精灯。 3、培养基（上次实验配制的）。 4、大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、酵母菌。 四、方法步骤
（一）接种的操作 1、斜面接种（接金黄葡萄球菌） （1）操作前，先用75%酒精擦手，待酒精挥发后点燃酒精灯。 （2）将菌种管和斜面握在左手大姆指和其它四指之间，使斜面和有菌种的一面向上，并处于水平位置。 （3）先将菌种和斜面的棉塞旋转一下，以便接种时便于拔出。 （4）左手拿接种环（如握钢笔一样），以火焰上先将环端烧红灭菌，然后将有可能伸入试管其余部位也过火灭菌。 （5）用右手的无名指、小指和手掌将菌种管和待接斜面试管的棉花塞或试管帽同时拔出，然后让试管口缓缓过火灭菌（切勿烧过烫）。 （6）将灼烧过的接种环伸入菌种管内，接种环在试管内壁或未长菌苔的培养基上接触一下，让其充分冷却，然后轻轻刮取少许菌苔，再从菌种管内抽出接种环。 （7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。。 （7）迅速将沾有菌种的接种环伸入另一支待接斜面试管。从斜面底部向上作“Z”形来回密集划线。有时也可用接种针仅在培养基的中央拉一条线来作斜面接种，以便观察菌种的生长特点。 （8）接种完毕后抽出接种环灼烧管口，塞上棉塞。 （9）将接种环烧红灭菌。放下接种环，再将棉花塞旋紧。 2、液体接种
常用免疫接种方法及注意事项 一滴鼻、点眼、滴口免疫法 1 配兑稀释 分别开启盛有疫苗和稀释液或灭菌生理盐水的瓶子。为防止两瓶在空气中互相倾倒受污染或将疫苗洒落瓶外，一般用塑料接头连接再倾倒，然后轻轻旋转摇晃至疫苗完全溶解，将其移到滴瓶中或直接加上滴嘴。配兑溶液量根据滴瓶和滴管的大小差异而有变化，可根据1ml水有几滴来推算。由于活毒疫苗配后1小时活力即有较大降低，在2小时后或在高温育雏等环境下活力将大大降低，故应坚持现用现配原则，一般配制1小时内使用完的疫苗量。 2 滴瓶操作 五指分开捏着，将装有疫苗的滴瓶滴头朝上掌心向天，轻捏瓶身，挤出一部分空气，然后倒转过来，使滴头朝下掌心向地，即可开始接种。在操作过程中始终保持该姿势。若滴头自然滴液，可稍松手指让其吸回。 3 滴鼻点眼法 将一滴疫苗溶液自1cm高处，垂直滴入 一侧眼睛或鼻孔里，等疫苗扩散到整个角膜 或被吸入鼻孔后才可放鸡，否则滴入的疫苗 易被甩丢，影响免疫效果。若疫苗停在鼻孔 处，可按压对侧鼻孔，让其吸进。在接种过 程中，严禁攀比速度、马虎了事，若没有滴 中应补滴。禁止将滴头伸入眼结膜内滴液， 不仅易损伤结膜，而且滴液大小不一。 4 滴口法 鸡腹部朝天，食指托住头颈后部，大拇指轻按前面头颈处，待张口后在口腔上方1cm 处滴下1滴疫苗溶液。在滴口免疫前后24小时内停饮任何有消毒剂的水。 二翼翅刺种法 1 该方法多用于鸡痘接种，配有专用稀释液 用塑料接头对接后，溶解摇匀。为防被打翻，可将疫苗瓶放在木块或泡沫上的小孔中。拉开一侧翅膀，抹开翼翅上的绒毛，刺种者将蘸有疫苗的刺种针从翅膀内侧对准翼膜用力快速穿透，使针上的凹槽露出翼膜。 2 注意事项 每次剌种针蘸苗都要保证两凹槽能浸在疫苗液面以下，出瓶 时将针在瓶口擦一下，将多余疫苗擦去。在针刺过程中，要避免 针槽碰上羽毛以防疫苗溶液被擦去，也应避免刺伤骨头和血管。 为防止传播疾病，每剌种完一群鸡要更换刺种针。在接种后6～8 天，接种部位可见到或摸到1～2个谷粒大小的结节，中央有一干 痂。若反应灶大且有干酪样物，则表明有污染；若无反应出现， 则可能是由于：鸡群已有免疫力，或接种方法有误，疫苗保存运 输不当，曾受阳光暴晒或受热，以及疫苗本身质量问题。一般至 少应有2％的鸡只有局部红肿反应现象。 三颈部皮下注射法 本方法较多的是使用灭活苗。灭活苗在用前应使疫苗温度升至室温，并摇匀。注射器具严格消毒，剔除钝卷针头。一般使用18号针头，若针头孔径太小，会影响疫苗质量。针头长短根据接种鸡群个体大小而异。检查连续注射器密封性能，有无滴漏现象。
肉鸡常用哪些疫苗 1 马立克氏病疫苗：马立克氏病疫苗是世界上第一种有效的动物癌症疫苗，对防制马立克氏病起关键作用。有两种类型的弱毒疫苗，一种为病毒与细胞结合的疫苗如SB1苗、814苗，保存条件要求严格，需液氮保存；另一种为病毒脱离细胞的火鸡疱疹病毒疫苗（HVT），可以冻干，保存较易，使用广泛，但对超强毒马立克氏病毒（WMDV）的感染预防效果差。对于WMDV流行地区应使用2价苗或多价苗。 2 鸡新城疫疫苗：分灭活苗和活苗，活苗主要有Ⅰ系，Ⅱ系（B1株）、Ⅲ系（F系）、Ⅳ系（Lasota株）、克隆-30等。Ⅰ系为中等毒力疫苗对雏鸡毒力较强可出现症状甚至引起死亡，但能较快产生坚强免疫力，多用于2月龄以上的鸡或紧急预防接种。Ⅱ系、Ⅲ系、Ⅳ系、克隆-30为弱毒疫苗，其中克隆-30、Ⅳ系的效果好于Ⅱ系Ⅲ系。灭活苗多为油佐剂苗，效力可靠免疫期长，多用于种鸡和蛋鸡好的加强免疫。 3 传染性法氏囊病疫苗：可分为弱毒苗、中等毒力疫苗和灭活苗三类。弱毒苗安全性好但效力稍差，中等毒力疫苗效力稍好，主要用于法氏囊病严重地区。灭活苗效果好免疫期长主要用于种鸡、蛋鸡。还有法氏囊病卵黄抗体主要用于紧急预防接种及治疗。 4 鸡病毒性关节炎疫苗：有灭活苗和弱毒疫苗。灭活苗用于种鸡开产前接种，孵化后雏鸡获得母源抗体，可在3周龄内不感染。弱毒苗主要接种2周龄雏鸡。 5 传染性支气管炎疫苗：活苗有H120苗，用于雏鸡，H52苗毒力稍强，用于加强免疫。由于传染性支气管炎病毒血清型复杂，变异性较大，经常有新的血清型出现，所以可以选用当地流行毒株制造灭活苗或用多种毒株制造多价苗。 6 鸡痘鹌鹑化弱毒疫苗：6日龄以上雏鸡及育成鸡可应用。在鸡翅内无血管处刺种或皮下注射。 7 联苗：为了减少注射次数联苗的应用有增多的趋势。养鸡场可根据实际情况酌情选用。