２０１５年
海洋湖沼通报
Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｏｃｅａｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｌｉｍｎｏｌｏｇｙ
№１芽孢杆菌不同使用方式对刺参生长、消化
和免疫防御因子的影响＊
赵 坤，田相利＊，董双林，李 杰，王文君
（中国海洋大学海水养殖教育部重点实验室，山东青岛２６６００３）
摘 要：研究了１株芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ，ＢＣ－０２）不同使用方式（活菌、灭活菌和芽孢）对刺参
（Ａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）生长、消化和非特异性免疫相关酶活性的影响。实验分低、中、高３个添加梯
度，其芽孢杆菌的添加量分别为１０７、１０９和１０１１ｃｆｕ·ｋｇ－１（以活菌量计），以投喂基础饲料组作为对照，
实验时间为５８ｄ。结果表明：添加中浓度和高浓度的活菌和芽孢粉，不仅能促进刺参生长，还能显著的
提高刺参肠道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶的活性，刺参体腔液中的ＡＫＰ、ＡＣＰ、Ｔ－ＳＯＤ以及ＬＳＺ活性也
显著提高（Ｐ＜０．０５），而添加灭活后的芽孢杆菌，对刺参的促生长作用不大，在刺参消化酶和体腔液非特
异性免疫相关酶活性方面的作用也不及活菌和芽孢粉状态显著，因此综合比较表明，芽孢杆菌ＢＣ－０２
对刺参的适宜使用方式为活菌和芽孢，适宜浓度为（１０９－１０１１）ｃｆｕ·ｋｇ－１，可以有效提高刺参的生长、消
化酶活性和非特异免疫力。
关键词：芽孢杆菌；生长；消化酶；非特异性免疫酶；刺参
中图分类号：Ｓ９１７ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００３－６４８２（２０１５）０１－０６３－１０
引言
刺参（Ａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ）隶属于棘皮动物门（Ｅｃｈｉｎｏｄｅｒｍａｔａ）、海参纲（Ｈｏｌｏｔｈｒｏｉｄｅａ），具有较高的营养与药用价值，因此近年来在我国刺参养殖业得到迅猛发展［１－２］。养殖集约化程度越来越高，病害频发，严重制约了刺参养殖产业的可持续发展［３］。传统的疾病防治以抗生素为主，过度使用抗生素会导致耐药菌株产生，干扰和破坏养殖环境的正常生物区系，致使生态失调，此外人类长期摄入含有残留抗生素的食品会导致慢性中毒，危害人体健康［４］。近年来，益生菌在水产养殖中的意应用越来越多。益生菌能够抑制病原微生物，从而减少疾病的发生；益生菌可以作为饲料添加剂，补充营养成分，改善养殖动物胃肠道有益菌群。通过在水产养殖中使用益生菌进行生态防治，有利于促进水产养殖业的健康持续发展［５－７］。
水产养殖中有关益生菌的研究最初集中在幼鱼，目前多集中在鱼、虾、贝、甲壳类、活饵料生物等［８－９］。有关益生菌在刺参养殖中的应用也进行了较多相关研究［１０－１２］。已有研究表明，在刺参饲料中添加益生菌可以促进刺参生长，并提高相关消化酶和非特异性免疫酶的活性［１３］。而关于益生菌对养殖刺参影响作用机理却鲜见报道。本文通过在饲料中添加益生菌的方式，研究了一株从刺参养殖环境中分离纯化的芽孢杆菌在３种不同的使用方式下对刺参生长以及消化和非特异性免疫防御因子的影响，以期为该潜在益生菌在刺参养殖中的合理使用和相关作用机制的研究提供理论基础。
＊基金项目：国家“十二五”科技支撑计划项目（２０１１ＢＡＤ１３Ｂ０３）和山东省杰出青年基金项目（ＪＱ２０１００９）资助第一作者简介：赵 坤（１９８８－），女，硕士生，从事水产养殖生态学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｋｕｎｑｉｎｇｄａｏ＠１６３．ｃｏｍ
＊通讯作者：田相利（１９７１－），男，教授，从事养殖生态学研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｘｉａｎｇｌｉｔｉａｎ＠ｏｕｃ．ｅｄｕ．ｃｎ
收稿日期：２０１４－０１－２７
DOI:10.13984/https://www.doczj.com/doc/9995803.html,37-1141.2015.01.009
６４
海 洋 湖 沼 通 报２ ０ １ ５年１ 材料和方法
１．１ 实验材料
１．１．１ 不同状态蜡样芽孢杆菌
本研究中使用的蜡样芽孢杆菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ．Ｃｅｒｅｕｓ）命名为菌株ＢＣ－０２，来自本实验室保种室，分离和筛选自刺参养殖池塘。实验所用蜡样芽胞杆菌分为３种状态，分别是活菌、灭活菌以及芽孢。活菌状态活菌浓度为１０１１ｃｆｕ·ｍＬ－１；采用甲醛灭菌法［１４］制得灭活菌，灭活菌浓度为１０１１ｃｆｕ·ｍＬ－１；芽孢由青岛根源生物集团有限公司提供，浓度为３×１０１１ｃｆｕ·ｋｇ－１。
１．１．２ 刺 参
所用刺参于２０１２年５月购自山东省青岛胶南市慧和海珍品基地，运回后置于玻璃钢水槽（规格为２００ｃｍ×５０ｃｍ×８０ｃｍ）中驯化１５ｄ左右。在驯化过程中，水温控制在（１７±１）℃，盐度控制在３０．０±０．１，日换水１次，每天换水量约为１／３～１／２，全天充气。每天投喂人工配合饲料１次，并及时清除残饵粪便。驯化结束后，挑选大小、重量相似的健康刺参用于实验，刺参的初始体质量为（５．０±０．２５）ｇ。
１．１．３ 实验饲料
实验饲料以马尾藻、鱼粉和海泥为原料，按重量比例６．５：１：２．５制成，呈粉末状［１３］。
１．２ 实验设计与管理
１．２．１ 芽孢杆菌添加浓度
实验中，所用３种状态的芽孢杆菌分低（１０７ｃｆｕ·ｋｇ－１）、中（１０９ ｃｆｕ·ｋｇ－１）、高（１０１１ｃｆｕ·ｋｇ－１）３个浓度梯度添加到刺参饵料中，通过拌饵投喂的方式使用。
１．２．２ 实验管理
养殖实验在室内水族箱中进行，水族箱的体积为６０Ｌ左右（５３ｃｍ×２８ｃｍ×３４ｃｍ）。以投喂基础饲料组作为对照。每个处理组分别设置了５个重复，每个重复随机放养１０头规格相似的刺参。
实验期间，每天按照刺参体重的１０％投喂刺参人工配合饲料１次，添加益生菌的饲料每天现拌现用。养殖过程中根据刺参的吃食情况适当调整用量，以饱食为准，及时清除残饵和粪便，全天充气，以上各处理组每隔７ｄ全量换水１次。整个养殖过程中，水温维持在（１７±１）℃，盐度维持在３０．０±０．１。实验共持续了５８ｄ。
１．３ 菌株消化酶活性检测
菌株淀粉酶、蛋白酶以及脂肪酶活性检测。淀粉酶测定采用ＳＬＢ培养基［１５］，将细菌在（２８±１）℃点种培养４８ｈ后用稀碘液显色测量水解圈直径大小；蛋白酶活力测定采用酪素培养基［１５］，将细菌在（２８±１）℃点种培养４８ｈ后用三氯乙酸显色测量水解圈直径大小；脂肪酶活性测定采用平板法［１６］，将细菌在（２８±１）℃经含三丁酸甘油脂的平板培养４８ｈ后用罗丹明Ｂ或者维多利亚蓝显色测量水解圈直径大小。水解圈直径与菌落直径的比值表示相应酶活力的大小。
１．４ 生长指标测定
实验结束后，对所有刺参个体进行称重，计算刺参特定生长率。
刺参的特定生长率（ＳＧＲ）根据以下公式计算：
ＳＧＲ（％·ｄ－１）＝１００×（ｌｎＤＷ２－ｌｎＤＷ１）／Ｔ
ＤＷ１：刺参的初始干重；ＤＷ２：刺参的终末干重；Ｔ：养殖天数［１７］。
１．５ 肠道消化酶和体腔液免疫酶活性的测定
１．５．１ 样品的采集
实验结束时，分别从每个处理组中随机选取１０头刺参，于冰盒上剖开刺参，取其肠道、体壁以及体腔液分别置于１．５ｍＬ和５ｍＬ离心管中，迅速放入液氮中冷冻，之后置于超低温冰箱（－８０℃）保存备用。１．５．２ 样品处理
测定时，取（０．０５～０．２）ｇ肠道样品，剪碎后加入４倍体积的冰冷生理盐水（０．８６％），制成２０％匀浆
１期芽孢杆菌不同使用方式对刺参生长、消化和免疫防御因子的影响６５液。将匀浆液在４℃、３ ０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心１５ｍｉｎ，取出上清液分装待测。体腔液样品测定前置于冰上解冻，之后在４℃、３ ０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心１５ｍｉｎ，取出上清液分装待测。体腔液样品测定前先置于冰上解冻，之后在４℃、３ ０００ｒ／ｍｉｎ条件下离心１５ｍｉｎ，取上清液分装待测［１３］。
１．５．３ 消化酶活性测定
选取肠道淀粉酶（ＡＭＳ）、蛋白酶（Ｐｒｏｔｅａｓｅ）以及脂肪酶（ＬＰＳ）作为评价指标。肠道淀粉酶活性单位定义为每克组织蛋白在３７℃条件下与底物作用３０ｍｉｎ，水解１０ｍｇ淀粉为１个活性单位；肠道蛋白酶活性单位定义为每毫克蛋白中含有的蛋白酶每分钟使吸光度变化０．００３为１个酶活力单位，用Ｕ／ｍｇｐｒｏｔ表示；肠道脂肪酶活性单位定义为每克组织在指定反应体系中与底物反应１ｍｉｎ，每消耗１ｕｍｏＬ底物为１个酶活力单位，用Ｕ／ｇｐｒｏｔ表示。
蛋白酶（Ｐｒｏｔｅａｓｅ）、脂肪酶（ＬＰＳ）以及淀粉酶（ＡＭＳ）活性，分别采用蛋白酶测定试剂盒、淀粉酶测定试剂盒和脂肪酶测定试剂盒测定（南京建成生物工程研究所），具体测定方法参照产品说明书。１．５．４ 非特异性免疫酶活性测定
免疫酶选取４个指标作为评价标准：超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）和碱性磷酸酶（ＡＫＰ）以及溶菌酶（ＬＳＺ）。体腔液ＳＯＤ酶活性单位定义为每毫升反应液中ＳＯＤ抑制率达到５０％时所对应的ＳＯＤ量为１个酶活性单位，以Ｕ／ｍＬ表示；体腔液ＡＣＰ酶活性单位定义为每１００ｍＬ样品在３７℃与基质作用３０ｍｉｎ产生１ｍｇ酚为１个活性单位，以Ｕ／ｍＬ表示；体腔液ＡＫＰ酶活性单位定义为每１００ｍＬ样品在３７℃与基质作用１５ｍｉｎ产生１ｍｇ酚为１个活性单位，以Ｕ／ｍＬ表示。
超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）和溶菌酶（ＬＳＺ）活性测定分别使用超氧化物歧化酶测定试剂盒、酸性磷酸酶测定试剂盒、碱性磷酸酶测定试剂盒和溶菌酶测定试剂盒（南京建成生物工程研究所），具体测定方法参照产品说明书。
１．６ 数据处理与分析
数据统计分析采用ＳＰＳＳ１７．０软件进行，数据结果以平均值±标准误（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｅ．）表示。在数据分析前，百分率数据先进行反正弦转换，各处理之间的差异采用单因子方差分析（Ｏｎｅ－Ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）和Ｄｕｎｃａｎ多重比较法进行，以Ｐ＜０．０５作为差异显著水平。
２ 结 果
２．１ 菌株消化酶活性测定结果
通过菌株消化酶活性检测，根据水解圈的有无及大小比较，结果表明，菌株ＢＣ－０２没有淀粉酶和脂肪酶活性，仅存在较弱的蛋白酶活性，水解圈直径与菌落直径比仅为１．３０±０．５０。
２．２ 菌株对刺参生长的影响
实验结束时不同处理组刺参末体重情况见图１。可以看出，菌株ＢＣ－０２以不同形式添加到饲料中，对刺参生长具有不同影响。其中，活菌处理在中浓度和高浓度时刺参体重显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），而灭活菌处理在３种添加浓度下刺参体重影响不显著（Ｐ＞０．０５），对于芽孢处理则在在３种添加浓度下均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。
各处理特定生长率（ＳＧＲ）情况见图２。可以看出，添加不同的状态的芽孢杆菌ＢＣ－０２对于刺参特定生长率的影响有所不同。对于活菌和芽孢，中浓度和高浓度对刺参生长具有显著的促进作用（Ｐ＜０．０５），但灭活菌的添加对刺参影响不大（Ｐ＞０．０５）。
综合比较，在刺参饲料中添加适量浓度的菌株ＢＣ－０２活菌和芽孢，对刺参具有显著的促生长作用，但灭活菌对刺参的生长影响不大。
６６ 海 洋 湖 沼 通 报２ ０ １
５
年图１ 不同处理组刺参的末重量（不同字母表示差异显著Ｐ＜０．０５）Ｆｉｇ．１ Ｆｉｎａｌ ｗｅｉｇｈｔｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓ ｉｎｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐ
ｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ
）图２ 不同处理组刺参的特定生长率（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５
）Ｆｉｇ．２ Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅｓ（ＳＧＲ）ｏｆ Ａ．ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐ
ｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ）２．３ 菌株对刺参肠道消化酶活性的影响
本研究选取了刺参肠道中的蛋白酶、淀粉酶和脂肪酶作为消化酶检测指标，测定了芽孢杆菌３种不同使用方式下对刺参消化酶活性的影响，具体结果如下：
２．３．
１ 菌株对刺参肠道蛋白酶活性的影响实验结束时，不同处理组刺参蛋白酶活性见图３。可以看出，菌株ＢＣ－０２不同使用方式对刺参肠道蛋白酶的影响变化规律与刺参生长基本一致，其中活菌和芽孢添加组中，添加中浓度和高浓度处理组蛋白酶活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。而ＢＣ－０２菌株灭活菌处理组的蛋白酶活性与对照组差异不显著
（Ｐ＞０．０５
）
。图３ 不同处理组刺参的蛋白酶活性（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５）Ｆｉｇ．３ Ｐｒｏｔｅａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐ
ｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ
）图４ 不同处理组刺参的脂肪酶活性（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５）Ｆｉｇ．４ Ｌｉｐａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐ
ｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ）２．３．２ 菌株对刺参肠道脂肪酶活性的影响
肠道脂肪酶活性变化趋势与蛋白酶变化趋势基本一致（见图４），其中使用菌株ＢＣ－０２活菌处理组ＬＰＳ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；菌株ＢＣ－０２芽孢添加组中，添加中浓度和高浓度处理组ＬＰＳ
活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；使用ＢＣ－０２菌株灭活菌实验组中，添加中浓度处理组ＬＰＳ活性显著
１期芽孢杆菌不同使用方式对刺参生长、消化和免疫防御因子的影响６７
高于对照组（Ｐ＜０．０５），其余添加浓度ＬＰＳ活性与对照组差异不显著（
Ｐ＞０．０５）。２．３．３ 菌株对刺参肠道淀粉酶活性的影响
刺参肠道淀粉酶活性见图５。使用菌株ＢＣ－０２活菌处理组中，３种添加浓度的ＡＭＳ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；使用菌株ＢＣ－０２灭活菌处理组中，３种添加浓度的ＡＭＳ活性与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）；使用菌株ＢＣ－０２芽孢处理组中，添加中浓度和高浓度处理组ＡＭＳ活性显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），但低浓度处理组的ＡＭＳ活性与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５
）
。图５ 不同处理组刺参的淀粉酶活性（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５）Ｆｉｇ．５ Ａｍｙｌａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐ
ｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ
）图６ 不同处理组刺参的超氧化物歧化酶活性
（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０
５）Ｆｉｇ．６ Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐ
ｏｎｉｃｕｓｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇ
ｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐ
ｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ
ｍｅａｎｓ）２．４ 菌株对刺参免疫防御因子的影响
本研究选取了刺参肠道体腔液中的超氧化物歧化酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶和溶菌酶作为免疫防御因子的检测指标，测定了芽孢杆菌３种不同使用方式下对刺参免疫防御因子的影响，具体结果如下：２．４．
１ 菌株对刺参体腔液超氧化物歧化酶活性的影响刺参体腔液超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）活性见图６。可以看出，菌株ＢＣ－０２的３种不同状态均对刺参体腔液的ＳＯＤ活性有影响，其中活菌和芽孢处理组变化规律一致，３种添加浓度的实验处理组的ＳＯＤ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；使用灭活菌处理组中，添加中浓度和高浓度处理组ＳＯＤ活性显著高于
对照组（Ｐ＜０．０５），使用低浓度处理组的ＳＯＤ活性与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。２．４．２ 菌株对刺参体腔液酸性磷酸酶活性的影响
刺参体腔液酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活性见图７。可以看出，菌株ＢＣ－０２的３种不同状态均对刺参体腔液的ＡＣＰ活性有影响，其中活菌和芽孢处理组变化规律一致，３种添加浓度的实验处理组的ＡＣＰ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；使用灭活菌处理组中，３种添加浓度的处理组的ＡＣＰ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），但３种不同添加浓度处理组间不存在显著差异（Ｐ＞０．０５
）。２．４．３ 菌株对刺参体腔液碱性磷酸酶活性的影响刺参体腔液碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活性见图８。由图可见，菌株ＢＣ－０２的３种不同状态均对刺参体腔液的ＡＫＰ活性有影响，其中活菌和芽孢处理组变化规律一致，３种添加浓度的实验处理组的ＡＫＰ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；使用灭活菌处理组中，添加高浓度处理组的ＡＫＰ活性显著高于对照组（Ｐ＜０．
０５），使用低浓度和中浓度处理组的ＡＫＰ活性与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。
６８
海 洋 湖 沼 通 报２ ０ １ ５
年
图７ 不同处理组刺参的酸性磷酸酶活性（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５）
Ｆｉｇ．７ ＡＣＰ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ
）
图８ 不同处理组刺参的碱性磷酸酶活性（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５）
Ｆｉｇ．８ ＡＫＰ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ
）
图９ 不同处理组刺参的溶菌酶活性
（字母不同表示差异显著Ｐ＜０．０５）
Ｆｉｇ．９ Ｌｙｓｏｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ（Ｐ＜０．０５）ａｎｄ ｂａｒｓ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔａｎｄａｒｄ
ｅｒｒｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ ｍｅａｎｓ）
２．４．４ 菌株对刺参体腔液溶菌酶活性的影响
刺参体腔液溶菌酶（ＬＺＭ）活性见图９。由图可
见，菌株ＢＣ－０２的３种不同状态均对刺参体腔液的
溶菌酶活性有影响。其中，活菌和芽孢处理组３种
添加浓度的实验处理组的ＬＺＭ活性均显著高于对
照组（Ｐ＜０．０５）；灭活菌处理组中，添加中浓度和高
浓度处理组的ＬＺＭ活性显著高于对照组（Ｐ＜
０．０５），ＬＺＭ在中浓度灭活菌处理中活性要显著高
于其它灭活菌处理，但低浓度处理组ＬＺＭ活性与对
照组差异不显著（Ｐ＞０．０５）。
３ 讨 论
３．１ 芽孢杆菌３种不同使用方式对刺参生长和肠
道消化酶活性的影响
Ｐａｒｋｅｒ于１９７４年第一次将益生菌定义为有助
于肠道菌群平衡的微生物和物质［１８］，此后有关益生
菌的定义经Ｆｕｌｌｅｒ［１９］、Ｔａｏｎｏｃｋ［２０］等人不断进行修正和完善，最终由Ｍｏｒｉａｔｙ［２１］将益生菌的含义扩展到添加到养殖水体中的有益微生物。Ｋｏｚａｓａ首次将１株分离自土壤的芽孢杆菌用于处理日本鳗鲡（Ａｎ－ｇｕｉｌｌａ ｊａｐｏｎｉｃａ）病害，成功降低了由爱德华氏菌（Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ）侵染引起的鳗苗死亡［２２］，此后，益生菌在水产养殖中的应用研究得到迅速发展。目前，芽孢杆菌作为１种常用益生菌，在水产动物中的应用已经得到广泛的研究与应用［２３］。
一般认为，芽孢杆菌具有较高的脂肪酶、蛋白酶和淀粉酶活性，对植物碳水化合物具有较强的降解作用，能够明显改善机体内菌群组成和提高机体对营养物质的消化吸收，促进养殖动物的生长［２４］。然而分离自不同的环境的菌株对不同的养殖生物的作用也不尽相同。本研究所用的芽孢杆菌ＢＣ－０２分离自刺参养殖池塘，其胞外酶仅具有较弱的蛋白酶活性。从其对刺参生长的影响看，使用活菌和活菌和芽孢的处理组，刺参生长和ＳＧＲ均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），而灭活菌处理组的刺参生长则与对照组差异
１期芽孢杆菌不同使用方式对刺参生长、消化和免疫防御因子的影响６９不显著（Ｐ＞０．０５）。由此可见，芽孢杆菌的添加形式对于其对生长的影响较大，对于本研究所用芽孢杆菌来说，灭活状态的菌体对刺参的促长的效果不明显。
消化酶的活性是反映水产动物消化生理机能的１项重要指标，消化酶活性的高低决定着水产动物对营养物质的消化吸收能力，从而影对水产动物的生长速度产生一定的影响［２５］。水生动物对营养物质的消化吸收主要在消化道内通过利用消化酶进行的，因而消化酶活性的高低可以作为衡量养殖生物消化水平高低的重要指标之一［２６］。袁成玉等［２７］认为，刺参生长与消化酶活性之间有一定的正向关系，高的消化酶活性可以提高刺参对饵料中营养成分的吸收，从而促进其生长。
在本研究中，使用芽孢杆菌ＢＣ－０２的活菌和芽孢处理组中，中浓度和高浓度处理组的刺参特定生长率（ＳＧＲ）显著高于对照，其肠道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活性也均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），这一结果与袁成玉等［２７］研究相似。在实验研究中灭活菌处理组的刺参肠道蛋白酶和淀粉酶则与对照组差异不显著（Ｐ＞０．０５），仅添加中浓度的处理组中脂肪酶活性高于对照组，研究结果也显示了灭活菌实验组对刺参的促生长作用不显著，整个养殖周期中刺参终末体重以及ＳＧＲ与对照均差异不显著（Ｐ＞０．０５），由此可见刺参肠道消化酶活性的提高对刺参生长具有一定的作用。同时胡毅［２８］和Ｐａｎ等［２９］的研究也证实了在饲料中添加一定剂量的芽孢杆菌，可以不同程度的提高养殖动物的消化酶活性，从而促进养殖动物的生长。上述研究均表明，饲料中适量添加益生菌可以不同程度的提高水产动物消化酶活性，提高饲料利用率，促进生长。
但是现有研究还发现，有益菌在动物消化道内的繁殖代谢可产生动物生长所必需的一些营养物质，有的还能产生淀粉酶、脂肪酶和蛋白酶等多种消化酶类帮助消化，从而提高饵料效率［３０］。同时，在刺参饲料中添加芽孢杆菌制剂可导致刺参肠道中某些细菌群的丰度发生改变，其它细菌群落也会受其影响而改变，进而可能影响到养殖对象的健康生长［３１］。本研究中使用活菌和芽孢粉处理组，刺参肠道消化酶活性显著提高，有效的促进了刺参的生长，而灭活菌处理组不仅对刺参生长没有促进作用，其在肠道消化酶活性提高方面的作用也不显著，由此推测，本研究中以活菌和芽孢形式添加的芽孢杆菌通过刺参摄食后，可能通过定植于刺参肠道，进一步导致刺参肠道细菌菌群改变，从而促进刺参的摄食和食物转化，最终促进刺参的生长，但具体机制尚待进一步研究。
综合３种消化酶与生长关系可见，使用浓度为（１０９～１０１１）ｃｆｕ·ｋｇ－１芽孢杆菌ＢＣ－０２活菌和芽孢对刺参的生长和消化酶有显著的促进作用。
３．２ 芽孢杆菌３种不同使用方式对刺参体免疫防御因子的影响
棘皮动物不存在特异性免疫机制，其免疫反应是体腔细胞和一系列体液因子共同参与的结果［３４］。刺参非特异性免疫酶活性防御体系包括体壁防御和体内免疫，体内免疫又分为细胞免疫和体液免疫［３５］。刺参的体腔液担任着多种功能，其最主要的功能是参与免疫防御［３６］。刺参体腔液中存在多种体液免疫因子，它们能够对外来物质进行识别和攻击。目前，相关研究涉及的刺参非特异性免疫酶种类主要包括酸性磷酸酶、碱性磷酸酶、溶菌活力、超氧化物歧化酶、过氧化物酶（ＰＯＤ）以及酚氧化酶（ＰＯ）等［３７］，不同的研究者选用的指标也有所差异。ＡＣＰ和ＡＫＰ是溶酶体酶的重要组成部分，其中ＡＣＰ是溶酶体酶的标志酶。ＡＣＰ和ＡＫＰ在体内直接参与磷酸基团的转移和代谢，并与一些营养物质的消化和吸收有关［３８］。ＡＫＰ和ＡＣＰ是刺参体内重要的水解酶，在刺参免疫反应、细胞损伤与修复以及免疫反应中发挥重要功能。超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）是１种重要的抗氧化酶，ＳＯＤ的活性与生物的免疫水平密切相关［３９］。溶菌酶广泛存在于脊椎动物、无脊椎动物、细菌及植物体内，它是非特异性免疫的重要组成部分［４３］，可使细菌细胞裂解并可能刺激机体吞噬细胞的吞噬作用。本研究中，使用活菌和芽孢粉实验组中，刺参体腔液中的超氧化物歧化酶（Ｔ－ＳＯＤ）、酸性磷酸酶（ＡＣＰ）、碱性磷酸酶（ＡＫＰ）以及溶菌酶（ＬＺＭ）活性均显著高于对照组，提高了免疫防御因子的活性，有助于刺参免疫力的增强。
研究表明，芽孢杆菌进入水产动物肠道后，能刺激机体的免疫防御系统，从而增强机体的非特异性免疫力［４０］。胡毅等［２８］比较了单一和复合芽孢杆菌制剂投喂凡纳滨对虾（Ｌｉｔｏｐｅｎａｅｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ）非特异性免疫力的影响，表明试验组均不同程度提高了对虾的血清蛋白浓度、酚氧化酶活力、溶菌酶活力和总抗氧
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海 洋 湖 沼 通 报２ ０ １ ５年化力。周慧慧等［４１］从刺参肠道筛选了２株芽孢杆菌，可显著提高稚参组织中酚氧化酶、溶菌酶、酸性磷酸酶和超氧化物歧化酶活性。王军等［１３］也报道了１株芽孢杆菌在适宜的添加量下可有效提高刺参的非特异性免疫力。本研究研究结果显示，在刺参饲料中添加活菌和芽孢粉状态的芽孢杆菌ＢＣ－０２可以显著提高刺参的Ｔ－ＳＯＤ、ＡＣＰ、ＡＫＰ以及ＬＺＭ活性，可见，该芽孢杆菌在提高刺参免疫力方面具有一定的潜在价值。
关于益生菌的不同状态对水产养殖动物免疫力影响的比较研究目前报道还较少见。Ｄｉａｚ－Ｒｏ－ｓａｌｅｓ［４２］等和Ｓａｌｉｎａｓ［４３］等分别在体内和体外实验中发现分离自鲷体表的２种热灭活弧菌（Ｖｉｂｒｉｏｎａｃｅａｅ）可以促进金头鲷（Ｇｉｌｔｈｅａｄ ｂｒｅａｍ）的先天性免疫反应。Ｉｒｉａｎｔｏ和Ａｕｓｔｉｎ［４４］在虹鳟（Ｒａｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ）养殖中使用福尔马林灭活的嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ）等益生菌，不仅鱼体白细胞数目等细胞免疫指标高于活菌处理试验，而且其抵御病原菌感染的能力也高于对照组。芽孢杆菌是水产益生菌中使用最广泛的微生物之一，多数产品以芽孢形态存在，但也有液态活菌产品。而在部分固体发酵产品中，经后处理后，则基本为灭活菌。本研究对表明，芽孢杆菌ＢＣ－０２的３种不同使用方式对刺参免疫指标影响有所差异。在中浓度和高浓度添加处理组中，刺参体腔液的ＳＯＤ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）；各处理组刺参体腔液ＡＣＰ活性均显著高于对照组（Ｐ＜０．０５），但灭活菌处理ＡＫＰ活性仅在高添加浓度下高于对照组（Ｐ＜０．０５）；在中浓度和高浓度处理，３种状态芽孢杆菌均能有效提高体腔液ＬＺＭ活性（Ｐ＜０．０５）。由此可以看出，不论是在活菌、芽孢，还是灭活菌状态下，一定添加量的菌株ＢＣ－０２均能有效提高刺参体腔液中刺参相关免疫酶活性，而灭活菌状态下，芽孢杆菌的添加量则需适当提高。
３．４ 结 论
本研究表明，在刺参饲料中以不同的方式添加不同浓度的芽孢杆菌ＢＣ－０２对刺参的生长、消化以及免疫防御因子的影响存在一定差异。在本研究设置的添加量范围下，活菌和芽孢对刺参生长、消化酶和免疫酶活性影响总体上相似；灭活菌对刺参生长影响不大，对肠道脂肪酶活性具有一定的影响，不同添加量对刺参免疫影响不同，对体腔液免疫酶活性产生影响剂量相对高于活菌和芽孢。综合比较表明，芽孢杆菌ＢＣ－０２对刺参的适宜使用方式为活菌和芽孢，适宜浓度为（１０９～１０１１）ｃｆｕ·ｋｇ－１，可以有效提高刺参的生长、消化酶活性和非特异免疫力。
参考文献
［１］ 常亚青，隋锡林，李俊．刺参增养殖业现状，存在问题与展望［Ｊ］．水产科学，２００６，２５（４）：１９８－２０１．
［２］ 马悦欣，徐高蓉，张恩鹏，等．仿刺参幼参急性口围肿胀症的细菌性病原［Ｊ］．水产学报，２００６，３０（３）：３７７－３８２．
［３］ 刘朝阳，孙晓庆，范士亮．有益微生物在刺参养殖中的综合应用［Ｊ］．中国水产，２００６，７：５８－５９．
［４］ 孙德文，詹勇，许梓荣．微生态制剂在水产养殖中的应用［Ｊ］．淡水渔业，２００２，３２（３）：５４－５７．
［５］ Ｖｅｒｓｃｈｕｅｒｅ，Ｌ．，Ｇ．Ｒｏｍｂａｕｔ，Ｐ．Ｓｏｒｇｅｌｏｏｓ，ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｓ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｏｍｔｒｏｌ ａｇｅｎｔｓ ｉｎ ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｒｅｖｉｅｗｓ，２０００，６４（４）６５５－６７１．
［６］ Ｉｒｉａｎｔｏ，Ａ．，ａｎｄ Ｂ．Ａｕｓｔｉｎ，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｉｓｈ Ｄｉｓｅａｓｅ，２００２，２５（１１）６３３－６４２．
［７］ 祁真，杨京平．几种微生物制剂和微藻在水产养殖中的应用［Ｊ］．水生生物学报，２００４，２８（１）：８５－８９．
［８］ 郭文婷，李健，王群，等．微生态制剂对牙鲆非特异性免疫因子影响的研究［Ｊ］．海洋科学进展，２００６，１（２４）：５１－５８．
［９］ Ｍｉｌａｎｅｓｅ，Ｍ．，Ｅ．Ｃｈｅｌｏｓｓｉ，ａｎｄ Ｒ．Ｍａｎｃｏｎｉ，Ｔｈｅ ｍａｒｉｎｅ Ｓｐｏｎｇｅ Ｃｈｏｎｄｒｉｌｌａ ｎｕｃｕｌａ Ｓｃｈｍｉｄｔ，１８６２ａｓ ａｎ ｅｌｅｃｔｉｖｅ ｃａｎｄｉｄａｔｅ ｆｏｒ ｂｉｏｒｅ－ｍｅｄｉａｔｉｏｎ ｉｎ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ［Ｊ］．Ｂｉｏｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，２００３，２０（６）３６３－３６８．
［１０］ 王路平，吴垠，班红琴，等．微生态制剂对刺参幼参在封闭式循环养殖系统中的应用研究［Ｊ］．中国微生态学杂志，２００９，２１（６）：４９７－４９９．
［１１］ 付鑫，吴垠，苏显屹，等．添加微生态制剂及投饲模式对幼刺参生长的影响［Ｊ］．水产科学，２０１１，３０（１２）：７３９－７４３．
［１２］ 李成林，胡炜，宋爱环，等．微生态制剂在刺参养殖中的应用与展望［Ｊ］．齐鲁渔业，２００８，２５（８）：１１－１１．
［１３］ 王军，田相利，董双林，等．一株芽孢杆菌对刺参生长以及消化和非特异性免疫相关酶活性的影响［Ｊ］．中国海洋大学学报（自然科学版），２０１２，４２（６）：３１０－３１６．
［１４］ 秀静，王玉琼．种常用低温灭菌方法研究现状［Ｊ］．护理研究，２００６，２０（６）：１４２５－１４２７．
［１５］ 郭谢航，邱宏瑞，王秀彬，等．地衣芽孢杆菌降解水产养殖中残余饵料的特性研究［Ｊ］．福建水产，２００８，１１８（３）：３１－２５．
［１６］ 裴素蕊．刺参个体生长差异的影响因素及其调节机制［Ｄ］．青岛：中国海洋大学，２０１２．
１期芽孢杆菌不同使用方式对刺参生长、消化和免疫防御因子的影响７１［１７］ Ｓｏｇａｒｒｄ，Ｄ．Ｈ．，ａｎｄ Ｔ．Ｓ．Ｄｅｎｍａｒｋ，Ｍｉｃｒｏｂｉａｌｓ ｆｏｒ ｆｅｅｄ ｂｅｙｏｎｄ ｌａｃｔｉｃ ａｃｉｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ［Ｊ］．Ｆｅｅｄ Ｉｎｔｅｒ．，１９９０，１１（４）３２－３７．
［１８］ Ｐａｒｋｅｒ，Ｒ．Ｂ．，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，ｔｈｅ ｏｔｈｅｒ ｈａｌｆ ｏｆ ｔｈｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｓｔｏｒｙ［Ｊ］．Ａｎｉｍ．Ｎｕｔｒ．Ｈｅａｌｔｈ，１９７４，２９：４－８．
［１９］ Ｆｕｌｌｅｒ，Ｒ．，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｍａｎ ａｎｄ ａｎｉｍａｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ，１９８９，６６（５）：３６５－３７８．
［２０］ Ｔａｎｎｏｃｋ，Ｇ．Ｗ．，Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｎｏｒｍａｌ ｍｉｃｒｏｂｉｏｔａ ｂｙ ｄｉｅｔ，ｓｔｒｅｓｓ，ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｇｅｎｔｓ，ａｎｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ［Ｊ］．Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，１９９７，２：４３４－４６５．
［２１］ Ｍｏｒｉａｒｔｙ，Ｄ．Ｊ．Ｗ．，Ｃｏｎｔｒｏｌ ｏｆ ｌｕｍｉｎｏｕｓ Ｖｉｂｒｉｏ ｓｐｅｃｉｅｓ ｉｎ ｐｅｎａｅｉｄ ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ ｐｏｎｄｓ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，１９９８，１６４（１）：３５１－３５８．［２２］ Ｋｏｚａｓａ，Ｍ．，Ｔｏｙｏｃｅｒｉｎ（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｔｏｙｏｉ）ａｓ ｇｒｏｗｔｈ Ｐｒｏｍｏｔｏｒ ｆｏｒ ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄｉｎｇ［Ｊ］．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ａｌｉｍｅｎｔ．Ｎｕｔｒ．，１９８６，４：１２１－１３５．
［２３］ Ｎｉｎａｗｅ，Ａ．，ａｎｄ Ｊ．Ｓｅｌｖｉｎ，Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｉｎ ｓｈｒｉｍｐ ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ：Ａｖｅｎｕｅｓ ａｎｄ ｃｈａｌｌｅｎｇｅｓ［Ｊ］．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００９，３５（１）：４３－６６．
［２４］ 王旭明，陈宗泽，袁毅．益生菌作用机理的研究进展［Ｊ］．吉林农业科学，２００２，２（１）：５０－５３．
［２５］ 李二超，陈立侨，顾顺樟，等．水产饲料蛋白源营养价值的评价方法［Ｊ］．海洋科学，２００９，３３（７）：１１３－１１７．
［２６］ 唐黎，王吉桥，程骏驰，等．水产动物消化酶的研究［Ｊ］．２００７，２８（２）：２８－３１．
［２７］ Ｚｉａｅｉ－Ｎｅｊａｄ，Ｓ．，Ｍ．Ｒｅｚａｅｉ，Ｇ．Ｔａｋａｍｉ，ｅｔ ａｌ．，Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｐｐ．Ｂａｃｔｅｒｉａ ｕｓｅｄ ａｓ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｏｎ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｓｕｒｖｉｖａｌ ａｎｄ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｔｈｅ Ｉｎｄｉａｎ ｗｈｉｔｅ ｓｈｒｉｍｐ Ｆｅｎｎｅｒｏｐｅｎａｅｕｓ ｏｎｄｉｃｕｓ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２００６，２５２：５１６－５２４．
［２８］ 袁成玉，张洪，吴垠，等．微生态制剂对幼刺参生长及消化酶活性的影响［Ｊ］．水产科学，２００６，２５（１２）：６１２－６１５．
［２９］ 胡毅，谭北平．饲料中益生菌对凡纳滨对虾生长、肠道菌群及部分免疫指标的影响［Ｊ］．中国水产科学．２００８，１５（２）：２４４－２５０．
［３０］ Ｐａｎ，Ｋ．Ｃ．，ａｎｄ Ｈ．Ｂ．Ｙａｎｇ，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ ｉｎ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ［Ｊ］．Ｆｅｅｄ Ｉｎｄｕｓｔｒｙ，１９９７，１８（９）：３２－３４．
［３１］ 杨维军，王华，杨坚．益生菌的功效及其在食品中的应用［Ｊ］．四川食品与发酵，２００５，４１（１）：２７－３０．
［３２］ 阳钢，田相利，王军，等．应用ＰＣＲ－ＤＧＧＥ技术分析复合芽孢杆菌制剂水体泼洒对刺参体内外微生物群落结构的影响［Ｊ］．中国海洋大学学报（自然科学版），２０１２，４２（６）３１０－３１６．
［３３］ Ｇｕｌｌｉａｎ，Ｍ．，Ｆ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，ａｎｄ Ｊ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｔｈｅｉｒ ｉｍｍｕｎｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｅｆｆｅｃｔ ｉｎ Ｐｅｎａｅ－ｕｓ ｖａｎｎａｍｅｉ［Ｊ］．Ａｑｕａｃｕｌｔｕｒｅ，２００４，２３３：１－１４．
［３４］ 孟繁伊，麦康森，马洪明，等．棘皮动物免疫学研究进展［Ｊ］．生物化学与生物物理进展，２００９，３６（７）：８０３－８０９．
［３５］ 孙永欣．黄芪多糖促进刺参免疫力和生长性能的研究［Ｊ］．大连：大连理工大学，２００８．
［３６］ 宋志东，王际英，张利民，等．棘皮动物的免疫防御机制［Ｊ］．齐鲁渔业，２００９，２６（７）：２４－２６．
［３７］ 王亚敏，王印庚．微生态制剂在水产养殖中的应用机理及应用研究进展［Ｊ］．动物医学进展，２００８，２９（６）：７２－７５．
［３８］ Ｚｈａｎｇ，Ｒ．Ｑ．，Ｑ．Ｘ．Ｃｈｅｎ，Ｗ．Ｚ．Ｚｈｅｎｇ，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｇｒｅｅｎ ｃｒａｂ（ｓｙｌｌａ ｓｅｒｒａｔａ）ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｂｙｄｉｔｈｉｏｔｈｒｅｉｔｏｌ ｏｒ ２－ｍｅｒｃａｐｔｏｅｔｈａｎｏｌ［Ｊ］．Ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ｃｅｌｌ ｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，３２：８６５－８７２．
［３９］ 丁美丽，林林，李光友，等．有机污染对中国对虾体内外环境的影响的研究［Ｊ］．海洋与湖沼，１９９７，２８（１）：５１－５７．
［４０］ 周慧慧，马洪明，张文兵，等．仿刺参肠道潜在益生菌对稚参生长、免疫及抗病力的影响［Ｊ］．水产学报，２０１０，３４（６）：９５５－９６２．［４１］ 朱学芝，郑石轩．芽孢杆菌对凡纳滨对虾免疫和生化指标的影响［Ｊ］．饲料研究，２００７，４：５６－５９．
［４２］ Ｄｉａｚ－ｒｏｓａｌｅｓ，Ｐ．，Ｉ．Ｓａｌｉｎａｓ，Ａ．Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ，ｅｔ ａｌ．，Ｇｉｌｔｈｅａｄ ｓｅａｄｂｒｅａｍ（Ｓｐａｒｕｓ ａｕｒａｔａ Ｌ．）ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ａｆｔｅｒ ｄｉｅｔａｒｙａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｅａｔ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ，Ｆｉｓｈ ａｎｄ Ｓｈｅｌｌｆｉｓｈ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００６，２０：４８２－４９２．
［４３］ Ｓａｌｉｎａｓ，Ｉ．，Ｐ．Ｄｉａｚ－Ｒｏｓａｌｅｓ，Ａ．Ｃｕｅｓｔａ，ｅｔ ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｅａｔ－ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｆｉｓｈ ａｎｄ ｎｏｎ－ｆｉｓｈ ｄｅｒｉｖｅｄ Ｐｒｏｂｉｏｔｉｃｓ ｏｎ ｔｈｅ ｉｎｎａｔｅ ｉｍｍｕｎｅＰａｒａｍｅｔｅｒｓ ｏｆ ｔｅｌｅｏｓｔ ｆｉｓｈ（Ｓｐａｒｕｓ ａｕｒａｔａ Ｌ．），Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２００６，１１１：２７９－２８６．
［４４］ Ｉｒｉａｎｔｏ，Ａ．，ａｎｄ Ｂ．Ａｕｓｔｉｎ，Ｕｓｅ ｏｆ ｄｅａｄ ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｕｒｕｎｃｕｌｏｓｉｓ ｉｎ ｒａｉｎｂｏｗ ｔｒｏｕｔ，Ｏｎｃｏｒｈｙｎｃｈｕｓ ｍｙｋｉｓｓ（Ｗａｌｂａｕｍ）［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｆｉｓｈ Ｄｉｓｅａｓｅｓ，２００３，２６（１）：５９－６２．
７２
海 洋 湖 沼 通 报２ ０ １ ５年
Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ Ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ Ｃｅｒｅｕｓ ｏｎ Ｇｒｏｗｔｈ，
Ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ Ｅｎｚｙｍｅ Ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ Ｉｍｍｕｎｅ Ｄｅｆｅｎｓｅ
Ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓ Ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
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Ｑｉｎｇｄａｏ ２６６００３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓｔａｔｅｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ（ＢＣ－０２）ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ｗｅｒｅ ｓｔｕｄｉｅｄ ｏｖｅｒ ５８ｄａｙｓ．Ｔｈｅ ｓｔａｔｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ＢＣ－０２ｗｅｒｅ ｖｉａｂｌｅ，ｉｎａｃｔｉｖｅ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｐｏｗｄｅｒ．Ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｄｏｅｓ ｏｆ ｌｉｖｉｎｇ ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｌｌ ｉｎ ｆｅｅｄ ｗｅｒｅ ０，１０７，１０９，１０１１ｃｆｕ ｋｇ－１，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ ｎａｍｅｄ ａｓ ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｌｏｗ，ｍｉｄｄｌｅ ａｎｄ ｈｉｇｈ．Ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ａｄｄｅｄ ｖｉａｂｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ａｎｄ ｓｐｏｒｅ ｐｏｗｄｅｒ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｉｄｄｌｅ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｉｎｔｏ ｔｈｅｆｅｅｄ ｎｏｔ ｏｎｌｙ ｐｒｏｍｏｔｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ，ｂｕｔ ａｌｓｏ ｃａｎ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅ ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｅｎ－ｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ，ｓｕｃｈ ａｓ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅａｓｅ，ＡＭＳ ａｎｄ ＬＰＳ，ｂｅｓｉｄｅｓ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ｓｕｃｈ ａｓ Ｔ－ＳＯＤ，ＡＣＰ，ＡＫＰ ａｎｄ ＬＺＭ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ（Ｐ＜０．０５）．Ｗｈｉｌｅｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｉｎａｃｔｉｖａｔｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａ ｏｎ ｇｒｏｗｔｈ，ｔｈｅ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ｆａｃ－ｔｏｒｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ．Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ，ｉｔ ｃｏｕｌｄ ｂｅｃｏｎｃｌｕｄｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｏｐｔｉｍａｌ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｓｔａｔｅｓ ｏｆ ＢＣ－０２ｗｅｒｅ ｖｉａｂｌｅ ａｎｄ ｉｎａｃｔｉｖｅ，ａｎｄ ｔｈｅ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｃｏｎ－ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ＢＣ－０２ｗａｓ（１０９－１０１１）ｃｆｕ ｋｇ－１，ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔａｔｉｏｎ，ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｒａｔｅｓ，ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｄｉｇｅｓｔｉｖｅｅｎｚｙｍｅ ａｎｄ ｔｈｅ ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｎｓｅ ｆａｃｔｏｒｓ ｏｆ Ａ．ｊａｐｏｎｉｃｕｓ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｍｐｒｏｖｅｄ．
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｃｅｒｅｕｓ；ｇｒｏｗｔｈ；ｄｉｇｅｓｔｉｖｅ ｅｎｚｙｍｅ；ｉｍｍｕｎｅ ｄｅｆｅｎｓｅ；Ａｐｏｓｔｉｃｈｏｐｕｓ ｊａｐｏｎｉｃｕｓ
枯草芽孢杆菌的发酵学院：化工学院 专业：生物工程 班级：生物10-2 ：霞
摘要 枯草芽孢杆菌是我国农业部允许作为饲料添加剂的15种菌种之一 ,其已被越来越多地制成饲用微生态制剂。因其制剂是无毒、无残留、无污染的“绿色”添加剂，故具有广阔的发展前景，并已在畜牧业、饲料业广泛应用，显示巨大的社会效益和生态效益。通过摇床培养筛选出较适宜于枯草芽孢杆菌发酵的培养基配方，发酵培养基配方确定后，在摇床条件下，通过对温度、初始ｐＨ值、初始接种量、装液量、摇床转速等发酵条件的摸索，确定最佳发酵条件。在摇瓶条件下优化发酵培养基和发酵工艺后，采用发酵罐进行发酵培养，对枯草芽孢杆菌在液体发酵过程中的菌体数量、ｐＨ值、总糖含量和总氮含量四个因素随时间的变化进行了观察。 枯草芽孢杆菌，是芽孢杆菌属的一种。单个细胞 0.7～0.8×2～3微米，着色均匀。无荚膜，周生鞭毛，能运动。革兰氏阳性菌，芽孢0.6～0.9×1.0～1.5微米，椭圆到柱状，位于菌体中央或稍偏，芽孢形成后菌体不膨大。菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些物质对致病菌或源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用。枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道pH值，间接抑制其它致病菌生长。枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体的消化酶类一同发挥作用，能合成维生素 B1、B2、B6、烟酸等多种B族维生素，提高动物体干扰素和巨噬细胞的活性，在饲料中应用广泛。它还可以用来改善水质，应用在污水处理和环境保护中。和其它微生物混合使用，还可以用于生物肥料和土地改良等 关键词：枯草芽孢杆菌生长发酵活菌数
北京理工大学2005年《微生物学》期末试题 一、名词解释（每题3分，共计18分） 1、L型细菌 2、菌落 3、鉴别性培养基 4、发酵 5、基因突变 6、BOD5 二、填空题（每空1分，共计30分） 1、微生物学的奠基人是__________。 2、__________繁殖是放线菌的主要繁殖方式。 3、分生孢子梗状如扫帚是__________的重要分类特征。 4、病毒粒的基本结构是_______________。 5、烟草花叶病毒是________________对称体制的典型代表。 6、噬菌体的繁殖一般可分为五个阶段__________、__________、 _____________、_________和__________。 7、温和噬菌体的3种存在形式有____________、____________和游离态。 8、微生物的6大营养要素是______________、_____________、____________、____________、____________和水。 9、在营养物质运输中既消耗能量又需要载体的运输方式是__________________________。 10、按照对培养基成分的了解作分类，培养基可分为____________、_______________和 ______________。 11、筛选营养缺陷型的四个环节是____________、____________、____________和 ____________。 12、根据下图中五类对氧关系不同的微生物在半固体琼脂柱中的生长状态，依次写出它们的 名称__________________、___________________、_________________、________________和________________。 三、判断题并改错（每题1分，共计5分，在括号内对的划“√”，错的划“×”） 1、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌属于单细胞生物，唾液链球菌和金黄色葡萄球菌属于多细胞生 物。（） 2、遗传型相同的个体在不同环境条件下会有不同的表现型。（） 3、低剂量照射紫外线，对微生物几乎没有影响，但以超过某一阈值剂量的紫外线照射，则 会导致微生物的基因突变。（） 4、一切好氧微生物都含有超氧化物歧化酶（SOD）。（） 5、一般认为各种抗性突变是通过适应而发生的，即由其所处的环境诱发出来的。（）
第4章微生物的生长 本章的学习目的与要求 ⑴掌握微生物生长的概念，个体生长与群体生长的关系。 ⑵掌握衡量微生物群体生长的指标，微生物生长量的测定方法。 ⑶了解微生物的群体生长规律和环境因素对微生物生长的影响。 1. 微生物生长 1.1微生物生长的概念 一个微生物细胞在合适的外界环境条件下，不断地吸收营养物质，并按其自身的代谢方式进行新陈代谢。如果同化作用的速度超过了异化作用，则其原生质的总量（重量、体积、大小）就不断增加，于是出现了个体的生长现象。如果这是一种平衡生长，即各细胞组分是按恰当的比例增长时，则达到一定程度后就会发生繁殖，从而引起个体数目的增加，这时，原有的个体已经发展成一个群体。随着群体中各个个体的进一步生长，就引起了这一群体的生长，这可从其重量、体积、密度或浓度作指标来衡量。所以： 个体生长→个体繁殖→群体生长 群体生长＝个体生长＋个体繁殖 这里需要强调的是，上述微生物生长的阶段性，对于单细胞微生物来说是不明显的，往往在个体生长的同时，伴随着个体的繁殖，这一特点，在细菌快速生长阶段尤为突出，有时在一个细胞中出现2或4个细胞核；除了特定的目的以外，在微生物的研究和应用中，只有群体的生长才有实际意义，因此，在微生物学中提到的“生长”，均指群体生长。这一点与研究高等生物时有所不同。 微生物的生长繁殖是其在内外各种环境因素相互作用下的综合反映，因此，生长繁殖情况就可作为研究各种生理、生化和遗传等问题的重要指标；同时，微生物在生产实践上的各种应用或是对致病、霉腐微生物的防治，也都与它们的生长繁殖和抑制紧密相关。下面对微生物的生长繁殖及其控制的规律作较详细的介绍。 1.2微生物生长量的测定 既然生长意味着原生质含量的增加，所以测定生长的方法也都直接地以此为根据，而测定繁殖则都要建立在计数这一基础上。 1.2.1 稀释平板菌落计数法 是一种最常用的活菌计数法。取一定体积的稀释菌液与合适的固体培养基在其凝固前均匀混合，或涂布于已凝固的固体培养基平板上。在最适条件下培养后，从平板上（内）出现的菌落数乘上菌液的稀释度，即可计算出原菌液的含菌数。在一个9cm直径的培养皿平板上，一般以出现50～500个菌落为宜。 这种方法在操作时，有较高的技术要求。其中最重要的是应使样品充分混匀，并让每支移液管只能接触一个稀释度的菌液。有人认为，对原菌液浓度为109个/mL的微生物来说，如果第一次稀释即采用10-4级（用10μL菌液至100mL无菌水中），第二次采用10-2级（吸1mL上述稀释液至100mL无菌水中），然后再吸此菌液0.2mL进行表面涂布和菌落计数，则所得的结果最为精确。其主要原因是，一般的吸管壁常因存在油脂而影响计数的精确度（有时误差竟高达15％）。这一稀释过程的示意图详见实验技术。
环境工程微生物学试卷 一、填空(每小题1分,共10分) 1. 蓝藻的营养类型为光能自养型。 2.大肠杆菌长为2.0μm,宽为0.5μm,其大小表示为0.5um*0.2um 。 3.水处理中活性污泥中的细菌采用对数生长时期的细胞。 4.革兰氏阳性菌细胞壁的主要成份为肽聚糖磷壁酸。 5.侵染寄主细胞后暂不引起细胞裂解的噬菌体称温和噬菌体。 6.微生物细胞的主要组成元素是 C H O N P S 。 7. 大肠杆菌个数可作为水的卫生细菌学检验指标。 8.用物理或化学方法杀死物品上大部分微生物的过程称消毒。 9. 加大接种量可控制少量污染菌的繁殖,是利用微生物间的拮抗关系。 10. 在放线菌发育过程中,吸收水分和营养的器官为营养菌丝。 二、单项选择(在每小题的四个备选答案中,选出一个正确的答案,并将其码写在题后的○内,每小题2分,共40分)。 1.组成病毒粒子核髓的化学物质是○c ①糖类②蛋白质③核酸④脂肪 2.常用于饮水消毒的消毒剂是○d ①石灰②CuSO4 1③KMnO4④漂白粉 3.以高糖培养酵母菌,其培养基类型为○a ①加富培养基②选择培养基③鉴别培养基④普通培养基 4. 酵母菌常用于酿酒工业中,其主要产物为○b ①乳酸②乙醇③丁酸④乙酸 5.属于细菌细胞基本结构的为○b ①荚膜②细胞壁③芽胞④鞭毛 6.酵母菌常用于酿酒工业中,其主要产物为○b ①乙酸②乙醇③乳酸④丙醇 7.土壤中三大类群微生物以数量多少排序为○c ①细菌＞放线菌＞真菌②细菌＞真菌＞放线菌③放线菌＞真菌＞细菌 ④真菌＞细菌＞放线菌
8.噬菌体属于病毒类别中的○a ①微生物病毒②昆虫病毒③植物病毒④动物病毒 9.常用消毒酒精的浓度的○B ①30% ②70% ③95% ④100% 10.制备培养基的最常用的凝固剂为○C①硅胶②明胶③琼脂④纤维素 11.沼气发酵的主要产物为○B ①CO2②CH4③NH3④H2S 12.酵母菌属于○微生物C ①好氧型②厌氧型③兼性厌氧型④微厌氧型 13.果汁、牛奶常用的灭菌方法为○A ①巴氏消毒②干热灭菌③间歇灭菌④高压蒸汽灭菌 14.加大接种量可控制少量污染菌的繁殖,是利用微生物间的○D ①互生关系②共生关系③竞争关系④拮抗关系 15. 以芽殖为主要繁殖方式的微生物是○B ①细菌②酵母菌③霉菌④病毒 16.干热灭菌法要求的温度和时间为○C ①105℃,2小时②121℃,30分钟③160℃,2小时④160℃,4小时 17.生鞭毛最多的菌属于○ ①螺旋菌②杆菌③球菌④假菌丝 18.微生物运输营养物质的主要方式○C ①被动扩散②促进扩散③主动运输④基团转位运转 19.在生物界分类中食用菌属于○B ①病毒界②真菌界③原核原生生物界④真核原生生物界 20.反硝化作用的最终产物○B ①NH3②HNO3③N2④HNO2 三、判断正误(认为正确的,在题后○内打"√";错误的打"×",并说明理由,不说明理由,该题无分。每小题2分,共10分) 1. 原核微生物的主要特征是细胞内无核○X 2. 细菌芽孢的生成是细菌繁殖的表现○X 3.细菌和放线菌最适的pH为中性-微碱性○对
食品微生物学试卷一、 一. 填空题（1分/空×20）： 1. 细菌一般进行___⑴__ 繁殖，即__⑵_。酵母的繁殖方式分为有性和无性两类，无性繁殖又可分为__⑶__ ，__⑷__ 两种形式，有性繁殖时形成__⑸_ ；霉菌在有性繁殖中产生的有性孢子种类主要有__⑹__ ，_⑺__ ；在无性繁殖中产生的无性孢子种类有_⑻_ ，__⑼__，__⑽__ ；放线菌以__⑾__ 方式繁殖，主要形成__⑿__ ，也可以通过___⒀__繁殖。 2. 微生物污染食品后，对人体造成的危害主要是引起___⒁_______和_____⒂_____。 3.在酵母菌细胞结构中，____⒃_____具有保护细胞及维持细胞外形的功能；____⒄____具有控制细胞对营养物及代谢产物的吸收和交换作用；____⒅_____是细胞进行生命活动，新陈代谢的场所；___⒆______是呼吸酶类的载体，细胞的能量供应站；_____⒇____具有传递细胞遗传性状的作用。 二.选择题（1分/小题×20） 1.革兰氏染色的关键步骤是___ a.结晶紫（初染） b.碘液（媒染） c.酒精（脱色） d.蕃红（复染） 2.属于细菌细胞基本结构的为___ a.荚膜 b.细胞壁 c.芽孢 d.鞭毛 3.测定食品中的细菌总数常采用_____ a.稀释混匀平板法 b.稀释涂布平板法 c.显微镜直接镜检计数法 4.干热灭菌法要求的温度和时间为___ a.105℃，2小时 b.121℃，30分钟 c.160℃，2小时 d.160℃，4小时 5.微生物运输营养物质的主要方式___ a.单纯扩散 b.促进扩散 c.主动运输 d.基团转位 6. Saccharomyces cerevisiae有性繁殖产生____ a.接合孢子 b.担孢子 c.孢囊孢子 d. 子囊孢子 7.以高糖培养酵母菌,其培养基类型为____ a.加富培养基 b.选择培养基 c.鉴别培养基 d.普通培养基 8. 抗干燥能力较强的微生物是_________。 a.酵母菌 b.霉菌菌丝 c.乳酸菌 9. 产生假根是____的形态特征。 a.根霉 b.毛霉 c.青霉 d.曲霉 10.配制1000ml的固体培养基需加琼脂____ a.0. b.2~7克 c.15~20克 d.50克 11.食品和饮料工业生产上常采用的“巴氏灭菌法”是一种______方法。 a.消毒 b.抑菌 c.灭菌 d.除菌 12. 下列微生物器官耐温顺序为_____ a.营养体＞孢子＞芽孢 b.芽孢＞孢子＞营养体 c.孢子＞营养体＞芽孢 c.芽孢＞营养体＞孢子 13.下列微生物能通过细菌滤器的是____ a.细菌 b.酵母菌 c.病毒d霉菌 14.下列不属于生长素类物质的是____ a.氨基酸 b.矿质元素 c.嘌呤碱基 d.维生素 15. E.coli是______ a. G＋菌 b.G－菌 c. G＋G－不定
枯草芽孢杆菌生产工艺-实验室操作 1. 培养基 1.1 种子培养基蛋白胨1 %，酵母浸出物0. 5 %，氯化钠1 % ，自然pH。 1.2 基础发酵培养基蔗糖1 %，蛋白胨1 %，磷酸氢二钠0. 2 %，磷酸二氢钠0. 2 %，pH 7. 0。 1.3 主要试剂 蔗糖、葡萄糖、淀粉、玉米淀粉、麦芽糖、酵母浸出物、胰蛋白胨、牛肉膏、尿素、氯化铵、硫酸锰、硫酸镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、氯化钠和氯化钙。 1.4 仪器设备 控温摇床、高压蒸气灭菌锅、电子天平、pH 测定仪、无菌操作台和紫外分光光度计。 2.方法 2. 1培养方法 2. 1. 1菌种活化 将保存的菌种转接到斜面培养基，37 ℃培养24 h，备用。 2. 1. 2种子液的制备 取一环活化的菌种，接入装量为50 mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，180 r/ min 培养18 h。 2. 1. 3摇瓶培养 分别取1 mL 种子液，接入盛有50 mL 发酵培养基的200 mL三角瓶中(接种量为2 % ，V/ V) 。置摇床中，30 ℃振荡培养12 h，转速为160 r/ min 3. 培养条件 3.1碳源 以葡萄糖、蔗糖和麦芽糖为碳源时枯草芽孢杆菌的生长明显优于可溶性淀粉和玉米淀粉。最佳碳源是葡萄糖，其次是蔗糖。 3.2氮源 氮源为有机氮源时枯草芽孢杆菌的生长明显优于无机氮源。最适氮源是酵母浸出物，从发酵成本考虑，酵母浸出物、胰蛋白胨及氯化铵组成的复合氮源较合适。
4.发酵条件 4.1生长曲线 接种12 h后细菌数量开始减少，枯草芽孢杆菌进入生长衰亡期。因此，采用8～12 h 时的菌液作为菌种较合适，此时枯草芽孢杆菌为对数生长末期，既可保持高的细胞活力，又可获得尽可能多的细胞数。 4.2 初始PH 在初始pH 5. 5～8范围内枯草芽孢杆菌均可良好生长，pH 为6. 0 时生长最好，说明枯草芽孢杆菌对pH 的适应性较宽，但随pH 的增大，活菌数呈下降趋势。 4.3温度 枯草芽孢杆菌在25～40℃均可良好生长，其生长的最适温度为35℃。 4.4装液量及接种量 枯草芽孢杆菌为需养菌，在生长过程中需要大量的氧气，装液量不可过多，培养液与容器体积比可设定为2:25；接种量3 % (V/ V) 较适合其生长。 5.干燥方式 采用喷雾干燥和低温冷冻干燥。低温冷冻干燥更利于芽孢的形成，但其操作复杂、成本高，不利于规模化工业生产。而喷雾干燥同样可产生高芽孢率，且成本相对低，更适合工业生产。
实验日期：2017.11.1实验班级：生物技术指导教师：张建丽 姓名：高熹学号：1120152430 测定细菌生长曲线 一．实验目的 1.通过对大肠杆菌生长曲线的测定，了解细菌生长的特点，综合训练微生物实验的基本实验技能。 2.巩固培养基的配制、灭菌、仪器的包扎、倒平板。 3.掌握用比浊法测定细菌的生长曲线。 二．实验原理 将少量细菌接种到一定体积的、适合的新鲜培养基中，在适宜的条件下进行培养，一定时间测定培养液中的菌量，以菌量的数量作纵坐标，生长时间作横坐标，绘制的曲线叫生长曲线。它反映了单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。依据其生长速率的不同，一般可把生长曲线分为延缓期、生长期、稳定期和衰亡期。将每一种一定量的细菌转入新鲜液体培养基中，在适宜的条件下培养细胞要经历延迟期、对数生长期、稳定期和衰亡期四个阶段。 延迟期：又叫调整期。细菌接种至培养基后，对新环境有一个短暂适应过程（不适应者可因转种而死亡）。此期曲线平坦稳定，因为细菌繁殖极少延迟期长短因素种、接种菌量、菌龄以及营养物质等不同而异，一般为1～4小时。此期中细菌体积增大，代谢活跃，为细菌的分裂增殖合成、储备充足的酶、能量及中间代谢产物。 对数生长期：又称指数期。此期生长曲线上活菌数直线上升。细菌以稳定的几何级数极快增长，可持续几小时至几天不等（视培养条件及细菌代时而异）。此期细菌形态、染色、生物活性都很典型，对外界环境因素的作用敏感，因此研究细菌性状以此期细菌最好。抗生素作用，对该时期的细菌效果最佳。 稳定期：该期的生长菌群总数处于平坦阶段，但细菌群体活力变化较大细菌浓度达到最大即环境最大容纳量。由于培养基中营养物质消耗、毒性产物（有机酸、过氧化物等）积累PH下降等不利因素的影响，细菌繁殖速度渐趋下降，相对细菌死亡数开始逐渐增加，此期细菌增殖数与死亡数渐趋平衡。细菌形态、染色、生物活性可出现改变，并产生相应的代谢产物如外毒素、内毒素、抗生素、以及芽孢等。 衰亡期：随着稳定期发展，细菌繁殖越来越慢，死亡菌数明显增多。活菌数与培养时间呈反比关系，此期细菌变长肿胀或畸形衰变，甚至菌体自溶，难以辩认其形。生理代谢活动趋于停滞。故陈旧培养物上难以鉴别细菌。 体内及自然界细菌的生长繁殖受机体免疫因素和环境因素的多方面影响，不会出现象培养基中那样典型的生长曲线。掌握细菌生长规律，可有目的地研究控制病原菌的生长，发现和培养对人类有用的细菌。 这4个时期的长短因菌种的遗传性、接种量和培养条件的不同而有所不同。因此通过测定微生物的生长曲线，可了解个菌的生长规律，对于科研和生产都具有重要的指导意义。 测定微生物的数量有多种不同的方法，可根据要求和实验室条件选用。本实
南京大学微生物试卷(01-04) 2001年 一选择题 1 某建筑工人劳动时受深部创伤，应去医院注射哪种物质：A抗毒素B类毒素C抗生素D 干扰素 2 今从土壤中分离到一株菌，欲对其进行鉴定，首先应进行的是： A获得该菌株的纯培养 B 细胞形态和习性水平研究C 查找权威鉴定手册基D因或DNA水平鉴定 3 在发明下列哪种技术前，人类无法了解某种微生物对人类或自然界的具体作用： A显微镜技术B 染色技术C 纯种分离D 消毒灭菌 4 生物转盘上微生物种类和数量随着在处理槽中位置不同而改变，接近出水口的盘片上以下列什么为主： A细菌，放线菌 B 菌胶团，丝状细菌 C 新生菌胶团D 原生动物 5 少数革兰氏阴性菌可产外毒素，如：A破伤风梭菌外毒素B 肉毒梭菌毒素C白喉棒杆菌外毒素D霍乱弧菌肠毒素 6 因其出现而改变了地球大气层，并为其他生物的生存发展创作条件的微生物是：A原始的蓝细菌B 原始的支原体C原始的红螺菌D 原始的绿菌类 二是非题 1 霉菌的膜边体是一种特殊的膜结构，与细菌的间体相似。 2 烟草花叶病毒的结晶具有感染性 3 早在宋朝，就发明了种牛痘预防天花的方法，比西方早几百年。 4 白僵菌是寄生于昆虫的细菌，因此被人们利用作为杀虫剂 5 要获得酵母菌和黑曲霉原生质体，可分别采用溶菌酶和纤维素酶除去细胞壁 6 朊病毒是一类仅含蛋白质的亚病毒 7 类病毒是一类只含单连环状RNA分子，并进行专性细胞内寄生的分子生物 8 病毒包含体类似与干扰素，是病毒作用与寄主细胞后产生的一种蛋白质，具有抗病毒作用 9 耐氧菌细胞内虽然缺乏过氧化物酶，但因其含有SOD和过氧化氢酶，仍然可以消除超氧离子自由基和H2O2的毒害作用，故在有氧的环境中进行发酵。 10 在较低浓度范围内即可影响微生物生长速率和菌体产量的营养物称为生长限制因子 11 抗磺胺类药物的细菌突变株的出现，其原因在于细菌产生了缺乏二氢碟酸合成酶的突变株，或者是变成大量合成PABA的突变株 12 诊断梅毒的康氏试验是一种絮状沉淀反映 13 干扰素具有种属特异性，既动物细胞产生的干扰素在人细胞没不能抑制病毒的增殖。 14 菌株是指遗传型纯的谱系，因而某种菌株的遗传物质一旦发生改变，应该成为新的菌株。三名词解释 1 吸器2自发裂解3连续培养4发酵罐5 COD 6黑死病7 兼用代谢途径8 抗反馈调节突变株 四问答题 1 试分析沼气发酵在国民经济和环境保护中的重大战略意义 2 试述ELISA中的见解免疫吸附测定法的主要步骤，并指出一种常用的酶及低物。 3 通过哪些措施可以对有害的微生物进行控制？试以表解法说明 4 简介无氧呼吸的5种类型 五学名互译1金黄色葡萄球菌 2 酿酒酵母3黑曲霉 4 Bacillus thuringiensis subsp.galleria 5 Pseudomonas spp. 6 Escherichia coli k12
细菌的生理活动包括摄取营养物质和合成各种所需物质，进行新陈代谢及生长繁殖。细菌具有独立的生命活动能力，处于适宜的环境条件下，可从外界环境中摄取营养物质，获得能量，具有代谢旺盛、繁殖迅速的特点。 第一节细菌的理化性状 一、化学组成 1.与其他生物细胞相似，含有包括水、蛋白质、无机盐、糖类、脂类和核酸等多种化学成分。 2.水占75-90%，为主要成分。 3.去除水分后，主要为有机物，包括碳、氢、氮、氧、磷和硫。还有少量无机离子，包括钾、钠、铁、镁、钙、氯等，用以构成菌细胞的各种成分、维持酶的活性和跨膜化学梯度。 4.还含有一些原核细胞型微生物所特有的化学组成，如肽聚糖、胞壁酸、磷壁酸、D型氨基酸、二氨基庚二酸、吡啶二羧酸等。 二、物理性状 1.光学性质细菌为无色半透明小体，细菌悬液呈混浊状态。观察-染色法-相差显微镜。 2.表面积细菌体积微小，表面积相对较大，有利于细菌的内外物质交换。 3.带电现象细菌的固有成分50-80%是蛋白质，主要为兼性离子氨基酸组成。G+菌的等电点pH为2-3 G-菌的等电点pH为4-5 因此，在弱碱性或近中性环境中细菌均带负电荷，等电点越低带负电荷越多。意义：细菌的带电现象与细菌的染色反应、凝集反应和抑菌杀菌作用有着密切关
系。 4.半通透性 意义：细菌为了利于内外物质交换，有利于营养物质的吸收和代谢产物的排出，其细胞壁和细胞膜都为半通透性。 5.渗透压细菌体内由于含有高浓度的营养物质和无机盐，其渗透压极高。 革兰阳性菌渗透压高达20-25个大气压，革兰阴性菌也有5-6个大气压。 意义：细菌一般处于相对低渗的环境，有坚韧的细胞壁保护不致崩裂。细菌若处于高渗环境中，菌内水分逸出，胞质脱水浓缩，细菌就不能繁殖。 第二节细菌的营养与生长繁殖 一、细菌的营养物质 1.水：溶解营养物质，有利于营养物质的吸收与代谢。 2.碳源：主要来源于糖类，是合成菌体的糖类、脂类、蛋白质、核酸的成分，又是细菌的能量来源。 3.氮源：来源于氨基酸、蛋白质等，合成菌体成分。肺炎克雷伯菌可利用硝酸盐甚至氮气。 4.无机盐：常用元素（P、S、K、Na、Mg、Ca、Fe、）和微量元素（钴、锌、锰、铜、钼）。 作用：构成菌细胞的各种成分；维持酶活性；参与能量的贮存和转运；调节内外渗透压；与菌的生长繁殖与致病作用有关。 5.生长因子：自身不能合成的，如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶等。 特殊：流感嗜血杆菌-X因子、V因子等。 二、细菌摄取营养物质的机制 水和水溶性物质可通过具有半透膜性质的细胞壁和细胞膜进入细胞内，蛋白质、多糖等大分子营养物质需经细菌分泌的胞外酶的作用分解成小分子物质才能被吸收。
不同重金属对两种细菌生长曲线的影响https://www.doczj.com/doc/9995803.html,/nongye/nongzi/195468.html 目录 摘要 (1) 关键词 (1) 引言 (1) 1 材料与方法 (2) 1.1 供试菌种 (2) 1.2 培养基 (2) 1.3 实验设计 (2) 2 结果与分析 (2) 2.1不同浓度Hg2+对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影响 (2) 2.2不同浓度Cu2+对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影响 (3) 2.3不同浓度Pb2+对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影响 (5) 2.4不同浓度Cr6+对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影响 (6) 2.5不同浓度Cr6+对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影响 (7) 2.6不同浓度Cr6+对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌生长曲线的影响 (8) 3 讨论 (9) 3.1不同的细菌对相同重金属的耐受程度不同 (9) 3.2 不同的重金属对微生物的毒性不同 (10) 致谢 (10) 参考文献 (11) 英文摘要 (12) 英文关键词 (12) 不同重金属对两种细菌生长曲线的影响 别金蓉 （玉溪师范学院资源环境学院农业资源与环境2006级2006035114） 指导教师：李淑英 摘要：以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌两种典型的微生物为实验材料，用六种不同的重金属离子Cu2+、Hg2+、Pb2+、Cd2+、Cr6+、Mn4+在不同浓度下对其进行胁迫培养，研究六种外源性重金属在不同浓度下对两种细菌生长曲线的影响，探讨不同重金属单一胁迫对两种细菌的毒害作用。结果表明，不同的重金属对G+和G-生长曲线的影响随不同重金属的浓度和培养时间而不同。由本实验结果可以看到，两种典型细菌的生长曲线随不同重金属浓度的增加发生了明显的变化，两种细菌对各种重金属的耐受程度不同，G-对重金属Pb2+、Cr6+有较强的耐受性，G+对重金属Pb2+、Cr6+、Cd2+、Mn4+具有较强的耐受性。 关键词：重金属；细菌；生长曲线；胁迫 引言：重金属对环境及生态系统有长期的毒性而且容易在生物体内积累形成一系列毒害[1]。土壤重金属污染与微生物群落之间的关系一直是土壤重金属污染生态评价中的热点问题。许多研究报道重金属污染能明显影响微生物群落的生物量、活性及结构组成。在重金属的作用下，微生物受到毒害，重金属胁迫可以引起微生物生长、
药学院2010级期末微生物考试卷 一、单项选择题（每题一分，共计15分） 1、下列微生物革兰氏染色反应阴性的是（） A.大肠杆菌 B.金黄色葡萄球菌 C.枯草芽孢杆菌 D.酿酒酵母 2、赋予细菌运动特性的细胞特殊结构是（） A.芽孢 B.荚膜 C.鞭毛 D.气泡 3、T偶数噬菌体的典型形态是（） A.杆状 B.蝌蚪状 C.球状Ｄ.螺旋状 ４、下列微生物属于化能异养菌的是（）Ａ.大肠杆菌Ｂ.红螺菌Ｃ.硫化细菌Ｄ.氢细菌 ５、描述烈性噬菌体生长规律的实验曲线是（）Ａ.一步生长曲线Ｂ.典型生长曲线Ｃ.Ｓ型曲线Ｄ.标准曲线６、常规的菌种冰箱保藏法的温度是（） A.-10℃ B.-20℃ C.4℃ D.10℃ 7、细菌酒精发酵与下列哪一种途径有关？（） A.EMP B.HMP C.ED D.TCA 8、瘤胃微生物与反刍动物间的关系是（） A.共生B．寄生C．拮抗D．捕食 9、霉菌最主要的繁殖方式是（）Ａ．芽殖Ｂ．裂殖Ｃ．孢子繁殖Ｄ．菌丝繁殖 １０、营养缺陷型菌株不能在下列哪种培养基中生长？（）Ａ．基本培养基Ｂ．完全培养基Ｃ．补充培养基Ｄ．天然培养基１１、下列环境中，通常微生物含量最高的是（）Ａ．土壤Ｂ．淡水湖泊Ｃ．海水Ｄ．空气 １２、下列遗传个体中营养型表现一致的是（）Ａ．野生型和营养缺陷型Ｂ．营养缺陷型和原养型 Ｃ．野生型和原养型Ｄ．三者均是 １３、提供ＰＣＲ反应中ＤＮＡ聚合酶的微生物属于（）Ａ．嗜热菌 B.嗜冷菌 C.嗜盐菌 D.嗜碱菌 14、微生物产生抗生素抗性是因为（） A.微生物接触药物 B.药物驯化作用 C.自发突变 D.定向变异 15、在微生物的双名法命名中，前面一个词表示（） A.学名 B.发现者名字 C.属名 D.种名加词 二、判断题（每题1分，共10分） 1.芽孢在细菌细胞体内的不同部位均可随意着生。（） 2.毒株是微生物分类学中最基本的单位。（） 3.病毒一般对抗生素不敏感，但是对干扰素敏感。（） 4.可以根据酵母细胞上“芽痕”的多少来推测该细胞的年龄。（） 5.古细菌的细胞壁与细菌细胞壁组成成分是一样的。（） 6.温和噬菌体侵入寄主细胞后永远不能裂解寄主细胞。（） 7.基团位移是借助于酶或定向酶系统实现注定输送，因此不需要消耗能量。（） 8.原核微生物和真核微生物唯一区别是细胞核的区别。（）
蛋白酶的发酵及酶活力测定实验报告 学院：生物科学与工程学院 专业：生物技术 班级： 1班 姓名： 学号：
摘要：蛋白酶是一类重要的工业用酶，广泛应用于食品、医药、洗涤剂、皮革、酿酒等行业。当前，食品工业用酶主要来自微生物，尤其是蛋白酶的应用最为广泛。作为一种生物催化剂,它具有催化反应速度快,无工业污染,催化反应条件适应性宽等的性质和优点。由于从植物和动物中生产蛋白酶具有的局限性,为了满足当今世界市场的需要,人们越来越多地把目光投到微生物蛋白酶上[2] 。微生物由于具有生长速度快、所需生长空间小、广泛的生化多样性及其遗传可操作性等特点,因而备受人们青睐。本文主要进行了菌种的生长曲线的绘制与菌种最佳发酵产酶时间等方面的研究。 关键字：蛋白酶生长曲线酶活力
第一章前言 1.1研究的目的与意义 蛋白酶是工业酶中用得最多的一种酶，是催化蛋白质肽键水解的一类酶,它作用于蛋白质,将其分解为蛋白胨、多肽及游离氨基酸[1] ，约占酶总量的 60%，其中碱性蛋白酶就占25%。有调查显示，酶制剂市场量最大的是洗涤剂用酶，第二位是淀粉加工用酶，以后依次为乳制品加工业、制酒工业、纺织工业和饮料加工业等用酶[2]。与动、植物来源的蛋白酶相比，利用微生物产的蛋白酶有易于培养、生长快、产量高、易于提取，适于大规模工业化生产，培养基的成本相对较低等优点，使微生物成为生产蛋白酶的重要来源和首选材料。 1.2 国内外研究概况 1.2.1 微生物蛋白酶的分类 由于从植物和动物中生产蛋白酶具有的局限性,为了满足当今世界市场的需要,人们越来越多地把目光投到微生物蛋白酶上[3]。当前工业用酶主要来源于微生物，微生物来源的蛋白酶按其作用的 pH 值的不同可分为三类，即碱性蛋白酶、中性蛋白酶及酸性蛋白酶，它们作用的最适 pH 值分别为碱性、中性及酸性。 1.2.2在食品工业中的应用 蛋白酶在食品工业上的应用主要是用在制干酪，蛋白质水解调味液，烤焙食品，肉类嫩化，功能性低聚肽和阿斯巴甜的合成等。食品加工使用的蛋白酶通常来自于枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、米曲霉和黑曲霉等。 随着社会发展和生活水平不断提高，人们对肉类的需求量日益增长的同时，对肉的品质也提出了更高要求。微生物蛋白酶肉类嫩化剂是一种专门用于嫩化肉类的生物制剂，在适当温度下，可以断裂蛋白质中的某些肽键，提高肉的嫩度，使肉变得多汁、柔软、易于咀嚼，提高了肉的成品率、保质期和经济效益，因此十分经济且便于生产，并能取得显著效果。面包制作过程中，面粉中含有的不溶解性谷蛋白可以通过碱性蛋白酶限制性降解来修饰。用米曲霉蛋白酶和肽酶对面筋蛋白作有限的水解，可改善面团操作性能和机械性能，以适应不同制品的需要。酶处理后的面团其韧性和机械强度都有所增加。过量使用蛋白酶能减少面团的混合时间和增加面包产量。使用细菌蛋白酶可以增加面团的延展性[4]。
微生物试题 一、写出下列名词解释的中文翻译及作出解释（每个２分，共１０分） 1.Gram positive bacteria 2.parasporal crystal 3.colony 4.life cycle 5.capsule 二.选择题（每个2分，共20分） 1、组成病毒粒子衣壳的化学物质是（） A、糖类 B、蛋白质 C、核酸 D、脂肪 2、属于细菌细胞特殊结构的为（） A、荚膜 B、细胞壁 C、细胞膜 D、核质体 3、噬菌体属于病毒类别中的（） A、微生物病毒 B、昆虫病毒 C、植物病毒 D、动物病毒 4、半固体培养基中，琼脂使用浓度为（）。 A、0 B、0.3—0.5% C、1.5—2.0% D、5% 5、以芽殖为主要繁殖方式的微生物是（） A、细菌 B、酵母菌 C、霉菌 D、病毒 6、土壤中三大类群微生物以数量多少排序为（）。 A、细菌＞放线菌＞真菌 B、细菌＞真菌＞放线菌 C、放线菌＞真菌＞细菌 D、真菌＞细菌＞放线菌
7、加大接种量可控制少量污染菌的繁殖，是利用微生物之间的（）。 A、互生关系 B、共生关系 C、竞争关系 D、寄生关系 8、下列孢子中属于霉菌无性孢子的是（） A、子囊孢子 B、孢囊孢子 C、卵孢子 D、接合孢子 9、霉菌适宜生长的PH范围为（） A、中性 B、中性偏碱性 C、中性偏酸性 D、酸性 10、放线菌属于（） A、病毒界 B、原核原生生物界 C、真菌界 D、真核原生生界 三.是非题（共10分。只需注明“对”或“错”） 1.大多数嗜热菌的G-C含量高于中温菌。 2.大肠杆菌属低等原核生物，所以其遗传物质只是一条松散的环状双链DNA，不存在DNA高级结构。 3.当菌体生长、氧吸收和糖利用的比速度下降时，青霉素的合成达到最高值。 4.初生F’菌株和次生F’菌株都属于部分二倍体。 5.分批培养时，细菌首先经历一个适应期，此期间细胞处于代谢活动的低潮，所以细胞数目并不增加。 6.渗透酶(permease)属于诱导酶，而其它种类的酶往往属于组成酶。 7.恒化培养与恒浊培养的区别在于前者的培养物群体始终处于对数生长期。 8.将HR病毒的外壳蛋白与TMV病毒的RNA混合，去感染烟草，则