第二节植物种苗脱毒技术
一、种苗脱毒的含义
1．外植体的来源：从感染病毒的植株上所剥离的茎尖分生组织。
2．培养方法：在离体条件下将外植体进行组织培养。
3．幼苗特点：不含病毒。
二、利用分生组织作为外植体的原因
1．农作物在种植过程中，经常会受到病毒、细菌和真菌等病原体的感染。
2．侵入植物体内的病毒可以通过维管束和细胞壁间的胞间连丝扩散到所有的组织器官。
3．植物的茎尖等分生组织处于分化的初级阶段，其组织内的维管束还未形成，此时植物体内的病毒只能通过胞间连丝移动到分生区，而这一移动过程远不及细胞分裂的速度，所以分生区一般不会受到病毒侵染。
三、马铃薯脱毒苗的培养程序
取材和消毒：剪芽并剥去外叶，自来水下冲洗 10 min，再用质量分数为5%的漂白粉溶液消毒后，用无菌水冲洗2～3次。
↓
剥离和接种：在解剖镜下，用解剖刀小心地除去茎尖周围的叶片组织，露出分生区，用解剖针细心剥取所需的茎尖，并将其接种于MS培养基上，切面接触培养基。
↓
培养：将接种的茎尖置于25 ℃、1 500 lx～3 000 lx光照条件下培养。
预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中
植物种苗脱毒的保障与方法
1．保障脱毒苗无毒的方法
(1)选取的外植体为分生组织。
(2)对材料消毒。
(3)所用培养基经过严格灭菌。
(4)操作过程为无菌操作。
(5)培养室为无菌室。
2．几种脱毒方法
材料一微繁殖技术又称快速繁殖技术，就是将植物体的一部分组织小块进行培养，并诱导分化成大量的小植株，从而达到快速无性繁殖的目的。在20 m2的培养室内最多可容纳100万株试管苗。这一技术已有几十年的历史，现已基本成熟，并形成诸如工厂化生产兰花这样产值巨大的工业生产体系。
材料二植物的脱病毒技术是微繁殖的一个分支，植物病毒严重地影响着农业生产，对于无性繁殖的植株来说，一旦感染上病毒就会代代相传，日趋严重。但在茎尖分生组织中，细胞繁殖十分迅速，病毒还未侵入，因此就成了植物体相对无病毒的特殊区域。
阅读上述材料请回答：
(1)利用微繁殖技术繁殖植物的方法称为________。
(2)利用微繁殖技术繁殖植物的优点是________。
(3)若要进行兰花无病毒植株的培育，首先要选择外植体，选择对象为兰花的________。
(4)对外植体进行消毒用________、________。克服外植体培养过程中的________是实验成功的关键。
(5)探索愈伤组织诱导和分化的条件需要做大量的工作。实践表明在MS培养基上添加激素的________、________、________、________等都会影响实验结果。另外不同的植物对各种环境条件的要求往往不同，除上述因素外，________、________、________等也影响实验结果。
【审题导析】
【精讲精析】植物组织培养是人工快速繁殖植物个体的方法，不受自然环境条件的影响，可进行大规模的工厂化生产。利用植物的茎尖等无毒区域作为外植体，经过无菌操作，可获得无病毒植株。培养过程中根据需要配制不同的培养基来满足外植体的需求，除培养基外，温度、酸碱度、光照等也会影响实验结果。
【答案】(1)植物的组织培养
(2)繁殖速度快、周期短、不受季节气候、自然灾害等因素的影响，并可实现工厂化生产
(3)茎尖分生组织
(4)体积分数为70%的酒精
质量分数为2%的次氯酸钠溶液污染问题
(5)种类浓度使用的先后顺序用量比例酸碱度温度光照
影响脱毒的因素
(1)母体材料病毒侵染的程度。
(2)起始培养的茎尖大小。
(3)离体茎尖大小对马铃薯脱毒效果的影响。
(4)外植体的生理状态。
植物种苗脱毒成败的关键是( )
A．培养基营养是否全面
B．培养条件是否适宜
C．接种操作是否正确
D．无菌操作及是否取得没有侵入病毒的分生区细胞
【解析】要使种苗脱毒成功，首先外植体不能带毒，其次要进行严格的无菌操作，防止病毒感染。
【答案】 D
1．关于病毒在植物体内扩散途径最准确的描述是( )
A．导管B．筛管
C．导管和筛管D．维管束和胞间连丝
【解析】病毒在植物体内的扩散途径是维管束和细胞壁间的胞间连丝。导管和筛管只是维管束的组成部分。
【答案】 D
2．植物种苗脱毒中的“脱毒”是指( )
A．脱去病毒
B．脱去真菌、细菌
C．脱去所有病原微生物
D．以上说法都不对
【解析】病毒、细菌、真菌等病原体都能导致农作物产量降低、品种退化。种苗脱毒是指清除所有有害的病原体。
【答案】 C
3．“种子银行”获得一批珍贵的种子，后来发现它们已经感染病毒。若要进行脱毒，应选择________作为外植体，利用________技术获得试管苗即可。整个过程要严格进行________操作。
【解析】茎尖和根尖的分生组织一般不含病毒，可作为外植体。利用植物组织培养技术可以获得试管苗，移植得植株。但植物组织培养过程要严格进行无菌操作。
【答案】茎尖(或根尖) 组织培养无菌
学业达标测评(十三)
一、选择题
1．植物组织培养过程中的再分化是指( )
A．植物体的分生组织通过细胞分裂产生新的细胞
B．愈伤组织重新分化成根或芽等器官的过程
C．植物的器官、组织或细胞，通过离体培养产生愈伤组织的过程
D．取下植物的枝芽培育成一株植物的过程
【解析】再分化指脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽器官的过程。
【答案】 B
2．下列有关马铃薯脱毒苗培养的叙述，正确的是( )
A．可以切取马铃薯的任何部位培养
B．获取的马铃薯外植体直接接种至土壤中培养
C．接种的外植体需放置在黑暗中培养
D．脱毒的马铃薯是否脱毒成功，可检测出来
【解析】马铃薯脱毒也要选茎尖作为外植体；获取外植体后要进行植物组织培养；培养时要给予一定的光照。
【答案】 D
3．采用组织培养的方法不能解决的问题是( )
A．分株繁殖缓慢
B．种子繁殖困难
C．增多品种的类型
D．病毒感染严重
【解析】组织培养属于无性繁殖，其优点是可以快速大量获得试管苗，并可获得脱毒苗，但由于遗传物质没有发生改变，因此不能增多品种的类型。
【答案】 C
4．某组织培养实验室的愈伤组织被真菌严重污染，为查找污染原因设计了4个实验，实验条件除图示外其他均相同。下列各图表示实验结果，据图得出的初步结论错误的是( )
A．污染主要不是培养基灭菌时间短造成的
B．污染主要来源于组织培养所用的离体组织
C．调节培养基pH不能解决污染问题
D．调节培养温度能有效解决污染问题
【解析】据题图可知，污染率与培养基灭菌的时间、培养基pH以及培养温度并没有规律性关系；而延长离体组织消毒时间，污染率降低，因此可得出污染的主要来源是离体组织。
【答案】 D
5．在下列选项中，需要采用植物组织培养技术的是( )
①利用秋水仙素处理萌发的种子或幼苗，获得多倍体植株
②获取大量的脱毒苗
③利用基因工程培养抗棉铃虫的植株
④单倍体育种
⑤无子西瓜的快速大量繁殖
A．①②③B．②③④⑤
C．①②④⑤ D．②③④
【解析】多倍体的获得不需要进行组织培养。脱毒苗的获取、培养抗虫植株、单倍体育种以及无子西瓜的快速繁殖都需要组织培养。
【答案】 B
6．下列有关植物种苗脱毒技术原理的叙述错误的是( )
A．侵入植物体内的病毒可以通过维管束和胞间连丝进行扩散
B．分生组织内的维管束和胞间连丝还没有形成，故这些组织内还没有侵入病毒
C．病毒在分生组织内扩散的速度比细胞分裂的速度慢
D．植物种苗脱毒技术的基础性技术手段是植物组织培养
【解析】本题主要考查植物种苗脱毒技术原理。侵入植物体内的病毒主要是通过维管束和胞间连丝进行扩散的，但处于分化初级阶段的分生组织内还没有形成维管束，病毒主要是通过胞间连丝进行扩散，而扩散的速度远不及细胞分裂的速度快，所以分生区细胞一般不
含有病毒，可以作为植物组织培养的材料来生产脱毒植株。
【答案】 B
7．马铃薯利用它的块茎进行无性繁殖，种植的世代多了以后，往往会感染病毒而减产，为此农户都希望得到无病毒的幼苗进行种植。获得无病毒植株的最佳办法是( ) A．选择优良品种进行杂交
B．进行远缘植物体细胞杂交
C．利用芽的分生组织培养
D．人工诱导基因突变
【解析】马铃薯被植物病毒侵染后引起品质下降，可利用植物组织培养技术进行脱毒。具体做法是选取无病毒芽体或无病毒的植物细胞进行组织培养，可获得无病毒植株。
【答案】 C
8．下列关于马铃薯种苗脱毒的说法，不正确的是( )
A．马铃薯种苗脱毒时，切取的茎尖越小越有利于成活
B．种苗脱毒时要经过脱分化和再分化两个过程
C．种苗脱毒时需要使用生长素和细胞分裂素
D．种苗脱毒是否成功可用脱毒苗快速检测试剂盒进行检测
【解析】种苗脱毒时，切取的茎尖越小脱毒效果越好，但茎尖越小，培养速度越慢，不易成活。
【答案】 A
二、非选择题
9．(2014·广东高考)铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一。应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎(简称PLBs，类似愈伤组织)生产生物碱的实验流程如下：
新生营养芽――→
诱导
PLBs――→
增殖培养
PLBs――→
不同时间
取样、检测
实验
结果
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图所示，请回答下列问题：
(1)选用新生营养芽为外植体的原因是_______________，_______________诱导外植体形成PLBs的过程称________。
(2)与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在________________，
________________，________________。
(3)脱落酸(ABA)能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案时探讨了以下问题：
①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基________后按比例加入。
②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品(PLBs)称重(g/瓶)后再测定生物碱含量。如初始(第0天)数据已知，实验过程中还需测定的样品数为________。
③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品(重复样)的________时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
【解析】(1)选用新生营养芽为外植体是因为其分裂能力旺盛且几乎不携带病毒。诱导外植体形成类似愈伤组织的PLBs的过程称为脱分化。(2)分析曲线图可知，在光照条件下PLBs开始增重的时间早，增重持续的时间长，增重的量更多。(3)①ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基灭菌冷却后按比例加入。②据题意可知，该实验共设置4个实验组和1个对照组，共5组；实验50天完成，每10天取样，初始数据已知，只需测5次，故5组样品重复3次，共需测定的样品数为25×3＝75。③在适宜的ABA浓度和适宜的培养时间下，样品生物碱含量最高。
【答案】(1)营养芽细胞分裂能力强，几乎不含病毒脱分化(2)开始增重的时间早增重持续的时间长PLBs增重的最更多(3)①灭菌冷却②75③生物碱产量最多
《植物生物学》课程教学大纲 一课程基本信息 1 课程名称（中/英文）：植物生物学/Plant Biology 2 课程性质：专业必修 3 周学时/学分：3/3 4 授课对象：生命科学学院生命科学与技术基地班2008级 5 使用教材：周云龙主编《植物生物学》（第二版）北京：高等教育出版社，2004年。 二课程简介 本课程是一门综合性的植物基础学科，包括传统植物形态学、植物分类学、植物生理学以及植物发育生物学的主要内容，通过本课程的学习，使学员掌握关植物结构及其功能和生理作用、植物多样性及分类、植物与环境的关系和植物进化的较为全面而基础的理论知识。 在绪论中，我们简单介绍植物的重要性、人类对植物的认识和植物生物学的学习方法，为正文的展开作一个开头。生命的基本单位是细胞，因此该课程首先以学习细胞的结构和功能以及由此形成的植物组织（第一章），然后介绍植物体的形态结构（第二章），以及植物的繁殖（第三章）。学习了植物的形态结构后，学习植物的生命活动，即分别在、四、五、六章介绍的植物的无机营养、光合作用以及植物的生长发育及其调控。在学习了个体生物学基础上，我们将按系统发育的顺序介绍地球上长期进化发展所形成植物多样性，包括藻类与地衣、苔藓、蕨类、裸子和被子植物，学习其鉴别特征和一些重要的代表植物类群（第七至十一章）。无论什么植物都离不开环境，植物多样性是在不同的环境因子组合条件下发展起来的，因此接下来讨论植物与环境的关系（第十二章）。进化是生物学的统一主题，是生物界发展变化和生物多样性产生原因的理论解释，因此我们将以进化的讨论结束课程主要内容的学习（第十三章）。最后是人类与植物关系的探讨，由学员们课外自学。 本大纲按教学计划规定的总学时为54学时，用一个学期完成授课，18周，每周3节。但按本学期学校安排，本学期授课18周，19周开始为期末考试时间，又因第六周为国庆，其中还有一次为期中考试时间，故实际授课周数为16周，总授课48学时。因课时较少，内容较多，所以部分内容安排学生自学，自学学时教师不作硬性安排，由学生自己掌握。 三教学目的与基本要求 本课程的基本目的首先在于使学生系统掌握植物的细胞、组织、器官的形态特征及功能，掌握营养器官和繁殖器官的解剖结构的基本知识；了解植物的生理、代谢及发育的基本知识；了解植物的多样性，各大类群及其相互之间的亲缘关系和系统发育的规律，并能够熟练地运用分类学原理识别植物，从而为以后学习其它课程打下基础，也立足于服务将来进一步的植物科学方面的科研和工作。其次在此基础上训练学员应用这些知识和原理分析和解释现实生活和生产实践中出现的有关植物的实际问题，第三，结合实验教学，使学生掌握一定的植物学研究实验技能，培养学生独立观察生命现象、提出问题、分析和解决问题的能力和创新精神。 四教学进度表
植物组培培养基的成分 培养基是人工配制的，满足不同材料生长，繁殖或积累代谢产物的营养物质。在离体培养条件下，不同种类植物对营养的要求不同，甚至同一种植物不同部位的组织以及不同培养阶段对营养要求也不相同。筛选合适的培养基是植物组织培养极其重要的内容，是决定成败的关键因素之一。 大多数植物组织培养基的主要成分是无机营养物质（大量营养元素和微量营养元素）、碳源、有机添加物、植物生长调节剂和凝胶剂。一些组织可以生长在简单的培养基上，这些培养基只含无机盐和可利用的碳源（蔗糖），但大多数组织必须在培养基中添加维生素、氨基酸和生长物质，而且经常还将一些复合的营养物质加入到培养基中，这种由“化学定义”的化合物组成的培养基称为“合成”培养基。 人们已设计了许多培养基用于特殊组织和器官的培养。 怀特培养基是最早的植物组织培养基之一，最初作为根培养的培养基。为了诱导培养组织器官发生和再生植株，广泛使用含有大量无机盐成分的MS（Murashige和Skoog，1962）和LS(Linsmaier 和Skoog，1965)培养基。原本为细胞悬液或愈伤组织培养而设计的B5培养基，经过改良后，被证实有利于原生质体培养。同时，B5培养基也被用于诱导原生质体再生植株。尽管Nitshch(1969)为花药培养设计的培养基仍然使用频繁，但另一个称为N6的培养基，专门用于禾谷类花药培养和其他组织培养。类似的，N6培养基越来越多地
用于大豆、红三叶草和其他豆科植物的培养。该培养基营养成分促进胚性细胞和原生质体再生细胞快速生长。使用这些培养基成功的原因很可能是营养元素的比例和浓度基本上满足不同培养体系中细胞或组织生长和分化的最适需要。 植物组织培养基中无机和有机成分的浓度用质量浓度（mg/L 或ppm，但现在习惯用mg/L）或物质的量浓度(mol/L)表示。按照国际植物生理学协会的推荐，应该用mol/L表示大量营养元素和有机营养成分浓度，用μmol/L表示微量营养元素、激素、维生素和有机成分浓度。用物质的量浓度的优点是，每一种化合物每一摩尔的分子数是常数，所以按照特定培养基配方配制培养基时，无论无机盐化合物的水分子数为多少，原物质的量浓度都可以使用。但是，用质量浓度来表示浓度的话，就不能不考虑无机盐化合物的水分子数目了。 1、水分 水分是植物体的主要组成部分，也是一切代谢过程的介质和溶媒，在植物生命活动过程中不可缺少。配制培养基母液时要用蒸馏水或纯水，以保持母液及培养基成分的精确性，防止储藏过程中发霉变质。研究培养基配方时尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。而在大规模工厂化生产时，为了降低生产成本，常用自来水代替蒸馏水。如自来水中含有大量的钙、镁、氯和其他离子，最好将自来水煮沸，经过冷却沉淀后再使用。
植物组织培养脱毒方法综述 摘要：植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素，通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料，综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词：组织培养；脱毒；茎尖培养 正文： 植物病毒分布广、危害大，对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来。随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术，病毒病开始流行，严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此，本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述，以期从中得到启示，进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等，其中由于茎尖培养脱毒效果好，是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径。研究表明，如果将不同的方法结合起来应用效果会更好，通常将茎尖结合热处理来脱毒。 1、茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理：在染病毒植株体内，病毒分布并不均匀，在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播，在分生区内无维管束，病毒扩散慢，加之植物细胞不断分裂增生，所以病毒含量少，在茎尖生长点几乎检测不出病毒，因此切取茎尖愈小愈好，但实际操作中茎尖取太小不易培养成活，过大又不能去毒。 1．1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20～40倍解剖显微镜下，用解剖刀剥取0．1～1 mm 的茎尖，迅速放入培养基中，如果在空气中暴露时间过长，就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明，带有一个叶原基的茎尖，脱毒效果最好，成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中，在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除，在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1～2片叶原基的生长点，生长点大小约在0.3～0.5 mm左右。大于以上尺寸脱毒率将会下降，反之成活率将会下降，迅速将摘出的生长点置于培养基中。就香石竹而言，切掉叶柄后，生长点是在几重叶原基的包围下，要从外到内逐一切掉外层叶原基，当生长点露出时把包括1—2片叶原基在内的生长点切下，迅速移入事先预备好的培养基内，注意生长点的方向及不要把生长点埋在培养基内。在康乃馨的茎尖培养中取带有1—2个叶原基、长0.2-0.3 mm的茎尖接种到培养基上，接种时只须沾取茎尖置于轻轻划破的培养基表面即可。洋葱可用0.5—0.7 mm茎尖培养，能有效地脱除洋葱中的O YDV和GI v病毒。在对白葱的茎尖脱毒研究表明，以带有1片叶原基大小为0.2-0.6 mm的茎尖外植体较为适宜。 1．2 茎尖培养可能出现的问题及防治方法 茎尖培养可能出现褐化、玻璃化等现象，这会严重影响植物的成活率，所以
第二节植物种苗脱毒技术 一、种苗脱毒的含义 1．外植体的来源：从感染病毒的植株上所剥离的茎尖分生组织。 2．培养方法：在离体条件下将外植体进行组织培养。 3．幼苗特点：不含病毒。 二、利用分生组织作为外植体的原因 1．农作物在种植过程中，经常会受到病毒、细菌和真菌等病原体的感染。 2．侵入植物体内的病毒可以通过维管束和细胞壁间的胞间连丝扩散到所有的组织器官。 3．植物的茎尖等分生组织处于分化的初级阶段，其组织内的维管束还未形成，此时植物体内的病毒只能通过胞间连丝移动到分生区，而这一移动过程远不及细胞分裂的速度，所以分生区一般不会受到病毒侵染。 三、马铃薯脱毒苗的培养程序 取材和消毒：剪芽并剥去外叶，自来水下冲洗 10 min，再用质量分数为5%的漂白粉溶液消毒后，用无菌水冲洗2～3次。 ↓ 剥离和接种：在解剖镜下，用解剖刀小心地除去茎尖周围的叶片组织，露出分生区，用解剖针细心剥取所需的茎尖，并将其接种于MS培养基上，切面接触培养基。 ↓ 培养：将接种的茎尖置于25 ℃、1 500 lx～3 000 lx光照条件下培养。 预习完成后，请把你认为难以解决的问题记录在下面的表格中
植物种苗脱毒的保障与方法 1．保障脱毒苗无毒的方法 (1)选取的外植体为分生组织。 (2)对材料消毒。 (3)所用培养基经过严格灭菌。 (4)操作过程为无菌操作。 (5)培养室为无菌室。 2．几种脱毒方法 材料一微繁殖技术又称快速繁殖技术，就是将植物体的一部分组织小块进行培养，并诱导分化成大量的小植株，从而达到快速无性繁殖的目的。在20 m2的培养室内最多可容纳100万株试管苗。这一技术已有几十年的历史，现已基本成熟，并形成诸如工厂化生产兰花这样产值巨大的工业生产体系。 材料二植物的脱病毒技术是微繁殖的一个分支，植物病毒严重地影响着农业生产，对于无性繁殖的植株来说，一旦感染上病毒就会代代相传，日趋严重。但在茎尖分生组织中，细胞繁殖十分迅速，病毒还未侵入，因此就成了植物体相对无病毒的特殊区域。 阅读上述材料请回答：
第一章 概念： 生物技术:是指人们以现代生命科学为基础，结合先进的工程技术手段和其它基础学科的科学原理，按照预先的设计改造生物体或加工生物原料，为人类生产出所需的产品或达到某种目的的科学。 植物生物技术：对植物的品质和性状进行改造的生物技术。 组织培养：在无菌和人为控制外因条件下，培养，研究植物组织器官，甚至进而从中分化，发育出整株的技术。 细胞工程：指以细胞为基本单位，在体外条件下进行培养，繁殖，或人为地使某些生物学特性按照人们的意愿产生某种物质的过程。 细胞全能性：指细胞经分裂和分化后仍具有形成完整有机体的潜能或特性。 培养基：含有各种被培养生物材料生长所需要的营养成分的培养基质。 灭菌：指消除实验设备或材料上的所有微生物。 消毒：仅指消除可能造成污染或侵染的有机体。 简答题 1植物生物技术包括哪几方面？ ①植物组织培养（细胞工程）②基因克隆与转基因植物生产③分子标记及辅助育种应用 2说明生物技术与农业生产的关系 ①传统农业技术在农业生产中仍将发挥主导作用，不可用生物技术全面替代，如新品种选 育。 ②生物技术和传统技术结合可以加速研究进程。 ③生物技术可以大幅度提高农产品的附加值。 ④生物技术的出现使大批农业公司被生物技术公司替代，使农业经营领域发生变革。 3生物技术涵盖的内容有哪些？ 4建立植物组织培养实验室需要哪些实验室设置和主要设备？ 实验室设置：（1）清洗和贮存玻璃皿器，塑料皿器和其他实验皿器。 （2）培养基的配制，灭菌和贮存（3）植物材料和无菌操作（4）可控温度，光照，湿度的条件，以对材料进行体外培养。（5）培养物生长发育过程的显微观察。 还有培养室，实验室，培养基室。 主要设备：（1）洗涤设备：洗涤架、干燥箱（2）灭菌设备：高压灭菌锅、消毒器（3）配制培养基设备：纯水器、天平、PH计、搅拌器、移液器、（4）无菌操作设备：超净工作台（5）培养设备：摇床、培养箱、培养架、空调（6）细胞学观察设备。 5培养基的营养成分有哪些？ （1）无机营养成分 大量元素（浓度>0.5mmol/L)：N、P、K、S、Ca、Mg 微量元素（浓度<0.5mmol/L) ：Fe、Cu、Zn、Mn、B、Cl （2）有机营养成分：主要包括碳源和维生素类 （3）植物生长调节物质：生长素，细胞分裂素等 6灭菌的方法包括哪些？其基本原理是什么？ （1）高温灭菌法，原理：将待灭菌的物品放在一个密封的高压高温灭菌锅内，在1210C 高压和每平方厘米1个大气压下，一般持续15~20分钟，就可以杀死一切微生物的营养体及其孢子，适于器皿，工具，衣物和培养基灭菌。 （2）过滤灭菌法，原理：将带菌的液体或者气体通过一个孔径小于0.45u微孔滤器装置，使气，液体通过滤膜流入无孔瓶中。主要用于不能利用高温高压灭菌的培养基成分。
植物生物学实验教案授课专业：生物科学、农学主讲：
实验1 光学显微镜及体视镜的构造和使用方法 一、实验目的 1、了解光学显微镜及体视镜的一般构造和性能； 2、学会正确地使用光学显微镜及体视镜，熟练地掌握对光，低高倍物镜的使用技术， 以及显微镜的维护； 3、学会临时装片的制作和徒手切片。 二、重点与难点 正确地使用光学显微镜及体视镜，熟练地掌握对光，低高倍物镜的使用技术。三、教学方法与手段 本次课主要采取讲授法和讨论法，在学生实验过程中辅以个别指导进行教学。 四、实验内容 1、光学显微镜的构造、使用方法及维护； 2、临时装片的制作及徒手切片的练习； 3、体视镜的一般结构及使用方法。 五、实验材料 洋葱（Allium cepa）根尖永久装片；洋葱（Allium cepa）鳞片叶；油菜（Brassica campestris）或水稻（Oryza sativa）花粉。 六、实验用品 普通光学显微镜、体视显微镜；镊子、载玻片、盖玻片、培养皿、纱布、吸水纸、擦镜纸、滴瓶、毛笔；碘液、水。 七、实验方法 （一）普通光学显微镜的构造、使用方法及维护 1、显微镜的构造 显微镜的基本结构可以分两部分，即光学部分与机械部分。 （1）光学部分 ①物镜、②目镜、③聚光器、④虹彩光圈、⑤反光镜、⑥镜筒 （2）机械部分 ①镜座、②镜柱、③镜臂、④载物台、⑤物镜转换器、⑥调焦螺旋 2、显微镜的使用方法 （1）正确安置显微镜、（2）对光、（3）低倍物镜的使用、（4）高倍物镜的使用（5）浸油物镜的使用、（6）显微镜的使用练习、（7）用毕复原 3、显微镜的放大倍数 4、光学显微镜的显微测微法 （1）显微测微计 ①镜台测微计、②目镜测微计 （2）测量方法
植物组织培养脱毒方法综述 符国芳,李 青 (北京林业大学,北京100083) 摘要:植物病毒是制约花卉产业发展的重要因素,通过茎尖处理、茎尖结合热处理、冷处理、化学药剂处理及愈伤组织处理等方法可以去除植物病毒。通过查阅国内外研究文献和资料,综合阐述了茎尖培养脱毒、热处理脱毒、化学药剂培养脱毒、愈伤组织脱毒、冷处理脱毒等方法。 关键词:组织培养;脱毒;茎尖培养 中图分类号:S432 4+1 文献标识码:A 文章编号:1002-7351(2007)03-0255-04 Summarization on the methods of virus elimination by plant tissue culture FU Guo fang,LI Qing (Beijing Forestry U niversity ,Beij ing 100083,China) Abstract:Plant virus is the factor that inhibits flow er industr y development Plant v irus can be eliminated by shoot tip treatment,shoot t ip and heat treatment,cold treatment,chemical treatment and callus treatment,so o n By searching the research bibliog ra phies home and abr oad,this paper describes the methods to eliminate v irus by shoot t ip culture,heat treatment,chemical treat ment,callus treatment and cold treatment,so on Key words:tissue culture;vir us elimination;shoot tip culture 植物病毒分布广、危害大,对世界花卉产业的发展产生了巨大的冲击。近年来,随着我国从国外引种花卉的种植面积的扩大以及不规范的繁殖技术,病毒病开始流行,严重影响了中国花卉产业的发展。目前国内外多用组织培养脱毒方法来阻止病毒病的继续传播以便提高植物的产量和质量。因此,本文对当前植物组织培养脱病毒方法作了综述,以期从中得到启示,进一步促进植物脱毒方法及应用的相关研究。 植物组织培养脱毒方法有茎尖培养脱毒、热处理脱毒、冷处理脱毒、化学药剂处理脱毒、花药培养脱毒、愈伤组织脱毒、珠心胚培养脱毒、茎尖微体嫁接脱毒等,其中由于茎尖培养脱毒效果好,是目前植物无病毒苗培育应用最广泛、最重要的一个途径 [1]。研究表明,如果将不同的方法结合起来应用效果会更好, 通常将茎尖结合热处理来脱毒。1 茎尖培养脱毒 茎尖培养脱毒原理:在染病毒植株体内,病毒分布并不均匀,在生长点病毒含量最低。病毒通过维管束和胞间连丝传播,在分生区内无维管束,病毒扩散慢,加之植物细胞不断分裂增生,所以病毒含量少,在茎尖生长点几乎检测不出病毒,因此切取茎尖愈小愈好,但实际操作中茎尖取太小不易培养成活,过大又不能去毒[2]。 1 1 茎尖培养的方法及注意事项 将消毒后的材料放置在20~40倍解剖显微镜下,用解剖刀剥取0 1~1mm 的茎尖,迅速放入培养基中,如果在空气中暴露时间过长,就会因失水引起茎尖死亡。赵军良等人的研究表明,带有一个叶原基的茎尖,脱毒效果最好,成活率最高[3]。不同的植物材料茎尖剥取的方法和最适合脱毒的茎尖大小不同。在菊花的茎尖培养中,在超净工作台内将消毒后的茎尖中用肉眼能看到的叶柄切除,在实体解剖镜下用解剖刀剥离顶芽至露出带有1~2片叶原基的生长点,生长点大小约在0 3~0 5mm 左右,大于以上尺寸脱毒率将会下降,反之成活率将会下降,迅速将摘出的生长点置于培养基中 [4]。就香石竹而言,切掉叶柄后, 收稿日期:2007-01-08;修回日期:2007-03-15 作者简介:符国芳(1982-),女(土家族),湖南张家界人,北京林业大学硕士研究生,从事园林植物组织培养研究。第34卷第3期 2007年9月福建林业科技Jour of F ujian Forestry Sci and T ech V ol 34 N o 3Sep ,2007
课程名称植物生物学 英文名称 Plant Biology 【课程编号】021*******【课程类别】学科基础课 【学分数】5 【适用专业】生物专业和生物技术专业【学时数】64（理论课）+96（实验课）【编写日期】2009年7月 一、教学目标 通过对该课程的学习，为植物科学各分支学科及相关生命科学内容的选修和深入学习奠定一定的植物科学的知识基础，提高学生的能力与素质，使学生达到综合性研究型大学生物学专业全日制本科毕业水平，培养合格的人才以适应21世纪科学发展的需要。了解植物科学研究的新方法、新思路以及学科发展的新趋势。培养良好的自学能力和科学的学习方法，较为熟练地解决实际中的植物科学问题。 二、教学内容和学时分配 （一）总论（或绪论、概论等）4学时（课堂讲授学时1+课程实验学时3） 主要内容： 本章介绍植物在生物分界中的地位；植物在自然界和人类生活中的作用；植物科学的研究对象和基本任务；植物科学在自然科学和国民经济发展中的意义；植物科学的发展简史和当代植物科学的发展趋势；学习植物生物学的要求和方法。 第一节植物在自然界和人类生活中的作用 内容：植物在自然界中的作用（包括对环境的保护作用），植物在人类生活中的作用。 第二节植物在生物分界中的地位 内容：生物界的划分。 第三节植物科学的研究对象和基本任务 内容：植物科学的研究对象和基本任务。 第四节植物科学在自然科学和国民经济发展中的意义 内容：植物科学在自然科学的意义，植物科学在国民经济发展中的意义。 第五节植物科学的发展简史和当代植物科学的发展趋势 内容：描述植物学时期，实验植物学时期，现代植物学时期，中国植物科学的发展简要回顾。 第六节学习植物生物学的要求和方法 内容：学习植物生物学的要求和方法
植物组织培养MS培养基配方 （一）母液配制与保存 配制培养基时，如果每次配制都要按着杨成分表依次称量，既费时，又增加了多次称量误差。为了提高配制培养基的工作效率，一般将常用的基本培养基配制成10～200倍，甚至1000倍的浓缩贮备液，即母液。母液贮存于冰箱中，使用时，将它们按一定的比例进行稀释混合，可多次使用，并在配制较多数量的培养基时，降低工作强度，也提高试验的精度。 基本培养基的母液有四种：大量元素（浓缩20倍），微量元素（浓缩100倍），铁盐（浓缩200倍），除蔗糖之外的有机物质（浓缩100倍） 1大量元素 配制大量元素母液时要分别称量，分别溶解，在定容时按表1中的序号依次加入容量瓶中，以防出现沉淀。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保存。 表1大量元素母液（配1L20倍的母液） 序号成分配方浓度/（mg.L-1）称取量/mg 配1mL培养基吸取 量/mL 1 硝酸铵NH4NO3 1650 33000 50 2 硝酸钾KNO 3 1900 38000 3 磷酸二氢钾KH2PO 4 170 3400 4 七水合硫酸镁MgSO4.7H2O 370 7400 5 氯化钙无水CaCl2 440 6644 2微量元素母液 在配制微量元素母液时，也应分别称量和分别溶解，定溶时不分先后次序，可随意加入溶量瓶中定容（表2），一般不会出现沉淀现象。倒入磨口试剂瓶中，贴好标签和做好记录后，可常温保存或放入冰箱内保有存。 表2微量元素母液(配制1L100倍母液) 成分配方浓度/(mg.L-1) 称取量/mg 配制1L培养基吸取 量/mL 碘化钾KI 0．83 83 10 硫酸锰MnSO4.H2O 22．3 2230 硼酸H3BO3 6．2 620 硫酸锌ZnSO4.7H2O 8．6 860 钼酸钠Na2MoO4.2H2O 0．25 25 硫酸铜CuSO4.5H2O 0．025 2．5 氯化钴CoCl2.6H2O 0．025 2．5 3铁盐母液 由于铁盐无机化合物不易被植物吸收利用，只有基螯合物才能被植物吸收利用，因此需要单独配成螯合物母液表3）。 配制方法：称取5.56g硫酸亚铁和7.46g乙二胺乙酸二钠，分别用450ml的去离子水溶解，分别适当加热不停搅拌，分别溶解后将硫酸亚铁溶液缓缓加入到乙二胺四乙酸二钠溶液中，将两种溶液混合在一起，最后用去离子水定溶于1000mL，倒入棕色贮液瓶中，贴好标签和做好记录后放入冰箱内保存。
植物生物学教学大纲 课程编号：1200034 课程名称：植物生物学 英文名称：Plant Biology 学分：2 总学时：34 实验学时：34 适用年级专业（学科类）：生物技术（二年级第一学期） Ⅰ课程说明 （一）制定教学大纲的指导思想、原则依据 本教学大纲是以马列主义思想为指导，坚持辩证唯物主义和理论联系实际的原则，根据植物生物学课的总体要求，结合我们的教学实践编写的。 （二）课程教学的目的和要求 植物生物学是从细胞、组织、器官、个体、类群、生态系统等不同层次，有机地阐述植物的形态、构造、生理、分类、分布、遗传变异和进化及其与环境相互关系的一门课程。目的是使踏入生物学大门的大学生对植物科学有一整体的了解，为学习后续课程打下较为广泛的知识基础和开阔的视野，培养全面、综合思维的能力。 （三）教学的难点和重点 1、本课程具有直观性和系统性强的特点，通过讲授和实践教学环节，要求学生掌握其基本理论、基本知识和基本技能，注意和提高学生分析问题、解决问题的能力和实际动手操作能力，同时注重基本理论知识的巩固，为相关专业课程奠定坚实的基础。 2、应采用讲授与实践教学紧密结合的教学模式，通过采用教学模型、实物以及电化教学手段，提高学生的学习兴趣，进一步加强直观教学。 3、在本教学中应注意理论联系实际，把相关的知识与农牧业生产实践有机地结合。（四）课程的知识范围及与相关课程的联系 植物生物学内容广泛，主要介绍植物的形态结构、分类及植物的生命活动规律等内容。进一步学习植物生理学、植物生态学、植物遗传学、细胞生物学、进化生物学、植物分子生物学等课程的基础。 （五）教材的选用 教材：《植物学》贺学礼主编，高等教育出版社，2004 主要参考书： 1、《Plant Function and Structure》 victor A Gneulach 1973 2、《Fundamentals of Botany》, J.L shreemali 1979 3、《植物生物学》杨世杰主编第一版2000，科学出版社。
植物组织培养的培养基中，需要添加糖类作为碳源物质，因此糖类是影响植物组织培养成功与否的关键之一。高中生物教材中明确指出，植物组织培养的培养基中添加的糖类是蔗糖。那么为什么不添加葡萄糖呢？很多资料上解释为蔗糖较葡萄糖便宜，易被植物细胞吸收。其实并非如此。之所以以蔗糖作为碳源，主要有三个方面的原因： （1）同样作为碳源为植物细胞提供能量来源，蔗糖较葡萄糖能更好地调节培养基内的渗透压。配制相同质量分数的培养基，蔗糖形成的渗透压要明显低于葡萄糖，因此若采用葡萄糖作为碳源，易使植物细胞脱水而生长不良。同时，植物细胞吸收蔗糖的速率要明显慢于吸收葡萄糖的速率，所以蔗糖形成的渗透压可相对长期的保持稳定。 （2）植物组织培养过程中，要时刻注意防止培养基受到微生物的污染。微生物生长所需的碳源最常用的是葡萄糖，一般很少利用蔗糖。因此，采用蔗糖作为培养基的碳源，可一定程度上减少微生物的污染。 （3）诱导作用。在培养基成分中，增加生长素的浓度，导致木质部形成，增加蔗糖浓度则导致韧皮部形成。当生长素水平恒定时，2％蔗糖使分化出的全部是木质部，4％蔗糖使分化出的几乎全部是韧皮部，3％蔗糖则可以分化出两者。所以，生长素和蔗糖浓度决定愈伤组织中维管束的类型与数量。因此，在植物组培中要选用蔗糖而不选用葡萄糖。 通过细胞膜内外的液体的浓度差来调节 当细胞膜内的浓度小于细胞膜外的时候蔗糖救能进入细胞中了 植物细胞培养中最常用的培养基的碳源是蔗糖，已知葡萄糖和果糖也能使某些植物生长得很好。植物细胞可以分解蔗糖，蔗糖是由一分子果糖和一分子葡萄糖组成的，蔗糖是可以直接进入细胞的，蔗糖跨质膜从质外体进入细胞是由载体介导并需要消耗能量的质子-蔗糖共运输机制进行的，另外，植物能够利用的某些其他形式的碳源有麦芽糖、半乳糖、甘露糖和乳糖等。葡萄糖更不稳定，培养基需添加葡萄糖一般都在灭菌后再兑换。实在要添加葡萄糖那么灭菌温度一般控制在108~110左右，120度灭出来的就有一定程度的碳化了。所以用蔗糖更简单 动物细胞只能吸收葡萄糖，二糖蔗糖是无法吸收的。 以蔗糖为植物培养基碳源有两个原因: 1.抑制杂菌生长.细菌等不能直接以蔗糖为碳源,故可起抑制其生长的作用 2.蔗糖被植物细胞利用机理目还无定论.主要有以下两个学说(1)植物细胞先以次级主动运输的方式在细胞内外形成质子梯度,然后蔗糖就会利用这个梯度被吸收进细胞. (2).植物的细胞壁中含有能分解蔗糖的相关酶,蔗糖先在细胞膜外被分解为单糖,然后这些单糖再以主动运输的方式进入细胞,从而被细胞利用.
第五章植物的组织培养技术第二节植物种苗脱毒技术 1．马铃薯可以进行的生殖方式是（） A．出芽生殖和有性生殖 B．分裂生殖和营养生殖 C．营养生殖和有性生殖 D．出芽生殖和营养生殖 2．利用植物的茎尖或叶片、茎段等，在无菌条件下，培养在玻璃器皿中人工配制的培养基上，使它发育成完整的植株。这种技术可以用来培育植物新品种、在较短的时间内大量繁殖植物、防止病毒的侵害。下列关于这种技术的叙述，正确的是（） ①这种技术利用了植物细胞的全能性②这种技术叫做组织培养，可以克隆生物体③这种技术属于细胞工程的应用领域之一④这种技术是一种无性繁殖的方式A．①②B．①②③ C．①②③④D．①②④ 3．甘薯种植多年后易积累病毒而导致品种退化。目前生产上采用茎尖分生组织离体培养的方法快速繁殖脱毒的种苗，以保证该品种的品质和产量。这种通过分生组织离体培养获得种苗的过程涉及细胞的（） ①有丝分裂②分化③减数分裂④全能性 A．①②③B．②③④ C．①③④D．①②④ 4．在下列选项中，没有采用组织培养技术的一项是（） A．花药离体培养得到单倍体植株 B．秋水仙素处理萌发的种子或幼苗得到多倍体植株 C．基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株 D．快速繁殖月季 5．在植物组织培养过程中，愈伤组织的形成和形态发生是十分关键的一步。除需要必备的营养外，还需要有起诱导作用的物质，这些物质是（） A．铜、锌等微量元素B．细胞分裂素和生长素 C．蔗糖和葡萄糖D．维生素和氨基酸 6．无菌技术是植物组织培养能否获得成功的关键，以下说法正确的是（） ①由于植物组织培养所利用的植物材料体积小、抗性差，对无菌操作的要求非常严格 ②对培养基及器具用高压蒸汽灭菌③对培养材料进行表面灭菌时，一方面要考虑药剂的消毒效果，另一方面还要考虑植物材料的耐受能力 ④培养中不同药剂、不同植物材料，甚至不同器官要区别对待⑤对培养材料可用高压蒸汽灭菌⑥如果不小心引起污染，将可能造成培养工作前功尽弃
生物工程综合实验—植物生物技术模块 生物工程教研组编 2017年春学期
目录 实验一植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知 (3) 实验二MS培养基母液的配制 (6) 实验三MS培养基配制与灭菌 (9) 实验四无菌接种操作 (12) 实验五外植体分化生长的诱导培养 (12) 实验六外植体脱分化生长的诱导培养 (17) 实验七组培苗的炼苗 (20)
实验一植物组培实验室设计和实验设备、实验用品认知 一、目的与要求 1、结合对植物细胞工程安徽省工程技术研究中心植物组织培养生产车间和研究实验室的现场认知，了解掌握植物组织培养实验室的组成和所需的基本仪器设备，学会植物组织培养实验室的设计； 2、为后续植物组培实验课程学习与实训准备所需的相关用品。 二、教学场所 1、植物细胞工程技术研究中心； 2、生物工程综合实验分室（A514）。 三、内容与方法 （一）关于植物组培实验室的认知与设计 1、组培实验室设计原则 要求环境干燥清洁；符合无菌操作规程要求；满足生产技术流程需要。 2、组培实验室的一般组成与设备 包括化学实验室、洗涤准备室、培养基制备室、无菌操作室、培养室、细胞学观察研究室，等。 （1）化学实验室 各种相关药品的贮存、溶液配制等。 主要设备：药品柜，防尘橱，冰箱，天平，蒸馏水发生器，加热器（电磁炉等），玻璃器皿，等。 （2）洗涤准备室 用于完成相关器具的洗涤、干燥、堆放存储等。 主要设备：洗涤池，洗瓶机，操作台，烘箱，储物架（柜）等。（3）培养基制备室
用于进行培养基的生产。 主要设备：冰箱，天平，蒸馏水发生器，酸度计，加热器（电磁炉等），玻璃器皿，分装机，灭菌设备，操作台，等。 （4）无菌操作室 主要用于植物材料的消毒、接种、培养物的继代等。无菌室的房间不宜太大，数量根据需要设置。要求干爽清洁，相对密闭，墙地光滑防潮，配置平移门。每一无菌室设内外二间，外间为缓冲室，内间较大，为接种室。 主要设备：紫外灯，超净工作台，臭氧发生器，酒精灯，接种器械（镊子、剪刀、解剖刀、接种针），手推车，等。 （5）培养室 是将接种的材料进行培养生长的场所，大小依规模而定。培养室的设计以充分利用空间和节省能源为原则。 主要设备：空调机，加热器，增湿器，培养架，光照设备，培养箱，转床，人字梯，等。 （6）细胞学观察室 用于进行培养物的取样观察和分析。 主要设备：显微镜，细胞染色、计数、制片设备，天平，离心机，等。（二）组培实验用品的准备 1、玻璃器皿及规格 （1）培养瓶：100~500 mL的玻璃或塑料培养瓶等； （2）培养皿：9～15 cm；（3）烧杯：100～5000 mL； （4）量筒：10～1000 mL；（5）移液管：1～10 mL； （6）试剂瓶：100～1000 mL；（7）容量瓶：100～1000 mL。 2、接种器械 酒精灯，不锈钢镊子、剪刀、解剖刀等。
实验一、植物组织培养基母液配制的若干关键环节目的与要求： 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法. 植物组织培养（plant tissue culture）是指植物的任何器官、组织或细胞，在人工预知的控制条件下，放在含有营养物质和植物生长调节物质等组成的培养基中，使其生长、分化形成完整植株的过程.植物组织培养具有取材少，培养材料经济；人为控制培养条件，不受自然条件影响；生长周期短，繁殖率高；管理方便，利于自动化控制等特点.因而被广泛应用于各种植物的快速繁殖之中. 为了避免每次配制培养基都要对几十种化学药品进行称量，应该将培养基中的各种成分，按原量10倍、100倍或1000倍称量，配成浓缩液，这种浓缩液叫做母液。这样，每次配制培养基时，取其总量的1/10、1/100、1/1000，加以稀释，即成培养液。现将培养液中各类物质制备母液的方法说明如下。 以MS培养基为例，其母液的配制包括大量元素、微量元素、铁盐、维生素、氨基酸、植物生长调节物质和有机附加物等种类.(见表1) 表1 MS培养基母液的配制 成分规定用量 /mg.L-1 扩大倍 数 称取量/ mg 母液定溶 体积/ml 配1LMS培 养基吸取量 /ml 大量元素 KNO3 NH4NO3 MgSO4·7H2O KH2PO4 CaCl2·2H2O 微量元数 MnSO4·4H2O ZnSO4·7H2O 1900 1650 370 170 440 22.3 8.6 20 20 20 20 20 1000 1000 38000 33000 7400 3400 8800 22300 8600 1000 1000 1000 1000 1000 1000 1000 50 50 50 50 50 1 1
《园艺植物生物技术》实验教案 实验一现代生物技术实验室与实验仪器 一、实验目的 实验室和实验仪器是开展现代生物技术研究的基础平台，对实验室布局和仪器配置的掌握程度是学生知识结构完整性的重要体现。华中农业大学国家农作物分子技术育种中心和国家柑橘育种中心的生物技术研究在国内一直处于领先地位并有重要国际知名度，其实验室布局和仪器配置能代表目前国内外生物技术实验室的整体情况，通过现场参观和老师讲解加深同学们对现代生物技术实验室的认识。 二、实验场所选择及实验内容 作物遗传改良国家重点实验室与开展现代生物技术研究直接相关的实验室分工与布局和主要仪器：如与组织培养有关的超净工作台、高压灭锅、接种至、培养室等；与分子生物学有关的如高速冷冻离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像系统等。 三、实验方法与步骤 1、相关背景知识回顾：对课堂讲述的各种生物技术如分子标记、细胞和组织培养等操作过程进行回顾，重要指出每个环节要用到的必备仪器的作用、性能指标、操作注意事项及仪器选购中应注意的问题等。 2、每班分为两小组简要介绍现代生物技术实验室的布局，及功能分区情况；针对每个分区的重要仪器进行讲述，结束时对所有参观内容进行简要总结，并回答同学们的提问 四、实验注意事项 实验有很多易损仪器或有毒试剂，参观时要求同学们认真记录，不要随意动手，以保证仪器和人身安全。 五、思考题 1、根据参观内容，描述本次参观有了解到的主要仪器的名称、用途及使用中的注意事项。 2、一个现代化生物技术实验室应具备的基本功能的必备仪器有哪些？
《园艺植物生物技术》实验教案 实验二植物组织培养 一、实验目的 植物组织培养是现代生物技术研究的重要技术手段，在原生质体融合、病毒脱除、离体快繁及遗传转化等领域发挥着不可替代的作用。胡萝卜以其培养体系成熟、再生容易而被视为组织培养的理想外植体材料，本实验通过胡萝卜的组织培养使同学们掌握基本培养基的配制、灭菌及培养的基本技能。 二、实验原理 基于1902年德国科学家哈勃兰特(HabrlMdt)提出植物细胞的全能性理论，即指已分化的细胞仍然具有分化发育成新个体的潜能。在适宜的培养条件下，植物的细胞、组织或器官都具备再生成完整植物的能力。 三、主要仪器及试材 仪器：PH计、微波炉、高压灭菌锅、超净工作台、培养室、三角瓶、封口膜、无菌滤纸、手术刀片、镊子、酒精灯、记号笔等 试材：新鲜胡萝卜，培养基配制所需相关试剂 四、实验方法与步骤 1、培养基的配制（小规模实验应按比例减少，避免造成很大的浪费）： 大量元素(10倍液)：称取下列药品分别溶解定容到1升后，加到5升存储瓶中。 KNO395 g NH4NO382.5 g KH2PO48.5 g MgSO4?7H2O 18.5 g CaCl2?2H2O 22.0 g 注意事项： 1、配置母液前要仔细清洗存储容器 2、应按照顺序分别彻底溶解后混合，每加完一种药品，摇动存储瓶使其混合均匀； 3、溶解时最好加热，以便充分溶解，避免沉淀的产生； 4、夏季要用新制的蒸馏水，并加热，这样可以避免因为水中带菌量过大而产生沉淀，同时可以减缓绿藻的生成； 5、沉淀的产生一是由于溶解不充分就混合造成的（浑浊型沉淀），所以配置时一定
植物生物学教案 第一章植物的细胞和组织 主要教学内容：植物细胞的化学组成、植物细胞的基本结构、植物细胞的新陈代谢、植物细胞繁殖、植物的组织概念和分类和组织系统 重点和难点：植物细胞的基本结构、植物细胞的分裂、植物组织的分类。 教学方式：课堂讲授4学时，实验3学时。以学生自学为主，教师课堂总结，重点讲解植物细胞的基本结构、植物细胞的分裂、植物组织的分类。 第一节细胞的化学组成 一、细胞是生物体结构和功能的基本单位，是生命活动的基本单位，也是生物个体发育和系统发育的基础。细胞具有遗传上的全能性。 1.细胞的发现 1665年，英国人罗伯特?虎克（R.Hook）观察软木片，发现软木由很多“小室”构成，形似蜂窝，他称其为“cell”，原意为小室，后来，随着研究的进展和细胞结构的进一步观察、发现，赋于“cell”以特定的意义，逐渐形成了“细胞”这一概念。实际上，他当时所观察到的是死细胞的空腔，细胞内的其他结构，是后来其他学者观察所发现的。 2.细胞学说 细胞学说的创立：植物学家施莱登（Schleiden）（德国）：于1838年提出，所有植物体都由细胞构成。 动物学家施旺（Schwann）（德国）：于1839年在动物研究中证实了上述结论。并首次提出“细胞学说”（Cell theory）这一概念。他提出：“动物和植物乃是细胞的集合体，它们依照一定的规律排列在动物和植物体内”。并明确提出：“一切动物和植物皆由细胞组成”。 二、无机化合物：水、无机盐 三、有机化合物：蛋白质，核酸，脂类，糖类。 第二节 植物细胞的基本结构 一、植物细胞的形态和大小 （一）植物细胞的形状 细胞单独生活时，呈球形，但在多细胞的植物体中，由于细胞互相挤压而呈多边的立体形状，高等植物体内的许多细胞其形状的特殊更体现着形态和功能和统一。 如起输导作用的细胞呈长筒形，支持器官的细胞呈纺锤形，吸水水肥的根毛细胞向外产生一条长管状突起，增大了它和土壤的接触面，许多薄壁细胞则常成为一种近于等径的多面体。细胞的形状由它所处的位置，执行的功能有关，是由遗传因素也就是细胞核控制的。（二）植物细胞的大小 大小差异很大，通常以微米来计算，细胞的直径一般为20-50μm，要在显微镜下才能观察。 二、细胞的基本结构 植物体的细胞由原生质体和细胞壁两部分组成。原生质体是活的具有生命特征的部分，细胞壁包在原生质体的外面。 （一）原生质体 原生质体的概念：构成生活细胞的除细胞壁以外所包含的各部分。 原生质的概念：构成原生质体的主要物质称为原生质。细胞中具有生命的物质基础。原生质是生命活动的物质基础，细胞内的一切代谢活动都在原生质内进行。包括质膜、细胞质和细胞核。细胞质又包括细胞器和胞基质 1．质膜
植物组织培养的一些注意事项 一、常用培养基主要特性 1、高盐成分培养基包括MS、LS、BL、BM、ER 等培养基。其中MS 培养基应用最广泛,其钾盐、铵盐及硝酸盐含量均较高, 微量元素种类齐全, 其养分数量及比例均比较合适, 广泛用于植物的器官、花药、细胞及原生质体的培养。LS、BM、ER 培养基由MS 培养基演变而来。 2 、硝酸钾含量较高的培养基包括B5 、N6 、LH、GS 等培养基。 ①B5 培养基B5 培养基除含有较高的钾盐外, 还含有较低的铵态氮和较高的盐 酸硫胺素, 较适合南洋杉、葡萄及豆科与十字花科植物等的培养。 ②N6 培养基N6 培养基( 朱至清等1975 ) 系我国学者创造, 获国家发明二等奖, 适用于单子叶植物花药培养, 柑橘花药培养也适合, 在楸树、针叶树等的组织培养中使用效果也好。 ③SH 培养基是矿盐浓度较高的一种培养基, 其中铵与磷酸是由磷酸二氢铵 ( NH4 H2 PO4 ) 提供的, 这种培养基适合于某些单子叶及双子叶植物的培养。 3 、中等无机盐含量的培养基 ①H 培养基本培养基大量元素约为MS 培养基的一半, 仅磷酸二氢钾及氯化钙稍低, 微量元素种类减少, 而含量较MS 为高, 维生素种类比MS 多。适于花药培养。 ②尼奇培养基(Niotsch 1969 ) 此培养基与H 培养基成分基本相同, 仅生物素比 H 培养基高10 倍。也适合于花药培养。 ③米勒培养基(Miller 1963 ) 此培养基和Blaydes(1966) 培养基二者成分完全相同。适合大豆愈伤组织培养和花药等培养用。 4 、低无机盐培养基大多情况下用于生根培养基。有以下几种: ①改良怀特培养基(White 1963 ) ②WS 培养基(Wolter & Skoog 1966) ③克诺普液( Knop 1965 ) 花卉培养上用得多。 ④贝尔什劳特液(Berthelot 1934) ⑤HB 培养基( Holley & Baker 1963) 此培养基在花卉脱毒培养和木本植物的茎尖培养中效果良好。其成分是大量元素比1/ 2 克诺普( Knop ) 液稍多, 微量元