淫羊藿苷提取工艺研究
作者：佚名科研信息来源：本站原创点击数：532 更新时间：2005-8-15
[关键词]：淫羊藿苷
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淫羊霍来源于小檗科 Beberidaceae淫羊藿属 Epimedium多种植物，为常用补肾壮阳中药，其主要成分为异戊烯取代的黄酮类化合物。对淫羊藿及其制剂的质量评价，大多以所含淫羊藿苷或总黄酮为指标。本文通过探讨不同提取溶媒、煎煮时间、浓缩时间及温度、药材粉碎度对淫羊藿苷含量的影响，为合理提取淫羊藿的活性成分提供参考。
1 仪器与试药
美国HP1100型高效液相色谱仪。淫羊藿苷对照品（批号：9508，中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。淫羊藿药材由健心医药有限公司提供，经广州市药检所谢培山主任药师鉴定为巫山淫羊藿 Epi medium wushanense T.S.Yingo甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 淫羊藿苷的含量测定
2.1.1 色谱条件色谱柱：HP Spherisorb ODS2 (250×4mm，5μm），流动相：乙腈-水（30:70），检测波长270nm，柱温25℃，流速1mL/min。
2.1.2 线性范围分别精密吸取淫羊藿苷对照品溶液（0.206mg/mL）0.5，2.5，5.0，7.5，10μL，按上述色谱条件进样测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y= 2131.02921 X-8.16197，r＝0.9999，淫羊藿苷在0.10～2.06μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。
2.2 不同提取溶媒对淫羊藿苷提取率的影响取淫羊藿药材粉末（50目）约0.2g共6份，精密称重，其中5份置60mL圆底烧瓶中，分别以30％乙醇、50 ％乙醇、70％乙醇、无水乙醇、水各20mL为提取溶媒，回流提取1h;另1份置100mL三角烧瓶中，加水20mL加热提取1h。待提取液冷却至室温，用 50％乙
醇定容至25mL，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，高效液相色谱法测定样品中淫羊藿苷的含量。结果见表1。
表1 不同提取溶媒对淫羊藿苷提取率的影响—————————————————————————————
提取溶媒 30%乙醇 50%乙醇 70%乙醇无水乙醇水(回流) 水(加热) —————————————————————————————
淫羊藿苷
含量/% 0.51 0.51 0.50 0.41 0.32 0.43 —————————————————————————————
采用不同的提取溶媒，淫羊藿苷的提取率有较大差异，以纯水和无水乙醇为提取溶媒，淫羊藿苷含量均较低，而采用一定浓度的乙醇提取，淫羊藿苷含量明显增高，提示在实际生产中，对含淫羊藿药材的处方，可考虑以低浓度的乙醇提取，不仅有利于提高指标成分的含量，而且可降低生产成本。
2.3 不同煎煮时间及提取溶媒用量对淫羊藿苷提取率的影响取淫羊藿药材粉末(50目)约0.2g共14 份，置100mL三角烧瓶中，精密称重，分别以水10 mL、20mL提取0.5，1，1.5，2，3，4，5h，待提取液冷却至室温，50%乙醇定容至25mL，摇匀， 0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液，高效液相色谱法测定样品中淫羊藿苷的含量。结果见表2。
表2 不同煎煮时间及提取溶媒用量对
淫羊藿苷提取率的影响(%) ————————————————————————
煎煮时间/h
溶媒及用量———————————————————
0.5 1 1.5 2 3 4 5 ————————————————————————
水10mL 0.39 0.38 0.44 0.44 0.48 0.51 0.42
水20mL 0.42 0.45 0.47 0.48 0.51 0.58 0.48
————————————————————————
随着煎煮时间和提取溶媒量的增加，淫羊藿苷的溶出量呈递增趋势，但煎煮时间过长会导致淫羊藿苷的破坏。实验结果表明，当煎煮时间超过4h，淫羊藿苷的含量明显下降，说明持续的高温加热会引起淫羊藿苷的成分变化，提示在含淫羊藿的制剂工艺设计中，应尽量避免长时间煎提。
2.4 加热浓缩对淫羊藿苷提取率的影响取淫羊藿药材粉末（50目）1.6g,精密称重，以水160mL加热提取2h，待提取液冷却至室温，定容至200mL，摇匀，过滤，精密吸取续滤液20mL，共6份，分置于不同敞口容器中，按以下条件浓缩：①100℃直火加热1h;②100℃直火蒸干药液后继续加热0.5h（总受热时间为1.5h)；③水浴浓缩1h;④75℃直火浓缩1.5h；⑤50℃直火浓缩
3.5h;⑥75℃直火蒸干药液（总受热时间为5.5h）。将按上述方法分别处理后的浓缩药液或残渣放冷，分别以适量50%乙醇稀释或溶解，并分次转移至25mL量瓶中，定容， 0.45μm微孔滤膜过滤后进样分析，高效液相色谱法测定样品中淫羊藿苷的含量。结果见表3。
表3 加热浓缩对对淫羊藿苷提取率的影响————————————————————————————————
浓缩条件100℃,1h 100℃,1.5h 水浴,1h 75℃,1.5h 50℃,3.5h 75℃,5.5h ————————————————————————————————
淫羊藿苷含
量/% 0.50 0 0.46 0.47 0.47 0.46 ————————————————————————————————结果表明，在均匀受热状态下，高温短时间（1h）受热和较低温度下（75℃以下）长时间受热（超过5h)均不会使淫羊藿药材中的淫羊藿苷遭到破坏。但直火加热lh和1.5h，淫羊藿苷含量有显著差异，加热1.5小时后，采用高效液相色谱法检测不到淫羊藿苷的存在，说明蒸干后继续高温加热可能会引起浸膏的不均匀受热或炭化，导致淫羊藿苷损失殆尽。在工业大生产中，由于生产量大，药液加热浓缩的时间必然很长，长时间的加热使粘稠的药液极易因搅拌不及而导致受热不均，浸膏在浓缩的过程中炭化，药材中的活性成分如淫羊藿苷等均会遭致严重破坏。在生产中若能采用旋转薄膜蒸发等方法，使药液在相对较低的温度下进行浓缩，对确保制剂产品的质量将大有裨益。
2.5 不同粉碎度对淫羊藿苷提取率的影响取未经粉碎的淫羊藿叶片、淫羊霍叶片粉末（粉碎度分别为 20目和50目）各约0.29,精密称定重量，置100 mL三角烧瓶中，加水20mL，加热提取2h，其余操作同上，重复操作2次，取平均值。结果见表4。
表4 不同粉碎度对淫羊霍苷提取率的影响————————————————————————
粉碎度未经粉碎 20目 50目————————————————————————
淫羊霍苷含量/% 0.51 0.52 0.54 ————————————————————————
结果表明，粉碎度对淫羊藿苷的浸出影响不大，这可能与叶片类药材的质地较疏松有关。提示在叶片类药材，即使是革质类叶片的提取过程中，只要有足够的溶媒使药材完全浸润，就能保证药材得到较完全的提取。
3 讨论
研究结果表明，在含淫羊霍药材制剂的大规模生产中，简单的水提醇沉、去酒浓缩工艺已不能满足制剂工艺合理化的需要，如果不对提取工艺中的诸多参数进行综合考察，了解提取、浓缩等过程中活性成分或总提取物等的含量变化情况，不仅与传统的中医药理论背道而驰，还会导致产品质量的不可控，临床疗效势必大打折扣。在工业大生产中，如何实现药材活性成分的合理化提取，值得药学工作者进行深入地探讨和研究。
淫羊藿黄酮类化合物提取研究进展时间:2010-06-03 14:13来源: 作者:张华峰,杨晓华
淫羊藿黄酮类化合物提取研究进展
摘要黄酮类化合物是淫羊藿的主要有效成分,具有广泛而重要的药理活性,在医药、食品等领域具有良好的应用前景。本文介绍了淫羊藿黄酮类化合物提取研究的现状,分析了提取研究中存在的问题,在此基础上提出了提取研究的思路与对策。
关键词淫羊藿;提取;黄酮类化合物
植物提取物是重要的药物来源,中国、法国、瑞士、波兰、英国、比利时、荷兰、匈牙利、罗马尼亚、意大利、德国等国家或地区的药典均收录了大量植物提取物〔1〕;此外,植物提取物在食品、化妆品等领域也具有重要用途〔2〕。植物提取物是我国中药出口创汇的主要商品类型。据中国医药保健品进出口商会统计, 2006年我国植物提取物出口累计4177 亿美元,占中药出口总额的43174%〔3〕; 2007年出口累计4180亿美元,占中药出口总额的40168%〔4〕。植物提取物的制备技术以及生物活性成分的提取工艺研究,是生物分离工程研究领域的重要课题,对医药、食品、化妆品工业的进步具有巨大的推动作用。淫羊藿是著名的中药材,具有治疗骨质疏松症、调节雄性发育等药理活性。淫羊藿在日本、韩国、东南亚地区和地中海地区等也被作为药用植物〔5〕。药理学研究表明,淫羊藿的主要有效成分为黄酮类化合物〔6〕。截止2005年,已经从淫羊藿中分离鉴定了60多种黄酮类化合物。其中, 82异戊烯基黄酮醇及其苷类具有调节神经和内分泌系统、调节免疫、壮阳、防治骨质疏松症、防治肥胖症、抗炎、抗抑郁等功效,朝藿定( ep imedin) A、朝藿定C等还在癌症、心血管疾病等重大疾病防治方面具有重要的应用前景〔5, 7211〕。研究淫羊藿黄酮类化合物的提取工艺或制备技术,对于淫羊藿药材质量控制方法的完善、药效物质基础的揭示以及新型植物药和食品配料或添加剂的研究与开发皆具有重要意义。
1 黄酮类化合物分离纯化研究进展
1.1 传统提取方法淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷( icariin)具有多种生物活性,是中国药典规定的淫羊藿药材质量评价指标。有关淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷提取的报道很多。加热回流法是最常见的淫羊藿黄酮类化合物提取技术〔12〕。陶君彦等〔13〕优选的乙醇回流工艺是:采用10倍量70%乙醇溶液提取2次,每次115 h,总黄酮、淫羊藿苷的提取率分别达到93134%、85187%。除加热回流法外,淫羊藿黄酮类化合物的传统提取方法还包括水煎法、渗漉法、醇提水沉法等。王欣等〔14〕比较了乙醇回流法、水煎法和乙醇渗漉法对巫山淫羊藿( Epim ed ium wushanense)中淫羊藿苷的提取量,发现乙醇渗漉法提取效率高、溶剂用量少、能耗低。苏玉春等〔15〕建立了淫羊藿的水提醇沉提取工艺,淫羊藿苷提取率约8190%。李玉山等〔16〕比较了水提醇沉法和醇提水沉法对淫羊藿苷的提取效果,发现后者的得率和纯度较高。申庆亮等〔1 7〕比较了水提醇沉法、乙醇回流法和碱提醇沉法对总黄酮的提取率,表明乙醇回流法提取效果最好。
1.2 超临界流体萃取方法L iu等〔18〕优化得到了朝鲜淫羊藿( E1 koreanum )中总黄酮的CO2 超临界流体萃取工艺:采用70%乙醇溶液为助剂(modifi2er) ,萃取压力30MPa,萃取温度60℃,先静止提取30min,后动态提取120min (流速6mL /min) 。该超临界流体萃取法比乙醇回流法效率更高、污染更小。由于CO2 超临界流体萃取法所使用的提取溶剂(超临界CO2 )安全无毒、不易燃易爆、成本低廉、在提取结束后容易去除,因此该方法十分适用于中药材中非极性生物活性成分的提取。然而,淫羊藿苷等黄酮醇糖苷系极性化合物,这就限制了该方法在淫羊藿黄酮类化合物提取中的应用。目前主要采用添加极性夹带剂〔18〕,使超临界CO2 形成反向微团或乳状液( reverse micell or microemulsion)等方法解决此问题。夹带剂可以改变提取溶剂对目标化合物的选择性和溶解性,但是某些夹带剂(如甲醇)却可能带来溶剂残留问题。总体上看,国内外有关淫羊藿黄酮类化合物的CO2 超临界流体萃取研究开展得很少,相关研究尚待加强。
1.3 外场辅助提取方法杨帆等〔19〕比较了乙醇回流法与超声波提取法对淫羊藿中淫羊藿苷的提取效果,证明前者优于后者。但是郭孝武〔20〕却发现超声波辅助提取30 min后的淫羊藿叶肉部分多数被破坏,细胞壁破裂,细胞严重损伤,说明超声波处理有利于淫羊藿苷的提取。欧少英等〔21〕利用正交试验法优化得到了淫羊藿苷的超声波辅助提取工艺:使用8倍量80%乙醇溶液超声波提取2次,每次90min。胡筱等〔22〕优选的淫羊藿总黄酮提取工艺为:以80%乙醇溶液为提取溶剂,超声波频率40kHz,提取1次,提取时间30 min,提取温度室温。笔者建立了心叶淫羊藿( E1 brevicornu)中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B 和朝藿定C的超声波辅助提取工艺:以50%乙醇溶液为溶剂,在液固比30∶1 (mL /g) 、提取温度50℃条件下超声波提取3次( 30 min /次) 。同常规的加热提取法和索氏提取法相比,笔者优选的超声波提取工艺提取时间较短、提取温度较低、溶剂消耗量较少〔5〕。为了揭示超声波辅助提取的机理,笔者运用电子显微镜技术观察了超声波处理对淫羊藿叶片干粉的效应,发现超声波可以降低样品粒度,并使样品表面产生损伤。降低样品粒度能够促进样品与溶剂的接触,增加直接暴露在超声波场中的样品细胞数目,从而提高提取效率;样品表面的损伤可能使细胞表面孔洞增大或者孔洞数目增加,有利于溶剂进入细胞内部并使细胞中的目标黄酮类化合物溶出〔5〕。
陈燕芬等〔23〕比较了微波提取法与加热提取法对淫羊藿中淫羊藿苷的提取效果,发现10 min的微波处理即可接近30 min加热提取的效果。黄瑞华等〔24〕也优选了淫羊藿苷的微波辅助提取工艺,该方法与常规方法相比能大大节省提取时间、提高提取率。Chen等〔25〕以淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B、朝藿
定C和总黄酮为提取指标,建立了一种动态微波辅助提取工艺,该方法的提取量高于加热回流法和索氏提取法,提取时间也较短。
1.4 精制、纯化方法大孔吸附树脂常被用来分离、纯化淫羊藿黄酮类化合物。李秀男等〔26〕考察了8种大孔吸附树脂对淫羊藿苷的吸附分离性能,优选的树脂经一步层析即可将淫羊藿苷的纯度提高近十倍。李玉山等〔16〕先用大孔吸附树脂从巫山淫羊藿提取液中分离到总苷,再用硅胶柱层析方法纯化出淫羊藿苷,得率约为119% ,纯度超过98%。赵小妹等〔27〕比较了大孔吸附树脂法、醇沉法、超滤法和吸附澄清法对淫羊藿水提液中淫羊藿苷的精制效果,发现醇沉法所得浸膏中淫羊藿苷含量最高。L iu等〔28〕采用制备型高速逆流色谱方法( p reparativehigh2speed counter2current chromatography method)从朝鲜淫羊藿中分离、纯化到了淫羊藿苷、淫羊藿次苷Ⅱ ( icariside Ⅱ) 和ep imedokoreanoside Ⅰ。王超展等〔29〕采用半制备型反相高效液相色谱从箭叶淫羊藿( E1 sagitta tum )中分离得到了温哥华苷F ( hexan2draside F) 、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C和淫羊藿苷,其中温哥华苷F 首次从淫羊藿属( Epim ediumL1)植物中分离得到。李步海等〔30〕考察了Tween802(NH4 ) 2 SO4 液2固萃取体系对淫羊藿粗提液的分离纯化效果, 发现淫羊藿苷的一次萃取率可达9512%。战佩英等〔31〕发现以乙酸乙酯为萃取剂所得淫羊藿总黄酮的纯度高于以正丁醇为萃取剂。马慧萍等〔32〕证明,酸碱沉淀法对总黄酮的分离效果优于乙酸乙酯萃取法和铅盐沉淀法;采用甲醇作为纯化溶剂时,总黄酮收率优于乙醇、正丁醇和乙酸乙酯。江永南等〔33〕优化了淫羊藿总黄酮的乙醇回流提取工艺,并用聚酰胺柱进行了分离纯化,最后制得了淫羊藿总黄酮磷脂复合物。
2 黄酮类化合物提取研究存在的问题
近年来,淫羊藿黄酮类化合物的提取研究取得了重大进展,淫羊藿提取物已经成为重要的出口创汇产品,淫羊藿苷也被开发成针剂。但是,目前淫羊藿黄酮类化合物提取研究依然存在一些问题,主要表现在: 1)提取的目标化合物主要限于总黄酮或淫羊藿苷,有关朝藿定C等重要生物活性成分的提取研究报道十分鲜见。在淫羊藿中, 82异戊烯基黄酮醇及其苷类具有药理活性,某些黄酮类色素则没有显著的药理活性〔34〕。因而,仅以总黄酮作为提取指标不能完全反映淫羊藿药理活性成分的提取效果。大量研究表明,朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C同淫羊藿苷一样皆广泛分布于淫羊藿属植物中,具有重要的药理活性〔5, 34〕。研究朝藿定C等重要黄酮类化合物的提取,具有一定的潜在应用价值。2)淫羊藿黄酮类化合物的外场辅助提取
研究取得了很大的进步,但是超声波、微波技术至今仍未应用于生产实践,提取工艺依然有待优化和完善,提取设备也有待改进和创新,提取机理亦有待深入探讨和揭示。3)淫羊藿中黄酮类化合物的含量受到遗传因素和环境因素的影响,但是不同因素对黄酮类化合物水平的效应尚未完全揭示,最佳品种、最适生境都不够明确,这些问题制约了淫羊藿黄酮类化合物的工业化提取进程。4)在淫羊藿黄酮类化合物的精制过程中,杂质的种类、含量尚不明确,不利于有的放矢地去除杂质。
3 黄酮类化合物提取研究展望
3.1 广泛研究淫羊藿多种重要黄酮类化合物的提取除了继续开展淫羊藿总黄酮、淫羊藿苷的提取研究以外,还应当对朝藿定A、朝藿定B和朝藿定C等重要药理活性成分的提取进行研究。淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B和朝藿定C四种黄酮醇糖苷的化学结构相近,药理活性显著,被认为是淫羊藿药材的标志化合物(marker compound)〔5, 34236〕。比较研究这四种标志化合物的提取过程,有利于总结淫羊藿黄酮类化合物提取的共性规律,为提取工艺的优化和提取设备的改进提供思路。
在提取研究中,可以尝试开展多种药理活性成分的联合提取。成本高、效率低是制约植物活性物质工业化提取的主要原因之一,也是影响淫羊藿黄酮类化合物大规模制备的重要因素之一〔37〕。如果能够实现两种或以上淫羊藿活性物质的联合提取,那么很可能使提取成本大大降低。Chen等〔38, 39〕建立的加压溶剂提取法( p ressurized liquid extraction)能同时提取淫羊藿中的15种黄酮类化合物。笔者开展了淫羊藿黄酮类化合物和多糖的联合提取研究(未发表数据) 。
3.2 揭示淫羊藿黄酮类化合物的提取机理、改进提取设备研究淫羊藿黄酮类化合物的超声波、微波辅助提取机理,不仅有助于解决植物次级代谢产物分离工程领域的基本理论问题〔2〕,而且有可能推动淫羊藿在医药、食品工业中的应用进程。采用落射荧光显微镜技术( ep ifluorescent microscopy)和免疫定位实验( immuno2localization experiment)等揭示淫羊藿黄酮类化合物在细胞中的合成、贮藏部位〔40〕,采用光学显微镜技术、电子显微镜技术等观察超声波、微波处理对淫羊藿组织和细胞的效应,有助于阐明淫羊藿黄酮类化合物的外场辅助提取机理。
提取设备是中药材生物活性成分提取的核心装置。设计、改进淫羊藿黄酮类化合物提取设备,对于提取工艺的优化、提取效率的提高以及工业化大规模提取的实现具有至关重要的作用。罗马尼亚科学院设计的超声波提取装置(工作容积7002850L )已经在PLAFAR工厂的药用植物活性物质提取实践中得到应用〔1〕。
笔者设计出了一种新型超声波微波耦合提取装置,具有高效、节能、安全、耐用等优点,在中药材生物活性成分的外场辅助提取中具有一定的应用价值〔41〕。
3.3 全面考察遗传因素和环境因素对淫羊藿中黄酮类化合物含量的效应系统研究品种、居群、日照、温度、降水量、湿度、土壤、水质、地势以及伴生群落植物等因素对淫羊藿中黄酮类化合物分布与水平的影响,有助于揭示黄酮类化合物的品种、居群间差异以及季节性、地域性变异规律,为淫羊藿黄酮类化合物提取所需药材原料的选择提供指导。刘敏等〔12〕证明湖北省恩施市出产的箭叶淫羊藿中总黄酮的含量比福建省三明市高,更适合作为提取所需药材原料。李玉山等〔16〕从四川省不同地区出产的11个淫羊藿样品中筛选出了1个淫羊藿苷含量较高的样品作为提取所需药材原料。笔者考察了20个不同品种、不同产地野生淫羊藿中淫羊藿苷、朝藿定A、朝藿定B 和朝藿定C的含量,最终选择陕西省出产的心叶淫羊藿作为提取所需药材原料,优化得到了四种标志化合物的提取工艺〔5〕。遗传因素和环境因素对淫羊藿中黄酮类化合物含量的影响以及提取所需药材原料的筛选研究,关系到提取效率的高低和纯化环节的难易,值得深入探讨。
参考文献
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Q/TRG003-2018《淫羊藿提取物》 企业标准 编制说明 ***有限公司 二〇一八年六月十九日
一、编制Q/TRG003-2018企业标准工作的简要说明 ***有限公司本着资源合理化利用，凭借当地中药资源优势，努力开发本地资源，实施系统化研究，规范化种植，标准化销售，紧密围绕《中药现代化发展纲要》，广泛动员社会力量，运用成熟技术，投资3600多万元，完善的建成了一条一流的符合GMP标准的天然产物提取生产线，占地50亩，厂房面积5000多平方米，拥有现代化的提取、浓缩、层析、喷雾干燥等先进设备，一条中试生产线及一个现代化的实验室，为中草药发展实施系统化研究、产业化发展、科学化管理、标准化加工、良性化销售创建发展平台。 现根据市场需求和本地资源情况，初步制定以淫羊藿提取物做为企业主打产品之一，创建企业品牌，为企业打向市场创造良好的先决条件。在目前国标、行标与地方标准还没有《淫羊藿提取物》标准的情况下，为指导生产，保证产品质量及安全性，保护消费者利益，根据《标准化法》和国家强制性标准，特制订本企业标准。 淫羊藿提取物具有促进性功能；抗菌消炎，镇咳平喘；降压，增加冠脉流量，增加心肌耗氧量。具有广阔的市场前景。 二、编制本标准的原则 编制Q/TRG003-2018《淫羊藿提取物》企业标准遵循以下原则： 1 标准的结构和编制规则严格遵守GB/T1.1-2000《标准化工作导则第1部分:标准的结构和编制规则》的规定。 2 主要技术内容的确定应遵守GB/T1.2-2002《标准化工作导则
第2部分:标准中规范性技术要素内容的确定方法》的规定,符合目的性原则、性能原则和可证实性原则的要求。 3 企业标准中所引用的国家标准、行业标准及其他文件应为现行有效版本,不得使用已废止版本。 4 企业标准中所有内容与现行法律、法规以及上级强制性标准与规定相一致,不得抵触。 三、生产工艺 （20%淫羊藿提取物、40%淫羊藿提取物、90%淫羊藿提取物）提取浓缩层析醇沉过滤浓缩喷雾干燥产品 注：执行以上工艺流程，淫羊藿甙含量大于90%，通过改变辅料（糊精）添加量，配制满足客户需求的不同产品规格。 四、主要技术指标制定的依据 1. 感官指标 淫羊藿原料经由以上工艺流程批量生产后，产品色泽为红棕色精细粉末,保持了淫羊藿原料本身所具有的特殊香味,产品味苦，组织形态均一，无可见异物，保证了提取物产品在进一步加工过程中其用量、药效的一致性和产品使用的安全性，满足了市场客户需求，因此，制订其相应的感官指标，规范产品质量。 2. 理化指标 淫羊藿提取物产品界限指标中粒度的测定通过Q/TRG003-2008附录A规定的检测方法多次检测，其通过率均大于90%，故制订其
淫羊藿提取物 西安金绿生物工程技术有限公司 +86-0 29 - 8 13 214 95 [产品名称-KinGreen]: 淫羊藿提取物 [英文名称-KinGreen]: Epimedium Herb Extract [拉丁名称-KinGreen]: Epimedium davidii Franch [原料别名-KinGreen]: 刚前、仙灵脾、仙灵毗、黄连祖、放杖草、弃杖草、三叉风、桂鱼风、铁铧口、铁耙头、鲫鱼风、羊藿叶、羊角风、三角莲、乏力草、千两金、干鸡筋、鸡爪莲、三枝九叶草、牛角花、铜丝草、铁打杵、三叉骨、肺经草、铁菱角。 [产品来源-KinGreen]: 淫羊藿提取物来源为为小檗科植物淫羊藿（Epimedium brevicornum Maxim.）、箭叶淫羊藿（Epimedium sagittatumMaxim.）、柔毛淫羊藿（Epimedium pubescens Maxim.）、或朝鲜淫羊藿（Epimedium koreanum Nakai）的干燥叶。 [原料形态-KinGreen]: 多年生草本，高30～40厘米。根茎长，横走，质硬，须根多数。叶为2回3出复叶，小叶9片，有长柄，小叶片薄革质，卵形至长卵圆形，长4.5～9厘米，宽3.5～7.5厘米，先端尖，边缘有细锯齿，锯齿先端成刺状毛，基部深心形，侧生小叶基部斜形，上面幼时有疏毛，开花后毛渐脱落，下面有长柔毛。花4～6朵成总状花序，
花序轴无毛或偶有毛，花梗长约1厘米；基部有苞片，卵状披针形，膜质；花大，直径约2厘米，黄白色或乳白色；花萼8片，卵状披针形，2轮，外面4片小，不同形，内面4片较大，同形；花瓣4，近圆形，具长距；雄蕊4；雌蕊1，花柱长。蓇葖果纺锤形，成熟时2裂。花期4～5月。果期5～6月。 [原料分布-KinGreen]: 生长于多荫蔽的树林及灌丛中。分布黑龙江、吉林、辽宁、山东、江苏、江西、湖南、广西、四川、贵州、陕西、甘肃。 [ Product—Brand ]: 西安金绿-Xi’an KinGreen [化学成分-KinGreen]: 淫羊藿苷、藿羊淫次苷、藿羊淫新苷、淫羊藿黄酮，有机酸、脂肪酸、生物碱、挥发油等成分 [供应厂家-KinGreen]: 西安金绿生物工程技术有限公司[药理作用-KinGreen]: 1．对性机能的影响淫羊藿能增强下丘脑－垂体－性腺轴及肾上腺皮质轴，胸腺轴等内分泌系统的分泌功能．淫羊藿煮提液1ml/100g 体重用于雌性大鼠，5天后能提高垂体对黄体生成释放激素的反应性及卵巢黄体生成素的反应性；明显增加正常大鼠垂体前叶、卵巢、子宫重量．淫羊藿有催淫作用，这种作用是由于精液分泌亢进，精囊充满后，刺激感觉神经而间接兴奋性欲．淫羊藿流浸膏有促进犬精液分泌的作用，其叶和根部的作用最强，果实次之，茎部最弱；以前列腺、精囊、提肛肌增
目录 摘要 (1) 关键字 (1) 前言 (1) 1.血红素的结构及性质 (1) 2.血红素的提取 (2) 2.1：试验材料及药品 (2) 2.2.试验方法 (2) 2.2.1 提取原理 (2) 2.2.2 试验流程 (3) 2.2.3 试验步骤……………………（3-4） 3.结果与分析 (5) 4..参考文献……………………（5-6）
牦牛中血红素的提取与分离 摘要：以新鲜牦牛血液为原料, 研究牛血红素的提取方法和工艺。采用醋酸钠 法, 蒸馏法, 两种方法提取血红素, 通过试验来确定药品的最佳用量，醋酸钠添加量约为 0.7 倍, 氯仿添加量约为 0.1 倍, 丙酮添加量约为 4倍, 加水量 为约 1 倍，醋酸钠法是提取血红素的最佳工艺。 关键词：血红素提取离心分离蒸馏法醋酸钠法 前言：铁是人体内含量最丰富的一种必需微量元素。机体缺铁能引起缺铁性贫 血, 并影响机体的免疫力, 对儿童还能影响其智力发育, 引起行为改变, 如注意力分散、易烦燥、表情淡漠等。虽然铁在食品中广泛存在, 但由于它在食品中存在的形态不利于机体对它的吸收利用, 所以, 人们易患缺铁症, 特别是轻度缺铁较常见, 多见于儿童、妊娠妇女、哺乳妇女等。我国少年儿童缺铁性贫血症发病率很高, 目前常用的补铁剂是含铁的化学制剂, 主要有硫酸亚铁、富马酸铁、葡萄糖酸亚铁等, 这些补铁剂在人体内吸收利用率较低, 它们对胃肠道有不同的刺激作用, 常使患者食欲不振, 且铁离子在血液中浓度过高, 可导致体内铁负荷过重, 产生铁蓄积中毒。而血红素是血红蛋白的辅基, 简称卟啉铁化合物, 是很好的铁强化剂。血红素治疗缺铁性贫血疗效显著, 已逐渐受到人们的重视。 青海省地处青藏高原地区，牦牛资源十分丰富，牦牛血中的血红素的含量随着海拔的升高而增多，由于有此特性在医学等领域有着广泛的运用，主要研究的有CMC-Na法提取牦牛血中的血红素、低温乙醇发法提取牦牛血中的血清蛋白、牦牛血粉制备氯化血红素、牦牛血红蛋白活性肤酶法的制备工艺牦牛血中超氧化物歧化酶的提取、醇法水解牦牛血红蛋白等研究工艺。从而更加清楚的了解牦牛血中红星无知的理化性质以及特有的作用。 1. 血红素的结构及性质 血红素是由一个二价铁离子镶嵌在一个原卟啉环而构成的称为铁卟啉的化合物，。卟啉环上的4个氮原子位于同一平面上,其中2个氮原子与铁原子以共价键结合,另外2个氮原子则以配位键结合。铁原子以配位键与球蛋白分子的组氨酸残基上的咪唑环的氮原子相结合,以复合蛋白质的形式存在。铁原子的配位数是6,因此还有一个配位键能与其他原子连接。血红素的分子式为C34H33FeN4O4,分子量为633. 49。血红素为片状或针状的紫色结晶,不溶于水、稀酸、醚、氯仿及丙酮,溶于氢氧化钠水溶液、热醇或氨水中，主要存在于动物的血液和肌肉中，是动物血液中的天然色素，具有重要的生理功能和很高的实用价值，是一种优良的铁强化剂及抗贫血药，在医药、食品、化工、保健品、建筑及化妆品行业中有广泛应用，其化学结构如图1所示：
【课题】：课题6 血红蛋白的提取和分离【备课人】： 【备课时间】：【上课时间】： 【课型】：复习【课时数】：1课时 【复习目标】 本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。 【复习重点与难点】 复习重点：凝胶色谱法的原理和方法。 复习难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。 【知识回顾】： 一、实验原理 蛋白质的物化理性质：形状、大小、电荷性质和多少、溶解度、吸附性质、亲和力等千差万别，由此提取和分离各种蛋白质。 1．凝胶色谱法（分配色谱法）： （1）原理：分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。 （2）凝胶材料：多孔性，多糖类化合物，如葡聚糖、琼脂糖。 （3）分离过程： 混合物上柱→洗脱→大分子流动快、小分子流动慢→收集大分子→收集小分子 ＊洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子的差速流动。 （4）作用：分离蛋白质，测定生物大分子分子量，蛋白质的脱盐等。 2．缓冲溶液 （1）原理：由弱酸和相应的强碱弱酸盐组成（如H2CO3－NaHCO3，HC－NaC，NaH2PO4/Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。 （2）缓冲液作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。 3．凝胶电泳法： （1）原理：不同蛋白质的带电性质、电量、形状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。 （2）分离方法：琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳等。
JTCM. Dec. 2009, V ol. 50, Supplement 258 [5] 杨君利，杨洪梅.参芪五味子片治疗自汗与盗汗疗效分析[J].现代中医药杂志，2005，25（4）：25. [6] 徐晴姣，刘甲东.参芪五味子片治疗原发性肾病综合征临床观察[J].中国中医药信息杂志,2007,1((3):62. [7] 孙国剑，赵瑞英，章岩，等.参芪五味子片配合牵引治疗交感型颈椎病的临床观察[J].现代医药卫生，2007，23（9）：1373-1374. [8] 刘涛.参芪五味子片治疗功能性消化不良125 例临床观察[J].中国中医药信息杂志，2006,13(12):68. [9] 孙华，张云先，张晋云，等.参芪五味子片合化疗对恶性肿瘤术后患者的影响[J].中国中医药信息杂志,2003，10（12）：49－50. ﹡山东省潍坊市益都中心医院神经内科 淫羊藿苷抗肿瘤作用的研究进展 吕祥1 吴金峰2 淫羊藿来源于小檗科（Berberidaceae）淫羊藿属（Epimdium）植物，其主要活性成分为黄酮和多糖，黄酮类有效成分主要是淫羊藿苷（icariin, ICA）。现代药理研究表明，淫羊藿黄酮类成分具有抗肿瘤作用，先就其主要成分ICA抗肿瘤功效的研究做一综述。 1 ICA对呼吸系统肿瘤作用 毛海婷等[1-3]研究表明，ICA对PG（高转移肺癌细胞）细胞的增殖有明显抑制作用，该作用可能与cAMP/cGMP比值升高有关；发现ICA可降低PG细胞表面黏附分子CD44V6、层黏连蛋白受体（LN-R）及胞浆内角蛋白18（CK18）的表达，从而降低PG细胞对胞外基质的黏附性、侵袭及运动能力，同时ICA可以下调侵袭诱导基因c-myc、Tiam-1的mRNA表达，上调转移抑制基因nm23-H1的mRNA表达，进而抑制肿瘤细胞发生转移；采用流式细胞术和荧光探针标记技术，发现ICA可以提高PG细胞膜流动性，从而增强膜表面抗原MHC-Ⅰ（HLA-ABC抗原）的表达，从而增强PG细胞免疫原性，肿瘤细胞进而易逃离机体的免疫监视，最终导致肿瘤的扩散和转移。李晓燕等[4]研究证明，ICA可抑制PG细胞中TGFβ2的mRNA 和蛋白表达，能够逆转受TGFβ2抑制的LAK和CD3AK细胞的杀伤活性，并能部分恢复受TGFβ2抑制的LAK细胞表面IL-2Rα表达、CD3AK细胞内穿孔素mRNA的表达、CD3AK细胞的增殖活性。 2 ICA对消化系统肿瘤作用 王谦等[5]观察发现中药ICA能有效地抑制HepG2.2.15细胞增殖，并有一定时间依赖效应；ICA可下调FasL的表达，上调细胞表面Fas的表达，对HepG2.2.15细胞诱导的T淋巴细胞凋亡作用有一定阻断，逆转肿瘤细胞的免疫逃逸作用；ICA显著增强HepG2.2.15细胞对CD3AK细胞杀伤的敏感性。唐菁等[6]探讨了ICA、黄芩苷（baicali, BA）联合化疗药多柔比星（doxorubicin, ADM）抑制肝癌HepG2细胞增殖诱导配体（proliferation-inducing ligand, APRL）的表达，研究表明，ICA、BA联合ADM抑制HepG2细胞APRL、bcl-2mRNA的表达，进而抑制肿瘤细胞增殖；同时增强其对CD3AK细胞的杀伤敏感性，逆转肿瘤细胞的免疫逃逸。李翠玲等[7]观察了ICA对肝癌细胞H22荷瘤小鼠体内抑瘤作用，实验表明，ICA有显著的抑瘤作用，可能是通过促进实体瘤细胞早期凋亡引起肿瘤组织坏死而起作用。 3 ICA对血液系统肿瘤作用 ICA作用于HL-60细胞和原代APL细胞72 h后，G0/G1期明显增加，S期细胞明显减少，从而诱导细胞周期阻滞，进而抑制HL-60细胞及原代APL细胞的增殖[8]。李贵新等[9]采用透射电镜、流式细胞术、DNA ladder等检测方法，发现ICA 可诱导HL-60细胞凋亡，呈现典型的凋亡形态学和生化特征，具有时间和剂量依赖性。葛林阜等[10]研究证实，ICA可明显诱导HL-60细胞和全反式维甲酸（ATRA）耐药HL-60细胞凋亡，其凋亡诱导作用机制可能与下调bcl-2和c-myc基因mRNA和蛋白表达有关。硝基四氮唑蓝（NBT）还原实验表明[8]，ICA可显著诱导HL-60细胞和原代APL细胞分化；ICA作用于HL-60细胞、ATRA耐药细胞HL-60细胞48 h或96 h后，两组细胞表面分化抗原CD11b、CD15、HLA-DR阳性表达增强[10]；上述结果显示，ICA可诱导HL-60细胞分化，其机制可能与ICA升高HL-60细胞内cAMP/cGMP比值，增加环磷酸腺苷相对含量有关。c-myc基因在端粒酶活性调节中起重要作用，ICA可下调c-myc基因mRNA和蛋白表达，HL-60细胞端粒酶活性的抑制也可能与c-myc基因有关[11]。郭铁军等[12]实验研究表明，p42MAPK和STAT3与ICA诱导HL-60细胞分化有关，而p42MAPK和STAT3则与ICA诱导HL-60细胞分化无关。谢超等[13]研究了曲古霉素A和ICA诱导急性非淋巴细胞白血病HL-60细胞株分化过程中nm23基因的表达变化，结果表明，HL-60细胞分化过程中c-myc基因的表达下调，G-CSF基因表达上调与下调nm23基因的表达有关。狄凯军等[14]报道，经Giemsa染色、Hoechst 33342/PI荧光双染色及电镜观察， ICA 对K562细胞具有增殖抑制和凋亡诱导作用。 4 ICA对其他肿瘤作用 4.1 ICA对乳腺癌作用 整体药理研究结果显示，淫羊藿或淫羊藿提取物可能具有雌激素活性[15-16]。流行病学研究和体内外实验研究表明，植物雌激素具有抗乳腺癌作用[17]。ICA具有与雌二醇相似的结构，表现出对乳腺癌细胞具有增殖抑制作用。叶海涌等[18]发现，ICA 浓度为10-5mol/L时可显著抑制T47D细胞增殖，其作用机制尚未见报道。 4.2 ICA对前列腺癌作用 流行病学和体内外实验研究表明，植物雌激素具有抗前列腺癌作用[19]。ICA及其衍生物ICT具有与雌二醇相似的结构，也表现出对前列腺癌细胞具有增殖抑制作用。HUANG等[20]考察了ICA、ICT对前列腺癌PC-3细胞的作用，ICA对PC-3细胞的抑制作用较ICT弱。 4.3 ICA对黑素瘤Cloudman S91作用
猪血中高纯度血红素的提取工艺 【摘要】目的：确立最佳溶血方法，建立高产量、高纯度血红素提取工艺。方法：新鲜抗凝猪血为原料，比较了水溶胀法、乙醇法以及超声波法对红细胞溶血效果，以盐酸丙酮配比，盐酸丙酮与溶血液体积比对猪血中血红素提取的影响。结果：确立超声波法进行红细胞溶血，36.5%浓盐酸与丙酮的体积为1%的血红素抽提液，与溶血液的体积比为5∶1抽提10分钟，最终可从新鲜猪血中得到红素6.0 g/L，纯度达99.8%。结论：用超声法溶血效果明显优于水溶胀法、乙醇法，溶血率达100%；36.5%浓盐酸与丙酮的体积比为1%的血红素抽提液，有利于规模化生产。 【关键词】猪血；血红素；超声波溶血；提取 探索酸性丙酮提取法制备血红素工艺中溶血方法、酸性丙酮及其与溶血液的比例对提取的影响，特别是超声波溶血与丙酮提取方法相结合，建立了快速、简便制备高产量和高纯度血红素的新工艺，为规模化生产提供依据。 1 材料与方法 1.1 材料与仪器：原材料：新鲜猪血，南京肉联厂提供。试剂：血红素标准品(Sigma公司)，其他试剂均为分析纯。主要仪器与设备：UV-8500型分光光度计(上海天美科学仪器有限公司)；超声波细胞粉碎机（宁波新芝科器研究所）。 1.2 实验方法 1.2.1 工艺流程：新鲜抗凝猪血→离心→红血球→洗涤→溶血→加酸性丙酮于溶血液→抽提得血红素溶解液→滤液→真空浓缩→氢氧化钠纯化→干燥得血红素。工艺要点：新鲜猪血加8 g/L柠檬酸三钠为抗凝剂，5 000 r/min，离心15分钟，收集红细胞，再用0.9%氯化钠溶液洗涤红细胞1次。抽提后的血红素溶液采用真空浓缩并回收丙酮。浓缩物采用0.1 mol/L NaOH溶解，3 000 r/min，离心10分钟收集上清液。以1 mol/L盐酸调解pH值至4～5，沉淀血红素，收集沉淀并水洗至中性，50 ℃真空干燥至恒重得血红素。 1.2.2 溶血方法的比较：（1）水溶胀法：取25 ml红细胞，按照去离子水与红细胞溶液体积之比为0.5∶1、1∶1、1.5∶1、2.0∶1、2.5∶1、3.0∶1，6个水平以400 r/min转速搅拌不同时间，用血球计数板计数红细胞破碎数量，比较
淫羊藿苷提取工艺研究 作者：佚名科研信息来源：本站原创点击数：532 更新时间：2005-8-15 [关键词]：淫羊藿苷 健康网讯： 淫羊霍来源于小檗科 Beberidaceae淫羊藿属 Epimedium多种植物，为常用补肾壮阳中药，其主要成分为异戊烯取代的黄酮类化合物。对淫羊藿及其制剂的质量评价，大多以所含淫羊藿苷或总黄酮为指标。本文通过探讨不同提取溶媒、煎煮时间、浓缩时间及温度、药材粉碎度对淫羊藿苷含量的影响，为合理提取淫羊藿的活性成分提供参考。 1 仪器与试药 美国HP1100型高效液相色谱仪。淫羊藿苷对照品（批号：9508，中国药品生物制品检定所，供含量测定用）。淫羊藿药材由健心医药有限公司提供，经广州市药检所谢培山主任药师鉴定为巫山淫羊藿 Epi medium wushanense T.S.Yingo甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 淫羊藿苷的含量测定 2.1.1 色谱条件色谱柱：HP Spherisorb ODS2 (250×4mm，5μm），流动相：乙腈-水（30:70），检测波长270nm，柱温25℃，流速1mL/min。 2.1.2 线性范围分别精密吸取淫羊藿苷对照品溶液（0.206mg/mL）0.5，2.5，5.0，7.5，10μL，按上述色谱条件进样测定，以对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程：Y= 2131.02921 X-8.16197，r＝0.9999，淫羊藿苷在0.10～2.06μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。 2.2 不同提取溶媒对淫羊藿苷提取率的影响取淫羊藿药材粉末（50目）约0.2g共6份，精密称重，其中5份置60mL圆底烧瓶中，分别以30％乙醇、50 ％乙醇、70％乙醇、无水乙醇、水各20mL为提取溶媒，回流提取1h;另1份置100mL三角烧瓶中，加水20mL加热提取1h。待提取液冷却至室温，用 50％乙
传统中药材淫羊藿的治病机理 药理实验研究表明，传统中药淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。 淫羊藿苷能显著增加家兔和狗脑血流量，降低脑血管阻力，保护脑缺血损伤。其增加脑血流量的作用主要是直接扩张脑血管的结果，其次与其钙通道的阻滞作用有关。淫羊藿总黄酮也能显著增加脑血流量，降低脑血管阻力，并可选择性阻断离体及整体动物心肌β1受体，但对气管β2受体和血管平滑肌α受体无阻断作用。 淫羊藿灌胃可抑制家兔体外血栓形成，其抑制血栓形成的主要因素可能和降低红细胞聚集性及降低全血粘度有关。淫羊藿总黄酮体外给药可显著抑制血小板聚集反应，可延长凝血酶原时间。 淫羊藿苷可促进小鼠脾淋巴细胞产生CSF样活性。CSF是促进人体或动物骨髓细胞增殖、分化、成熟及存活的一类糖蛋白，可促进机体造血并具有刺激诱导成熟细胞的功能，对机体造血功能具有重要作用。淫羊藿苷还可协同诱生IL-3和IL-6，而IL-3则可作用于骨髓多能干细胞，促进多种血细胞的分化增殖，IL-6亦可协同IL-3支持多能干细胞的增殖，因而可促进造血的功能。 淫羊藿多糖可使胸腺缩小，促进胸腺释放成熟细胞，增强机体细胞免疫功能。淫羊藿多糖皮下注射可提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，灌胃同样有效。淫羊藿苷也可显著激活巨噬细胞，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进IL-2和TNF（肿瘤坏死因子）的产生。淫羊藿多糖能促进小鼠T细胞增殖，对Ｂ细胞也有刺激增殖的作用。此外，淫羊藿多糖尚能使小鼠胸腺和脾脏细胞合成IL-2增多，诱生IFN，还有可能诱生γ干扰素。 淫羊藿苷能使小鼠附睾及精囊腺增重。淫羊藿可以使氢化考的松所致睾丸酮及雌二醇水平明显降低的模型动物睾丸酮的含量有所增加，改善雄性动物性腺的损伤。淫羊藿对垂体-性腺系统的功能也有促进作用。淫羊藿的补肾助阳作用可能与其直接刺激靶腺分泌激素有关。 淫羊藿苷在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，尚能影响细胞周期各时相分布的改变，凋亡率增高与Ｓ期细胞减少和Ｇ0/Ｇ1期细胞增多相关。淫羊藿苷能增强抗癌效应细胞（NK，LNK）的作用。淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能和红细胞免疫功能具有一定的恢复作用，在一定程度上可抑制肿瘤细胞的生长。 淫羊藿可抑制骨细胞功能，特别是使钙化骨形成增加，有“补骨”作用，对骨质疏松可能有防治效果。淫羊藿制剂可以从不同方面影响衰老机制，如影响细胞传代，延长生长期，调节免疫和分泌系统，改善机体代谢和各器官功能。此外，淫羊藿具有抗氧化作用，且对自然衰老动物下丘脑神经递质老年性变化有明显的延缓作用。
淫羊藿药理研究进展 近年药理实验研究表明，传统中药淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。 增加脑血流量 淫羊藿苷能显著增加家兔和狗脑血流量，降低脑血管阻力，保护脑缺血损伤。其增加脑血流量的作用主要是直接扩张脑血管的结果，其次与其钙通道的阻滞作用有关。淫羊藿总黄酮也能显著增加脑血流量，降低脑血管阻力，并可选择性阻断离体及整体动物心肌β1受体，但对气管β2受体和血管平滑肌α受体无阻断作用。 抑制血栓形成 淫羊藿灌胃可抑制家兔体外血栓形成，其抑制血栓形成的主要因素可能和降低红细胞聚集性及降低全血粘度有关。淫羊藿总黄酮体外给药可显著抑制血小板聚集反应，可延长凝血酶原时间。 增强造血功能 淫羊藿苷可促进小鼠脾淋巴细胞产生CSF样活性。CSF是促进人体或动物骨髓细胞增殖、分化、成熟及存活的一类糖蛋白，可促进机体造血并具有刺激诱导成熟细胞的功能，对机体造血功能具有重要作用。淫羊藿苷还可协同诱生IL-3和IL-6，而IL-3则可作用于骨髓多能干细胞，促进多种血细胞的分化增殖，IL-6亦可协同IL-3支持多能干细胞的增殖，因而可促进造血的功能。 增强免疫功能
淫羊藿多糖可使胸腺缩小，促进胸腺释放成熟细胞，增强机体细胞免疫功能。淫羊藿多糖皮下注射可提高小鼠巨噬细胞吞噬能力，灌胃同样有效。淫羊藿苷也可显著激活巨噬细胞，增强巨噬细胞的吞噬功能，促进IL-2和TNF（肿瘤坏死因子）的产生。淫羊藿多糖能促进小鼠T细胞增殖，对B细胞也有刺激增殖的作用。此外，淫羊藿多糖尚能使小鼠胸腺和脾脏细胞合成IL-2增多，诱生IFN，还有可能诱生γ干扰素。 提高雄性激素水平 淫羊藿苷能使小鼠附睾及精囊腺增重。淫羊藿可以使氢化考的松所致睾丸酮及雌二醇水平明显降低的模型动物睾丸酮的含量有所增加，改善雄性动物性腺的损伤。淫羊藿对垂体-性腺系统的功能也有促进作用。淫羊藿的补肾助阳作用可能与其直接刺激靶腺分泌激素有关。 抗肿瘤作用 淫羊藿苷在诱导肿瘤细胞凋亡的同时，尚能影响细胞周期各时相分布的改变，凋亡率增高与S期细胞减少和G0/G1期细胞增多相关。淫羊藿苷能增强抗癌效应细胞（NK，LNK）的作用。淫羊藿总黄酮对荷瘤小鼠低下的细胞免疫功能和红细胞免疫功能具有一定的恢复作用，在一定程度上可抑制肿瘤细胞的生长。 其他 淫羊藿可抑制骨细胞功能，特别是使钙化骨形成增加，有“补骨”作用，对骨质疏松可能有防治效果。淫羊藿制剂可以从不同方面影响衰老机制，如影响细胞传代，延长生长期，调节免疫和分泌系统，改善机体代谢和各器官功能。此外，淫羊藿具有抗氧化作用，且对自然衰老动物下丘脑神经递质老年性变化有明显的延缓作用。
单位：中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京100094 关键词：淫羊藿；淫羊藿苷；淫羊藿黄酮；药理作用 中草药001139 摘要综述了淫羊霍对免疫系统、生殖系统、核酸代谢、心脑血管系统、神经内分泌系统、抗衰老、骨代谢和抗肿瘤等方面的药理作用。 淫羊藿为中国传统的补益中药，历代本草均有记载，始载于《神农本草经》，别名仙灵脾，为小檗科(Berberidaceae) 淫羊藿属(Epimedium L.) 植物。《本草纲目》[1]记载：茎、叶入药，辛温无毒，有坚筋骨、益精气、补腰膝、强心力等作用，丈夫久服令人无子，丈夫绝阳无子，老年昏耄，中年健忘，四肢不仁，偏风不遂，真阳不足者宜之。现代药理研究表明：生品，无促进且抑制性机能，即性寒；炮制品，经温的羊脂油炮制后，促进性机能，即性温[2]。国内外研究表明，淫羊藿主要化学成分为黄酮类化合物、木脂素及生物碱。近年来关于淫羊藿的药理研究表明，淫羊藿具有多种药效功能，主要集中在免疫、生殖系统、核酸代谢、心脑血管系统及抗衰老等方面。现综述如下： 1 药理作用 1.1 对免疫系统的影响 1.1.1 对巨噬细胞的调节作用：淫羊藿及淫羊藿多糖(EPS) 和淫羊藿苷(icarrin) 都可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，并能使受环磷酰胺损伤的小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能恢复至正常水平。淫羊藿总黄酮(TFE) 对大剂量氢化可的松和羟基脲所致免疫功能低下模型小鼠巨噬细胞的吞噬功能有明显增强作用[3]。 淫羊藿及其提取物可以通过影响巨噬细胞因子的分泌而调节免疫功能，对巨噬细胞分泌白细胞介素-1 (IL-1) 和肿瘤坏死因子(TNF) 具有双向调节作用。 1.1.2 对T 淋巴细胞的调节作用：EPS 对小鼠T 淋巴细胞具有有丝分裂原样作用，能促进T 淋巴细胞的增殖，提高机体细胞免疫功能[4，5]，并可促进Ts 细胞产生。淫羊藿苷可减少Ts细胞产生，表明淫羊藿对机体免疫机能有双向调节作用[3] 。TFE 可提高T 淋巴细胞亚群CD4+ 的水平。 1.1.3 对B 淋巴细胞的调节作用：EPS 可促进B 淋巴细胞的增殖和分化，提高机体生成水平。 1.1.4 对自然杀伤细胞(NK) 和LAK 细胞调节作用：EPS 和TFE 均能明显提高老年大鼠的NK 细胞活性。淫羊藿苷可提高NK 细胞活性，并提高LAK 细胞杀伤活性[5] 。 1.1.5 对细胞因子的调节作用：EPS 有诱生干扰素(INF) 的作用。EPS 和淫羊藿苷可使小鼠胸腺和脾脏细胞产生白细胞介素-2 (IL-2) 的能力显著提高[6]。
市售淫羊藿提取物的品质研究 淫羊藿提取物在促进男性生殖系统健康之外，还具有对抗心血管疾病，提高免疫力的作用，在中老年保健产品市场上广受欢迎，西安源森生物一直将淫羊藿提取物作为其男性保健系列产品的主打之一。近期来，依据客户对市场上淫羊藿产品质量参次不齐、难以把控的信息反馈，西安源森生物实验室采用HPL和紫外分光光度法对市售的淫羊藿提取物中有效成分的含量进行了测定。 淫羊藿提取物质量差异的原因比较复杂，根本原因可以归为药材来源的不同和提取工艺的差别，前者为主因，后者只能部分校正前者的差别所产生的影响。目前国内植物提取物厂家多选取成本比较低的水提取工艺(或辅以醇沉)。因此，本次实验选择水提取工艺为前提。 淫羊藿提取物的原料除了药典规定的心叶淫羊藿、箭叶淫羊霍、巫山淫羊、柔毛淫羊霍和朝鲜淫羊藿外，初步调查还有粗毛淫羊霍和天平山淫羊藿，不同药材的各成分含量及其比例构成有很大不同，西安源森生物的本次研究从测定构成淫羊蕾双甙的2个主成分淫羊蕾甙、朝藿定C的含量、另一个重要成分箭霍苷B的含量和总黄酮的含量，以及HPLC指纹图谱的角度考察现今市场上的淫羊霍提取物的质量状况。 一、仪器、试药及试验准备 高效液相色谱仪，紫外可见光分光光度计；电子分析天平。 水为蒸馏水； 乙睛为色谱纯； 其余试剂均为分析纯。 淫羊藿甙、朝藿定C和箭藿苷B由西安源森生物研究组分离所得，用光谱方法鉴定结构，并用HPLC面积归一法测定其纯度为≥99%。 淫羊藿提取物来源于全国生产淫羊蕃提取物的几个代表地区：江苏、辽宁、山东、广西、陕西、四川的植物提取物生产商(赠送或购买)。 二、试验方法与结果 1、3种单体化合物的含量测定 （1）色谱条件 Venusil ASB一C18色谱柱(4.6mmx250mm,5μ)，保护柱:Security Guard Cartrid-ges C18 (4mmx3.0mm)； 流动相：0min 水(B)-乙睛(A) (75:25)，24 min A 27%，43 min A 48%，63 min A 80%，69 min A 100%，检测波长272nm，柱温20℃，流速1.0 mL·min-1。 3个对照品HPLC图见图1 1.朝藿定C； 2.淫羊藿甙； 3.箭藿苷B （2）对照品溶液的制备