未准爸爸自我检测：
对于准爸爸来说，你应带头检查自己的"软硬件"是否过关。具体点说，是看看自己在生殖功能方面是否存在隐患，例如阳痿、早泄、精液过多或过少以及睾丸异常等。
阳痿，在医学上被称为阴茎勃起功能障碍，大致可分为心理性阳痿和生理性阳痿两种。心理性阳痿从客观上讲并不是疾病，只是男人偶尔脆弱的一面。如果你善于调节，放松心情，很快就能重新振作。而生理性阳痿则通常是疾病的产物，如阴茎异常、动脉硬化、高血压、前列腺炎、肥胖等。此种情况下，需配合医生积极治疗。
早泄是指性生活时精液泄出过早。这无疑会破坏双方的"性致"，而且对孩子的健康影响也很大。早泄也分为心理性和生理性两种，引起生理早泄的疾病有尿道炎、前列腺炎等等。
你还应仔细观测一下小生命的源泉--精液。一般说来，正常男子一次排出的精液量为2～7毫升。如果你偶尔一次射精量小于2毫升，可能是因为性生活过频而导致的供不应求。但如果每次的精液量都小于2毫升，就属于病态了，应立即去医院确诊。当然，精液量过多也并非好事。过多的精液量通常是由精囊炎症引起，精囊炎症会分泌出大量渗出液，使精液增多，但质量却堪忧。
蛋白质是人体的基础营养，是生成精子的重要原材料。它就好比一座高楼的钢筋水泥，少了它，人体的新陈代谢和生理功能都会受到影响，甚至无从谈起。备孕男同胞的饮食应以高蛋白质为主，多吃牛奶、禽肉、蛋类、大豆类、牛肉、鱼肉还有锌爸爸的食物。
锌、硒是精子代谢和男性生殖系统免疫功能最为重要的组成，一旦少了它们，不仅引起少精、弱精等精子异常，而且免疫力低下，容易受前列腺炎等炎症的反复感染，继而诱发精子畸形、精子不液化。
此外，睾丸是产生精子的地方。因此，无论是先天发育障碍还是后天的诸多因素引起的睾丸病变，都会影响宝宝的健康。
准爸爸在孕前准备的必修课 #优生遗传#当怀孕成为家庭的头等大事后，孕前准备就成了未准父母们的必修课了，而在这个课程中似乎妈妈们应修的学分更多一些，毕竟宝宝是在妈妈的身体里生长发育的，其实爸爸要修的学分一点也不比妈妈少，别忘了，准爸爸要保证精力十足，才能提供优质的精子与妈妈的卵子结合哦。所以，未准妈妈们也要监督老公，不能让他偷懒。一、少穿紧身的裤子，专家强调，别穿太紧的长裤，当然也不要穿太紧的内裤。过紧的裤子、合成材料以及过高的温度都被证明能够影响男性的生殖能力。二、少洗热水浴，经常洗热水浴是可以使精子数量降低的。在40℃以上的热水中呆上半个小时以上就会降低男性的精子数量。桑拿、蒸汽室和旋流温水浴也应该避免的。三、禁烟戒酒，大量饮酒不仅会伤肝脏，研究表明也会损伤精子，从而使他的生殖能力下降。大量饮酒可以使睾酮水平降低并降低精子的质量和数量。吸烟会影响男人的生殖能力，会引起男性的勃起障碍，每天抽1至2包香烟的男性，精子可能会畸形，其游动的速度也可能比非吸烟者慢很多。四、控制体重，脂肪过多或过少都可能扰乱性激素的正常产生，这将会使男性精子数量降低并且使异常精子所占百分比升高。所以男性也要将体重控制在正常范围内，才最可能产生大量高质量的精子。五、适度的夫妻生活，过多的射精和长时间的节欲都会影响精子的质量。房事每2至3天一次可能是比较理想的。房事过多，可导致慢性前列腺充血，发生无菌性前列腺炎，直接影响到精液的营养成分、数量、粘稠度、酸碱度等，诱发不育。另外，房事过频，妻子频繁地接触丈夫的精子和粘液，容易激发女性体内产生抗精子抗体，导致女方免疫性不孕。六、运动：劳逸结合，人的大脑皮层处于正常工作状态下时，全身的神经、内分泌功能稳定，睾丸的生精功能及生理功能正常。相反，如果由于身体处于疲劳状态，大脑皮层的工作便会失调，全身神经、内分
原位杂交组织（或细胞）化学（In situ Hybridization Histochemistry，ISHH）简称原位杂交（In Situ Hybridization），属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。根据所用探针和靶核酸的不同，原位杂交可分为DNA-DNA杂交，DNA-RNA杂交和RNA-RNA 杂交三类。 根据探针的标记物是否直接被检测，原位杂交又可分为直接法和间接法两类。直接法主要用放射性同位素、荧光及某些酶标记的探针与靶核酸进行杂交，杂交后分别通过放射自显影、荧光显微镜术或成色酶促反应直接显示。间接法一般用半抗原标记探针，最后通过免疫组织化学法对半抗原定位，间接地显示探针与靶核酸形成的杂交体。 原位杂交最初是以同位素标记探针进行的。尽管同位素标记（如35S，3H，32P等）仍然广泛使用，但非同位素标记探针的迅速发展（尤其是生物素标记探针和地高辛标记探针），更引起科技工作者的极大兴趣。 一、基本要求 1. 组织取材：组织取材应尽可能新鲜。由于组织RNA降解较快，所以新鲜组织和培养细胞最好在30 min 内固定。 2. 固定目的是： （1）保持细胞结构； （2）最大限度地保持细胞内DNA或RNA的水平； （3）使探针易于进入细胞或组织。 最常用的固定剂是多聚甲醛，与其它醛类固定剂（如戊二醛）不同，多聚甲醛不会与蛋白质产生广泛的交叉连接，因而不会影响探针穿透入细胞或组织。 3. 增强组织的通透性和核酸探针的穿透性： （1）稀酸处理和酸酐处理：为防止探针与组织中碱性蛋白之间的静电结合，以降低背景，杂交前标本可用0.25%乙酸酐处理10 min，经乙酸酐处理后，组织蛋白中的碱性基团通过乙酰化而被阻断。组织和细胞标本亦可用0.2 M HCl处理10 min，稀酸能使碱性蛋白变性，结合蛋白酶消化，容易将碱性蛋白移除。 （2）去污剂处理：去污剂处理的目的是增加组织的通透性，利于杂交探针进入组织细胞，最常应用的去污剂是Triton X-100。注意：过度的去污剂处理不仅影响组织的形态结构，而且还会引起靶核酸的丢失。
Southern杂交 Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量 基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。 Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）；二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。 Northern 印记杂交 Northern blot 是一种通过检测RNA的表达水平来检测基因表达的方法，通过northern blot 的方法可以检测到细胞在生长发育特定阶段或者胁迫或病理环境下特定基因表达情况。 原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 Western杂交 原理：是将蛋白质电泳、印迹、免疫测定融为一体的特异性蛋白质的检测方法。其原理是：生物中含有一定量的目的蛋白。先从生物细胞中提取总蛋白或目的蛋白，将蛋白质样品溶解于含有去污剂和还原剂的溶液中，经SDS-PAGE电泳将蛋白质按分子量大小分离，再把分离的各蛋白质条带原位转移到固相膜（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，接着将膜浸泡在高浓度的蛋白质溶液中温育，以封闭其非特异性位点。然后加入特异抗性体（一抗），膜上的目的蛋白（抗原）与一抗结合后，再加入能与一抗专一性结合的带标记的二抗（通常一抗用兔来源的抗体时，二抗常用羊抗兔免疫球蛋白抗体），最后通过二抗上带标记化合物（一般为辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶）的特异性反应进行检测。根据检测结果，从而可得知被检生物（植物）细胞内目的蛋白的表达与否、表达量及分子量等情况。
未准爸爸孕前必修课 来源：摇篮网 【导读】当怀孕成为家庭的头等大事后，孕前准备就成了未准父母们的必修课了，而在这个课程中似乎妈妈们应修的学分更多一些，毕竟宝宝是在妈妈的身体里生长发育的，其实爸爸要修的学分一点也不比妈妈少，别忘了，准爸爸要保证精力十足，才能提供优质的精子与妈妈的卵子结合哦。 当怀孕成为家庭的头等大事后，孕前准备就成了未准父母们的必修课了，而在这个课程中似乎妈妈们应修的学分更多一些，毕竟宝宝是在妈妈的身体里生长发育的，其实爸爸要修的学分一点也不比妈妈少，别忘了，准爸爸要保证精力十足，才能提供优质的精子与妈妈的卵子结合哦。所以，未准妈妈们也要监督老公，不能让他偷懒。 一、少穿紧身的裤子 专家强调，别穿太紧的长裤，当然也不要穿太紧的内裤。过紧的裤子、合成材料以及过高的温度都被证明能够影响男性的生殖能力。 二、少洗热水浴 经常洗热水浴是可以使精子数量降低的。在40℃以上的热水中呆上半个小时以上就会降低男性的精子数量。桑拿、蒸汽室和旋流温水浴也应该避免的。 三、禁烟戒酒 大量饮酒不仅会伤肝脏，研究表明也会损伤精子，从而使他的生殖能力下降。大量饮酒可以使睾酮水平降低并降低精子的质量和数量。吸烟会影响男人的生殖能力，会引起男性的勃起障碍，每天抽1至2包香烟的男性，精子可能会畸形，其游动的速度也可能比非吸烟者慢很多。 四、控制体重 脂肪过多或过少都可能扰乱性激素的正常产生，这将会使男性精子数量降低并且使异常精子所占百分比升高。所以男性也要将体重控制在正常范围内，才最可能产生大量高质量的精子。 五、适度的夫妻生活 过多的射精和长时间的节欲都会影响精子的质量。房事每2至3天一次可能是比较理想的。房事过多，可导致慢性前列腺充血，发生无菌性前列腺炎，直接影响到精液的营养成分、数量、粘稠度、酸碱度等，诱发不育。另外，房事过频，妻子频繁地接触丈夫的精子和粘液，容易激发女性体内产生抗精子抗体，导致女方免疫性不孕。 六、运动：劳逸结合 人的大脑皮层处于正常工作状态下时，全身的神经、内分泌功能稳定，睾丸的生精功能及生理功能正常。相反，
原位杂交原理及具体操作
原位杂交实验原理与方法 一、目的 本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。 二、原理 原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标记探针与组织细胞中的待测核酸杂交，再应用标记物相关的检测系统，在核酸原有的位置将其显示出来的一种检测技术。原位杂交的本质就是在一定的温度和离子浓度下，使具有特异序列的单链探针通过碱基互补规则与组织细胞内待测的核酸复性结合而使得组织细胞中的特异性核酸得到定位，并通过探针上所标记的检测系统将其在核酸的原有位置上显示出来。 当然杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。 探针的种类按所带标记物可分为同位素标记探针和非同位素标记探针两大类。目前，大多数放
射性标记法是通过酶促反应将标记的基因掺入DNA中，常用的同位素标记物有3H、35S、125I 和32P。同位素标记物虽然有灵敏性高，背底较为清晰等优点，但是由于放射性同位素对人和环境均会造成伤害，近来有被非同位素取代的趋势。非同位素标记物中目前最常用的有生物素、地高辛和荧光素三种。 探针的种类按核酸性质不同又可分为DNA探针、cDNA探针、cRNA探针和合成寡核苷酸探针。cDNA 探针又可分为双链cDNA探针和单链cDNA探针。原位杂交又可分为菌落原位杂交和组织原位杂交。 菌落原位杂交（Colony in situ hybridization）菌落原位杂交是将细菌从培养平板转移到硝酸 纤维素滤膜上，然后将滤膜上的菌落裂菌以释出DNA。将NDA烘干固定于膜上与32P标记的探针杂交，放射自显影检测菌落杂交信号，并与平板上的菌落对位。 组织原位杂交（Tissue in situ hybridization）组织原位杂交简称原位杂交，指组织或细胞的原位杂交，它与菌落的原位杂交不同。菌落原位杂交需裂解细菌释出DNA，然后进行杂交。而原位
Southern印迹杂交
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放射自显影或酶反应显色，从而检测特定DNA分子的含量
实验原理 核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图谱。但为了进一步构建出DNA分子的遗传图，或进行目的基因序列的测定以满足基因克隆的特殊要求，还必须掌握DNA分子中基因编码区的大小和位置。有关这类数据资料可应用Southern印迹杂交技术获得。
Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是 将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定 的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹（blotting）;二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针 在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。 该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的，Southern印迹杂交故因此而得名。 早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后， 经毛细管的虹吸作用，转移到硝酸纤维膜上。近年来 印迹方法和固定支持滤膜都有了很大的改进，印迹方 法如电转法、真空转移法；滤膜则发展了尼龙膜、化 学活化膜（如APT、ABM纤维素膜）等。利用Southern 印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中 某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性 片断长度多态性分析（RFLP）等。
孕前奶爸必做功课4 准爸爸身体素质影响胎儿性别 准爸爸身体疲劳状态下，易生女孩;工作轻松的准爸爸更容易得到男孩。 研究表明，准爸爸身体累不累，会影响女方生男生女。 原因是，Y精子虽然体态娇小敏捷，游得快，但寿命短，较脆弱，对环境的适应能力很弱。准爸爸若受孕期间常加班、熬夜、抽烟、喝酒，太过疲累，都会导致Y精子的折损，或元气不足，无力穿过粘调的宫颈粘液去同卵子会见，而被耐力更持久，寿命更长的X精子占上风。 因此，准爸爸身体疲劳状态下，易生女孩;工作轻松的准爸爸更容易得到男孩。 从职业上来说，工作忙、压力大的男性生女孩的概率很大，如老板、职业经理人、工程设计师、司机、飞行员、麻醉科医师等;而心态良好、工作轻松的男性则生男孩几率偏大。 想要生男孩的准爸爸，至少要在妻子怀孕前三个月，就要有意识地锻炼身体，调整作息，千万不要太累太疲劳，保持良好的心态，尽量不加班不熬夜少出差，让身体充分放松，好的身体状态有助于Y精子的矫健灵敏，更易让妻子怀上男孩。 在性生活上，想要生男孩的夫妻，在女方排卵日前5天最好禁欲，一方面让准爸爸身体得到充分休息，另一方面女性在排卵时期子宫颈呈碱性，更有利Y精子生存。 英国著名医学权威杂志《柳叶刀》指出，日本和丹麦科学家组成的联合科研小组对11815个新生儿的父母进行调查研究后得出结论，有吸烟习惯的夫妇生女孩的几率更高。 科学家将调查对象分成了3组：夫妇均不吸烟、每日吸烟在20支以下和每日吸烟在20支以上。结果发现第一组家庭生男孩的比例最高，为55%;而第三组家庭男孩的出生比例最低，仅为45%。即使夫妻只有一方吸烟，生男孩的几率也会降低。而且越是瘾君子，生女孩的几率明显越高。 科研小组负责人、哥本哈根医学院教授安妮说，吸烟对生育的影响也许可以帮助解释为什么最近几十年来，英国、美国和加拿大这些发达国家男孩的出生率呈现降低的趋势。“我们作出的假设是，y染色体比x染色体更为敏感，对吸烟造成的一些不良变化更为排斥，因此在受到香烟毒素的影响下，y染色体更加不易受精。” 一般男孩和女孩的出生比率为50：50，正常情况下，男孩出生比率还略高于女孩。此前曾有研究指出，压力、温度以及男方结婚的次数等都会对男女孩出生比例产生不同程度的影响，但吸烟影响男女出生比例在医学界还是首次提出。相关整本阅读：https://www.doczj.com/doc/944824492.html,/ebook/69b8c113192e45361066f5d4.html 孕前爸爸应做哪些充分准备 准备怀孕，准妈妈要注意调节饮食结构，而准爸爸可不能闲闲没事干哦。要知道，宝宝的健康可是有爸爸妈妈共同决定的，所以孕前准爸爸的饮食也不能忽视啊! 备孕时期，幸孕网专家提醒，备孕夫妇在饮食上可不能随便。在这竞争的社会机制中，为了自己的下一代能生存下去，饱经竞争风霜的准爸爸在考虑自己后代的时候，比谁都清楚，
附件1 《孕妇学校管理工作指南》（试行） 为加强孕产妇保健，保护母婴健康，规范孕妇学校工作，根据《中华人民共和国母婴保健法》及其实施办法，《孕产妇保健工作管理办法》和《孕产期保健工作规范》等法律法规、规定和各地实际，特制定《孕妇学校工作规范》。 孕妇学校是指对准妈妈、准爸爸及其亲属进行孕产期健康教育的场所。通过有组织地咨询、科普课堂，帮助、指导孕产妇了解有益于孕产期健康的行为和生活方式，改变不良行为和习惯,预防和减轻影响健康的危险因素，保护母婴健康,促进儿童早期综合发展,使其顺利、安全、健康地度过孕产期。 凡开展助产技术服务的各级各类医疗保健机构均应设置孕妇学校。 一、工作原则 1.实行分级管理，分类指导。 2.不仅重视孕产期生理、身体问题，还要关注心理、精神方面的问题。 3.提倡自然分娩，减少非医学原因剖宫产，减少不必要的医疗干预。 4.提倡、支持、促进母乳喂养。 5.尊重知情选择权。 二、课程设置与要求 （一）课程设置的基本原则 1.教材规范，内容具有科学性、科普性、实用性，通俗易懂。考虑到孕妇实际，一次讲课时间原则不超过1小时。 2.将孕期保健知识分为必修课和选修课，必修课的知识孕妇应该能熟练掌握。 3.讲课内容随着科技卫生及时代的发展不断更新，及时将新的理念、知识和技能传授给服务对象。
4.授课形式多样化，提倡教学互动，鼓励学员之间的交流。 5.有条件应提供个性化指导服务。 （二）课程设置 1.必修课 （1）产前检查与保健 大多数妈妈做产检时都是被动服从，对检查目的并不十分了解，而门诊医生又没有更多时间进行答疑，因此，通过在孕妇学校听课，参加活动，学习孕产期保健知识和自我监测方法，了解不同时期各项检查目的、意义及注意事项，配合各项相关检查的正常进行。 （2）孕期营养健康与体重管理 孕期均衡合理的营养有助于预防各种妊娠期并发症及巨大儿的产生，有效控制孕妇与胎儿体重，促进母婴健康。 （3）自然分娩 了解分娩征兆，学习产程基本知识，学习分娩镇痛方法与技巧，做好各种准备，积极配合，顺利完成分娩过程，减少不必要的医疗干预和非医学原因的剖宫产。 （4）母乳喂养 介绍母乳喂养的好处、方法、技巧，了解母乳喂养中常见问题和解决办法，为母乳喂养的妈妈提供帮助和支持，促进母乳喂养成功。 （5）产褥保健（坐月子） 坐月子是中国人的传统习惯，重视产褥期保健是医务人员的责任。介绍产褥期母体变化，产褥期容易发生的问题及解决方案，改变不科学的旧观念、旧习俗，学习避孕方法，科学度过产褥期。根据产妇特点，注重心理健康，预防产后抑郁。 （6）新生儿保健 初为人父人母，爸爸妈妈需要学习很多新生儿护理方法，了解新生儿生理特点，解决宝宝成长中可能遇到的常见问题。 2.选修课
原位杂交实验操作步骤 一质粒制备 1质粒的转化和扩增 1.1制备XL1-Blue感受态细菌 1.取400uLXL1-Blue菌种加入到含200mlLB培养基的锥形瓶中，37℃、100rpm 培养4h，离心，倒置，以冰冷的0.1mol/LCaCl_2重悬细菌，冰浴30min，离心，弃上清，倒置，再加4ml(含15%甘油)冰冷的CaCl2重悬细菌，分装(200μ/tube)，-80℃保存。 2.转化：在冰浴中将1管XL1-Blue感受态菌解冻，将浓度为2ng/μ1的质粒DNA4μ1加入到8Oμ1感受态菌中。 3.轻轻摇匀，冰浴30min。 4.42℃热激9O秒，然后迅速冰浴2min。 5.加入LB培养液(无氨苄青霉素)0.8ml，在37℃，100转/min水浴孵育60min。 6.取200μl菌液铺于琼脂板上(涂有X-Gal(20mg/ml)-IPTG(200mg/ml)的LB-氨苄青霉素50mg/ml,1μl/ml培养基)，待菌液全部被吸收后，倒置平板于37℃培养12-16h。 1.2鉴定和挑选含重组质粒的菌落 1.用无菌牙签挑取单菌落，接种到10ml含氨苄青霉素的LB培养液的离心管中，于37℃，200转/分培养2h，取1ml之一Eppendorf离心管，加 50μl10mmol/L EDTA(pH8.0)。 2.加入50μl新配置的0.2mol/LNaOH、0.5%SDS、20%蔗糖溶液后，振荡30秒。 3.在70℃温育5min，然后冷却到室温。 4.加1.5μ14mol/LKCl和0.5μ1含0.4%溴酚兰染液，振荡3O秒后，冰浴5min。 5.12000g，4℃离以3min，以除去细菌碎片。 6.制备1%的琼脂糖凝胶(含EB0.5μg/ml)，取50μl上清液加入到样品孔中，其中一孔加入中等分子量DNAMarker。恒压50V，进行电泳。 7.当溴酚兰迁移到凝胶全长的2/3-3/4时，停止电泳，在紫外灯下检查质粒DNA 分于量的大小是否与转入质粒相符。
Southern 杂交实验 Southern 杂交的原理是将待检测的DNA分子用限制性内切酶消化，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按照其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其他标记物标记的DNA探针进行反应。如果待测物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补原理进行结合，游离的探针洗涤后用显影或其他合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 一、溶液配制 (1)20 X SSC(1000 mL) : 组分浓度 3.0M的Nacl，0.3M的柠檬酸钠 NaCl 175.32g 柠檬酸钠88.26g NaOH调PH值到7.0，高温高压灭 (2)洗涤缓冲液Washing buffer 200ml 组分浓度：0.1M Maleic acid, 0.15M Nacl; pH 7.5(20℃); 0.3%(v/v) Tween20. Maleic acid：2.32g Nacl： 1.75g Tween20 0.6ml NaOH固体约1.7g调Ph值7.5 (3)马来酸缓冲液Maleic acid buffer 200ml 组分浓度：0.1M Maleic acid, 0.15M Nacl; pH 7.5 (20oC) Maleic acid：2.32g Nacl： 1.75g Tween20 0.6ml NaOH固体约1.7g调Ph值7.5 (4)检测缓冲液Detection buffer 100ml 组分浓度：0.1M Tris-HCl, 0.1M Nacl, pH 9.5(20oC) Tris 1.21g, NaCl 0.584g
孕前奶爸请注意3 男性需达到5项硬指标才能优育 要想孕出一个健康不可的优质宝宝，可不是未准妈妈一个人的责任，幸孕网专家提醒广大未准爸爸，为了孕育，男性一定要达到以下几个硬指标，而在现在生活节奏快的情况下，广大男性更应该注意。 指标一：年龄 名中医男科专家、中国中医研究院广安门医院泌尿外科男科主任医师贾金铭教授说：“人的最佳生育年龄应是24-30岁。 虽然男子18岁就已发育完全，女子“十四天癸至”即月经初潮，可以有子嗣，但这并不是最合适的生育年龄。另一方面，男子在40岁以后，身体素质已逐渐走下坡路，同时因饮食受到各种污染而在体内堆积增多，因此，在这种情况下生育出的下一代，患病几率将明显增加。” 指标二：情调 “精、气、神”乃人体“三宝”，三者互相联系，相辅相成。“神”是人身体状况的外在体现，人的精神状态如何，将直接影响到生育。因此，中医认为要健康生育，重在“调情致”，做到心境豁达开朗，学会排解各种不健康的情绪，这是优育非常重要又往往被忽视的一个方面。 指标三：运动 在打算生育的一段时间，男性要经常保持一定的运动量，工作要劳逸结合。运动时间可根据个人身体状况灵活制定，一般以每周3次以上、每次半小时以上为宜。另外，生活中要多见阳光、多呼吸新鲜空气，这有益于男性内分泌协调。 指标四：守规律 在生育打算时的前半年内就应该做到戒烟、戒酒，或其他不良生活嗜好。另外，对于性生活要“顺其自然”，没有不行，太过也不行。尤其不要为了追求所谓“持久、高质”的性生活而乱服鞭和补药。而对于有些性功能确实低下的患者，也应该在有经验中医医师的指导下服药进补。 指标五：饮食 贾教授强调，其实除了因患疾病而需要忌口外，要做到不偏食、什么都吃，这就是最佳饮食调养。与西方“以肉为主”的饮食相比，东方人尤其是中国人“以谷物和豆类为主”的传统饮食结构则更为健康。大鱼大肉对人体没有太多好处，吃多了还容易诱发前列腺炎等疾病。贾教授介绍，西方科学家曾做过一个实验，他们解剖了多名年龄在40岁以上死者的前列腺，结果发现几乎都存在癌细胞。对于生育能力差、少精的患者，则可以适当多吃瘦肉和蔬菜，因为瘦肉和蔬菜中富含的Vc、Va、Ve对精子很有好处。相关整本阅读：https://www.doczj.com/doc/944824492.html,/ebook/69b8c113192e45361066f5d4.html
原位杂交操作流程 1、使用地高辛标记的核酸探针进行石蜡切片的RNA原位杂交第一天 1）二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟； 2）无水乙醇浸泡2次，每次3分钟； 3） 95%乙醇浸泡2次，每次3分钟； 4） PBS清洗3分钟； 5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟； 6） PBS清洗10分钟； 7）加入胃蛋白酶25ul/ml，37℃孵育15分钟； 8） PBS清洗2次，每次3分钟； 9） 0.2N的HCl孵育30分钟； 10）PBS清洗2次，每次3分钟； 11）0.25%无水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分钟； 12）PBS清洗2次，每次5分钟； 13）预杂交缓冲液孵育30分钟； 14）准备核酸探针混合物：使用预杂交缓冲液稀释探针，85℃加热5分钟，置于冰块中10分钟； 15）杂交；第二天 16）将玻片置于SSC中2次，每次5分钟以去除封片； 17）PBS清洗3分钟； 18）RNA酶A溶液中（或0.1-1ng/mlPBS中），37℃孵育30分钟； 19）PBS清洗5分钟； 20）室温，2×SSC清洗10分钟； 21）37℃，1×SSC清洗10分钟； 22）37℃，0.5×SSC清洗10分钟； 23）缓冲液A孵育10分钟； 24）缓冲液A（1%正常绵羊血清和0.03%三重氢核X-100）孵育30分钟； 25）加入抗地高辛抗体（1/200的上述缓冲液，来自Boehringer Mannheim），37℃孵育3 小时； 26）缓冲液A清洗2次，每次10分钟； 27）缓冲液B清洗2次，每次5分钟； 28）制成NBT/BCIP暗处保存30-60分钟，显微镜下进行观察，如果背景尚佳，显色时间可延长到16小时；29）停止缓冲液B的反应，用水进行简单的清洗； 30）固红，脱水以及封片进行核的复染。 2、使用地高辛标记的寡核苷酸探针进行石蜡切片的原位DNA杂交第一天 1）二甲苯于37℃脱蜡2次，每次15分钟； 2）无水乙醇浸泡2次，每次5分钟； 3） 95%乙醇浸泡2次，每次5分钟； 4） PBS清洗5分钟； 5） 2%焦碳酸二乙酯室温下浸泡10分钟； 6） PBS清洗5分钟； 7）加入胃蛋白酶25ul/ml，37℃孵育10分钟； 8） PBS清洗2次，每次5分钟； 9） 0.2N的HCl孵育30分钟； 10）PBS清洗2次，每次5分钟； 11）0.25%无水乙酸和0.1M三乙醇胺孵育10分钟；
Southern 印迹杂交实验报告 姓名：陆叶学号：14211020062 专业：公共卫生 实验时间：12.18；12.25 带教老师：潘銮凤 【实验目的】 学习核酸杂交的基本过程和操作 【实验原理】 将待检测的DNA分子用或不用限制性内切酶消化后，通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，继而将其变性并按其在凝胶中的位置转移到硝酸纤维素薄膜或尼龙膜上，固定后再与同位素或其它标记物标记的DNA或RNA探针进行反应，检测靶DNA片段中是否存在与探针同源的序列。如果待检物中含有与探针互补的序列，则二者通过碱基互补的原理进行结合，游离探针洗涤后用自显影或其它合适的技术进行检测，从而显示出待检的片段及其相对大小。 用途：检测样品中的DNA及其含量，了解基因的状态, 如是否有点突变、扩增重排等。【实验步骤】 1、基因组DNA的限制性内切酶酶切 取1个1.5ml离心管按下列量依次加入基因组DNA、10X酶缓冲液，酶，做好标记。老师给的HL60基因组DNA 10μg（7.6μL）；10×Buffer E（10.4μL）；EcoR I（10 u/μL）（2μL）。总体积20μL。37℃保温1.5小时。 2、1％琼脂糖电泳 先制备凝胶，称取1.2 g Agarose放入三角烧瓶中，加入60 mL TAE溶液，微波炉中加热令其完全溶解，稍作冷却后加入GelRed核酸染液6μL（稀释10,000倍）。浇板，水平放置，待凝。胶凝后按照以下顺序加样。两组共用一块凝胶，共7个样。 ①基因组DNA10 20μl （自己的） ②基因组DNA10 μg（老师的） ③酶切样品 ④阳性对照（c-myc 4.7 kb线性片段，30pg/μl, 10μl) ⑤酶切样品 ⑥基因组DNA10 μg （老师的） ⑦基因组DNA10 20μl （自己的） 插上电源，负极在样品槽一边，DNA将向阳极跑，80V电泳2小时左右，直到溴酚蓝染料跑到接近凝胶尾部，在电泳期间做好胶变性和转移准备。 3、变性 切胶，2—6孔，宽4.5cm,长7cm(从顶部开始，可用尼龙膜保护纸作为标尺） ①将凝胶浸在5倍体积的胶变性液中, 慢慢摇动20分钟。 ②ddH2O洗2次。 ③在胶中和液中慢慢摇动15分钟。 4、转移 ①在搪瓷盘中加入300 ml 10×SSC，放上培养皿和小玻璃板。 ②将3张长滤纸浸湿，逐张放在玻璃板上，用移液管的滚动，赶走气泡。 ③切除多余凝胶，小心地将凝胶放在滤纸上（加样孔面向下），赶走滤纸与胶之间的气泡。 ④再将与胶大小相同的尼龙膜（浸湿）放在胶上，同样不能有气泡，然后放上三张浸湿的 滤纸，赶走气泡。 ⑤紧贴凝胶四周各放一张X光片。 ⑥小心蒙上一张比搪瓷盘大的保鲜膜。保鲜膜要紧贴滤纸，但不能让滤纸移动。
核心提示：孕前准备是未准父母们的必修课，准爸爸要保证精力十足，才能提供优质的精子与妈妈的卵子结合。 当怀孕成为家庭的头等大事后，孕前准备就成了未准父母们的必修课了，而在这个课程中似乎妈妈们应修的学分更多一些，毕竟宝宝是在妈妈的身体里生长发育的，其实爸爸要修的学分一点也不比妈妈少，所以，未准妈妈们也要监督老公，不能让他偷懒。 一、少穿紧身的裤子 专家强调，别穿太紧的长裤，当然也不要穿太紧的内裤。过紧的裤子、合成材料以及过高的温度都被证明能够影响男性的生殖能力。 二、少洗热水浴 经常洗热水浴是可以使精子数量降低的。在40℃以上的热水中呆上半个小时以上就会降低男性的精子数量。桑拿、蒸汽室和旋流温水浴也应该避免的。 三、禁烟戒酒 大量饮酒不仅会伤肝脏，研究表明也会损伤精子，从而使他的生殖能力下降。大量饮酒可以使睾酮水平降低并降低精子的质量和数量。吸烟会影响男人的生殖能力，会引起男性的勃起障碍，每天抽1至2包香烟的男性，精子可能会畸形，其游动的速度也可能比非吸烟者慢很多。 四、控制体重 脂肪过多或过少都可能扰乱性激素的正常产生，这将会使男性精子数量降低并且使异常精子所占百分比升高。所以男性也要将体重控制在正常范围内，才最可能产生大量高质量的精子。
五、适度的夫妻生活 过多的射精和长时间的节欲都会影响精子的质量。房事每2至3天一次可能是比较理想的。房事过多，可导致慢性前列腺充血，发生无菌性前列腺炎，直接影响到精液的营养成分、数量、粘稠度、酸碱度等，诱发不育。另外，房事过频，妻子频繁地接触丈夫的精子和粘液，容易激发女性体内产生抗精子抗体，导致女方免疫性不孕。 六、运动：劳逸结合 人的大脑皮层处于正常工作状态下时，全身的神经、内分泌功能稳定，睾丸的生精功能及生理功能正常。相反，如果由于身体处于疲劳状态，大脑皮层的工作便会失调，全身神经、内分泌功能就会出现异常，导致生殖功能紊乱，使精液量减少以及精子数目和活动力降低，导致不育。 加强身体运动。运动的方式应以耐力训练为主，不求运动量和运动强度，贵在长期坚持不懈，达到逐渐减肥、强体之目的。运动项目可多种多样，如漫步、游泳、乒乓球、羽毛球、篮球以及减肥操、器械训练等，每天运动至少要30分钟。 最后，如果对自己的生殖能力有所怀疑，觉得自己的精子不太健康，那就要及时到医院向医生进行咨询。最好是夫妻双方都进行孕前检查，这样才能对双方的整体健康状况有一个详细的了解，从而进行受孕计划。
原位杂交 1 探针的设计与合成 1)根据实验室已有的p8基因cDNA全长序列，用premier primer5.0设计引物p81和p82， 以卤虫cDNA为模板，PCR扩增得到346bp的产物，用Takara胶回收试剂盒回收纯化。引物编号引物序列长度 p81 TGCGGACGAAACAGGAAG 18 bp p82 GCTCAAACAGTGA TGCCAGT 20 bp 2)目的片段克隆 a. 在无菌离心管中加入连接载体的各种成分，载体与片段的摩尔比控制在1:3-1:8，根据凝胶电泳检测后的浓度及载体与片段分子大小来计算摩尔比。加入成分及比例如下： 目的PCR片段 5 μl pGM-T载体（约50ng/uL） 1 μl 10×T4 DNA Ligation Buffer 1 μl T4 DNA Ligase（3U/uL） 1 μl 无菌去离子水 3 μl 总体积10 μl b. 轻轻弹动离心管以混合内容物，短暂离心。置于PCR仪中16℃过夜连接，反应结束后将离心管置于冰上。 c. 向铺好的含有氨苄青霉素的固体平板表面加入16 μl的IPTG（50mg/ml）、40 μl的X-gal （20mg/ml），使用无菌的弯头玻璃棒将其均匀的涂开，避光置于37℃培养箱1-3小时，使溶解X-gal的二甲基甲酰挥发干净。 d. 将10 μl的连接产物加到100 μl DH5 感受态细胞中，轻弹混匀，冰浴半小时，将离心管置于42℃水浴90秒，取出管后立即置于冰浴上放置2-3分钟，其间不要摇动离心管。向离心管加入500 μl 37℃预热的LB（不含抗生素）培养基，150rpm摇床37℃振荡培养45分钟。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。将菌液于4000g下离心10分钟，去掉上清，加入100 μl培养液重溶并加入到配制好的LB固体培养基上，用无菌的弯头玻璃棒轻轻将细胞均匀涂开。待平板表面干燥后，倒置平板，37℃培养12-16小时。 e. 挑取白色菌落直接进行PCR检测，筛选转化子。 f. 将转化子接种于LB液体培养基中培养24小时，吸取1mL菌液送至大连宝生物公司进行序列测序。 3)重组质粒的线性化 取6 μl以测序的重组质粒，选取NcoI内切酶37℃酶切4h。酶切反应体系为20 μl： 质粒 6 μl 10xK Buffer 2 μl NcoI酶 1 μl 0.1% BSA 2 μl 灭菌水9 μl 终体积20 μl 取酶切前后的质粒各4 μl，经1%琼脂糖电泳检测，确认酶切完全，将酶切产物用Takara胶回收试剂盒回收纯化，作为探针合成的模板。 4)探针合成 按罗氏DIG RNA Labeling Kit (SP6/T7)试剂盒使用指南，标记反义RNA探针。 使用的所有试剂和器皿均经去RNase处理，合成方法如下:先准备反应体系。冰上向RNase-Free的微离心管中顺序加入下列试剂:
原位杂交实验操作步骤 撰写人：范为民 一、实验原理 原位杂交是指借助于核酸分子杂交的方法，在显微镜水平检测和定位特异的核苷酸片段。现在原位杂交已经成为在分子水平研究肿瘤和遗传性疾病的发生，发展和调控等根本性问题的有力工具。 二、试剂盒 本实验室常用的原位杂交试剂盒是博士德公司生产的敏感加强型原位杂交检测试剂盒，此试剂盒分为两种，一种为过氧化物酶（POD）检测（MK1030型），一种为碱性磷酸酶(AP)检测系统（MK1032型），用于mRNA的杂交。过氧化物酶（POD）检测的最终信号为棕黄色，而碱性磷酸酶(AP)检测的信号为紫色，因后者信号比较突出，所以一般采用后一种检测方法。两种检测方法的实验步骤相差不多，所用洗脱缓冲液也大同小异。用于杂交的探针也可以分为两种，一种是DNA探针，即是用DNA与组织中的mRNA杂交，另一种是RNA 探针，即用RNA与组织中的mRNA杂交。DNA探针处理操作简单，但杂交信号一般不如RNA探针强烈，所以条件允许的话一般采用RNA探针。下面先介绍碱性磷酸酶(AP)检测试剂盒，采用RNA作为探针的操作步骤。 三、实验步骤 原位杂交实验主要包括三大部分，即组织冰冻切片、RNA探针标记、原位杂交三部分。 （一）组织冰冻切片 1. 实验准备 （1）原位杂交专用载玻片：用多聚赖氨酸处理后的载玻片，使切片紧密粘附在玻片上，可以用于后面的洗脱。一般一张载玻片上可以贴至多十张切片（可以是不同组织的切片），所以需要玻片的数目需要根据实验的要求而定。这种专用载玻片可以从中杉金桥公司购买，目前价格是每片2.2元，玻片有一面的一端是毛玻璃，用于标记组织名称等，切片应该贴在此面，切勿贴到反面。 （2）缓冲液配备 1.1器具准备 剪刀、镊子各三把，开壳钳一把，100ml量筒一个，磁力搅拌子一个；100ml试剂瓶一个，250ml试剂瓶三个。以上器具均洗净后置于180摄氏度以上烘烤6小时以上。铅笔、显微镜、冰、吸水纸、一次性塑料手套等。 1.2 溶液配制 0.1M PB缓冲液：Na2HPO4?12H2O 5.8021g,NaH2PO4?2 H2O 0.5928 g,加入200ml ddH2O溶解于之前准备的250ml试剂瓶中，再加入200ūl DEPC，充分摇匀后过夜，高压灭菌。以上溶液配制两份，其中一份瓶中放入磁力搅拌子。
怀孕的第一个月，即是确认准妈妈怀孕的时候。通常最后一个月，准妈妈会觉得时间变得漫长，很着急要跟肚子里的宝宝见面，这时的宝宝已经开始落入盆腔，准妈妈会感到比较舒服。 妻子怀孕了，准爸爸也要开始负起责任来，幸孕网孕育专家提醒，在这怀胎十个月里，准爸爸每月要做好以下一些事情。 第一个月 怀孕的第一个月，即是确认准妈妈怀孕的时候。 通常准妈妈的生理状况会有一些微妙的变化：比如胃口跟以前有点不一样了，常常提不起劲。在确认已怀孕的情况下，准爸爸就得开始我们的爱心旅程了，全心遵守爱心守则： 1.陪妻子到医院确认是否受孕成功，并在医生的指导下准备叶酸及所需补充的维生素，督促妻子每天按时按量服用。 2.戒烟、戒酒、戒药物，因为烟、酒、药物都会对胎宝宝的成长造成不良影响。 3.准备关于孕期指南及育儿方面的书籍。 4.和妻子一起制定一个孕期日程表，罗列每个月该做的事情。 5.节制自己的性欲，避免前3个月进行性生活。 6.跟一些已经当爸爸的同事、朋友交流，吸取经验。 第二个月 怀孕的第二个月，是胎儿各器官分化发育的敏感时期，准妈妈要特别注意远离一些容易对胎儿致畸的元素：比如辐射、X光线、化学药品等。有些准妈妈开始了强烈的妊娠反应，身体虚弱的准妈妈更要注意休息，过度劳累容易引起先兆流产。所以准爸爸从这个月开始就应该： 1.主动承担一些家务，减轻妻子的体力劳动消耗，保证她有充分的休息和睡眠。 2.温柔体贴妻子，安抚她不安的情绪。 3.把房间布置得干净温馨，可以添置妻子喜欢的物品和宝宝海报。 4.对有妊娠反应的准妈妈，准爸爸要更加悉心关照，在妻子反应时多给予协助，为她准备可能接受的食物。 5.给妻子添置防辐射衣，电脑防辐射屏等用品，叮嘱妻子远离家中的辐射源：微波炉、电脑、电热毯等。
仪器设备 1、医用微波炉； 2、水浴锅； 3、OLYMPUS BX51荧光显微镜； 4、OLYMPUS DP11数字显微照相机。 FISH试剂 （1）1×PBS：由10×PBS溶液稀释而成，储存于4℃； （2）20×SSC（）； （3）2×SSC，由20×SSC溶液稀释而成； （4）25mg/ml蛋白酶K消化液。 （5）变性液(70％甲酰胺+2×SSC，：4ml 20×SSC；8ml蒸馏水；28ml甲酰胺。每次新鲜配制。 （6）杂交后洗涤液：20×SSC 4ml；蒸馏水16ml；甲酰胺20ml。每次新鲜配制。调节pH 前升至室温。 实验步骤 1、脱蜡： 1）二甲苯脱蜡3次，每次5min； 2）100％酒精两次，每次2min； 3）移出酒精，斜置切片，标记末段向下，空气干燥。 2、蛋白酶处理: 1）每个染色缸40ml蛋白酶K消化溶液，配制方法如下：2×SSC 40ml倒人Facal管，在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内，摇动直到酶溶解。 2）37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20min。 3）×SSC在室温下漂洗切片3次，每次1min。 4）梯度酒精脱水（-20℃预冷）。 3、变性： 1）每一个立式染色缸配制40ml变性溶液； 2）78℃水浴槽中平衡预热混合液染色缸； 3）78℃孵育8min； 4）即移入-20℃预冷70%酒精的染色缸内2min，再依次移入80%、90%和100%的-20℃预冷酒精内，每缸2min； 5）空气干燥。 4、杂交： 1）准备探针； 2）取一个较大的湿盒，交叉放置切片； 3）滴10μl探针在切片的组织上，加盖玻片； 4）盖上湿盒盖，37℃孵育12h～16h。 杂交后的水洗： 5）镊子小心去除盖玻片； 6）43℃预热杂交后水洗溶液40ml水洗切片15min； 7）2×SSC(37℃)洗两次，每次10min； 8）切片放人染色缸的1×PBS内待检测，勿使切片干燥。 检测：
地高辛标记探针的Southern杂交 1.探针标记(20μL体系)： 1)将10ng-1μg模板DNA用无菌去离子水补足至16μl。 2)沸水浴或干浴锅98o C10分钟，使DNA变性成单链并迅速冰浴冷却。 3)充分混匀DIG-high Primer（1#管），并取4μl至变性DNA管，混匀并离 心； 4)37o C温育1小时或过夜（最大到不超过20小时）； 5)停止反应，加2μL0.2M EDTA（pH8.0）或65o C加热10分钟。若不用 将于-20o C冰箱保存。 2.探针标记效率检测： 将地高辛标记好的探针作一系列的稀释，点到一条尼龙膜上，同时用地高辛标记的control DNA作对照标准，120℃固定30分钟；然后用地高辛抗体免疫检测，按BNT/BCIP显色步骤显色；比较显色结果，选择带有可以接受的背景的最高探针浓度做正式的杂交。操作步骤如下： 1)根据表1DIG-High Prime DNA标记及检测试剂盒理想条件下探针的标记 产量将标记的探针稀释到1ng/μl，将试剂盒提供的control DNA稀释到1ng/μl(原始浓度是5ng/μl)，然后按照表2作一系列的稀释探针及control DNA稀释 表1DIG-High Prime DNA标记及检测试剂盒理想条件下探针标记产量 Template DNA1h20h 10ng45ng600ng 30ng130ng1050ng 100ng270ng1500ng 300ng450ng2000ng 1000ng850ng2300ng 3000ng1350ng2650ng
表2探针DNA及Control DNA系列表 Tube DNA(μl)From Tube#DNA dilution buffer(μl) Dilution Final concentration 1Diluted orginal 1ng/μl 2211981:10010pg/μl 3152351:3.33pg/μl 452451:101pg/μl 553451:100.3pg/μl 654451:100.1pg/μl 755451:100.03pg/μl 856451:100.01pg/μl 90-50-0 1)将上述稀释的2-9号管的control DNA及探针DNA各取1μL点膜； 2)120o C固定30min或紫外交链3-5min； 3)将膜放入装有20mL Maleic acid buffer的塑料器皿中，室温振荡2min； 4)将膜放入10mL Blocking solution中室温温育30min； 5)将膜放入10mL Antibody solution中室温温育30min； 6)用10mL Washing buffer洗2次，每次15min； 7)在10mL Detection buffer平衡2-5min； 8)将膜放入2mL新配制的Color substrate solution(从试剂5#中取100ul到 5mL)中暗室条件下显色。显色过程中不要摇动或振荡! 9)当斑点或带显示出来后，用50ml灭菌的双蒸水洗膜5分钟，照相 染色至0.1pg的Control DNA出现斑点，比较标记的探针与Control DNA染色情况计算出地高辛标记的DNA的量：如果0.1pg的探针及对照稀释点都显色，则探针标记理想；如果0.1pg的对照显色，0.1pg的标记探针没显色，但0.3pg 显色，则计算探针浓度（约为理想浓度的1/3）以确定杂交时加多少探针（25ng 探针/ml杂交液）；如果0.1pg的对照显色，但标记探针0.3pg的斑点没显色，则应重新标记探针。