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031*-2./4,+ 5 8679giaifi [`eg]\_debe^h \ZgZbe^ edb`d]:mwwtYOOyyyNwioiuiNjsqNjr .1/{30,z +|2}-4*~ Q c gunvM_\p Jt_WNTL WNVL XNPK : I JRNS7GDO :H :8b~:;:8:M JRNS QK :H 4^R U ;8t 3L A99 POg /} T8Yclw\1yU <8[?`~t 3-C9ix ;AD gQG O U =8u 1E j 2P :HU >8m >m B,{qY 7>]dU SF Z I61E |0P7>q N ijQG O Y H 常用试剂的配制 1．无Ca2+、Mg2+Hanks液 NaCl 4.5g KCl 0.2g NaHCO 3 0.175g Na 2HPO 4 ·12H 2 O 0.076g KH 2PO 4 0.03g 葡萄糖 0.5g 0.4%酚红 2.5ml 将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中, 最后补加双蒸水至500ml, 以5.6%NaHCO 3调整 pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。 2．甲基红试剂 （1）成份 甲基红 0.1g 蒸馏水 200ml 95％乙醇 300ml （2）用途：测定甲基红反应。 3．Hanks液（原液） 原液甲： NaCl 160g KCl 8g MgSO 4·7H 2 O 2g MgCl 2·6H 2 O 2g 上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。 CaCl 2 2.8g溶于100ml双蒸水 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 原液乙： Na 2NPO 4 ·12H 2 O 3.04g KH 2PO 4 1.2g 葡萄糖 20g 加入800ml双蒸水，溶解。 0.4%酚红溶液100ml 上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。 使用时甲,乙原液按下列比例配成Hanks 液使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，8磅20min灭菌，放4℃冰箱保存，使用前用NaHCO 3 调整PH值。 4．0.4%酚红溶液 称取0.4g酚红置研钵中研碎，逐渐加入0.lmol/LNaOH并不断研磨，直到所有的颗粒 几乎完全解，加入0.lmol/LNaOHl0ml，然后倒入容量瓶中，并加蒸馏水至l00ml,棕色瓶保存备用。 5．pH7.2 Tris-NH 4 CI溶液(红细胞崩解液） Tris (三羟甲基氨基甲烷) 1.03g NH 4 Cl（氯化氨) 3.735g 加双蒸水至500ml，用浓HCl调pH=7.2，10磅15min灭菌后放4℃保存。 6．0.05moI/L pH8.6 巴比妥缓冲液 巴比妥 1.84g 加蒸馏水 200ml 加热溶解 巴比妥纳 10.3g 叠氮纳 0.2g 加蒸馏水溶解 , 并补加到 1000ml 。 7．磷酸盐缓冲液(PB) A 液：为 0.2mol/L 磷酸二氢钠水溶液 ,NaH 2PO 4 ·H 2 O 27.6g, 溶于蒸馏水中, 最 后补加蒸馏水至 1000ml 。 B 液：为 0.2mol/L 磷酸氢二钠水溶液 ,Na 2HPO 4 .7H 2 O 3.6g（或 Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g, 或Na 2HPO 4 · 2H 2 O 35.6g ）, 加蒸馏水溶解，最后加水至 1000ml。若再加 蒸馏水至200ml则成为0.1mol/LPB。 8．0.1mol/LPH8.4 硼酸缓冲液（BBS） 硼酸钠（Na 2B 4 O 7 .10H 2 O） 0.46g 硼酸（H 2BO 3 ） 0.51g 加蒸馏水至100ml 溶解。9．PH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS）配制方法一： 0.2mol/L Na 2HPO 4 （ Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 71.6g加蒸馏水至1000ml） 0.2mol/L NaH 2PO 4 （NaH 2 PO 4 ·2H 2 O 35.6g加蒸馏水至1000ml） 取0.2mol/L Na 2HPO 4 81.0ml 加0.2mol/L NaH 2 PO 4 19ml,再加1900mlH 2 O和 17gNaCl即为PH7.4 0.01mol/L PBS。 PH7.4 0.01mol/L PBS再加入0.05%Tween-20即为ELISA试验的洗涤液。 配制方法二： 甲液（0.1mol/LKH 2PO 4 溶液）：KH 2 PO 4 13.608g，加蒸馏水至1000ml。 乙液（0.1mol/L Na 2HPO 4 溶液）：Na 2 HPO 4 35.814g，加蒸馏水至1000ml。 取甲液19ml，乙液81ml NaCl8.5g、Tween-20 0.5ml混合后加蒸馏水至1000ml即可。 实验室试剂管理办法 1目的 1.1使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2范围 2.1适用于化验室化验员日常药品的管理。 3职责 3.1化验室 4内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、 通风良好、温度一般不超过３０℃。 4.1.2化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3室内备有消防器材。 4.1.4所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分 类，钾盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示 剂按用途分类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按 测定对象分类。 4.1.5易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配 备相应的灭火设备。 4.1.6低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂 同置一个柜中。 4.1.7见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财 产损失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于<化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过 程中都应避免受热和强光照射。 4.2.2所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原 标签，配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影 响。 4.2.3.1试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标 明配制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光等。 4.2.3.2试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓 度多会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 化学试剂管理规定 一、目的 建立化学试剂管理规程，保证化学试剂正确使用，确保检验结果真实可靠。 二、适用范围 本制度适用于公司化学试剂的采购、贮存、使用与管理。 三、职责 1 严格按照操作程序使用和储存化学试剂。 2 理化实验室主管负责化验室化学试剂日常使用的监督与管理。 3 综合办公室负责化验室化学试剂的采购。 四、管理规定 1 化学试剂的分级 1.1 术语 化学试剂：是指在化学实验、化学分析工作中所用的具有一定纯度标准的各种单质和有机、无机化合物。 1.2 我们常用的化学试剂按使用等级分为4级，如下表1所示： 表1：一般化学试剂的分级 1.3 除上述把化学试剂分为四级外，尚有其它特殊规格的化学试剂，如表2所示： 表2：特殊规格化学试剂的分级 2 化学试剂的贮存 2.1 化学试剂由专人管理，管理人员应由具备一定的专业知识，具有高度责任心，保证化学试剂按规定的要求贮存。 2.2 化学试剂应单独贮藏于专用的试剂贮存室内。保持贮存室内清洁，通风，保证所贮试剂的贮存条件符合规定要求。 2.3 化学试剂贮存室应设在安全位置，消防灭火设施器材完备，以防一旦事故发生造成伤害和损失。 2.4 化学试剂贮藏室应有良好排风装置。盛放易燃易爆化学试剂的贮存柜顶部需装有通风设施，取用方便。 2.5 化学性质或防护、灭火方法相互抵触的化学危险物品，不得在同一柜或同一储存室内存放。 2.6 对于易燃、毒害性较大的试剂应上锁保管。危险物品的采购和提运按公安部门和交通运输部门的有关规定办理。剧毒、放射性物体、爆炸品试剂及其它危险物品，要单独存放，应执行双人双锁双台帐双人验收双人发放“五双”管理，由使用人员领取使用，保管人员应建立记录，记录内容应有试剂名称、存放数量、领用人、领用日期、领用量、发放人姓名等内容，剧毒试剂的领用需实验室负责人签字。 2.7 配制的试剂应贴标识，注明试剂名称、浓度、配制时间、有效期及配制人。 2.8 每周检查试剂是否过期，过期试剂应及时妥善处置。 2.9 配制的试剂除有特殊规定外，存放期不应超过三个月。 2.10 应定期检查试剂是否齐全，所缺试剂应及时申请购买。 2.11 标准物质应按规定存放，定期检查是否完好，每次使用必须有相应的记录。标准物质证书统一存放在资料柜。 2.13 所有药品必须有明显的标志。对字迹不清的标签要及时更换，对过期失效和没有标签 Code No.：DRR019A RNA PCR Kit (AMV) Ver.3.0 （100次量） 目录 内 容 页 码 ●制品说明 1 ●制品内容 1 ●保存 2 ●RNA PCR原理 2 ●试剂盒特点 3 ●RNA样品制备 4 ●使用注意 4 ●引物选择 5 ●实验操作 5 ●Q&A9 ●参考文献 9 ●制品说明 PCR（Polymerase Chain Reaction；聚合酶链式反应）是一种体外扩增DNA的简单而有效的方法。虽然原理上PCR法是扩增DNA，RNA不能直接被扩增，但是经过反转录酶的作用把RNA反转录成cDNA 后，PCR法便可应用于RNA的解析了。迄今为止，此方法已广泛应用于RNA的构造解析、cDNA的克隆及RNA水平上的表达解析等多种领域。 TaKaRa RNA PCR Kit Ver.3.0是使用AMV（Avian Myeloblastosis Virus）由来的反转录酶将RNA合成cDNA，然后在同一反应管中使用Hot Start PCR用TaKaRa Ex Taq HS DNA聚合酶扩增此cDNA的RT-PCR试剂盒。本试剂盒含有从RNA到cDNA，然后使用PCR法扩增此cDNA所需的全部试剂。 本试剂盒中的Oligo dT-Adaptor Primer的独特设计，大大地提高了Poly(A )+ RNA 3′端区域的cDNA合成效率。Hot Start PCR用DNA聚合酶TaKaRa Ex Taq HS的应用，大大地增加了本试剂盒的扩增性能。 ●制品内容（100次量） 1. AMV Reverse Transcriptase XL（5 U/μl） 50 μl （Avian Myeloblastosis Virus来源） 2. RNase Inhibitor（40 U/μl） 25 μl 3. Random 9 mers（50 pmol/μl） 50 μl 4. Oligo dT-Adaptor Primer（2.5 pmol/μl） 50 μl 5. RNase Free dH2O 1 ml 6. TaKaRa Ex Taq?HS（5 U/μl） 40 μl 7. M13 Primer M4（20 pmol/μl） 50 μl 8. 10×RT Buffer 1 ml [100 mM Tris-HCl（pH8.3），500 mM KCl] 9. 5×PCR Buffer 1 ml 10. dNTP Mixture（各10 mM） 150 μl 11. MgCl2（25 mM） 1 ml 12. Control R-1 Primer（20 pmol/μl） 25 μl （Positive Control RNA下游引物） 13. Control F-1 Primer（20 pmol/μl） 25 μl （Positive Control RNA上游引物） 14. Positive Control RNA（2×105 copies/μl） 25 μl （Transcribed poly(A)+ RNA of pSPTet3 plasmid） 【各种引物序列】 引物名称 各引物序列 Random 9 mers 5′-（P）NNNNNNNNN-3′ Oligo dT-Adaptor Primer 包含dT区域及M13 Primer M4序列。 Control F-1 Primer 5′-CTGCTCGCTTCGCTACTTGGA-3′ Control R-1 Primer 5′-CGGCACCTGTCCTACGAGTTG-3′ M13 Primer M4 5′-GTTTTCCCAGTCACGAC-3′ -1- 实验室常用溶液及试剂配制 一、实验室常用溶液、试剂的配制-------------------------------------------------------1 表一普通酸碱溶液的配制 表二常用酸碱指示剂配制 表三混合酸碱指示剂配制 表四容量分析基准物质的干燥 表五缓冲溶液的配制 1、氯化钾-盐酸缓冲溶液 2、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 3、邻苯二甲酸氢钾-氢氧化钾缓冲溶液 4、乙酸-乙酸钠缓冲溶液 5、磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲溶液 6、硼砂-氢氧化钠缓冲溶液 7、氨水-氯化铵缓冲溶液 8、常用缓冲溶液的配制 二、实验室常用标准溶液的配制及其标定-----------------------------------------------4 1、硝酸银（C AgNO3=0.1mol/L）标准溶液的配制 2、碘（C I2=0.1mol/L）标准溶液的配制 3、硫代硫酸钠（C Na2S2O3=0.1mol/L）标准溶液的配制 4、高氯酸（C HClO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 5、盐酸（C HCl=0.1mol/L）标准溶液的配制 6、乙二胺四乙酸二钠（C EDTA =0.1mol/L）标准溶液的配制 7、高锰酸钾（C K2MnO4=0.1mol/L）标准溶液的配制 8、氢氧化钠（C NaOH=1mol/L）标准溶液的配制 三、常见物质的实验室试验方法 ----------------------------------------------------------6 1、柠檬酸（C6H8O7·H2O） 2、钙含量测定（磷酸氢钙CaHPO4、磷酸二氢钙Ca（H2PO4）2·H2O、钙粉等） 3、氟（Fˉ）含量的测定 4、磷（P）的测定 5、硫酸铜（CuSO4·5H2O） 6、硫酸锌（ZnSO4·H2O） 7、硫酸亚铁（FeSO4·H2O） 8、砷 9、硫酸镁（MgSO4） 四、维生素检测--------------------------------------------------------------------------------8 1、甜菜碱盐酸盐 2、氯化胆碱 Code No. RR047A 研究用 PrimeScript TM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 说明书 目录 内容页码 ●制品说明1 ●制品内容 1 ●试剂盒外必备材料 1 ●保存 1 ●特长 2 ●使用注意 2 ●操作方法 2 ●Real Time PCR 4 ●实验例 6 ●附录7 ●关联产品8 ●制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA作为模板检出的先决条件，但Total RNA中常常混有基因组DNA，并可以直接作为PCR反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA得不到扩增。但是，此方法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA样品进行DNase I处理，以除去残存的基因组DNA。而DNase I处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser是可以除去基因组DNA进行Real Time RT-PCR反应的专用反转录试剂。Kit中使用了具有较强DNA分解活性的gDNA Eraser，通过42℃，2 min即可除去基因组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser处理后的样品可以直接进行15 min的反转录反应合成cDNA，因此，20 min内即可迅速完成从基因组DNA去除到cDNA 合成的全过程。 使用本制品合成的cDNA适用于SYBR? Green分析法和TaqMan?探针分析法，可以根据实验目的，选择与SYBR?Premix Ex Taq II（Tli RNaseH Plus）、Premix Ex Taq（Probe qPCR）等定量试剂组合使用。注意：Takara Bio使用SYBR? Green I作为研究试剂已得到Molecular Probes Inc.的许可。SYBR?为Molecular Probes Inc.的注册商标。 ●制品内容（20 μl反应×100次） 1. gDNA Eraser 100 μl 2. 5×gDNA Eraser Buffer*1200 μl 3. PrimeScript RT Enzyme Mix I*2100 μl 4. 5×PrimeScript Buffer 2（for Real Time）*3400 μl 5. RT Primer Mix*4 400 μl 6. RNase Free dH2O 1 ml×2 7. EASY Dilution（for Real Time PCR）*5 1 ml *1：5×gDNA Eraser Buffer在反转录反应前使用，请务必进行基因组DNA的除去反应。 *2：含有RNase Inhibitor。 *3：含有dNTP Mixture。 *4：含有Oligo dT Primer和Random 6 mers。 *5：制作标准曲线时梯度稀释DNA或RNA标准品的稀释液。模板DNA或RNA如果用水或TE Buffer稀释时，由于受Microtube吸附作用等的影响，往往不能准确地进行稀释，导致实验结果精 度降低。使用本制品时，即使稀释至低浓度也能够进行准确地稀释，容易在宽广范围内获得准确定 量的标准曲线。本制品不影响反转录和PCR反应，用其稀释后的样品可直接使用。EASY Dilution 也可以单独购买（Code No.9160）。 注意：EASY Dilution请与本公司Real Time PCR试剂组合使用，对于其他公司的同类制品的适用性本公司尚未进行确认。 ●试剂盒外必备材料 热循环仪（或37℃水浴，42℃水浴和85℃加热块） 反转录反应所用0.2 ml和1.5 ml的微量反应管 微量移液器和枪头（高压灭菌） ●保存：-20℃。 实验室常用生化试剂配方 1.常用抗生素配制以及使用说明（参考链霉菌室操作手册2019版） 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 贮藏液浓度(mg/ml) 100 25(无水乙醇配) 50 25 50 50 25(DMSO配) 100 50 35 25(0.15M NaOH配) 50(DMSO配) 50 50 MM 使用终浓度（μg/ml）链霉菌 2CM YEME 大肠杆菌 LA或LB 氨苄青霉素氯霉素潮霉素卡那霉素壮观霉素链霉素硫链丝菌素红霉素阿泊拉霉素紫霉素萘锭酮酸 TMP Ampicillin, Amp bla Chloramphenicol, Cml Hygromycin, Hyg Kanamycin, Km Spectinomycin, Spc Streptomycin, Str Thiostrepton, Thio Erythomycin, Ery Apramycin, Am Viomycin,Vio Nalidixic acid Trimethoprim cat hyg aac/aph aadA str tsr ermE aac(3)IV vph －* 10 10 2 5 10 5 100 10 －－ 25 25 20 25 10 － 50 －－－－－－ 2.5 － 5 50-100 25 － 25 50 25 25 20 10-30 注意事项： (1) –表示无记录或不能使用，贮存液除特别说明外均用无菌水配制，配制过程请 确保抗生素粉末充分溶解混匀后再分装； （2）Km 和Am有交叉抗性，同时具有这两种抗性基因时应适当提高抗生素的量，并 设置阴性对照； （3）Hyg、Vio易见光分解，配制好后应用锡箔纸包好,使用过程中建议避光操作。有些抗生素需要在低盐的环境（如DNA培养基）下筛选效率较高，如Hyg, Km, Vio （4）用无菌水配制的抗生素需在超净工作台内用0.22 μm一次性过滤器过滤除菌并 分装；氯霉素、TMP、硫链丝菌素可以在超净工作台外配制分装，无需过滤除菌，但需确 保配制贮存液所用溶剂（无水乙醇、DMSO）未遭受污染，建议配制氯霉素时使用新的无水 乙醇，不要使用抽提质粒或总DNA时用的无水乙醇，以防止污染；DMSO，即二甲亚砜，易 挥发，有剧毒； （5）长期不用的抗生素请置于-20℃保存，抗生素粉末按照使用说明一般置于4℃保存，经常使用时可以暂置于4℃保存； （6）抗生素的实际使用浓度请结合实验经验进行适当调整； (7)配制抗生素时应尽量一次性称取抗生素粉末，配制过程中建议穿工作服，戴一次 性橡胶手套及口罩，及时清理称量配制抗生素时使用的台面及器具，以避免抗生素及溶剂 对自身的损伤及对工作环境的污染。 注意事项： (1)表中所列酶均可以用无菌水配制，也可以用相应的缓冲液配制，缓冲液配制方法 参考《分子克隆实验指南（第3版）》： 蛋白酶 K缓冲液：50 mM Tris（pH 8.0），1.5 mM 乙酸钙； RNase A缓冲液：TE （pH 7.6）：10 mM Tris-HCl，1 mM EDTA；溶菌酶缓冲液：10 mM Tris-HCl（pH 8.0）； (2) RNase A配制好后沸水浴处理5 min，取出贮存RNase A后首次使用时也需沸水 浴处理5 min后再使用； （3）制备原生质体时使用的溶菌酶配制时需过滤除菌，其他情况一般无需过滤除菌； （4）所有酶均应在-20℃保存，使用过程中避免反复冻融，配制过程中尽量避免外界 污染。 （1）IPTG用无菌水配制，0.22μm一次性滤膜过滤除菌，分装保存于-20℃； 化学试剂管理规定 Company number：【WTUT-WT88Y-W8BBGB-BWYTT-19998】 化学试剂管理规定 一、目的：为加强公司化学试剂的使用管理，特制定本规定； 二、范围：本文件规定了化学试剂管理的内容及要求，适用于本公司； 三、职责： 资产管理部负责化学试剂购置； 各检测室负责人对领用的化学试剂进行管理、处置，对本单位化学试剂的使用管理进行监督检查； 四、管理内容及要求 化学试剂的采购 化学试剂的贮存 化学试剂的领用 化学试剂的使用 对于盐酸设立专门区域存放，实行双人双锁，钥匙由专人保管。出入库时应两人一起到场，使用过的空瓶等容器，应及时回收，统一处理。配制时，只许缓缓将试剂倒入水中，严禁将水倾入药品中。保管人员要定时维护和检查药品是否有损坏或泄露，采取合理办法处理事故隐患。 对于易制毒化学品采取专柜放置，并实行固定的双人双锁，“易制毒化学品专柜”不得长时间敞开；原则上，领用时不可以带走整瓶，当天使用多少领用多少。易制毒化学品原包装（外包装、试剂瓶等）放置于“易制毒化学品专柜”上，并统一回收，不得改作他 用，所有易制毒化学品应符合标签管理、普通试剂管理、记录管理 之规定 化学危险品管理制度 为了加强对化学危险品的安全管理,保证安全的使用,保障员工生命财产的安全,保护环境,特制定如下制定: 一、本公司对化学危险品的购置、使用、存储、统一规划，严格管理； 二、在使用某种化学危险品时需办理领用手续，同时填写《化学试剂领用记录》； 三、所用化学危险品必须有明确的标识； 四、使用化学危险品时，必须遵守各项安全生产制度和操作规程； 五、根据化学品的性质、种类设置相应的通风、操作等安全设施； 六、盛装化学危险品的容器在使用前后，必须进行检查，消除隐患，防止事故发生； 七、开封的化学危险品应尽快使用完毕，暂时不用的化学危险品应重新密封保存； 八、加强对使用场所、储存场所的日常检查和定期检查，并做好记录。 标准溶液的配制管理制度 1、目的 保证标准滴定溶液在保质期内浓度的可靠性以及被测样品 分析结果的准确性与真实性。 2、基本要求 从事标准溶液配制的人员需持试验检测证书上岗。 所用化学药品试剂无异常现象。 标准溶液制备水，除另有规定外，均系指蒸馏水。 制备标准溶液所用的玻璃计量器具、天平必须经过严格检定、校准合格，方可使用。 实验室试剂管理办法 1 目的 1.1 使操作员能够妥善保存化学药品、化学试剂，防止其变质、防止意外事故的发生。 1.2 使操作员能够妥善处理废料，防止其污染环境、防止意外事故的发生。 2 范围 2.1 适用于化验室化验员日常药品的管理。 3 职责 3.1 化验室 4 内容 4.1 化学药品、试剂的储存 4.1.1 化学药品储存室应符合有关安全规定，有防雷、防火、防爆、调温等安全措施。室内应干燥、通 风良好、温度一般不超过3 0C。 4.1.2 化学药品建立严格的帐目并记录于《化学试剂点检表》、《化学药品使用记录表》。 4.1.3 室内备有消防器材。 4.1.4 所有的化学试剂分类存放，无机试剂按酸、碱、盐、氧化物、单质等分类；盐类按阳离子分类，钾 盐、钠盐、铵盐、钙盐、镁盐等；有机试剂按官能团排列，烃、醇、酸、酯等；指示剂按用途分 类，酸碱指示剂、氧化还原指示剂、配位滴定的金属指示剂；专用有机指示剂按测定对象分类。 4.1.5 易燃易暴品应存放于阴凉偏低、不易碰撞的地方，有良好的通风效果，移动时轻拿轻放；配备相应 的灭火设备。 4.1.6 低沸点、易挥发有机溶剂存放于阴凉、通风处，远离热源，不得有明火。并不要与固体试剂同置一 个柜中。 4.1.7 见光易分解的应保存在棕色瓶中，或用黑色袋子裹严包装物，避光保存。 4.1.8 易燃易爆品、有毒害药品，应锁入药品柜内，防止人员带出制成自己或他人身体伤害和财产损 失，药品柜钥匙由部门主管保管一把，带班主管保管一把，其余钥匙全部交还公司，如要使用以上药品，需带班主管或部门主管批准后，由带班主管或代理人亲自开锁按其需要数量发料，并记录于< 化学药品使用记录表》。易燃易爆品储存于①药品柜，有毒害药品储存于②药品柜。 4.2 化学试剂溶液的管理 4.2.1 化学试剂溶液要装在细口瓶中，见光易分解的应装在棕色瓶中。所有化学试剂溶液在存放过程中 都应避免受热和强光照射。 4.2.2 所有试剂、溶液的盛装容器上都必须贴上标签，标签书写工整、完整和清晰；试剂最好是原标签， 配制的溶液包装上的标签应写明名称、单位浓度、配制日期；长期使用的试剂、溶液上的标签，贴层透明胶保护，以防腐蚀、磨损。并填写《标液配制记录表》。 4.2.3 影响试液质量的因素。试液的质量除主要受试剂质量的影响以外还会受其他多种因素的影响。 4.2.3.1 试液的稳定性。稳定性较好的试剂配制成溶液后，其稳定性可能变差。因而试液都应标明配 制日期，并根据需要定期检查记录于《实验室试剂点检表》，如发现试液变色、沉淀等变质迹 象，即应弃去重配。不稳定试液应分多次少量配制，并分特别情况来采取特殊贮存方法，如避光 等。 4.2.3.2 试液的贮存期。一般浓溶液在贮存期内变化不大，而稀溶液则随贮存时间的延长，其浓度多 会发生变化。溶液的浓度愈低，有效使用期限愈短。化学试剂溶液只能在其有效期内使用，GB 601 规定一般滴定分析用标准溶液在常温下，使用期限不宜超过两个月。 4.2.3.3 容器的耐蚀性。玻璃容器的耐碱性都较差，玻璃被腐蚀后可释放出某些杂质污染试液，所以，应采用聚乙烯瓶盛放碱性试液。软质玻璃的耐酸性和耐水性也较差，不应采用此种玻璃制成的容器长期贮存试液。 化验室化学试剂管理规定 1.范围和目的 本规程适用于品检科所有化学试剂以及配制试剂。 制定本规程的目的是为了建立化验室化学试剂的购买、接受、储存、发放、使用、销毁使用管理规程，使化验员能正确地使用试剂，保证化验工作质量。 2.化学试剂的购买： 技术员根据库存量及化学试剂检验需要量提出购买计划，经化验室负责人审核，公司厂长批准，交供应科采购员购买。 3.化学试剂的入库 购买后由采购员直接交给仓库管理员并办理入库手续。 技术人员根据购买计划办理出库手续并通知化学试剂管理员到出库接受。 化学试剂管理员先检查包装的完好性，封口是否严密,试剂无泄漏，标签是否粘贴牢固无破损，内容清晰,贮存条件明确，瓶签已部分脱胶的，应及时用胶水粘贴。无标签的试剂不得入库。严格按采购计划单内容，逐一核对。 化学试剂保管员必须每天检查一次温湿度表并记录。超出规定范围的应及时调整。 无标签的试剂应予销毁。 4.化学试剂的领用 化验员根据检验需要量提出领用要求。 化学试剂管理员根据化验员的要求发放化学试剂，并填写化学试剂领用记录。 5.化学试剂贮存 原装化学试剂贮存环境 55 5 55℃,相对湿度以45-75%为宜。 5应有良好的通风设备。 化验室内化学试剂的贮存 5 配制好的化学试剂应存放于试剂架上。性质不稳定的配制试剂应根据不同的性质存放，如放在阴暗处、冰箱等地方。使用化学试剂的过程中应特别注意其外观的变化。 配制化学试剂一般贮存1~2个月为宜,过期不得使用,须重新配制。在使用过程中发现有沉淀的，亦不得使用。 55需要冷藏保存的化学试剂应放在冷藏箱内保存。 易潮解、易失水风化、易挥发易吸收、二氧化碳、易氧化、易吸水变质化学试剂，需密闭保存或蜡封保存,应存放试剂柜下部柜中,平时应关门上锁；。 易爆炸品、易燃品、腐蚀品应单独存放,平时应关门上锁,剧毒品用后归还专用库（柜）。某些高活性试剂应低温干燥贮放。 保持室内清洁,通风和温湿度应符合规定。 每日检查一次消防灭火器材的完好状况,保证随时可以使用。 https://www.doczj.com/doc/969098142.html, 常用试剂配制及显色方法 （一）通用显色剂 1．重铬酸钾——硫酸 一般有机物均能显色，不同化合物显示不同颜色。 喷洒剂：5克重铬酸钾溶于100ml，40%硫酸中。喷洒后加热至150o C斑点出现。2．碘：检查一般有机物 （1）碘蒸汽：在一个密闭玻璃皿先放入碘片，使缸内空气被碘蒸气饱和将薄层或纸层放入缸内数分钟即显色，有时在缸内放一盛水的小杯，增加缸内的湿度，可提高 显色的灵敏度。 （2）0.5%碘的氯仿溶液，取出挥发散过量的碘再喷1%淀粉的水溶液，斑点转成蓝色。3．碘——碘化钾溶液：很我有机物虽黄色（配法见后）。 4．5%——磷钼酸乙醇溶液：喷后120o C烤，还原性物质显兰色，再用氨气熏，则背景变为无色。 5．20%磷酸乙醇溶液：喷后120o C，还原性物质显兰色。 6．碱性高锰酸钾试剂：还原性物质在淡红背景上显黄色。溶液I:1%高锰酸钾溶液。 溶液II：5%碳酸钠溶液。 溶液I和溶液II等量混合使用。 7．中性0.05%高锰酸钾溶液：易还原性物质在淡红背景上显黄色。 8．硝酸银——氢氧化铵（Tollen’s--zoffaronl）试剂，喷后105o C烤5~10分钟，还原性物质显黑色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液。溶液II：氢氧化铵溶液。 临用前溶液I和溶液II以1：5混合。注意：放久则形成爆炸性的叠氦化银。 9．硝酸银——高锰酸钾试剂：还原性物质在兰绿色背景上立即显黄色。 溶液I：0.1N硝酸银溶液：2N氢氧化铵溶液：2N氢氧化钠（1：1：2）。临用前配制。 溶液II：高锰酸钾0.5g，碳酸钠1g，加水成100ml溶液,临用前溶液I和溶液II等量混合。 10．四唑试剂：还原性物质，在室温或微加热时显紫色。 溶液I：0.5%四唑兰甲醇溶液。溶液II：6N氢氧化钠溶液。临用前溶液I和溶液II等量混合。 11．铁氰化钾：三氯化铁试剂：还原性物质显兰色，再喷射2N/L盐酸溶液，则兰色加深。 溶液I：1%铁氰化钾溶液。溶液II：2%三氯化铁溶液。临用前溶液I和溶液II 目 录 蛋白质电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 30% (W/V) Acrylamide 1 40% (W/V)Acrylamide 1 10% (W/V) 过硫酸铵 1 5×Tris-Glycine Buffer (SDS-PAGE电泳缓冲液) 1 5×SDS-PAGE Loading Buffer 1 考马斯亮蓝R-250染色液 2 考马斯亮蓝染色脱色液 2 凝胶固定液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 凝胶处理液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 凝胶染色液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 显影液（SDS-PAGE银氨染色用） 2 实验室常用培养基的配制方法 Ampicillin (100 mg/ml) 4 IPTG (24 mg/ml) 4 X-Gal (20 mg/ml) 4 LB培养基 4 LB/Amp培养基 4 TB培养基 5 TB/Amp培养基 5 SOB培养基 5 SOC培养基 5 2×YT培养基 6Φb×broth 6 NZCYM培养基 6 NZYM培养基 6 NZM培养基 7 一般固体培养基的配制 7 LB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 7 TB/Amp/X-Gal/IPTG平板培养基 7 实验室常用试剂、缓冲液的配制方法 1 M Tris-HCl (pH7.4, 7.6, 8.0)9 1.5 M Tris-HCl (pH8.8) 9 10×TE Buffer (pH7.4, 7.6, 8.0) 9 3 M 醋酸钠 (pH5.2) 9 PBS Buffer 9 10 M 醋酸铵 10 Tris-HCl平衡苯酚 10 苯酚/氯仿/异戊醇(25 : 24 : 1) 10 10% (W/V) SDS 10 2 N NaOH 10 2.5 N HCl 10 5 M NaCl 11 20% (W/V) Glucose 11 Solution I (质粒提取用) 11 Solution II (质粒提取用)11 Solution III (质粒提取用) 11 0.5 M EDTA (pH8.0)11 1 M DTT1 2 10 mM ATP 12 核酸电泳相关试剂、缓冲液的配制方法 50×TAE Buffer (pH8.5)13 10×TBE Buffer (pH8.3)13 10×MOPS Buffer 13溴乙锭（10mg/ml） 13 Agarose 凝胶 13 6×Loading Buffer (DNA电泳用)14 操作流程 1. 使用TAE缓冲液或TBE缓冲液制作琼脂糖凝胶，然后对目的DNA进行琼脂糖凝胶电泳。 2. 在紫外灯下切出含有目的DNA的琼脂糖凝胶，用纸巾吸尽凝胶表面的液体。此时应注意尽量切除不含目的DNA部分的凝胶，尽量减小凝胶体积，提高DNA回收率。胶块超过300 mg时，请使用多个Column进行回收，否则严重影响收率。注）切胶时请注意不要将DNA 长时间暴露于紫外灯下，以防止DNA损伤。 3. 切碎胶块。胶块切碎后可以加快操作步骤6的胶块溶解时间，提高DNA回收率。 4. 称量胶块重量，计算胶块体积。计算胶块体积时，以1 mg=1 μl 进行计算。 5. 向胶块中加入胶块溶解液Buffer GM，Buffer GM的加量如下表： 凝胶浓度Buffer GM使用量 1.0％3个凝胶体积量 1.0％～1.5％4个凝胶体积量 1.5％～ 2.0％5个凝胶体积量 6. 均匀混合后室温15-25℃溶解胶块（胶浓度较大或比较难溶时可以在37℃加热）。此时应间断振荡混合，使胶块充分溶解（约5～10分钟）。 7. 当凝胶完全溶解后，观察溶胶液的颜色，如果溶胶液颜色由黄色变为橙色或粉色，向上述胶块溶解液中加入3 M醋酸钠溶液（pH5.2）10 μl，均匀混合至溶液恢复黄色。当分离小于400 bp的DNA片段时，应在此溶液中再加入终浓度为20%的异丙醇。 8. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。 9. 将上述操作步骤7的溶液转移至Spin Column中，12,000 rpm离心1分钟，弃滤液。注）如将滤液再加入Spin Column中离心一次，可以提高DNA的回收率。 10. 将700 μl 的Buffer WB加入Spin Column中，室温12,000 rpm离心30秒钟，弃滤液。注）请确认Buffer WB中已经加入了指定体积的100%乙醇。 11. 重复操作步骤10。 12. 将Spin Column安置于Collection Tube上，室温12,000 rpm离心1分钟。 13. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上，在Spin Column膜的中央处加入30 μl 灭菌蒸馏水或Elution Buffer，室温静置1分钟。注）将灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至60℃使用时有利于提高洗脱效率。 14. 室温12,000 rpm离心1分钟洗脱DNA。 氨苄青霉素 ﹡组分浓度 100mg/ml 氨苄青霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 5g Ampicillin置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。卡那霉素 (可配 25mL ﹡组分浓度 50mg/ml卡那霉素 ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 2.5g 卡那霉素置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。RNase A ﹡组分浓度 10mg/ml RNase A ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.取 0.5g RNase A置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3. 100℃煮沸 15min, 缓慢冷却至室温,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。IPTG ﹡组分浓度 24mg/ml IPTG ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1.2g IPTG置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40ml 灭菌水,充分混合溶解之后定容 50ml 。 3.用0.22μm 滤膜过滤除菌,小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 X-Gal ﹡组分浓度 20mg/ml X-Gal ﹡配制量 50ml ﹡配制方法 1.称取 1g X-Gal置于 50ml 塑料离心管中。 2.加入 40mlDMF (二甲基甲酰胺 ,充分混合溶解之后定容至 50ml 。 3.小份分装(1ml/管后,置于-20℃保存。 DTT ﹡组分浓度 1M DTT ﹡配制量 10ml 实验室药品的取用和溶液的配制 1 固体试剂的取用规则 （1）要用干净的药勺取用。用过的药勺必须洗净和擦干后才能再使用，以免沾污试剂。 （2）取用试剂后立即盖紧瓶盖。 （3）称量固体试剂时，必须注意不要取多，取多的药品，不能倒回原瓶。 2 液体试剂的取用规则 （1）从滴瓶中取液体试剂时，要用滴瓶中的滴管，滴管绝不能伸入所用的容器中，以免接触器壁而沾污药品。从试剂瓶中取少量液体试剂时，则需要专用滴管。装有药品的滴管不得横置或滴管口向上斜放，以免液体滴入滴管的胶皮帽中。 （2）使用胶头滴管“四不能”：不能伸入和接触容器内壁，不能平放和倒拿，不能随意放置，未清洗的滴管不能吸取别的试剂。 （3）配制一定物质的量溶液时，溶解或稀释后溶液应冷却再移入容量瓶。 （4）配制一定物质的量浓度溶液，要引流时，玻璃棒的上面不能靠在容量瓶口，而下端则应靠在容量瓶刻度线下的内壁上（即下靠上不靠，下端靠线下）。 （5）容量瓶不能长期存放溶液，更不能作为反应容器，也不能互用。（一般用于配制标准溶液的容量瓶最好专用） 3 溶液的配制 （1）配制溶质质量分数一定的溶液 计算：算出所需溶质和水的质量。把水的质量换算成体积。如溶质是液体时，要算出液体的体积。 称量：用天平称取固体溶质的质量；用量筒量取所需液体、水的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯里,加入所需的水,用玻璃棒搅拌使溶质完全溶解。（2）配制一定物质的量浓度的溶液 计算：算出固体溶质的质量或液体溶质的体积。 称量：用托盘天平称取固体溶质质量，用量筒量取所需液体溶质的体积。 溶解：将固体或液体溶质倒入烧杯中，加入适量的蒸馏水用玻璃棒搅拌使之溶解，冷却到室温后，将溶液引流注入容量瓶里。 转移：用适量蒸馏水将烧杯及玻璃棒洗涤2－3 次，将洗涤液注入容量瓶，振荡，使溶液混合均匀。常用试剂的配制.
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