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doc_人白细胞介素12IL-12(P40)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

doc_人白细胞介素12IL-12(P40)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)
doc_人白细胞介素12IL-12(P40)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

仅供科研使用,不得用于临床检验。

人白细胞介素12(IL-12(P40))酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

说明书

黄石市艾恩斯生物科技有限公司

【产品名称】

通用名称:人白细胞介素12(IL-12(P40))酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

英文名称:Human Interleukin-12(IL-12(P40))ELISA KIT

【包装规格】

48人份/盒,96人份/盒

【预期用途】

仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中人白细胞介素12(IL-12(P40))的浓度。

【检验原理】

本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗人白细胞介素12(IL-12(P40))抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入人白细胞介素12(IL-12(P40))校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗人白细胞介素12(IL-12(P40))抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人白细胞介素12(IL-12(P40))的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中人白细胞介素12(IL-12(P40))的浓度。

【主要组成成分】

主要成分

校准品检测范围:31.2-2000pg/ml。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。

需要但未提供的材料及耗材

1、酶标仪

2、精密移液器及一次性吸头

3、蒸馏水

4、洗瓶或者自动洗板机

5、37℃水浴锅或恒温箱

6、500ml量筒

7、无粉一次性乳胶手套

【储存条件及有效期】

1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。

2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。

3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。

【适用仪器】

半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。

【样本要求】

样本类型和采集

以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。

1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。

3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。

样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。

【检验方法】

1、使用前,所有的组分都要至少复温30min,确保充分复温到室温。

2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加19份的蒸馏水。

3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1体积充分混合,混合后15分钟内使用。

1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。

2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。

3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

4、设置标准品孔、样本孔和空白孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL,样本孔加待测样本50μL,空白孔不加。

5、除空白孔外,标准品孔和样本孔,加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。

6、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

7、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干。

8、如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。

9、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

10、所有孔加入终止液50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。

【检验结果的解释】

检测完成后,以标准品浓度做为纵坐标,对应的吸光度(OD值)作为横坐标,利用计算机软件,采用四参数Logistic曲线拟合(4-pl),创建标准曲线方程,通过样本的吸光度(OD 值),利用方程计算样品的浓度值。

如果样品被稀释,通过上述方法测的的浓度值,要乘以稀释倍数,才是样品的最终浓度。【检验方法的局限性】

1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。

2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。

3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。

4、使用试剂盒配套的样品稀释液。

5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。

6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素。

7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。

【产品性能指标】

1、物理性能

试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。

2、剂量反应曲线线性

校准品剂量反应曲线相关系数r值,大于等于0.9900。

3、精密度

批内精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在同一个板块内精度评估。批内变异系数CV%小于10%。

批间精密度:三组已知的高、中、低浓度样品,进行二十次在不同板块内精度评估。批间变异系数CV%小于15%。

4、灵敏度

最低检出剂量小于。

5、回收率

三组已知的高、中、低浓度样品,进行五次回收率评估,回收率在85%-115%之间。

6、特异性

本试剂盒识别天然和重组人白细胞介素12(IL-12(P40)),与结构类似物无交叉。

7、稳定性

2℃-8℃保存,有效期6个月。

【注意事项】

生物安全

1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。

2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。

3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。

技术提示

1、混合蛋白溶液时,避免起泡。

2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。

3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。

4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。

5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。

6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。

7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。

废物处理

所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。

酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则

附件1 酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则 一、前言 本指导原则主要针对酶联免疫类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。 本指导原则系对酶联免疫法检测试剂的一般要求,申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用,若不适用,需详细阐述其理由及相应的科学依据。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件,但不包括注册审批所涉及的行政事项,亦不作为法规强制执行,如果有能够满足相关法规要求的其他方法,也可以采用,但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的,随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展,其相关内容也将进行适时的调整。 二、适用范围 本指导原则适用于有关病原微生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查。其他酶联免疫法检测试剂(如作为二类管理的体外诊断试剂)可参考本指导原则执行。 三、基本要求 (一)基本原则 1.研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准,并应符合有关法规的要求。

2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境,获得《医疗器械生产许可证》;同时,应按照《体外诊断试剂生产实施细则(试行)》的要求建立相应的质量管理体系,形成文件和记录,加以实施并保持有效运行;还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准(试行)》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定,并经国家药品监督管理部门批准。 3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则,各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。 4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺,应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。 5.生产和质量控制的总体目标:保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。 (二)原材料质量控制 1.主要生物原料 与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、中和反应用抗原或抗体、制备校准品(标准品)等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验,以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产,其工艺必须相对稳定;若购买,其供应商要求相对固定,不能随意变更供应商,如果主要原料(包括工艺)或其供应商有变更,应依据国家相关法规的要求进行变更申请。 主要生物原料的常规检验项目一般包括: (1)外观 肉眼观察,大部分生物原料为澄清均一的液体,不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒;或者为白色粉末,不含其他颜色的杂质;特殊生

酶联免疫法

酶联免疫吸附试验(又称酵素免疫分析法,Enzyme-linked immunoassay,简称ELISA)利用抗原抗体之间专一性键结之特性,对检体进行检测;由于结合于固体承载物(一般为塑胶孔盘)上之抗原或抗体仍可具有免疫活性,因此设计其键结机制后,配合酵素呈色反应,即可显示特定抗原或抗体是否存在,并可利用呈色之深浅进行定量分析。根据待测样品与键结机制的不同,ELISA可设计出各种不同类型的检测方式,主要以三明治法(sandwich)、间接法(indirect)、以及竞争法(Competitive)三种为主,以下为各种方法之介绍. 三明治法 常用于检测大分子抗原,一般之操作步骤为: 1.将具有专一性之抗体固著(coating)于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体 2.加入待测检体,检体中若含有待测之抗原,则其会与塑胶孔盘上的抗体进行专 一性键结 3.洗去多余待测检体,加入另一种对抗原专一之一次抗体,与待测抗原进行键结 4.洗去多余未键结一次抗体,加入带有酵素之二次抗体,与一次抗体键结 5.洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,以肉眼或仪器读取呈色 结果 三明治法分别以两种抗体对检体中的抗原进行两次专一性辨认,因此专一性相当高,但此待测抗原必须是多价抗原,如此才可获得两种以上的专一性抗体,以分别进行夹心;而且此法需要足够的表位空间以进行抗原抗体的夹心,所以并不适用于半抗原或小分子抗原等分子量较小之标的。 间接法 间接法常用于检测抗体,一般之操作步骤为: 1.将已知之抗原固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余之抗原 2.加入待测检体,检体中若含有待测之一次抗体,则其会与塑胶孔盘上的抗原进 行专一性键结 3.洗去多余待测检体,加入带有酵素之二次抗体,与待测之一次抗体键结 4.洗去多余未键结二次抗体,加入酵素受质使酵素呈色,藉仪器(ELISA reader) 测定塑胶盘中的吸光值(OD值),以评估有色终产物的含量即可测量待测抗原 的含量。 竞争法 竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制,一般用于检测小分子抗原,其操作步骤为: 1.将具有专一性之抗体固著于塑胶孔盘上,完成后洗去多余抗体 2.加入待测检体,使检体中的待测抗原与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结 3.加入带有酵素之抗原,此抗原也可与塑胶孔盘上的抗体进行专一性键结,由于 塑胶孔盘上固著的抗体数量有限,因此当检体中抗原的量越多,则带有酵素之

小鼠髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)

仅供科研使用,不得用于临床检验。 小鼠髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒)说明书 黄石市艾恩斯生物科技有限公司 【产品名称】 通用名称:小鼠髓过氧化物酶(MPO)酶联免疫试剂盒(ELISA试剂盒) 英文名称:Mouse Myeloperoxidase(MPO)ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒,96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用,定量检测血清、血浆、细胞培养上清液中小鼠髓过氧化物酶(MPO)的浓度。【检验原理】 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被抗小鼠髓过氧化物酶(MPO)抗体(固相抗体)的微孔酶标板中,加入小鼠髓过氧化物酶(MPO)校准品和待测样本,再加入另一株HRP标记的抗小鼠髓过氧化物酶(MPO)抗体(酶标抗体),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中小鼠髓过氧化物酶(MPO)的浓度正相关。拟合校准品曲线,可以计算出样本中小鼠髓过氧化物酶(MPO)的浓度。 【主要组成成分】 主要成分

校准品检测范围:0.156-10ng/ml。校准品已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。 2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为14天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。 2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。 3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。

人胰岛素定量检测试剂盒(酶联免疫法)说明书V9.0

人胰岛素定量检测试剂盒(酶联免疫法)说明书V9.0 10-1113-01 96人份试剂 10-1113-10 96×10人份试剂 由瑞典Mercodia AB制造

用于标签上的标识的说明

预期用途 人胰岛素定量检测试剂盒(酶联免疫法)提供了一种人血清或血浆样本中胰岛素的定量检测方法。 本试验综述和说明 在胰岛β细胞内合成的胰岛素是调控糖代谢的主要激素。胰岛素前体—胰岛素原生成C 肽和胰岛素。等摩尔质量分泌到门静脉循环。成熟的胰岛素分子由2条多肽链组成(A链、B链,分别由21个和30个氨基酸组成),A、B链间由2个二硫键连接,并且A链内存在1个二硫键。 胰岛素的分泌主要由血糖浓度控制,该激素还参与许多重要的代谢活动。它的机制功能是在外周组织中通过运糖载体来控制糖的吸收和利用。和其它降血糖代谢活动抑制肝糖异生和通过升血糖素(胰高血糖素、肾上腺素、生成激素和皮质醇)抵消肝糖分解。 胰岛素依赖型糖尿病或垂体机能减退症的患者体内胰岛素浓度严重降低。胰岛素升高的情况出现在非胰岛素依赖型糖尿病、肥胖症、胰岛瘤、内分泌功能失调(库兴氏综合症、肢端胖大症)的患者。 检测程序的原理 人胰岛素检测试剂盒(酶联免疫法)是一种固相双表位酶联免疫试剂。它基于双夹心技术,两单克隆抗体分别结合在胰岛素分子的抗原决定簇上。在孵育过程中,样本中的胰岛素与结合在微孔(板)中的抗胰岛素抗体和酶标抗胰岛素抗体反应。洗涤移去非结合的酶标抗体。结合的偶联物(标记物)通过与3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)反应而被检测到。加入酸后反应终止,然后通过分光光度计(酶标仪)读取反应的终点。 警告与注意事项 ●用于体外诊断。 ●不能让反刍动物或猪接触到本试剂盒的内容物及其残余物。 ●本试剂盒的终止溶液含有0.5M的硫酸。按常规预防措施处理危险化学品。 ●所有的患者样本都应按潜在传染物处理。 要求但未提供的材料 ●25μL、50μL、100μL、200μL、1000μL移液管(重复移取加入酶结合物溶液、TMB底物 和终止溶液) ●用于试剂制备的烧杯和量筒

酶联免疫分析法

酶联免疫分析法 生工121 徐娜 酶联免疫分析法是目前分析化学领域中的前沿课题,它是一种特殊的试剂分析方法,是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术,特别是在食品和饲料中有毒有害物质的检测应用极为广泛。 酶联免疫分析法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。该技术的原理主要有三点:第一、抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍具有其免役活性;第二、抗体或抗原与酶结合所形成的结合物仍保持免疫活性和酶的活性;第三,结合物与相应的抗原或抗体反应后,结合的酶仍能催化底物生成有色物质,而颜色的深浅可定量抗体或抗原的含量。 酶联免疫法在医药、食品加工业、农牧渔业等领域有着广泛的应用:如乙型肝炎、莱姆病,急性心肌梗死的早期诊断,定量检测内毒素,HIV抗体初筛,SARS 病毒的快速检测;检测食品中的病毒,残留农药,微生物及其其它成分;检测香蕉有关病毒,小麦黄花叶病毒,检测水产品中氯霉素的残留量,禽脑脊髓抗体等。 一、医学临床中的应用 医学中,检测各种抗原和抗体,为临床疾病的辅助诊断和早期诊断提供了特异性、敏感性强的试验基础。 1、乙型肝炎、原发性肝癌的血清学检测:用血清学方法检测肝炎病毒的抗原或抗体,一直受到各级医疗卫生机构检验科室的高度重视。尤其是对乙型肝炎,甲型肝炎,丙型肝炎的血清学检测,更因为试剂盒的推出而得到广泛开展。上述各种肝炎病毒抗原或抗体的检测方法,绝大部分都是酶联免疫分析法。 2、简化莱姆病的诊断:由于在作出博氏疏螺旋体感染诊断前要进行双重测试,因此莱姆病的测试可能花费很长时间。采用由关键的疏螺旋体抗原决定簇构成的重组蛋白开发出一种新的酶联免疫测定方法。该测试比最常用的商业全细胞酶联免疫测定法特异,而敏感性相同,并且在20分钟就会产生结果。 3、急性心肌梗死的早期诊断:急性心肌梗死为一多发病,病情严重。目前对此病的策略是尽早的确诊并迅速积极的治疗。约有四分之一或更多的患者,在初诊时心电图并不显示典型心肌梗死心电图异常,无Q波。心肌坏死时释放出的Mb可直接快速血液循环。Mb是最早出现的心肌梗死生化标志物,但它在血中滞留时间短。为此,刘宏伟等研制出只需30分钟的酶联免疫快速法,为早期诊断心肌梗死提供了依据。 4、定量检测内毒素:临床上,细菌感染的患者常发生内毒素血症,死亡率高达20%——30%,检测标本中的LPS对早期诊断和防治有重要意义。用优化后的双抗体夹心法检测LPS敏感性为50ng/L,特异性与准确性均高于仪器比浊法和试验定性法。此为内毒素血症提供了一种简便,快速,准确,特异性的诊断参考。 5、快速检测SARS病毒:SARS病毒引起传染性非典型肺炎,发病快,传染性强。2003年4月,北京基因组研究所与军事医学科学院研制出诊断非典的酶联免疫分析法检测试剂,为控制疫情蔓延提供了新的诊断手段。 二、在食品分析中的应用 1、检测食品中的毒素:采用辣根过氧化氢酶标记高亲和力的黄曲霉素B1抗体,建立了直接竞争抑制酶联免疫快速筛选法。该法检测B1抗体的线性范围

酶联免疫吸附测定法

酶联免疫吸附测定法(ELISA) 1.定义 (3) 2.原理 (3) 2.1抗原抗体反应 (3) 2.2免疫测定在临床检验中的应用 (5) 3.ELISA的类型 (5) 3.1双抗体夹心法测抗原: (6) 3.2双抗原夹心法测抗体 (6) 3.3间接法测抗体 (6) 3.4竞争法测抗体 (7) 3.5竞争性测抗原 (7) 3.6捕获包被法测抗体 (7) 3.7ABS-ELISA法 (8) 4.ELISA试剂的组成 (9) 4.1固相载体: (9) 4.2包被的方式 (9) 4.3包被用抗原:天然抗原、重组抗原、合成多肽抗原。 (10) 4.4包被的条件: (10) 4.5洗涤液: (10) 4.7酶的催化性; (11) 4.8结合物的制备 (11) 4.9结合物的保存 (12) 4.10酶的底物 (12) 4.11酶反应终止液 (12) 4.12参考标准品 (13) 4.13加样: (13) 4.14保温 (13)

4.15保温方式: (13) 4.16室温温育的反应 (13) 4.17洗涤 (14) 4.18显色 (14) 4.19比色 (14) 4.20酶标比色仪 (15) 4.21结果判定 (15) 4.22定量测定 (16) 4.23ELISA的操作要点 (16)

1.定义 酶联免疫吸附测定法(Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay),简称ELISA,采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,对受检物质进行定性或定量分析的一种检测方法。 2.原理 采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接,然后通过酶与底物产生颜色反应,可对受检物质的定性或定量分析。 2.1抗原抗体反应 2.1.1可逆性 抗原与抗体结合形成抗原抗体复合物的过程是一种动态平衡,其反应式为: Ag+Ab→Ag·Ab 抗体的亲和力(affinity),可以用平衡常数K表示:K=[Ag·Ab]/[Ag][Ab],Ag·Ab的解离程度与K值有关。高亲和力抗体的抗原结合点与抗原的决定簇在空间构型上非常适合,两者结合牢固,不易解离。解离后的抗原和抗体均能保持原有的结构和活性。 2.1.2特异性 抗原抗体的结合发生在抗原的决定簇与抗体的结合位点之间。化学结构和空间构型互补关系,具有高度的特异性。因此,在很多时候,测定某一特定的物质不需分离待测物。2.1.3最适比例 只有当抗原抗体的浓度比例是当时,才出现可见反应。 以沉淀反应为例(Ab量固定,Ag量递增)

高灵敏小鼠白细胞介素-6(IL-6)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒使用说明书

高灵敏小鼠白细胞介素-6(IL-6)酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 金益柏试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定小鼠血清,血浆样本中白细胞介素-6(IL-6)含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠白细胞介素6(IL-6)水平。用纯化的小鼠白细胞介素6(IL-6)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素6(IL-6),再与HRP标记的白细胞介素6(IL-6)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素6(IL-6)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中小鼠白细胞介素6(IL-6)浓度。 试剂盒组成: 样本处理及要求: 1.血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000转/ 分)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.血浆:应根据标本的要求选择EDTA、者柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合 10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。 3.尿液:用无菌管收集,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上 清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。 4.细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用PBS (PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。 仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。 5.组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速 冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS (PH7.4),用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 6. 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。 若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融. 7. 不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、 第二孔中分别加标准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第 四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中, 再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加 标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为90 pg/mL,60 pg/mL ,30 pg/mL,15 pg/mL,7.5 pg/mL)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各 步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释 液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒酶联免疫法

乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒酶联免疫法 Document serial number【NL89WT-NY98YT-NC8CB-NNUUT-NUT108】

核准日期:丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法) 说明书 【药品名称】 通用名称:丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒(酶联免疫法) 英文名称:Diagnostic Kit for Antibody to Hepatitis C Virus(ELISA) 汉语拼音:Bingxing Ganyan Bingdu Kangti Zhenduan Shijihe(Meilian Mianyifa) 【成份】 1.可拆孔HCV抗原包被板 96人份 2.抗HCV阳性对照血清1ml/瓶 1瓶 3.抗HCV阴性对照血清1ml/瓶 1瓶 4.样品稀释液15ml/瓶 1瓶 5.酶结合物15ml/瓶 1瓶 6.显色剂A液8ml/瓶 1瓶 7.显色剂B液8ml/瓶 1瓶 8.终止液8ml/瓶 1瓶 9.20×浓缩洗涤液60ml/瓶 1瓶 10.一次性封口胶片 3张 11.封板用塑料袋 1个 12.使用说明书 1份【适应症】 用于人血清或血浆样本中丙型肝炎病毒抗体检测。 【试验原理】 本试剂盒系由基因重组表达的丙型肝炎病毒(HCV)融合抗原包被的酶联板,辣根过氧化物酶标记的抗人IgG(γ链)单克隆抗体,以及丙型肝炎病毒抗体阳性、阴性对照血清等组成,以间接法原理(ELISA)检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒抗体。 【适用仪器】 1.温育器(干式或湿式)或恒温水浴,37±1℃ 2.具有双波长检测能力的酶标仪 3.洗板机 4.微孔板振荡器 【样本要求】 1.样本采集前对受检者无特殊要求,不需禁食。 2.应按规范的采血技术采集样本,并按标准程序进行样本的预处理。 3.可以使用血清或血浆样本进行检测,柠檬酸、肝素、EDTA等常用抗凝剂在正常 使用剂量下对检测结果无影响,但使用特殊种类或不适宜比例抗凝剂的样本,不能用于检测。 4.轻度溶血、轻度乳糜血及轻度黄疸的样本一般不影响检测结果。 5.已经进行加热处理的样本及使用叠氮钠作为防腐剂的样本不能用于检测。

植物NADPH酶联免疫分析(ELISA)

植物NADPH酶联免疫分析(ELISA) 试剂盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定植物组织,细胞及其它相关样本中植物NADPH含量。 实验原理: 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中植物NADPH水平。用纯化的植物NADPH抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入植物NADPH,再与HRP标记的NADPH抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的植物NADPH呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中植物NADPH浓度。 标本要求: 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤: 1.标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在第一、第二孔中分别加标 准品100μl,然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,

混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为120U/L,80U/L ,40U/L,20U/L,10U/L)。 2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 注意事项: 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 9.本试剂不同批号组分不得混用。 10. 如与英文说明书有异,以英文说明书为准。

抗链球菌溶血素“O”IgG IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)产品技术要求limi

抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法) 适用范围:用于体外定性检测人血清中的抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体水平。 1. 产品型号/规格及其划分说明 1.1 产品规格 48人份/盒 1.2 组成及成分 表1. 抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)组成成分

2.性能指标 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组份齐全、完整。标识应清晰、易识别。液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。 2.1.2 抗原包被板包装袋应密封性好,无破损、无漏气现象。 2.2 净含量 各液体组份的净含量不少于标示值。 2.3 临界值 2.3.1 对ASO IgG临界值阳性参考品(A值为0.35)检测,检测次数≥20,结果的阳性率应≥95%。 2.3.2 对ASO IgG临界值阴性参考品(A值为0.15)检测,检测次数≥20,结果的阴性率应≥95%。 2.3.3 对ASO IgM临界值阳性参考品(A值为0.35)检测,检测次数≥20,结果的阳性率应≥95%。 2.3.4 对ASO IgM临界值阴性参考品(A值为0.15)检测,检测次数≥20,结果的阴性率应≥95%。

2.4 S/CO值重复性 2.4.1 对ASO IgG重复性参考品(A值为0.60)检测20次,变异系数CV≤15%。 2.4.2 对ASO IgM重复性参考品(A值为0.60)检测20次,变异系数CV≤15%。 2.5 批间差 抽取三个批次的试剂盒,每个批次80人份,按2.3项临界值的要求检测,各浓度反应结果应一致。 2.6 效期稳定性 试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末或超过有效期二周内进行检测,检测结果应符合2.3、2.4项的要求。

克伦特罗酶联免疫定量检测试剂盒I

克伦特罗酶联免疫定量检测试剂盒(I) 使用说明书 概述: 克伦特罗(Clenbuterol)属于一类β-兴奋剂,具有改进脂肪型动物体内肉与脂肪的比例的作用,亦可促进动物生长。但同时,此药物还会使非横纹肌松弛,人体摄入后可引起心跳、心率不正常等副反应,甚至可导致心脏病。因此在我国,克伦特罗在畜牧业上的使用是被严格禁止的。 本试剂盒利用竞争酶联免疫法对生物样品中的克伦特罗进行定量分析。适用于动物尿液、血清、内脏等物质中克伦特罗的快速检测。由于ELISA法的高通量与简便快速,适合大量样本的定量筛查,自样本加入至结果读出,不超过60分钟,检测灵敏度为0.1ppb。 一、简要原理 试剂盒所提供的微孔板上包被有抗体,然后将校准品或样本中的克伦特罗与酶标记的克伦特罗加入微孔中后,两者可竞争结合克伦特罗抗体,洗去未结合的酶标记克伦特罗。加入底物后,在酶作用下,底物溶液会显蓝色,加入终止剂后,溶液由蓝转为金黄色。在450nm波长光下测吸光度,吸光度高低与校准品或样品中克伦特罗的含量呈反比,根据校准品的读数作出校准曲线,并利用校准曲线计算出样品中克伦特罗的含量。 二、试剂盒组成 1.酶标反应板: 96孔易折板,抗体已包被 2.克伦特罗校准品: 1ml/瓶×6瓶浓度:0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3.11×酶标记克伦特罗浓缩液: 1.2ml/瓶×1瓶(稀释11倍使用) 4.底物液: 11ml/瓶×1瓶 5.酶标稀释液: 20ml/瓶×1瓶 6.50×浓缩洗涤液: 20ml/瓶×1瓶(稀释50倍使用) 7.终止剂: 11ml/瓶×1瓶 8.其他:说明书×1份自封袋×1个 2-8℃贮存,有效期一年 三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器 1.试剂 ――――――10mM盐酸溶液 ――――――氯化钠 ――――――50mM PH7.0 PBS (配制:9g NaCl;4.65g Na2HPO4·12H2O;0.56g NaH2PO4·2H2O 溶解于1000ml蒸馏水中) ――――――异丙醇 ――――――乙酸乙酯 2 .仪器 ――――――微孔板酶标仪 ――――――涡旋振荡器或超声波粉碎仪 ――――――离心机

人封闭抗体(BA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书

人封闭抗体(BA)酶联免疫分析试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用 特异性:本试剂盒可检测人封闭抗体(BA),且与其他相关抗体无交叉反应。 有效期:6个月 预期应用:ELISA法定量测定人血清、血浆或其它相关生物液体中封闭抗体(BA)含量。 说明 1.试剂盒保存:-20℃(较长时间不用时);2-8℃(频繁使用时)。 2.浓洗涤液低温保存会有盐析出,稀释时可在水浴中加温助溶。 3.中、英文说明书可能会有不一致之处,请以英文说明书为准。 4.刚开启的酶联板孔中可能会含有少许水样物质,此为正常现象,不会对实验结果造成任何影响。 试剂盒组成及试剂配制 1.酶联板(Assay plate):一块(96孔)。 2.酶结合物(Conjugate):2×6ml/瓶。 3.样品稀释液(Sample Diluent):2×6ml/瓶。 4.阳性对照(Positive Control):1×0.5ml/瓶。 5.阴性对照(Negative Control):1×0.5ml/瓶。 6.底物溶液A(Substrate A):1×7ml/瓶。 7.底物溶液B(Substrate B):1×7ml/瓶。 8.浓洗涤液(Wash Buffer):1×15ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释20倍。 9.终止液(Stop Solution):1×7ml/瓶。 需要而未提供的试剂和器材 1.标准规格酶标仪 2.高速离心机 3.电热恒温培养箱 4.干净的试管和Eppendof管 5.系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,最好用多通道移液器 6.蒸馏水,容量瓶等 标本的采集及保存 1.血清:全血标本请于室温放置2小时或室温过夜后于1000x g离心20分钟,取上清即可检测,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 2.血浆:可用EDTA或肝素作为抗凝剂,标本采集后30分钟内于2-8°C1000x g离心15分钟,或将标本放于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。 操作步骤 实验开始前,请提前配置好所有试剂,试剂或样品稀释时,均需混匀,混匀时尽量避免起泡。如样品浓度过高时,用样品稀释液进行稀释,以使样品符合试剂盒的检测范围。 1.加样:分别设空白孔,不加任何溶液;设阴性对照孔2孔,加阴性对照100μl;设阳性对照孔2孔,加阳性对照100μl;余孔加100μl样本稀释液,然后直接加待测样本5μl。注意不要有气泡,加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃放置30分钟。 2.弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。 3.每孔加酶结合物100μl(空白孔除外),充分混匀,酶标板加上盖或覆膜,37℃放置20分钟。 4.弃去孔内液体,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分钟,200μl/每孔,甩干。 5.依序每孔加底物溶液A和B各50μl,37℃避光显色10分钟。 6.依序每孔加终止溶液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。终止液的加入顺序应尽量与底物液的加

酶联免疫吸附实验

ELISA酶联免疫吸附试验在动物生产过程中的 应用 简介 随着方法的不断改进、材料的不断更新,尤其是采用基因工程方法制备包被抗原,采用针对某一抗原表位的单克隆抗体进行阻断ELISA试验,大大提高了ELISA的特异性,由于电脑化程度极高的ELISA检测仪的使用,ELISA更为简便实用和标准化,从而使其成为最广泛应用的检测方法之一。被广泛应用于多种细菌和病毒等疾病的诊断。在动物检疫方面,ELISA在猪传染性胃肠炎、牛副结核病、牛传染性鼻气管炎、猪伪狂犬病、蓝舌病等的诊断中已为广泛采用的标准方法。 基本原理 ELISA方法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。此种酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色的氧化型,出现颜色反应。因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

特性 用于标记抗体或抗抗体的酶须具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室温下稳定;反应产物易于显现;能商品化生产。如今应用较多的有辣根过氧化物酶(HRP)、碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等,其中以HRP应用最广。 辣根过氧化物酶 过氧化物酶(HRP)广泛分布于植物中,辣根中含量最高,从辣根中提取的称辣根过氧化物酶(HRP),是由无色酶蛋白和深棕色的铁卟啉构成的一种糖蛋白(含糖量18%),分子量约40 000,约由300个氨基酸组成,等电点为pH 3-9,催化反应的最适pH 值因供氢体不同而稍有差异,一般多在pH 5左右。此酶溶于水和50%饱和度以下的硫酸铵溶液。酶蛋白和辅基的最大吸收光谱分别为275nm和403nm。 酶的纯度以RZ表示:RZ=OD403/OD275 纯酶的RZ多在3.0以上,最高为3.4。RZ在0.6以下的酶制品为粗酶,非酶蛋白约占 75%,不能用于标记。RZ在2.5以上者方可用于标记。HRP的作用底物为过氧化氢,催化反应时的供氢体有几种:⑴邻苯二胺(OPD),产物为橙色,可溶性,敏感性高,最大吸收值在490nm,可用肉眼观察判别,容易被浓硫酸终止反应,颜色可在数小时内不改变,是目前国内ELISA中最常用的一种;⑵联大茴香胺(OD),产物为橘黄色,最大吸收值在400nm,颜色较稳定;⑶5-氨基水杨酸(5-AS):产物为深棕色,最大吸收值在449nm,部分溶解,敏感性较差;⑷邻联甲苯胺(OT)产物为蓝色,最大吸收值在630nm,部分溶解,不稳定,不耐酸,

酶联免疫使用试剂盒检测过程中值得关注的问题

酶联免疫()使用试剂盒检测过程中值得关注的问题 1、仪器质控 为使仪器保持最佳工作状态,应建立维护和校正仪器的标准操作程序(),所要控制的仪器包括移液器(加样枪)、温箱、洗板机和酶标仪。 ◎移液器:加样量小(20-200卩l ),其准确性直接影响实验结果,利用称重法检查:低、中、高三个刻度分别吸取指示量的水,万分之一天平称重后计算吸量是否准确,一般应在土5淋内;◎恒温箱:经常检查恒温箱温度计所示的温度和水中(或温箱内)实测温度是否一致,允许有土1C的误差; ◎洗板机:每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定,一般不超过2卩I ;人工扣板时,垫纸不湿;定期检查管孔是否堵塞;◎酶标仪:经常维护其光学部分,防止滤光片霉变,定期检测校正,使其保持良好的工作性能。 2、试剂盒选择 ◎应尽量选择正规厂家,产品经相应政府部门审核认可,试剂应从灵敏度、特异性、精密度、稳定性、简便性、安全性及经济性全面评价。 ◎灵敏度:有二层含义,1)为试剂检出被检物质的最低量的能

力;2)为试剂对大量样品中阳性检出的能力。 ◎特异性:常用交叉反应率表示。含有与待测物相近结构部份的物质可能存在交叉反应,使测定结果升高,可能导致假阳性,所以交叉反应是评价其质量的关键指标。 ◎精密度:试剂一般指其批内,其值应小于15%;定量试剂应同时考察线性范围。 ◎准确度:通过添加回收实验进行评价。 ◎简便性:指在不影响试剂的前三项指标的前题下,实验和测定步骤越少越好,在定性实验中结果判断简单明了,定量试验结果计算也应简单。 ◎安全性:指试剂对操作者和环境安全无害无传染性。◎经济性:试剂在同等质量条件下通过大规模生产或技术进步降低成本,而市场价格比较合理。 ◎试剂评价:需要有权威的确证方法和确证的样品进行检测。 3、样本前处理注意事项 3.1 均质 组织样本: 肉、肝食品类切细,用绞肉机反复绞碎,混合均匀。水产样本:去除样品的非食用部分,食用部分切细,用均质器均浆;原料表面较脏时, 需适当用蒸馏水清洗。 蛋类:鲜蛋去壳,蛋黄和蛋白充分混匀。水果、蔬菜类:先用水洗去泥沙,然后除去表面的水分,取食用部分。 3.2 振荡提取将提取溶剂加入到装有样品的具塞容器中,振荡, 使提取溶剂与容器内的样品充分接触以深入到样本组织内部,提取待测组分。 3.2.1 振荡方式:振荡器上进行上下、往返式振荡、手摇式上下振荡。 3.2.2 在组织样本中加入有机溶剂之间提取时,应边加边振荡,防止组织凝结成团,不利于提取。 3.3. 在用有机溶剂提取过程中,如果出现乳化现象,解决的方法有: ①用细头轻轻的搅拌,破坏乳化后,再重复离心。②再加入适量的提取剂,重新振荡。注意离心后要保证样本的稀释倍数不变。 3.4 浓缩 由于净化过程中引入的溶剂,可能会降低待测组分的浓度或者不适宜直接分析,需要去除全部有机溶剂。即试剂盒前处理步骤中把样本在60C氮气下吹干,再用复溶液溶解干燥残留物。浓缩方式:

TB-IGRA酶联免疫分析试剂盒说明书

人结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围:96T 10pg/ml-240pg/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)水平。用纯化的人结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA),再与HRP标记的结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中人结核分枝杆菌Y-干扰素(TB-IGRA)浓度。 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。

2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。 4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用 5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此 重复5次,拍干。 6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。 7.温育:操作同3。 8.洗涤:操作同5。 9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟. 10.终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结: 计算

微囊藻毒素-LR_定量酶联免疫检测试剂盒_Microcystin-LR_ELISA_Kit

微囊藻毒素检测试剂盒 适用 普华仕科技发展有限公司提供的微囊藻毒素检测试剂盒适用于水中微囊藻毒素的定量检测。 检测原理 微囊藻毒素检测试剂盒由可以和微囊藻毒素及微囊藻毒素酶标记物结合的多克隆抗体制成。样品中的微囊藻毒素与微囊藻毒素酶标记物竞争结合数量有限的抗体结点。 检测过程中,先加入微囊改造毒素酶标记物及含有微囊藻毒素的样品到测试孔中接着加入抗体,酶标记物与样品中的微囊藻毒素竞争结合同样的抗体的结合点。 测试孔中包被有抗兔IgG,用于捕获加入的兔抗微囊藻毒素抗体。 孵育30分钟后洗掉小孔中所有没有结合的分子。每孔中加入干净的底物溶液,连接的酶结合物可以将底物转化成蓝色化合物,一个酶分子可以转化多个底物分子。 由于各个孔中抗体可结合位点是相同的,并且加入的微囊藻毒素酶标记物的量也是相同的,样品中微囊藻毒素含量低的则酶标记物结合得多,颜色会显深蓝色。反之,样品中微囊藻毒素含量高的则酶标记物结合得少,颜色会显浅蓝色。 注意:颜色与微囊藻毒素的含量成反比。 较深的颜色=较低的浓度 较浅的颜色=较高的浓度 特性: 特异性 Beacon微囊藻毒素检测试剂盒没有区分微囊藻毒素-LR(作为标准品)及其它类型,然而可以测到微囊藻毒素的其它类型,以下表格中展示的是相关值及交叉反映率(%CR),以下所有浓度均为ppb级。 试剂盒组成 ?包被有羊抗兔抗体的的微孔板(12×8条)。 ?阴性对照品一瓶(0ppb微囊藻毒素-LR)。 ?0.1ppb、0.3ppb、0.8ppb、2ppb微囊藻毒素-LR标准品各一瓶。 ? 1.0ppb微囊藻毒素质控样品一瓶。 ?微囊藻毒素HRP酶标记物一瓶。 ?兔抗微囊藻毒素抗体溶液一瓶。 ?底物一瓶。 ?停止液一瓶。(注意!1N 盐酸,小心处理) ?100×清洗液。 注意事项

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