华南农业大学实验报告
专业班次 11农学1班组别 0110
题目根系活力的测定姓名梁志雄日
期 2012-11-21
一、实验原理
氯化三苯基四氮唑( TTC )是标准氧化电位为 80 mV 的氧化还原色素,溶于水中成为无色溶液,但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲( TTF )生成的三苯甲( TTF )比较稳定,不会被空气中的氧自动氧化,所以 TTC 被广泛用作酶试验的氢受体,植物根系中脱氢酶会引起的TTC 还原。所以 TTC 还原量能表示脱氢酶活性,并作为根系活力的指标。根系的活力越高,产生的NAD(P)H+H+等还原物质越多,则生成红色的TTF 越多。TTF溶于乙酸乙酯,并在波长485nm处有最高吸收峰,因此,可用分光光度法定量测定。
二、实验材料与实验器材
蒜根、分光光度计、分析天平、恒温水浴锅、研钵、漏斗个、移液管、比
色管、10ml容量
瓶、50ml烧杯
三、实验试剂
乙酸乙酯、石英砂、硫代硫酸钠粉末、1%TTC、1/15mol/磷酸缓冲液、1mol/L 硫酸
四、实验步骤
1、称取根尖样品 0.5 g ,放入小烧杯中,加入% TTC 溶液和磷酸缓冲
液()各 5 mL ,使根充分浸没在溶液内,在 37 ℃下暗保温 1 h ,此后立即加入 1 mol/L 硫酸 2 mL ,以停止反应。(与此同时做一空白实验,先加硫酸,再加根样品, 37 ℃下暗保温后不加硫酸,其溶液浓度、操作步骤同上)
2、把根取出,用滤纸吸干水分,放入研钵中,加乙酸乙酯 3 ~ 4 mL ,
充分研磨,以提出 TTF 。把红色提取液移入刻度试管,并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤 2 ~ 3 次,皆移入刻度试管,最后加乙酸乙酯使总量为 10 mL ,用分光光度计在波长 485 nm 下比色,以空白试验作参比测出吸光度,查标准曲线,即可求出 TTC 还原量。
TTC还原量=从标准曲线查出的TTC浓度*提取液总体积*稀释倍数
五、数据记录记录
从标准曲线上查出TTC的浓度为(ug/ml)
故可以知道TTC的还原强度为*10*1/=
六、实验总结
本实验严格按照实验步骤进行,利用根系生长发育过程中所产生的还原物质,把TTC还原为红色的TTF,再利用TTF溶于乙酸乙酯从而把它提取出来,在485nm的波长下测定其吸光度,从而计算出TTC的还原量,以此来表现根系活力的大小,本实验测得的数据为,从网上查出的一个数据位,所以总体上数据还是比较合理的。在分光光度法实验中,样品和表样都加了处理剂,处理剂可能会含有被测物质,使用空白对照就是我去掉被测物质外所带来的结果误差,进行对照,可以清晰检验出结果。