医学免疫学实验指导
实验五凝集反应
由长沙达尔锋生物科技有限公司整理
【文章介绍】
实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。
【实验目的】
1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。
2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。
【实验用品】
1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。
2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。
【内容和方法】
一、玻片凝集试验(slide agglutination)
1.原理
玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。
2.方法
（1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。
（2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10 稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2 滴于第1、2 格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2 滴于第3格内。
（3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。
3.结果观察与判定
细胞生物学实验报告 一．实验名称：细胞凝集反应 二．实验原理： 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分支状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分支状糖分子有关。 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 凝集素是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin, PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素 A(Conconvalina,ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin, WGA)、花生凝集素 (Peanut agglutinin, PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin, SBA)等，凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，它们具有的某些“亲合” 特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。 血型鉴别实验，也是凝集反应的一种。 三．实验用品： 土豆块茎 显微镜，粗天平，载玻片，滴管2支，离心管2支 PBS缓冲液：称取NaCl7.2g，Na2HPO41.48g,KH2PO40.43g,加蒸馏水，定容至1000ml，调pH值到7.2. 4.2%的红细胞 四．实验步骤：
1.称取土豆去皮块茎2g，加10mlPBS缓冲液，浸泡2h，浸出的粗提液中含 有可溶性土豆凝集素。 2.以无菌方法抽取兔子静脉血液（加抗凝剂），加生理盐水3ml，在 1000r/min，离心5min，重复3次离心，最后按压积红细胞体积用生理盐水配成1%红细胞液。 3.分别用滴管吸取土豆凝集素和1%红细胞液各一滴，置双凹片左孔内，充 分混匀。 4.同时分别用滴管吸取PBS缓冲液和1%的红细胞悬液各一滴，置双凹片右 孔内，充分混匀，做对照实验。 5.摇晃5—10min后，观察有无发生细胞凝集并置显微镜下观察。 图左为PBS缓冲液对照图右为土豆凝集素
科目细胞生物学实验题目细胞凝集反应 细胞凝集反应 【实验目的】 1.了解细胞膜的表面结构； 2.掌握凝集素促使细胞凝集的原理； 3.学习研究细胞凝集反应的方法。 【实验原理】 1.凝集素 凝集素是一类含糖（少数例外）并能与糖转移结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物，人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集素，通常一起被提取的植物命名，如伴刀豆凝集素A、麦胚凝集素、花生凝集素和大豆凝集素等，凝集素是他们的总称。 在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（又称为糖萼）。凝集素能与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”，从而引起细胞凝集。凝集素引起的血细胞凝集，其细胞膜结构没有发生变化，与血液凝固中发生的复杂生物化学过程完全不同；另外，凝集素能与不同的糖蛋白特异结合，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集，但是凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，因此，Ponder提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。 人们利用凝集素与不同的糖蛋白特异性结合的原理，识别和研究不同类型膜结构的生物学特征，以及进行血型鉴定。ABO血型鉴定主要用于临床输血，在皮肤、肾等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体；不孕症和新生儿溶血症病因的分析及亲子鉴定等。另外，凝集素在临床疾病防治、机体生理活动调控以及生物工程等方面展示出了十分广阔的应用前景。如：植物凝集素可抑制受精；芸豆凝集素可直接抑制HIV-1反转录酶的活性，减少HIV感染者的病毒载量；细胞膜表面糖复合物的糖链结构与肿瘤细胞增殖、侵染、转移等发展过程密切相关，凝集素芯片技术实现了对癌症的快速、高通量检测，有助于筛选出癌症相关的糖链标志物。 2.细胞凝集 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团。细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为，细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，如植物血球凝集素，伴刀豆凝集素和土豆凝集素等，它具有凝集细胞核刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 3.细胞凝集的反应技术 一、直接凝集反应技术 颗粒性抗原(细菌、螺旋体、红细胞等)与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一定时间，抗原抗体凝聚成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。 血清中的抗体称为凝集素。抗原称为凝集原。 细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状态。抗原与抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在着相互对应的化学基团，因而发生特异性结合，称为抗原抗体复合物。由于抗体与抗原结合，降低了抗原分子间的经典排斥力，抗原表面的亲水基团减少，由亲水状态变为疏水状态，此时已有凝集的趋向，在电解质（如生理盐水）参与下，由于例子的作用，中和
《医学免疫学》实验教学大纲 实验名称：医学免疫学 学时：6学时 学分： 适应专业：护理学专业 执笔人：边藏丽 审定人：王恺兵 一、实验目的与任务 实验教学是医学免疫学教学的重要组成部分，通过实验教学加深对基础理论知识的理解，了解常用的免疫学检查方法，掌握免疫学基本实验技术（试管凝集、玻片凝集、对流免疫电泳、免疫细胞形态观察、淋巴细胞分离、ELISA等），培养学生严谨求实的科学态度以及观察、分析、综合能力、创造思维能力和初步的科研能力。 二、教学基本要求 医学免疫学实验对象多为具有传染性的材料，要求学生在实验教学中严格遵守实验室规则，牢固树立无菌观念，认真操作与观察实验结果，实事求是的记录实验结果，并对实验结果进行认真分析和讨论。 四、实验教学内容及学时分配 实验一凝集反应（试管凝集、玻片凝集） 3学时 1．目的要求 掌握体外抗原抗体反应的特点和影响因素；掌握凝集反应原理、方法和用途。 2．方法原理 颗粒性抗原与相应抗体在一定条件下特异性结合而出现肉眼可见的凝集现象。 3．主要实验仪器及材料 试管、玻片、水浴箱、吸管、伤寒杆菌“H”“O”诊断菌液、大肠埃希菌、大肠埃希菌
诊断血清等。 4．掌握要点 掌握凝集反应原理、方法和用途；血清效价；凝集现象的观察。 5．实验内容： （1）玻片凝集（抗原定性试验） （2）试管凝集（抗体定量试验） 实验二对流免疫电泳、血型鉴定 2学时1．目的要求 掌握沉淀的反应原理、方法和用途；了解对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；掌握血型鉴定的反应原理、方法及结果判断。 2．方法原理 对流免疫电泳是将经典沉淀反应与电泳技术结合而设计的一项实验。沉淀反应是指可溶性抗原与相应抗体在一定条件下发生结合并出现肉眼可见的沉淀物的一种血清学反应。 带电的胶体颗粒可在电场中移动，其移动方向与胶体颗粒所带电荷有关。抗原在的缓冲带负电荷，将抗原加于琼脂板阴极端的小孔中，由阴极向阳极移动；抗体为球蛋因电渗作用而流向阴极。当抗原抗体在两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉淀线。此种在双向琼指扩散基础上加电泳的方法，称为对流免疫电泳。 血型鉴定属直接凝集反应。将已知标准抗A和抗B血型抗体分别与待测红细胞混合。如果抗原与抗体相对应，则引起红细胞凝集，反之则不凝集，据其凝集现象可判断血型。 3．主要实验仪器及材料 标准的抗A和抗B单克隆抗体（抗A为蓝色，抗B为黄色）、酒精棉球、采血针、载玻片、待测血清、甲胎蛋白诊断血清，肝癌病人阳性血清， L巴比妥缓冲液，琼脂对流免疫板、打孔器、加样器、电泳仪等。 4．掌握要点 （1）对流免疫电泳的操作步骤，结果观察； （2）血型鉴定的方法及结果判断。 5．实验内容： （1）讲述沉淀的反应原理、方法和用途；对流免疫电泳的操作步骤，结果观察；血型鉴定的反应原理、方法及结果判断； （2）对流免疫电泳的操作及结果观察； （3）血型鉴定的操作及结果观察； 实验三小鼠吞噬细胞及转化细胞形态观察 2学时 1.目的要求 观察吞噬细胞的吞噬现象；了解机体的非特异性免疫功能。观察转化细胞、淋巴母细胞的形态了解机体的特异性免疫功能。 2．方法原理 巨噬细胞可吞噬异种或异体细胞等体积较大的异物，中性粒细胞可吞噬多种细菌。观察这两类细胞的吞噬现象，可计算出吞噬异物的细胞数和吞噬细胞中吞入的异物数，用以评价机体的免疫状态。 淋巴细胞，在受抗原的刺激后，可转化为淋巴母细胞，淋巴细胞转化率的高低可反映机体细胞免疫水平。
《医学免疫学与病原生物学》 课程实验教学大纲 [适用对象]中医学（骨伤）、针灸推拿学专业 [实验学时] 9 学时 一、实验教学任务和目的 《微生物与免疫学实验》是与《微生物与免疫学》理论课程密切结合的一门重要的、非单独设课的医学专业基础实验课程。课程学习的目的是让学生掌握本课程基本技能操作，为学习基础医学有关课程和临床医学课程、为学生将来从事医药相关工作和科研工作奠定基础。 二、实验教学基本要求 （1）训练学生掌握微生物学与免疫学最基本的操作技能。 （2）加深理解课堂讲授的微生物学与免疫学理论。 （3）培养学生观察、思考、分析问题、解决问题和提出问题的能力。 （4）培养学生实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神。 (5)培养学生树立勤俭节约、爱护公物的良好作风。 三、实验教学内容 实验一细菌的人工培养法 1、实验目的和要求 （1）掌握各种培养基接种技术。 （2）熟悉细菌在培养基中的生长现象；认识菌落、菌苔。 （3）了解常用的液体、固体和半固体培养基的成分、制备方法和用途。 2、实验内容 （1）分离培养法(平板划线法) （2）斜面培养基接种方法 （3）液体培养基接种法 （4）半固体培养基的接种法 （5）观察细菌在培养基上的生长情况：细菌各种培养物的示教；描述细菌
在各种培养基上的生长现象；观察大肠杆菌与痢疾杆菌在半固体培养基上的现象。 3、实验仪器 普通琼脂平板，普通琼脂斜面，半固体培养基，肉汤培养基，接种环，接种针，酒精灯，大肠杆菌24小时斜面培养物等。 4、实验学时 1学时 实验二细菌的分布及消毒与灭菌 1、实验目的和要求 掌握高压蒸气灭菌器的使用方法及注意事项；证实热力和紫外线的杀菌效果；证实常用消毒剂的消毒效果；证明细菌在自然界和正常人体的存在，为在医学实践中树立严格的“无菌观念”提供依据。 2、实验内容 （1）高压蒸气灭菌法 （2）干热灭菌器（干烤箱） （3）紫外线的杀菌实验 （4）热力对芽胞及繁殖体的作用 （5）药物敏感性试验 （6）化学消毒剂的杀菌的作用———手指皮肤消毒前后的细菌学检查 （7）空气中的细菌检查 （8）污水和净水中的细菌数检查 （9）皮肤表面的细菌检查 3、实验仪器 普通琼脂平板、1％高层琼脂，血琼脂平板，无菌试管，无菌吸管，无菌平皿，灭菌棉签，咽拭子，酒精灯等。 4、实验学时 2学时 实验三细菌形态与结构的检查法 1、实验目的和要求 (1)学会显微镜油镜的使用和保护方法。 (2)认识细菌的基本形态和特殊结构(荚膜、鞭毛、芽胞)。 (3)掌握革兰氏染色方法 (4)了解细菌的动力 2、实验内容 (1)显微镜油镜的使用 (2)观察细菌的形态结构 (3)动力试验 (4)革兰染色 3、实验仪器
实验1 细胞凝集反应 （赵海泉主编基础生物学实验指导细胞生物学分册中国农业大学出版社2008.8.） 一、实验目的与原理 1．目的 学习植物凝集素的提取方法，观察红细胞凝集现象。 2．原理 细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为细胞间的联系和识别、细胞的生长和分化、免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖分子有关。 凝集素（1ectin）是一类含糖并能与糖专一结合的蛋白质（少数例外），它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 二、实验用品 1．材料 土豆块茎，兔血。 2．试剂 0.9 % NaCl溶液，PBS缓冲液（称取7.2 g NaCl、1.48 g Na2HPO4、0.43 g KH2PO4。加蒸馏水定容至1 000 mI，pH 7.2）。 3．器材 离心机，显微镜，天平，注射器，6号针头，载玻片，容量瓶，滴管，离心管等。 三、实验内容与操作 （一）提取凝集素 称取土豆去皮块茎20 g，加100 ml PBS缓液，浸泡2 h，将浸出的粗提液过滤，即为可溶性土豆凝集素提取液。 （二）制备2%的红细胞悬液 以无菌方法抽取兔静脉血液（加抗凝剂）2 mI。加8 mL 0.9 % NaCl溶液，
以2 000 r/min离心5 min，去掉上清液，再加0.9 % NaCl溶液至10 ml，反复洗涤5次。最后按沉淀压积的红细胞体积用生理盐水配成2%红细胞悬液。（三）凝集反应 用滴管吸取土豆凝集素和2%红细胞液各1滴，置载玻片上，充分混匀，静置20 min后于低倍显微镜下观察血细胞凝集现象。 四、注意事项 1．若沉淀压积的红细胞暂时不用，应将其4℃保存。下次使用前，先洗涤再用生理盐水配成2%红细胞悬液。 2．以PBS液加2%血细胞液作对照实验。 五、作业与思考题 1记录血细胞凝集情况。 2实验课程感想或感受。 教学内容： 1实验室安全教育。 2教学方法改革。创新小导师制 3实验报告写作要求 4本次实验内容讲解。 知识点： 实验动物知识。 采血操作。 凝集素。 显微镜。 记录方法。
第1次课教学整体设计
、课堂训练内容安排 （1）案例； （2）通过图片思考、根据情境设计展开讨论分析； （3）问题探讨，总结归纳； （4）培养学生创新思维。 三、课后作业与思考题：（根据课程内容适当设计巩固性作业、项目式作业、预习性作业、推荐参考书及网站） （1）项目式作业： 每小组针对每种类型超敏反应至少写出两种疾病和对应的治疗方案、护理注意事项（2）预习性作业： 案例角色扮演 教学后记:
教学过程（教学设计实施步骤及时间分配） 步骤1：师生互问好，考勤（3 分钟） 步骤2：复习，提问（4 分钟） 步骤3：图片展示，案例，学生分析（8 分钟） 步骤4：教师对知识点进行集中总结 一、概念 机体接受某些抗原刺激后，再次接触相同抗原时，发生的一种以机体生理功能紊乱或组织细胞损伤为主的特异性免疫应答。 二、类型 I型超敏反应：速发型 U型超敏反应：细胞毒型、细胞溶解型 川型超敏反应：免疫复合物型、血管炎型 W型超敏反应：迟发型 （一）1型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 过敏性休克：某男孩，15 岁，急性扁桃体炎，青霉素治疗。皮试为弱阳性，护士误作阴性处理，给患者静脉滴注青霉素，约半分钟后，患者出现胸闷、气急、呼吸困难，随即抽搐、昏迷、抢救不及而死亡。（时间短、症状重）步骤5：学生分析，回答（5 分钟） 2、常见疾病 过敏性鼻炎、荨麻疹、湿疹、哮喘、消化道上吐下泻等 3、变应原接触/吸入性变应原：花粉、室尘、动物皮毛等 食物变应原：鱼、虾、蛋、牛奶、海产品等药物：青霉素、异种免疫血清（TAT、普鲁卡因、VitB等 步骤6：视频播放（5 分钟）
（二）n型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 某产妇27岁，血型RH-,产下的RH+女婴浑身多处瘀斑，2天后死亡。诊断死于新生儿溶血症。 新生儿溶血的机制 步骤7：学生分析（5 分钟、 2、常见疾病 输血反应、新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血、药物过敏性血细胞减少症、甲状腺功能亢进症 （三）川型超敏反应（10分钟） 1 、案例分析 某男8岁，因患白喉大量注射动物免疫血清，1 -2周后局部红肿、淋巴结肿大、皮肤出现皮疹、 发痒、面部及眼睑浮肿、关节疼痛、肾小球肾炎、尿中出现蛋白。为什么 步骤8：学生分析（5 分钟、 2、常见疾病 局部免疫复合物病、全身性免疫复合物病 （四）W型超敏反应（5分钟） 1 、案例分析 高校新生入学后，以0T试验普查对结核病免疫力。 1 、常见疾病 传染性迟发型超敏反应性疾病、接触性皮炎、同种异型移植排斥反应3、特点 （1 ）发生较慢，常需24?72小时; （2）无抗体和补体参与。 （3）炎症反应与效应T 细胞和吞噬细胞及其产生的细胞因子或细胞毒性介质有关步骤9：临床案例，小组分析，讨论（10 分钟）
医学免疫学实验指导 实验五凝集反应 由长沙达尔锋生物科技有限公司整理
【文章介绍】 实验是映证理论，对学生进行基本技能训练和培养科学研究能力的手段。BioRike博瑞克根据《医学免疫学实验指导》一书系统整理了14个实验项目，每个实验说明实验目的，实验原理，实验内容方法，实验要求及注意事项，希望广大师生能够从中有所收获。 BioRike简介：BioRike（中文简称“博瑞克”）是长沙达尔锋生物科技有限公司旗下的产品品牌,由旗下专业的生命科学实验室BioRike博瑞克研发和生产。BioRike是一家致力于生命科学和生物技术领域的高科技实验室，专门从事以Elisa试剂盒、抗体、细胞因子、免疫检测试剂盒、血清等免疫学产品为主的生物试剂的研发与销售。 【实验目的】 1.了解凝集反应的原理、基本类型及其用途。 2.熟悉玻片凝集试验、试管凝集试验、间接凝集试验的实验方法和结果分析。 【实验用品】 1. 材料试剂：伤寒杆菌、大肠杆菌18～24小时琼脂斜面培养物、伤寒杆菌H血清、伤寒杆菌H菌液、待测孕妇尿液、HCG阳性孕妇尿液、1:10稀释伤寒杆菌诊断血清、ABO血型标准血清、类风湿免疫诊断试验（用变性IgG致敏的乳胶颗粒）、HCG致敏乳胶试剂、兔抗HCG诊断血清、待测血清、生理盐水。 2.器材：洁净载玻片、巴氏吸管、乳胶皮头、接种环、酒精灯、特种铅笔（或记号笔）、小试管、牙签、采血针、75%酒精棉球、无菌干棉球、试管架；1ml、5ml刻度吸管、37℃恒温箱（或37℃/56℃水浴箱）、显微镜。 【内容和方法】 一、玻片凝集试验(slide agglutination) 1.原理 玻片凝集试验(slide agglutination)是将已知的抗体直接与未知的颗粒性抗原物质(如细菌、立克次体、钩端螺旋体等)混合，在有适当电解质存在的条件下，如两者对应便发生特异性结合而形成肉眼可见的凝集物，即为阳性；如两者不对应便无凝集物出现，即为阴性。此法属定性试验，主要用于检测抗原，如ABO血型鉴定、细菌鉴定和分型等。 2.方法 （1）取载玻片一张（平置实验台上），用特种铅笔或记号笔划分为3格，并标明1、2、3。 （2）取巴氏吸管一支，套上乳胶皮头后，吸取1:10 稀释的伤寒杆菌诊断血清1～2 滴于第1、2 格内，另取巴氏吸管一支，吸取生理盐水1～2 滴于第3格内。 （3）将接种环在酒精灯火焰上烧灼灭菌，冷却后取少许伤寒杆菌菌培养物与第1、3格内的诊断血清、生理盐水混合并涂抹成均匀悬液。然后用同样方法取少许大肠杆菌培养物与第2格内的的诊断血清混合并涂抹成均匀悬液。静置数分钟后观察结果。 3.结果观察与判定
《医学免疫学》教学大纲 课程编号：03100030 课程名称：医学免疫学（） 学分：2.5学分 总学时：45学时 理论学时：27学时 实验学时：18学时 先修课程：生物学、生物化学、生理学、病理学 适应专业：临床医学五年制 使用教材： 1.曹雪涛.医学免疫学（第6版），人民卫生出版社，2013. 2.高劲松、吴高莉. 病原生物免疫学实验教程.北京大学医学出版社，2014. 参考教材： 1.曹雪涛、何维.医学免疫学（第3版），人民卫生出版社，2015. 2.郝素珍.医学免疫学，人民卫生出版社，2010. 3.司传平、丁剑冰.医学免疫学，高等教育出版社，201 4. 4.柳忠辉、吴雄文.医学免疫学实验技术，人民卫生出版社，2014. 一、课程在培养方案中的地位、目的和任务 免疫学是研究机体防御系统——免疫系统的组织结构和生理功能的科学，主要包括三部分。基础免疫学从基因、分子、细胞和整体等不同水平研究免疫系统的结构与功能；抗原的特性；及免疫系统对抗原应答的机制与规律。临床免疫学包括免疫病理学和临床疾病免疫学。免疫病理学主要研究在疾病条件下，免疫系统的变化及对抗原应答的规律。免疫学技术主要包括免疫学诊断、预防、治疗技术原理，以及免疫学实验原理与技术操作。 医学免疫学还广泛渗入到医学各个领域，形成了众多分支学科，成为指导医学实践的理论基础。因此，医学免疫学是医学教育中的一门主干课程，是医学生必修的医学基础课程。本课程的任务是，通过教学使学生掌握免疫学的基础理论，基本知识和基本技能，为学习其他基础医学课程及临床医学课程奠定基础。 二、课程基本要求 1.基础理论与基本知识 （1）免疫学概论
细胞凝集反应实验报告 【摘要】细胞凝集素可以将不同的细胞粘连在一起，在显微镜下可以观察到最终形成大的细胞团块，可以观察到细胞的凝集现象。通过不同的变量，控制细胞凝集反应因素，观察细胞凝集程度。 【关键字】血细胞凝集素凝集反应 【背景介绍】 细胞凝集指细胞与细胞之间通过某种凝集素的作用而相互粘连在一起的现象，最终形成大的细胞团块，在不用显微镜时即可用肉眼看到的明显的现象。早在1896年，Widal就利用伤寒患者的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。至1900年，Landsteriner在特异性血凝现象的基础上发现了人类血型，并于1930年获得了诺贝尔奖。凝集实验灵敏度高，方法简便，迄今已成为通用的免疫学实验技术，广泛应用于临床检验。 凝集素是一种能够与糖类物质特异性结合的糖蛋白，具有一个以上同糖结合的位点，因此能够参与细胞识别和粘连，从而将不同的细胞联系起来。常见的凝集素有刀豆素A、麦胚素、花生凝集素、大豆凝集素等。凝集素主要的作用就是凝集细胞和刺激细胞分裂，在细胞间形成“桥”的作用，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 细胞的凝集与细胞的细胞膜有关，细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能与糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被，目前普遍认为，细胞间的联系，以及细胞的生长分化，免疫反应等都与细胞表面的糖蛋白有关。 细胞凝集的作用很多，机体免疫中反应中，细菌等颗粒性病原体
会与凝集素结合而产生凝集反应，从而被更好的清除。 细胞凝集在实际中应用广泛，在临床上血细胞的凝集作用可用于血型鉴定，同时凝集素可以作为饲料添加剂，帮助抵御感染。 【实验材料】 1、试剂：土豆凝集素（已制备好）、2%兔血红细胞悬液、PBS缓 冲液、生理盐水。 2、仪器：移液管、离心管、离心机、有凹坑的载玻片、带刻度的 试管若干、显微镜。 【实验方法】 1、检查实验所用的仪器是否完备，完好，准备实验； 2、土豆切片，取2g放入10ml的PBS缓冲液中浸泡2h，获取土豆凝集素（此步骤已有老师准备好）； 3、梯度稀释制备不同浓度的土豆悬浮液：取1ml的土豆凝集素悬浮液原液于其中一只试管中，并编号1×；另取0.5ml的土豆悬浮液原液于另一只试管中，加入0.5ml的PBS缓冲液，并编号0.5×；再去一只试管，加入1ml的PBS缓冲液，并编号0×； 4、取1ml已制备好的2%的兔血细胞悬液，通过系列稀释将血细胞悬液制备成不同浓度：在1ml的试管上编号为2%；在标号2%的试管中取0.5ml于另一只试管中，在试管中加入0.5ml生理盐水，混合均匀并编号1%；在1%的试管中取0.5ml的细胞悬液于另一只试管中，并加入0.5ml的生理盐水，混合均匀编号0.5%；（在实验时由于各方面原因，误将已制备好的2%兔细胞悬液当做兔的静脉血，而加入3ml 的生理盐水，进行离心分离，从而重复实验不必要的步骤，需要在以
【实验题目】 细胞凝集反应 【实验目的】 1、了解细胞的表面结构。 2、掌握细胞凝集的原理。 3、掌握细胞凝集实验的操作方法。 【实验材料与用品】 1. 试剂：PBS缓冲溶液、0.9%的氯化钠溶液（生理盐水） 2. 器具：酒精棉球、双凹片、载玻片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管 3. 材料：兔子静脉血 【实验原理】 1.凝集素 凝集素（lectin）是一类含糖的（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。目前已发现近千种植物中含有凝集素，在各种真菌、无脊椎动物、脊椎动物、人体的各种组织和器官中及某些病毒体内也含有凝集素。常用的为植物凝集素，通常以其被提取的植物命名，凝集素为它们的总称。 在细胞表面，组成细胞膜的糖脂和糖蛋白伸出寡糖链，形成细胞外被（糖萼）。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞表面的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 2.细胞凝集 细胞凝集是指细胞彼此聚集在一起，成为一簇不规则的细胞团，目前认为，细胞间的联系、细胞的生长和分化、肿瘤的发生与免疫反应都与细胞表面的分枝状糖分子有关。 3.细胞凝集的反应技术 （1）直接凝集反应技术 颗粒性抗原与相应的抗体血清混合后，在电解质的参与下，经过一定时间，抗原抗体凝集成肉眼可见的凝集块，这种现象称为凝集反应。血清中的抗体称为凝集素。抗原称为凝集原。细菌或其他凝集原都带有相同的电荷（阴电荷），在悬液中相互排斥而呈均匀的分散状
态。抗原和抗体相遇后，由于抗原和抗体分子表面存在相互对应的化学基团，因而发生特异性结合，称为抗原抗体复合物，由于抗体与抗原结合，降低了抗原分子间的排斥力，抗原表面的亲水基团减少，此时已有凝集趋势，在电解质参与下，中和了抗原抗体复合物的大部分电荷，使之失去了经典排斥力，分子间相互吸引，凝集成较大颗粒。出现了肉眼可见的凝集反应。 （2）间接凝集反应技术 可溶性抗原（或抗体）吸附于免疫学反应无关的颗粒表面上，当这些致敏的颗粒与相应的抗体（或抗原）相遇时，就会产生特异性的结合，在电解质的参与下，这些颗粒就会发生凝集现象。这种借助于载体的抗原抗体凝集现象就叫做间接凝集反应技术。 4.载体 具有吸附抗原（抗体）的载体很多，如聚苯乙烯乳胶、白陶土、活性炭、人和多种动物的红血球、某些细菌等。 良好的载体有以下几点基本要求： （1）在生理盐水或缓冲液中无自凝现象； （2）大小均匀； （3）比重与介质相似，短时间内不沉淀； （4）无化学或血清学活性； （5）吸附抗原（或抗体）后，不影响其活性； 目前使用最广泛的是人的O型红血球和绵羊红血球。后者使用更广，因其来源方便，另外绵羊红血球的表面有大量的糖蛋白受体，极易吸附某些抗原物质，吸附性能好，且大小均匀一致。
血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B 抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 三 消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A 型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。 精品文档
红细胞凝集试验 血球凝集(HA)试验: 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验 血球凝集抑制(HI)试验:病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝 集抑制(HI)试验 阿氏液（Alsever）：即红细胞保养液 指红细胞凝集的现象。由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的红细胞凝集。 （1）由病毒而引起的凝集：G．H．Hirst（1941）发现流感病毒能使鸡的红细胞发生凝集，其后又发现其它各种病毒也能引起同样的红细胞凝集反应。即红细胞表面存在着对各种病毒的受体，病毒与受体结合，以红细胞为桥梁的结果而引起凝集。利用此反应可以进行病毒的定性和定量。另外，如果存在抗病毒的抗体时，则由病毒引起的凝集作用将被抑制，所以可用于抗病毒抗体的检出。 （2）由抗体引起的凝集：（a）如果存在对红细胞表面决定基的抗体，则红细胞亦将凝集。可用于测定对抗红细胞的抗体的效价或鉴定人的血型。（b）在红细胞表面，如果人为地使之吸附或结合特定的抗原物质，则与该抗原相对应的抗体将引起红细胞凝集（被动凝集反应或间接凝集反应，psssive he-magglntination）。 血凝及血凝抑制试验 有些病毒具有凝集某种(些)动物红细胞的能力，称为病毒的血凝，利用这种特性设计的试验称血球凝集(HA)试验，以此来推测被检材料中有无病毒存在，是非特异性的，但病毒的凝集红细胞的能力可被相应的特异性抗体所抑制，即血球凝集抑制(HI)试验，具有特异性。通过HA-HI试验，可用已知血清来鉴定未知病毒，也可用已知病毒来检查被检血清中的相应抗体和滴定抗体的含量。 [目的要求] 掌握病毒HA和HI试验的原理和基本操作方法，了解其实用价值。 [材料与试剂] 1. 96孔“U”形或“V”形微量反应板，50 uL定量移液器，滴头，微型振荡器。 2. 生理盐水，0.5%鸡红细胞悬液，新城疫病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），新城疫阳性血清，被检鸡血清。 [实验内容及操作方法] （一）血球凝集(HA)试验 1. 在96孔微量反应板上进行，自左至右各孔加50 uL生理盐水。 2. 于左侧第1孔加50 uL病毒液（尿囊液或冻干疫苗液），混合均匀后，吸50 uL至第2孔，依次倍比稀释至第11孔，吸弃50 uL；第12孔为红细胞对照。 3. 自右至左依次向各孔加入0.5%鸡红细胞悬液50 uL，在振荡器上振荡，室温下静置后观察结果（表4-1）。
影响血液凝固的因素 （一）实验目的：通过本实验来了解血液凝固的基本过程及了解影响血液凝固的一些因素。 （二）实验对象：家兔 （三）实验步骤：（略） （四）实验结果： 1、观察纤维蛋白原在凝血过程中的作用：实验中可见到静置杯内血液发生凝固。搅拌杯内血液不凝固，但在毛刷上见到红色的血凝块，经水冲洗后毛刷上缠绕有白色丝状物。 2、观察影响血凝的一些理化因素：如下表9-1所示。 表9-3 影响血凝的一些理化因素实验条件 1.加少许棉花 2.用石蜡油均匀涂试管内壁 3.放置37℃水浴 4.放置冰水水浴 5.加肝素10个单位 6.加草酸钾2mg （表9-3文字说明：略） 3、观察内源性及外源性凝血过程：如下表9-2所示 表9-2 内源性和外源性凝血过程的观察 试剂 1、富血小板血浆 2、少血小板血浆 3、生理盐水 4、羊肺悬液 5、0.025mol/l cacl2 血液凝固时间 （表9-2文字说明：略） （五）讨论： 血液凝固是指血液由流动的液体状态变为不流动的冻胶状态血液凝固过程大致分为三个 主要阶段：①凝血酶原激活物形成；②凝血酶原激活成凝血酶，③纤维蛋白原转变为纤维蛋白。在凝血酶原激活物的形成过程中分有两种不同的途径：内源性凝血途径和外源性凝血途径。内源性凝血途径是由凝血因子?启动的，参和血凝的全部凝血因子都在血浆内。凝血因子?可被各种带负电荷的物质等所激活，如血管内膜暴露的胶原纤维、玻璃、陶器等。外源性凝血途径是由存在于血管外组织中的凝血因子ⅲ所启动的，其余参和的凝血因子也在血管内。凝 血因子ⅲ在脑、肺、胎盘组织含量很丰富。 不管是内源性凝血途径或外源性凝血途径，他们最后的是使血纤维蛋白的形成而使血液 发生凝固。在观察纤维蛋白原在凝血过程中作用的实验中，由于参和凝血的全部凝血因子都在血浆中，因此其凝血过程是属于内源性凝血。由于玻璃和毛刷表面都带有负电荷，后者可激活凝血因子?，启动内源性凝血过程。凝血到最后阶段时，在凝血酶的作用下，把纤维蛋白原水解成血纤维蛋白；形成的纤维蛋白不断地交叉成网状结构，把血液中的所有血细胞网凝血时间50’’ 8’15’’ 2’15’’ 6’45’’ 不凝不凝试管1 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 2’15’’ 试管2 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 3’45’’ 试管3 0.2 ml 0.2 ml 0.2 ml 45’’ 罗于其中，从而使血液发生凝固。静置杯中的血液，由于发生了上述的血液凝固过程， 所形成的纤维蛋白没有被破坏，所以杯中血液凝固。而搅拌过的杯内血液，虽也发生血液凝固过程，但所形成的纤维蛋白却不断缠绕到毛刷上，当杯内血液的纤维蛋白原全部水解掉后，形成的纤维蛋白也全部缠绕在毛刷上，这时血纤维只能网罗毛刷附近的一些血细胞，在毛刷上见
实验报告
二者均在正常值内，患伤寒的可能性小； H抗体效价超过正常值，O抗体效价正常，可能是接种了伤寒菌苗或者是接种的回忆反应；O抗体效价超过正常值，H抗体效价正常，可能是伤寒早期或者其他沙门氏菌感染； 一般间隔1~2周复查，若抗体效价比前次结果增高2~4倍，则具有诊断价值。 实验报告
任务二：打孔 1.待琼脂板凝固后在琼脂板中间部分打四个孔，孔径3mm，孔距10mm。在左上角打一个孔作为标记。用胶头滴管吸去空上废液。 提示： （1）打孔时要小心，勿使琼脂层脱离载玻片或琼脂板底层开裂，以免加样时顺裂缝或底部散失。一旦出现裂缝或脱离现象，可向孔内滴加少许温琼脂加以弥补或将琼脂板在火焰高处来回通过几次补底。 （2）在琼脂板左上角打上标记孔，有助于确定正负极方向和样本上样位置，通常情况下，有标记孔侧，放置于正极端。 任务三：加样 1.如下图所示加样，用移液枪每个孔加10微升对应液体： C：人待测血清；D：人阳性血清；E：抗人血清抗体/诊断血清 提示： （1）抗原和抗体在一定的pH条件下，由于带电荷量的多少及分子量大小不同，在电场中以不同的速度作定向移动。在pH8.6的缓冲液中，多数蛋白质抗原物质带负电荷，在电场作用下向阳极移动，而其抗体大多为Y球蛋白，等电点较高，带负电荷较少，且分子量较大，电泳速度慢，受电渗作用影响向负极移动。 （2）加样时勿使样品外溢或在边缘残存小气泡，以免影响扩散结果。 （3）抗原、抗体的量应相接近时容易出现沉淀带，反之不易发生，如抗原过多，可造成假阴性结果，可通过稀释抗原加以解决。 任务四：正确放置琼脂板至电泳槽 1.向电泳槽中加入约2/3体积的pH8.6 0.05mol/L巴比妥溶液，将加好样的琼脂板放入电泳槽，有标记孔的一侧放在正极端。 2.用纱布条搭在琼脂板两侧，以便电泳。 提示： （1）电泳时抗原、抗体电极方向不可放反。 （2）搭桥时应注意与凝胶接触紧密，否则会使电流不均匀，致使沉淀线歪斜、不均匀。 任务五：确定电泳电压 1.设置电泳仪Us=6V，Is=4mA，Ts=60：00 提示： 电压、电流增大时，电泳时间可更短。但电压过高则孔径变形，可将琼脂融化，电流过大抗原抗体蛋自易变性，干扰实验结果；电压过低时沉淀线出现的时间会延长。
医学免疫学》课程实验教学大纲 一、基本情况 1、实验总学时： 2、试验项目数： 3、适合专业： 4、开课学期： 5、实验教材（或指导书、参考书）： 司传平主编，《医学免疫学实验》人民卫生出版社 龚非力主编，《医学免疫学》科学出版社 二、实验目的及任务： 医学免疫学实验课的实验目的及任务是使学生通过实验来验证和巩固已学习的理论知识，并通过实验课的基本技术的操作、基本技能的掌握培养学生认真观察、独立思考和辩证分析问题的能力，训练严格的科学作风、严肃的科学态度和严密的工作方法，并启发学生的创新能力为进一步学习临床专业课和今后从事医学专业工作打下良好的基础。 三、考核方式及评分办法： 评阅实验报告及作业 四、试验主要仪器设备： 显微镜、离心机、恒温箱、水浴箱、酶标仪等 五、实验项目 实验 1 免疫器官的大体形态学观察和免疫细胞的获取（ 3 学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握中枢和外周免疫器官的解剖学形态；掌握免疫细胞的获取和计数方法。 （五）实验内容提要： 观察免疫器官和免疫细胞。 （六）主要仪器设备及配套数： 眼科剪刀，镊子，解剖台（10套）；离心机（1台）；显微镜（10台）。
实验2 E-玫瑰花环形成实验（4学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握人T淋巴细胞形成E-花环的实验原理和操作方法；熟悉T淋巴细胞的功能检测方法。 （五）实验内容提要： 以玫瑰花环试验体外测定人外周血中T 淋巴细胞数量。 （六）主要仪器设备及配套数：离心机、水浴箱、电冰箱（各1台）；显微镜（10套）。 实验 3 中性粒细胞吞噬功能测定（3 学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握中性粒细胞吞噬白色葡萄球菌实验的操作过程；掌握瑞氏染色的基本步骤及吞噬百分率的计算。（五）实验内容提要：观察中性粒细胞吞噬金黄色葡萄球菌的结果，计算吞噬百分率。 （六）主要仪器设备及配套数： 水浴箱、离心机（各 1 台）；采血全套用品。 实验 4 抗原抗体反应及免疫学标本片的观察（2学时） （一）实验类型：综合性实验 （二）实验类别：基础实验 （三）每组人数：30 人 （四）实验目的与要求： 掌握凝集反应和沉淀反应的基本原理；熟悉凝集反应和沉淀反应的操作方法；了解E-玫瑰花 环实验、淋巴细胞转化实验、大小吞噬实验和一些常用生物制品。 （五）实验内容提要： 观察肝癌病人阳性血清与抗血清的反应（双向）以及抗IgG 抗体与IgG 的反应（单向），观察 E-玫瑰花环实验、淋巴细胞转化实验、大小吞噬实验镜片
细胞生物学实验报告 细胞凝集反应 【实验目的】 ⒈了解细胞膜的表面结构。 ⒉掌握凝集素促使细胞凝集的原理。 ⒊学习研究细胞凝集反应的方法。 【实验原理】 ⒈细胞膜是双层脂镶嵌蛋白质结构，脂和蛋白质又能和糖分子结合为细胞表面的分枝状糖外被。目前认为：细胞间的联系，细胞的生长和分化，免疫反应和肿瘤发生都和细胞表面的分枝状糖外被有关。 ⒉凝集素（lectin）是一类含糖（少数例外）并能与糖专一结合的蛋白质，它具有凝集细胞和刺激细胞分裂的作用。凝集素使细胞凝集是由于它与细胞外被中的糖分子连接，在细胞间形成“桥”的结果，加入与凝集素互补的糖可以抑制细胞的凝集。 【实验用品】 ⒈材料 土豆块茎、家兔。 ⒉试剂 ⑴PBS缓冲液 称取NaCl 7.2g、Na2HPO4 1.48g、KH2PO4 0.43g，加蒸馏水，定容至1L，调pH至7.2。 ⑵1％肝素溶液 0.1g肝素溶解于10mL0.9％氯化钠溶液中。 ⒊器材 5mL注射器、酒精棉球、双凹片、普通光学显微镜、托盘天平、滴管、离心管。 【实验程序】 ⒈以无菌方法抽取兔耳缘静脉血液（5mL注射器先吸取3mL1％肝素溶液）1mL，用0.9％氯化钠溶液洗5次，每次3000r/min离心5min，最后按沉淀的红细胞体积用0.9％氯化钠溶液配成1％红细胞悬液。 ⒉称取去皮土豆块茎2g，切成薄片，加10mLPBS缓冲溶液，浸泡2h，浸出的粗提取液中含有可溶性土豆凝集素。 ⒊用滴管吸取土豆凝集素和PBS缓冲液各一滴，置于双凹片的左右两孔内，再分别滴入一滴1％红细胞悬液，振荡10min。 4.待红细胞液发生明显凝集反应后，将双凹片置于显微镜下观察。 【实验结果】 ⒈结果 细胞凝集反应实验现象 ⒉图像
. ..血型测定实验报告 一、实验目的： 学习ABO型血的鉴定原理和方法。观察红细胞凝集现象，了解抗原抗体反应。 二、实验原理： 血型就是红细胞膜上特异抗原的类型。在ABO血型系统中，红细胞膜上抗原分A和B两种抗原，而血清抗体分抗A和抗B两种抗体。A抗原加抗A抗体或B抗原加抗B 抗体，则产生凝集现象。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（含有抗B抗体）与标准B型血清（含有抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞膜上有无A或/和B抗原。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含A、B 抗原而分为A、B、AB、O四型。（见表4-3-1-1） 三 消毒采血针；载玻片；消毒棉签；抗A、抗B血型定型试剂；75%乙醇；受检者血液四、实验步骤 （1）取双凹玻片一块，用干净纱布轻拭使之洁净，在玻片两端用腊笔标明A及B，并分别各滴入A及B标准血清一滴。 （2）细胞悬液制备从指尖或耳垂取血一滴，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，即得约5％红细胞悬液。采血时应注意先用75％酒精消毒指尖或耳垂。 （3）用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。 （4）竹签两头分别混合，搅匀。 （5）10～30min后观察结果。如有凝集反应可见到呈红色点状或小片状凝集块浮起。先用肉眼看有无凝集现象，肉眼不易分辨时，则在低倍显微镜下观察，如有凝集反应，可见红细胞聚集成团。 （6）判断血型根据被试者红细胞是否被A，B型标准血清所凝集，判断其血型。 五、实验结果： 我们组本次实验中，载玻片1左边为抗B型定型试剂，呈淡红色，未发生凝聚；右边为抗A 型定型试剂，血液在试剂中凝结，试剂较清亮。该受试者1血型为A。 载玻片2左右边的试剂内的血液皆不出现凝结现象，受试者2为O型血。 六、实验讨论： 1.实验中要分清牙签，不要用一牙签一端同时在抗A血清和抗B血清中搅拌，以免造成抗体试剂不纯。 2.实验中我们组发现15分钟后没有出现血凝现象，可用牙签轻轻搅拌一会儿，有些载玻片上就不现了血块，但有些经搅拌后仍不出现血凝现象，表示确实不含相应的抗原。