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免疫组库测序项目计划书

免疫组库测序项目计划书
免疫组库测序项目计划书

免疫组库项目计划书

一项目背景

免疫系统拥有6个主要类型的蛋白,分为免疫球蛋白的轻链和重链、TCRα,TCRβ,TCRγ和TCRδ,每一种免疫蛋白拥有彼此间细微差异的数量巨大的亚型。对于某一种特定的感染或疾病,免疫系统中的B 细胞和T 细胞会作出特异性的免疫反应,产生对抗抗原的特异性BCR 和TCR 序列。记忆性的免疫细胞会长期存在免疫系统中以便当抗原再次入侵时能快速做出反应。这样人们可以寻找不同病毒、细菌或真菌引起免疫反应的特定的BCR/TCR 基因序列。

免疫组库(Immune Repertoire,IR)是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所有功能多样性B细胞和T细胞的总和。它反映机体免疫系统在特定时间内应对外界刺激应答的能力,可以准确而全面地反映机体免疫系统的健康状况。免疫组库测序是以T/B淋巴细胞为研究目标,多重PCR(或5’RACE)结合高通量测序为技术手段,全面评估免疫系统的多样性,识别并量化体内免疫应答增殖克隆,在抗体发掘、疫苗设计、认识免疫系统发育、感染性疾病治疗、自身免疫系统疾病治疗以及癌症的免疫治疗等领域有着潜在的应用价值。

二市场调查

免疫组库测序技术现在已经成熟,市场也较大,目前市场上有许多公司开展,比如:华大基因,北京迈诺基因,上海伯豪生物,北京百迈客生物,上海晶能生物,苏州泓迅生物等。

三技术路线

免疫组库测序的技术已经成熟,有许多商业化试剂盒,数据分析也已经流程化。

1.总技术路线

2.项目实施细节

目前clontech公司有商业化的免疫组库文库构建试剂盒SMARTer Human TCR a/b

Profiling Kit ,考虑到前期的技术风险,推荐购买此商业试剂盒减少技术磨合的时间。

测序TCR CDR3推荐PE101,BCR CDR3推荐PE151

3.项目周期

从收到标本到给出实验报告,目前市场上的公司都是30天

收集样本,质控3天

文库构建10天

上机测序5天

数据分析12天

四项目用仪器

五项目的风险

目前国内要开通医学高通测序检测,需要国家认证的CFDA证书,实验室需要符合CLIA认证。

成体组织干细胞公司项目计划书

成体组织干细胞公司项目计划书 内容提要 一、干细胞概述 二、原有技术——脐血干细胞技术应用的现状 三、真正的生命银行——成体干细胞(胎盘干细胞) 四、建立胎盘干细胞中心的重要性和必须性 五、建立胎盘血干细胞中心的可行性分析 六、项目实施方案 七、具体建设打算和资金分配 八、经济效益分析 九、新公司组建设想 十、风险分析 十一、环境爱护问题 小结 附件 内容提要: 投资项目:成体组织干细胞公司 本打算要建立一座大型的世界一流水平的干细胞提取、储存,干细胞治疗和相应的研究开发和应用公司,为所有的客人提供配型完全相符、质量可靠、数量充足

的自体成体干细胞用于治疗各种细胞损害性疾病。要在尽短的时刻内(3年)成为跨国的细胞生物上市公司。 项目的先进性: 该学科的开发能够修复、改善或取代损害、缺失、病变、衰老的组织或器官,治疗目前尚不能治愈的大多数疾病。 项目适用: 恶性肿瘤性疾病 多种缘故导致的骨髓衰竭 遗传性血液免疫系统疾病 肝坏死、脑萎缩、脊髓瘫痪,皮肤溃疡等 采纳我公司专门的国内专利和技术从人体的各种组织,专门是抛弃组织(以胎盘为例)提取干细胞,是目前在中国还未应用的技术空白,那个技术的开发和应用完全优于目前的骨髓干细胞治疗和脐带血干细胞治疗中心。 投资金额:2400万人民币 合作方式:合资 合作地点:(待定) 项目特点: 首创性:无同类产品 专利性:具有多个中国专利 有效性:临床上证明切实有效的治疗。 广泛性:产品具有美好的市场前景,适用各类人群——不论是富人,穷人,依旧病人或健康人都需要应用这些产品。 高回报性:产品的利润介于数倍到上千倍之间,在公司完全开始运作后的当年即可回收全部投资。

常用免疫组化标记物精编版

常用免疫组化标记物公司标准化编码 [QQX96QT-XQQB89Q8-NQQJ6Q8-MQM9N]

常用免疫组化指标的意义 Ki-67为细胞增值的一种标记,在细胞周期G1、S、G2、M期均有表达,G0期缺如,其和许多肿瘤分化程度、浸润、转移、预后密切相关。PCNA(增埴细胞核抗原)。 多数腺癌表达CEA Rb (retinoblastoma视网膜母细胞瘤) 基因是肿瘤抑制基因,调节细胞周期。 P53在免疫组化中均为突变型,阳性率越高,预后约差。野生型半衰期很短 Nm23是转移抑制基因,其阳性表达和肿瘤转移呈负相关。 E-Ca,E钙粘附蛋白,介导细胞间粘连作用的跨膜糖蛋白,其功能丧失引起细胞之间连接的破坏,主要用于肿瘤侵袭和转移方面的研究。 PS2(雌激素调节蛋白),其表达和ER表达有关,可作为内分泌治疗和预后判断的指标之一。 CK18,低分子量角蛋白,主要标记各种单层上皮包括腺上皮,而复层鳞状上皮常阴性,主要用于腺癌诊断。 CK19,分布于单层上皮和间皮,常用于腺癌诊断,肝细胞不表达,而胆管为阳性反应 Hep par 1,肝细胞抗原,正常肝细胞和高分化肝细胞癌阳性,低分化肝细胞癌多弱阳性或阴性。 CK20,用于胃肠道腺癌、卵巢黏液性肿瘤、皮肤Merkel细胞癌诊断。鳞癌、乳腺癌、肺癌、子宫内膜和卵巢非黏液性肿瘤常阴性。 CK7 卵巢、肺和乳腺上皮常阳性,结肠、前列腺、胃肠道上皮阴性。 Villin 绒毛蛋白,正常组织中,villin通常只表达于有刷状缘的细胞上,如胃肠道上皮细胞、胰腺和胆管上皮细胞以及肾实质的上皮细胞中(特别是近曲小管)。Villin在胃肠道癌、胰腺癌、胆囊癌和胆管癌组织中有很高的表达率,具有明显腺样结构的肿瘤上没有villin表达,则这个肿瘤为胃肠道、胰腺、胆囊或胆管来源的可能性极低。 乳腺癌也经常成为女性患者未知原发部位转移癌要鉴别排除的一种疾病。因为在转移癌组织上观察到明显的villin免疫组化阳性染色,则这个肿瘤就极

建筑工程项目策划书

第一章编制说明及工程概况 一、编制说明 1、编制目的 本施工策划书体现我项目部用科学合理的管理方法,完全实现 该工程各项目标的总体施工部署,是指导施工的大纲。 2、编制依据 (1)全套施工图纸; (2)招标文件、图纸答疑 (3)现场的施工环境、施工条件; (4)国家现行的建筑法律、法规、条例、操作规程及施工工艺; (5)公司制定的《质量手册》、《程序文件》。 二、工程概况 本工程为航天四院经济适用性高层住宅建设项目二区高层住宅 工程,施工地点位于陕西省西安市灞桥区,建设单位为中国航天科 技集团公司第四研究院。 1、建筑工程概况 本工程设计使用年限为50年,建筑工程等级一级,屋面防水等 级I级,建筑结构类型为剪力墙结构,建筑物抗震设防烈度八度, 建筑层数为地上三十三层,地下一层,建筑高度为96.15m。 2、结构工程概况 本工程基础设计等级为甲级,人防抗力等级为甲类核6常6, 黄土地区建筑物分类为甲类,本工程设计标高±0.000相当于绝对 高程440.65m,本工程砌块砂浆潮湿房间采用水泥砂浆,其余采用 预拌砂浆。

3、本项目工程管理的特点和难点 (1)要求达到市优质工程和省文明工地要求。 (2)施工质量要求高,管理难度大。 (3)一次性开工面积较大,工程量较多。 (4)本工程工期较紧。 第二章项目的组织架构与岗位职责 1、项目中心组织构架 项目采用总承包的管理模式,组建总承包项目部,将工程划分为几个部分,分包给具有实力的专业公司施工,总包项目部负责组织、协调、控制、监督、验收。组织机构采用了直线职能式的组织机构形式,以利于明确职责、强化管理、便于协调,指令明确。

造血干细胞捐献宣传活动项目策划书

伸出你的手臂,点燃生命希望 活 动 策 划 书 主办单位:共青团人文科技学院委员会 人文科技学院社团联合会 承办单位:人文科技学院爱心社

一、活动背景 当我们在感受着生活的美好同时,却有那么一群人在社会的某个角落忍受着疾病的煎熬,他们在生命的边缘岌岌可危,他们就是白血病患者。可是让我们痛心疾首的是目前我国的白血病患者数量与日俱增,而中国骨髓库的HLA型数据十分有限,远远无法满足白血病患者的需要。数以百万计需要移植造血干细胞拯救生命的患者正在翘首盼望,等待更多的造血干细胞捐献志愿者的援助之手。这就需要我们发扬爱心,勇敢的奉献,扩充造血干细胞库,为挽救更多白血病患者的生命不段努力。 二、活动主题 伸出你的手臂,点燃生命希望 三、活动目的 1、用我们力所能及的方式去帮助那些血液病患者,用爱心拯救更多的白血病患者。 2、加强当代大学生对造血干细胞意义的认识,使更多的人加入到造血干细胞志愿捐献者的队伍中来。 3、使大学生了解造血干细胞捐献流程,招募大学生造血干细胞志愿捐献者。 4、提高大学生的素质,让爱心充满整个校园。

四、活动形式 1,摆点宣传,进行捐献造血干细胞知识咨询 2,贴宣传海报 3,发放宣传单 4,网络宣传 5,下系宣传 五、活动时间与地点 活动时间:2012年11月日 活动地点:人文科技学院一食堂门前 六、活动流程 1、前期准备 造血干细胞捐献宣传活动海报的制作(宣传部) 造血干细胞捐献宣传活动展板的设计以及报名表的制作(秘书处) 造血干细胞捐献宣传单的制作(信反部) 利用网络手段宣传造血干细胞捐献,搜集大量关于造血干细胞的知识以及捐献造血肝细胞的相关资料。(网编部) 对负责宣传的社干进行分组(组织部) 进行社团活动的财务预算与物品采购(财务部) 联系市红十字会,取得他们的支持和协助(志愿者服务团队)2、活动开展

建筑公司年度计划书

建筑公司年度计划书 2012年度展望 公司管理层要团结和带领全体员工,以“增创优势,增产增收,稳健管理,稳步发展”为主题工作目标,全体员工发扬开拓、务实、创新、奉献的企业精神和实事求是、真抓实干的工作作风,使总公司业务、经营、效益稳步上升,圆满地实现了全年工作目标,保持了公司持续、稳定的发展态势。 (1)营销管理方面:公司继续保持当前管理架构不变,并不断向标准化管理与数字化管理转化,继续提高企业自身技术管理水平。 (2)公司财务状况方面:资金充足,财务健全,能充分发挥灵活运转功能。 (3)人力资源投入:2011年度公司推行多项工作的管理革新,强化组织功能收效颇大,员工工作积极性较高,人员能积极配合生产需求;对于新进入公司的员工,应该组织好转正之后的培训工作。 第二部分 2012年度工作方针及目标 全年实现产值: 20000(暂定)万元,比去年同期增长 %,超额完成全年计划指标;上缴税收:万元,比去年同期增长 %,完成全年计划指标;实现利

润:万元,比去年同期增长 %,完成全年计划指标。 年度目标计划(暂定) ◆主目标: 1、加强经营管理,接手项目要高于往年,圆满的完成了承接工程项目合同产值任务 2、加强安全质量管理,确保在建工程安全质量双向达标,完善工程项目检查管理手段,增强工程项目的管理实效性 3、通过开发、缝补、调整、优化等手段整合现有渠道资源,形成稳定的优质客户网络。 4、建立合理的绩效薪酬管理体系、科学的日报管理制度、实行经理奖金责任制。力求打造一支专业性强、市场反应快速、执行力高、责任心强的高效销售团队。 ◆辅目标: 1、树立员工企业意识,培养员工对于企业良好发展的责任心和竞争意识。 2、建立各部门的协调及横纵向联系,完成向销售终端的精细化运作。 年度目标计划思路 (一)理清市场脉络,大力拓展业务 1、以业务为龙头,稳拓业务,稳增效益,稳步推进在

免疫组库测序项目计划书

免疫组库项目计划书 一项目背景 免疫系统拥有 6 个主要类型的蛋白,分为免疫球蛋白的轻链和重链、TCRα, TCRβ, TCRγ和TCRδ,每一种免疫蛋白拥有彼此间细微差异的数量巨大的亚型。对于某一种特定的感染或 疾病,免疫系统中的 B 细胞和 T 细胞会作出特异性的免疫反应,产生对抗抗原的特异性BCR 和TCR 序列。记忆性的免疫细胞会长期存在免疫系统中以便当抗原再次入侵时能快速做出 反应。这样人们可以寻找不同病毒、细菌或真菌引起免疫反应的特定的BCR/TCR 基因序列。 免疫组库(Immune Repertoire ,IR)是指在任何指定时间,某个个体的循环系统中所 有功能多样性 B 细胞和 T 细胞的总和。它反映机体免疫系统在特定时间内应对外界刺激应答 的能力,可以准确而全面地反映机体免疫系统的健康状况。免疫组库测序是以T/B 淋巴细胞为研究目标,多重 PCR(或 5’RACE)结合高通量测序为技术手段,全面评估免疫系统的多 样性,识别并量化体内免疫应答增殖克隆,在抗体发掘、疫苗设计、认识免疫系统发育、感染 性疾病治疗、自身免疫系统疾病治疗以及癌症的免疫治疗等领域有着潜在的应用价值。 二市场调查 免疫组库测序技术现在已经成熟,市场也较大,目前市场上有许多公司开展,比如:华大基 因,北京迈诺基因,上海伯豪生物,北京百迈客生物,上海晶能生物,苏州泓迅生物等。 三技术路线 免疫组库测序的技术已经成熟,有许多商业化试剂盒,数据分析也已经流程化。 1.总技术路线 收集样本 磁珠法分离T 细胞和 B 细胞 提取 mRNA 多重 PCR扩增构建文库 高通量测序 生物信息分析

细胞免疫组化常用试剂配制

免疫细胞化学常用试剂 一、固定剂 大多数神经激素、肽类物质为水溶性,在用于免疫细胞化学研究之前,常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同,因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此,在进行免疫细胞化学研究之前,很有必要了解所要研究的物质(蛋白质或肽类)的化学性质,并根据需要来选择适宜的固定剂(或固定方法)以及改进固定条件。 目前,免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂,其中以甲醛类和戊二醛最为常用。在此,简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂,以供读者选用。 1.4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液(pH7.3) 试剂:多聚甲醛40g 0.1mol/L磷酸缓冲液至1000ml 配制方法:称取40g多聚甲醛,置于三角烧瓶中,加入500~800ml 0.1mol/L 磷酸缓冲液(Phosphate Buffer以下简称PB),加热至60℃左右,持续搅拌(或磁力搅拌)使粉末完全溶解,通常需滴加少许1n NaOH才能使溶液清亮,最后补足0.1mol/L的PB于1000ml,充分混匀。 该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究,最好是动物经灌注固定取材后,继续浸泡固定2~24h。另外,该固定剂较为温和,适于组织标本的较长期保存。 2.4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠 试剂:A液:多聚甲醛40g 蒸馏水400ml B液:Na2HPO4·2H2O16.88g 蒸馏水300ml C液:NaOH 3.86g 蒸馏水200m

配制方法:A液最好在500ml的三角烧瓶中配制(方法同前),至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意,在溶解多聚甲醛时,要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后,将B液倒入C液中,混合后再加入A液,以1n NaOH 或1N HCl 将pH调至7.2~7.4,最后,补充蒸馏水至1000ml充分混合,4℃冰箱保存备用。 该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究,用于免疫电镜时,最好加入少量新鲜配制的戊二醛,使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和,适于组织的长期保存。组织标本于该固定液中,4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。 3.Bouin’s液及改良Bouin’s液 试剂:饱和苦味酸 40%甲醛250ml 冰醋酸50ml 配制方法:先将饱苦味酸过滤,加入甲醛(有沉淀者禁用),最后加入冰醋酸,混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸最好在临用前加入。改良Bouin’s液即不加冰醋酸。 该固定液为组织学、病理学常用固定剂这一,对组织的穿透力较强,固定较好,结构完整。但因偏酸(pH为3~3.5),对抗原有一定损害,且组织收缩较明显,故不适于组织标本的长期保存。此外,操作时,应避免吸入或与皮肤接触。 4.Zamb oni’s(Stefanini’s)液 试剂:多聚甲醛20g 饱和苦味酸 150ml Karasson-Schwlt’s PB至1000ml 配制方法:称取多聚甲醛20g,加入饱和苦味酸150ml,加热至60℃左右,持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt’s PB至1000ml充分混合(Karasson –Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。 该固定液适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和苦味酸,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18h。 5.PLP液PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定液 (Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)

胎盘造血干细胞库建立计划书

胎盘造血干细胞库建立项目计划书 一、胎盘造血干细胞库建立项目目的 本计划要建立一座大型的世界一流水平的胎盘造血干细胞提取、保存,造血干细胞治疗和相应的研究开发和应用公司,为所有的客人提供配型完全相符、质量可靠、数量充足的胎盘造血干细胞用于治疗各种血液性疾病。 项目的主要业务是储存胎盘造血干细胞,以期当需要时可随时提供病人所缺乏的造血干细胞,这就是当前较为前沿的细胞治疗。目前,国外已开始有个案的临床报告,相信很快就会进入临床应用,而一旦胎盘造血干细胞移植开始实现,不但能为成千上万的病人造福,也有巨大的商业价值。 二、背景概述 20世纪末,世界生命科学领域最重要的进展有二:一是人类基因组完成DNA 序列测定,二是干细胞生物学研究取得突破,这两大科学进展将使生命科学在21世纪发生革命性的变化。人类基因组工程发现了人类各种致病基因及生理性基因,这个学科能使人们了解自身生命的奥秘和疾病发生发展的机制,早期诊断疾病及时采用有效预防保健和治疗措施。干细胞生物工程的研究课题使人体的自我修复变成了可能,干细胞可以修复、改善或取代人体内损伤、缺失、病变、衰老的组织或器官,可以治疗目前不能治愈的大多数疾病。 干细胞是具有自我复制和向各种细胞分化潜能的原始细胞,是形成生命机体各组织器官的起源细胞。人类个体的发育过程实质上就是干细胞的自我更新和增殖分化的过程。人体内所有血细胞、红细胞、白细胞、血小板等,都是由造血干细胞分化而来。而各个器官的细胞也是分别来源于各个器官的干细胞,像肝脏、神经、脑组织、胰腺、皮肤等。 美国脐血干细胞中心的建设始于20世纪90年代初,现有46个脐血中心,其中公共中心18个,自体中心28个。纽约血站在美国卫生总署(NIH)的帮助下,首先建成世界上第一个脐带血干细胞中心并在临床应用。到现在,美国已建立起可容纳55000份脐带血的大型冷冻中心,目前已冻存17000多份脐带血向临床提

免疫组化试剂

免疫组化 免疫组化是组织化学的一种,它是利用已知的特异性抗体或抗原能特异性结合的特点,通过化学反应使标记于结合后的特异性抗体上的显示剂,如酶、金属离子、同位素等,显示一定的颜色,并借助显微镜观察其颜色的变化,从而在抗原抗体结合部位确定组织、细胞结构的化学成份或化学性质。 免疫组化试剂盒: Vector Laboratories公司VECTASTAIN@ ABC免疫组化试剂盒: Vector公司于1977年率先开发出了生物素-亲和素系统,该产品系列是检测方法上的重要革命。其后,公司发展出ABC技术(Avidin : Biotinylated Enzyme Complex Technology,亲和素-生物素-过氧化物酶复合物技术),并建立了著名的VECTASTAIN?ABC系统,目前,该系统被视为最灵敏、最可靠与最有效的染色系统,并被广泛应用于免疫组织化学、免疫电镜、原位杂交与凝集素化学中。ABC技术利用生物素和卵白素具有极高亲和性的生物学特征,将卵白素和生物素化辣根酶按照一定的比例混合,形成ABC复合物。该法亦被称作三步法,第一步为biotin化二抗和一抗结合,第二步为avidin(亲和素,A液)和二抗上的biotin结合,第三步为HRP偶联的biotin(B液)和avidin结合,而HRP再催化底物显色完成染色。试剂盒组份: 2ml试剂A(Avidin DH溶液) 2ml试剂B(生物素化的酶) 1ml生物素化的二抗(1.5mg anti-IgG/0.5mg anti-IgM抗体/2.1mg通用抗体) 3ml阻断血清 其中standard试剂盒只含有试剂A和试剂B VECTASTAIN?ABC系列产品 VECTASTAIN?ABC-HRP Kits(辣根过氧化物酶)最通用的系统,使用范围广VECTASTAIN?ABC-AP Kits(碱性磷酸酶)灵敏度较高,染色密度较低,适于形态学染色非常重要的组织 VECTASTAIN?ABC-GO Kits(葡萄糖氧化酶)灵敏度较低,适用于组织内源性HRP或AP 含量比较高的组织,常与HRP或AP系统配合进行双染。 VECTASTAIN?ABC Kits(辣根过氧化物酶)灵敏度高,特别适用于神经组织

建筑工程项目规划书

一、项目概况 1.1、工程慨况 本工程名称为西安航空信息产业基地1#通用厂房,位于西安市高新区锦业二路12号,该项目总建筑面积为41905.28m2,总造价1.55亿元,结构形式以框架结构为主,地下一层,地上七层(局部八层),建筑总高

度36.25m,抗震烈度8度,结构抗震等级为一级,地基基础设计等级为丙级。 项目由A、B、C三个区组成,A区为框架结构,建筑面积40897.2m2,其中地下室建筑面积5556.81m2;B区为钢桁架结构地上架空一层,建筑面积156 m2;C区为单层门式钢架结构,建筑面积852.08 m2。 本工程基础为柱下承台基础,桩承台、基础底板及地下室外墙为抗渗砼,砼等级为C35S6,基础及地下外墙体防水采纳4㎜厚的SBS改性沥青卷材防水。建筑物外立面为干挂石材和玻璃幕墙,室内地面要紧为花岗石和地砖地面,顶棚为矿棉吸音板吊顶,楼梯为不锈钢栏杆,标准层高为4.3m。 安装工程要紧有通风与空调系统、消防喷淋系统、强弱电系统、高低压配电系统、电梯系统、智能系统、给排水系统等多个专业,涉及专业面比较广泛。 该项目于于2008年3月9日开工,打算2009年11月30日竣工,总工期640天。基础桩基工程于2008年6月16日完成。 1.2、各责任主体单位 1.2.1、建设单位:中国航空第一集团公司631研究所 1.2.2、设计单位:中国航空工业规划设计研究院 1.2.3、勘察单位:西安建材地质勘察研究院 1.2.4、施工图审单位:陕西华瑞勘察设计有限公司 1.2.5、监理单位:陕西华建建设监理有限公司 1.2.6、项目总承包单位:中国航空建设进展总公司 1.2.7、施工总承包单位: 1.3、工程目标

免疫组库高通量测序技术检测ALL-MRD的研究进展

免疫组库高通量测序技术检测ALL-MRD的研究进展 【摘要】急性淋巴细胞白血病(ALL)占儿童恶性肿瘤性疾病的首位,尽管儿童ALL治疗已 取得很大进展,但复发仍是我们面临的难题。白血病的微小残留病(MRD)状态是复发的根源。研究表明,对患者进行定期MRD检测具有重要的临床指导意义。目前临床上通过实时 定量PCR、流式细胞术和原位荧光杂交等技术检测白血病微小残留病(MRD),但是这些技 术都有各自的局限,导致一定程度的漏检或假阳性。免疫组库高通量测序技术(IR-SEQ)的 高灵敏度和高特异性,能够更加全面地检测MRD。本文将对IR-SEQ技术在检测ALL-MRD中 的研究进展进行综述。 【关键词】急性淋巴细胞白血病;微小残留病;免疫组库;高通量测序 急性淋巴细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)在儿童所有恶性肿瘤性疾病中占 据首位,且有逐年增加的趋势,我国每年约有1.5-2万名新发儿童白血病,其中急性淋巴细 胞白血病占80%左右,是小儿时期最常见的白血病类型,发病高峰年龄为3~4岁,是严重 威胁小儿生命和健康的疾病之一。 随着诊疗技术水平的增高,人们对儿童白血病经过形态学、免疫学、遗传学及分子生物学检 测综合分析(MICM分型)的方法对急性白血病进行了精确的诊断和分型、分层治疗使得儿 童ALL的诊疗水平方面得到了质的飞跃,但仍有20%~30%患儿在缓解后复发[1-3],这与体 内仍存在形态学无法检测的残留白血病细胞,即微小残留白血病(minimal residual disease,MRD)有关。因此,在治疗过程中对白血病患者进行定期MRD检测,具有重要的临床指导 意义。目前用于临床评估MRD的技术包括流式细胞术(flow cytometry,FCM)、实时定量PCR(real-time quantification polymerase chain reaction,RQ-PCR)和原位荧光杂交等技术[4],但是这些技术都有各自的局限,导致一定程度的漏检或假阳性,也都无法监测治疗过程中病 人整体的免疫系统重建情况。免疫组库测序技术(immune repertoires sequencing,IR-SEQ) 的高灵敏度和高特异性,能够更加全面地检测MRD,在一定程度上弥补传统方法的不足。 1 免疫组库高通量测序技术的介绍 1.1 高通量测序 高通量测序技术(high-throughput sequencing,HTS),第二代测序技术,又被称为“下一代 测序”(next generation sequencing,NGS)[5]。二代测序技术具有很高的通量,能够同时并 行检测几十万到几百万的DNA分子[6,7],能够用来对进行基因组水平的转录组或者基因组 的分析。二代测序一般采用连接酶或者聚合酶,一般是同步化三磷酸核苷酸的洗脱和同步化 的荧光检测方法相结合,采用“边合成边测序”的方法,输出短的连续性的DNA片段序列。根 据测序原理和技术的不同,主要的技术平台包括以下几种:Roche/454 FLX、Illumina Hiseq系 列和ABI SOLID系列。其中,应用做广泛的,仍然是Hiseq系列。 Illumina Hiseq测序技术其前身是solexa测序技术,依靠其专利核心技术“DNA簇”和“可逆性 末端终结”技术,能够实现样本制备的自动化和高通量的碱基大规模平行测序。主要的步骤是:1)将待测的DNA制备成一定大小的DNA片段的文库,在片段的两端加上接头;2)将模板DNA加到芯片上,进行桥式扩增,形成DNA簇;3)进行边合成边测序。边合成边测序的核 心的原理是,在合成新的DNA互补链时,加入改造后的DNA聚合酶和带有荧光标记的4种dNTP,这些dNTP是“可逆性终止子”,其3’端带有化学修饰的部分,未切除掉该修饰时,不 能连接下一个碱基,能够保证每轮反应只连接一个核苷酸。在掺入单个碱基后,用激光扫描 整个芯片,读取每条模板序列所聚合上的核苷酸种类,之后切除掉末端修饰,掺入下一个碱基,这样,统计每个循环的碱基种类,就得到了所测DNA片段的信息。

免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)

免疫组化技术 原理 抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物,将抗原放大,由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒)。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。 分类(常用) 1、免疫荧光方法 最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用比较广。 2、免疫酶标方法 免疫酶标方法是继免疫荧光后,于60年代发展起来的技术。基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种标记方法,目前在病理诊断中广为使用的当属PAP法(过氧化物酶-抗过氧化物酶)、ABC法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物)、SP 法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)、即用型二步法(聚合物链接)等。 3、免疫胶体金技术 免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作为探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银加强的免疫金银法则更便于光镜观察。 4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法 标本 1、组织标本:石蜡切片(病理切片和组织芯片)、冰冻切片 2、细胞标本:组织印片、细胞爬片、细胞涂片

公司建设项目策划书范例

公司建设项目策划书范例 公司建设项目策划书范例 品牌策划书 | 项目策划书第一部分摘要(整个计划的概括) 一、公司简单描述 二、公司的宗旨和目标(市场目标和财务目标) 三、公司目前股权结构 四、已投入的资金及用途 五、公司目前主要产品或服务介绍 六、市场概况和营销策略 七、主要业务部门及业绩简介 八、核心经营团队 九、公司优势说明 十、目前公司为实现目标的增资需求: 原因、数量、方式、用途、偿还 十一、融资方案(资金筹措及投资方式) 十 二、财务分析 1.财务历史数据(前3年~5年销售汇总、利润、成长) 财务预计(后3年~5年) 3.资产负债情况 第二部分综述 第一章、公司介绍 一、公司的宗旨(公司使命的表述)

二、公司简介资料 三、各部门职能和经营目标 四、公司管理 1.董事会 经营团队 3.外部支持(外聘人士/会计师事务所/律师事务所/顾问公司/技术支持/行业协会等) 第二章、技术与产品 一、技术描述及技术持有 二、产品状况 1.主要产品目录(分类、名称、规格、型号、价格等) 产品特性 3.正在开发/待开发产品简介 4.研发计划及时间表 5.知识产权策略 无形资产(商标/知识产权/专利等) 三、产品生产 1.资源及原材料供应 现有生产条件和生产能力 3.扩建设施、要求及成本,扩建后生产能力 4.原有主要设备及添置设备 5.产品标准、质检和生产成本控制 包装与储运 第三章、市场分析

一、市场规模、市场结构与划分 二、目标市场的设定 三、产品消费群体、消费方式、消费习惯及影响市场的主要因素分析 四、目前公司产品市场状况,产品所处市场发展阶段(空白/新开发/高成长/成熟/饱和),产品排名及品牌状况 五、市场趋势预测和市场机会 六、行业政策 第四章、竞争分析 一、无行业垄断 二、从市场细分看竞争者市场份额 三、主要竞争对手情况: 公司实力、产品情况(种类、价位、特点、包装、营销、市场占有率等) 四、潜在竞争对手情况和市场变化分析 五、公司产品竞争优势 第五章、市场营销 一、概述营销计划(区域、方式、渠道、预估目标、份额) 二、销售政策的制定(以往/现行/计划) 三、销售渠道、方式、行销环节和售后服务 四、主要业务关系状况(代理商/经销商/直销商/零售商/加盟者等),各级资格 认定标准及政策(销售量回款期限/付款方式/应收账款/货运方式/折扣政策等)

免疫组库检测的优势和科普知识

我觉得我们的技术因为扩增覆盖面大(敏感性强)而且扩增是半定量的,不会因为扩增引起免疫组库测序偏向,而且还能避免B细胞的hypermutation引起的扩增失败,所以在技术上我们还是有很多优势的 Stanford 诺贝尔得奖者Andrew Fire 他们组的论文在Translational Medicine 上面发表;加拿大一组科学家在Robert Holt 领导下也发表了免疫组库测序的文章;更早还有Quake组对Zebrafish 抗体做高通量测序的文章 研究疫苗,我觉得关键问题就是搞懂免疫记忆:免疫记忆是如何形成的?用什么方式记录?记录在那里?如何回顾这个记忆? 我们不妨这样随想一下:假设体内的免疫系统是由我来掌管的部队,遇到一个可能反复入侵的敌人,我该如何制订防范计划? 免疫记忆,应该是把反抗入侵的成功经验记录下来。这样,当这股敌人再次入侵时,我就可以用预先准备好的方案去对付他们了。 那么,都有什么信息是需要记录下来的? 重要的信息应该有敌人的入侵的部位(呼吸道),入侵的敌人量(病毒或者细菌量),敌人的主攻方法,他们的兵器;上次“反扫荡”我们所用的兵力(动员免疫资源的程度),兵种(T细胞,B细胞等等),火药配备(IgG? IgA? IgM?),友军(比如先天免疫系统的参与等),抗击时间和出兵的时机,运兵路线,粮草等。 那么,人体(动物)的免疫系统又是如何记录这些信息的?是否也要考虑到这么多的方面?这么复杂的“作战计划”是如何储存在免疫记忆中的?又是如何被完美地回招出来的?记忆又是如何保存而不被忘记的?记忆的空间是否有限?记忆的时间是否有限? 教科书上讲的Response to antigen recall 部分很笼统,这里面还有很多细节是我们所不知道的。那么,从大的方面看,教科书上的假说都正确吗?我们看到的数据有那些是和教科书相符的,那些又是不符的?不符的如何解释?是修改原先的假说还是另外提出假说? 当我们手头掌握了只有少数人才有的工具(免疫组库高通量测序技术)的时候,就好比站在一望无际等待收割的麦田边,启动了大型全自动收割机,等待收获的喜悦的时刻。因为我们看到的数据量之大,之全,之广是前人梦寐以求的。这是我们的幸运,也是我们的责任。许多疫苗都属于所谓的减毒活疫苗:如麻疹减毒活疫苗、甲型肝炎减毒活疫苗、乙型脑炎减毒活疫苗、风疹减毒活疫苗、口服脊髓灰质炎减毒活疫苗、口服狂犬病减毒活疫苗等。 这类疫苗的好处就是接种者能获得长期或者终身保护作用,不过安全性是个问题。 有人猜测,减毒活疫苗效果好的原因可能是它更贴近野生型病毒的感染进入途径,所以所刺激出来的免疫反应也更完整,全面,完美。而用合成蛋白作为抗原的疫苗不能有效地挑起机体完整的免疫反应,所以不是产生出来的士兵兵种不对(该产生分泌型的IgA 结果产生出了IgG), 就是把训练出的士兵送到了错误的战场(呼吸道疾病的抗体送到消化道去了)。或者是军区之间步调不协调(T细胞,B细胞,和先天免疫的一些功能细胞之间的协调不够好)。

干细胞联合实验室建立运作合同范本

编号: 干细胞联合实验室建立运作合同 甲方:_______________________________ 乙方:_______________________________ 签订日期:_______ 年______ 月______ 日 甲方: 地址: 乙方: 地址:

公司(以下简称“”或者乙方) 和公司(以下简称“”或者甲 方)为了促进干细胞技术相关领域的科学研究,推动生物技术经济产业的发展,本着优势互补、平等互利和长期合作的原则,双方商议决定联合建立和运作 -- 联合实验室(以下简称“联合实验室”),内容如下: 一、合作目标 1.1以共赢机制创建干细胞联合实验室,促进双方在干细胞技术前沿领域的研究工作。 1.2通过联合研究和合作项目进行共同创新。 1.3。 1.4。 二、合作范围和研究领域 联合实验室以干细胞技术领域的相关研究作为工作重点,双方初期将在以下领域开展研究工作 2.1 2.2 2.3 。 三、组织管理 3.1.联合实验室由和公司在协议指导下共 同管理和运作,联合实验室不是独立的法人实体。 32联合实验室的日常管理和运作由和公司共同承担。

3.3.和公司将联合建立一个实验室管理委 员会以管理联合实验室的日常运作。联合管理委员会的成员将包括: 方: 方: 实验室管理委员会将负责管理和审核联合实验室的日常运作,包括人员安排、流程制定及效果评定。实验室管理委员会每年定期举行会议,审议实验室年度工作状况和规划下一年度工作计划。 3.4.实验室管理委员会下设学术(专业)委员会。学术(专业)委员会的成员将包括 和在、以及相关领域的学术领头人。由学术(专业)委员会负责上列___ 2.1、2.2、2.3节中所述研究 方向的项目招标、项目评审、学术交流的管理与执行。学术委员会将定期召开会议以推动工作进行,并定期向联合管理委员会汇报工作进展和成果。 四、合作形式及内容 4.1研究课题 4.1.1课题种类 第一类是联合实验室基金课题,主要资助应用创新性、技术前沿性、经费相对较少 的研究型课题(I类课题); 第二类是直接向联合实验室工作委员会申请并获得立项、完全由 公司提供经费支持的重大课题(II类课题); 第三类是双方联合申请到的国家或者政府资助的研究课题(III类课题),如需配 套经费可由公司提供。 4.1.2立项原则 经过广泛而深入的双方交流,在双方感兴趣的研究领域中确立课题,由

免疫组化技术(原理、分类、步骤及主要试剂、设备准备)

免疫组化技术 免疫组化技术
业精于勤而荒于嬉 行成于思而毁于随
免疫组化技术
原理
抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色 来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究。 众所周知,抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性,即先将组织或细胞中的某些化学物质提取 出来,以其作为抗原或半抗原去免疫实验动物,制备特异性抗体,再用这种抗体(第一抗体)作为抗原去免疫动物制备第二抗体,并 用某种酶(常用辣根过氧化物酶)或生物素等处理后再与前述抗原成分结合,形成抗原 - 一抗 - 二抗复合物,将抗原放大,由于抗 体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的,因此,还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来(常用显色剂 DAB 显示 为棕黄色颗粒) 。通过抗原抗体反应及呈色反应,显示细胞或组织中的化学成分,在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产 物,从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质,如蛋白质、多肽、氨 基酸、多糖、磷脂、受体、酶、激素、核酸及病原体等都可用相应的特异性抗体进行检测。
分类(常用)
1、免疫荧光方法
最早建立的免疫组织化学技术。它利用抗原抗体特异性结合的原理,先将已知抗体标上荧光素,以此作为探针检查细胞或组织内 的相应抗原,在荧光显微镜下观察。当抗原抗体复合物中的荧光素受激发光的照射后即会发出一定波长的荧光,从而可确定组织中某 种抗原的定位,进而还可进行定量分析。由于免疫荧光技术特异性强、灵敏度高、快速简便,所以在临床病理诊断、检验中应用比较 广。
2、免疫酶标方法
免疫酶标方法是继免疫荧光后, 60 年代发展起来的技术。 于 基本原理是先以酶标记的抗体与组织或细胞作用, 然后加入酶的底物, 生成有色的不溶性产物或具有一定电子密度的颗粒,通过光镜或电镜,对细胞表面和细胞内的各种抗原成分进行定位研究。免疫酶标 技术是目前定位准确、对比度好、染色标本可长期保存,适合于光、电镜研究等。免疫酶标方法的发展非常迅速,已经衍生出了多种 标记方法,目前在病理诊断中广为使用的当属 PAP 法(过氧化物酶-抗过氧化物酶) 、ABC 法(卵白素-生物素-过氧化物酶复合物) SP 、SP 、即用型二步法(聚合物链接)等。 法(链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶) 链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶)
3、免疫胶体金技术
免疫胶体金技术是以胶体金这样一种特殊的金属颗粒作为标记物。胶体金是指金的水溶胶,它能迅速而稳定地吸附蛋白,对蛋白 的生物学活性则没有明显的影响。因此,用胶体金标记一抗、二抗或其他能特异性结合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌 A 蛋白)等作为 探针,就能对组织或细胞内的抗原进行定性、定位,甚至定量研究。由于胶体金有不同大小的颗粒,且胶体金的电子密度高,所以免 疫胶体金技术特别适合于免疫电镜的单标记或多标记定位研究。由于胶体金本身呈淡至深红色,因此也适合进行光镜观察。如应用银 加强的免疫金银法则更便于光镜观察。
4、免疫铁蛋白法 5、放射免疫自显影法
标本
1、组织标本:石蜡切片 石蜡切片(病理切片和组织芯片) 、冰冻切片 石蜡切片 2、细胞标本:组织印片、细胞爬片、细胞涂片
---------------------------------------------------------------------------------华中科技大学同济医学院
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园林绿化工程有限公司建设项目投资计划书

1. 项目简介 2. 市场前景 3. 投资规模 4. 投资效益 5. 项目实施的制约因素及风险预测 6. 总结 1. 项目简介 长沙市正鑫园林绿化工程有限公司是一家集花卉苗木产销、种苗组培、园林绿化施工为一体的综合性企业,在宁乡县政府、农业局、林业局的大力支持下,建设成为了以八月桂、丹桂、紫薇等中高档花卉苗木种植业务为主,园林绿化施工为辅,拥有现代化栽培设施、绿化施工设备以及较高科技含量的现代化农业公司。 公司成立于2011 年2 月,注册资金200 万元,拥有固定资产

300 多万元,苗木资产800 多万元,建设面积500 多亩,员工50 多名,其中高级工程师3 名,技术人员10 多名。苗木基地现设苗圃部、育材部和绿化工程部,能提供育苗、移栽、成材、绿化、养护、施工等一龙条服务。公司拥有苗木基地二处,一处为宁乡县坝塘镇保安村苗木种植基地,占地面积500 亩,种植有八月桂、丹桂、紫薇等高档苗木合计8000 余株。基地环境优美,生活水电设施齐全,欲打造成农家乐式的现代化苗木基地。另一处为长沙县跳马乡苗木示范基地,占地面积2 亩,种植有大樟树、丹桂等高档苗木90 余株,是公司精品苗木的展示区。公司预计3年后幼苗销售额可达到60 万元每年,8至10年后,苗木的销售总额可达到1100 万元每年,创税138 万元。公司拥有大型园林工程机械10 余台,苗圃技术力量雄厚,施工经验丰富,生产设施配套齐全,有能力承接公路、小区、广场等场所绿化工程的设计、施工和养护,预计年可接工程总价值达500 万元。2012 年,公司正着手升级企业资格和施工资质,以提高公司的整体业务水平及核心竞争力,努力打造一支更强大的企业队伍。 2. 市场前景 2.1 从国际上来看 花卉苗木产业已成为世界上最具活力的三大朝阳产业之一,苗木花卉产品已成为国际贸易的大宗商品,消费量迅猛增长。据统计,1985 年世界花卉苗木消费额150 亿美元,1998 年接近300 亿美元,1991 年开始,我国的花卉绿化苗木市场需求量以平均每年30% 以上的速度增长。世界上著名的花卉绿化苗木企业都把目光瞄准了中国市场,许多国家纷纷向中国输出种子、鲜花、种球等产品或建立花卉苗木生产基地,试图抢占中国的花卉绿化苗木市场。 2.2 从国内来看

免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结

免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难,最大的难处是出现异常结果时如何解决?这就需要掌握免疫组化实验原理,每一步知道为什么这样做,这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间,这三者一般是相互成反比的(相对),其中浓度是最重要的先决条件,温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说,可以有4度、室温、37度,我推荐4度最佳,反应最温和,背景较浅;而37度反应速度较快,时间较短;室温我不太提倡,除非你每次都把环境温度控制在一定的范围,否则,尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法,免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确,是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析,但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下,分析最为准确,这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做;阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应,其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题;后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛,是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时,明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难,加一些形态学数据或图片,老外十分欢迎,可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤,重复运用于同一性质的切片和同一种抗体,做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法,更换一种抗体后,居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程,成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那,这是因为我经过了反复的动手+动脑,把理论原理运用于实践,在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决,最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究,这种技术称为免疫组织化学(immunohistochemistry)技术或免疫细胞化学(immunocytochemistry)技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理,组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合,再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应,前者再用标记辣根过氧化物酶(HRP)或碱性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如链霉亲和素等)结合,最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分,在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物,从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1)按标记物质的种类,如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等,可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2)按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法)。与直接法相比,间接法的灵敏度提高了许多。3)按结合方式可分为抗原-抗体结合,如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法;亲和连接,如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等,其中SP法是比较

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