【组培设备】月季组织培养技术
一、培养意义
月季属蔷薇科蔷薇属多年生草本植物，每年多次开花，而且香味怡人，在观赏植物中地位很高。另一大优点是分布极广，适应性强，栽培容易。使得月季无愧于“花中皇后”之美誉，古今中外文人墨客咏叹月季的佳作，不胜枚举。多伦县就是一个月季之乡，但品种比较单一，更新换代缓慢。随着组织培养技术的应用，多伦县农业技术推广中心于2000年11月引进组织培养全套设备，成功培育了大量优质月季组培苗，填补了市场空白，对加速新老品种更新换代，迅速普及名优新品种起到了重要作用。
二、培养程序
（一）无菌培养的建立
（1）选条
从中国科学院、中国农科院等一级科研机构引进6个月季优良品种，分别是“红双喜”、“白雪山”、“彩云”、“和平”、“皇冠”、“金丝鸟”。选取生长健壮的当年生枝条，用饱满而未萌发的侧芽作为外植体。以枝条中段芽最好，因为接种后，中段芽第5天左右就能萌发，而基部和梢部的芽往往迟至15天才萌发。
2）培养基的配制
整个培养过程都可用MS培养基，诱导芽萌发所加的植物激素只需要BA一种即可，每升用0.3～1.Omg，6个品种均适用，只是萌发迟早有些差别
（3）清洗外植体
采回的枝条切去叶，再剥去附在茎上的叶柄及皮刺，先整段用洗手刷沾浓洗衣粉水仔细刷洗，再用自来水冲洗，毛巾擦干，放置在小木板上，用利刀切成2～3厘米一段，每段至少一个侧芽，装入消毒过的培养皿，放在超净工作台上，打开紫外灯，做表面灭菌30分钟。
（4）消毒与接种
在超净工作台上，用饱和漂白粉上清液作表面灭菌25～30分钟，灭菌时间快到时，即倾去灭菌溶液，用无菌水涮洗数次，无菌纱布吸干茎段外表水分，按无菌操作要求，接种到小试管里，从芽萌发到芽长到1厘米左右需要2～3周。
（5）培养
培养温度21℃最好，最高不超过25℃，有昼夜温差，光照10～12小时/天，光强800～1200LX。
（二）继代增殖
（1）将上述无菌芽从原茎段上切下，转接到MS+BA1-2+1AA0.1-0.3或MS+BA1-2+NAA0.01-0.1的培养基上，促使嫩茎长出更多的侧芽，原茎段弃去。继代增殖培养基每升用蔗糖30克。
2）5周后，“红双喜”增殖了3.5倍，“白雪山”4.1倍，“和平”、“彩云”5～6倍，“皇冠”、“金丝鸟”达15倍。
（3）每5～6周做一次继代增殖，继代前先制备好培养基，然后在无菌操作条件下，将月季嫩茎切成1～2节一段，投入新鲜的增殖培养基上，月季小苗就会按几何级数增殖起来，也可以将大苗转入到生根培养基上。
（4）壮苗培养
①对增殖倍率高的品种，所增殖的嫩茎很细弱，要求进行一次壮苗培养，以取得适合生根和今后移栽的苗子。壮苗培养的培养基为：MS+BA0.3-0.5+NAA0.01-0.1，如果并不特别强调繁殖速度，也可以一直使用这种培养基，以壮苗为主，增殖为辅，使增殖与壮苗合为一步。②培养条件。光照10～12小时/天，光强800～1800LX，温度20～23℃，最高24～26℃。（5）生根与移栽
月季嫩芽生长到一定长度时，就应切割下来，转入生根培养基。切下的嫩芽长度以2～3厘米为宜，让幼苗基部伤口愈合，已长出根原基，幼根尚未长出，即出瓶种植。这种方法不会损伤根系，移栽速度快，成活率高。
（a）以MS培养基为基础，配方为MS+NAA0.5，此外加入300mg/L活性炭，30g/L蔗糖。插植2厘米以上无根嫩茎，经2周左右出现根原基，幼根尚未长出即出瓶种植。
（b）移栽。幼苗出瓶后，先洗去沾附的琼脂培养基，再种植到粗沙+园田土（1：3）介质中，总的原则是疏松透气，有一定的保水、保肥能力。种植密度2～3厘米×4～6厘米/株，移栽完毕浇透水，并用0.1％的百菌清、多菌灵或甲基托布津等喷雾保苗，能显著提高成活率。
（c）移栽后管理。移栽后需保持相对湿度85％以上，在温室、拱棚中移栽，覆好遮荫网，一般成活率都比较高，并注意通风和温度管理。4～6周后，须做好第二次移植，通常植入5厘米×9厘米的塑料杯中，每杯种1苗，再经4～6周，地上、地下部分都充分生长，有些植株还能开花，此时即可出售，或上盆种植，利于观赏。
（d）移栽后植保工作。首次移栽1周后，可少量的追肥，视苗大小，浓度逐
渐由0.1％提高到0.3％左右，施用种类有复合肥、尿素、磷酸二氢钾，MS 培养液等，通常每7～10天喷一次杀菌剂，如百菌清等保苗，也可结合喷药施肥，以减少管理用工。试管苗第二次移栽后，管理上仍不可放松，须注意除草、施肥、防治病虫害，及时掐去顶芽，尤其是花蕾，以促进侧芽的生长，促使早日壮大。
三、影响月季增殖的因素
1.BA用量及侧芽在茎段上的位置对侧芽发育的影响。用“和平”品种月季的枝条，均等分为6段，取每段的一个侧芽培养在无激素的MS基本培养基上，23天后可见接近枝条最顶端和紧挨着枝条基部的芽发育最慢，而枝条中部的芽发育比较快。
在不同浓度BA的MS培养基上，BA含量为0.03～0.3毫克/升的培养基，促进“皇冠”“彩云”侧芽的发育，如果BA超过O.3mg/L，则延迟芽的发育，但对于茎段中部的芽影响较小。
2.摘心对茎增殖的影响。在继代培养的接种操作时，切去嫩芽的顶芽后，再转接到新的培养基上，对嫩芽增殖有很大的促进作用。
3.赤霉素的影响。试用了赤霉素，其浓度为0.1、0.3、1、3、10、30和100毫克/升，试验发现所有浓度都抑制茎增殖，随着其浓度增高，茎增殖数下降，赤霉素浓度增加，还出现细长的嫩茎和发育不全的叶子，畸型植株等。
4.嫩芽长度对形成多芽苗的影响。茎尖在1～10毫米长短时，对形成多芽苗最有效，不但百分率高，而且每个茎段的侧枝数也比较多，切割过短或过长都对茎的增殖不利，芽苗形成较少。切割过长会表现出叶子衰老等不利的现象，最适宜的茎尖长度为6～10毫米。
5.每次继代培养所需时间对嫩茎增殖的影响。在MS+BA3+IAA0.3的培养基上，“红双喜”月季的培养时间为28天，继代一次较好，超过28天，茎的数目已不再增加。
6.MS配方和无机盐浓度。试验证明，全量的MS无机盐对茎增殖效果最好。
四、影响月季生根和移栽成活率的因素
1.不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响。以“彩云”为材料，用NAA、IAA两种不同浓度的生长素做生根试验，发现用NAA诱导生根和提高移栽成活率效果最好，浓度为100ppm为宜，发现以IAA诱导生根和提高移栽成活率效果并不理想，其浓度只能在1mg/L以下，超过时对生根的促进作用已不显著，反而大幅度降低移栽成活率。
2.无机盐浓度和含糖量对月季生根的影响。采用较低浓度的无机盐对月季生根效果较好。但糖浓度不可降低。否则削弱苗的生长势。试验证明1/2MS+30克/升蔗糖利于生根。
3.琼脂用量及对生根的影响。琼脂粉用量在4～5克/升的范围内对生根效果影响没有显著差别，以4克/升稍优，用最小不利于凝固，用量大培养过硬不利于扎根。
五、结论
用组织培养的方法生产月季试管苗不仅生产周期短，而且繁殖倍数高，周年均可生产，年可生产月季试管苗50万株，经济效益，社会效益都很可观，建议业界同仁能够关注此项事业。
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月季组织培养技术研究 摘要：以MS为基本培养基，附加不同浓度的细胞分裂素（6-BA）和生长素(NAA)， 以及用不同外植体部位筛选出最适合月季腋芽萌发的培养基和最佳外植体部位。 实验结果表明：诱导侧芽萌发以MS+6-BA2.0mg/L培养基效果最好，外植体部位 以中部枝条发芽率最佳,为80%。 关键词：月季；组织培养；快速繁殖 Abstract: Use MS as basic medium ,with different concentration of cytokinin and auxin,a nd use different part of the stem as explant for tissue culture to select the suitable medium and best explants site for the induction of Rosa chinensis. The results showed that MS +6B A2.0mg / L is the suitable medium for bud germination, and the middle part of the stem ist he best explant. Keywords: Rosa chinensis, tissue culture, rapid propagation 月季（Rosa chinensis）是蔷薇科落叶或半长绿灌木，其花色艳丽、香味浓郁，是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。由于其分布极广、适应性良好、栽培容易等优点，加之月季四季常青、花期长、花色多等特点，使得在园林和路带绿化以及庭院居室的盆栽美化和切花等方面都得到广泛的应用。月季在观赏植物中具有很高的地位。月季花型大、美丽、幽雅、高贵，深爱各国人民喜爱，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。被誉为“花中皇后”之美称，深受人们喜爱。 月季通常采用扦插和嫁接繁殖，一些名贵品种扦插不易生根，主要是靠芽接繁殖[1]。而芽接速度慢，因而造成优良品种苗木供不应求。应用组织培养技术可以大大缩短其增殖周期，达到快速繁殖优良品种的目的。近年来随着生物技术的不断发展与更新，用植物组织培养的方法快速繁殖各种花木技术得到了普遍重视和广泛应用，关于月季的离体培养、根诱导及移栽问题，以有了不少报道[1、2、8、9、10]。由于受基因影响，不同品种之间的组织培养特性表现出一定的差异[2]。因此讨论不同品种组培快繁的培养条件，特别是培养基中适宜的不同激素配比仍具有重要价值，另外选择适合接种的外植体不同部位也会影响其发芽率。本实验以月月红月季品种为材料进行了侧芽的诱导和筛选出适合月季组织培养最佳外植体部位的组织培养特性研究，试图找出适合月季品种的组培快繁的最佳激素配比的培养基和最适合培养的外植体部位。 1 材料与方法
植物组织培养技术论文—月季组织培养技术 系别：生命科学学院 专业：生物技术及应用 姓名：曹胜华 学号：200930771015
[摘要]月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。 [关键词] 月季组培 随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。 一.月季组织培养的研究进展 月季是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。别名长春花、月月红、斗雪红、瘦客等，蔷薇科蔷薇属植物，其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小。其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一[1]。月季的花色可编制成完美的连续色谱。月季是重要的花卉，世界的销售额多年来稳居各类花)卉的第一或第二。月季的一大优点是分布极广，适应性良好，栽培容易。月季是四季常青花卉，花期长，花色多，芳香馥郁，由于其特殊的情感内涵和商品价值[2]，被广泛应用于园林、庭院装饰，并可制成月季盆景，作切花、花篮、花束等。此外，月季花可提取香料，根、叶、花均可人药，具有活血消肿、消炎解毒等功效。当前，月季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求[3]。随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。同时，月季组培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异育种和基因工程育种的重要前期工作[4]。 月季原产我国，早在汉代就有历史记载。2 0 0年前，月季植入西方和各国的蔷薇结缘，繁育出成千上万新月季品种，现代月季( 分为茶香月季 HT、聚花月季 F、壮花月季 Gr|、攀缘月季 CI、微型月季 Mi n、以及中国月季 Ch等 9大系。 ) 也随之推广到除热带和寒带外的世界各地。目前世界各地广为栽培的月季，是以中国月季为主要亲本，经以长期杂交育种而选育成功的。月季在观赏植物中的地位是很高的，全世界各国人民都普遍喜爱月季，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。月季的用途很广( 如用藤本月季布置长廊、拱门；树状月季装饰主干道等)。 国外月季花卉工厂化育苗开展较早，在某些国家和地区已成为获得巨额外汇的支柱产业。我们国家的组织培养技术与国外相比差距不大，但是产业化起步较晚。在加快科学技术转化为生产力的今天，植物组培技术广泛应用于月季花卉的繁殖育种．必将取得巨大的经济效益、社会效益和生态效益。月季生长繁殖速度较慢，应用组织培养技术可大大缩短它的增殖周期，快速繁殖优良品种。在短期内繁殖出数以万计的苗木，这些苗木的遗传特性和表型特性与母株完全相同，完全保持了母株的优良特性。月季花组
月季植物组织培养实验报告 姓名：张恒玉 （天津师范大学10生乙10517085） 摘要：月季（Floribunda roses）为蔷薇科蔷薇属木本植物,其花姿优美，花 型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一。植物组织培养主要以绿色植物细胞或组织块为研究主要对象，把植物体上的生活器官、组织块活细胞从整体上离体下来进行人工培养。以细胞全能性为理论基础对最适月季培养的培养基、激素、培养基质进行筛选，使离体组织经过脱分化和再分化而发育成新的植物个体。为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。 关键词：月季组织培养 Rose Plant Tissue Culture Lab Report Name: ZhangHengyu （Tianjin Normal University college of Life Science, Biological Sciences 300387） Abstract:Rose (Floribunda roses) for the woody Rosaceae Rosa, the beautiful flower position, abundant flowers, colors available, easy to trim the tree, planting small difficulty; its flowers large, beautiful, elegant, noble. Applications in the flowers, the status and the proportion rose growing is the world's leading one of the four cut flowers. Plant Tissue Culture main object of the green plant cells or tissue blocks for research, Of life on the plant organ, tissue block living cells isolated from the whole down the artificial culture, Cell totipotency theory based on the optimum rose culture medium, hormones, culture media filter, Isolated tissue and develop into new individual plants after dedifferentiation and redifferentiation. breeding of new varieties offer a new way, in the rose show a significant improvement potential applications. Keywords: Rose tissue culture 1 月季介绍
月季的植物组织培养综述 摘要： 随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。 月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。前言： 为了进行月季组织培养实验，我们查阅了相关文献，从多个方面了解影响月季组织培养的因素，如外植体的取材部位、时间、大小、消毒、接种方式、不同阶段激素的配比、培养基成分、培养条件等，以期在实验中调控月季组培的环境，确保实验顺利进行。同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，同时探究由愈伤组织诱导出芽及生根所需的最佳浓度配比。并在月季组织培养过程中，掌握外植体消毒方面要注意的事项，整个培养过程中培养条件的选取与控制，实验过程中出现的现象的观察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。察记录以及分析，在这个过程中不断加强理论与实践的联系，深化对理论知识的理解。 关键词：月季、MS培养基、激素等。 综述： 培养基 基本培养基 众多培养基中以MS 培养基的效果为最好，广泛用于月季的离体快速繁殖中。对MS 培养基的成分及物理性能进行合理的选择会提高月季组织培养的成功率。 诱导培养基以MS为基本培养基，附加适量的细胞分裂素 6 一苄氨基嘌呤( 6 - BA) 和生长素萘乙 D 6 7 B 0 2) 酸 ( NAA) 。 激素 不同激素对诱导愈伤组织的影响诱导培养基以ＭＳ为基本培养基，附加适量的细胞分裂素和生长素。生长素增加至0.1mg/L时，细胞分裂素浓度的高与低已对增殖系数不产生明显影响。最适的侧芽诱导培养基为MS+细胞分裂素0.5-3.0mg/L和生长素0.01-1.00mg/L，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。 不同生长素种类和浓度对月季生根和移栽成活率的影响。用NAA 诱导生根和提高移栽成活率效果最好，浓度为100ppm 为宜，现在IAA 诱导生根和高移栽成活率效果并不理想，其浓度只能在1mg/L 以下,超过时对生根的促进作用已不显著,反而大幅度降低移栽成活率。NAA 和IBA对月季的诱导生根都有较好的效果,在1/2MS培养基附加NAA或IBA0.1-1.5mg/kg均可诱导不定根的产生,生根63.3%-93.3%。 糖浓度的影响 不同类型的月季，其组培需求的碳源和糖浓度有所不同。月季组培最常用的碳源是蔗糖，在丰花月季的组织培养中，初代培养的蔗糖含量为5%，继代培养的蔗糖含量为3%时培养效果
一、选题依据 1、论文题目及研究领域 （1）论文题目：月季茎段组织培养技术研究 （2）研究领域：组织培养在月季繁殖上的应用 2、论文研究的理论意义和应用价值 月季在我国应用非常广泛，因此繁殖方法也非常多，但是常规繁殖技术很难对其品种进行更新。虽然自l875年人工杂交技术产生后，经过长期的杂交和选择，获得了许多理想品种，但月季育种目前存在着以下几个问题：（1)传统杂交方法具有局限性。表现在基因资源有限，染色体数目及倍性差异使远缘杂交难以成功；生长一致性、开花同时性等多基因控制性状难以改良等。此外月季作为多年生灌木，育种所需时间较长。（2）只注重对外观性状的改良，而忽视了对内在性状的改良。在过去的育种史中，育种家们只注意芽形、花形、花径、瓣数和茎长等外观性状的改良，并且选择的标准也趋于一致，造成资源流失，而内在性状，如生活力、瓶插寿命以及对病虫害的抵抗能力等未得到相应的提高。（3)遗传背景相对狭窄。据统计蔷薇属的100多个物种中只有8个种对现代月季做出过突出贡献，因此这种近亲杂交现象严重影响月季的生活力[1]。 90年代发展起来的以组织培养为基础的转基因技术无疑为月季育种提供了一条新途径。这种方法不但使品种在外源基因所控制的性状上发生改变，其性状保持相对稳定，还可利用来自其他生物类型的基因，创造更优良的品种。目前，月季的组织培养已有了较深入的研究，基因的分离、克隆以及载体构建等技术在重要的农作物及模式植物上已积累了较多的经验，皆可应用于月季的基因工程育种中[2]。运用这项技术不断培育出新品种以满足人们对月季求新求异的需求。 3、目前研究的概况和发展趋势 月季传统的栽培方法是用嫁接和扦插法进行繁殖，但繁殖速度较慢。自20世纪60年代组培技术在生产中应用以来，许多研究者在月季的组培方面做了大量的研究工作，在月季组培苗的利用方面也取得了很大的进展，对加速新品种的推广和运用起到了积极作用。我国的研究者从20世纪80年代以后便开始进行切花月季组培种苗的生产，在组培的各大领域取得了很好的成绩。 目前，植物组织培养已经向基因的分离、克隆以及载体构建方向发展。在当前再生体系不够完善仍然是制约月季转基因的主要因素，直接再生不定芽途径虽然再生高，需时短，适应范围广，但转化困难；胚性愈伤组织或次级体细胞胚易于转化，但体细胞胚再生体系的建立相对困难，需要在诱导出初级体细胞胚后经过长时间的继代和选择，目前具备该再生体系的品种还非常有限。植株再生是进行遗传转化的必要前提，只有具备了成熟的再生体系才能有效的进行基因转化。现在组织培养技术在很大程度上仍是已经验为基础的，广泛开展月季组培的研究仍是解决问题的最佳途径，在我国尤其如此。随着经验的累积，月季再生体系将不断完善，为转基因提供前提条件。此外，人们对环保的日益重视，对新奇花朵的需求日益增加，以组织培养为基础的技术必将在月季育种中发挥重要作用[3]。 二、论文研究的内容
月季的植物组织培养开题报告 一、实验目的意义 通过月季的植物组织培养实验，对植物组织培养技术进行初步了解，认识植物组织培养的重要性和发展潜能，并了解月季的特征及生长习性，锻炼自己独立做实验、独立思考的能力。 二、实验材料和方法 1.实验材料：月季（取材自天津师范大学主校区明理楼旁边） 2.实验步骤 ①称取6.5g～12g琼脂，先用蒸馏水置1000ml搪瓷杯浸泡2小时后充分洗去杂质。弃去浸 液用无离子水再洗1～2次，并加入500ml无离子水在电炉上溶化。边搅拌边溶化，直至完全溶化备用。 ②另取蔗糖30g于上述溶液中搅拌完全溶解备用。 ③另按MS培养基用量量取无机大量微量元素及有机成分的母液于一烧杯中，并完全倒入 ②液中搅拌溶解混匀备用。 ④按目的要求用取样器加入各种激素并搅拌混匀，加稀碱或稀释酸调pH值应比目的要求 的pH值稍高0.1～0.2。定溶1000ml。 ⑤趁热大于60℃分装于培养瓶中，应边搅拌边分装液体，根据要求的量分装。一般液体的 厚度掌握在1cm左右为宜。分装时不得将液体粘落至瓶口上。 ⑥将培养瓶封口塞棉塞、包牛皮纸系线绳。 ⑦另取Ф5cm的滤纸若干，置Ф9cm的培养皿中并用牛皮纸包好准备灭菌。 ⑧另取无离子水若干不得超过瓶内总体积的70%，加棉塞包牛皮纸，灭菌制备无菌水。另 取清毒瓶包好备用。 ⑵灭菌 ①检查有无漏电漏水现象，加无离子水的3升，将要灭菌的物品平稳地放置高压锅套桶 内。 ②盖上锅盖水平拧好螺栓，打开放气阀，接通电源加热，待放气阀处水汽充分溢出时盖 上放气阀，待压力升至0.05Mpa时打开放气阀放气至压力回到零位时盖上放气阀升压。 ③待压力达0.12～0.15Mpa时，开始计时，使调压器自220V回调170～180V左右维持 30分钟断电。 ④待压力回降至零位时，打开锅盖错开一缝隙使热蒸汽迅速溢出烘干包纸和瓶塞。 ⑤趁热取出被灭菌之物，将培养瓶置平稳处使培养瓶中的培养基凝固。23小时后查有无 细菌，48小时后查有无霉菌，如有杂菌应及时处理，无杂菌备用。 ⑶接种 ①取材：将采集的月季茎段冲洗干净，分装到烧杯中，放入超净工作台；先用70%酒精浸 没并轻摇15s进行欲消毒；倒出酒精，加入0.1%二氯化汞浸没；倒净二氯化汞。用无菌水冲洗3次，将废液倒弃备用。 ②解下培养瓶上包头纸的线绳，并将培养瓶整齐地排列在接种台的左侧，然后用70%的酒 精棉球从内向外擦接种台面。 ③在酒精灯下用用镊子在消毒瓶内取出材料置于培养皿内的无菌滤纸上吸干水分，右手持 镊子左手拿灭过菌的解剖刀迅速地将茎段切成剪成每段2～3cm至少有1个侧芽，用镊子将外植体迅速地在酒精上接入培养瓶内。 ④在酒精灯火焰上转动瓶口和棉塞进行灼热灭菌，迅速塞好棉塞、包好包头纸，系好线绳，
月季组织培养方案 1供试材料来源:本实验材料取自盆栽的丰花月季,剪取腋芽尚未萌发的枝条,去除茎段两端各2毫米，选芽以茎段中芽为最好。 2技术路线: 外植体选取——初代培养——增值培养——生根培养——训化 3方法步骤: （1）外植体的剪取和消毒程序的筛选: 取无菌苗叶片切成0.5cm×0.5cm的小块，叶柄，茎段切成小段。外植体很小时，有利于培养脱毒的植株(对月季的杉树坏疽环斑病毒可通过茎尖培养的方式达到脱毒的目的，如果单纯为了快速繁殖，可用大的茎尖或茎段进行离体培养，这时外植体的大小决定了茎尖的成活比例。一般说外植体愈大，成活率愈高，成苗时间愈短。外植体的大小同时影响外植体自身的发育和月季组培苗茎的增殖，外植体的长度在9.0-10.0mm，直径在3.0-3.5mm范围时(茎的增殖和发育是最好的）.消毒:接种材料为当年抽生侧芽饱满的幼嫩茎段，自来水冲洗10-20min;75%或70%乙醇表面消毒15s。用无菌水冲洗3次。2%NaClO灭菌5—10min。然后用无菌水冲洗3次。 （2）初代培养基的筛选:诱导培养基以MS为基本培养基，附加适量的细胞分裂素6一苄氨基嘌呤(6-BA)和生长素萘乙酸(NAA)。NAA增加至0.1mg,L时，6一BA浓度的高与低已对增殖系数不产生明显影响。最适的侧芽诱导培养基为MS + 6一B A 0.5,3.0 mg,L + NAA 0.0l,1(0mg,L，且培养基中添加蔗糖有增加丛生芽数量的作用。 （3）增殖培养基的筛选:诱导培养基上已经萌发的嫩芽转入附加6一BA、NAA等激素的MS培养基中，进行增殖继代。KT，IAA等激素作用效果较差，协同作用不明显。低浓度的6 一BA有利于不定芽的增殖，浓度过高则抑制不定芽增殖，适量NAA有利于芽和叶生长，但浓度过高诱导产生大量愈伤组织，不利于侧芽的直接分化和生长。在NAA浓度相同BA 浓度不同的培养基中，随BA浓度的升高，芽苗的增殖系数也相应提高。在BA浓度相同而NAA浓度不同的培养基中，随NAA浓度升高，小芽生长速度加快 (4).生根培养基的筛选:无菌芽苗在继代培养基中只诱导地上部分生长。待培养一段时间后，转入生根培养基中，诱导生根。采用1,4 MS培养基，不加生长素即可以促进生根。在无菌苗的生根诱导过程中，生长素的种类和浓度起决定性作用。分浓度NAA、IBA、IAA 对藤本月季进行生根培养，发现3种生长素的生根效果不同，且浓度的影响较大。发现低浓度的生长素有利于根的形成，适当浓度的IBA、NAA 对生根率有显著影响，浓度过高会抑制根的形成，NAA浓度为0.50mg,L时效果最佳。生根阶段加人活性炭(AC)后，有助于提高生根率和生根质量。 (5).试管苗移栽实验 小苗接到生根培养基上后，14d可见基部分化出根点，20d则长出许多白根。此时组培阶段结束，进入试管苗移栽成活阶段。所有试管苗移栽前都应先将生根苗移至室温进行移栽前的锻炼。锻炼时问与移栽成活率有关，练苗7d以上，成活率达到95,。影响移栽成活率的主要因素有3个:湿度、温度以及基质种类和带菌量。考虑到这3个因素，移栽时应保持90,以上湿度，18,25?的环境温度，基质用0.2 ,的高锰酸钾或其他灭菌剂进行消毒灭菌。而基质的选择上，以蛭石和珍珠岩的栽培效果较好。移栽成活后喷极稀的营养液，使小苗得到营养补充。l0,15d即长出新叶，且根系快速生长，可适时进行大田移栽。
目录 摘要〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃4 前言〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃4 综述〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃5 1．外植体〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃5 1.1取材部位 1.2取材时间 1.3取材大小 2. 消毒〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃8 3. 接种方式〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃8 4.培养基〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃9 4.1基本培养基 4.2激素 4.2.1不同激素对诱导愈伤组织的影响 4.2.2不同激素对继代培养的影响 4.2.3不同激素对生根培养的影响 4.3糖浓度的影响 4.4无机盐 4.5琼脂 5.培养基的配臵〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃13 6.培养条件〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃14 7．防褐化〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃14
技术路线与实验设计〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃15 参考文献〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃〃17
实验——月季的花药培养 1． 1个子房内共有4个胚珠，则完成受精作用需要的花粉粒个数、最终形成的种子数及果实数依次为…（） A．8、4、1 B.4、4、1 C．4、4、4 D.8、1、1 2．关于被子植物花粉的形成，说法正确的是（） A．花粉是花粉母细胞经有丝分裂形成的 B．花粉的发育要经历四分体期、单核期和双核期 C．花粉发育经历的四分体时期与减数第一次分裂的四分体时期含义相同 D．花粉母细胞形成花粉粒中精子的过程是一系列减数分裂的过程 3．菊花的组织培养和月季的花药培养都是利用组织培养技术，关于两者的叙述下列说法中正确的选项有() C．①②④ D．①②③④ 4．下列关于月季花药培养的叙述中，错误的是（） A．材料的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率 B．选择花蕾通常选择完全未开放的花蕾 C．选取材料时一定要进行消毒 D．培养形成的胚状体可继续在原培养基中分化形成植株 5．在花药培养过程中，需要对培育出来的植株作进一步的鉴定和筛选，目的是看其（）A．是否有染色体丢失 B．是否有基因突变 C．是否出现染色体倍性变化 D．是由哪种形式形成的 6．花药培养中材料消毒主要有以下几步，顺序正确的是（）
①将花蕾在酒精中浸泡约30 s ②放入氯化汞溶液中2～4 min ③无菌水清洗，然后用无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分④用无菌水冲洗3～5次 A．①②③④B．①③②④ C．③①④②D．②③①④ 7．下列关于月季花药培养的叙述中，错误的是() A．材料的选择与培养基的组成影响花药培养的成功率 B．选择花药时常用的方法是醋酸洋红法 C．选取材料时一定要进行消毒 D．培养形成的胚状体可继续在原培养基中分化形成植株 8．根据植物组织培养和生物有效成分的提取的知识回答下列问题： （1）菊花的组织培养常用的培养基是，原理是。 （2）月季的花药离体培养，从花粉粒的选择上看，应选择期的花粉粒为宜。 （3）从茶籽中提取茶油一般最好采用法，工业上提取胡萝卜素一般采用萃取法，鉴定该色素的方法是法。 9．根据生物技术实践的有关知识，回答下列问题： （1）欲从土壤中分离出能高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入制成选择培养基进行分离。若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是。 （2）微生物培养过程中，获得纯净培养物的关键是。 （3）在月季花粉发育的过程中，只有某一个时期对离体刺激敏感，一般来说，在期，花药培养成功率高。 （4）在香料工业提取的“液体黄金”玫瑰精油，要求不含任何添加剂和化学原料，其提取方法主要是；玫瑰精油的提取过程中向获得的乳化液中加入NaCl，增加盐浓度的目的是。（5）某兴趣小组将豆腐块灭菌，接种微生物后培养2天，加入适量食盐，经密封放置10 天后制的豆腐乳。在保质期内，豆腐乳放置时间越长，蛋白质含量越低，其原因是豆腐中蛋白质被微生物产生的分解。最终使含量增加，因此保质期内豆腐乳放置越久风味越佳。10．利用植物组织培养可培育无病毒植株和大量生产细胞产物，请回答以下相关问题。（1）诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低的主要影响因素是__________和培养基的组成。利用月季的花药离体培养产生单倍体时，一般来说，在期花药培养的成功率最高。为了选择该期的花药，通常选择的花蕾。确定花粉发育时期最常用的方法有法，但是对于花粉细胞核不易着色的植物，需采用法，该法能将花粉细胞核染成色。 （2）若要进行兰花无病毒植株的培育，从外植体到无病毒植株试管苗，要人为控制细胞的____________和过程。 （3）进行组织培养需配制MS培养基，在该培养基中常需要添加、等激素。欲利于根的分化，植物激素的用量比例应为。
月季植物组织培养 月季介绍 月季为常绿有刺灌木，或呈蔓状与攀援状。常绿或落叶灌木，直立，茎为棕色有一点绿，具有钩刺或无刺，但也有几乎无刺的。小枝绿色，叶为墨绿色，多数羽状复叶，宽卵形或卵状长圆形，长 2.5-6厘米，先端渐尖，具尖齿，叶缘有锯齿，两面无毛，光滑；托叶与叶柄合生，全缘或具腺齿，顶端分离为耳状。花朵常簇生，稀单生，花色甚多，色泽各异，径4-5厘米，多为重瓣也有单瓣者；萼片尾状长尖，边缘有羽状裂片；花柱分离，伸出萼筒口外，与雄蕊等长；每子房1胚珠。果卵球形或梨形，长1-2厘米，萼片脱落。花期4--10月。大多数是完全花，或者是两性花。有花中皇后的美称。现为天津市的市花，还是中国十大名花. 实验原理 植物的组织培养广义又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。狭义是指组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植 物。 实验材料及用具 实验材料：月季 实验试剂：MS母液70％酒精氯化汞0.1 mol/L NaOH与0.1 mol/L HCl IAA 2,4-D 实验器具：广口瓶棕色瓶锥形瓶剪刀镊子酒精灯紫外灯 实验步骤： 培养基的配制 1 称取6.5g～12g琼脂，先用蒸馏水置1000ml搪瓷杯浸泡2小时后充分洗去杂质。弃去浸液用无离子水再洗1～2次，并加入500ml无离子水在电炉上溶化。边搅拌边溶化，直至完全溶化备用。 2 另取蔗糖30g于上述溶液中搅拌完全溶解备用。
植物组织培养论文 —月季组织培养技术 植物组织培养论文 植物组织培养是一门专业性、操作性和实践性很强的技术类课程,近年来国内各农林院校的农学、园艺、林学和综合性院校、师范院校的生物和生物技术等本、专科专业都相继开设了植物组织培养课程。实验教学是《植物组织培养》课程教学的中心和关键环节。本文从五方面就河池学院近几年《植物组织培养》实验课程教学改革模式进行了探讨和总结。 随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。以月季为试材进行组培试验,综述了月季组织培养、快繁的研究技术及进展，并对月季组培的最优条件进行了总结。本研究探索出的月季组培快速繁殖技术，在试管苗单芽诱导丛生苗、利用代用品培养降低组培成本、试管苗管外扦插生根、试管苗微型化长途运输等方面，较前人有所改进。 月季为蔷薇科蔷薇属木本植物, 其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小;其花型大，美丽，幽雅，高贵。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求。 一.月季组织培养的研究进展 月季是世界栽培种类较多的多年生木本花卉之一。别名长春花、月月红、
斗雪红、瘦客等，蔷薇科蔷薇属植物，其花姿优美，花型丰富，花色齐备, 树型易修剪，栽培难度小。其花型大，美丽，幽雅，高贵。在鲜花应用中，月季花的地位和比重与日俱增,是世界上著名的四大切花之一[1]。月季的花色可编制成完美的连续色谱。月季是重要的花卉，世界的销售额多年来稳居各类花)卉的第一或第二。月季的一大优点是分布极广，适应性良好，栽培容易。月季是四季常青花卉，花期长，花色多，芳香馥郁，由于其特殊的情感内涵和商品价值[2]，被广泛应用于园林、庭院装饰，并可制成月季盆景，作切花、花篮、花束等。此外，月季花可提取香料，根、叶、花均可人药，具有活血消肿、消炎解毒等功效。当前，月季育种是花卉育种中最活跃的领域之一。月季通常采用扦插、嫁接和压条繁殖，但是一些名贵品种扦插不易生根，主要靠芽接繁殖，而芽接速度慢，因而造成优良品种的月季苗供不应求[3]。随着生物技术的迅猛发展，植物组织培养和细胞培养等现代生物技术得到普遍重视和应用，为月季的快繁和新品种的选育提供了新的途径，在月季的改良上显示了很大的应用潜力。同时，月季组培和遗传转化系统的建立也是体细胞克隆变异育种和基因工程育种的重要前期工作[4]。 月季原产我国，早在汉代就有历史记载。2 0 0年前，月季植入西方和各国的蔷薇结缘，繁育出成千上万新月季品种，现代月季( 分为茶香月季 HT、聚花月季 F、壮花月季 Gr|、攀缘月季 CI、微型月季 Mi n、以及中国月季 Ch等 9大系。 ) 也随之推广到除热带和寒带外的世界各地。目前世界各地广为栽培的月季，是以中国月季为主要亲本，经以长期杂交育种而选育成功的。月季在观赏植物中的地位是很高的，全世界各国人民都普遍喜爱月季，月季的销售额多年来稳居各类花木的前茅。月季的用途很广( 如用藤本月季布置长廊、拱门；树状月季装饰主干道等)。 国外月季花卉工厂化育苗开展较早，在某些国家和地区已成为获得巨额外汇的支柱产业。我们国家的组织培养技术与国外相比差距不大，但是产业化起步较晚。在加快科学技术转化为生产力的今天，植物组培技术广泛应用于月季花卉的繁殖育种．必将取得巨大的经济效益、社会效益和生态效益。月季生长繁殖速度较慢，应用组织培养技术可大大缩短它的增殖周期，快速繁殖优良品种。在短期内繁殖出数以万计的苗木，这些苗木的遗传特性和表型特性与母株完全相同，完全保持了母株的优良特性。月季花组培繁殖可以周年生产，不受季节限制，并且耐贮藏不易烂苗，可脱离培养基长途运输，实现了苗木运输“微型化”。二.月季组织培养技术 （一）.外殖体的选择、消毒及接种 外殖体一般选取生长健壮的当年生枝条的饱满而未萌发的侧芽。取回枝条用自来水冲洗干净，无菌条件下用7 0 ％酒精表面消毒3 0 ～ 4 0 S，再用0.1 ％H g C 1 溶液灭菌5 ～ 1 0min，最后用无菌水冲洗3 ～ 5 次。芽的快速繁殖与供试材料的基因型有关，同时还与外殖体的取材部位有关，来源于枝条中部的侧芽的繁殖速率最快[5]。李青等分别选取一年生枝条的冬芽和当年生枝条的腋芽作为外殖体，相同条件下培养发现越冬芽的成活率较高，且从接种到萌动时间较短，生长快，在后代繁殖中植株健壮。于冰沁在外殖体的接种中采用了垂直接种，斜向上4 5 度接种，水平接种和反转接种4种方式，发现垂直接种和斜向上 45 度接种是最佳的接种方式，腋芽再生芽数多，且生长健壮，这可能与植物的生长极性有关。
专题3 植物组织培养技术 课题2 月季花的组织培养 备课时间：主备人：武爱玲课型：新授课 上课时间：审核：生物组班级： 一、学习目的 1、说明植物组织培养的基本原理； 2、学习并进行植物组织培养的基本技术， 3、理解细胞分化的概念及离体植物细胞的脱分化和再分化。 二、重点和难点 1.教学重点：植物组织培养过程中使用的无菌技术 2.教学难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术 第一课时问题生成课 一、创设情景，导入课题。(2ˊ) 二、自主学习 ★基础知识： 1．被子植物的花粉发育 被子植物花粉的发育要经历、和等阶段。花粉是由花粉母细胞经过而形成的，因此花粉是。 2．产生花粉植物的两种途径 通过花药培养产生花粉植株的两种途径： 思考：（1）花药培养产生花粉植株的两种途径的差别主要取决于什么？ （2）什么是体细胞胚？ （3）单倍体性细胞产生的花粉胚，也可发育成为单倍体植株，这和植物的体细胞克隆有区别吗？ 3．影响花药培养的因素 诱导花粉植株能否成功及诱导成功率的高低，受多种因素影响，其中与 是主要的影响因素；也是提高诱导成功率的重要因素；另外亲本植株的生长条件、以及等对诱导成功率都有一定影响。 思考：（1）为什么选择合适的花粉发育期是诱导花药培养成功率的重要因素？ （2）为什么花药的培养要选择完全未开放的花蕾？ 4．实验操作 （1）材料的选取 选择花药时，一般要通过来确定其中的花粉是否处于适宜的发育期。确定花粉发育时期的方法有和。 （2）材料的消毒 材料消毒过程中用的0.1%的氯化汞溶液,实验完毕应如何处理? （3）接种和培养 剥离花药时，应注意哪些问题？花药培养过程中应注意哪些问题？ 【疑难点拨】 1．为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？ 花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药，给材料的消毒带来困难。 2．植物组织培养技术与花药培养技术有何区别？ 相同之处：培养基的配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。 不同之处：花药培养的选材非常重要，需事先摸索时期适宜的花蕾；花药裂开后释放出的愈伤组织或胚状体也要及时更换培养基；花北培养对培养基配方的要求更为严格。这些都使花药的培养难度加大。 三、评价预习，各组学科长评价，老师评价。 四、共性问题，除上述问题还有什么生成问题。 第二课时问题解决课 花药中的花粉花药中的花粉 丛芽 丛芽 移栽脱分化 脱分化 态度决定成败！