计数法测定细胞生长曲线
实验目的：
学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。
实验原理：
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。
仪器、材料和试剂：
1、仪器：CO2 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板
2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、盖玻片、酒精灯
3、试剂：1640、胰酶、Hanks
实验步骤：
1、点上酒精灯，用酒精棉擦拭双手和超净台台面(每组两个人同时做，点两盏酒精灯)，将装有1640、胰酶、Hanks的离心管放在两盏酒精灯之间，每管在火焰上稍微过一下．镊子过火后用镊子打开离心管盖，倒置于酒精灯一侧。
2、取细胞培养瓶，在倒置显微镜下观察细胞生长状态(梭形或是长条形连片生长，漂浮着的圆的发亮的细胞是死细胞)。
3、用酒精棉将瓶底擦干净，对着日光灯观察瓶底，能看到一层细胞(像蒙了一层灰)。
4、将培养瓶口在火焰上稍微过一下，用镊子打开瓶盖，放在酒精酒灯一侧，将瓶中的培养液迅速倒入废液缸。
5、取-支一次性吸管，从吸球的一头打开无菌包装，吸取5ml hanks至培养瓶中，将吸管放在hanks的离心管中(注意吸管不能接触培养瓶及其他物品)，手拿培养瓶使hanks平铺瓶底，瓶口朝向火焰左右摇晃培养瓶清洗细胞，将hanks迅速倒入废液缸。重复以上操作1次。
6、用前面的吸管吸取51nl胰酶加入培养瓶中，将吸管放在胰酶的离心管里，用镊子盖上培养瓶盖，拧紧后放于37。C培养箱中消化，2-3min后拿出，在倒置显微镜下观察80％细胞变成圆形既消化完成。
7、酒精灯前打开盖子，迅速将胰酶到入废液缸，另取一支吸管，吸取20ml l 640培养液至培养瓶中，用吸管吸瓶中培养液反复吹打瓶底至细胞层脱落(在灯光下观察瓶底透亮)。
8、计数
细胞计数取血球计数板和盖玻片，用酒精棉擦干净(酒精棉以湿但挤不出来酒精为佳)，可以稍微过火烘干，将盖玻片盖于血．球计数板上，摇匀细胞悬液，用50btl移液枪吸取悬液，小心的打到计数槽上(不能有气泡)，在显微镜下计数，显微镜下血．球计数板如下图所示，分别计左上、左一F、右上、右下各1 6个大格，遇压线细胞遵循数上不数下数左不数右的原则，以免重复计数。若所得细胞数总和／4=a，则该细胞悬液浓度为a*10^4个／ml
9、将上述细胞悬液稀释至l*10^5个细胞／ml，共30ml，用于铺24孔板。(注意要一边摇离心管一边加，以免细胞沉淀，导致每孔加的细胞数不一样；加的时候移液枪垂直打在孔的中间，每孔加完后立即水平摇晃孔板，使细胞分布均匀。)
10、取一组进行计数，剩下的放入培养箱后，每24小时一组进行一次计数。
结果与讨论：
1、细胞计数结果如下：
天数/日 1 2 3 4 5
细胞数
（万/ml） 2 8.5 28 22 8
2、绘制生长曲线如下：
人类胚胎肾细胞生长曲线
迟缓期对数期稳定期衰亡期
细
胞
个
数
/
10^5
天数/d
3、分析与讨论
1、由上图可以看出，实际所得生长曲线与理论生长曲线有一定差距，主要表现在潜伏期不明显，没有稳定期。这可能是由于计数误差造成的。
2、每管细胞没有重复计数2-3次。
3、由于操作不熟练，胰酶消化时间控制不当（过长或过短）也能导致细胞计数误差。
心得体会：
通过此次关于计数法测定细胞生长曲线的实验，了解了细胞生长的四个时期以及它们的特征。通过测定生长曲线，了解了培养细胞生物学特性的基本参数、测定细胞绝对生长数、判断细胞活力等。
通过此次实验，我组同学了解并熟练掌握了实验基本操作方法及过程。在实验操作过程中，我组同学均认真且严格按照规定操作进行试验，每位同学都认真参与到了试验过程中，并且相互提醒相互帮助，谨慎有序的完成了本次实验操作。
在实验中也有不足之处，例如用加样枪吸取液体的过程中，不够熟练，操作过程较慢，影响试验速度；操作过程中，由于经验不足，不能迅速的完成各个实验步骤；由于做的实验不够多，小组成员间的配合也不够默契，对实验的进度略有影响。
细胞生长曲线的绘制实验报告 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 利用血细胞计数板计数 涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法 细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的
掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料： 1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液 实验步骤： 1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl 细胞悬液进行培养。
微生物得计数——血球计数板法 【摘要】测定微生物细胞数量得方法很多，有分光光度法、显微直接计数法与平板计数法。分光光度法比较简便，易操作，但就是会使数据严重偏大。而平板计数法则会使实验数据严重偏小.?显微计数法适用于各种含单细胞菌体得纯培养悬浮液,如有杂菌或杂质，常不易分辨.菌体较大得酵母菌或霉菌孢子可采用血球计数板,一般细菌则采用彼得罗夫·霍泽(PetｒｏｆHausｓｅr)细菌计数板。两种计数板得原理与部件相同，只就是细菌计数板较薄,可以使用油镜观察。而血球计数板较厚,不能使用油镜，计数板下部得细菌不易瞧清.本实验采用血球计数板法，主要目得就是了解血球计数板法得构造与使用方法，学会用血球计数板对酵母菌细胞进行计数。 一、实验目得与要求 １、了解微生物计数常用得三种方法：分光光度法;平板计数法；血球计数板法。 2、了解血球计数板得构造与使用方法。 3、学会用血球计数板对酵母细胞进行计数。 二、基本原理 利用血球计数板在显微镜下直接计数，就是一种常用得微生物计数方法。此法得优点就是直观、快速.将经过适当稀释得菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间得计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室得容积就是一定得（０、1mｍ2），所以可以根据在显微镜下观察到得微生物数目来换算成单位体积内得微生物总数目。由于此法计得得就是活菌体与死菌体得总与，故又称为总菌计数法. 血球计数板,通常就是一块特制得载玻片，其上由四条槽构成三个平台。中间得平台又被一短横槽隔成两半，每一边得平台上各刻有一个方格网,每个方格网共分九个大方格,中间得大方格即为计数室，微生物得计数就在计数室中进行。 计数室得刻度一般有两种规格,一种就是一个大方格分成１６个中方格，而每个中方格又分成25个小方格;另一种就是一个大方格分成25个中方格，而每个中方格又分成16个小方格。但无论就是哪种规格得计数板,每一个大方格中
每代细胞的生长过程： ①游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。持续 10分钟一4小时 ②贴壁期：细胞附着于底物上，细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。 ③潜伏期：此时细胞有生长活动，而无细胞分裂。细胞株潜伏期一般为6～24小时。 ④对数生长期：细胞数随时间变化成倍增长，活力最佳，最适合进行实验研究。 ⑤停止期（平台期）：细胞长满瓶壁后，细胞虽有活力但不再分裂。机制：接触抑制、密度抑制 细胞是否处于对数生长期并不是以数量来定的，一般接种数量多，潜伏期相对会缩短一些，反之，潜伏期会稍长。并且不同细胞潜伏期是不一样的，故建议最好在实验以前做一下生 长曲线 细胞生长状况的观察 1.细胞计数 （1）［概述］ 细胞计数法是细胞培养研究中的一项基本技术，它是了解培养细胞生长状态。测定培 养基、血清、药物等物质生物学作用的重要手段。常用的细胞计数有血球计数板计数 法和电子细胞计数仪计数法。 （2）［用品］ a）血球计数板，巴氏吸管。 b）0. 25%胰蛋白酶溶液，无血清培养液。 c）显微镜。 （3）［步骤］ a）准备计数板：用无水酒精或95%酒精清洁计数板及专用盖玻片，然后用绸布轻轻 拭干。 b) 制备细胞悬液：用消化液分散单层培养细胞或直接收集悬浮培养细胞，制成单个细 胞悬液。本法要求细胞密度不低于104/ml，若细胞数很少，应将悬液离心(1000rpm， 5 min)，重悬浮于少量培养液中。 c) 加样：用吸管轻轻吹打细胞悬液，取少许细胞悬液，在计数板上盖玻片的一侧加微 量细胞悬液，加样时不要溢出盖玻片也不能溢入两侧的玻璃槽内，如果产生上述情况 需对计数板冲洗和拭干后重新加样，加样量也不要过少或带气泡。 d) 计数：在显微镜下，用10×物镜观察计数板四角大方格中的细胞数。细胞压中线时，只计左侧和上方者，不计右侧和下方者。 e) 计算：将计算结果代入下式，得出细胞密度。
实验内容：计数法测定细胞生长曲线 作者：王卫东实验日期：2001.10.24-2001.10.31 实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。 实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止 生长，进入平顶期，然后退化衰老。典型的生长曲线即可分为潜伏期、 指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相 （潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。通过 测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定 细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素 对细胞生长的影响。本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续 对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后 以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。 仪器、材料和试剂： 培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板 1、仪器：CO 2 2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精灯 3、试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶 实验步骤： 1、细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培 养基制成细胞悬液后计数。 2、接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实际 接种每瓶5.9×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶）。 3、计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。 4、绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。 结果与讨论： 1、细胞计数结果如下：
血细胞计数板计算方法 血细胞可以说是人类身体的一种微型结构，而且细胞计数吧，通常是用来计算血细胞数量的一种生物学工具。血细胞计数板计算公方法是怎样的呢？如果你对这个问题感兴趣，不妨跟小编一起来研究一下吧。 1．视待测菌悬液浓度，加无菌水适当稀释（斜面一般稀释100倍），以每小格的菌数可数为度。 2．取洁净的血球计数板一块，在计数区上盖上一块盖玻片。 3．将菌悬液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴（不宜过多），让菌悬液利用液体的表面张力充满计数区，勿使气泡产生，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌悬液。也可以将菌悬液直接滴加在计数区上（不要使计数区两边平台沾上菌悬液，以免加盖盖玻片后，造成计数区深度的升高），然后加盖盖玻片（勿使产生气泡）。 4．静置片刻，使细胞沉降到计数板上，不再随液体漂移。将血球计数板放置于显微镜的载物台上夹稳，先在低倍镜下找到计数区后，再转换高倍镜观察并计数。由于生活细胞的折光率和水的折光率相近，观察时应减弱光照的强度。 5．计数时若计数区是由16个中方格组成，按对角线方位，数左上、左下、右上、右下的4个中方格（即100小格）的菌数。如果是25个中方格组成的计数区，除数上述四个中方格外，还需数中央1个中方格的菌数（即80个小格）。 6．对于出芽的酵母菌，芽体达到母细胞大小一半时，即可作为两个菌体计算。每个样品重复计数2-3次（每次数值不应相差过大，否则应重新操作），按公式计算出每mL（g）菌悬液所含细胞数量。 7．测数完毕，取下盖玻片，用水将血球计数板冲洗干净，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免损坏网格刻度。洗净后自行晾干或用吹风机吹干，放入盒内保存。 通过上文的介绍，你对血细胞计数板的计算方法是否增加了了解呢？血细胞是存在于我们人体血液中的一种重要组成成分，对人类的健康来说具有举足轻重的影响。而医生通过测量你的血细胞分布状况和数量，对于判断身体的病灶具有重大的作用。因此我们都应该对血细胞的计算方法有所了解。
细胞增殖及细胞活力检测方法 目前主要有两种用于检测细胞增殖能力的方法。一种是直接的方法，通过直接测定进行分裂的细胞数来评价细胞的增殖能力。另一种是间接的方法，即细胞活力（cell viability）检测方法，通过检测样品中健康细胞的数目来评价细胞的增殖能力。显然，细胞活力检测法并不能最终证明检测样品中的细胞是否在增殖。如细胞在某一培养条件下会自发启动凋亡程序，但药物的干扰可抑制凋亡的发生；这时若采用细胞活力检测法，显然可以区分两种条件下的细胞数量，但我们并不能从药物干扰组细胞数大于对照组的事实说明药物可促进细胞增殖的结论。所以最直接的证据应该采用方法一。 用于检测细胞增殖能力最经典的方法是用氚标记的胸腺嘧啶核苷处理细胞，再检测DNA链中氚含量。若细胞具有增殖能力，DNA合成过程中将会采用氚标记的胸腺嘧啶核苷作为合成原料，因此检测细胞DNA链内标记核苷酸的量可判断细胞是否进行DNA 的合成。 但更为常用的方法是BrdU检测法。用BrdU预处理的细胞中，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。细胞经过固定和变性处理后，可用免疫学方法检测DNA中BrdU的含量（如采用鼠抗BrdU单克隆抗体特异识别BrdU,再采用辣根过氧化酶标记的山羊抗鼠IgG二抗标记，最后用比色法或荧光的方法进行定量测定），从而判断细胞的增殖能力。Calbiochem/EMD公司提供一种BrdU检测试剂盒，以微孔板的形式，合并所有清洗、固定、变性的步骤以单一试剂当中。比色检测在一抗二抗标记后在450nm下读数，
所有操作在3小时内结束。而且该试剂盒的灵敏度与市场上其他同类产品相比是最强的。1000个细胞以上水平的检测只需用BrdU预孵育2小时，100个细胞则采用过夜预孵育，即可检测细胞的增殖能力。 BrdU法的一个缺点是需要固定和变性等破坏DNA的处理。有些情况下，研究者可能希望在测定细胞增殖能力的同时检测细胞的总DNA含量，然而，在变性条件下，DNA 的双链结构将被破坏，DAPI和Hoechest 33342等核酸标记探针就不再能识别DNA，因而也无法估计DNA总量。Molecular Probes公司的Click-iT EdU检测试剂盒可以解决这个问题。这种方法不需要变性步骤，因为荧光探针标记的叠氮化物小分子，而不是庞大的抗体分子，可以很轻易的识别并结合未变性DNA双链中的EdU分子。采用BrdU方法时，你必须非常小心的去对DNA进行变性，才能一方面使BrdU抗体进入细胞，另一方面又保留足够的双链DNA分子来进行细胞周期的分析。有了EdU 后则不同，由于你不再需要变性，这一切都很简单了；另外，常常用于DNA变性的HCl，可能破细胞内坏蛋白的抗原识别位点，因而限制了BrdU检测法中同时检测其他蛋白的应用，但这种情况在EdU法中不存在。 图1：EdU及BrdU原理示意图（摘至invitrogen说明书） 在一些情况下，细胞活力的检测相当于细胞增殖能力的测定。用于细胞活力检测的方法又很多，这些方法主要采用特殊的试剂来测定细胞的代谢活力，Alamar Blue，MTT及其他四唑盐。它们通过检测细胞的氧化还原活性来检测细胞增殖能力，所以这是一种间接的方法。 Calbiochem的快速细胞增殖试剂盒，或者，严格来说，叫细胞活力试剂盒，采用一
M TT比色法测定细胞生长曲线 郝新保 张利朝 殷 缨 韩秀珍 陶秦渝 郝晓柯 张盈华(第四军医大学唐都医院中心实验室 西安710038) 关键词 细胞生长曲线 M T T比色法 中图号 Q28 在有关肿瘤细胞生物学的研究中,我们常常要测定细胞的生长状态,制作细胞生长曲线,以往的方法是取少量细胞在镜下或计数仪中计数,然后标注在坐标纸上,制作出细胞生长曲线.这种方法对同一样品要求计数几次取平均值,不但操作繁琐、费时,更主要的是误差较大,可达到20%～30%[1],包括取样误差、计数误差等.为了能简便、准确地测定细胞数,我们建立了基于M T T比色法的细胞生长曲线制作方法. 1 材料和方法 1.1 试剂 R P M I1640培养基为G I BCO公司产品,小牛血清为杭州四季青产品,M T T为SERV E产品,其它试剂均为国产. 1.2 仪器 HL22029P型酶标自动分析仪为国营二六二厂产品,P rofile ,E lite型流式细胞仪为美国COUL T ER 公司产品. 1.3 细胞培养 选用人乳腺癌细胞系SK2BR23.细胞培养在含10%小牛血清的R P M I1640培养基中,37℃,5% CO 2. 1.4 镜下计数测定细胞数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,用计数板按常规方法在倒置显微镜下计数,每个样品测三次,取平均值. 1.5 流式细胞仪计数 细胞消化后悬浮在一定量的培养基中,取0.2m l细胞过滤后用流式细胞仪自动计数. 1.6 M T T比色法计数 M T T比色法计数为间接计数,先要做出细胞的标准曲线,然后根据欲测样品的A值计算出相应的细胞数. 1.6.1 制作标准曲线 准备细胞悬液,从1×107细胞 200Λl 孔开始在96孔板中倍比稀释至1×102细胞 孔,每个稀释度三孔细胞,培养板置37℃培养4h后细胞贴壁,每孔中加入20Λg M T T继续培养4h,然后吸出150Λl培养液,加入等量DM SO,37℃20m in,570nm处测定吸光度[2],用二六二厂酶标自动分析仪程序绘出细胞标准浓度曲线. 1.6.2 制作生长曲线 调整细胞的浓度,按2×103 孔接种在96孔板中,置37℃培养,每天用M T T比色法测定3孔细胞的A值,在标准曲线上计算出相应的细胞数,即可绘出细胞的生长曲线. 郝新保,男,32岁,讲师,主治医师2 结果 2.1 细胞数与A值的标准曲线 根据各稀释度的A值制作细胞浓度的标准曲线, 如图1. 图1 SK2BR23细胞浓度的标准曲线 2.2 肿瘤细胞的M T T比色法生长曲线 根据每天测定的三孔细胞的A值在标准曲线上求得其对应的细胞数,7～10d 后即可绘制细胞生长曲线,如图2. 图2 SK2BR23细胞的生长曲线 2×;--0.2×;…20×. 2.3 细胞接种密度对生长曲线的影响 当细胞接种密度较低(2×102 孔)和较高(2×104 孔)时,对细胞生长曲线的形状有一定的影响,如图2. 2.4 M T T比色法与镜下计数法及流式细胞仪计数法的比较 为了比较M T T比色法和镜下计数法制作的细胞生长曲线,用流式细胞仪的计数结果作为参照,结果表明M T T 比色法与流式细胞仪计数结果更接近,明显优于镜下计数法的结果. 3 讨论 从结果可以看出,用M T T比色法制作细胞生长
细胞计数方法——-－-—细胞计数板法 实验原理:当待测细胞悬液中细胞均匀分布时,通过测定一定体积悬液中得细胞得数目,即可换算出每毫升细胞悬液中细胞得细胞数目。 具体操作: １. 将计数板及盖片擦拭干净,并将盖片盖在计数板。 ２、将细胞悬液吸出少许,滴加在盖片边缘,使悬液充满盖片与计数板之间,静置３miｎ,注意盖片下不要有气泡,也不能让悬液流入旁边槽中。 3。计算板四大格细胞总数,压线细胞只计左侧与上方得。然后按公式计算: 细胞数/ｍL=四大格细胞总数/4×1０个／ml (注:当细胞很多时,可在四个格中选一定数目较平均得小格,由于每大格中有１6 个小格,然后计左侧与上方得细胞数,求出每小格得细胞数,取平均值m,m×1６即每个格得平均值。所以,细胞密度=m×1６×10个／ml) 说明:公式中除以4,因为计数了４个大格得细胞数。 公式中乘以10因为计数板中每一个大格得体积为: １。0mm(长)×1.0mm(宽)×０。１mm(高)=0.1mm 而1ml=1０00ul＝１0０0ｍm (注意:镜下偶见有两个以上细胞组成得细胞团,应按单个细胞计算,若细胞团10% 以上,说明分散不好,需重新制备细胞悬液。) =========＝===============＝==＝=＝=＝＝===＝=＝＝====＝== 细胞计数板得使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板就是一块特制得厚型载玻片,载玻片上有四个槽构成三个平台。中间得平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各刻有一小方格网,每个方格网共分九个大格,中央得一大格作为计数用,称为计数区。计数区得刻度有两种:一种就是计数区分为１６个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成２5个小方格;另一种就是一个计数区分成２5个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成1６个小方格。但就是不管计数区就是哪一种构造,它们都有一个共同特点,即计数区都由400个小方格组成、
一细胞生长曲线： A、目的：学习细胞生长曲线的测定方法，观察细胞生长基本规律。 B、背景知识 细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。 原理（选填项目）： 细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。 C、材料 （一）仪器 1.净化工作台 2.离心机 3.恒温水浴箱 4.冰箱（4℃、-20℃） 5.倒置相差显微镜 6.培养箱（37℃、5%CO2、饱和湿度） （二）玻璃器皿 1.吸管（弯头） 2.培养瓶 3.玻璃瓶（250ml、100ml） 4.废液缸 （三）塑料器皿 1.吸头 2.枪头 3.24培养板 4.胶塞 （四）其他物品 1.微量加样枪
2.红血球计数 板（五）试剂 1.D-Hanks液 2.小牛血清 3.R PMI1640 4.双抗（青霉素、链霉素） 5.0.08%胰酶 （四）、操作步骤 1.取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液； 2. 计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。培养3～5d常要给未计数的细胞换液。 4.以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），描绘在半对数座标纸上，连接成曲 线后即成该细胞的生长曲线。 9 （五）、注意事项 1．细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，可有20～30%的误差，需结合其它指标进行分析。 2．现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定，较为简便。 3．标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，再经过几天 的潜伏适应期，然后进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后到达衰老。 4．在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。 二、四唑盐试验（ MTT）比色试验 （一）、目的 学习四唑盐比色试验，检测细胞存活和生长情况。
细胞计数方法------细胞计数板法 实验原理：当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞的数目，即可换算出每毫升细胞悬液中细胞的细胞数目。 具体操作： 1. 将计数板及盖片擦拭干净，并将盖片盖在计数板。 2. 将细胞悬液吸出少许，滴加在盖片边缘，使悬液充满盖片和计数板之间，静置3min，注意盖片下不要有气泡，也不能让悬液流入旁边槽中。 3. 计算板四大格细胞总数，压线细胞只计左侧和上方的。然后按公式计算： 细胞数/mL=四大格细胞总数/4×104个/ml (注：当细胞很多时，可在四个大格中选一定数目较平均的小格，由于每大格中有16个小格，然后对选定的小格计左侧和上方的细胞数，求出每小格的细胞数，取平均值m，m×16即每个大格的平均值。所以，细胞密度=m×16×104个/ml) 说明：公式中除以4，因为计数了4个大格的细胞数。 公式中乘以104因为计数板中每一个大格的体积为： 1.0mm（长）×1.0mm（宽）×0.1mm（高）=0.1mm3而1ml=1000ul=1000mm3 （注意：镜下偶见有两个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计算，若细胞团10%以上，说明分散不好，需重新制备细胞悬液。） ================================================ 细胞计数板的使用 一、血球计数板-基本构造 血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有四个槽构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各刻有一小方格网，每个方格网共分九个大格，中央的一大格作为计数用，称为计数区。计数区的刻度有两种：一种是计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格；另一种是一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。但是不管计数区是哪一种构造，它们都有一个共同特点，即计数区都由400个小方格组成。
、目的与要求了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。 二、原理 用血球计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻 片，其上由四条槽构 成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方格网，每个方格网共分为9个大方格，中间的大方格即为计数室。计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大方格分成16个中方格，每个中方格又分成25个小格（即16x25），另一种是一个大方格分成25个中方格，每个中方格又分为16个小方格（即25X 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的小方格都是400个，每一个大方格边长为 1 mm则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片 与载玻片之间的高度为0.1mm,所以计数室的容积为0.1 mm3 实磴圈-石血球计弦板杓构jfi 三、血球计数板的使用方法 （一）菌悬液的制备为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含5?10个酵母为 宜，可采用10倍系列稀释法。 （二）加菌悬液样品将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻 片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置5-10分钟。 （三）显微镜计数在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。当芽抱菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。 （四）计数时若使用刻度为25X 16 （大格）的计数板，则数四角的4个大格（即100小格）内的菌数。如用刻 细胞数的测定 D申決甌裕牧我
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细胞生长曲线的绘制实验报告范文 前言语料：温馨提醒，报告一般是指适用于下级向上级机关汇报工作，反映情况，答复上级机关的询问。按性质的不同，报告可划分为：综合报告和专题报告；按行文的直接目的不同，可将报告划分为：呈报性报告和呈转性报告。体会指的是接触一件事、一篇文章、或者其他什么东西之后，对你接触的事物产生的一些内心的想法和自己的理解 本文内容如下：【下载该文档后使用Word打开】 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 （一）微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 （1）利用血细胞计数板计数 （2）涂片计数 2、活菌菌落计数法 3、滤膜法
（二）细菌生长曲线 将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growthcurve） 篇二：细胞生长曲线的测定 细胞生长曲线的测定 一、实验目的 掌握测定细胞生长曲线的方法。 二、实验器具 24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。 三、实验方法 1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。 2.计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。 3.绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。 篇三：MTT法绘制生长曲线 实验材料：
血球计数板的构造和使用 血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的.玻片中有四条下凹的槽,构成三个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽隔为两半,每半边上面,刻有一个方格网.方格网上刻有9个大方格,其中只有中间的一个大方格为计数室,供微生物计数用.这一大方格的长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3. 计数室通常有两种规格.一种是大方格内分为16中格,每一中格又分为25小格;另一种是大方格内分为25中格,每一中格又分为16小格.但是不管计数室是哪一种构造;它们都有一个共同的特点,即每一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组成,见图.
血球计数板的使用 以计数酵母菌为例 (1)用血球计数板计数酵母菌悬液的酵母菌个数. (2)样品稀释的目的是便于酵母菌悬液的计数,以每小方格内含有4-5个酵母细胞为宜,一般稀释10倍即可. (3)将血球计数板用擦镜纸擦净,在中央计数室上加盖专用的厚玻片. (4)将稀释后的酵母菌悬液,用吸管吸取一滴置于盖玻片的边缘,使菌液缓缓渗入,多余的菌液用吸水纸吸取,捎待片刻,使酵母菌全部沉降到血球计数室内. (5)计数时,如果使用16格×25格规格的计数室,要按对角线位,取左上,右上,左下,右下4个中格(即100个小格)的酵母菌数.如果规格为25格×16格的计数板,除了取其4个对角方位外,还需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数.
(6)当遇到位于大格线上的酵母菌,一般只计数大方格的上方和右方线上的酵母细胞(或只计数下方和左方线上的酵母细胞). (7)对每个样品计数三次,取其平均值,按下列公式计算每1ml菌液中所含的酵母菌个数. 3.计算公式 (1)16格×25格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=100小格内酵母细胞个数/100×400×104×稀释倍数(2)25格x16格的血球计数板计算公式: 酵母细胞数/ml=80小格内酵母细胞个数/80×400×104×稀释倍数4.血球计数板的清洁 血球汁数板使用后,用自来水冲洗,切勿用硬物洗刷,洗后自行晾干或用吹风机吹干,或用95%的乙醇,无水乙醇,丙酮等有机溶剂脱水使其干燥.通过镜检观察每小格内是否残留菌体或其他沉淀物.若不干净,则必须重复清洗直到干净为止.
MTT实验 实验材料： 1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS, 2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT 工作液（1ml/管） 实验步骤： 1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养（每孔1x104 细胞）。 2，培养16-48后，每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液（5mg/ml）20μl，37℃继续孵育。 3，孵育4h后终止培养，吸出孔内上清，此时应该倾斜96孔板，用枪头小心的将上清液吸去，不可吸去下面的结晶颗粒，慢慢吸去。每孔加入150μlDMSO,室温振 荡10min，使结晶充分溶解，于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1 孔。
注意事项： 【1】1, 两种方法分离小型猪骨髓间充质干细胞的比较 分别取两组0,1,3代细胞，制成1x103的细胞悬液，接种到96孔板，每孔细胞悬液200微升，置37℃、5%CO2饱和湿度孵箱内孵育，各组每24小时分别取出4孔，每孔加入MTT（2mg/ml）20微升37℃孵育，4h后吸弃孔内培养液，每孔加入150微升分析纯的二甲基亚砜，移至酶联免疫检测仪上振荡10min,用分光光度计在492nm波长处测定每孔的吸光度值（OD492），以OD(492)值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线 【2】来自：SD大鼠骨髓间充质干细胞体外分离培养的实验研究 大鼠MSCs生长曲线测定：为了定量测定大鼠BMSCs的生长状况，对来源于同一动物的原代细胞进行连续培养。分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。接种到96孔板，每孔接种200μl细胞悬液进行培养（每孔1x104细胞）。次日起每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液（5mg/ml）20μl，37℃继续孵育4h后终止培养，吸出孔内上清，每孔加入150μlDMSO,室温振荡10min，使结晶充分溶解，于试验孔平行设不加细胞只加培养液的空白对照1孔。在酶标仪上选择570nm波长，以空白孔调零，测定各孔吸光度（A）值，连续测7天，以时间为横轴，A值为纵轴绘制细胞生长曲线。
MTT法绘制生长曲线 一细胞生长曲线： A、目的：学习细胞生长曲线的测定方法，观察细胞生长基本规律。 B、背景知识 细胞生长曲线是观察细胞生长基本规律的重要方法。只有具备自身稳定生长特性的细胞才适合在观察细胞生长变化的实验中应用。因而在细胞系细胞和非建系细胞生长特性观察中，生长曲线的测定是最为基本的指标。 原理（选填项目）： 细胞生长曲线的测定一般可利用细胞计数法进行。 C、材料 （一）仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱（4℃、-20℃） 5. 倒置相差显微镜 6. 培养箱（37℃、5%CO2、饱和湿度） （二）玻璃器皿 1. 吸管（弯头） 2. 培养瓶 3. 玻璃瓶（250ml、100ml） 4. 废液缸 （三）塑料器皿 1. 吸头 2. 枪头 3. 24培养板 4. 胶塞 （四）其他物品 1. 微量加样枪 2. 红血球计数板 （五）试剂 1. D-Hanks液 2. 小牛血清 3. RPMI1640 4. 双抗（青霉素、链霉素） 5. 0.08%胰酶 （四）、操作步骤 1. 取生长状态良好的细胞，采用一般传代方法进行消化，制成细胞悬液； 2. 计数，精确地将细胞分别接种于21～30个大小一致的培养瓶内或培养孔（以24孔培养板为宜），每瓶或孔细胞总数要求一致，加入培养液的量也要一致。 3. 每天或每隔一天取出3瓶（孔）细胞进行计数，计算均值。培养3～5d常要给未计数的细胞换液。
4. 以培养时间为横轴，细胞数为纵轴（对数），描绘在半对数座标纸上，连接成曲线后即成该细胞的生长曲线。 9 （五）、注意事项 1．细胞生长曲线虽然最为常用，但有时其反映数值不够精确，可有20～30%的误差，需结合其它指标进行分析。 2．现在很多实验室利用培养板采用MTT法进行生长曲线测定，较为简便。3．标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，再经过几天的潜伏适应期，然后进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后到达衰老。 4．在生长曲线上细胞数量增加1倍时间称为细胞倍增时间，可以从曲线上换算出。 二、四唑盐试验（MTT）比色试验 （一）、目的 学习四唑盐比色试验，检测细胞存活和生长情况。 （二）、原理和背景。 四唑盐是一种能接受氢原子的染料，简称MTT。活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶性的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。 （三）、材料 A、仪器 1. 净化工作台 2. 离心机 3. 恒温水浴箱 4. 冰箱（4℃） 5. 倒置相差显微镜 6. CO2培养箱 7. 振荡混合仪 8. 酶联免疫检测仪 9. 移液枪 10. 电磁力搅拌机 11. 微孔滤器 B、玻璃器皿 1. 吸管 2. 小烧杯（100ml） 3. 废液缸 C、塑料器皿 1. 吸头 2. 枪头 3. 96孔培养板 4. 15ml离心管 5. 50ml离心管
全自动细胞计数和活力分析系统： 中标产品必须逐条响应以下技术参数： 1.细胞直径范围：2μm -70μm 2.细胞浓度：5x104-1x107个/毫升 3.细胞存活率：0-100% 4.操作系统：Windows XP 5.具有自动取样装置 6.样品量：≤0.5 ml 7.有精确进样系统 8.分析时间周期（包括自动进样，作样，清洗全过程）：≤2.5 分钟 9.自动聚焦FIREWIRE CCD：≥1394 X 1040 10.可实时采集细胞图像 11.图形具有缩放功能 12.样品抽取及台盼蓝染料混合可变量 13.浓度高低可自动报警，废液过多可自动报警 14.符合21CFR PART 11 准则 15.有生物处理3D，旋转绘图 16.可将多重结果输出至EXCEL 文件 17.用户可自行定义非存活细胞分团选项 18.有提高圆度检测功能，可分离细胞碎片 19.可提供的数据：细胞存活率；总细胞数；存活细胞数；总细胞浓度；存活细胞 浓度；细胞的直径及分布；细胞的平均直径；细胞圆度及分布；细胞平均圆度； 细胞的生长速度；细胞倍增时间；细胞生长曲线
连续波长微孔板分光光度计 中标产品必须逐条响应以下参数： 常规参数 孔板类型：6-,12-,24,48,96和384-孔标准微孔板，大小128mm×86mm，最高0.8英寸。 可选配件：Take3TM微孔板适配器，可进行微量检测、BioCell TM、标准比色杯检测 软件：Gen5软件控制，兼容各种版本，包括中文软件 检测模式：终点法，动力学法，波长扫描发和孔域扫描法 检测性能 波长范围：200-999nm，可选1nm步进 波长准确性：＋/-2nm 波长重复性：＋/-0.2nm 吸收光检测范围：0-4 OD 吸收光分辨率：0.0001 带宽：5nm OD准确性：0-2 OD：+/-1% +/-0.010 OD 2-2.5OD：+/-3% +/-0.010 OD 重复性：0-2 OD：+/-1% +/-0.005 OD 0-2 OD：+/-3% +/-0.005 OD 线性：0-2 OD：+/-1% +/-0.010 OD 2-2.5 OD: +/-3% +/-0.010 OD 读板速度：96孔≤50秒（标准）；≤40秒（快速）；≤15秒（扫描） 384孔≤170秒（标准）；≤135秒（快速）；≤35秒（扫描） 物理参数 连接：USB串口连接电脑控制 化学兼容性：所有暴露表面均耐受0.5%次氯酸钠、70%乙醇或异丙醇进行消毒
内部编号：AN-QP-HT616 版本/ 修改状态：01 / 00 In Order T o Standardize The Management, Let All Personnel Enhance The Executive Power, Avoid Self- Development And Collective Work Planning Violation, According To The Fixed Mode To Form Daily Report To Hand In, Finally Realize The Effect Of Timely Update Progress, Quickly Grasp The Required Situation. 编辑：__________________ 审核：__________________ 单位：__________________ 细胞生长曲线的绘制实验报告通用范 本
细胞生长曲线的绘制实验报告通用范本 使用指引：本报告文件可用于为规范管理，让所有人员增强自身的执行力，避免自身发展与集体的工作规划相违背，按固定模式形成日常报告进行上交最终实现及时更新进度，快速掌握所需了解情况的效果。资料下载后可以进行自定义修改，可按照所需进行删减和使用。 篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制 一、实验目的 学习了解微生物生长量测定的方法 学习了解细菌生长曲线的绘制方法 学习掌握血细胞计数板的使用方法 （一）微生物生长量的测定 计数法重量法生理指标法 1、显微镜直接计数法 （1）利用血细胞计数板计数 （2）涂片计数 2、活菌菌落计数法
血细胞计数板的构造和使用方法简介 【摘要】人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。本文简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。 【关键词】血细胞计数板的构造计数方法使用方法 人民教育出版社高中生物教材必修3《稳态与环境》中“探究培养液中酵母菌种群数量的变化”实验用到血细胞计数板（血球计数板），教材中没有介绍其构造和用法，学生对此感到很生疏。下面简要介绍血细胞计数板的构造和使用方法。 1.血细胞计数板的构造 血细胞计数板(血球计数板)是显微镜上的外挂物件，可用来测量细胞、细菌等一些微小物体的长度，测量单位体积细胞的数量等。血细胞计数板是由一块比普通玻片大而厚的特制玻璃片制成的，它的两边有两个凸起部分，中间有四条槽沟构成三个平台，中央的平台较宽，而且被一短槽隔成两半，每个半边上各刻有一个方格网，每个方格网共有九大格，中央的大格就是计数室、中央的平台比两边稍低，加盖盖玻片后，中央平台要比两边平台低0.1mm,也就是盖上盖玻片后计数室深度为0.1mm.。（见图A、B、C、D） 1.1 计数室的规格有两种，一种是由25中格组成，每个中格又分为16个小格（共25×16＝400小格）（见图E）；另一种是由16中格组成，每个中格又分成25个小格（共16×25＝400小格）(见图F)。可见，尽管计数室有两种规格，但是，不管计数室是哪一种构造，它们都有一个共同的特点，即每一大方格都是16×25=25×16=400个小方格组成。 1.2 计数室的大小有两种，一种是边长为1mm,则计数室面积为1mm2,每个小格面积为〖SX(〗1〖〗400〖SX)〗mm 2 ，盖上盖玻片后，计数室的高度为0.1mm。所以，一个计数室的体积为0.1mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗4000〖SX)〗mm 3 ；另一种是边长为2mm，则计数室的面积为4mm2，每个小格面积为〖SX(〗1〖〗100〖SX)〗mm2，盖上盖玻片后计数室的高度为0.1mm，所以，一个计数室的体积为0.4mm3，每个小方格的体积为〖SX(〗1〖〗1000〖SX)〗mm3。 〖XC12.TIF；%50%50〗 2.计数方法 2.1 25×16计数室：显微镜下数左上、右上、左下、右下和中央共五个中格，即5×16＝80个小方格的细菌数，若这80个小方格细菌数为A(对每个样品计数三次,取其平均值)。①若计数室的边长为1mm,则每毫升菌液的含菌量计算公式为〖SX(〗A〖〗80〖SX)〗×400×10×1000=50000A（若菌液被稀释，还要乘以
生长曲线的制作 将少量单细胞的纯培养，接种到一恒定容积的新鲜液体培养基中，在适宜条件下培养，每隔一定时间取样，测菌细胞数目。以培养时间为横坐标，以细菌增长数目的对数为纵坐标，绘制所得的曲线。 ①.延滞期（lag phase） 其它名称：停滞期、调整期、适应期 指少量微生物接种到新培养液中后,在开始培养的一段时间内细胞数目不增加的时期. 1.现象：活菌数没增加，曲线平行于横轴。 2.特点： 生长速率常数= 0 细胞形态变大或增长 细胞内RNA特别是rRNA含量增高，原生质嗜碱性增强 合成代谢活跃（核糖体、酶类、ATP合成加快），易产生诱导酶 对外界不良条件敏感，（如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物） 3.原因：适应新的环境条件，合成新的酶，积累必要的中间产物 ★影响延迟期长短的因素： ◆菌种：繁殖速度较快的菌种的延迟期一般较短； ◆接种物菌龄：用对数生长期的菌种接种时，其延迟期较短，甚至检查不到延迟期； ◆接种量：一般来说，接种量增大可缩短甚至消除延迟期（发酵工业上一般采用1/10的接种量）； ◆培养基成分：◇在营养成分丰富的天然培养基上生长的延滞期比在合成培养基上生长时短；◇接种后培养基成分有较大变化时，会使延滞期加长，所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基接近。 认识延迟期的特点及形成原因对实践的指导意义： ◆在发酵工业上需设法尽量缩短延迟期； 采取的缩短lag phase 的措施有： ①增加接种量；（群体优势----适应性增强） ②采用对数生长期的健壮菌种； ③调整培养基的成分，在种子基中加入发酵培养基的某些成分。 ④选用繁殖快的菌种 ◆在食品工业上，尽量在此期进行消毒或灭菌 ②.对数期（logarithmic phase） 又称指数期,指紧接着延滞期的细胞数以几何级数增加的时期. 现象：细胞数目以几何级数增加，其对数与时间呈直线关系。 特点： 生长速率常数最大，即代时最短 细胞进行平衡生长，菌体大小、形态、生理特征等比较一致 代谢最旺盛 细胞对理化因素较敏感 影响因素： 菌种 营养成分 营养物浓度﹡ 培养温度