微生物实验
微生物实验
细菌形态观察
细菌分布
消毒灭菌
细菌形态观察
一、实验目的
1.掌握光学显微镜（油镜）的使用及日常维护
2.掌握细菌的三种形态
3.掌握临床常见细菌的形态及染色
4.掌握细菌的特殊结构
5.了解支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体及真菌的结构特点
二、实验原理
1.普通光学显微镜（油镜）的使用
1.在标本欲检部位滴一滴香柏油，然后转换油镜头
2.从侧面观察并慢慢转动粗调节器，使油镜头浸没在油滴内，当油镜头几乎接触玻片时
停止转动，以免碰撞玻片，用双眼观察目镜，同时调节细调节器，直至细菌清晰
3.根据需要调节显微镜亮度
2.普通光学显微镜的维护
1.移动显微镜时，用右手持镜壁，左手托镜座，平端于胸前
2.油镜用毕后，要立即用擦镜纸擦去香柏油；再用滴有二甲苯的擦镜纸擦油镜头；最后，用
干净擦镜纸将镜头上的二甲苯擦去，以免损伤油镜头
3.镜头擦净后，降低接物镜并将其转成八字形，罩好镜罩放入柜内
4.做好使用记录
3．微生物知识
1．细菌按形态分类：
球菌：球形（包括双球菌、四联球菌、八叠球菌、葡萄球菌、链球菌等）
杆菌：杆状（包括单杆菌、双杆菌、链杆菌、分枝杆菌、双歧杆菌等）
螺旋菌：螺旋状（包括螺旋菌、弧菌等）
2．细菌的基本结构
细胞壁、细胞膜、细胞质、核质、核蛋白体
3．细菌的特殊结构
荚膜：如肺炎双球菌
鞭毛：又分单毛菌、双毛菌、丛毛菌、周毛菌。如：变形杆菌为周毛菌
菌毛
芽胞：如破伤风梭菌、炭疽芽胞杆菌、肉毒梭菌
4．微生物是一切肉眼看不见或看不清的微小生物的总称，包括原核类、真核类和非细胞类。
原核类：细菌、放线菌、蓝藻、衣原体、支原体、立克次氏体
真核类：真菌、原生动物、显微藻类
非细胞类：病毒、亚病毒
5．真菌
单细胞：圆形、芽生孢子。如：酵母菌
多细胞：菌丝及孢子、孢子出芽。如：霉菌
6．白假私酵母菌（白念）
生物学性状： G+单细胞真菌、芽生孢子、类酵母型菌落
厚膜孢子、假菌丝有助于鉴定
致病性：皮肤粘膜——鹅口疮、内脏感染、 CNS感染
微生物学检查：直接涂片、染色后镜检——菌体、芽生孢子、假菌丝
7．新型隐球菌
生物学性状：圆形酵母型菌、外周有厚荚膜（比菌体大1-3 倍）
致病性：吸入后侵犯皮肤、粘膜等——慢性炎症和脓肿；侵袭CNS——亚急性或慢
性脑膜炎
微生物学检查：脑脊液离心后取沉淀、痰和脓标本直接检查；墨汁负染见出芽菌体外
围有宽厚荚膜为阳性
三、实验材料
记号笔：接种环：1 支；大镊子： 1 支；火柴： 1 盒；蜡笔： 1 支；试管架：
1 支； Olympus 显微镜： 1 台；显微镜使用记录本： 1 个
1 个；酒精灯： 1 个；
四、实验内容
1.观察细菌三种形态
1）球菌
链球菌、葡萄球菌、肺炎双球菌（子弹形）、脑膜炎双球菌（蚕豆形）、四联菌2）杆菌
破伤风杆菌、白喉杆菌（异染颗粒）、绿脓杆菌、伤寒杆菌、变形杆菌
3）螺形菌
弧菌——霍乱弧菌；螺菌；螺杆菌——幽门螺杆菌；弯曲菌
2.观察细菌的特殊结构
芽胞、鞭毛、荚膜、异染颗粒、钩端螺旋体、幽门螺杆菌
3.绘图
葡萄球菌 (staphyloccocus)；肺炎双球菌 (pneumo coccus) ；脑膜炎球菌 (meningococcus) ；破伤风杆菌（ Clostridium Tantenus ）；霍乱弧菌（ vibrio cholera) ；芽胞 (spore)；鞭毛
（ flagellum) ；荚膜 (capsule)；钩端螺旋体 (leptospira)
五、实验结果
绘 8 幅细菌镜下图，已交。
六、思考与讨论
1．显微镜高倍镜使用时看不清楚的常见原因
（1）未滴加镜油
（2）镜头不干净
（3）标本放置反了，所以达不到对焦平面
（4）制片问题：标本太厚、染色误差等
细菌分布
一、实验目的
1.掌握固体培养基的制备
2.掌握机体常见部位及环境中的细菌采样、培养、及初步鉴定
3.掌握革兰氏染色方法及结果判定
二、实验原理
1.培养基：
1．细菌生长所需营养物质：水、碳源、氮源、无机物和生长因子
2．培养基分类：
（1）根据营养物质：营养培养基、选择培养基、鉴别培养基
（2）根据物理性质：液体培养基、固体培养基和半固体培养基
3．细菌在培养基中的生长状况：表面生长、均匀浑浊生长、沉淀生长
2.革兰氏染色：
革兰阳性细菌细胞壁的肽聚糖(peptidoglycan) 层较厚，经乙醇处理后使之发生脱水作用而使
孔径缩小，通道弯曲，结晶紫与碘的复合物保留在细胞内而不被脱色；而革兰阴性细菌的肽
聚糖层很薄，脂肪含量高，经乙醇处理后孔径仍可使结晶紫与碘的复合物通过，因而将染料洗去而被脱色。
三、实验材料
咽拭子、羊血培养皿： 1 套 / 人；大号普通培养皿： 1 块 /2 人；载玻片： 1 片/ 人；A、 B 菌：6 套/ 桌； NS： 1 份/ 人；滤纸： 1 张 / 人；消毒液： 4 套 / 桌；三角瓶、电天平、营养琼脂、称
药纸、称药勺、量筒： 1 套/桌
四、实验内容
1.培养基制备
1）按产品要求称取营养琼脂
2）每实验桌制备200ml
3）高压蒸汽灭菌后，在洁净工作台内倒平皿
4）所制备的普通平皿用于空气培养
2.机体不同部位的细菌采样、培养
1）咽部正常菌群的采样、培养
咽拭子擦拭咽部，平行划线法接种于羊血平皿。
2）手指消毒前后细菌的采样培养
未消毒手指平行划线法接种于普通平皿；同一手指碘酒、酒精消毒后平行划线法接种于普通平皿。
3. 环境中细菌采样培养
1）空气培养
将培养皿打开暴露于空气中，20 分钟后盖好平皿盖儿
2）流通纸币（或硬币）的细菌采样培养
将硬币正反面分别在培养基上充分接触
3）采样结束后，将培养皿底部朝上放入铁丝筐，统一置培养箱：37℃ 18-24 小时
4.A、 B、 C 菌鉴定（革兰氏染色法）
1）. 细菌涂片制备程序：
（1）取一干净玻片，火焰上方缓缓通过三次去油
（2）蜡笔画线将玻片分割为 A、B、 C三区域
（3）接种环取生理盐水分别滴入A、 B 两区域各一滴
（4）分别取少许 A、 B 、 C 菌，与生理盐水充分混匀成菌液，风干后形成菌膜
（5）固定（火焰上方缓缓通过三次）
（6）革兰氏染色
（7）滤纸吸干水分，油镜观察
2）. 革兰氏染色：
（1）细菌涂片、火焰固定
（2）结晶紫初染 1min
（3）卢戈氏碘液媒染 1min
（4） 95%乙醇脱色 30-40s
（5）沙黄复染 1min
五、实验结果
A：G+，球菌，推测为金黄色葡萄球菌；
B： G-，短杆菌，推测为大肠杆菌；
六、思考与讨论
1．影响革兰氏染色的因素：
（1）细菌本身因素：
菌龄：如果菌龄太大，可能出现假阴性
（2）操作因素
涂片：取菌应适量，涂片要均匀，如果某个部分菌层太厚，可能在脱色时达不到，会
导致局部假阳性
固定：固定温度太高或时间太长都会导致细菌结构破坏而出现假阴性；但是固定不够，细菌会在水洗时被冲掉
初染：初染时间虽然说是 1 分钟，但是可以适当延长，时间太短会出现假阴性；染色
滴加不均匀可能出现半阴半阳
媒染：和初染一样
脱色：脱色时间不能过长，基本上用酒精滴过之后马上水冲就可以了，否则容易出现
假阴性
复染：复染时间需足够长，否则可能会染不上
消毒灭菌
一、实验目的
1.了解实验室常用消毒灭菌方法及其原理
2.掌握实验中所用仪器的使用方法
3.掌握机体常见部位及环境中的细菌培养物的初步鉴定
4.强化革兰氏染色技能
二、实验原理
1．口咽部及皮肤正常菌群
鼻咽部及扁桃体：葡萄球菌、类白喉杆菌、肺链、溶血及非溶血性链球菌、奈瑟菌等
口腔：链球菌多见、放线菌、螺旋体、G-杆菌等
皮肤：表皮葡萄球菌、丙酸杆菌、类白喉杆菌、铜绿假单胞菌
2．溶血类型
α溶血：现象：草绿色溶血环
常见菌种：机会致病菌（甲链、肺链）
原理：细菌产生过氧化氢将血红蛋白氧化成深绿色的高铁血红蛋白
β溶血：现象：透明溶血环
常见菌种：致病菌（乙链)
原理：细菌释放溶血素使红细胞破裂，血红蛋白释放
三、实验材料
咽拭子培养物： 1 套 / 人；空气、纸币、手指消毒前后培养物： 1 套 /2；载玻片： 1 片/ 人；NS：1 支/人；滤纸： 1 张/人
四、实验内容
1.常用消毒灭菌方法：（示教讲解）
1）．热力灭菌：
（1）干热灭菌法：焚化、烧灼、干烤（160 ℃，2 小时）
（ 2 ）湿热灭菌法：煮沸（2%Na2 3
， 105 ℃）；高压蒸汽灭菌（，20 分钟， 121℃，
CO
临床运用最广的灭菌方法）
2）. 紫外线（ Ultraviolet radiation) ：
波长 265nm-266nm(DNA 吸收光谱）杀菌能力最强。紫外光穿透力差，一般只用于不耐
热物品表面的消毒。
3）. 过滤 (filtration)
用物理阻流的方法除去液体或空气中的细菌，用于不耐热物质的灭菌（血清、毒素、抗
生素等）
滤菌器：薄膜滤菌器、玻璃滤菌器、石棉滤菌器、素陶瓷滤菌器
4）. 低温
保存菌种（冷冻真空干燥法）
5）．常用的化学消毒剂
类别作用机制常用种类
酚类蛋白变性，细胞膜损伤洗必泰
醇类去除脂类，蛋白变性乙醇
卤素蛋白变性氯气、碘酊、碘伏
重金属盐蛋白变性红汞、硫柳汞、硝酸银醛类蛋白变性福尔马林、戊二醛
表面活性剂蛋白变性，细胞膜损伤新洁而灭
酸碱类破坏细胞膜、细胞壁，蛋白变性十一烯酸
染料干扰氧化、抑制繁殖龙胆紫
6）．实验室常用化学消毒剂：
70-75%乙醇
洁净台消毒：来苏水擦拭
防腐剂：三氯甲烷、硫柳汞、叠氮钠
2．细菌分布结果鉴定
1）观察菌落
2）取部分菌落的细菌进行革兰氏染色并观察
五、实验结果
1.咽部正常菌群的采样、培养结果：
在羊血培养皿上出现四种菌落：
（1）数目多，划线沿线都有；针尖大小；无色、光滑、湿润、透明、圆形。周围出现草绿色溶血环，发生了不完全溶血即α溶血。
（2）数目较多，划线沿线都有；较小；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形。
（3）少，只出现在四个点；中型；乳黄色、光滑、半湿润、不透明、形状不规则。
在此种菌落下方的培养基出现了透明溶血环，发生了完全溶血即β溶血。
（4） 1 个菌落；较大；乳白色、光滑、湿润、半透明、圆形。粘稠。
取（ 1）、（ 2）、（ 3）进行革兰氏染色，结果如下;
（1） G+，链球菌，根据不完全溶血推断，为甲型链球菌。
（2） G-，球菌，细胞个体小，形状像金黄色葡萄球菌，但是染色为阴性。
（3） G-，球菌。
2.手指消毒前后细菌的采样培养结果：
1）消毒前：
仅出现 2 个菌落，较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
革兰氏染色结果：G-，杆菌
2）消毒后：无菌落出现。
3.硬币正反面的细菌采样培养结果：
1）正面
三种菌落：
（1） 13 个菌落；较小；乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。和手指消毒前的菌落一样。（2） 1 个菌落；较大；白色、光滑、湿润、近似圆形。
（3） 5 个菌落；较大；中央乳黄色边缘颜色变浅、光滑、湿润、中间凸、不规则、边缘光
滑
取其中（ 2）、（ 3）进行革兰氏染色，结果如下：
（2） G-，杆菌。和手指消毒前的细菌一样
（3） G-，链杆菌。形态较大，形状像炭疽芽胞杆菌，但是没有芽孢且染色为阴性。
2）反面
两种菌落：
（1） 2 个；较大，乳白色、光滑、湿润、有光泽、圆形。
（2）多个，沿硬币边缘线连成一片；针尖大小、无色、光滑、湿润、透明。
4. 空气培养结果
平皿敞开在实验室的窗台上放置了约20 分钟，当时阳光照在上面：
平皿出现了五种菌落：
（1） 11 个；中等大小；白色、光滑、湿润、半透明、圆形
（2） 2 个；较大；周围白色，中间有一个透明圈，光滑、湿润、中间凹的圆饼状
（3） 1 个；较大；周围黄色，中间有一个透明的圆形区域，半湿润、没有光泽
（4） 1 个；较大；边缘橘黄色，中央偏白、明显凸起、干燥、形状不规则
（5） 1 个；较大；边缘透明，中央乳黄色，光滑、湿润、半透明、圆
形取其中（ 3）、（ 4）进行革兰氏染色，结果如下：
（3） G-，杆菌。和手指消毒前、硬币正面菌落（2）的细菌一样
（4）出现三种细菌：
G-，双球菌
G+，双球菌
G-，梭菌
5．八个取样染色结果
取样细菌来源染色结果细菌形态
1 咽部G+ 链球菌
2 咽部G- 球菌
3 咽部G- 球菌
4 手指（消毒前）G- 杆菌
5 硬币正面G- 杆菌
6 硬币正面G- 链杆菌
7 空气（实验室窗台）G- 杆菌
8 空气（实验室窗台）G- 双球菌
G+ 双球菌
G- 梭菌
六、思考与讨论
1．巴氏消毒法的利用
30 分钟；高温瞬
巴氏消毒法是一种低温消毒法，包括：低温维持法：摄氏度维持
时法：摄氏度作用15-30 秒。
该法适用于食品的消毒。现主要应用于乳制品。
2．为什么湿热消毒法的温度比干热消毒法低？
课堂上讲到的干热消毒法温度都比湿热消毒法要高，说明湿热灭菌法可在较低的温度下达
到的灭菌效果可以与干热法相同，分析原因如下：
（1）湿热中蛋白吸收水份，更易凝固变性；
（2）水分子的穿透力比空气大，更易均匀传递热能，在干热状态下，由于热穿透
力较差，微生物的耐热性较强，必须长时间受高温的作用才能达到灭菌
的目的
（ 3）蒸汽潜热大，每 1 克水由气态变成液态可释放出529 卡热能，可迅速提高物体的温度。
3．细菌分布试验结果讨论
咽部正常菌群主要为：溶血和非溶血性链球菌、球菌等，不同人由于个体差异和取样部
位差异，所得菌种也有所不同
手的消毒是有效的，消毒后细菌明显减少了。同时手上的菌是很多的，所以需要常洗手。手上较常见的是四联球菌。
硬币上的菌也相对较多，因为它经历的环境很多。
在咽部、硬币和未消毒的手上，都得到了一种很像大肠杆菌的革兰氏阴性杆菌，说明这种菌分布非常广泛。
4．空气培养取样染色时，为什么得到三种菌？
图 1 空气培养取样革兰氏染色（10*100 ）
一般认为，菌落形成是一个菌落到培养基上并增殖而来，但是在空气培养得到的菌落取
样染色时，发现了三种形态完全不同的菌（如图1，较大的双球菌和梭菌为革兰氏阴性，较
小的双球菌为革兰氏阳性）。可能的原因有：
（1）取样的污染，该菌落被两次取用，可能遭到污染
（2）在非常小的概率下，三个不同的菌掉到了同一处，同时这三种菌的生长互不影响甚至互利，于是形成了混合菌群。
（3）三个菌落在生长过程中由于靠得很近而融合了。
微生物实验报告
实习报告 实习名称食品微生物检验实习 系别生物与化学工程系 年级专业12级食品科学与工程专业学生姓名某某某 指导老师王老师、黄老师、李老师 X X 学校
2015 年1 月13日
1、实习时间、地点和实习单位 2、实习目的 通过食品微生物检验实习，掌握培养基的配制、包扎及灭菌；正确采集样品并对样 品进行稀释、滴加、培养；菌落观察、鉴定与计数；数据处理、分析等方面内容，并结 合生产和科研技术的发展，开设较高的综合性实验为主，运用综合的实验方、实验手段 对我们的知识、能力、素质形成综合的培养。为我们今后从事各种与食品相关的工作打 下基础。 3、实习过程概述 3.1参加认识实习动员大会 2014年11月8日上午由黄大川、王瑶琼2位老师召开了微生物实习动员大会。会 上，老师们说明了实习目的、内容、时间、地点，着重强调了此次实习的自主性和和注 意事项，另外还应遵守实验室的规章制度，保持高度的安全意识。 3.2实习内容 一、腐乳中细菌含量的检测 1、实验材料和设备 1ml移液管 5支,1000ml、500ml、100ml的烧杯各1、1、2个,250ml锥形瓶 3个， 100ml量筒1个，研钵1个,滴定管1支,试管5支,试管架1个，玻璃棒1根,培养皿 12 个,涂布器1个,洗耳球1个,酒精灯1盏,电磁炉1个，天平1台,药匙1个，pH试纸， 标签纸1张，纱布、棉花、线、报纸若干，高压蒸汽灭菌锅，恒温培养箱，超净工作台。 2、牛肉膏蛋白胨培养基的配制 配方：牛肉膏3g 蛋白胨10g NaCl 5g 琼脂15—20g 水1000ml pH 7．4—7．6 步骤：称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→倒平皿→接种→培
医学微生物学考试试卷（A） (临床医学本科、影像医学本科、中医药学本科、实验技术本科、预防医学本科) 班级学号姓名 注意事项： 1．在试卷上写上姓名、班级。在答题卡上填上学号，将相应的数字涂黑，并写上班级、姓名和试卷类型（A卷/B卷）。交卷时必须将答题卡与试卷一起上交，否则以零分计算！ 2．本份试卷由基础知识题和病例分析题组成，共150个选择题，请按题目要求，在备选答案中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应的字母涂黑，做在试卷上无效。 3．考试时请严格遵守考场纪律，原则上不允许上厕所。 第一部分、Ａ型选择题 （由一题干和５个备选答案组成，请选出一个最佳答案。共90个选择题） 1.哪种疾病的病原体属于非细胞型微生物： A.疯牛病 B.梅毒 C.结核病 D.沙眼 E.体癣 2.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是: A.单细胞 B.二分裂方式繁殖 C.对抗生素敏感 D.有由肽聚糖组成的细胞壁 E.仅有原始核结构，无核膜 3.革兰阳性菌细胞壁： A.肽聚糖含量少 B.缺乏五肽交联桥 C.对溶菌酶敏感 D.所含脂多糖与致病性有关 E.有蛋白糖脂外膜 4.青霉素杀菌机制是: A.干扰细胞壁的合成 B.与核糖体50S亚基结合，干扰蛋白质合成 C.影响核酸复制 D.与核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成 E.损伤细胞膜 5.有关“细菌鞭毛”的叙述，哪一项是错误的: A.与细菌的运动能力有关 B.许多革兰阳性菌和阴性菌均有鞭毛 C.在普通光学显微镜下不能直接观察到 D.可用于细菌的鉴定 E.将细菌接种在固体培养中有助于鉴别细菌有无鞭毛(半固体) 6.有关“芽胞”的叙述，错误的是: A.革兰阳性菌和阴性菌均可产生（都是阳性） B.不直接引起疾病 C.对热有强大的抵抗力 D.代谢不活跃 E.通常在细菌处于不利环境下形成 7.用普通光学显微镜油镜观察细菌形态时，总放大倍数为: A.10倍 B.100倍 C.400倍 D.900～1000倍 E.10000倍 8.脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌经结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色后，菌体分别呈: A.红色和紫色 B.紫色和紫色 C.紫色和无色 D.无色和无色 E.无色和紫色 9.革兰染色法是最常用的一种染色法，其实际意义不包括:
2012级制药专业 工业微生物学实验报告 姓名: 刘甜甜学号: 2012304090 班级: 制药12-2班指导老师：王健 日期：2014.6.11
一、实验目的 1、抑制或杀死微生物的一些物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的原理。 2、掌握物理、化学及生物的因素抑菌、杀菌的试验方法。 3、了解细菌的形态特征、染色特点。 4、了解细菌在普通培养基、选择培养基、血平板上的菌落特征。 5、掌握细菌分离划线培养的方法。 6、掌握细菌的初步生化反应。 7、掌握细菌密集划线法，掌握细菌K-B药敏纸片法。 二、实验内容 1 细菌Gram’s stain染色，镜检，观察记录细菌形态和特色特征 1.1 实验原理：染色原理：G+菌与Gˉ菌细胞壁不同，G+菌比Gˉ菌细胞内核糖核酸镁盐含量高，G+菌比Gˉ等电点低。 1.2 实验步骤： 1.2.1.制片：○1涂片：取半滴生理盐水置一洁净玻片上，以无菌操作技术自平板上去菌落少许，与生理盐水混匀，均匀涂布约1cm2大小，自然干燥； ②固定：取含菌膜的玻片与酒精灯火焰上来回三次，使菌膜牢固附于玻片表面； 1.2.2染色：①初染：取结晶紫一到两滴覆盖于菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,细流水冲洗，切勿直接冲洗涂片区域； ②媒染：取卢氏碘液1~2滴覆盖菌膜表面，轻微摇动，维持30〃~40〃,用上法细流水冲洗； ③脱色：取95%酒精2~3滴于菌膜表面，轻微摇动，局部接近无色即可, 用上法细流水冲洗； ④复染：取1：10稀释石炭酸复红覆盖涂片区域，轻微摇动，用上法细流水冲洗； ⑤吸水纸初步吸干玻片水分，然后自然干燥； 1.2.3 镜检：于涂片区域加半滴香波油，油镜（100倍目镜）下。 图1：Gram’s stain（1000×）图2：染色试验 三、分离培养 1实验原理：四区划线法是把混杂着在一起的微生物或同一微生物群体的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养繁殖后生成个菌落。有时这些单菌落并非由单个细胞繁殖而来，故必须反复分离多次才能得到纯种。其原理是微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离的目的。
［实验名称］:沉淀反应 ［实验目的］:通过单向琼脂扩散测定待测血清Ig 含量 ［实验材 料］: 打孔器 (1) 将溶解后的离子琼脂冷却到4 5 °C ，加入适 当浓度的抗原混 合均匀，吸取3—4毫升加在载玻片上，使其均匀布满载玻片 而又 不流失。 (2) 琼脂凝固后制成凝胶板，然后隔适当距离打孔。 (3) 在孔内滴加待测可溶性抗体。 (4) 将凝胶平板放入带盖瓷盘中，下面垫一湿纱布以保持湿度，置 于3 7 °0恒温箱中2 4小时，观察沉淀环。 单向琼脂扩散是一种定量试验，主要用来测定标本中各种免疫球 蛋白或补体成分的含量。 在孔中加入待测抗体使其向四周扩散，经一定时间后抗体与琼脂 中抗原相遇，在比例适宜处生成白色沉淀环。 沉淀环直径与抗体浓度成正比。根据测试样品沉淀环直径的大 小，可从已知的标准曲线中查出样品中抗体的含量。 实验二 ［实验名称］:间接凝集抑制试验（妊娠试验） ［实验目的］:测定待检尿液中是否含HCG （绒毛膜促性腺激素）以诊断妊娠 ［实验材料］:孕妇尿液、非孕妇尿液、HCG 致敏乳胶抗原、抗HCG 血清、载 实验一 1%离子琼脂、白喉类毒素、白喉抗毒素、载玻片、毛细吸管 ［试验步骤］: ［实验结果］: (沉淀环直径) 测量沉淀环直径: 毫米 ［实验分析］
玻片等 ［试验步骤］: （1）取一片载玻片，标记出左右。 （2）在载玻片左侧加一滴待检尿液，右侧加一滴非孕妇尿液。 （3）在两侧尿液中分别加一滴抗HCG血清，摇动混匀2 —3分钟。 （4）在两侧液滴中分别再加一滴HCG致敏乳胶抗原，摇动混匀2 — 3分钟。 （5）观察判定结果。 ［实验结果］:（凝集和非凝集的描述） 左侧（待检尿液侧）呈现均匀的乳状液状态，无凝集颗粒。间接凝集抑制阳性。 右测（非孕妇尿液侧）出现明显的凝集颗粒。间接凝集抑制阴性。 ［实验分析］:（结合实验原理） 孕妇尿液中的HCG含量显著增高。尿液中的HCG与加入的抗HCG结合, 抗HCG被消耗，使得加入的HCG乳胶抗原不能再与抗HCG结合，不出现乳胶抗原间接凝集反应（凝集被抑制），所以液滴呈现均匀乳状液，为乳胶间接凝集抑制阳性反应。 非孕妇尿液中HCG含量极少，不足以抑制抗HCG与HCG乳胶抗原发生间接凝集反应，所以出现乳胶颗粒的凝集，为乳胶间接凝集抑制阴性反应。
一、选择题(每题1分,共30分) A型题: 每一考题有A、B、C、D、E五个备选答案，请从中选择一个最佳答案填入题干后括号内。 1．细菌的革兰染色性主要决定于：( ) A．核质结构B．细胞壁结构C．细胞膜结构 D．磷壁酸的有无E．中介体的有无 2．溶原性细菌是指：( ) A．带有前噬菌体基因组的细菌B．带有毒性噬菌体的细菌 C．带有温和噬菌体的细菌D．带有R质粒的细菌 E．带有F质粒的细菌 3．能引起内毒素性休克的细菌成分是：( ) A．肽聚糖B．磷壁酸C．LPS D．菌体抗原E．荚膜多糖 4．关于顿挫感染，下列叙述中哪项正确?( ) A. 因宿主细胞内有相应抑制物 B. 因宿主细胞DNA有关基因激活 C. 因宿主细胞缺乏有关酶 D. 因感染病毒有核酸缺失 E. 因感染病毒抗原性转变 5．细菌芽胞特有的、并与其高度耐热性有关的成分是：( ) A．磷脂B．肽聚糖C．磷壁酸 D．二氨基庚二酸E．吡啶二羧酸 6．下列哪种实验可用来检测致癌物质？( ) A．Ames test B．transformation test C．fluctuation test D．replica plating test E．Widal test 7．杀灭包括芽胞的所有微生物的方法称作：( ) A．消毒B．无菌C．灭菌D．灭活E．防腐 8. 下列无芽胞的细菌中，抵抗力最强的是: ( ) A. 乙型溶血性链球菌 B. 金黄色葡萄球菌 C. 淋病奈瑟菌 D. 肺炎球菌 E. 脑膜炎奈瑟菌 9. 下列哪项不是病毒在细胞内增殖的指标？( ) A. 细胞病变效应 B. 红细胞吸附 C. 细胞代谢的改变 D. 干扰现象 E. 细胞培养液混浊 10．霍乱弧菌能粘附定植于小肠粘膜上皮细胞是因为具有：( ) A．鞭毛B．ＬＴＡC．菌毛D．Ｋ抗原E．Ｖｉ抗原11．对青霉素产生耐药性的最常见的细菌是：( ) A．Streptococcus B．Staphylococcus C．Meningococcus D．Gonococcus E．Pneumococcus 12．分枝杆菌属最突出的特点是：( ) A．胞壁含大量脂质B．无特殊结构C．呈分枝生长 D．一般不易着色E．抗盐酸乙醇脱色 13. 下列哪种物质与结核结节和干酪样坏死有关？( ) A．分枝菌酸B．蜡质ＤC．磷脂 D．索状因子E．硫酸脑苷脂
发酵实验报告四甜酒酿 的制作 集团档案编码：[YTTR-YTPT28-YTNTL98-UYTYNN08]
发酵工程学实验报告实验四、甜酒酿的制作 学院生命科学学院 专业应用生物教育 班级12应生A班 姓名李顺昌 学号124120218 实验课程甜酒酿的制作 指导教师许波 开课学期2014—2015学年下学期
实验四、甜酒酿的制作小组合作：是小组成员：李顺昌、李媛媛、方淑萍、周玉坤一、实验目的 学习并掌握甜酒酿的酿制方法 二、实验设备与材料 1.设备：天平、灭菌锅、盆、容器（口缸）、保鲜膜、培养箱等 2.材料：糯米（约400g/人）、市售甜酒药、冷开水 三、实验原理 1、将蒸熟的米饭经接种酒酿种曲后，在适宜的培养条件下，让种曲中的根霉孢子萌发菌丝体，大量繁殖后通过淀粉酶等的作用，将淀粉转化为葡萄糖，从而使甜酒酿具有独特的甜醇口味。 2、从微生物的观点来看，酿制的关键在于： 要有优质的酒酿种曲，即种曲中应含有糖化率很高的优质根霉孢子或菌丝体；应选择优质的糯米作原料；严格无菌操作规程，尽量避免杂菌污染；制作甜酒酿的器具都要清洗干净；合理控制酿制条件等。 四、实验方法步骤 浸米→蒸饭→淋饭→拌酒药→搭窝→保温培养 1、蒸饭：将滤干水分的糯米，扎紧纱布口后放入灭菌锅；于115-121℃灭菌20~25min，到米饭熟透为止。 2、淋饭：加少许冷开水淋洗糯米饭，边淋边拌，使米饭迅速冷却至35℃左右。 3、拌酒药（接种）：按干糯米的重量换算接种量( 0.35% ) ；将酒药均匀地撒在冷却的糯米饭中（稍微留下一点点酒曲最后用），拌匀。 4、搭窝：将拌好酒药的米饭装入容器后（不能压太紧），将饭粒搭成中心下陷的凹窝（中间低、周围高）；饭面和凹窝中均匀撒上少许酒药，倒入少量的冷开水，盖上盖子或保鲜膜； 5、保温培养：28℃培养约24-48小时，待凹窝内有少许液体渗出即可食用
医学微生物学考试试卷（A）(附答案) (临床医学本科、影像医学本科、中医药学本科、实验技术本科、预防医学本科)班级学号姓名 注意事项： 1．在试卷上写上姓名、班级。在答题卡上填上学号，将相应的数字涂黑，并写上班级、姓名和试卷类型（A卷/B卷）。交卷时必须将答题卡与试卷一起上交，否则以零分计算！ 2．本份试卷由基础知识题和病例分析题组成，共150个选择题，请按题目要求，在备选答案中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应的字母涂黑，做在试卷上无效。 3．考试时请严格遵守考场纪律，原则上不允许上厕所。 第一部分、Ａ型选择题 （由一题干和５个备选答案组成，请选出一个最佳答案。共90个选择题） 1.哪种疾病的病原体属于非细胞型微生物： A.疯牛病 B.梅毒 C.结核病 D.沙眼 E.体癣 2.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是: A.单细胞 B.二分裂方式繁殖
C.对抗生素敏感 D.有由肽聚糖组成的细胞壁 E.仅有原始核结构，无核膜 3.革兰阳性菌细胞壁： A.肽聚糖含量少 B.缺乏五肽交联桥 C.对溶菌酶敏感 D.所含脂多糖与致病性有关 E.有蛋白糖脂外膜 4.青霉素杀菌机制是: A.干扰细胞壁的合成 B.与核糖体50S 亚基结合，干扰蛋白质合成 C.影响核酸复制 D.与核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成 E.损伤细胞膜 5.有关“细菌鞭毛”的叙述，哪一项是错误的: A.与细菌的运动能力有关 B.许多革兰阳性菌和阴性菌均有鞭毛 C.在普通光学显微镜下不能直接观察到 D.可用于细菌的鉴定
E.将细菌接种在固体培养中有助于鉴别细菌有无鞭毛 6.有关“芽胞”的叙述，错误的是: A.革兰阳性菌和阴性菌均可产生 B.不直接引起疾病 C.对热有强大的抵抗力 D.代谢不活跃 E.通常在细菌处于不利环境下形成 7.用普通光学显微镜油镜观察细菌形态时，总放大倍数为: 倍倍 倍～1000倍 倍 8.脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌经结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色后，菌体分别呈: A.红色和紫色 B.紫色和紫色 C.紫色和无色 D.无色和无色 E.无色和紫色 9.革兰染色法是最常用的一种染色法，其实际意义不包括: A.鉴别细菌 B.初选抗菌药物 C.了解细菌致病性 D.了解细菌的染色性
环境微生物学实验报告 一、实验目的 （1）了解普通光学显微镜的构造及原理，掌握显微镜的操作及保养方法。（2）观察、识别几种原核微生物。真核微生物的个体形态，学会生物图的绘制。 二、实验器皿与材料 （1）器皿：显微镜、擦镜纸、二甲苯。 （2）材料：示范片：细菌三形（球状、杆状、螺旋状）、弧状（硫酸盐还原菌）、丝状（浮游球衣菌等）、细菌鞭毛及细菌荚膜。放线菌、颤蓝细菌、微囊蓝细菌或念珠蓝细菌等。 三、实验步骤 （1）将标本片放在载物台上，使观察的目的物置于圆孔正中央。（2）将镜头换成低倍镜，将粗调节器向下旋转（或载物台向上旋转），眼睛注视物镜。当物镜的尖端距离载玻片约0.5cm 处时停止旋转。 （3）左眼对着目镜观察，将粗调节器向上旋转，如果见到目的物，但不十分清楚，可用细调节器调节，直至目的物清晰。此时找到目的物并移至中央。（4）换成高倍镜，观察目的物，旋转细调节钮，直至视野清晰。（5）观察示范片，绘出其形态图。 四、思考题 （1）使用油镜时，为什么要先用低倍镜观察？答：为了
找到目的物并移动到中央。 （2）要使视野明亮，除采用光源外，还可采取哪些措施？ 答：调大孔径光阑，调整光源。如果是用反光镜的显微镜，用凹面镜可使视野明亮。 五、生物图 实验二、微生物培养基的配制与灭菌 一、实验目的 （1）熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。 （2）了解配置微生物培养基的基本原理，掌握配置、分装培养基的方法。（3）学会各类物品的包装、配置（稀释水等）和灭菌技术。 二、实验器皿与材料 （1）实验器皿：高压蒸汽灭菌器、干燥箱、煤气灯、培养皿、试管、刻度移液管、锥形瓶、烧杯、两桶、药物天平、玻璃棒、玻璃珠、石棉网、药匙、铁架、表面皿、pH试纸和棉花等。 （2）材料：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、NaOH和琼脂等。 三、实验原理 培养基是微生物生长的基质，是按照微生物营养、生长繁殖的需要，由碳、氢、氧、氮、磷、硫、钾、钠、钙、镁、铁及微量元素和水，按一定的体积分数配置而成。调整合适的pH，经高温灭菌后以备培养微生物之用。由于微生物种类及代谢类型
医学微生物学模拟试题(一) [A1型题] 以下每一考题下面有A、 B、 C、 D、 E 5个备选答案，请从中选一个最佳答案，并在答题卡将相应题号的相应字母所属方框涂黑。 1．用来测量细菌大小的单位是 A. cm B．mm C. um D．nm E．Pm 2．细菌缺乏下列哪一种结构仍可存活 A．细胞壁 B．细胞膜 C．细胞质 D．核质 E．以上均可
3．下列有鉴别意义的细菌代谢产物是：A．靛基质 B. 色素 C．H2S D．酸性气体 E．以上均是 4．H—O变异属于 A．毒力变异 B．菌落变异 C．鞭毛变异 D．形态变异 E．耐药性变异 5. 是已知毒物中毒性最强者 A．肉毒毒素 B．破伤风痉挛毒素 C．白喉外毒素 D．霍乱肠毒素 E．金葡萄肠毒素 6．抗毒素 A．为外毒素经甲醛处理后获得 B．可中和游离外毒素的毒性作用。
C．可中和与易感细胞结合的外毒素的毒性作用D．由细菌内毒素刺激机体产生 E．B十C 7．湿热灭菌法中效果最好的是 A．高压蒸气灭菌法 B．流通蒸气法 C．间歇灭菌法 D．巴氏消毒法 E．煮沸法 8．哪种实验不属于细菌的生化反应 A．糖发酵试验 B．外斐试验 C．VP试验 D. 靛基质生化试验 E. 甲基红试验 9．链球菌感染后引起的变态反应性疾病 A．产褥热 B. 风疹 C．风湿热 D．波状热 E．以上均不是
10．关于淋球菌 A．女性感染者比男性更严重 B．G+肾形双球菌 C．空气传播 D．无垂直传染 E．人是惟一宿主 11．关于痢疾杆菌 A．易入血引起败血症 B．菌毛是致病的重要因素 C．不能引起休克 D．福氏痢疾杆菌因能产生外毒素，故引起的痢疾比较严重E．我国以志贺氏痢疾感菌感染多见。 12．肠道致病菌特征 A．抗原结构复杂，均有H、 O抗原 B．在SS琼脂上为无色不透明菌落 C．多数分解乳糖 D．可用免疫血清鉴定分型 E．革兰阴性杆菌 13．霍乱弧菌 A．有周鞭毛，运动十分活泼
山东大学实验报告2012年 12 月 4日 姓名系年级 2011级生科2班组别四 科目微生物学实验题目微生物的生理生化反应 微生物的生理生化反应 一、【实验目的】 1. 证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明不同微生物有着不同的酶系统。 2.掌握进行微生物大分子物质水解试验的原理和方法。 3.了解糖发酵的原理和在肠细菌坚定中的重要作用。 4.掌握通过糖发酵鉴别不同微生物的方法。 5. 了解吲哚和甲基红试验的原理以及其在肠道细菌鉴定中的意义和方法。 二、【实验仪器与试剂】 菌种：枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、普通变形杆菌、产气肠杆菌培养基：培养基：固体淀粉培养基、固体油脂培养基（大分子水解试验）；葡萄糖发酵培养基、乳糖发酵培养基（内装有倒置的德汉氏小管）（糖发酵试验）；蛋白胨水培养基（吲哚试验）；葡萄 糖蛋白胨水培养基； 试剂：卢戈氏碘液、乙醚、吲哚试剂、甲基红试剂、蒸馏水、 仪器：酒精灯、接种针、培养皿、试管、试管架、烧杯、量筒、德汉氏小管 三、【实验原理】 1.在所有生活细胞中存在的全部生物化学反应称之为代谢，代谢过程主要是酶促反应过程，由于各种 微生物具有不同的酶系统，所以他们能利用的底物不同，或虽利用相同的底物但产生的代谢产物却不同，因此可以利用各种生理生化反应来鉴别不同的细菌，尤其是在肠杆菌科细菌的鉴定中，生理生化试验占有重要的地位。 2.淀粉的水解：由于微生物对淀粉这种大分子物质不能直接利用，必须靠产生的胞外酶将大分子物质 分解才能被微生物吸收利用.胞外酶主要为水解酶,通过加水裂解大的物质为较小的化合物,使其能被运输至细胞内.如淀粉酶水解淀粉为小分子的糊精,双糖和单糖；而淀粉遇碘液会产生蓝色，因此能分泌胞外淀粉酶的微生物，则能利用其周围的淀粉，在淀粉培养基上培养用碘处理其菌落周围不呈蓝色，而是无色透明圈，据此可分辨微生物能否产生淀粉酶。 3.油脂的水解：在油脂培养基上接种细菌，培养一段时间后观察菌苔的颜色，若出现红色斑点，则说 明此中菌可产生分解油脂的酶。 4.糖发酵试验：糖发酵试验是常用的鉴别微生物的生化反应,在肠道细菌的鉴定上尤为重要.绝大多数 细菌都能利用糖类作为碳源和能源,但是它们在分解糖类物质的能力上有很大的差异.有些细菌能分解某种糖产生有机酸(如乳酸,醋酸,丙酸等)和气体(如氢气,甲烷,二氧化碳等);有些细菌只产酸不产气. 例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气。产酸后再加入溴甲酚指示剂后会使溶液呈黄色，且德汉氏小管中会收集到一部分气体。若细菌不能使糖产酸产气，则最后溶液为指示剂的紫色，且德汉氏小管中无气体。 5.IMVC实验主要用于快速鉴别大肠杆菌和产气肠杆菌。 （1）吲哚试验：是用来检测吲哚的产生，在蛋白胨培养基中，若细菌能产生色氨酸酶，则可将蛋白胨中的色氨酸分解为丙酮酸和吲哚，吲哚与对二甲基苯甲醛反应生成玫瑰色的玫瑰吲哚。但并 非所有的微生物都具有分解色氨酸产生吲哚的能力，所以吲哚实验可以作为一个生物化学检测
1 测量细菌大小用以表示的单位是_________ 。_ 2. 在消毒灭菌时应以杀死 ________ 作_ 为判断灭菌效果的指标。 3. 细菌的形态鉴别染色法最常用的是 _________ ，_ 其次是______ 。 4. 根据细菌的外形，可分为 _________ 、_ ______ 、_________ 。_ 5. 细菌群体生长繁殖分为 、 6. _________________________________ 人工培养基按功能或用途分为、_ _______ 、_ _____________ 、、_ _________________________________ 5类培 养基。 7. 根据细菌代谢时对氧气的需求与否分为 _____ 、_________ 、_ _______ 、 ________。_ 8. 细菌生长繁殖的条件是 ________ 、 _______ 、_ ______ 、 _________ 。_ 9. ______________________________ 人工培养基按物理性状分为、_ 、_ 3类培养基。 10. 高压蒸汽灭菌的温度是 _______ ，压力是_________ ，时间持续 ________ 。 11. 半固体培养基主要用于 _______ ，斜面培养基________，_ 平板培养基主要用于________ 。_ 12. __________________________ 光学显微镜观察细菌应用 _ 镜观察，它的放大倍率是倍。 13. ____________________________________________ 抗酸染色把细菌分成两类，阳性菌呈___色，阴性菌呈_____________________________________________________色。 14. 细菌的色素分为 ________ 和_ __________ 2种 15.SS培养基多用于____________ 的分离培养。 16. 热力灭菌分为__________ 和_ ___________ 灭_ 菌。 17. 湿热灭菌分为___________ 、_______ 、 ________ 、 _______ 、 ______ 。 18. 紫外线杀菌的机理主要是破坏细菌__________ 。_ 19. 对于毒素、血清、抗生素不耐高温灭菌的制物制品应采用的灭菌方法是____________ 。_ 20. 化学消毒剂杀菌的机理是 ____________ 、 ________ 、_ ____________ 。_ 21. 致病菌的检验程序主要有 _________ 、_ ______ 、_________ 、_ _______ 等_ 。 22. 根据葡萄球菌在血琼脂平板培养基中产生的色素不同，将葡萄球菌分为 ________ 、________ 、_______ 三种。其中致病力最强的葡萄球菌为_________ ，产生的色素为 ___________ 。 23. 根据链球菌在血琼脂平板培养基中生长后菌落周围溶血现象的不同，可将链球菌分为 _______ 、_ _______ 、_ __________ 三大类。 24. 鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌实验是 ________ 、 _______ 。_ 25. 人工培养脑膜炎双球菌、淋球菌常用的培养基是 ________ 或 ______ 。 26. 伤寒杆菌分离培养，在病程早期第一周应取 _______ 标本；发病第2、3 周应取_________ 标本，其阳性率高。 27. 大多数志贺菌不分解乳糖，只有 ________ 志贺菌能 _______ 分解乳糖。 28. 霍乱弧菌耐 ________不耐酸，常用的人工培养基是 _____ 或_ _________ 。 29. 白喉棒状杆菌在亚碲酸钾血平板生长时，其菌落呈 ______ 。 30. 培养白喉棒状杆菌常选用的培养基是 ______ 。 31. 毒力鉴定是鉴别白喉棒状杆菌与其他棒状杆菌的重要试验。体外法可用 ______ ，体内法可用 ________ 。 32. 结核分枝杆菌常用 _____ 染色，呈现_________ 色。 33. 结核分枝杆菌对湿热敏感，经 _____ C ________ m ir即可被杀死。 34. 结核菌素试验所用的试剂有 ___ 、_________ 两种。 35. 幽门螺杆菌形态呈 ______ 、_______ 或______ 状。目前认为与人类的 _______ 、 ________ 疾病有关。 36. 绿脓杆菌在生长繁殖过程中能产 ______ 色素。
2016年南方医科大学医学微生物学实验报告 日期 2016年5月22号 一、实验目的 1、掌握培养基制备的原则和一般方法。 2、掌握病原菌的分离与培养方法。 3、掌握油镜的正确使用、细菌涂片标本的制备、革兰氏染色法，熟悉细菌基本形态。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、掌握血浆凝固酶试验的原理、方法及用途。 6、熟悉药物敏感性试验方法的种类、原理及应用，掌握纸片扩散法。 7、掌握玻片凝集试验的原理、方法、结果观察与判断。 二、实验器材 1、天平、称量纸、干粉培养基、锥形瓶、量筒、15支试管、试管架、试管筐、5ml 刻 度吸管、平皿、洗耳球、酒精灯 2、脓汁标本1支，粪便标本1支；伊红美兰平板2个，营养琼脂平板2个，伊红美蓝 平板2个，接种环，酒精灯 3、斜面4支、细菌分离培养物（上次实验平板） 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者：马浩楠 3140020007 参与者名字：马浩楠 丁超 王尧鑫 桂文茁 年级专业 2014级医学影像专业 指导老师 罗军
4、斜面培养物4支，营养肉汤4支，生理盐水2支，镜油瓶、拭镜纸1套，吸水纸1 本，载玻片4张，染色瓶，染色架 5、斜面培养物4支，营养肉汤培养物（菌液）4支，半固体琼脂4支，营养琼脂平板4 个，糖发酵管1套，抗菌素纸片1套，眼科镊子2把 6、半固体培养物4支，药敏试验培养物4个，微量发酵管培养物1套。 三、方法与步骤 1、培养基的制备： 培养基称量干粉培 养基(g) 水量(ml) 煮沸(次）分装(ml) 备注 营养琼脂11.4 300 3瓶，500ml 瓶，平板 营养琼脂 2.7 70 3 5 14支×3，中试管，斜面 营养肉汤 1.3 60 1 3 20支×2，小试管，肉汤 半固体琼脂 1.7 60 3 4 14支×3，小试管，高层 （1）营养琼脂培养基的制备：称量11.4g琼脂，置于三角烧瓶中，加入300ml蒸馏水，分2瓶装，用于倒平板。 （2）营养琼脂培养基的制备（用于制作斜面）：称量2.9g琼脂，置于三角烧瓶中，加入75ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管5ml。 （3）肉汤培养基的制备（用于制作液体培养基）：称量1.1g琼脂，置于三角烧瓶中，加入50ml蒸馏水，放在电炉上，煮沸1次，分15支小试管装，每支试管5ml。 （4）半固体琼脂培养基的制备：称量1.7g琼脂，置于三角烧瓶中，加入60ml蒸馏水，放在电炉上，先后煮沸3次，分15支中试管装，每支试管4ml。 2、细菌的分离培养 平板划线分离法
微生物学实验报告格式 专业学号 姓名 实验一、???培养基的配制和高压蒸汽灭菌 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际用到哪些试剂、材料、玻璃器皿等都要写出，包括数量） 四、实验步骤（按照实际步骤填写,切忌抄袭） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、简述培养基的配制原则？ 2.为什么湿热灭菌比干热灭菌法更有效？ 3.高压蒸汽灭菌时，为什么要先将灭菌锅锅内的冷空气完全排尽？ 实验二自生固氮菌的分离纯化 （这是个综合实验，请大家回顾三周来的所有操作步骤，将其整理成连贯完整的一份报告，注意每次实验的衔接，不要把其他的实验项目写进来，但也不要漏写该实验的相关步骤。） 一、实验目的
二、实验原理 三、实验材料（整个综合实验有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙每周所做的相关步骤） 五、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 六、思考题 1、划线分离时，为什么每次都要将接种环上多余的菌体烧掉？划线为何不能重叠？ 2、如何从自然界中分离自己所需要的纯培养？ 实验三平板培养测数法 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（实际操作有涉及到的材料都要列出） 四、实验步骤（详叙相关步骤） 五、实验结果 六、注意事项（自己总结实验过程中的注意点） 七、思考题 1、平板菌落计数法中，为什么溶化后的培养基再冷却至45℃左右才能倒平板？
2、本次实验是否成功？如果失败，试分析原因。 实验四简单染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并描述所观察到的细菌的显微形态） 六、思考题 1、简单染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 实验五革兰氏染色 一、实验目的 二、实验原理 三、实验材料（包括菌种、染料、玻璃器皿） 四、实验步骤 五、实验结果（黏贴染色结果图片并判断自己分离到的菌种是G还是G+-？） 六、思考题 1、革兰氏染色要获得成功，有哪些问题需要注意，为什么？
五、实验报告 (一)实验结果 1. 详细记录实验过程中各参数及数据。 结果记录如表： 糖化后，加入可乐瓶中的上清：约400ml. 加入400ml蒸馏水。活化的酵母种液：5ml 2.对实验结果的判断与分析。 ○1二氧化碳生成的检验：培养约一星期后，观察瓶中混合液，淀粉大部分沉降在瓶底，上清浓度较稀，靠瓶壁边缘有一连串微小气泡 接种完，擦干瓶外壁，于天平上称量W1=727.5g；培养结束，取出瓶轻轻摇动，使二氧化碳尽量溢出，在同一天平上称量W2=725.0g 计算得：二氧化碳生成量= W1-W2=2.5g ○2酒精生成的检验：打开瓶塞，闻到有明显酒精气味。 取发酵液5ml, 加10%硫酸2ml,加1%K2Cr2O7溶液 10-20滴，颜色由黄色变为黄绿色。 左：蒸馏水5ml,颜色偏黄，透明度高 右：发酵液5ml,黄绿色，与对照管有明显差异 左图：酒精生成的检验结果 （二）思考题 现有3株不同来源的酒精酵母，请设计实验判断哪株酵母发酵酒精能力最强？ 答：按实验步骤配制等量的三组醪液，加入等量糖化酶进行糖化作用，将原料中的淀粉转化为可发酵性糖，向三组糖化后的淀粉上清中加入等量3株不同来源的酒精酵母种液，相同条件下培养一段时间，分别测定三组实验产生的CO2的质量，进行比较。产CO2越多表示发酵酒精能力越强。 （三）注意事项 1. 淀粉糖化过程中，需要不断进行搅拌，直至粘度下降到一定程度，使淀粉完全糖化。 2. 检验酒精生成时需要用到H2SO4,使用时应该注意安全，不要溅到皮肤上。 3. 使用天平测量可乐瓶质质量时，应遵守天平使用规则用镊子夹取砝码。以免出现误差，导致CO2质量测量不准确。
实验四环境中微生物的检测和分离纯化 一、实验目的 1.熟悉常用微生物培养基的配置方法。 2.学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。 3.用平板划线法和稀释法分离微生物。 4.认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。 二、实验原理 土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。 平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。 三、实验器材 土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪； 平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul 各一支，培养箱； 0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml 三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。 四、实验步骤 1.配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml配置培养基，调 pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。 2.采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带 回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验 室。 3.制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中， 用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸 取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。 类推制得10-4、10-5的土壤悬液。 4.涂板： 1）土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃 涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。 2）单菌落划线（4块）：用接种环挑取未知平班上的菌落，做单菌落划线分离，每人2板。 3）手指（1块）：分别用未洗过的手指头, 用自来水打湿的手指头，用自来水洗过的手指头，用肥皂洗过的手指头和用酒精棉球擦过的手指头(不用毛巾擦)在同 一平板的不同分区涂抹（用力一致）。
医学微生物学实验考 试
1测量细菌大小用以表示的单位是___________。 2.在消毒灭菌时应以杀死___________作为判断灭菌效果的指标。 3.细菌的形态鉴别染色法最常用的是___________，其次是_________。 4.根据细菌的外形，可分为___________、_________、___________。 5.细菌群体生长繁殖分为_________、 ___________、_________、___________。 6.人工培养基按功能或用途分为____________、____________、__________、____________、______________5类培养基。 7.根据细菌代谢时对氧气的需求与否分为_________、___________、_________、___________。 8.细菌生长繁殖的条件是_________、___________、_________、___________。 9.人工培养基按物理性状分为____________、___________、________3类培养基。 10.高压蒸汽灭菌的温度是________，压力是_________，时间持续_________。 11.半固体培养基主要用于_________，斜面培养基__________，平板培养基主要用于__________。 12.光学显微镜观察细菌应用_______镜观察，它的放大倍率是____倍。 13.抗酸染色把细菌分成两类，阳性菌呈___色，阴性菌呈____色。 14.细菌的色素分为____________和___________2种 15.SS培养基多用于_____________的分离培养。 16.热力灭菌分为______________和_______________灭菌。 17.湿热灭菌分为____________、___________、_________、__________、________。 18.紫外线杀菌的机理主要是破坏细菌______________。 19.对于毒素、血清、抗生素不耐高温灭菌的制物制品应采用的灭菌方法是______________。 20.化学消毒剂杀菌的机理是______________、____________、______________。 21.致病菌的检验程序主要有___________、__________、___________、___________等。 22.根据葡萄球菌在血琼脂平板培养基中产生的色素不同，将葡萄球菌分为 __________、__________ 、 __________ 三种。其中致病力最强的葡萄球菌为__________ ，产生的色素为_________ 。 23.根据链球菌在血琼脂平板培养基中生长后菌落周围溶血现象的不同，可将链球菌分为__________、__________、 __________ 三大类。 24.鉴别肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌实验是__________、__________。 25.人工培养脑膜炎双球菌、淋球菌常用的培养基是_________或_________。 26.伤寒杆菌分离培养，在病程早期第一周应取_________标本；发病第2、3周应取_________标本，其阳性率高。 27.大多数志贺菌不分解乳糖，只有_________志贺菌能________分解乳糖。 28.霍乱弧菌耐_________不耐酸，常用的人工培养基是_________或 _________。 29.白喉棒状杆菌在亚碲酸钾血平板生长时，其菌落呈________。 30.培养白喉棒状杆菌常选用的培养基是________。 31.毒力鉴定是鉴别白喉棒状杆菌与其他棒状杆菌的重要试验。体外法可用________，体内法可用________。 32.结核分枝杆菌常用 ________染色，呈现________色。 33.结核分枝杆菌对湿热敏感，经________℃________min即可被杀死。 34.结核菌素试验所用的试剂有________、 ________两种。 35.幽门螺杆菌形态呈________ 、________ 或 ________状。目前认为与人类的________ 、________疾病有关。 36.绿脓杆菌在生长繁殖过程中能产________色素。 37.培养流感嗜血杆菌必须在培养基中加入________，以提供________因子和________因子。
微生物学实验报告 实验一普通光学显微镜的使用及细菌染色与形态观察 第一部分：显微镜的使用 一、目的要求 1．熟悉普通光学显微镜的构造、油镜的使用原理和显微镜的维护方法。 2．学会正确使用油镜观察细菌的基本形态和特殊构造。 3．了解各种显微镜的主要特征。 二、实验原理 （一）光学显微镜的构造 微生物实验室中最常用的是普通光学显微镜，它的构造可分为机械部分和光学部分。 1、机械部分 普通复式光学显微镜的机械部分通常包括以下几个部分：目镜、镜筒、基座回转器、物镜、载物台、光圈、聚光器、光源、镜臂、细调节器、粗调节器等。 2、光学部分：目镜、物镜、聚光器、光圈、光源。 （二）放大倍数 标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短，这时光圈就要打开得愈大。 显微镜的性能受物镜的分辨距离或分辨力所限制。分辨距离即透镜所能分辨的两个物点之间的最小距离，分辨距离愈小，透镜的分辨力愈高，物像也就愈清晰。因此常以分辨距离来衡量显微镜的分辨力。 R=0.61λ/N.A 式中：R-----分辨距离； λ------作用光的波长； N.A------数值口径。 一些介质的折射率
介质折射率 空气 水玻璃香柏油 1 13 55 1.56 三、实验内容 （一）材料：显微镜，香柏油，擦镜纸。 （二）方法： 细菌很小，须使用油镜方可观察到。油镜是显微镜上最重要的部件之一，观察时与玻片非常接近，稍不小心即可压碎玻片，更严重的是损坏镜头，故必须极其仔细地学习油镜的使用方法： 1、为使低倍镜取得最适之光源，可将低倍镜头调节到离载物台约1cm的高度，将聚光器提高，光圈完全打开，然后调节电压旋钮至视野最合适。 2、滴一滴香柏油，固定于载物台上，用推动器调节到载物台正中。在双目侧视下，下旋粗调节器，使油镜头浸入油中几乎与标本片相接触。然后眼睛从目镜观察（如光线不足，可适当增大电源电压），徐徐上旋粗调节器至看到模糊物像之后，再用细调节器调节以使物像清晰。如镜头已离开油面还未看到物像，则再重新操作。 3、更换标本时应先提高油镜头，再更换玻片，切勿随意移动显微镜的位置。 4、油镜观察完毕后，按“显微镜保护”中（6）项处理。 5、最后将油镜各部分还原，聚光器下降，反光镜垂直于镜座，镜头转成八字形， 以免与聚光器发生碰撞。 四、思考题 1、使用显微镜时为何调节下列构造？反光镜，光圈，聚光器，粗调节器，细调节器，镜头回转器。 答：聚光器的位置之升降可影响视野的明亮度，上升则视野明亮，下降则光线减弱。光圈的放大或缩小也可控制视野明亮程度。粗调节器和细调节器均是调节焦距的装置。镜头回转器为装置物镜和转换物镜之用。 2、使用不同放大倍数的物镜时，工作距离与光圈的关系。如何利用这一原理用好显微镜？ 答：物镜的放大倍数愈大，其工作距离（物镜镜头到标本片之间的距离）愈短。标本首先经物镜放大，在目镜的焦距平面上形成一个实像，再经过目镜放大成最终的虚像。总的放大倍数是物镜放大倍数与目镜放大倍数的乘积。 3、为何要选用与玻璃折射率相似的香柏油作为油镜的介质？油镜的原理是什么？ 答：香柏油只在使用油镜头时（100倍物镜）使用，因为当镜与装片之间的介质为空气时，由于空气（n= 1.52）的折射率不同，光线会发生折射，不仅使进入物镜的光线减少，降低了视野的照明度，而且会减少镜口角。当以香柏油（n=1.515）为介质时，由于它的折射率与玻璃相近，光线经过载玻片后可直接通过香柏油进入物镜而不发生折射，不仅增加了视野的照明度，更重要的是通过增加数值孔径达到提高分辨率的目的。可见光的波长平均为0.55μm。当使用数值孔径为0.65的高倍镜时，它能辨别两点之间的距离为0.42μm；而使用数值孔径为1.25的