烟草bar基因的转化及其转化体快速检测方法的研制
周锺信,李明,王英超,张丽香
(天津农学院农学系遗传教研室,天津300384)
摘要:用改良的叶圆盘法进行了烟草bar基因高效转化并获得11个转基因株系,转化率高达32.4%。提出构建以bar基因为选择标记的新型植物表达载体的设想,实验分析了不同PPT浓度与GS酶的解抑制量及外植体存活、分化率的关系,结果表明,100mg L以上的PPT可完全抑制非转化外植体的存活,从而证实了设想的可行性。研制出检测抗除草剂转基因植物的微量、快速、有效的检测新方法,并用实际检测实验和统计学手段验证了该方法的可靠性和实用性。
关键词:烟草;bar基因转化;选择性标记;转bar基因检测中图分类号:Q 78 文献标识码:A
TobaccoBarGeneTransformationandNewMethodof
Mini-trans-bar-genicbudorExplantAssay
ZHOUZhong-xin,LIMing,WANGYing-chao,ZHANGLi-xiang
(GeneticsGroup,DepartmentofAgronomy,TianjinAgriculturalCollege,Ti anjin300384,China)
Usingmodifiedleaf-diskmethod,atobaccobargenetransformationhasbeen conductedand11transgenicplantsAbstract:
weregained.Thetransformationefficiencyreached32.4%.Anewtentativei deaforconstructinganewplantexpressibleplas-midwithbargeneastheselecti
vemarkerhasbeenpostulated.Also,therelationshipbetweenPPTconcentration s,decreasesofinhibitiontotheGSenzymeactivityandsurvivalrateanddiffere ntiationefficiencyofexplantshasbeenanalyzed.Theresultsstatethat100mg LormuchhigherconcentrationsofPPTcaninhabitthevigorofexplantsthoroughl y,whichconfirmthefea-sibilityforthenewidea.Anewtestmethodhasbeendevel opedthatissuitablefortherapidandeffectiveassayofthemini-trans-bar-gen icbudorexplant,whosepracticabilityandcredibilityhasbeenvalidatedbythe meansofpracticaltestexperimentsandstatisticanalysis.
tobacco;bar-genetransformation;selective-marker;trans-bar-genetes tKeywords:
自1982年Chilton等通过根癌农杆菌把外源基因转入烟草获得成功以来,烟草已成为植物转基
因研究的模式植物。烟草上报道的转基因方法有农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法和电激法等,但目前在高等植物外源基因导入操作中,以根癌农杆菌介导的基因转化仍然是一种最为有效和可靠的方法。
任何一种表达载体或转化方法均需要一种通用的选择性标记基因,以便在目的基因导入植物的操作中进行再生性、选择性的培养。目前通用的选择性标记基因多为抗抗生素类,如:卡那霉素、潮霉素抗性选择性标记。但是,用抗生素做选择标记时,往往因多数作物对抗生素不甚敏感而导致假转化体的比例较大;转基因操作中抑菌或筛选性培养周期长,大量高纯度抗生素的消耗很不经济(而潮霉素属于非医用或常用的抗生素,其价格就更加昂贵);用抗生素作为选择性标记基因,尚有其在土壤微生物乃至动
收稿日期:2003-11-21
[1]
),,,,@.com。
植物中扩散的危险,这也成为对转基因食品生态安全性提出质疑的一条理由。因此,另辟新路,开发一种廉价而且有效的植物转化体的选择性标记就是十分必要和有意义的工作。
bar基因最初是从吸水链霉菌(Str.eptomyceshygroscopicus)中分离出来的
[3]
。该基因编码的膦丝
菌素乙酰转移酶(PAT)能够通过乙酰化作用钝化除草剂草丁膦中的有效成分PPT(phosphinothricin)。PPT对植物细胞中普遍存在并涉及许多重要代谢过程的谷氨酰胺合成酶(GS)的活性具有强烈的抑制作用,以至降低植物的生活力,甚至导致死亡(谷氨酰胺合成酶(GS,EC6.3.1.2)是氨同化的主要酶,在ATP供能的情况下催化NH与谷氨酸转变成谷氨酰胺。该酶与谷氨酸合成酶形成的循环反应为其它所有含氮有机化合物的合成提供前体。GS
[4,5]
4+
广泛存在于各种植物组织或器官中)。因此,将bar基因
导入植物基因组将会解除PPT对GS活性乃至植物生活力的抑制作用,使植物获得抗除草剂草丁膦的能力。目前,关于bar基因克隆、带有bar目的基因的表达载体的构建以及bar目的基因转化植物方面
[4～7]
的工作有较多的报道,其目的多是培育抗除草剂的品种,以期在农业生产中大规模地采用农田化学除草,或通过田间喷洒农药以淘汰不良基因型植株来降低田间管理成本和提高产量、质量。但是,关于利用bar基因作为目的基因转化体筛选用的遗传标记方面的研究尚未见报道。以bar基因作为选择性标记将会有以下优点:(1)bar基因不会污染农业生态环境,比较安全、可靠;(2)与bar基因标记配套的筛选因子———农药已在我国批量生产,并且价格低廉;(3)已克隆的b ar基因较多,可直接用于选择标记的开发,开发费用低;(4)由于植物对除草剂极其敏感,用bar基因做选择标记,并用相应的除草剂进行带有目的基因的植物转化体的筛选,显然比现有的抗生素标记的筛选更为直接、有效,不会产生过多的假阳性结果。
本研究通过用带有bar基因的表达载体对烟草叶盘
[7]
进行转化操作,旨在探讨利用bar基因作为植
物转化体选择性标记基因的可能性,为以bar基因作为植物转化体选择性标记的表达载体的构建提供理论依据;研制以bar基因作为选择性标记基因时植物转化体的早期、快速、有效、低成本的检测方法———通过检测PPT对GS活性抑制解除量,间接确认T-DNA或外源目的基因植物转化体。
1 试材与方法
1.1 试材
1.1.1 植物材料:以本院遗传实验室保存的黄苗榆烟草为试材,以防虫室内栽培的10叶期植株的叶片作为制作叶盘受体的材料。
1.1.2 菌株及质粒:本研究使用的含pCAMbarD34表达载体的LBA4404农杆菌系由天津农学院遗传实验室保存(pCAMbarD34质粒含有35s启动子控制的抗除草剂bialaphos的bar基因)。1.1.3 试剂
实验使用的羟胺、咪唑、MnCl2、砷酸钠、TCA购自天津化学试剂公司,L-Gl uADP二钠盐购自华美公司。
研磨缓冲液成分:100mmol LTris-HCl(pH7.5),0.5mmol LEDTA,5mmol Lβ-巯基乙醇。反应液成分:135mmol L咪唑,18mmol L羟胺,0.27mmol LMnCl2,25mm ol L砷酸钠,0.36mmol LADP钠盐,调pH至7.0。
终止液成分:1000mL中含有55gFeCl3.6H2O、20g三氯乙酸和21mL浓HCl。
底物母液:L-Glu300mmol L。
植物分化培养基:MS无机盐+ZH有机成分+BAP1mg L+NAA0.1mg L,30g L蔗糖,琼脂0.7%,pH调至5.8。
LB培养基:蛋白胨10g,酵母膏5g,NaCl10g,调pH至7.0。
草丁膦母液:100mg L,于-20℃冰箱保存。,gL℃
1.2 方法
1.2.1 烟草转化植株的获得
取新鲜的烟草叶片,于0.1%升汞中消毒6min,用无菌水冲洗4～5次,用打孔器打取6mm直径的叶盘。用液体分化培养基重悬的对数期农杆菌感染烟草叶盘(设5min、10min、15min3种处理,每处理35个叶盘),用无菌吸水纸吸干叶盘表面的菌液并将其接种到烟草分化培养基上,28℃、黑暗下共
-1-1
培养3d。将共培养后的外植体转移到含有头孢霉素(200mg·L)和草丁膦(40 0mg·L)的分化培养基上,25℃连续光照下进行选择性培养,每隔5d转移到新鲜的培养基一次,直至分化出芽(培养30d时观察统计不同感染时间处理的存活率、分化率)。分割转化的芽于含同样浓度的头孢霉素和草丁膦、但不含激素的MS培养基上,于同样条件下培养10d后,将带根的小植株移栽到蛭石基质上,并转入正常栽培管理。
1.2.2 酶活性的测定
[7]
采用Bender等的方法,并加适当改良:取待测的烟草叶盘或再生芽在0.5mL 的离心管中,加入适量的研磨缓冲液(植物材料与缓冲液浓度比例(W V)设1∶0.
5、1∶1、1∶5以做比较),用自制的磨砂玻棒杵于4℃下研成匀浆;4℃4000g下离心20min,回收上清液备用;各样品(10、25、50、75μL)于1.5mL离心管中分别加入过量的反应液(183.8、170.4、148.1、125.9μL),28℃水浴锅中预热5mi n;分别加入L-Glu母液使终浓度为20mM,加入草丁膦使终浓度为400mg L,并用蒸馏水将总体积调整到216.7μL,28℃保温反应10min;加入终止液433.3μL,振荡
摇匀(全部处理均设2次重复);4000g室温下离心去掉蛋白;取上清液650μL,于540nm波长下比色(721分光光度计,光程1cm,以蒸馏水为
者为转化芽。统计转化芽数,并计算转化率。零对照)。以大于XOD540+2δ
2 结果与讨论
2.1 农杆菌感染时间对外植体存活率与分化率的影响
在农杆菌介导的转基因操作中,感染时间的长短往往与转化率有关,但感染时间过长,往往会导致外植体的生活力下降,甚至死亡。为筛选最佳的感染时间,我们设计了不同感染时间对转化率影响的实验,结果见表1。
表1 浸染时间对芽存活率与分化率的影响
侵染时间5minCK10minCK15minCK
接种叶盘数块
333334342323
存活块数块
300280170
出芽块数块
1008040
存活率 %90.9082.4073.90
分化率 %33.3028.6023.50
注:存活率=存活的块数接种叶盘数×100%
分化率=出芽块数存活块数×100%
对照为在附加有头胞霉素200mg L和草丁膦400mg L的共培养培养基上未转化烟草的叶盘。
从表1可以看出:感染5min、10min、15min的烟草叶盘在含有400mg L草丁膦的分化培养基上
存活率均在70%以上,这说明在选择性培养基上附加草丁膦进行初步筛选确有明显效果。比较3种感染时间的叶盘存活率和分化率,5min的存活率和分化率最高。随着感染时间的延长,存活率下降,而分化率降低更烈。这说明,农杆菌悬液对幼嫩并具创伤的叶盘是一种极其不利的生理环境,在其中浸泡时间超过5mi n会影响叶盘的生活力,而勉强存活的叶盘的再生能力也大大下降。因此,在烟草转化操作中,农杆菌感染时间以5min较为理想。2.2 除草剂草丁膦对烟草叶盘生活力的影响
生株的关键。本研究将未转基因的烟草叶盘于含不同浓度草丁膦(100、200、400、600、800mg L)的选择性培养基(MS+BA1mg L+NAA0.1mg L+草丁膦)上进行互比培养,以观察除草剂对烟草外植体生活力的影响,实验结果见表2。
表2 不同浓度草丁膦对烟草叶盘生活力的影响
草丁膦浓度mg·L-1接种数叶盘块数
4d存活数块8d存活数块4d存活率 %8d存活率 %15d存活率 %15d分化叶盘数块15d分化率 %
076
7676100.00100.00100.0076100.00
10057
563998.2568.50000
20056361564.3026.80000
40061331254.1019.70000
6005925842.4013.60000
8005918130.501.70000
从表2的数据可以看出,随着草丁膦浓度的提高,培养4d和8d的叶盘存活率均呈下降趋势,说明
草丁膦对叶盘的生活力有强烈的破坏作用,这种破坏作用随着时间的推移而加剧。从表中还可以看出,100mg L以上的草丁膦均可使培养15d后的叶盘外植体完全丧失生活力和分化能力。这表明,在100mg L以上的草丁膦的选择压力下,以抗草丁膦的bar基因作为转化体的选择性标记的设想是成立的。因为在这种选择压力下,非转化叶盘将全部死亡,而只有抗除草剂的转化叶盘或芽才有可能生存和分化,而且草丁膦浓度越高,筛选出的转化芽的抗性将越强。但是,过高的选择压力(如400～800mg L的草丁膦),有可能导致漏选因bar基因在植物染色体上整合情况不同而抗性较差的转化体,故不适于仅以bar基因作为选择标记的情况。相反,较高的选择压力适合于以bar基因作为目的基因转化并选育抗除草剂植物新品种的情况。
2.3 草丁膦浓度与样品浓度对检测灵敏度的影响
对非转化叶盘外植体在0、50、100、200、300、400、500mg L7个草丁膦浓度(以蒸馏水为对照)和植物材料匀浆缓冲液=1∶1、1∶5、1∶0.5(w v)3种样品浓度(加样量均为50μL),共计24个处理条件下的GS活性进行实际检测(见试材与方法),比较各处理540nm波长下2次重复的光吸收的的平均值,以期观察不同处理组合条件对检测灵敏度的影响。实验结果见表3和图1。
表3 不同草丁膦与不同样品浓度的光吸收值
样品质量缓冲液体积
1∶11∶51∶0.5
注:CK为不加草丁膦和酶液的空白对照
草丁膦浓度mg·L-1
00.2700.2250.026
500.2470.1900.023
1000.2350.1830.024
2000.2250.1750.024
3000.2150.1650.022
4000.1850.1510.020
5000.1600.1250.020
CK0.0240.0240.024
图1 不同草丁膦与不同样品浓度下的光吸收值:,OD)
从表3和图1可以看出,在样品浓度为1∶0.5的条件下,不同草丁膦浓度的OD540很小,而且基本没变化。这表明,在1∶0.5的样品浓度下,通过检测G S酶的活性不能显示组织细胞内草丁膦的差异,其原因是当外植体很小时,缓冲
液的体积则极小(尽管使用0.5mL离心管和专门制作的微型杵进行样品的研磨,也难以维持植物材料与研磨缓冲液的均匀混合状态),其缓冲能力和抗氧化性很低,不足以对所
研磨出来的酶液起到保护作用,致使酶液被氧化、发生褐变、有效活性大幅下降,超出了仪器灵敏度所能显示差异的范围。表3和图1的结果还显示,在1∶1和1∶5的样品浓度下,随着草丁膦浓度的提高,OD540均呈递降趋势,说明在2种样品浓度下的光吸收值均能反映细胞内不同草丁膦浓度的差异。如果被检测的植物材料来自于bar基因转化植株,则OD540将上升,上升的幅度将反映bar基因表达的有无和强度,亦即可以通过比较被检测样品与非转化对照样品的OD540的差异来鉴别被测样品是否为bar基因转化体。换言之,这一研究结果证实了bar 基因作为植物转化体选择性标记和用在有草丁膦条件下检测的GS酶活性的增量作为转基因叶盘或植株快速检测新方法的可行性,并为以bar基因作为选择性标记的新型植物表达载体以及转基因植物快速检测新方法的开发提供了理论依据。
应当指出,与1∶1的样品浓度相比,1∶5样品浓度下可检测更少量的植物材料,这在该方法的应用上是有实际意义的。因为转化操作的早期,叶盘外植体的部分细胞可能是已经转化的细胞,但是此时外植体体积和重量很小(直径5mm,重
3～4mg左右),用1∶1的研磨比例所得到的研磨上清液不足以供一次测定之用,而采用1∶5的研磨比例才能得到可满足检测所需的最小样品量(根据实际计算
结果,菌感染后并在分化培养基上与农杆菌共培养3d的烟草叶圆盘按1∶5的比例研磨的上清液体积最低为10μL,但如按1∶1的比例研磨,则不能回收上述的上清液的最小量———10μL)。正如表3和图1的结果所示,用1∶5的研磨比例同样可以很好地显示细胞内有效草丁膦的差异,因此,此法非常适于转化叶盘的早期检测。如果检测的对象是在分化培养基上培养30d的分化芽,则按1∶1的比例即可满足检测所需的样品量,并且有余(根据实际计算结果,1∶1比例研磨,在分化培养基上培养30d的芽可得到75μL的研磨上清液)。所以,选择1∶5与1∶1的研磨缓冲液分别对检测共培养3d的烟草叶圆盘和30d的芽来说是适合的。从图1结果还可以看出,1∶1的样品浓度下,草丁膦浓度在300～400mg L之间O D540下降较快,因此,采用400mg L的草丁膦的选择压力时,检测的灵敏度比较高。所以,我们将此浓度确定为检测转化芽时的最佳草丁膦浓度。2.4 研磨样品最小体积的确定
分别选取转化30d的芽和共培养3d的烟草叶圆盘各5个样品,按烟草叶盘与研磨缓冲液1∶5的比例以及转化芽与研磨缓冲液1∶1的比例于4℃下研成匀浆。并计算2种研磨比例所得上清液量的平均数。结果见表4。
表4 不同样品研磨的上清液的体积
样品号
12
转化芽
34512
转化叶盘
345
样品重 g0.0700.0730.0780.0720.0730.0040.0040.0040.0050.003
研磨缓冲液浓度
1∶1
1∶11∶11∶11∶11∶51∶51∶51∶51∶5
Buffer量μL
70
737872732020252515
研磨上清液μL
72
758174751014111211
从表4可看出,转化30d之后的再生芽在芽重与缓冲液的比例为1∶1时,所能回收的上清液的最
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大体积为81μL,最小体积为72μL;烟草叶盘与；为了进一步验证上述各检测参数优化后组合而成的ba；表5烟草转化芽与未转化芽的光吸收值；样品号1
23456789101112131415；样品量μL；111111112525252525252525；草丁膦mg·L -1；400400400400400400400400；转化芽的OD540；0.3100.3000
大体积为81μL,最小体积为72μL;烟草叶盘与农杆菌共培养3d以后,叶盘的质量为0.004g左右,在叶盘重量与缓冲液体积为1∶5的条件下,一个烟草转化圆盘所能研磨的酶液最多可达到14μL,最小可得到10μL。这就为最小反应体积的确定提供了依据。按我们目前所采用的仪器、材料的测试系统,一次检测所需的样品量最小为10μL,上述研磨酶液量可以满足测试之需要。如果改用酶标仪代替光电比色计,用96孔点滴板代替1.5mL的指形管,按上述的样品制备程序,将可以检测更微量的转化材料。2.5 烟草转化率的测定
为了进一步验证上述各检测参数优化后组合而成的bar基因转基因烟草的检测程序的可靠性和实用性,我们做了一批黄苗榆叶盘外植体bar基因转化的操作,并用我们所研制的检测方法对选择性培养基初选出来的再生芽进行了检测和鉴定。对初步筛选得到的“转化芽”和对照的非转化芽各34个芽,用本研究所研制的快速检测系统进行成对检测,结果见表5。
表5 烟草转化芽与未转化芽的光吸收值
样品号1234567891011121314151617181920212223242526272829303132333 4
样品量μL
11111111252525252525252525505050505050505050507575757575757575757 575
草丁膦mg·L-1
40040040040040040040040040040040040040040040040040040040040040040 0400400400400400400400400400400400400
转化芽的OD540
0.3100.3000.2800.2800.3000.4400.3300.3100.4000.2750.2600.3200.265 0.2450.2650.3100.2700.3000.3000.3000.2800.3100.3000.3100.3100.3000.43 00.5500.4600.3500.3550.4100.3800.550
未转化芽的OD540
0.2300.2500.2500.2300.2600.2800.2700.2700.2500.2450.2300.2500.280 0.2750.2750.2800.2900.2750.2750.2850.2850.2800.2850.2900.2950.3100.29 50.2900.2950.3000.2900.3100.3200.300
注:以大于对照OD540+2δ者为转化芽
计算表5中对照芽OD540值的平均数与标准差,分别为0.276和0.02。将各分化芽的OD540值与对照的XOD540+2δ=0.31进行比较,大于该值的分化芽数为11个,用其除以分化芽的总数(34),得出转化率为32.4%。这大大高于通常报道的10%左右的转化率,从而证实我们找到了一种高效的农杆菌介导的烟草转化程序,并得到了抗草丁膦的转基因烟草株系。对上述鉴定为转化的芽和非转化的芽进行平均数差异显著性测验,结果见表6。
表6 用快速检测法确认的转化芽与非转化芽的OD540
样品号67
92728293031323334
转化芽OD540
0.4400.3300.4000.4300.5500.4600.3500.3550.4100.3800.550 样品号12
34581011131415
非转化芽OD540
0.2300.2500.2500.2300.2600.2800.2700.2700.2500.2450.230 样品号1617
181920212223242526
非转化芽OD540
0.2500.2800.2750.2750.2750.2800.2900.2750.2750.2850.285 样品号67
92728293031323334
非转化芽OD540
0.2900.2950.3100.2950.2900.2950.3000.2900.3100.3200.300
计算非转化芽OD540值的平均数与标准差分别为:
X非=∑X非 n非=0.276X转=∑X转 n转=0.423
S混=S非 n非+S转 n转=1.595×10
2
2
2
-5
+5.01×10
-4
=5.17×10
-4
W转非=转—非) S混=6.475>W0.01=2.58
因此,转化芽的平均数与非转化芽的平均数的差异达到极显著的水平。这再一次印证了以大于对照的XOD540+2δ作为转化芽的标准的合理性以及所研制的bar基因转基因植物快速检测法的可行性。
3 结论
3.1 本研究找到了适于烟草的农杆菌介导的转基因操作的高效技术程序(以无菌的6mm直径的烟草叶盘为外植体———MS+1mg L6-BA+0.1mg LNAA重悬
的对数期工程农杆菌感染5min———于同样的培养基上共培养3d(黑暗、28℃)———MS无机盐+ZH有机成分+1mg L6-BA+0.1mg LNAA+100mg L草丁膦+200mg L 头胞噻肟钠上25℃连续光照下培养30d(每5d继代1次),叶盘转化中心部位形成再生芽丛———分割再生芽,于MS+草丁膦+200mg L头胞噻肟钠的培养基上培养10d,形成带根小植株———将带根的转基因小植株移栽到蛭石基质上,并转入正常栽培管理,从而获得转基因
株系)。该程序具有外植体存活率、分化率、转化率高,适于大量获得转基因株系的特点。用该程序进行了黄苗榆烟草bar基因转化的操作,获得抗草丁膦的转基因株系11个。
3.2 本研究首次提出开发以抗除草剂的bar基因作为植物目的基因转化体筛选用的选择性遗传标记的新型植物表达载体的设想。从对烟草叶圆盘外植体细胞内GS酶活性水平与草丁膦浓度的关系、草丁膦与外植体存活率和分化率的关系以及对本研究中所得到的11个黄苗榆bar基因转化株系与非转化再生芽间的比较分析,证实以bar基因作为植物转化选择性标记的设想的可行性,并为以bar 基因作为植物转化选择性标记的新型植物表达载体的构建和开发提供了理论依据。
3.3 本研究研制了一套检测抗草丁膦的转bar基因植物的新的快速检测方法。该方法对仪器、器材、,1,;
检测,因而不但可用于转化植株的鉴定,而且可用于转化早期外植体的检测;如果以本程序及有关参数为依据进行商品性的专门仪器及其配套程序的开发,还可用于转基因植物或转基因食品安全性的检验。具体的检测流程是:用自制的磨砂玻棒杵———4℃下按转化芽与研磨缓冲液1∶1或1∶5的比例于0.5或1.5m L指形管中研成匀浆———4℃4000g离心20min,回收上清———10～50μL上清
液于1.5mL的离心管中加入过量的反应液(190～130μL)———28℃水浴锅中预热5min———加入L-Glu并用蒸馏水调终浓度至20mM、终体积至216.7μL———28℃保温反应10min———加入终止液433.3μL———振荡摇匀———4000g 室温下离心去蛋白———取上清液650μL,于540nm波长下比色(721分光光度计,光程1cm,以蒸馏水为零对照)———以大于XOD540+2δ者为阳性转化芽。参考文献:
[1] ChiltonMD,FepferDA,PetititA.AgrobacteriumrhizogenesinsertsT-DNAintogenomesofthehostplantrootcells
[J].Nature,1982,295:432-434.
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StreptomyceshygroscopicusTu494anditsexpressioninNicotianatobacum [J].Gene,1988,70:25-37.
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什么是农业标准化
农业标准化是以农业为对象的标准化活动,即运用“统一、简化、协调、选优”原则,通过制订和实施标准,把农业产前、产中、产后各个环节纳入标准生产和标准管理的轨道。它通过把先进的科学技术和成熟的经验组装成农业标准,推广应用到农业生产和经营活动中,把科技成果转化为现实的生产力,从而取得经济、社会和生态的最佳效益,达到高产、优质、高效的目的。它融先进的技术、经济、管理于一体,使农业发展科学化、系统化。
农业标准化是一项系统工程,这项工程的基础是农业标准体系、农业质量监测体系和农产品评价认证体系建设。农业标准化工程的核心工作是标准的实施与推广,是标准化基地的建设与蔓延,由点及面,逐步推进,最终实现生产的基地化
烟草运输保供方案 讲义
项目名称: 招标编号: 第标段 投标文件 第二册 道路运输服务方案(模版)投标人: 法定代表人(或委托代理人): 某年某月某日
目录 一、运输服务方案总体说明 ................... 错误!未定义书签。 1.1公司简介 .............................. 错误!未定义书签。 1.2项目简介 .............................. 错误!未定义书签。 1.2.1运输任务的下达..................... 错误!未定义书签。 1.2.2货物的发运......................... 错误!未定义书签。 1.2.3货物卸货........................... 错误!未定义书签。 1.2.4运费结算........................... 错误!未定义书签。 1.2.5业务过程的管理..................... 错误!未定义书签。 1.2.6业务操作流程示意图................. 错误!未定义书签。 二、以云南某某地区(市)-昆明-湖南长沙卷烟厂运输服务专线为例......................................... 错误!未定义书签。 2.1本物流方案设计目的 .................... 错误!未定义书签。 2.1.1操作流程........................... 错误!未定义书签。 2.1.2运输线路........................... 错误!未定义书签。 2.1.3运输时间估计....................... 错误!未定义书签。 2.1.4物流车辆调度....................... 错误!未定义书签。 三、货物运输服务管理机构人员配备............ 错误!未定义书签。 3.1管理结构图 ............................ 错误!未定义书签。
实验三、从烟草中提取烟碱 内容：P93-96和P42-44 一、实验目的（明确） 1、 学习从烟草中提取烟碱的基本原理和方法。 2、 初步了解烟碱的一般性质。 3、 掌握水蒸汽蒸馏的操作技术。 二、实验原理（介绍） 烟草中含有多种生物碱，除主要成分烟碱（约含2 ~ 8 %）外，还含有去甲烟碱、假木烟碱和多种微量的生物碱。烟碱又名尼古丁，是由吡啶和吡咯两种杂环组成的含氮碱，其结构式如右图： 烟碱能与HCl 结合生成烟碱盐酸盐（弱碱强酸盐）而溶于水中，在此提取液中加入强碱NaOH 后，可使烟碱游离出来。 + HCl → 游离烟碱在100℃左右具有一定的蒸气压。因此，可利用水蒸气蒸馏法分离提取。 由烟碱的结构可知，烟碱具有碱性，它不仅可以使红色石蕊变蓝，还可以使酚酞试剂变红，并可以被KMnO 4溶液氧化生成烟酸，与生物碱试剂作用 产生沉淀。 附：水蒸气蒸馏原理（见书P46） 三、实验仪器与试剂（要求学生认真检查） 1. 仪器 长颈圆底烧瓶（250 mL ） 圆底烧瓶（100 mL ） 直形冷凝管 电热套 玻璃棒 试管 止水夹 蒸汽导管（导入、导出） 烧杯（100 mL ） 球形冷凝管 接液管 T 形管 滴管 洒精灯 锥形瓶（100 mL ） 量筒（100 mL ） N N CH 3
2.试剂 烟叶（或烟丝） HCl溶液10 % NaOH 40 % KMnO4 0.1 % 酚酞 0.1 % Na2CO3 5 % 苦味酸（饱和） 3. 其它 红色石蕊试纸沸石 四、实验内容（简单介绍） 1、烟碱的提取 取一支烟，拨去外纸，将烟丝置于100 mL圆底烧瓶内，加入20 mL10％HCl溶液，安装好回流装置，回流20 min。（如图3. a） 将反应化合物冷却至室温，在不断搅拌下慢慢滴加40％NaOH溶液，使之呈明显碱性（用红色石蕊试纸检验）。 按图3. b安装好水蒸汽蒸馏装置。通入冷却水后，用电热套加热水蒸汽发生器，当有大量水蒸汽产生时，关闭T形管上的止水夹。 收集约10 mL提取液后，先打开止水夹，再停止加热[2]。待体系稍冷却，关闭冷却水。 2、烟碱的性质检验 （1）碱性试验：取10滴烟碱提取液，加入1滴0.1%酚酞试剂，振摇并观察现象。另取1滴烟碱提取液在红色石蕊试纸上，观察试纸的颜色变化。解释上述现象。 （2）氧化反应：取20滴烟碱提取液加入1滴0.1％KMnO4溶液和3滴5％Na2CO3溶液，摇动试管，于酒精灯上微热，观察颜色是否变化，有无沉淀生成。 （3）与生物碱的反应：取10滴烟碱提取液，逐滴加入饱和苦味酸，边加边摇动，观察有无黄色沉淀生成。 图3. a 回流图3. b水蒸气蒸馏 五、注意事项（强调）
＃＃市烟草专卖局配送方案设计 一、整体解决方案 1、车型选择:封闭车或半封闭车 2、路线规划:一线多卸 考虑因素：运货总量、装货点位置、卸货点位置和个数、最大卸货点位置、各点的卸货量。 方法：根据起始点货运量选择车辆吨位；根据始发点和卸货点，规划闭合线路，选择卸货次序量。 目标： 3、信息系统设计：
( 4、网络设计 5、流程设计； 系统的主业务流程 图
6、组织结构设计 2、确定单位服务价格 (1)、根据要求可得： １队的户次配送数量＝616000/295108=2件（取整数） 每辆车配送户次＝180/2=90 每天配送的户次＝295108/360＝820 需要车辆＝820/90=10辆 ２队的户次配送数量＝717000/337997=3件、 每辆车配送户次＝180/3=60 每天配送的户次＝206847/360=939 需要车辆=939/60=16 每天配送的户次＝206847/360=939 需要车辆=939/60=16 (2)、成本计算 固定成本=100×12+40×10+10000+1000+100000/5=32600元 总固定成本＝32600×(10+16)=847600元 １队变动成本＝10×(10×72×25×3.5+10×72×25+4000×12+2500×12) ＝1590000元
２队变动成本＝16×72×25×3.5+16×72×25+4000×12+2500×12) ＝3321600元 总变动成本＝1590000+3321600=4911600元 总成本＝847600+4911600=5759200元 单位成本＝总成本/总配送数量 ＝5759200/(616000+717000) ＝4.32048元 3、设计信息系统工程模块、
网上结算公告 为向您提供更为优质的服务，即日起，福州烟草开发推出网上结算系统，系统利用我司与后台扣款合作银行的技术接口，在充分保证资金安全的基础上，实现了网上订货客户实时结算、自主查询实时账户余额、选择扣款账户、查询结算历史记录等功能。受银行系统性能限制，我司将根据实际情况有序逐步授权零售客户网上结算功能，您如果有意开通网上结算服务请尽早向客户经理提出申请。现具体说明如下： 一、开通基本条件 您必须是网上订货客户，采用后台扣款的结算方式，且目前至少已经签约农行借记卡、农行贷记卡、邮政银行借记卡、邮政银行贷记卡、兴业银行借记卡等一种银行卡以上。（兴业贷记卡近期也将支持网上结算，农信社不支持网上结算） 二、开通后享有的服务 1、有效扣款卡查询 点击网上结算的“有效扣款卡查询”菜单，系统会查出，可参与电子扣款的有效的扣款卡信息，如下图所示。
2、有效扣款卡设置 点击“有效扣款卡设置”，系统列出零售户所有的的授信银行卡（包括已经停用的卡），您可以自行决定启用、停用指定银行卡，而且只需点击“设置默认卡”就可以将指定银行卡设置为默认卡，后台扣款 系统会优先选择默认卡进行扣款。界面如下图所示：
3、历史结算信息 点击“历史结算信息”，您可按时间区间查询近三个月的客户的扣款情况，包括扣款失败的单据，及失败原因。界面如下图所示: 4、实时余额查询 点击“实时余额查询”菜单，系统列出可用于网上结算的银行卡，您可选择指定的银行卡，点击“查询实时余额”，系统向银行发起余额查询的请求。等银行返回后，系统在实时余额那一列显示当前实时余额。
4、网上结算 在网上订货订完货以后，您可在订单界面可以看到“马上支付” 的按钮。 点击“马上支付”进入网上结算平台，如果您没有当天的订单，系统显示没有可结算的订单，如果您有当天的订单，系统会显示当天 的订单，并列出可用于网上结算的银行卡，实时余额等信息，您如有
2020年烟草管理办公室工作总结文档3篇 Work summary document of tobacco management offic e in 2020 汇报人：JinTai College
2020年烟草管理办公室工作总结文档3 篇 小泰温馨提示：工作总结是将一个时间段的工作进行一次全面系统的总检查、总评价、总分析，并分析不足。通过总结，可以把零散的、肤浅的感性认识上升为系统、深刻的理性认识，从而得出科学的结论，以便改正缺点，吸取经验教训，指引下一步工作顺利展开。本文档根据工作总结的书写内容要求，带有自我性、回顾性、客观性和经验性的特点全面复盘，具有实践指导意义。便于学习和使用，本文下载后内容可随意调整修改及打印。 本文简要目录如下：【下载该文档后使用Word打开，按住键盘Ctrl键且鼠标单击目录内容即可跳转到对应篇章】 1、篇章1：2020年烟草管理办公室工作总结文档 2、篇章2：烟草办公室工作总结文档 3、篇章3：烟草办公室工作总结文档 篇章1:2020年烟草管理办公室工作总结文档 20xx年，是设立地级***市的开元之年。一年来，市政府办公室积极适应和服务设市的新形势，紧紧围绕市委、市政府中心工作，充分发挥“综合协调、督查落实、信息调研、参谋决策”的职能作用，突出协调服务，创新工作方式，加快工作
节奏，不断提高服务水平，较好地完成了市政府交办的各项工作任务。 一年来，主要抓了以下六个方面的工作： （一）、紧扣中心，围绕大局，全面提高服务工作水平一年来，我们突出政务主体，优化保障服务，注重抓调研、抓协调、抓督查、抓服务，努力当好参谋助手，保证了政府各项工作的有效开展。 1、严谨细致，办文办会提水平。在公文处理上，坚持从严、从精、及时、实效的原则，严格按照《国家行政机关公文处理办法》的规定，从文书处理的收发、印制、传阅、清退、归档、销毁等各个环节入手，严把政策关、时效关、公文体例格式关、文字关和校核关，力求政策清楚、主题突出、观点准确、格式规范、逻辑严谨、准确及时。同时，规范发文行为，精减文件数量，努力做到少行文、行短文、行到文。在会务工作上，严格执行会议审批制度，认真审查会议议题，努力做到少开会、开短会。同时，狠抓会前准备、会中服务、会后落实三个环节，力求会议主题明确，中心突出，务求实效。 2、高质高效，信息工作创一流。一是抓“五点”保质量。抓住重点，紧紧围绕结构调整、工业发展、城市建设、招商引
烟草销售策划方案 烟草销售策划方案 第一、卖好老牌子，关注新品种。 在继续做好20xx年销售较好的卷烟的同时，注意上网搜索、或通过《XX 烟草》《XXX周刊》《XX烟草通讯》《XX在线》等烟草专刊了解卷烟新品种，适当采购并积极向消费者推荐，以扩充消费者选择范围，让他们有更多的选择余地。因为有的年轻消费者喜欢新鲜的，说不定新品种能拉拢生意。 第二、开启新的服务模式，用优质的服务打动顾客 在商品质量、价格同质化的今天，我们零售户要想赢取更多顾客，就必须为顾客提供优质服务、便捷的服务。在销售香烟时推迟试抽服务，让顾客品尝不同品牌的香烟，选择自己喜欢的牌子；购买后抽着不适合，随时更换其他品牌的香烟，补偿差价。这一下那些烟民们都来我这了，虽然免费试抽带来损失，销量却大大增加，正面影响客源也多了，带累了更多的利润，也推动其他商品的销售，一举两得。 第三、善于动脑，用高超的方法留住顾客 首先，要随机应变，根据消费群体有所变化调整香烟品种的进货。每年过了春节，都有外出务工的人员，都要带着几条烟走，一般都是中低档的香烟，大部分都买中南海；到了夏季，许多外省的刮松油的工人陆续而来，上山刮松油，都喜欢抽骄子香烟；过了雨季，开矿就开始了，矿工们喜欢抽10-20元的香烟，紫云销售的挺好。针对每年相对稳定的群体变化，我总是提前调整卷烟购进数量和品牌，保证货源，稳定收入。 其次，要学会预测，提前订货进货。并做好替补产品的酬作，保证销量。有些牌子的卷烟有时候不能都能订到，根据多年的经营经验，探查变化规律，再断货源之前进足货，保证库存。并及时推出替补方案，万一缺货，用哪几种品牌的香烟替补，来稳定客源，吸引顾客。 其三，主动营销，开发大客户。刘叔是我经营中的大客户，每次出了新品牌卷烟，我都亲自登门让他试抽，细致的介绍该品牌的特点。例如黄鹤楼硬红刚上市，我就跑到他家里推销，他认为很好，当场就预定五六条，我请求他替我向他的朋友们推荐，并许诺帮助他购买缺货的卷烟比如红旗渠、红金龙九州腾龙......刘叔认识的朋友都很有钱，自己用并送礼销量都很大，当然也带来了丰厚的利润。 然后我再尽力购进新品如黄鹤楼硬红、黄金叶大金圆，卖给刘叔，哈哈里外赚钱，刘叔也很高兴，拿着黄鹤楼硬红在朋友面前倩炫耀。我就借着朋友间的相互推荐慢慢的打开了大客户的销路。 其四，做好人文关怀，搞好促销。在经营中采取赠送润喉糖、小礼品、纪念品，或者买一送一等方法，吸引顾客的注意力，刺激顾客的购买欲。 总而言之，作为一个零售户，我们要以“顾客至上，服务为王”为原则，我们一方面要认真执行卷烟零售各项政策规定，坚持做到依法经营、合法经营，诚信经营，做一个受顾客尊敬和爱戴的零售人，另一方面，要善于动脑，善于思考，不断在零售经营中总结经验、积累别人的好经验，创新经营理念，和经营方法，做一个学习型的零售商！ （编辑：果宝）
从烟草中提取烟碱 主要仪器与试剂 仪器：烧杯，微型布氏漏斗，抽滤瓶，分液漏斗，圆底烧瓶，锥形瓶。试剂：干燥烟叶2g，5% NaOH溶液20mL，乙醚15mL，饱和苦味酸甲醇溶液，甲醇 1、碱处理。在25mL烧杯中加入2g干燥碎烟叶和2mL 5% NaOH溶液，搅拌10min，然后用带尼龙滤布的布氏滤斗抽滤（1），并用干净的玻塞挤压烟叶以挤出碱提取液。接着用4mL水洗涤烟叶，再次抽滤挤压，将洗涤水合并至碱提取液中。 2、醚萃取。将黑褐色滤液移入25mL分液漏斗中，用15mL乙醚分三次萃取。萃取时应轻旋液体，勿振荡漏斗以免形成乳浊液导致分层困难。上层醚相从漏斗上口倒入25mL圆底烧瓶中（2）。 3、蒸去乙醚。合并醚萃取液，在水浴上蒸去乙醚（3），并用水泵将溶剂抽干。 4、重新溶解。残留物中加入2滴水和1mL甲醇，使残渣溶解，然后将溶液通过放有玻璃毛的短颈漏斗滤入25mL烧杯中，并用1mL甲醇涮洗烧瓶和玻璃毛，合并至烧杯中（4）。 5、制备衍生物。在搅拌下往烧杯中加入2mL饱和苦味酸盐的甲醇溶液，立即有浅黄色的二苦味酸烟碱盐沉淀析出。用玻砂漏斗过滤，干燥称重，测定熔点，并计算所提取的烟碱的百分产量。此操作所得二苦味酸烟碱盐熔点：217~220℃。 6、重结晶。用刮刀将粗产物移入10mL锥形瓶中，加入4mL 50%乙
醇-水（V/V）溶液，加热溶解，室温下静置冷却，析出亮黄色长形棱状结晶。抽滤，烘干，称重，测熔点。纯二苦味酸烟碱盐的熔点为222~223℃。 注释（1）滤纸在碱液中会很快溶胀并失去作用。此处宜采用尼龙滤布挤压过滤。（2）在分液漏斗中进行乙醚萃取时，应注意不时放气，减低乙醚蒸气在漏斗内的压力。此时可一手握紧上口旋塞，让漏斗倾斜下支管口朝上，另一只手打开分液旋塞放气，或者在垂直放置时打开上口旋塞放气。在分离液层时，应小心使醚层与夹杂在中间的出现在漏斗尖底部的少量黑色乳状液相分离。上层液从上口倒出，下层液从下口放出。（3）乙醚易燃。在蒸馏乙醚时应用水浴加热，不能直火加热。同时开窗通风，避免外泄的乙醚蒸气富集遇火点引燃，酿成火灾！（4）烟碱毒性极强，其蒸气或其盐溶液吸入或渗入人体可使人中毒死亡。高浓度的烟碱液操作时务必小心。若不慎手上沾上烟碱提取液，应及时用水冲洗后用肥皂擦洗。
烟草常用有机肥的作用及施用方法 摘要阐述了烟草常用有机肥的作用，并介绍了其施用方法，以期促进有机肥在烟叶生产中的正确施用。 关键词烟叶；有机肥；作用；施用方法 随着现代烟草农业不断推进深入，规模化种植被摆上烟叶工作日程，通过计划、品种、烟田、烟农4个方面优化布局，烟农户均规模得到较大的突破。但与此同时，烟叶颜色偏淡、油分不足、烟叶内在质量下降的问题也进一步突显。并且由于近年来烟田长期高位满负荷运作，伴随烟田种植时间增加，土壤有机质不断减少、砂化、劣化、板结等问题突出，烟株落黄层次不明显和后期抗病性减弱，直接导致烟农抢采、采青现象。通过分析认为在众多影响烟叶质量的因素中，因长期大量施用化肥，忽略有机肥的使用，导致土壤板结，保水性差，土壤有机质含量下降，生物活性降低，磷肥、钾肥及微量元素等养分的利用率不高，是造成烟叶产量和内在烟叶品质的下降的关键因素[1]。 为此，除继续加大土壤改良力度、引导烟农广积农家肥外，将确保有机肥施用量作为提高烟叶质量特色的重点。通过生物有机肥与化肥配合施用使土壤营养状况得到改善，增强烟株吸收能力，能够促进烤烟的生长发育，使烟株抗病能力增强，提高烟叶产量和质量。但是常规的农家制作的有机肥发酵方法不当，发酵不彻底、不均匀，有机肥中还存有大量病虫害。施用有机肥的同时把病虫害也带进烟田。因此采用正确的堆沤方式才能确保有机肥正常发挥作用。 1 有机肥的作用 有机肥料能净化环境、提高土壤肥力、降低农业生产成本、改善农产品品质、促进自然界物质良性循环[2-4]。研究表明，有机肥与化肥配合施用能培肥地力，明显提高作物产量和品质[5-7]，提高植烟土壤中的有机质含量[8]及作物对化肥氮素的利用率[9]。其作用主要表现在以下方面：一是有机肥腐解后，可促进土壤微生物的繁殖，其活动能加速有机质的分解，丰富土壤中的养分；二是有机肥中不但含有氮、磷、钾三要素，还含有硼、锌、钼等微量元素，为农作物提供全面营养；三是有机肥中的有机质分解后，可增强土壤深处的供肥和耐酸碱的能力；四是有机肥能有效改善土壤的水、肥、气、热状况，使土壤变得疏松肥沃；五是有机肥中的有机质分解时产生的有机酸，能促进土壤和化肥中的矿物质养分溶解；六是有机肥施入后，可提高土壤的孔隙度，改善根系的生态环境，促进根系的发育，提高作物的耐涝能力，还可增强土壤的蓄水保水能力，提高作物的抗旱能力；七是在盐碱地上施用有机肥，可改良土壤，有机肥腐解后产生的一些酸性物质和生理活性物质，能够促进种子发芽和根系生长。 2 有机肥施用方法 现在烟草上普遍使用的有机肥主要种类包括豆饼肥、堆肥（堆肥包括沂水家
答案要点： 1、一、概括我国控烟失败的具体表现：烟草价格和税收较低，控制不力；烟草广告泛滥、烟草赞助行为隐性存在；香烟盒上“吸烟危害健康”的宣传不力；公共场所未能全面禁烟。 我国控烟失败的具体表现：第一、烟草价格和税收较低，为实现提高烟草价格和税收的承诺; 第二、烟草广告泛滥、烟草赞助行为隐性存在，未被了承诺中禁止烟草广告和赞助行为的内容；第三、香烟盒上“吸烟危害健康”的宣传不力，与它国相比我国的烟盒包装警示力度不够；第四、公共场所未能全面禁烟，未被了公共场合完全无烟的约定。 2、我国控烟失败的主要原因是：政企不分，烟草业的阻挠。其他原因为：缺乏全国性 的针对公共场所禁止吸烟的法律；广告法中缺乏禁止香烟广告的明确规定，存在隐性的烟草 广告公益活动。 我国控烟失败的原因包括以下几个方面：一是政企不分，工信部既是政府部门又是烟草专卖的管理者的双重身份影响了我国控烟工作的正常开展；二是我国缺乏全国性的针对公共场所禁止吸烟的全国性法律法律；三是现有法律中存在不完备之处，广告法中缺乏禁止香烟广告的明确规定，缺少对烟草参与公益活动的明确禁止规定。以上导致控烟失败原因中最主要的是政企不分。 3、搞好我国控烟工作的启示如下： 一、通过法律法规，明确禁烟的范围，同时广泛宣传，使市民了解。 、提高烟草税费，提高烟草价格
三、成立中介组织：设置禁烟日号召全社会共同帮助吸烟者戒烟 四、加大惩罚力度，对于违规吸烟者给予经济上的重罚 五、加强监管，可以通过技术手段加大对违规者的监督处罚， 4、两者言论的分歧在于政府该以何种理由来禁烟；梁文道反对以限制个体吸烟为目的的禁 烟。吸烟是个人的自由选择。只要不让二手烟危害别人，就应该容许吸烟。 罗秉祥支持以避免当事人受伤的限制自由行为更有价值，所以要禁烟。吸烟危害自身和他人 健康，污染环境，安全隐患严重，因此公权力应当限制诸如此类的个人的自由选择。不能因 为只要不让二手烟危害别人，就容许吸烟。 禁烟道义与利益的抉择 作为《烟草控制框架公约》的缔约方，我国承诺今年1月9日前在室内公共场所和室内工 作场所实现100%禁烟。但时至今日，我国仍无一部国家级的无烟立法，且囿于相关部门政企不分、烟草涨税不涨价、烟草文化难以改变等原因，履约5年内，不仅全民吸烟率没有下 降，二手烟的受害者却在3年内增加了2亿人。 按照《烟草控制框架公约》中提出的5个控烟关键政策和10项烟草控制指标，专家评估，中国控烟履约的绩效综合得分，仅为37.3分，中国“爽约”已是必然。可是，只要你回 顾中国履约5年内的所作所为，会发现我们对于禁烟这件事其实并无诚意。 2010年11月在乌拉圭举行的《公约》缔约方第四次会议，旨在探讨《公约》中对涉及“烟 草制品成分管制和烟草制品披露的规定方面”的实施准则，但我国由于以工信部和烟草专卖
2018年烟草办公室工作总结 山东京鲁烟叶复烤有限公司办公室 20xx年工作总结和 20xx年工作打算20xx年，办公室在公司领导班子的领导下和各兄弟单位的大力支持下，认真贯彻二届二次董事会议精神和公司工作会议精神，始终坚持务实、高效、勤奋、廉洁的工作作风，紧紧围绕生产经营这一重点工作，切实履行办公室的职能，在为领导、为职工群众服务上做了大量有成效的工作，全面推进了各项工作的顺利开展，较好地完成了工作任务。 现将今年的工作情况总结汇报如下： 一、20xx年办公室工作情况 (一)增强履行职能意识，切实为生产经营工作服务。 我们坚持从服务生产经营工作、服务发展大局出发，履行好办公室职能，发挥作用，积极做好服务工作。 1. 做好贯标及各类资质的申报、换证、年检等工作。 2.做好客户接待工作。 随着公司业务的不断扩大，客户接待工作成为重中之重，办公室作为职能部门，20xx年共接待了上烟(集团)公司、山东中烟公司、河北中烟公司，包括有限公司储运站在内等 16 家烟厂客户，工作量非常大，尤其在生产旺季，平均每天要接待 40 多人次。在人手少、接待任务重的情况下，办公室精心组织、综合协调、周密安排，本着节约和体现地方特色的原则，提高接待工作水平和服务质量，确保满足客户的合理性需求，配合领导圆满完成了烟厂客户、上级视察、来访等各类接待任务，赢得了客户、领导的广泛好评，并为保持企业良好
形象做出了贡献。 3.做好后勤保障工作。 一是积极抓好一、二食堂的管理工作，确保为广大职工提供良好的伙食条件，尤其旺季生产以来，一食堂加班加点，全力配合，保证饭菜供应及时、品种多、价格实惠。二是今年对职工宿舍管理进行了改革，对外承包给保洁公司进行专门管理，每年可为企业节约管理费用 3 万元，并且职工宿舍环境、卫生得到大大改善，管理水平有了很大提高，进一步为职工提供了良好的生活环境，满足了广大职工群众的基本生活要求，有力的支持了公司的生产经营工作。 4. 做好档案管理工作。 今年，为搞好档案管理工作，公 2 司领导高度重视，把档案工作列入了议事日程，办公室主要做了以下工作：一是进一步建立健全了档案工作管理制度，调整充实了档案工作领导小组和各科室兼职档案员，完善了基础设施，确保了档案安全。二是抓了档案的开发利用，编印了《全宗指南》《组织机构沿革》《大事记》《基础数字、、、汇编》等资料，为利用者和公司各项工作服务，档案管理水平有了进一步提高，在今年省档案局委托市档案局组织的大检查中受到好评。 5.做好企业宣传工作。 去年潍坊烟草网站投入运营以来，办公室设立信息员，积极组织公司各个岗位上的宣传员撰写企业报道，通过网络及时宣传企业取得的新成绩及工作动态，20xx年共向潍坊烟草网站投稿 33 篇，为树立企业形象发挥了积极的作用，进一步扩大了影响，提高了企业知名度。 (二)树立正确工作意识，做好办文、办会、办事工作。
烟草活动方案 篇一：娇子卷烟营销策划方案 娇子营销策划方案 a市烟草公司"娇子"(大金元)品牌营销策划方案 一,策划导入 目前,我市零售20元左右/包的卷烟共有玉溪,黄鹤楼和芙蓉王等三个品牌.由于我市人口众多,近年来经济发展迅速,在销品牌由于货源问题,难以满足本市市场需求. 因此,我公司决定再引入一个该档位品牌进行重点培育.经研究分析,认为"娇子"(大金元)卷烟品质较好,定位清晰,预期成长性较强,因此决定将其作为重点培育对象,拟通过12个月的培育使其成为该档次的又一主销品牌,成为我公司的又一利润增长点. 二,策划分析 (一)策划环境分析 1,宏观环境分析: 随着我市经济的不断发展,20元左右/包的卷烟需求量日益增加;"娇子"为全国重点卷烟品牌,符合品牌政策发展导向;同时,"娇子"(大金元)也是省公司主推品牌,其在我市上市拥有行业支持.2,生产企业分析: 该产品的生产商川渝中烟是一家拥有较强科研实力,较大生产规模,较高市场评价的大型卷烟生产企业,"娇子"(大金元)集合了该公司的多
项先进技术,品质超群. 3,产品分析: "娇子"系列在我市知名度较高,拥有一定的品牌美誉度和忠诚度,为"大金元"销售创造了有利条件.4,竞争对手分析: 目前该价位的几个品牌,虽然在我市占有较大市场份额,市场接受度高,但我市该档卷烟消费需求不断扩大,"娇子"(大金元)的销售还是拥有较大市场空间. (二)SwoT分析 S优势: 1,娇子系列知名度高; 2,他地上市取得较好反馈; 3,a市烟草营销队伍能力强; 4,产品科技含量高,定位准确 w机会: 1,a市经济发展迅速,旅游业的发展带来了新的市场机会; 2,国家品牌政策背景支持; 3,a市烟草公司培植新的增长点; o劣势: 1,新品上市接受度低; 2,同价位竞争优势不明显 T威胁 :1,该价格档位的主销品牌十分突出,引导消费具有相当难度;
背景资料：《烟草控制框架公约》 一、《烟草控制框架公约》产生的背景： 世界卫生组织的研究表明，全球目前有烟民约１３亿人，每年有近５００万人因吸烟而死亡，每年支出的医疗费和造成的经济损失超过2000亿美元。烟草已成为继高血压之后的第二号杀手。如果不加以控制，到2025年全球吸烟者将达到13亿至17亿，每年因吸烟致死的人数有可能增加一倍。中国目前的烟民数量约３．２亿。近年来，中国的吸烟率呈下降趋势。 二、《烟草控制框架公约》经过： １９９６年５月提议进行《烟草控制框架公约》(FCTC) 的谈判。 １９９９年５月，第５２届世界卫生大会决定启动公约的谈判 ２００３年５月，在日内瓦召开的第５６届世界卫生大会上，世界卫生组织１９２个成员一致通过了第一个限制烟草的全球性公约——《烟草控制框架公约》，为在全球控制烟草危害、共同维护人类健康提供了法律框架。 ２００４年１１月３０日，秘鲁成为第４０个批准该公约的国家，至此，公约的批准国家达到了符合国际法效力的规定数目。《烟草控制框架公约》将在获得40个缔约国批准90天后正式生效。 ２００５年２月２8日，世界第一个旨在限制全球烟草和烟草制品的公约《烟草控制框架公约在全球４０个国家生效。 ２００３年１１月，中国成为该公约的第７７个签约国。２００５年８月，全国人大常委会表决批准了该公约，１０月正式向联合国交存了批准书。 三、什么是国际烟草控制框架公约
《烟草控制框架公约》是由世界卫生组织主持达成的第一个具有法律效力的国际公共卫生条约，是针对烟草的第一个世界范围多边协议。 《控烟公约》共分11个部分和38项条款。它对烟草及其制品的成分、包装、广告、促销、赞助、价格和税收等问题均作出了明确规定。具有实质性影响的内容主要体现在烟草制品的包装和标签，烟草广告、促销和赞助，责任包括成分信息披露，履约报告等方面。核心内容在于制定与烟草广告、宣传和销售以及终止烟草走私的全球性法规。公约的主要目标是提供一个由各缔约方在国家、区域和全球各级实施烟草控制措施的框架，以便使烟草使用和接触“二手烟”频率大幅度下降，从而保护当代和后代人免受烟草对健康、社会、环境和经济造成的破坏性影响。 公约生效后，各缔约国须严格遵守公约的各项条款：提高烟草的价格和税收，禁止烟草广告，禁止或限制烟草商进行赞助活动，打击烟草走私，禁止向未成年人出售香烟，在香烟盒上标明“吸烟危害健康”的警示，并采取措施减少公共场所被动吸烟等。 《公约》明确指出，吸烟会引起上瘾，吸烟和被动吸烟会导致“死亡、疾病和丧失机能”，并且对目前吸烟儿童和青少年日益增多、烟草广告和促销手段产生影响表示警惕。 《公约》要求各国至少应该以法律形式禁止误导性的烟草广告，禁止或限制烟草商赞助的国际活动和烟草促销活动，镇压烟草走私，禁止向未成年人出售香烟，在香烟盒上用３０％至５０％的面积标明“吸烟危害健康”的警示，以及禁止使用“低焦油”、“清淡型”之类欺骗性词语。 《公约》还要求各国的烟草税收和价格政策应该以减少烟草消费为目标，禁止或限制销售免税烟草；室内工作场所、公共场所和公共交通中应该采取措施，以免人们被动吸烟。 《公约》第13条规定：“各缔约方应根据其宪法或宪法原则，在公约对其生效后的5年内，广泛禁止所有的烟草广告、促销和赞助。”
单位名称：_________________________ 姓名：_________________________ 日期：_______年______月______日 2020烟草公司个人业务工作总结通 用版 ——Summaring Experience, Carrying Over To Go Forward Striving for More Achievement。
2020烟草公司个人业务工作总结 我叫，20XX年3月至今，一直在烟草有限责任公司营口卷烟厂制丝车间中心控制室的担任一名操作工。之前20XX年8月至20XX年3月，在营口卷烟厂制丝车间膨胀线冷端担任操作工工作8年来，我一直严格要求自己，工作兢兢业业，勤勤恳恳，在自己本职工作岗位上，多年如一日，爱厂如家，爱岗敬业，勤学苦钻，以干好本职工作的实际行动在平凡的工作岗位上践行着"两个至上"的庄严承诺，多次在工厂、车间举行的技术比武、考试中，名列前茅，被评为工厂先进生产（工作）者、操作能手，多次获得领导的好评。 一、积极的学习态度，扎实的工作作风 制丝车间是工序最多、工艺最复杂、生产流程最长的车间。全线7个工序中有5个工序都由中央控制室直接进行整线操作控制。如果不对制丝生产流程、各道工序操作要领、工艺参数、工艺指标了如指掌，如果没有很强的敬业精神，很难胜任中控室操作岗位。到中控室之初，为了能让自己尽快适应新的工作岗位，我除了跟班向师傅、向同事学习请教外，还主动延迟下班时间，向其它班组同事请教，逐步在运行实践中摸索操作要领，积累经验心得。每当中控室出现设备或者程序故障，我总会挤在众多维修师傅面前一边观察调试过程，一边不停地询问，一边在本子上不停地纪录。为了弄懂一个工艺技术难题，我甚至不惜花费长途话费打电话到学校向曾经的专业老师请教。功夫不负有心人。短短两个月时间，我就熟练掌握了制丝生产流程、各工序的工艺参数指标以及生产组织、协调等技能，
UF/CRM烟草行业解决方案 一、概述 中国加入WTO，全球经济一体化进程不可逆转，市场竞争环境正在发生巨大变化，企业将不得不面对以“客户”、“竞争”和“变化”为特征的时代背景。随着Internet技术的发展与广泛应用，人类社会已从工业经济时代进入到“电子商务”时代，大规模生产(Mass Production)模式将被迫向大规模定制(Mass Customization)模式转变；但由于国家专控，烟草行业一直是比较特殊的行业，较之其他行业竞争压力相对较小，但近年来企业感受到越来越大的生存危机。国内香烟企业数量庞大，但占领全国市场的大企业屈指可数，绝大部分中小企业受区域政策保护维持发展，传统的管理模式和方法是企业进一步发展的掣肘，如果烟草行业企业能抓住有利时机，把握时代企业竞争核心，建立一套以客户为中心的信息管理系统，将为企业的生存与发展带来不可估量的价值！企业可以利用计算机信息技术手段来提升企业管理水平，以适应全球一体化的经济发展，同时利用Internet技术将企业业务进一步向海外扩展。 二、UF/CRM系统功能目标 根据烟草行业用户营销与服务特点，用友UF/CRM主要从市场营销、销售管理、服务管理和管理拓展4个方向和层面对企业管理起着促进作用，详细功能目标如下： (1)市场营销 ★提供企业产品市场分析，为企业新产品的研发和市场推广提供参考 包括：产品销售构成分析； 产品特性分析 产品购买周期分析； 客户购买习性分析等
★提供全面、实时、深入的竞争信息管理、分析 包括：竞争厂商、竞争产品、竞争策略、竞争力度信息管理与分析预测 ★提供灵活、强大的渠道管理功能 包括：渠道厂商及产品与服务信息管理 渠道产品库存管理 渠道销售机会跟踪、业务进程干预 渠道支持、渠道信息交换等 ★提供功能强大的价格、折扣管理 针对不同级别客户的灵活的价格与折扣管理 ★统一管理、责任到人-加强市场活动管理 对产品或服务制定的市场活动方案的形成、规划、管理和评估分析 (2)销售管理： ★通过对客户档案信息、交往记录、报价记录、交易记录、反馈记录等信息的动态获取和分析，使企业多角度的了解客户需求，把握销售机会； ★对销售、服务等具体业务中产生的历史信息进行统计、汇总与分析，挖掘出最有价值的20%的客户；通过采取区别对待措施，为金牌客户提供金牌服务，以最大限度的巩固与金牌客户的关系，保证企业经营业绩。 ★让所有业务员对客户每次报价的内容和过程一目了然，避免了由于沟通渠道不畅造成的报价混乱。 ★缩短产品销售周期，提高销售效率
【烟草方案】重庆市南川区创建无烟草广告城区实施 方案 创建无烟草广告城区实施方案 根据南川区创建国家卫生城市工作的整体安排和部署，按照《中华人民共和国广告法》、《烟草广告管理暂行办法》、《烟草专卖法》和《重庆市爱国卫生条例》的规定，为加强城市管理，减少烟草广告对公众的健康带来的影响，保护人民群众身体健康，特制定本实施方案。 一、工作目标 2016年5月底，成功创建无烟草广告城区。 二、实施标准 （一）在广播、电影、电视、报纸、期刊等宣传媒体上无烟草广告或变相烟草广告。各类等候室、会议厅堂、体育比赛场馆等公共场所不设置烟草广告或变相烟草广告。 （二）在建成区无任何形式的烟草广告或变相烟草广告,即在街道广场、车站及其公共设施,交通沿线两侧等地的建筑物,以及路牌、霓虹灯、电子显示牌、橱窗、灯箱、墙壁、遮阳伞和烟草销售点等无烟草广告或变相烟草广告。 （三）不利用交通工具及行李、运货车等移动设施设置、绘制、张贴烟草广告或变相烟草广告。 （四）不利用互联网、音像制品和印刷品（如站台票、门票等）发布以及派发、促销各类烟草广告或变相烟草广告。 （五）不运用烟草赞助的形式开展文化、体育等活动,不在文体活动中发布烟草广告或变相烟草广告、进行烟草促销活动。
三、工作任务 （一）广泛开展宣传动员 由区创卫办牵头，区文化委、区工商分局、区市政园林局、区卫生计生委、区烟草专卖局等部门参与，加强创建无烟草广告城区活动的宣传，使全社会高度关注和充分认识到设置或变相设置任何形式烟草广告的社会危害性，增强约束力，提高自觉性，为创建无烟草广告城区创造良好的舆论氛围。区委宣传部、区卫生计生委、区教委、区交委、区文化委等部门要广泛深入开展公共场所禁烟、各类人群控烟和戒烟的健康教育活动，不断提高广大民众对吸烟有害健康的认识，增强控烟自觉性，提高健康素质和文明程度。 （二）扎实开展集中整治 区工商分局要加强烟草广告的监督管理，做好商场、超市、商店、小副食店、小卖部、餐馆、饭店以及辖区公路（高速路）沿线的无烟草广告工作，在新审批的店招店牌中，不能出现与烟草及烟草相关的名称；区市政园林局要做好城区主次干道、广场、公用设施等建筑物或空间的无烟草广告工作；区交委要做好公共交通工具及车站无烟草广告工作；区文化委要做好文化馆、图书馆、娱乐场所、体育场馆等场所无烟草广告工作；各机关、企事业单位负责做好本单位内外无烟草广告工作；学校、医院内设小卖部、食堂等场所不准出售香烟。区创卫办负责协调有关职能部门对我区烟草广告进行执法监督检查和治理整顿，确保在2016年5月底前完成创建工作。 （三）全面开展专项检查 由区卫生计生委牵头，区市政园林局、区烟草专卖局、区工
(实验)烟草中提取烟碱
实验三、从烟草中提取烟碱 内容：P93-96和P42-44 一、实验目的（明确） 1、 学习从烟草中提取烟碱的基本原理和方法。 2、 初步了解烟碱的一般性质。 3、 掌握水蒸汽蒸馏的操作技术。 二、实验原理（介绍） 烟草中含有多种生物碱，除主要成分烟碱（约含2 ~ 8 %）外，还含有去甲烟碱、 假木烟碱和多种微量的生物碱。烟碱又名尼古丁，是由吡啶和吡咯两种杂环组成的含氮碱，其结构式如右图： 烟碱能与HCl 结合生成烟碱盐酸盐（弱碱强酸盐）而溶于水中，在此提取液中加入强碱NaOH 后，可使烟碱游离出来。 + HCl → 游离烟碱在100℃左右具有一定的蒸气压。因此，可利用水蒸气蒸馏法分离提取。 N N CH 3 N N CH 3 N N CH 3
由烟碱的结构可知，烟碱具有碱性，它不仅可以使红色石蕊变蓝，还可以使酚酞试剂变红，并可以被KMnO4溶液氧化生成烟酸，与生物碱试剂作用产生沉淀。 附：水蒸气蒸馏原理（见书P46） 三、实验仪器与试剂（要求学生认真检查） 1. 仪器 长颈圆底烧瓶（250 mL）圆底烧瓶（100 mL）直形冷凝管电热套玻璃棒试 管止水夹 蒸汽导管（导入、导出）烧杯（100 mL）球形冷凝管接液管T形管滴 管洒精灯 锥形瓶（100 mL）量筒（100 mL） 2.试剂 烟叶（或烟丝）HCl溶液10 % NaOH 40 % KMnO40.1 % 酚酞0.1 % Na2CO3 5 % 苦味酸（饱和） 3. 其它 红色石蕊试纸沸石 四、实验内容（简单介绍） 1、烟碱的提取 取一支烟，拨去外纸，将烟丝置于100 mL 圆底烧瓶内，加入20 mL10％HCl溶液，安装好回流装置，回流20 min。（如图3. a） 将反应化合物冷却至室温，在不断搅拌下慢慢滴加40％NaOH溶液，使之呈明显碱性（用红色石蕊试纸检验）。 按图3. b安装好水蒸汽蒸馏装置。通入冷却水后，用电热套加热水蒸汽发生器，当有大量水蒸汽产生时，关闭T形管上的止水夹。
2015年烟草办公室工作总结 (四)积极组织参与各类双语教学活动,成绩突出。在今年10月地区组织的学前“双语”讲课比赛中,县幼儿园的高咏梅荣获一等奖,姜红玉荣获二等奖;在小学数学“双语”课堂比赛中,二乡的安尼瓦尔和六乡的阿米娜荣获二等奖。这些成绩说明我们的双语教学在不断的努力中已取得阶段性的进展。 以下是由J.L为您整理推荐的《2015年烟草办公室工作总结》正文，欢迎参考阅读。 二要始终坚持以强化管理为保证。办公室犹如一部机器，文稿起草、文件核校、公文处理、会议安排、机要交通、安全警卫、后勤接待等各项工作，都是这部机器上的零部件。要使办公室工作的这部机器上的所有零部件始终处于良好状态，保证整个机器的最佳运转，就必须建立一套科学的管理方式和工作手段，进行规范化运作，提高制度化、规范化、科学管理水平,要严格制度约束，用制度管人，按制度办事，做到人人责任分明，处处有章可循，事事一办到底。要理顺工作关系，合理、科学地确定内部工作分工、任务衔接和业务联系，缩短办事流程，简化中间环节，加快工作节奏。每一项工作都要从全局出发，确保办公室日常运转的灵敏、高效和有序。 篇一：2015年烟草办公室工作总结 二是信息工作取得了新的成绩。办公室一年来共向县信息科、县文明办、《亳州日报》、《安徽日报》报送各种信息100余条，其中采用
率达到60%，为上级领导了解岳坊镇的情况发挥了重要作用。 山东京鲁烟叶复烤有限公司办公室20xx年工作总结和20xx年工作打算20xx年，办公室在公司领导班子的领导下和各兄弟单位的大力支持下，认真贯彻二届二次董事会议精神和公司工作会议精神，始终坚持“务实、高效、勤奋、廉洁”的工作作风，紧紧围绕生产经营这一重点工作，切实履行办公室的职能，在为领导、为职工群众服务上做了大量有成效的工作，全面推进了各项工作的顺利开展，较好地完成了工作任务。 现将今年的工作情况总结汇报如下： 一、20xx年办公室工作情况 (一)增强履行职能意识，切实为生产经营工作服务。 我们坚持从服务生产经营工作、服务发展大局出发，履行好办公室职能，发挥作用，积极做好服务工作。 1.做好贯标及各类资质的申报、换证、年检等工作。 在20xx年的贯彻ISO9001：2000 版标准工作中，办公室进一步明确、规范工作程序和责任分工，加强学习、理解和吃透文件精神，积极配合、注重沟通，对所负责的程序文件操作严谨，工作细致，确保了标准的贯彻落实，顺利通过了北京卷烟厂今年组织的第二方质量认证。同时，办公室积极与有关主管部门加强沟通与协调，顺利完成了企业营业执照、机构代码证、专卖生产许可证、车辆等年检工作，为京鲁公司获得更多的市场“通行证”进而争取更多客户和占领市场付出了一定的努力。
自治区烟草安全规划方案建议书 目录 1概述 (1) 2自治区烟草公司业务网络现状及需求分析 (2) 3信息安全规划思路 (3) 3.1 信息安全目标和工作思路 (3) 3.2 信息安全建设主要任务 (3) 4第一阶段-迫切阶段 (7) 4.1加强区公司与地州公司的边界访问控制 (7) 4.2解决区公司的网页安全问题 (7) 4.3提升入侵防御能力 (7) 4.4加强对区公司、地州终端的桌面管理能力 (8) 4.5解决VPN系统的更新并且有效过渡的问题 (9) 4.6提升区公司及地州公司对网络可管理的能力 (9) 4.7加强对上网行为审计的能力 (9) 5第二阶段信息安全建设方案 (11) 5.1 建设原则 (11) 5.2 遵照的标准或规范 (12) 5.3 安全建设的思路和方法 (13) 5.4 安全域建设 (13) 5.4.1安全域基本概念 (14) 5.4.2安全域划分的原则 (14) 5.4.3安全域理论 (17) 5.5 统一认证授权系统技术方案 (22) 5.6 自治区烟草公司网络安全评估 (31) 6第三阶段信息安全建设方案 (61) 6.1建设内容 (61) 6.2建设需求 (61) 6.34A统一管理平台建设方案 (61) 6.3.1统一日志审计子系统技术方案 (63) 6.3.2功能概述 (63) 6.3.3安全日志采集 (64) 6.3.4安全日志多维分析 (64) 6.3.5安全日志实时展现 (65) 6.3.6报表分析 (67) 6.3.7审计策略配置 (69) 6.4 系统平台和应用系统安全建设方案 (70) 6.4.1认证、授权与行为审计的基本概念 (70) 6.4.2认证、授权与行为审计体系的建设原则 (70) 6.4.3实施效果 (71)