微生物学实验复习题
一、选择题
1.革兰氏染色的关键操作步骤是：
A. 结晶紫染色
B. 碘液固定
C. 酒精脱色
D. 复染
2.放线菌印片染色的关键操作是：
A. 印片时不能移动
B. 染色
C. 染色后不能吸干
D. A和C
3.高氏培养基用来培养：
A. 细菌
B. 真菌
C. 放线菌
4.肉汤培养基用来培养:
A. 酵母菌
B. 霉菌
C. 细菌
5.无氮培养基用来培养:
A. 自生固氮菌。
B. 硅酸盐细菌
C. 根瘤菌
D. A、B 均可培养
E. A、B、C 均可培养
6.在使用显微镜油镜时，为了提高分辨力，通常在镜头和盖玻片之间滴加:
A. 二甲苯
B. 水
C. 香柏油
7.常用的消毒酒精浓度为:
A. 75%
B. 50%
C. 90%
8.用甲醛进行空气熏蒸消毒的用量是:
A. 20ml/M3
B. 6ml/M3
C. 1ml/M3
9.实验室培养基高压蒸汽灭菌的工艺条件是:
A. 121℃/30min
B. 115℃/30min
C. 130℃/30min
10.巴氏消毒的工艺条件是:
A. 62-63℃/30min
B. 71-72℃/15min
C. A.B. 均可
11.半固体培养基的主要用途是:
A. 检查细菌的运动性
B. 检查细菌的好氧性
C. A.B. 两项
12.半固体培养基的琼脂加入量通常是:
A. 1%
B. 0.5%
C. 0.1%
13.使用手提式灭菌锅灭菌的关键操作是:
A. 排冷气彻底
B. 保温时间适当
C. 灭菌完后排气不能太快
D. A-C
14.目镜头上的“K”字母表示:
A. 广视野目镜
B. 惠更斯目镜
C. 补偿目镜
15.目镜头上的“P”字母表示:
A. 平场目镜
B. 广视野目镜
C. 平场补偿目镜
16.物镜头上的“PL”字母表示:
A.正低相差物镜
B.正高相差物镜
C.负高相差物镜
17.物镜头上的“UVFL”字母表示。
A. 无荧光物镜
B. 照相物镜
C. 相差物镜
18.镜头上标有“TC”字母的镜头是:
A. 相差调整望远镜
B. 摄影目镜
C. 相差目镜
19. “PA”表示:
A. 马铃薯培养基
B. 高氏培养基
C. 肉汤培养基
20.无菌室空气灭菌常用方法是:
A. 甲醛熏蒸
B. 紫外灯照射
C. 喷石炭酸
D. A.B. 并用
21.干热灭菌的关键操作是:
A. 灭菌物不能有水
B. 保温过程中不能开箱门
C. 降温不能太快
22.霉菌水浸制片的关键操作是：
A. 菌丝要分散
B. 菌丝首先要用50% 的乙醇浸润
C. 盖盖玻片不能有气泡
D. A-C
23.加热法染芽胞的染料通常是:
A. 孔雀绿
B. 结晶紫
C. 复红
D. 蕃红
24.复红法染鞭毛的关键操作是:
A. 玻片干净
B. 染料新鲜
C. 菌体活化适当
D. A、B、C
25.镀银法染鞭毛的关键操作是:
A. 玻片干净
B. 染料无沉淀
C. 加热适当
D. 菌体活化适当
E. A-D
26.进行简单染色使用的染色液通常是:
A. 复红
B. 蕃红
C. 结晶紫
D. 孔雀绿
E. A-D 均可
27.物镜头上的“APO”字母代表:
A. 消色差物镜
B. 复消色差物镜
C. 半消色差物镜
28.物镜头上的“Ach”字母表示:
A. 平场物镜
B. 超平场物镜
C. 消色差物镜
29.物镜头上的“NH”字母表示：
A. 正相差物镜
B. 负相差物镜
30.物镜头上的“0.17”表示：
A. 要求的盖玻片厚度
B. 要求的载玻片厚度
C. 镜头浸油的深度
31.镜头上标有“NFK" 字母的镜头是：
A. 照相目镜
B. 荧光目镜
C. 相差目镜
32.目镜头上的“PK”字母表示：
A. 平场目镜
B. 补偿目镜
C. 平场补偿目镜
33.物镜头上的"Splan" 字母表示:
A. 超平场物镜
B. 平场物镜
C. 消色差物镜。
34.物镜头上的"Splan Apo" 表示:
A. 超平场复消色差物镜
B. 超平场半消色差物镜
C. 超平场物镜
35.物镜头上的"Plan Apo" 表示:
A. 超平场物镜
B. 平场物镜
C. 平场复消色差物镜
36.物镜头上的"Plan" 字母表示:
A. 平场物镜
B. 消色差物镜
C. 超平场物镜
37.目镜头上的"WF" 字母表示:
A. 广视野高眼点补偿目镜
B. 高眼点目镜
C. 广视野目镜
38.目镜头上的"SWK" 字母表示:
A. 超广视野目镜
B. 高眼点补偿目镜
C. 平场补偿目镜
39.目镜头上的"WHK" 字母表示:
A. 超广视野目镜
B. 广视野高眼点目镜
C. 平场补偿目镜
40.物镜头上的"F.L" 字母表示:
A. 消色差物镜
B. 半消色差物镜
二、判断题
1.无菌吸管上端塞入棉花是为了过滤口中的有菌空气。
2.无菌吸管上端塞入棉花的目的是为了防止菌液吸入口中
3.稀释平板测数时，放线菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300 个之间的稀释度进行计数。
4.稀释平板测数时，细菌计数的标准是选择每皿中菌落数在30-300 个之间的稀释度进行计数。
5.稀释平板测数时，细菌，放线菌，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在 30-300 个的稀释度进行计数。
6.稀释平板测数时，真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100 个的稀释度进行计数。
7.稀释平板测数时，细菌、放线菌、真菌的计数标准是选择每皿中菌落数在10-100 个的稀释度进行计数。
8.用混菌法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是1ml。
9.用涂抹法测微生物活菌数时，每个平皿中的菌液加入量是0.1ml。
10.用油镜镜检时应将聚光器升至最高。
11.使用高倍镜时, 可将聚光器升至最高。
12.为了满足微生物对微量元素的需要，配制培养基所用的水最好使用自来水。
13.稀释测数用的无菌水通常是由自来水灭菌而成。
14.观察根霉，青霉只需用低倍镜观察即可。
15.实验室通常使用血球计数板测微生物的总菌数。
16.浸油的油镜头可用软的卫生纸擦净。
17.为了节省时间，可直接在染色涂片上滴加香柏油后, 直接用油镜观察。
18.使用油镜的正确操作步骤是:
（1）低倍镜观察。
（2）高倍镜观察。
（3）转出高倍镜头，滴加香柏油后用油镜观察。
19.在擦拭显微镜镜头时，应向一个方向擦拭。
20.显微镜镜头的放大倍数越大，它的数值孔径值越大，其镜口角也越大。
21.稀释平板测数通常是采用十倍稀释法。
22.稀释平板测数通常采用的是二倍稀释法。
23.做稀释平板测数时，只需一支吸管从头稀释到尾即可。
24.做稀释平板测数时，每做一个稀释度都必须更换一支无菌吸管。
25.稀释平板测数时，无论是用混菌法，还是用涂抹法, 每个平皿中的菌液加入量都是 1ml。
26.稀释平板测数时，无论是用混菌法，还是用涂抹法，每个平皿中的菌液加入量都是 0.1ml。
27.实验室做固体培养基时，常加 1.8% 的琼脂作凝固剂，做半固体培
养基时, 琼脂加入量通常是 0.5%。
28.实验室做固体培养基，常加 2% 的琼脂作凝固剂，做半固体培养基时，琼脂加入量通常是 1%。
29.E. coli经革兰氏染色后，菌体呈红色，它是革兰氏正反应细菌。
30.在光学显微镜下，根霉的孢子囊是透明的。
31.使用手提灭菌锅灭菌后，为了尽快排除锅内蒸汽，可直接打开排气阀排气。
32.所有苏云金杆菌的芽胞在菌体的中央。
33.所有真菌菌落的表面干燥，呈绒毛状。
34.所有放线菌菌落表面干燥，呈粉粒状。
35.所有细菌菌落的表面都是光滑湿润状。
36.镜台测微尺每小格的实际长度是10 微米。
37.目镜测微尺每小格的实际长度是 10μm。
38.镜台测微尺每小格的实际长度是 10nm( 纳米)。
39.血球计数板两边的平台比计数区高 0.1cm。
40.血球计数板两边的平台比计数区高 0.1mm。
41.棉花塞塞入试管的长度应为棉塞全长的 2/3。
42.棉花塞入试管的长度应为棉塞全长的 1/2。
43.摆斜面的长度应不超过试管长度的 2/3。
44.摆斜面的长度应不超过试管长度的1/2。
45.血球计数板计数区的面积是 1 mm2。
46.用血球计数板计数时，任数 5 个大方格(80 个小格) 的菌数即可。
47.在使用细菌计数板计数时，为了防止计数偏大，计数区四周压线的菌只能数两边。
48.目镜测微尺每格的实际长度是未知的，需用长度已知的镜台测微尺校正。
49.测微生物的细胞大小时, 需要校正的是镜台测微尺每格的实际长度。
50.测微生物细胞大小时，需要校正的是目镜测微尺每格的实际长度。
51.血球计数板计数区每小格的体积是1/4000mm3。
52.血球计数板计数区共有400 个小格，每小格的面积是 1/400 cm2。
53.用分装器将培养基分装试管时，应谨防培养基沾染试管口。
54.琼脂的熔化温度是 80℃以上，凝固温度是 45℃以下。
55.琼脂的熔化温度是 95℃以上，凝固温度是 45℃以下。
56.玻璃器材洗净后在急需时可采用高压蒸汽灭菌，而不能用干热灭菌。
57.细菌计数板每小格的体积是 1/20000 mm3。
58.血球计数板计数区每小格的体积是1/4000cm3。
59.无菌室用甲醛熏蒸消毒后可喷氨水以减少甲醛的刺激。
三、填空题
1.霉菌水浸片的制片程序是_________, ____________, ___________, _____________,_____________, _________________。
2.放线菌印片染色的操作程序是_______________, _____________,
_____________, _______________, ____________, ________________。
3.固体培养基常用__________ 作凝固剂，普通固体培养基的用量一般为__________ ，半固体培养基的用量一般为_____________。
4.简单染色的操作程序是_____________, ___________, ___________, __________, __________, __________。
5.使用手提式灭菌锅进行灭菌的操作程序是__________, __________, __________, _________,___________, __________, ___________, __________, ___________, ____________。
6.实验室配制固体培养基的操作程序是______ __、____________、
_____________、_______________、___________________、_____ ________________、
___________________。
7.有荚膜的细菌用负染色法染色后, 荚膜为____ 色，菌体为_____ 色。
8.细菌经革兰氏染色后，革兰氏正反应菌呈_______，革兰氏负反应菌呈________。
9.细菌经简单染色后呈_________。
10.显微镜的光学系统由_________,_________,__________和__________ 组成。
11.显微镜的机械部分包括__ _______、____ _____、___________、
____________、____________、___________、______________、____ ______、____________等九部分组成。
12.高氏培养基通常用来培养_________ ，其 pH 值为__________。
13.PA 培养基通常用来培养_________，其 pH 值为___________。
14.牛肉膏、蛋白胨培养基通常用来培养____ 菌，其pH 值为________。
15.干热灭菌的工艺条件是_____________________。
16.使用显微镜低倍镜观察时, 聚光器应该__________，使用显微镜高倍镜观察时，聚光器应该____________________。
17.革兰氏染色的关键操作是_____________________。
18.显微镜的放大倍数越大，焦深________ ，调焦应该_____________。
19.按培养基的形态, 可将培养基分为____________、______ ____、
__________三种类型。
20.配制常规培养基时通常用________________水。
21.干热灭菌通常用来灭菌 _____________，培养基的灭菌通常用________________。
22.细菌稀释测数通常采用___________ 稀释法，稀释用试管无菌水为__________ 毫升。
23.配制培养基时常用__________ 和 ____________ 调节 pH 值。
24.按培养基的特殊用途, 可将培养基分成 __________、_________、
________________ 等。
25.选择培养基可用来分离培养我们所需的特殊微生物类群，例如我们要从土壤中分离纤维分解菌，可以利用 ________作唯一碳源来筛选 _________；要分离产蛋白酶的微生物，可以利用 __________ 作唯一氮源分离__________。
26.革兰氏染色的操作程序是__________, __________, ___________, __________, ________________, _____________, ____________, _____________, ____________, ____________, ___________, ____________。
27.培养基是人工配制的适合不同微生物生长繁殖或_________ 的
营养基质。按营养物质的不同来源可分为 ___________、_____________、_____________ 三大类。
28.高倍镜头的数值孔径通常为_________，放大倍数为____________。
29.油镜头的数值孔径通常为_____________，放大倍数为____________。
30.低倍镜头的数值孔径通常是__________，放大倍数为____________。
31.穿刺接种使用的接种工具为_________，斜面接种使用的接种工具为_________。
32.进行稀释测数使用的主要器材有_________、______________、___________、_________。
33.用孔雀绿和复红作细菌芽胞染色时，可使菌体呈_____ 色，使芽胞呈_______ 色。
34.用日光灯作光源时, 通常用_________反光镜，用自然光作光源时，通常用_______ 反光镜。
35.无菌室杀菌通常采用____________ 和___________相结合的方法。
36.半固体培养基通常用来检查____________________。
37.摆试管斜面的基本操作方法是________、 ________、 ____________。
38.不能加热灭菌的液体培养基应采用_______________ 除菌，通
常用的器皿有_____________和______________。
39.蓝细菌的培养可用___________________ 培养基。
40.分离酵母菌时为了抑制细菌的生长，通常用________ 培养基。
41.从土壤中分离真菌时, 通常在培养基中加入________和__________ 抑制细菌的生长。
42.测微生物大小使用的主要工具是_____________、_____________和
________ __。
43.进行酵母菌的显微计数使用的主要工具是____________ 和_______________。
44.进行细菌的显微计数时使用的主要工具是___________和_____________。
45.普通光学显微镜测酵母菌的大小的操作程序是________________ _________________、_______________、_______________、_______________、________________、 ________________、、 __________________、 ____________________。
46.显微计数的操作程序是_____________________、 __________________、
_________________________、 _____ _____________、 _____________________、
_____________________、 _____________________、 __________________________。
47.荚膜染色法的操作程序是__________________、 ___________________、
_______________________、 ______________________、 ______________________、
_______________________、 ________________________。
48.芽胞染色的操作程序是___________________、 _____________________、
_____________________、 ______________________、 _________________________、
_____________________、 ______________________、 _________________________。
49.芽胞染色的关键操作是_____________________。
50.放线菌印片染色的关键操作是___________________。
51.用负染色法染荚膜的关键操作是____________________。
52.摇床振荡培养通常用来培养___________ 微生物，享格特的厌氧操作方法通常用来培养______________菌。
53.革兰氏染色反应与细菌细胞壁的_________ 和_________有关。在革兰氏染色过程中，当用 95% 酒精处理后，就放在显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈______ 色，而革兰氏阴性菌呈_______ 色。
54.血球计数板与细菌计数板的主要差别是_______________。
55.制霉菌水浸片时加棉兰染色液可使菌体呈_____________色。
56.Anabaena azotica的异型胞通常是________ 生，在光学显微镜下它是_________ 的，细胞两端有 _______ 。它能控制 ________________ 的进入，保持异型胞内 ____________，以利于 ____________。
57.配制培养基时，应注意各种营养物质的配比，特别是______________。一般而言, 当C : N ≥5 : 1 时, 有利于________；当 C : N ∠5 : 1 时有利于___________。
58.由于各种微生物对某种化合物如抗生素、染料的敏感性不同，可以利用这一特征来从土壤中分离出不同类群的微生物。如在培养基中加入_________ ，会杀死或抑制____________ 的生长而分离出___________；在培养基中加入__________ ，有利于分离到革兰氏阴性菌。
59.细菌在革兰氏染色过程中,最后用蕃红复染因是_____________________, _______________________, _________________________。
60.高倍镜下能看到的物象在油镜下看不到往往是由于____________ 和_______________ 引起。
61.微生物在培养基中生长时，由于其____________ 而使培养基___________ 发生改变；所以在配制培养基时，为维持该条件的相对恒定，常在培养基中加入缓冲物质如____________或____________。
62.一般而言, 微生物在含糖基质上生长，会产__________ ，而使_____________；微生物分解蛋白质或氨基酸会产____________ ，而使_____________。
63.在微生物培养过程中使用的培养皿首先是被__________ 采用的，因此又称培养皿为_______dish。 _________ 在其妻子的启发下，将固体培养基使用的凝固剂由明胶改为_____________。
64.显微镜的微动螺旋每转一圈升降距离为___________________。
65.两个典型的革兰氏正反应细菌和革兰氏负反应细菌经革兰氏染色后都呈阴性反应往往是由于___________________ 和____________ 引起。
66.检查乳品和饮料是否含有__________ 等肠道细菌，可采用_______________ 培养基，在这种培养基平板上____________ 会形成具有__________光泽的紫黑色小菌落。
67.细菌鞭毛经镀银法染色后呈_________ 色。
68.细菌鞭毛经李夫森法染色后呈_____________ 色。
69.由于升汞(HgCL2) 有腐蚀作用, 所以不能用于__________ 消毒，特别是___________ 制品。
70.无氮培养基通常用来培养____________ ，其氮源来自_______________。
四、名词解释
1.电子显微镜
2.普通光学显微镜
3.合成培养基
4.培养基
5.天然培养基
6.半合成培养基
7.革兰氏染色法。
8.简单染色。
9.稀释平板计数法
10.显微直接计数法
11.巴氏消毒
12.间歇灭菌
13.消毒
14.灭菌
15.过滤除菌
16.湿热灭菌
17.干热灭菌
18.选择培养基
19.加富培养基
20.鉴别培养基
21.数值孔径
22.分辨力
23.超净工作台
24.纯培养技术
25.焦深
26.暗视野显微术
27.荧光显微术
28.负相差
29.正相差
五、问题
1.试述在普通光学显微镜下测定微生物细胞大小的基本方法。
2.以测苏云金杆菌工业菌粉中的活菌数为例，试述稀释平板计数的基本方法。
3.试述划线分离的操作方法。
4.如何检查细菌的运动性?
5.简述配制培养基的基本原则:
6.试述配制培养基的基本过程及应该注意的问题。
7.试述显微计数的基本方法。
8.标本片上的某一物象，第一次看到后如何再次找到它?
9.试述在光学显微镜下所看到的Anabaena azotica的主要特征。
10.革兰氏染色反应的成败关键是什么? 为什么革兰氏染色有十分重要的理论与实践意义?
11.如何从土壤中分离得到一个微生物的纯培养体?
12.察氏培养基的组成为: 蔗糖:30 克, 磷酸氢二钾: 1.0 克, 硝酸钠:2
克, 硫酸镁 0.5 克, 氯化钾: 0.5 克, 硫酸亚铁: 0.01 克,蒸馏水: 1000 ml. 试述:
(1)该培养基的 C 源, N 源各是什么物质。
(2)除 C 源和 N 源外的其它物质起什么作用:
(3)该培养基为什么不加生长因子?
微生物学实验复习题答案
一、选择题
1.C
2.D
3.C
4.C
5.D
6.C
7.A
8.B
9.A
10.C
11.C
12.B
13.A
14.C
15.A
16.A
17.A
18.A
19.A
20.D
21.A
22.D
23.A
24.D
25.E
26.A
27.B
28.C
29.C
30.A
31.A
32.C
33.A
34.A
35.C
36.A
37.C
38.A
39.B
40.B
二、判断题
1.对。
2.错。
3.对。
4.对。
5.错。
6.对。
7.错。
8.对。
9.对。
10.对。
11.错。
12.对。
13.对。
14.错。
15.错。
16.错。
17.错。
18.对。
19.对。
20.对。
21.对。
22.错。
23.错。
24.对。
25.错。
26.错。
27.对。
28.错。
29.错。
30.错。
31.错。
32.错。
33.错。
34.错。
35.错。
36.对。
37.错。
38.错。
39.错。
40.对。
41.对。
42.错。
43.错。
44.对。
45.对。
46.错。
47.对。
48.对。
49.错。
50.对。
51.对。
52.错。
53.对。
54.错。
55.对。
56对。
57.对。
58.错。
59.对。
三、填空题
1.加一滴水于载玻片中央，用解剖针挑取菌丝少许, 将菌丝用50% 的酒精浸润，将菌丝用蒸馏水水洗，将菌丝放入载玻片水滴中并小心分散，盖上盖玻片
2.印片 , 干燥 , 固定 , 复红染色 2-3 分钟 , 水洗 , 晾干
3.洋菜( 琼脂) ， 1.5-2.0%， 0.5%
4.涂片，干燥，固定，复红染色1-2 分钟，水洗，晾干
5.锅内加水，灭菌物体装锅，对称上紧密封螺帽将锅密封，加热升温，排尽锅内冷空气，升温至灭菌工艺条件{一般为 98kpa}，在工艺条件下保压计时{一般为30 分钟} ，到时间后切断热源，降温，出锅
6.照配方称取药品，将药品溶解在一定量的水中后加热煮沸，将琼脂按量称取后用水浸湿，将浸湿的琼脂加入煮沸的营养液中，待琼脂全部融化后调节 pH 值，补充损失的水分，分装培养基入不同的容器中
7.无色，红色
8.紫色，红色
9.所染染料的颜色
10.反光镜 , 聚光镜 , 物镜 , 目镜
11.镜座，镜臂，载物台，转换器，镜筒，推动器, 粗动螺旋 ,微动螺旋，聚光镜升降螺旋
12.放线菌，7.5-8.0
13.真菌，5-6
14.细菌、6.8-7.2
15.160-170℃ /2h
16.降低，适当升高
17.酒精脱色
18.越小，越小心
19.液体，固体，半固体
20.自来
21.玻璃器材，高压蒸汽灭菌
22.10 倍 , 9
23.1 mol NaOH、 1 mol HCL
24.选择培养基，加富培养基，鉴别培养基
25.纤维素，纤维分解菌，酪蛋白，蛋白分解菌
26.涂片，干燥，固定，结晶紫染色 1 分钟，水洗, 碘液媒染 1 分钟，水洗， 95% 的乙醇脱色 25 秒，水洗，蕃红复染 3-5 分钟，水洗，晾干
27.积累代谢产物，天然培养基，合成培养基,，半合成培养基
28.0.65， 40x
29.1.25， 100x 或90x
30.0.25， 10x 或 8x
31.接种针，接种环
32.酒精灯， 1ml 无菌吸管， 9ml 试管装无菌水， 9cm 的无菌平皿
33.红色，绿色
34.平面，凹面
35.紫外灯照射，喷洒化学药剂( 如酚)
36.细菌的运动性
37.将摆斜面用特制木条放在桌面上，将装有固体培养基的试管趁热放在特制木条上摆成斜面，斜面长度不得超过试管长度的 1/2，将试管棉塞部分用灭菌报纸盖上，以防空气中微生物落到棉塞上引起污染
38.过滤法，蔡氏细菌过滤器，滤膜
39.无氮
40.酸性
41.孟加拉红，链霉素
42.显微镜，镜台测微尺，目镜测微尺
43.显微镜血球计数板。
44.显微镜细菌计数板。
45.将镜台测微尺置载物台上，调焦找到台尺，在低倍镜下校正目镜测微尺每格的长，在高倍镜下校正目镜测微尺每格的长，去掉台尺换上待测样本片，在高倍镜下测出十个酵母菌宽和长的格数，将校正值乘入，算出十个酵母菌的平均宽和平均长，以平均宽Xμm ×平均长 Yμm 表示酵母菌的大小。
46.将待测菌进行适当的稀释，将计数板置于载物台上 , 在低倍镜下找到计数区, 将菌液加到计数区上,调焦看到菌体,按五点取样法计数五个大方格的菌数,计算每小格的含菌数，计算出单位体积( 如每 ml) 中的含菌数。
47.涂片，风干，加复红染色 3-5 分钟，水洗，晾干，加墨素涂抹，风干。
48.涂片，干燥，固定，孔雀绿加热染色 15 分钟，水洗，复红染色2-3 分钟，水洗，晾干。
49.孔雀绿加热染色适当
50.印片时不能移动
51.涂抹墨素要薄
52.好气，专性厌氧
53.结构，组成，紫，无
54.前者计数区的深度是后者的五倍
55.浅兰
56.间生，透明，极节，氧气，低氧分压，固定分子氮
57.C:N 比 ( 碳氮比 )，菌体生长，积累代谢产物
58.青霉素( 链霉素)，细菌和放线菌，真菌，结晶紫
59.G-细菌经结晶紫染色、碘液媒染、酒精脱色后，菌体紫色脱去，故需用蕃红复染，这样在光镜下才能见到红色的菌体。
60.玻片置反，菌体着色太浅
61.新陈代谢， pH 值，碳酸盐(CaCO3)，磷酸盐
62.酸， pH 下降, 碱， pH 上升
63.Petri， Petri， Hesse ，琼脂。
64.0.1毫米
65.酒精脱色时间过长，菌体培养时间太长
66.大肠杆菌(E.Coli)，伊红-- 美兰，大肠杆菌(E.Coli)，金属
67.褐
68.红
69.金属器皿，铝
70.自生固氮菌，空气中的 N2。
四、名词解释
1.电子显微镜是利用电子波波长短，分辨力高的特点以电子流代替光学显微镜的光束使物体放大成象的超显微镜检装置。
2.用自然光或者灯光作光源镜检物体的显微镜。
3.由化学成分已知的营养物质配制而成的培养基。
4.人工配制的供微生物生长繁殖并积累代谢产物的一种营养基质。
5.由化学成分不完全清楚的天然物质如马铃薯, 麸皮等配制而成的培养基。
6.由化学成分已知的化学物质和化学成分不完全清楚的天然物质配制而成的培养基。
7.革兰氏染色是细菌的一种鉴别染色法，细菌首先用结晶紫染色，再用碘液固定，然后用 95% 的酒精脱色,最后用蕃红复染。凡是菌体初染的结晶紫被酒精脱去了紫色后，又被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏负反应细菌；凡是菌体初染的紫色不能被酒精脱色，也不能被蕃红复染成红色的细菌称为革兰氏正反应细菌。
8.用单一染料使微生物细胞染上所用染料颜色的染色方法。
9.将一定量的样品经十倍稀释后，用平板培养最后三个稀释度的样品稀释液。待菌落长出后，计数出某一稀释度的菌落数后再乘
以稀释倍数，即为样品中的含菌数。
10.利用血球计数板或细菌计数板在显微镜下测计出每小格的微生物细胞数量后，再换算出单位体积中微生物细胞总数的测数方法。
11.巴氏消毒是法国微生物学家巴斯德发明的一种消毒方法。是在 62-63℃的条件下，保温半小时杀死微生物的营养体 ( 主要是病原菌) 的方法。
12.利用 100℃的温度杀死微生物的营养体. 每次 1 小时连续三天，中间的空隙时间让未杀死的芽胞萌发成营养体，在下一次 100℃的温度下被杀死。如此反复两次可将培养基的微生物( 包括芽胞 ) 全部杀死。该方法适用于没有高压灭菌器的地方进行灭菌处理。
13.只杀死微生物的营养体 ( 主要是病原菌 )，而不能杀死微生物的芽胞的除菌方法。
14.利用物理或化学方法杀死所有微生物包括细菌的芽胞的除菌方法称为灭菌。
15.利用一定孔径的滤膜阻止微生物的通过而除去溶液中或者空气中微生物的除菌方法。
16.利用热的蒸汽杀死微生物的灭菌方法。湿热灭菌又分常压蒸汽灭菌和加压蒸汽灭菌。
17.利用干热空气杀死微生物的方法。其灭菌工艺条件通常为160-170℃/2h 。
18.根据使用的目的，控制培养基的组成成分，使之有利于某种微生物的生长而限制其它微生物的生长，从而能从自然界混杂的群体中分离出某一种单一的微生物。如无氮培养基用来分离土壤中的自生固氮菌。
19.在基本培养基中加入血清，动植物组织液或者其它生长因子而配制出来的营养特别丰富的培养基。
20.根据微生物的代谢特点，通过指示剂的显色反应，用以鉴别不同微生物的培养基。
21.数值孔径是判断物镜和聚光镜性能的重要指标，通常用 N.A 表示。N.A = n.sinα/2( n 为介质折光率，α为镜口角)。
22.分辨力是指显微镜能够分辨出的物体两点间最小距离的能力。它与波长及物镜的数值孔径有关。
23.利用过滤除菌的原理而设计出来的一种无菌操作工作台，鼓风机鼓出的空气通过孔径很小的薄膜将空气中的微生物过滤后变成无菌空气吹向操作台，可防止周围有菌空气流入，能保证操作台始终保持无菌状态，便于无菌操作。
24.纯培养技术是培养某个单一微生物的方法。包括培养基的制作与灭菌。单一微生物的分离与纯化, 和无菌操作接种技术。
25.焦深是指清晰的目的象的上面和下面所看见的物象之间的距离。它与放大倍数成反比，即放大倍数越大, 焦深越小。
26.利用暗视野聚光器能阻止光线直接照射标本，而使光线斜射在标本上。在显微镜中见到黑暗视野中明亮物象的镜检技术。27.以紫外光作光源的显微镜检技术。
28.在黑暗视野中看到明亮物体的相差镜检技术。
29.在明亮视野中看到黑暗物体的相差镜检技术。
五、问题
1.测定微生物细胞的大小主要使用目镜测微尺。其方法如下:
（1）先用长度已知的镜台测微尺校正目镜测微尺。校正的方法是让台尺与目尺重叠, 看台尺的 X 格正好与目尺的 Y 格重叠，然后用计算目尺每格的长. 分别校正目镜测微尺在低倍镜, 高倍镜及油镜下每格所代表的实际长度。
（2）将待测微生物制成水浸片或染色涂片置载物台上，调焦找到微生物后用目镜测微尺测量其宽几格，长几格, 然后乘上相应放大倍数下的校正值。（3）一般测 10 个微生物，然后以平均值表示。
（4）若是酵母、细菌等单细胞微生物, 通常测其宽和长，然后以平均宽 平均长表示, 单位为μm。
2.答：（1）测数前先准备好测数用的 1ml 无菌吸管,9cm 无菌平皿，9ml 试管无菌水和牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。
（2）称取10克工业菌粉加入 90ml 无菌水中置摇床上或用手振荡 20-30分钟，让菌体分散。
（3）将上述振荡过的菌液按无菌操作法进行十倍稀释直到 10-8。
（4）取 9cm 无菌平板皿9 套用记号笔在平皿底编号，10-8编3 套，10-7编3 套，10-6编3 套。
（5）用 1 支 1ml 的无菌吸管，取 1ml 10-8的稀释菌液放入编号10-8的平皿中，如此将三个重复做完。同法取 10-7稀释菌液放入三个编号为10-7平皿中。同法取10-6稀释菌液放入三个编号为10-6 平皿中.( 均要按无菌操作法做)。
（6）将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基熔化冷至 45-50℃后，在酒精灯火焰边按无菌操作法倒入上述 9 套平皿中，每个加入量大约 15-20ml，边加边摇动平皿,，使培养基与菌液充分混匀。
（7）待培养基凝固后,将平板倒过来，置 28-30℃下培养 48 小时后计数。
3. 答：（1）取 9ml 无菌平皿一套在火焰旁按无菌操作法倒人 15-20 ml 营养琼脂，让其冷凝成平板。
（2）左手拿上述平板,右手拿接种环在火焰上灭菌后沾取原始分离物在平板上平行划线三条。
（3）将接种环在火焰上灭菌,左手平板转动大约 70 度，用灭菌接种环通过第一次划线的地方作二次划线，亦划三条。
（4）同上法再作第三次,，第四次划线。
（5）盖上平板盖，将平板倒过来置 28-30℃下培养 2-4 天后观察结果。划的好应在第四次划线处出现单个菌落。
注: 本答案也可画图说明。
4.检查细菌的运动性有两种方法:
（1）镜检法
将待检样品制成菌悬液,滴一点菌液于一盖玻片上，取一凹窝载玻片，将凹窝对准菌悬液盖在盖玻片上，然后将盖玻片和载玻片一起翻转，让菌悬液在凹窝上的盖玻片下。然后在显微镜下观察，观察应找悬液的边缘，因细菌为了更多地接触空气，总向水滴的边缘运动。观察时要注意将细菌的运动与分子的布朗运动区别开。
（2）半固体穿刺法
将待检细菌穿刺接种在半固体试管培养基中, 若细菌仅沿穿刺线生长, 说明细菌不运动。若细菌沿穿刺线向周围扩散生长, 说明细菌有运动性。
5.培养基是人工配制的供不同微生物生长繁殖，或用于积累代谢产物的营养基质。所以配制培养基时应注意以下原则：（1）根据微生物的不同选用不同的培养基，以满足微生物对营养物的需要。如自养型微生物所要求营养较简单，而异养型微生物营养要求较复杂。培养细菌，放线菌，真菌等各有不同的培养基。
（2）注意各种营养物质的浓度与配比。微生物生长所需要的营养物质往往在适当时才生长良好。浓度大往往会抑制微生物的生长。如糖类，各种重金属盐类如果浓度太高，也会影响微生物的生长。同时各种营养物质的浓度比也应注意，特别是 C/N 比。
（3）注意将培养基的 pH 值控制在一定范围内。为了防止因微生物生长繁殖或积累代谢产物后影响培养基 pH 值，常在其中加入磷酸盐，碳酸盐，以维持培养基 pH 值的相对恒定。
（4）同时还应考虑培养基的氧化还原电位及原材料的经济、易购和来源广泛的原则。
6. 制培养基的基本过程是:
（1）按培养基的配方称取各种药品，用量太少的药品应配制成溶液后再取一定量加入。
（2）将各种药品加水溶解，通常是加所需水量的一半。
（3）若配固体培养基，按 2% 的用量称取琼脂，用水将琼脂浸湿一下，用手挤去琼脂中过多的水分，加入 2 的溶液中。
（4）加热至琼脂全部溶解，并补足所需的全部水量。
（5）用 1mol NaOH 和 1mol HCL 调节 pH 至要求值。
（6）用分装器将培养基分装入试管或三角瓶中，塞上棉塞并包扎，灭菌后备用。注意事项:
（1）过程中，在加热熔化琼脂时，要不断搅拌，以防糊底。
（2）分装时不要让培养基沾染试管口或瓶口，以防培养过程中容易污染杂菌。
7.显微计数通常用来测微生物单细胞的数量，大一点的细胞如酵母菌用血球计数板，小一点的细胞如细菌用细菌计数板。该测数方法不能区别死活细胞，测出的是微生物总的细胞数量。
（1）血球计数板和细菌计数板构造相似，计数区的面积都是1mm2，两者的差别在于血球计数板的深度为 0.1mm。细菌计数板的深度为0.02mm。无论是血球计数板还是细菌计数板计数区都划为 25 个大方格，每个大方格又划为 16 个小格。所以每小格的体积为 1/4000 mm3或 1/20000mm3。
（2）计数时, 先在显微镜下找到计数区，然后将菌液稀释到适当浓度，取少量菌液滴在计数区上盖上特制盖玻片，亦可先盖盖玻片。然后用吸管将菌液从计数板上的沟里加入。靠菌液的表面张力充满计数区。
（3）计数时采取五点取样法数数，即四角各取一个大方格，再在中央取一个大方格。计数时大方格四周压线的细胞只数两边，以防增加数量。（4）将 5 个大方格的菌数加起来除以 80 得出每个小格的菌数，再乘以 4000 即为 1mm3的菌数，再乘上 1000 即为 1ml 的菌数，乘上稀释倍数即为样品含菌数。
8.做到这一点，首先取决于显微镜的好坏，若显微镜上的推动器带有纵横标尺，很容易做到这一点。首先记住标本片放到推动器上的方向，然后记下观察某一物体时推动器上的纵横标尺的数字。如纵 3，横 4。
当标本片拿下来后，若要重复观察原来的物象，只要按原方向将标本片荚在推动器上，将推动器推动到第一次观察该物体的纵，横标尺数字纵 3，横 4，即可看到第一次观察过的物体。
9.Anabaena azotica的主要特征是:
（1）菌体为丝状体，营养细胞为绿色，藻丝不扭曲。
（2）该菌有异型胞, 异型胞间生，无色透明，两端有极点。
（3）厚壁孢子无色、大、两端无极点。
10.答：通过革兰氏染色，可把几乎所有的细菌都分成 G＋和 G－菌两大类细菌，在细胞结构、成分、形态、生理、生化、遗传、免疫、生态和药物敏感性等方面都呈现出明显的差异。因此，任何细菌只要通过革兰氏染色，即可提供不少重要的生物学特性方面的信息。
革兰氏染色反应的成败关键是:
（1）菌龄:12-24 小时的纯培养物。
（2）革兰氏染色操作时，要严格控制酒精脱色时间，菌液涂布均匀而薄。
（3）养基的组成。
11.首先要根据分离对象选择适宜的培养基。若要分离真菌应选用马丁- 孟加拉红选择培养基；若要分离细菌应选用牛肉膏蛋白胨培养基；若要分离放线菌应选用高氏培养基。
土样采回来后，用常规的十倍稀释分离法进行稀释分离，若分离细菌，一般稀至 10-8, 若分离放线菌,一般稀至 10-6；若分离真菌，一般稀至 10-4。取最后三个稀释度倒平板获得单个菌落。将平板上出现的单菌落转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度，若不纯，应将培养的单菌落斜面再次进行稀释分离。倒平板获得单菌落，转接斜面培养，同时镜检菌体的纯度。反复几次直到得到菌体单一的单菌落方可认为是某一微生物的纯培养体。
12. （1）该培养基的 C 源物质是蔗糖，N 源物质是硝酸钠。
（2）磷酸氢二钾、硫酸镁、氯化钾、硫酸亚铁为该培养基提供矿质营养。蒸馏水提供水分。
（3）该培养基培养的微生物在培养基上能合成自身所需的全部生长因子，故无需添加生长因素,该培养基所培养的微生物为野生型。
微生物实验知识总结与实践应用经过这学期学习和实验操作，我对《微生物实验》有了一些初步的认识，也从中学习到了有用的知识。《微生物学实验》是要求我们掌握实验知识的基本操作和技能训练，初步了解和掌握先进的技术和方法，与迅速发展的科学前沿接轨。微生物：包括细菌、病毒、真菌以及一些小型的原生动物、显微藻类等在内的一大类生物群体，它个体微小，却与人类生活关系密切。涵盖了有益有害的众多种类，广泛涉及健康、食品、医药、工农业、环保等诸多领域。我将我这学期学到的微生物学知识，结合生活和工业当中的一些应用，归纳如下：在吾尔恩老师的带领下，我们先从最基本的知识学起。 （1）无菌操作技术：高温对微生物具有致死效应，因此微生物在转接过程中，一般再火焰旁进行，并用火焰直接灼烧接种环，已达到灭菌的目的。在做实验时要保持严谨的态度，以后的实验中多数操作都必须再火焰旁进行。 （2）培养基的制备：培养基是人工配置的生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴别微生物或积累代谢产物。自然界中培养基的种类很多，但是不同的培养基中，一般含有水分、碳源、氮源、无机盐和生长因子等，不同类别的微生物对PH值的要求一般不同。 （3）消毒与灭菌：灭菌是用理化方法杀死一定物质中的微生物的微生物学基本技术。灭菌的彻底程度受灭菌时间与灭菌剂强度的制约。微生物对灭菌剂的抵抗力取决于原始存在的群体密度、菌种或
环境赋予菌种的抵抗力。灭菌是获得纯培养的必要条件，也是食品工业和医药领域中必需的技术。是指用物理或化学的方法杀灭全部微生 物，使之达到无菌保障水平。经过灭菌处理后，未被污染的物品，称无菌物品。经过灭菌处理后，未被污染的区域，称为无菌区域。 （4）平板分离与活菌计数：平板分离计数法是将待测菌液经适当稀释，涂布在平板上。经培养后在平板上形成肉眼可见的菌落。根据稀释倍数和取样量计算出样品中细胞密度。平板分离法主要有：1.平板划线分离法。2.稀释涂布平板法。 （5）革兰氏染色法：革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性细菌（G+）和革兰氏阴性细菌（G-）两种类型。这是两种细菌细胞壁结构和组成的差异决定的。大肠杆菌是革兰氏阴性杆状细菌，金黄色葡萄球菌是革兰氏阳性细菌，经过革兰氏染色后两者呈现不同的颜色，在显微镜下便于进行观察…… 我们学习微生物实验技术，就是要把微生物的实验技能应用于实践生产，培养繁育细菌收集细菌代谢产物，应用于药业、工业，产生经济利益。制备培养基是微生物实验技术操作的重要环节，按照培养基的功能分类培养基的类型有：1.选择培养基。2.鉴别培养基。在工业生产中常常应用于培养微生物的主要是-发酵罐。我将微生物在生产生活中的应用总结如下： 微生物技术的应用在当今社会中已取得了很大的作用，在工业、农业、医药业、畜牧业等各个行业中都取得了长足的进展，但相对于
2011环境微生物学考研试题及答案一、名词解释 包含体： 细胞膜： 衣原体： 同宗配合： 酵母菌： 生态系统： 碳源： 拮抗： 菌种复壮： DNA的变性： DNA复制： 根际微生物： 物质流： 类菌体： 硝化细菌： 细菌活性污泥法： 生物反应器：
微生物细胞固定化： 堆肥化： 自生固氮作用： 二、是非题 原噬菌体是整合在宿主DNA上的DNA片段,它不能独立进行繁殖。() 细菌的异常形态是细菌的固有特征。（） 真核微生物比原核微生物更能在高温下生长。（） 芽孢是芽孢细菌的繁殖器官。（） 光合细菌和蓝细菌都是产氧的光能营养型微生物。() 用来固化细菌培养基的多糖是琼脂。() 微生物生长的衰亡期，细胞死亡速率超过细胞分裂速率。() 碱基腺嘌呤、鸟嘌呤和胞嘧啶存在于RNA或DNA，但只RNA中有胸腺嘧啶。() 真菌最适的生长条件是有点碱性的。() 凡是影响微生物生长速率的营养成分均称为生长限制因子。() 三、选择题 1．大部分微生物___。
(a）是原生动物(b）帮助改善生活质量 (c)生活在海洋的底层(d)发现于外层空间 2.噬菌体是一种感染____的病毒。 （a）酵母菌（b）霉菌 （c）放线菌和细菌（d）原生动物 3.G＋菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是___ （a）支原体(b)L型细菌(c)原生质体(d)原生质球 4.下列微生物中，______属于革兰氏阴性菌 （a）大肠杆菌(b)金黄葡萄球菌(c)巨大芽孢杆菌(d).肺炎双球菌5.下列能产游动孢子的霉菌是____。 （a）腐霉(b)毛霉 (c)赤霉(d)青霉 6.硝酸细菌依靠____方式产能。 （a）发酵作用(b)有氧呼吸(c)无氧呼吸(d)光合磷酸化 7.酵母菌适宜的生长pH值为____ (a)5.0-6.0(b)3.0-4.0(c)8.0-9.0(d)7.0-7.5 8.进人三羧酸循环进一步代谢的化学底物是____。 (a)乙醇(b)丙酮酸（c）乙酰CoA(d)三磷酸腺苷 9.称为微好氧菌的那些细菌能___生长。
实验一光学显微镜的使用及微生物形态的观察、 大小的测定和计数 一、实验目的 １、掌握光学显微镜的结构、原理，学习显微镜的操作方法和保养 2、观察细菌、真菌、原生动物的标本装片,学会绘制生物图 3、掌握使用测微尺测量微生物大小的方法 ４、了解血球计数板的结构，掌握使用和计算方法 二、实验器材 １、显微镜 ２、微生物标本装片 ３、目、物镜测微尺 ４、血球计数板 ５、酵母菌液或霉菌孢子液 6、载波片、盖波片、烧杯、滴管、擦镜纸、香柏油、二甲苯等 三、显微镜的构造、原理及使用方法 1、构造 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜,由机械装置和光学系统两大部分组成。机械装置包括镜筒、转换器、载物台、镜臂、镜座、调节器;光学系统包括目镜、物镜、聚光器、电光源。显微镜的总放大倍数为目镜和物镜的放大倍数的乘积。 ２、操作 在目镜保持不变的情况下,使用不同放大倍数的物镜所能达到的分辨率及放大率都是不同的。一般情况下,特别是初学者，进行显微观察时应遵循从低倍镜到高倍镜再到油镜的观察程序,因为低倍数物镜视野相对大,易发现目标及确定检查的位置。 四、微生物大小的测量原理和方法 微生物细胞的大小是微生物重要的形态特征之一，由于菌体很小,只能在显微镜下来测量。用于测量微生物细胞大小的工具有目镜测微尺和物镜测微尺。 1、目镜测微尺(图1-1）是一块圆形玻片,在玻片中央把5ｍｍ长度刻成5０等分，或把1０mm长度刻成100等分。测量时，将其放在接目镜中的隔板上（此处正好与物镜放大的中 --
-- 间像重叠)来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同,目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用物镜测微尺校正，以求出在一定放大倍数下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。 2、物镜测微尺(图１-２）是中央部分刻有精确等分线的载 玻片,一般将lmm 等分为100格,每格长ｌ０μm （即0.0ｌmm), 是专门用来校正目镜测微尺的。校正时，将物镜测微尺放在载 物台上,由于物镜测微尺与细胞标本是处于同一位置，都要经 过物镜和目镜的两次放大成象进入视野,即物镜测微尺随着显 微镜总放大倍数的放大而放大，因此从物镜测微尺上得到的读数就是细胞的真实大小,所以用物镜测微尺的已知长度在一定放大倍数下校正目镜测微尺，即可求出目镜测微尺每格所代表的长度,然后移去物镜测微尺，换上待测标本片，用校正好的目镜测微尺在同样放大倍数下测量微生物大小。 3、目镜测微尺的校正 把目镜的上透镜旋下，将目镜测微尺的刻度朝下轻轻地装入目镜的隔板上，把物镜测微尺置于载物台上，刻度朝上。先用低倍镜观察，对准焦距，视野中看清物镜测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺与物镜测微尺的刻度平行，移动推动器,使两尺重叠,再使两尺的“０”刻度完全重合，定位后，仔细寻找两尺第二个完全重合的刻度（图1－３)，计数两重合刻度之间目镜测微尺的格数和物镜测微尺的格数。因为物镜测微尺的刻度每格长l0μｍ，所以由下列公式可以算出目镜测微尺每格所代表的长度。 例如目镜测微尺５小格正好与物镜测微尺5小格重叠，已知物镜测微尺每小格为ｌ0μm ，则目镜测微尺上每小格长度为=5×10μm/５=1０μm 用同法分别校正在高倍镜下和油镜下目镜测微尺每小格所代表的长度。 由于不同显微镜及附件的放大倍数不同,因此校正目镜测微尺必须针对特定的显微镜和附件(特定的物镜、目镜、镜筒长度）进行，而且只能在特定的情况下重复使用,当更换不同放大倍数的目镜或物镜时,必须重新校正目镜测微尺每一格所代表的长度。 4、细胞大小的测定 移去物镜测微尺,换上待测菌体的装片，先在低倍镜下找到目的物,然后在高倍镜下用目镜测微尺来测量菌体的长，宽各占几格（不足一格的部分估计到小数点后一位数）。测出的格数乘上目镜测微尺每格的校正值,即等于该菌的长和宽。 结果计算： 长μm=平均格数×校正值 宽μｍ＝平均格数×校正值 大小表示: 宽μm ×长μｍ 五、微生物细胞数量的测定原理和方法 1、血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽而构成3个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区(图1-4），计数区 图1-1 目镜测微尺 图1-2 物镜测微尺 图1-3 目、物镜测微尺的校正 图1-4 血球计数板
《微生物学教程》考试试卷 （B 卷） （本试卷共 3 页） 要求：开卷考试；答案写在答题纸上，标清楚题号；答案和试题全交。 一、解释名词（每个2分，本题满分20分） 1、菌落 2、病毒 3、生长因子 4、微生物典型生长曲线 5、灭菌 6、质粒 7、营养缺陷型 8、水体自净作用 9、微生物的种 10、培养基 二、填空（每个空0.5分，40个满分20分） 1、微生物与生物环境间的相互关系分为五种： （1） 、 （2） 、 （3） 、 （4） 、 （5） 。 2、单细胞微生物典型生长曲线由 （1） 、 （2） 、（3） 、（4）四个时期组成。 3、防止霉腐微生物引发食品腐败的常用措施有： （1） 、 （2） 、 （3） 、 （4） 、 （5） 。 4、微生物的五大共性包括： （1） 、 （2） 、 （3） 、 （4） 、 （5） 。 5、微生物根据对氧的需求可分为5种类型： （1） 、（2） 、（3） 、 （4） 、 （5） 。 6、葡萄糖经EMP 代途径10步反应产生的3种产物是： （1） 、 （2） 、 （3） 。 7、真菌（霉菌类）无性孢子有多种类型。比如（1） 、 （2） 、 （3） 、 （4） 。 8、列举对微生物学发展做出过巨大贡献的科学家名字： （1） 、 （2） 、 （3） 。 第1页 9、三域学说将整个生物划分为3个域，即 （1） 、 （2） 、 （3） 。
10、常用的消毒剂有： （1） 、 （2） 、 （3） 。 三、判断题（每小题1分，满分10分） 1、冷冻干燥保藏和液氮保藏是长期有效保藏各种微生物的 基本方法。 2、青霉素可以杀死正在旺盛生长繁殖的细菌细胞，但无法杀死正处于休止状态的营养缺陷型细胞。 3、黑曲霉、红曲霉、黄曲霉、根霉、毛霉，其中有些是单细胞微生物。 4、食品的水活度值越低，越不利于腐败（病原）微生物的生长，因此降低含水量有利于食品的保藏。 5、因为细菌是低等原核生物，所以，它没有有性繁殖，只有无性繁殖形式。 6、大肠杆菌F +细胞通过接合作用向受体细胞转移F 质粒，结果导致原供体细胞失去了F 质粒。 7、国家规定：引用水中的微生物数应低于100个细胞/mL, 大肠菌群数不能超过3个细胞/L 。 8、黄曲霉毒素是由黄曲霉菌产生的剧毒、致癌物质，它要在人或动物体经过代活化后才引起致癌作用。 9、地衣实际上是蓝细菌与真菌或藻类与真菌形成的共生体。 10、青霉菌发酵时，产青霉素的最佳温度与菌体生长最适温度完全一致。 四、简答题（4道题，每小题10分，满分40分 ） 1、简述常用化学消毒剂的种类及其杀菌机制。 2、简述艾姆氏试验的原理和实践意义。 3、比较同型乳酸发酵与异型乳酸发酵在产物、产能和菌种上的差异。 4、常用的高温灭菌方法及其适用对象。 第2页
实验二实验器具的灭菌 一、实验目的 1.学习并初步掌握和各种实验器具的包扎及高压蒸汽灭菌的方法。 2.了解其他灭菌方法。 二、基本原理 高压蒸汽灭菌法可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果最好、应用最广的灭菌方法。其基本原理是：在密闭的蒸锅内，其中的蒸汽不能外溢，压力不断上升，使水的沸点不断提高，从而锅内温度也随之增加，在0.1MPa的压力下，锅内温度达121℃，在此温度下，可以很快杀死各种细菌及其高度耐热的芽孢。 三、器材 1、高压蒸汽灭菌锅 2、牛皮纸 3、棉绳 4、仪器和其他用具 四、操作步骤 1、包扎 将各种实验器具进行合理规范包扎后，要用牛皮纸覆盖，最后用棉绳系紧。 2、加热烧开 待高压锅内的水烧开，将包扎好的器具放入锅内的桶内，最后放入高压锅。 3、升压 完全排除锅内空气后，关闭放弃阀，待压力上升到0.1MPa时，开始计时，维持压力0.1~0.15MPa 20分钟。 4、减压，取出器具 到达保压时间后，即可切断电源，压力降到0.5MPa时，可缓慢放出蒸汽，注意不要使压力降低太快，以致引起激烈的减压沸腾，使容器中的液体四溢。当压力降到零后，才能开盖。 五、思考题 （1）、你认为那些环节会影响高压灭菌的效果？如果影响，请简述其中最关节的环节是什麽？
实验三牛肉膏蛋白胨培养基的配制 —、目的要求 1、明确培养基的配制原理 2、通过对基础培养基的配制，掌握培植基的一般方法和步骤。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基的配方如下： 牛肉膏 3.0g 蛋白胨10.0g NaCI 5.0g 水1000mI pH 7.4～7.6 三、器材 1、溶液和试剂牛肉膏，蛋白胨，NaCI,琼脂，1 moI/L NaOH, 1 moI/L HCI。 2、仪器和其他用品试管，三角瓶，烧杯，量筒，破棒，培养基分装器，天平，牛角匙，高压蒸气灭菌锅，pH试纸（pH5.5～9.0），棉花，牛皮纸，记号笔，麻绳，纱布等。 四、操作步骤 1、称量 按培养基配方比例依次准确地称取牛肉膏、蛋白胨，NaCI放入烧杯中。牛肉膏常用破棒挑取，放在小烧杯或表面皿中称量，用热水融化后倒入烧杯。也可放在称量纸上，称量后直接放入水中，这时，如稍微加热，牛肉膏便会与称量纸分离，然后立即取出纸片。 （蛋白质很易吸湿，在称取时动作要迅速，另外，称药品时严防药品混杂，一把牛角匙用于一种药品，或称取一种药品后，洗净，擦干，再称取另一药品。瓶盖也不要盖错。） 2、溶化 在上述烧杯中先加入少于所需要的水量，用玻棒搅匀，然后，在石棉网上加热使其溶解，或在磁力搅拌器上加热溶解。将药品完全溶解后，补充水到所需的总体积，如果配制固体培养基时，将称好的琼脂放入已溶的药品中，再加热溶化，最后补足所损失的水分。在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5％~2.0％的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。 3、调pH 在未调pH前，先用精密pH试纸测量培养基的原始pH，如果偏酸，用滴管向培养基中逐滴加入1mol/LnaOH，边加边搅拌，并随时用pH试纸测其pH，直至pH达7.6。反之，用1mol/LHCl进行调节。 4、分装 按照实验要求，可将配制的培养基分装入试管内或三角瓶内。 5、加塞 培养基分装完毕后，在试管口或三角瓶口上塞上棉塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。 6、包扎 加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
兽医微生物学实验复习题 1、兽医微生物实验室注意事项是什么？ 答：①防止病原微生物的散布；②防火；③节约；④标记；⑤记录；⑥安全；⑦清洁与秩序 2、观察细菌常用什么显微镜？它主要有哪几部分组成？ 答：光学显微镜光学部分:目镜、物镜、反光镜、聚光器；机械部分：镜座、镜臂、镜筒、粗调节器、细调节器。 3、油镜用毕后，为什么必须把油镜擦净？ 答：油镜的原理是通过香柏油的光路折射能更加清晰的观察微生物，油具有粘附性，且不溶于水，所以，在观察完后，香柏油会粘附在镜头上，不擦去的话，风干后镜头就变得模糊不清，甚至报废了，又因为是油所以简单的用擦镜纸擦拭是擦不干净的，二甲苯属于有机溶剂， 4、用过多的二甲苯或酒精乙醚混合液擦拭镜油有什么危害？ 答：过多的二甲苯或酒精乙醚混合液容易脱胶，使油镜脱落。 5、使用油镜时用什么作为物镜与玻片间的介质，有几种？ 答：可用与玻璃的折光系数相近的油类，有7种，如柏木油。 6、观察细菌时显微镜的操作步骤是什么？主意事项是什么？ 答：将显微镜物镜镜头转为油镜对好光线（开高集光器，开大光圈，调好反光镜）使亮度最强在载物台上放上载玻片，并在玻片上放一滴香柏油将标本移至载物台正中转动粗准焦螺旋，使油镜浸入油滴中左眼由目镜注视镜内，慢慢地转动细准焦螺旋，直至物像清晰为止 注意事项：1.调节粗准焦螺旋的时候要慢 2.观察完后要用二甲苯擦拭油镜 7、微生物绘图要求有哪些？ 答：①绘出一个视野，圆形。 ②细菌大小比例合理，必须标明名称。 ③标名显微镜的放大倍数，标明菌名。 ④绘图一律用铅笔。 8、制备细菌染色标本片时应注意哪些事项？ 答：①干燥好的抹片固定时，使抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖动过数次，略作加热，但不能太热，以不烫手为度进行固定。 9、涂片固定的意义何在？固定时应注意什么问题？有哪些固定方法？答：意义：涂片固定可将涂片上的细菌杀死，使之固定而不会到处漂移，并且死菌比活菌更容易着色，为后面染色做准备。 注意：若用火焰固定时，抹面向上，以其背面在酒精灯外焰上如钟摆样来回拖动过数次，略作加热，但不能太热。固定方法：火焰固定和化学固定。 10、细菌染色的原理是什么？ 答：细菌的等电点较低，约在pH 2～5之间，故在中性、碱性或弱碱性溶液中，菌体蛋白质电离后带负电荷，易与带正电荷的碱性染料如龙胆紫及碱性复红等结合，使细菌被染成紫色或红色。 11、试述细菌革兰氏染色法的步骤及结果。革兰氏染色的原理是什么？ 答：原理：G＋菌：细胞壁厚，肽聚糖网状分子形成一种透性障，当乙醇脱色时，肽聚糖脱水而孔障缩小，故保留结晶紫-碘复合物在细胞膜上。呈蓝紫色。 Gˉ菌：肽聚糖层薄，交联松散，乙醇脱色不能使其结构收缩，其脂含量高,乙醇将脂溶解，缝隙加大，结晶紫-碘复合物溶出细胞壁，沙黄复染后呈红色。
环境微生物学试题答题要点(精华版) 一、名词解释（每题1.5分，计30分） 噬菌体：是侵染细菌、放线菌、霉菌等微生物的病毒。 菌落：菌落是指在固体平板培养基上，微生物的单细胞经过生长繁殖，形成肉眼能看到的，具有一定形态特征的微生物群体。PHB：是细菌细胞中含有的叫聚羟基丁酸盐的贮藏物质。 初生菌丝体：担子菌的孢子直接萌发而成的菌丝体，一般不会繁殖成为子实体。 分生孢子：分生孢子是由菌丝分枝顶端细胞或者由菌丝分化成的分生孢子梗的顶端细胞分割缢缩而成的单个或者成簇的孢子。间歇灭菌法：是利用常压蒸气反复灭菌的方法。 生物氧化：物质在生物体内经过一系列连续的氧化还原反应逐步分解并释放能量的过程。 化学杀菌剂：能够抑制和杀死微生物的化学物质。 共生：两个微生物在一起时形成特殊的结构和功能，两者高度的协调和彼此得利。 启动子：是一个“开始”的信号，它含有与RNA聚合酶结合并启动转录的保守序列。 操纵子：负责合成特殊蛋白质的基因簇。 生态系统：是生物群落与其生存环境组成的整体系统。 活性污泥：污水处理过程中的具有活性的微生物絮凝体。 联合固氮：是指某些生活在植物根的表面至根皮层细胞间而不进入植物根细胞的微生物进行固氮作用的现象。 反硝化细菌：反硝化作用是指微生物还原硝酸产生气态氮的过程。 活性污泥法：以活性污泥为主体的污水生物处理技术。 生物反应器：是通过酶、微生物、动植物细胞等的固定化，进行物质转化的反应器。 根际微生物：生长在植物根系直接作用土壤范围内的微生物。 纯培养：是指在实验室条件下，从一个微生物细胞繁殖得到的后代。 细胞壁：细胞壁是包在细菌细胞表面、内侧紧贴细胞质膜的较为坚韧并略具弹性的结构。 二、是非题（每题1分，计10分） ?溶源性细菌在一定条件诱发下,可变为烈性噬菌体裂解寄主细胞。( + ) ?细菌形态通常有球状、杆状、螺丝状三类。自然界中杆状最常见，球状次之，螺旋菌最少。( - ) ?某些藻类如团藻属存在群体形态。( + ) ?光合磷酸化和氧化磷酸化一样都是通过电子传递系统产生ATP。( - ) ?在固体培养基中，琼脂的浓度一般为0.5—1.0%。( - ) ?称为嗜碱菌的那些细菌是能在pH 7.0以上的环境中生长的细菌。( + ) ?在真核微生物细胞的染色体中，DNA是与组蛋白结合形成染色体的。( + ) ?EMP、ED等糖酵解途径的共同特点是将葡萄糖降解到丙酮酸。( + ) ?精确定量某些成分而配制的培养基是所有成分的性质和数量已知的培养基，称为天然培养基。( - ) ?在实验室中细菌不能形成菌落。( - ) 三、选择题（每题1分，计20分） 1. 适合所有微生物的特殊特征是__c__。 (a)它们是多细胞的（b)细胞有明显的核 (c)只有用显微镜才能观察到（d）可进行光合作用 2. 病毒缺乏__b___。 (a)增值能力(b)独立代谢的酶体系 (c)核酸 (d)蛋白质 3. G－菌由溶菌酶处理后所得到的缺壁细胞是___d__。 (a) 支原体(b) L型细菌(c) 原生质体(d) 原生质球 4. 酵母菌的细胞壁主要含___d__。 (a) 肽聚糖和甘露聚糖 (b) 葡聚糖和脂多糖 (c) 几丁质和纤维素 (d)葡聚糖和甘露聚糖 5. 下列能产子囊孢子的霉菌是__c__。 (a) 毛霉和根霉 (b) 青霉和曲霉
微生物学实验讲义 Document serial number【KKGB-LBS98YT-BS8CB-BSUT-BST108】
《生物学实验Ⅰ——微生物》 （2008级基地班） 任课教师：熊芳 教学时数： 15学时 实验周数： 4周 生物学实验教学中心 微生物实验目录（15学时） 微生物实验基础知识介绍 实验一：培养基的配制与灭菌（4学时） 实验二：土壤自生固氮菌的分离纯化（5学时） 实验三：显微镜的使用和简单染色（3学时） 实验四：革兰氏染色和荚膜染色（3学时） 第一次实验： 微生物学实验基础知识 一、实验目的 1.熟悉实验室规则和安全守则，正确应对实验中出现的意外事故； 2.认识微生物学实验室常用仪器和有关试剂的基本知识； 3.掌握实验报告的正确书写。 二、实验内容 1.实验室规则； 2.实验室安全守则； 3.实验室中意外事故处理； 4.常用器皿及用具； 5.显微镜及有关知识；
6.实验预习、实验记录和实验报告。 实验一培养基的配制和高压蒸汽灭菌 配置培养基的基本流程如下： 原料称量→溶解→调节pH值→过滤澄清→分装→塞硅胶塞和包扎→灭菌 培养基的配制原则 一、营养成分 1. 根据不同微生物的营养需要配制不同的培养基，如自养型微生物的培养基完全可以（或应该）由简单的无机物质组成。异养微生物的培养基至少需要含有一种有机物质。 碳源物质的功能：构成细胞物质；为机体提供整个生理活动所需要的能量（异养微生物）。 氮源(nitrogen source) 凡是提供微生物营养所需的氮元素的营养源，称为氮源。氮源物质的主要作用是合成细胞物质中含氮物质，少数自养细菌能利用铵盐、硝酸盐作为机体生长的氮源与能源，某些厌氧细菌在厌氧与糖类物质缺乏的条件下，也可以利用氨基酸作为能源物质。 能源指能为微生物的生命活动提供最初能量来源的营养物或辐射能。 2. 注意各种营养物质的浓度与配比 营养物的浓度：在一般情况下，浓度合适的营养物质才对微生物表现出良好作用，浓度大时对微生物生长起抑制作用，浓度小时不能满足微生物生长的需要。 各营养物质之间的浓度比：培养基中各营养物质之间的浓度比直接影响微生物的生长与繁殖和（或）代谢产物的形成与积累，尤其是碳氮比（C／N）（碳氮比一般指培养基中元素碳与元素氮的比值，有时也指培养基中还原糖与粗蛋白两种成分含量之比）的影响更为明显。 二、控制培养基的PH值 各类微生物生长的最适pH各不相同，细菌与放线菌生长的pH在之间，酵母菌与霉菌生长的pH值在4-5之间。 在微生物的生长和代谢过程中，由于营养物质的利用和代谢产物的形成与积累，常会改变培养基的pH值，为了维持培养基pH值的相对恒定，通常采用下列两种方式： 内源调节：在培养基里加一些缓冲剂或不溶性的碳酸盐；调节培养基的碳氮比。 外源调节：按实际需要流加酸或碱液 三、渗透压
名词解释： 微生物、微生物学、纯培养、纯培养物无菌技术、灭菌、消毒、过滤富集培养 简答题： 1、微生物的特点有那些？ 2、Mullis的贡献对我们有什么启发？ 3、列文虎克对微生物学有什么贡献？4 、巴士德和柯赫对微生物学的发展有什么贡献？5、柯赫证病律的具体内容是什么？6 、拂来明对微生物学的贡献是什么？7 、我国著名的微生物学家有那些？分别作出了什么贡献？8、干热灭菌和高压蒸汽灭菌有什么差别？9、举出几种常用的消毒药品和方法？10、纯培养有几种方法？11、为什么活菌记数和直接记数有很大的差别？12、按照功能和营养成分培养基有几种类别？13、菌种保藏的基本原理是什么？1 4、保藏微生物的基本方法有那些？1 5、已发现的微生物的形态有几种？1 6、芽孢杆菌和芽孢梭菌有何异同？1 7、举例说明非芽孢杆菌的特点？1 8、古细菌有那三大类？1 9、根霉、曲霉和青霉的形态特征如何？20、吃什么食用菌可以预防感冒？21、吃什么食用菌可以增加智力？22、原核微生物和原核微生物的主要类群有那些？23、球菌的基本形态有几种？24、细菌的基本结构组成有那些？25、细菌的特殊结构有那些？26、细胞壁及其功能是什么？27、肽聚糖的基本组成是什么？28、G+ 和G-细胞壁的结构有和异同？29、Gram染色的基本过程如何？30、细菌为什么可以分为G+ 和G-两种？31、无壁细胞有那几种？32、聚-B-羟丁酸有什么功能？33、气泡有什么功能？34、什么是糖被、根据物理特征不同可以分为几类？35、糖被的化学组成和功能是什么？36、鞭毛有何功能和种类？37、鞭毛的一般结构和基体的组成如何？38、什么是芽孢、有何特点？39、芽孢耐热的分子机制如何？40、为什么放线菌介于真菌和细菌之间而更接近于细菌？41、放线菌的繁殖方式有几种？42、在什么条件下使用火焰灭菌？43、稀释倒平板法和涂平板法有什么差别？
微生物学实验 实验一常用培养基的制备、灭菌与消毒 一、实验目的 了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 二、实验原理 培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 三、试剂与器材 1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天 平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂 四、实验内容 1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒 压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 五、关键步骤及注意事项 1.要严格按配方配制。 2.调pH不要过头。
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧，注意温度的时间控制，70oC 以下放物、取物。 4.高压灭菌要注意物品不要过多，加热后排除冷空气，到时降压回零 取物。 5.过滤除菌要注意各部件灭菌，压滤时，压力要适当，不可太猛太快， 滤膜要注意清洗保存。 六、思考题 1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是 无菌的? 2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题?为什么? 3.培养微生物的培养基应具备哪些条件?为什么? 4.培养基的配制原则是什么? 实验二土壤中微生物分离纯化培养 一、实验目的 掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术；了解不同的微生物菌落在斜面上、半固体培养基和液体培养基中的生长特征；进一步熟练和掌握微生物无菌操作技术；掌握微生物培养方法。 二、实验原理 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的分离、纯化方法：单细胞挑取法，稀释涂布平板法，稀释混合平板法，平板划线法稀释涂布平板法步骤：倒平板－制备土壤污水稀释液－涂布－培养－挑菌落；平板划线法步骤：倒平板－标记培养基名称－划线。 三、试剂与器材 1.器材盛9m1无菌水的试管、盛90m1无菌水并带有玻璃珠的三角 烧瓶、无菌玻璃涂棒、无菌吸管、接种环、酒精灯、无菌培养皿、显微镜、血细胞计数板等。 2.试剂牛肉膏蛋白胨培养基，高氏1号培养基，查氏培养基 四、实验内容
医学微生物学考试试卷（A） (临床医学本科、影像医学本科、中医药学本科、实验技术本科、预防医学本科) 班级学号姓名 注意事项： 1．在试卷上写上姓名、班级。在答题卡上填上学号，将相应的数字涂黑，并写上班级、姓名和试卷类型（A卷/B卷）。交卷时必须将答题卡与试卷一起上交，否则以零分计算！ 2．本份试卷由基础知识题和病例分析题组成，共150个选择题，请按题目要求，在备选答案中选择一个最佳答案，并在答题卡上将相应的字母涂黑，做在试卷上无效。 3．考试时请严格遵守考场纪律，原则上不允许上厕所。 第一部分、Ａ型选择题 （由一题干和５个备选答案组成，请选出一个最佳答案。共90个选择题） 1.哪种疾病的病原体属于非细胞型微生物： A.疯牛病 B.梅毒 C.结核病 D.沙眼 E.体癣 2.细菌属于原核细胞型微生物的主要依据是: A.单细胞 B.二分裂方式繁殖 C.对抗生素敏感 D.有由肽聚糖组成的细胞壁 E.仅有原始核结构，无核膜 3.革兰阳性菌细胞壁： A.肽聚糖含量少 B.缺乏五肽交联桥 C.对溶菌酶敏感 D.所含脂多糖与致病性有关 E.有蛋白糖脂外膜 4.青霉素杀菌机制是: A.干扰细胞壁的合成 B.与核糖体50S亚基结合，干扰蛋白质合成 C.影响核酸复制 D.与核糖体30S亚基结合，干扰蛋白质合成 E.损伤细胞膜 5.有关“细菌鞭毛”的叙述，哪一项是错误的: A.与细菌的运动能力有关 B.许多革兰阳性菌和阴性菌均有鞭毛 C.在普通光学显微镜下不能直接观察到 D.可用于细菌的鉴定 E.将细菌接种在固体培养中有助于鉴别细菌有无鞭毛(半固体) 6.有关“芽胞”的叙述，错误的是: A.革兰阳性菌和阴性菌均可产生（都是阳性） B.不直接引起疾病 C.对热有强大的抵抗力 D.代谢不活跃 E.通常在细菌处于不利环境下形成 7.用普通光学显微镜油镜观察细菌形态时，总放大倍数为: A.10倍 B.100倍 C.400倍 D.900～1000倍 E.10000倍 8.脑膜炎奈瑟菌和肺炎链球菌经结晶紫初染、碘液媒染、95%乙醇脱色后，菌体分别呈: A.红色和紫色 B.紫色和紫色
2013-2014（2）《食品微生物学与实验》思考题 期末考试题型： 1、单选题（四选一） 2、多选题（两个以上） 3、填空题 4、简述题 5、绘图说明题 6、试述题或分析题 第0章绪论 1. 概念： 细胞型微生物、非细胞型微生物、单细胞微生物、多细胞微生物、原核微生物、真核微生物、种、菌株、变种、型、模式种、柯赫原则。 细胞型微生物：具有典型的细胞结构，即细胞含有真正的细胞核，有核膜、核仁和染色体。 非细胞型微生物：没有典型的细胞结构、不具备代必须的酶系统、只能在各种活的细胞中生长繁殖，病毒就属此类。 单细胞微生物：仅由一个细胞构成的生物。 多细胞微生物：由许多形态和功能发生了分化的细胞群构成的生物。 原核微生物：具有细胞结构的微生物中，原核微生物是指一类不具有细胞核膜，只有核区的裸露DNA的原始单细胞生物，核区只有一条双螺旋结构的脱氧核糖核酸构成的染色体。 真核微生物：在微生物中，大多数种群具有真核生物(Eukaryotes)的细胞结构，即细胞核具有核膜、能进行有丝分裂、细胞质中存在线粒体或同时存在叶绿体等细胞器这些微生物被称为真核微生物。 种：是分类单元的最基本单位，是显示高度相似性、亲缘关系极其相近、与其他种有明显差异的一群菌株的总称。 菌株：它是指来源不同的同一个种的纯培养物。 变种：从自然界中分离得到的某一微生物的纯种，必须与文献上记载的典型种的特征完全一致，才能鉴定为同一个种。实际上有时分离到纯种，除了大多数指标符合典型种的特征外，还有某一个显然不同的特征，而此特征又是稳定的。就把这种微生物称为典型种的“变种”。 型：同一细菌种显示很小生物化学与生物学差异的菌株，常用于细菌中紧密相关菌株的区分。型是细菌亚种的细分。 模式种：微生物学中种带有抽象的种群概念，但在具体分类时常用一个被指定的、能代表这个种群的模式菌株或典型菌株作为该种的模式种来定种。它往往是定为一个新种的第一个种或第一批种之一，也可以是在某一已知数任意指定的种。 柯赫原则：对病原菌的研究证明了炭疽病是由炭疽菌引起的，结核病是由结核菌引起的，创立了确定某一微生物是否为相应疾病病原的基本原则——柯赫法则 2. 什么是微生物，它包括几大类群？其特点是什么？
食品微生物学实验技术思考题答案 1. 用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油?起什么作用？ 答：应该先用擦镜纸将镜头擦干净,以防上次实验的污染.操作时,先低倍再高倍.用完要擦掉油.加香柏油,作用是增加折光率,也就是增加了显微镜的分辨率.油的折光率和分辨率成反比(有公式),同时与波长成正比. 2. 列表比较低倍镜、高倍镜及油镜各方面的差异。为什么在使用高倍镜及油镜时应特别注意避免粗调节器的误操作答：使用高倍镜和油镜时镜头距离标本较近，而粗调节器的调节幅度较大，粗调节器的误操作会使镜头大幅度向标本移动，很容易损坏标本和镜头。一般先用低倍镜找到物象后换到高倍镜，就只需要用细调节器了。 3. 什么是物镜的同焦现象？它在显微镜观察中有什么意义？ 答：在一般情况下，当物像在一种物镜中已清晰聚焦后，转动物镜转换器将其他物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本准焦的状态，这种现象称为物镜的同焦。利用这种同焦现象，可以保证在使用高倍镜或油镜等放大倍数高、工作距离短的物镜时仅用细调节器即可对物像清晰聚焦，从而避免由于使用粗调节器时可能的误操作而损坏镜头或载玻片。 4. 影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 答：物镜的NA 值（物镜的数值孔径）与照明光源的波长 5. 根据你的实验体会,谈谈应如何根据所观察微生物的大小,选择不同的物镜进行有效地观察 答：细菌用油镜，真菌用高倍镜。都是先用低倍镜找到目标后，再用高倍镜调到合适的视野和合适的清晰度。 答：放线菌、酵母菌、多细胞真菌相对较大，用放大40 倍的物镜就可以看了，细菌小，要用放大1000 倍的物镜看，感觉还很小。病毒那就要用电子显微镜看了。 6. 哪些环节会影响革兰色染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？ 答：涂片环节、加热固定环节、脱色环节；其中最关键的环节是脱色环节 7. 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，用老龄细菌染色会出现什么问题? 答：着色不均，染色效果不好。阴性阳性不明显分不太清楚,问题是：不便于显微镜下观察是阳性菌还是阴性菌 8. 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 答：不可以。因为碘与染料会结合成大分子，使得染料分子不能穿过细胞的细胞壁，对
临床微生物学检验技术试题及答案A1题型 1、人类ABO血型抗原包括 A、A抗原 B、B抗原 C、O抗原 D、AB抗原 E、A抗原和B抗原 答案：E 2、ABO血型物质在人体中可引起哪几种Ab产生 A、抗B抗体 B、抗AB抗体 C、抗A抗体 D、抗O抗体 E、抗A和抗B抗体 答案：E 3、免疫耐受就是 A、非特异性无反应性 B、特异性无反应性 C、机体无反应性 D、免疫抑制性 E、对任何抗原都不反应 答案：B 4、迟发型皮肤过敏反应与下列哪种物质有关 A、IgE B、IgA C、活化B细胞 D、活化T细胞 E、活化NK细胞
答案：D 5、佐剂作用是 A、将Ag送入机体各部位 B、将Ag固定在局部 C、增强Ag免疫原性 D、赋予Ag免疫原性 E、增强机体对Ag的免疫应答 答案：E 6、下列哪种物质既有非特异性免疫也参与特异性免疫反应 A、IgG B、干扰素 C、IgA D、前列腺素 E、补体 答案：E 7、TDH 细胞是 A、产生Ab细胞 B、天然杀伤细胞 C、细胞毒细胞 D、迟发变态反应T细胞 E、依Ab杀伤T细胞 答案：D 8、关于霍乱弧菌是否侵入上皮细胞，下列说法正确的是 A、不侵入 B、侵入 C、在特定条件下侵入 D、具有侵袭基因的霍乱弧菌侵入 E、侵入后局限于上皮细胞内 答案：A 9、葡萄球菌能产生多种溶血素，其中最主要的是
A、α、β溶血素 B、α、γ溶血素 C、β、γ溶血素 D、δ、ε溶血素 E、α、γ溶血素 答案：A 10、与其他肺部感染病原菌相比较，铜绿假单胞菌的毒力特点是 A、产生外毒素 B、具有内毒素 C、产生溶血素 D、产生绿脓素 E、具有菌毛 答案：D 11、有荚膜的流感嗜血杆菌含有荚膜多糖抗原称作： A、V抗原 B、M抗原 C、A抗原 D、X抗原 E、S抗原 答案：B 12、下列关于铜绿假单胞菌叙述中，正确的是 A、革兰氏阳性球菌 B、革兰氏阳性杆菌 C、无芽孢 D、具有荚膜 E、无鞭毛 答案：C 13、下列何种微生物具有荚膜结构 A、军团菌 B、支原体
实验一水中细菌的分离、培养、鉴定及菌落总数的测定 1 培养基的配制及灭菌 【目的要求】 1．了解培养基的概念、种类及用途 2．了解培养基的配制原理及其常规配制程序 3．学习和掌握细菌培养基的配制方法。 【基本原理】 培养基是指利用人工方法将适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的各种营养物质混合配制而成的营养基质，主要用于微生物的分离、培养、鉴定、菌种保藏等方面。自然界中微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基种类很多。不同培养基一般都应含有微生物生长繁殖所需的碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等营养成分。此外，为了满足微生物生长繁殖的要求，还必须控制培养基的pH值。 牛肉膏蛋白胨培养基是一种用于培养细菌的培养基，属于半合成培养基。 【材料与用品】 1．材料与试剂 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、NaCl、NaOH溶液（1mol/L）、pH试纸。 一、肉膏蛋白胨培养基的配制 1．培养基成分 牛肉膏0. 3g 蛋白胨1g NaCl 0.5g 琼脂 1.5g 水100mL pH 7.2~7.4 2．配制方法 （1）称量及溶化：分别称取蛋白胨和NaCl的所需量，置于烧杯中，加入所需水量的2／3左右的蒸馏水；用玻璃棒挑取牛肉膏置于另一小烧杯中，进行称量。然后加入少量蒸馏水于小烧杯中，加热融化，倒入上述烧杯中。 （2）定容：将溶液倒入量筒中，补充水量至所需体积。 （3）加琼脂：将所需量的琼脂先放到三角瓶中，再将定容后的培养基倒入三角瓶中。 （4）调pH：待溶液冷至室温时，用1mol/L NaOH溶液调pH至7.2~7.4。 （5）分装、加塞、包扎。 （6）高压蒸汽灭菌20分钟。 待培养基冷却至60℃左右时，倒入已灭菌的培养皿中，等到培养基完全凝固后，放入冰箱中保存。 【思考题】 1.制作平板培养基的注意事项是什么？ 2.培养基配好后，为什么必须马上进行高压蒸汽灭菌？如不能及时灭菌时，应将培养基暂时放置何处？ 3.如何检查灭菌后的培养基是否无菌？ 2 细菌的分离和培养 【目的要求】 1．掌握细菌稀释分离技术。
实验一显微镜的使用及微生物大小测定的方法 二、基本原理 现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，它们由机械装置和光学系统两大部分组成。物镜的性能最为关键，它直接影响着显微镜的分辨率。其中油镜的放大倍数最大，对微生物学最为重要。 微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征，也是分类鉴定的依据之一。微生物大小的测定，需要在显微镜下，借助于特殊的测量工具—测微尺，包括目镜测微尺和镜台测微尺。其中镜台测微尺并不直接用来测量细胞大小，而是用于校正目镜测微尺每格的相对长度。目镜测微尺每小格所代表的实际长度因显微镜的不同放大倍数而异，因此用目镜测微尺测量微生物大小时，必须先用镜台测微尺进行校正，以求出该显微镜在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度，然后根据微生物细胞相当于目镜测微格数，即可计算出细胞的实际大小. 两重合线间镜台测微尺格数×10 目镜测微尺每格长度= 两重合线间目镜测微尺格数 思考题 1、用油镜观察时应注意哪些问题？在载玻片和镜头之间加滴什么油？起什么作用？ 答（1）应先用摖镜纸将镜头摖干净，以防止实验的污染。使用油镜时，应先用低倍镜再用高倍镜，然后再是油镜，用完之后也要用摖镜纸将油镜摖掉。（2）滴加香柏油 （3）作用是增加折射率，即增加了显微镜的分辨率，油的折射率和分辨率成反比，同时与波长成正比。 2、影响显微镜分辨率的因素有哪些？ 答：显微镜的分辨率指显微镜能辨别两点之间的最小距离的能力，最小分辨距离越小，分辨率越高，最小可分辨率距离=λ／2NA且NA=n.sin,所以，分辨率由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定，当然还有介质的折射率。 3、为什么要换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正？ 答：不同放大倍数，目镜测微尺每小隔所代表实际长度不一样，必须用镜台测微尺进行重新校正，这样目镜测微尺测量的长度才是目前状态的准备长度。 4、在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一微生物的大小时，其测定的结果是否相同？为什么？ 答：相同的，不同的放大倍数，目镜测微尺每小格所代表实际长度不一样，必须重新校正，才能得到目前状态的准确长度。 实验二显微镜直接计数法 二、基本原理 显微镜直接计数法是将小量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻片上（又称计菌器），其优点是直观、快速、操作简单。目前国内外常用的计菌器有：血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器及Hawksley 计菌器等。利用血细胞计数板在显微镜下直接计数是一种常用的微生物计数方法。此法是将单细胞微生物的悬液或孢子悬液，注入血球计数板载玻片与盖玻片