Sigma的试剂：IBMX（Sigma I-7018) Dexamethasone (Sigma D-4902) Insulin (Bovine; Sigma I-5500) gibco血清：小牛血清(GibcoBRL-Cat#16170-078/Lot #1060198) 胎牛血清(GibcoBRL-Cat# 10437-028/Lot # 1026566) 培养基DMEM;（GibcoBRL-Cat# 11965-084） MEM Sodium Pyruvate (100mM; GibcoBRL Cat#11360-070) Pen/Strep/Glutamine (100x P/S/G; GibcoBRL Cat#10378-016) 一: 本次3T3-L1细胞共一25cm3培养瓶消化后传代分为2个10cm培养皿，3天后每个10cm皿分别传代3个10cm皿。共6个10cm皿，将其中5个皿细胞冻存于-80°，将一个10cm皿中3t3-l1细胞分别接种于一个6孔板一个12孔板其中4孔和2个10cm皿，待2个10cm皿中细胞铺满90%后消化冻存于-80。 二：6孔板和12孔板4孔即将用于分化。两者均在细胞铺满90%左右接触抑制2d开始加诱导剂，诱导方案严格按照之前计划的施行，诱导剂①培养2d后换为诱导剂②培养2d，后换诱导剂③培养，以后每48h换液，均采用诱导剂③，8天左右即可看到脂滴，此次整个诱导过程共用14天，出脂滴后继续48h换液，目的主要是获得更多的脂肪细胞。 三：3t3-l1诱导分化过程整体较为顺利，之前考虑到的诸如细胞可能贴壁不牢，易漂浮的情况基本未出现（漂浮很少），诱导剂配置过程中由于剂量极低，担心的浓度不准问题，后证明对分化影响不是很大。 一、诱导液配制 1、4,3-异丁基-1-甲基黄嘌呤溶液（IBMX）配制。分子量222，几乎不溶于水，现配现用，过滤除菌。100×母液（50mmol/L）：IBMX+940ul超纯水+60ul 1mol/L KOH。每毫升培养基加10ul IBMX.
C3H1O T1 2细胞向神经元诱导分化的方法研究 邓均 艾国平 王军平 徐辉 邹仲敏 闫国和 董世武 郝磊 冉新泽 粟永萍 【摘 要】 目的 探讨体外诱导间充质干细胞(m esenchym al stem cells,M SC s)系C3H1O T1 2细胞分化为神经元细胞的方法。 方法 取3月龄SD大鼠1只,体重200g,进行神经元细胞的原代培养及诱导上清液的收集,用细胞免疫组织化学方法进行鉴定。将C3H1O T1 2细胞进行培养,分别用Β巯基乙醇(A组)和神经元原代细胞上清液(B组)作为诱导剂,对C3H1O T1 2细胞进行诱导分化;对照组(C组)不加诱导剂进行培养。采用细胞免疫组织化学方法对分化的细胞进行鉴定。 结果 细胞免疫化学检测原代培养细胞为神经元,表达特异标志物:神经丝蛋白(neu rofilam en t p ro tein, N F)和神经元特异性烯醇化酶(neu ron specific eno lase,N SE)。A组C3H1O T1 2细胞经Β巯基乙醇诱导2h即表达N F和N SE,5h表达强度增强。B组C3H1O T1 2细胞经原代神经元培养上清液诱导,1d有N F和N SE表达,但表达强度比A 组弱。各组N SE表达阳性率和强度均高于N F。 结论 化学分子和微环境体液因素均可诱导M SC s向神经元细胞分化;为M SC s通过神经分化参与脑创伤的修复提供了理论依据。 【关键词】 间充质干细胞 分化 神经元细胞 诱导 中图分类号:Q813111 R329.2 文献标识码:A EXPER I M ENTAL INVESTIGATI ON ON CHARACTER ISTI CSOF C3H1OT1 2CELL IND UCED D IFFERENTI ATI ON INT O NEUR ON-L IKE CELL S D EN G J un,A I Guop ing,W A N G J unp ing,et a l.Institu te of Co m bined Inju ry,Colleg e of P reven tive M ed icine,T h ird M ilita ry M ed ica l U n iversity,Chong qing,400038,P.R.Ch ina.E2m a il:dj t mm u@to m. co m Corresp ond ing au thor:SU Y ongp ing,E2m a il:suyp2003@y ahoo.co https://www.doczj.com/doc/c5908167.html, 【Abstract】 Objective To exp lo re the m ethod that can induce the m esenchym al stem cells(M SC s)to differen tiate in to the neu ron2like cells in v itro.M ethods T he neu ron2like cells w ere iso lated from an SD rat(age, 3mon th s;w eigh t,200g).T hey underw en t a p ri m ary cu ltu re;the induced liqu id supernatan t w as co llected,and w as iden tified by the cell i m m unoh istochem istry.T he C3H1O T1 2cells w ere cu ltu red,as an M SC s model,and they w ere induced in to differen tiati on byΒ2m ercap toethano l(Group A)and by the liqu id supernatan t of the neu ron2like p ri m ary cells(Group B),respectively.T he cells w ere cu ltu red w ithou t any inducti on w ere u sed as a con tro l(Group C). I mm unoh istochem istry w as u sed to iden tify the type of the cells.Results T he resu lt of the i m m unochem istry show ed that the cells undergo ing the p ri m ary cu ltu re exp ressed the neu rofilam en t p ro tein(N F)and the neu ron specific eno lase (N SE),and they w ere neu ron2like cells.Β2m ercap toethano l cou ld induce the C3H1O T1 2cells to exp ress N F and N SE at2h,and the exp ressi on in ten sity increased at5h.T he liqu id supernatan t of the p ri m arily2cu ltu red neu ron2like cells cou ld induce the C3H1O T1 2cells to exp ress N F and N SE at1d,bu t the exp ressi on in ten sity induced by the liqu id supernatan t w as w eaker than that induced byΒ2m ercap toethano l.T he po sitivity rate and the in ten sity exp ressi on of N SE w ere h igher than tho se of N F.Conclusion M SC s can differen tiate in to the neu ron2like cells byΒ2m ercap toethano l and the m icroenvironm en t humo ral facto r,w h ich can pave the w ay fo r a fu rther study of the differen tiati on of M SC s and the effect of the differen tiati on on the b rain traum a repair. 【Key words】 M esenchym al stem cells D ifferen tiati on N eu ron2like cells Induce Founda tion ite m:N ati onal Basic Science R esearch and D evelopm en t Gran ts(2005CB522605) 近年来,干细胞由于其多向分化潜能成为研究热点,也成为细胞工程、再生医学研究中的主要选择细 基金项目:国家重点基础研究发展计划(973)资助项目(2005CB522605) 作者单位:第三军医大学军事预防医学院复合伤研究所(重庆, 400038) 通讯作者:粟永萍,教授,博士导师,研究方向:干细胞参与创伤修复的机制研究,E2m ail:suyp2003@https://www.doczj.com/doc/c5908167.html, 胞[1,2]。神经干细胞的发现为中枢神经细胞变性疾病和中枢神经系统损伤的移植治疗提供了有效的移植物,但由于目前很难获得足够的神经干细胞,因此寻找一种新的移植细胞来源,对神经科学领域基础与应用研究的发展至关重要[3,4]。研究证实,间充质干细胞(m esenchym al stem cells,M SC s)具有可塑性,可跨胚层分化,诱导分化为外胚层的神经元细胞[5,6]。而且M SC s易获取,易生长,有较强的增殖能力,可成为神
干细胞诱导分化具体步骤及注意事项 一、技术简介 干细胞诱导分化是诱导干细胞定向分化，使之成为成熟的功能细胞，是目前干细胞研究的关键环节。干细胞是一种未充分分化，具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。如：骨髓间充质干细胞是位于骨髓基质中的一类中胚层来源的未分化细胞，在体内外均发现有极强的增殖能力，具有很强的自我更新和多向分化潜能。在一定诱导条件下，可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等，还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞，具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。 在体胚胎分化过程中，组织发生和身体构造的形成具有时空顺序性和相互诱导性。在个体发育过程中，细胞分化是程序控制的有序有规律过程，程序的运行结果表现为不同发育阶段、不同组织部位的细胞表现出不同的形态、不同的生长方式和不同的生理功能。从分子水平上来看，这一结果取决于细胞在基因表达上的时空差异，这种基因表达差异除由细胞内在发育程序决定外，还受细胞外环境影响和调控，且有时这种外部控制条件或环境对形成特定细胞有着决定性作用。干细胞体外定向诱导分化的原理，就是选择适当的诱导剂和诱导模式，通过诱导物与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等，使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化，然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代，从而得到人们所需要的细胞类型。 二、实验流程 1. 干细胞的分离、原代和传代培养。 2. 定向诱导干细胞分化。 3. 成长曲线测定。 4. 诱导分化后细胞鉴定。 5. 结果统计分析。
万方数据
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华西口腔医学杂志第篮卷第４期２００７年８月 ———— 一一里型！１１些地婴坐堂皇！型些！臣！！！堑盟型些ｇ：！婴！：塑！： 物经琼脂糖凝胶电泳分折，可见一条约３８０ｂｐ大小 的扩增产物条带，与ＧＦＡＰ预期片段大小基本一致。 内参对照ＧＡＰＤＨ也可见９００ｂｐ的清晰条带（图４）。 ２．２免疫细胞化学染色１＋Ｍａ妇２：Ｇ８Ａ９和诱导细胞，３：ｃＦＡ’耳口束诱导细胞４： 诱导细胞抗黑∑世氍ｅ鲞掣肌岬：、”冒：Ｉ鬻翟：詈：黧鬻：…。，。。呈 ３），对照组这两种抗体染色均呈阴性。一 阳性表选 囤２坤经诱导４ｄ盾牙髓干细胞抗ＧＦＡＰ的阳性表远ＡＢｃ×２００ ，培２ｈ椰ｖｅ８叩哪ｌ…ｍ曲ｔｌｂｏｄ）∞ｃＦＡＰ缸ｄｅⅡｋｌＦＬＩｌｐｓｔ…ｅⅡｓⅡｅａｔｅｄ诵ｔｈＩ）叫口ｌｊｎｄｕｃｂｖｅｒｒ?刚ｉｕｍＲⅡ４ｄＨＹｓ ＡＢＣＨ２００ 幽３砷经诱导４ｄ后，牙髓Ｔ细胞抗Ｎ虬的｜５Ｈ性表述ＡＢｃ×２００ Ｆ咱３Ｐｏｇｉｄ…砷…ｍ们【ｈａ埘ｂｏｄｙｔ０ＮｓＥ０ｆｄｅｎ词ｐＵ如“Ｌｅ…ｄｋｈ即Ｌ出ｗＪⅡＩＪ?ｅｍ“１ｎｄｌｍｄ…ｌ。出Ｉｌｒｔ＿ｈ４ｄａｖｓ ＡＢＣ×Ⅻ ２＿３１ｗ—Ｐｃｌ｛检测 咀未诱导细胞为对照，诱导细胞的ＲＴ—ＰｃＲ产３讨论 成体干细胞的横向分化潜能或称为可塑性是指其不仅能分化为来源组织的各种细胞类型，而且具有分化为其他胚层来源的成熟细胞的潜能Ｈ。自从１９９７年有关成体干细胞可塑性的系列研究＝ｌ挂道后，可塑性研究引起生命科学领域的极大关注，对干细胞的研究产生重要影响。而这其中研究最多、可塑性最强的是骨髓基质干细胞（ｂｏｎｃｍｃｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ－ＢＭｓｃｓ），可以诱导分化为骨髂肌细胞、心肌细胞、内皮细胞、肝细胞、胆管上皮细胞、肺上皮细胞、肠上皮细胞、皮肤上皮细胞、神经细胞、脂肪细胞等，其中最引八注目的是其神经方向的分化潜能。 Ｅｄｉｔｉｓ等”研究表明小胶质细胞、星形胶质细胞是来源于骨髓的一种前体细胞。而Ｂｒａｚｅｌｔｏｎ等‘啦过绿色荧光蛋白基因转染示踪研究发现，在脑内微环境下，ＢＭｓｃｓ能分化为神经元样细胞、星形胶质样细胞，除表达相应神经细胞表型特点外，尚有神经元样功能。而在体外，削ＤＭｓＯ、ＢＨＡ、Ｂ—ＭＥ等作为主要诱导剂，可诱导成年大鼠和人的ＢＭＳＣｓ分化为神经元和神经胶质细胞，诱导后细胞在形态上出现类似于神经元样突起，表达ＮｓＥ、ｎｅｓｔｉｎ等神经细胞特异性标志㈣。此外，表皮生长｜盘｜子或脑源性神经生长因子与维甲酸或胎鼠的中脑、纹状体的悬液也可体外诱导ＢＭｓｃｓ分化为幼稚的神经兀和神经胶 质细胞口。可见体外不同培养条件下都可诱导ＢＭｓｃｓ 万方数据
癌的分化诱导治疗和分化诱导剂 作者：闫晓光(A1435)综述周训银1 吴军正2审校一般认为，癌细胞的分化程度较正常低，主要有以下几种观点：⑴癌细胞来源于未能完全分化的正常干细胞的异常分化；⑵癌细胞是已完全分化的正常细胞的反分化形成的；⑶癌变是细胞发育的阻抑，即细胞在早期分化阶段被致癌物转化为低分化、高增殖的癌细胞；而在细胞接近于分化完成时，被致癌物转化为高度分化的、低增殖的癌细胞。不管癌细胞是来自成熟细胞的反分化，或来自未成熟细胞的异常分化，还是阻抑正常细胞的分化，都可以看作是一种细胞分化的疾病，目前已经有许多把恶性细胞再分化成高分化不(或低)增殖正常细胞的例子：⑴Mckinell等人将蛙肾肿瘤细胞核注入受精的去核卵，结果发现肿瘤细胞核改变了基因的表达，经过正常分化，成长为正常的蝌蚪，及至成年蛙，都没有一点恶性肿瘤的迹象。⑵Mintz由含特异标志的小黑鼠分离畸胎瘤细胞，直接注入另一种含不同基因标志的小白鼠胚胎，然后将胚胎移植到假孕的寄养母鼠的子宫内，结果胚胎长成了正常鼠。从上面的实验中可以得出下面的启示：⑴至少有部分癌是由于基因的表达及功能改变所致，而基因的结构并未改变。如果癌都是由于基因的永久性突变，那么畸胎瘤就不可能再分化为正常细胞。⑵如果癌细胞可以向正常逆转，就有可能设计出一种治疗癌瘤的药物，促使癌细胞再分化成正常细胞。很多生成因子或化学物质在体内或体外可促进癌细胞分化而降低肿瘤恶性程度的事实，为发展抗癌治疗开辟了一条新途径──分化诱导治疗[1]。 1 分化诱导疗法特点 肿瘤细胞分化诱导疗法的基本特点为不杀伤肿瘤细胞，而诱导肿瘤细胞分化为正常或接近正常细胞，即在一些化学制剂的作用下，有的肿瘤细胞出现类似正常细胞的表型，有的恢复了正常细胞的某些功能，这些制剂被称为分化诱导剂，运用分化诱导剂促进体内肿瘤细胞分化来治疗癌症，被称为分化诱导疗法。目前国内外文献资料对癌细胞分化的叫法有所不同，如：逆转、表型逆转、逆向转化、正常化、脱癌、去恶性及去恶化等，总之，均表达出肿瘤细胞向正常细胞方向发展。分化诱导疗法的提出，打破了50年代曾流行的“一旦成了癌细胞，便永远是癌细胞”的观点，癌细胞的分化诱导疗法，作为肿瘤治疗的一条新途径，近年
胚胎干细胞体外诱导分化综述 摘要：由于胚胎干细胞具有自我更新、高度增值和多向分化的潜能，因此，自20世纪90年代开始，对胚胎干细胞的研究成为生物学领域和医药工程领域研究的一个焦点。本文从胚胎干细胞的分离、体外诱导胚胎干细胞的原理和定向分化的机制、胚胎干细胞体外诱导的方法、定向分化的细胞、应用前景和研究存在的问题对胚胎干细胞进行综述。 关键词：胚胎干细胞；体外培养；诱导分化；应用 干细胞是一种具有多分化潜能和自我更新功能的早期未分化细胞。在特定条件下，它可以 分化成不同的功能细胞，形成多种组织和器官，它包括胚胎干细胞和成体干细胞。前者指早期胚胎的多能干细胞，后者是存在于胎儿和成体不同的组织内的多潜能干细胞这些细胞具有自我复制能力，并产生不同种类的具有特定表型和功能的成熟细胞的能力，能够维持机体功能的稳定，发挥生理性的细胞更新和修复组织损伤作用[4,9,10]。 胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC)是从着床前胚胎内内细胞团(inner cell mass,ICM)或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞[1]。它能在体外长期不断自我更新,并保持多向分化潜能,可以分化为内、中、外三个胚层的几乎所有类型细胞。自1981年Evans和Kauffman[2,8]用不同的方法首次成功分离得到小鼠胚胎干细胞以来,小鼠胚胎干细胞成为近20年来人们用来研究发育分化、基因表达调控、基因治疗等最理想的模型，并且有大量研究表明小鼠胚胎干细胞可以在体外被诱导分化为绝大多数类型的成体细胞.1998年Thomson等首次成功分离并建立人胚胎干细胞系。自此，人胚胎干细胞不但提供了一个研究人类自身发育分化的良好机会,而且如果人胚胎干细胞能像小鼠胚胎干细胞一样可以在体外诱导形成各种成体细胞,那么利用这些诱导分化形成的成熟细胞将有可能进行细胞和组织替代治疗, 包括糖尿病、帕金森病、早老性痴呆、心血管疾病和肿瘤等多种目前临床上难以治愈的疾病。 1 胚胎干细胞的分离 自Thomson成功分离并建立人胚胎干细胞系后，多年以来，人们研究出很多胚胎干细胞的 分离方法，在这里主要介绍三种： 1.1 分离自胚胎内细胞团 内细胞团又称胚细胞（embryoblast）,是一团于哺乳动物初期胚胎中的一个细胞团块。从早期胚胎内细胞团（inner cell mass,ICM）分离是获得胚胎干细胞的主要途径。由于不同动物的胚胎发育存在差异，因此应注意取材时间。可通过免疫外科手术法、机械剥离法、组织培 养法等方法除去胚胎滋养层细胞获得囊胚内细胞团（ICM）细胞进行体外分化抑制培养。 1.2分离自原始生殖细胞
p27Kip1在神经前体细胞分化中的作用 作者：许秋岩张海燕赵咏梅 【关键词】 p27Kip1；神经前体细胞；细胞周期；分化 脊椎动物的神经系统发育过程是由细胞增殖与分化共同协调完成的，细胞周期调控蛋白参与了神经系统细胞周期的调节。受细胞周期调控蛋白严格调控的作用，多潜能神经前体细胞分化为神经元和神经胶质细胞，并在特异性形成的过程中，一些细胞周期调节蛋白起了关键的作用。p27Kip1作为细胞周期蛋白激酶抑制剂（CKI）家族的重要成员已经被广泛研究。本文将对p27Kip1在神经前体细胞分化中的作用及其调节机制作一综述。 1 p27Kip1与cyclins/CDKs结合促使细胞分化 在细胞分化过程中，G1期所有的周期蛋白激酶(CDKs)的活性都是降低的，在很多细胞的分化过程中都能观察到CKIs的聚集，作为CKIs家族主要成员的p27Kip1在细胞分化中发挥了关键的作用。p27Kip1是1994年由Polyak等〔1〕首先发现的一种周期蛋白依赖性激酶抑制剂，参与细胞周期的负向调控。p27Kip1能与很多细胞周期蛋白（cyclins）/CDKs结合，但主要与cyclinD/CDK4/6、cyclinE/CDK2结合，同时它对每种cyclins/CDKs活性的抑制也不同，对cyclinE/CDK2的抑制作用最强，cyclinD/CDK4次之，cyclinA/CDK2再次之，cyclinB/CDK2最弱。它的主要作用机制是与cyclins/CDKs 结合形成三聚体，并通过至少两个环节抑制cyclins/CDKs的活性：一方面，p27Kip1能够与CDK的亚单位结合，抑制CDK激活激酶 (CAK)
牙髓干细胞向神经细胞方向的诱导分化实验 贺慧霞;金岩;史俊南;罗玉庆;周艳妮;彭智;许玉和 【期刊名称】《华西口腔医学杂志》 【年(卷),期】2007(025)004 【摘要】目的探讨克隆化培养分离的人牙髓干细胞是否具有向神经细胞方向分化的潜能,并确定其诱导条件.方法克隆化培养的人牙髓干细胞预诱导24 h,然后换含一定浓度二甲基亚砜(DMSO)、丁羟基茴香醚(BHA)、forskolin、β-巯基乙醇(β-ME)和氢化可的松(hydrocortisone)的联合诱导液连续诱导4 d,对诱导细胞进行形态学观察,神经胶质酸性蛋白(GFAP)、非特异性酯酶(NSE)免疫组化染色和GFAP mRNA RT-PCR检测.同时,以未诱导细胞为对照.结果诱导12 h 时细胞形态开始改变,24 h时分化为较为典型的神经细胞样细胞,继续诱导分化细胞数量增多;诱导细胞表达神经元细胞特异性标志NSE和GFAP蛋白;RT-PCR 检测诱导细胞表达GFAP mRNA,而未诱导细胞均无上述改变和表达.结论人牙髓干细胞在一定的诱导条件下可横向分化为神经元样细胞. 【总页数】4页(331-334) 【关键词】牙髓干细胞;诱导;分化 【作者】贺慧霞;金岩;史俊南;罗玉庆;周艳妮;彭智;许玉和 【作者单位】第四军医大学口腔医院病理科,组织工程中心,陕西,西安,710032;武警甘肃总队医院,口腔科,甘肃,兰州,730050;第四军医大学口腔医院病理科,组织工程中心,陕西,西安,710032;第四军医大学口腔医院,牙体牙髓科,陕西,西安,710032;兰州军区临潼疗养院三区,门诊部,陕西,西安,710600;武警甘肃总队医院,口腔科,甘肃,兰州,730050;武警甘肃总队医院,口腔科,甘肃,兰州,730050;武
脂肪细胞的基础知识 脂肪细胞的生长全过程及其形态变化脂肪母细胞，是指能向脂肪细胞分化的ADSCs在激素、生物活性因子、寒冷等因素刺激下均能逐渐分化成为单能干细胞。它可保持着干细胞增殖活跃的特性，脂肪母细胞再进一步分化为前脂肪细胞，即通常人们所说的脂肪细胞前体。前脂肪细胞再经历细胞融合、接触抑制和克隆扩增等步骤启动向成熟脂肪细胞分化，并在胰岛素、地塞米松等诱导剂作用下完成向成熟脂肪细胞的分化。全过程可以表示为：多能干细胞——脂肪母细胞——前脂肪细胞——不成熟脂肪细胞——成熟脂肪细胞。生长期前脂肪细胞的形态与成纤维细胞相似，经诱导分化，其细胞骨架和细胞外基质发生变化，开始进入不成熟细胞向成熟细胞转变。细胞形态由成纤维细胞样逐渐趋于类圆或圆形，胞体逐渐增大，胞质中开始出现小脂滴，脂质开始累积，以后小脂滴增多并融合为较大的脂滴，可经油红“O”染色等方法于显微镜下显色，从而获得成熟脂肪细胞的形态特征。此时的细胞无分裂增殖能力，为脂肪细胞分化的终末阶段。 张高娜,梁正翠.动物脂肪细胞的研究进展[J].饲料工业,2009,30(2):42-44. 脂肪细胞由起源于中胚层的间充质干细胞逐步分化形成,按间充质干细胞→脂肪母细胞→前脂肪细胞→不成熟脂肪细胞→成熟脂肪细胞的过程发展。前脂肪细胞在多种转录因子调控下,激活脂肪组织相关基因,并在这些基因的顺序性调控下,经一系列复杂的步骤分化为成熟脂肪细胞。 张艳.脂肪细胞分化过程中的分子事件[J].儿科药学杂志,2008,14(1):56-57.
间充质干细胞 概念： 不同文献中，分别命名为抽脂处理细胞（processed lipoaspirate cells, PLA），脂肪基质微管碎片细胞（stromal vascularfraction cells, SVF），脂肪组织源基质细胞（adipose-tissue derived stromal cells, ATSCs），脂肪源中胚层干细胞（adipose-derived mesodermal stem cells, ADMSCs）等。这些不一致的名称均指从脂肪组织中分离的、可在体外大量扩增并具有多向分化潜能的细胞。 李惠侠,屈长青. 脂肪组织源性干细胞研究进展[J]. 生理科学进展,2007,38(2) 脂肪细胞是由起源于中胚层的间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)逐步分化、发育而来，MSC主要分布于脂肪组织和骨髓中。脂肪细胞不同发育阶段的两类细胞系为多能干细胞系和前体脂肪细胞系，前者为不定向的细胞系，能转变为稳定的脂肪细胞、肌细胞和软骨细胞，后者为定向的细胞系，是目前体外研究脂肪细胞分化应用最为广泛的细胞系。 庞卫军,李影. 脂肪细胞分化过程中的分子事件[J]. 细胞生物学杂志,2005,27: 497-500. 脂肪来源的间充质干细胞(adipose tissue derived mesenchymal stem cells, ADMSCs) 间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)具有自我更新及多向分化潜能,是一种 具有潜力的组织工程种子细胞。目前研究得比较多的是骨髓来源的MSCs,但骨髓中的间 充质干细胞数量很少(约占细胞总数的1/105),且存在取材困难等问题。MSCs广泛分布于 其他组织中,包括肌肉、血管、肝脏、胰腺和脂肪等。 ADMSCs表面有CD29、CD44、CD71、CD90、CD105/SH-2、SH-3、STRO-1等多 种抗原标志。 李冬艳,宇丽. 脂肪来源的间充质干细胞分离方法的改进[J]. 暨南大学学报(医学版),2007,28(6). 脂肪源性干细胞（adipose-derived stem cells，ADSCs） Zuk等从脂肪组织中分离出了一种成纤维细胞样细胞，它与骨髓间充质干细胞(MSCs)形态相似，称之为脂肪干细胞（ADSCs)，平均每300 ml脂肪组织可获得2×108～ 6×108个这样的细胞。ADSCs和MSCs具有相同的表现型，对CD29、CD44、CD71、 CD70、CD105/SH2和SH3为阳性反应，对CD31、CD34和CD45为阴性反应。此外， 它们还具有各自特征性的表达分化抗原：ADSCs具有特征性表达分化抗原CD49d，而MSCs具有特征性表达分化抗原CD106。 张高娜, 梁正翠. 动物脂肪细胞的研究进展[J]. 饲料工业,2009,30(2) 间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）是一类具备干细胞特点的细胞系，具有自我更新能力、长期的活性和多系分化潜能。 脂肪来源的间充质干细胞（adipose tissue-derived mesenchymal stem cells，ADSCs），以其取材方便、来源丰富等多种优势逐渐取代骨髓间充质干细胞（bone marrow-derived mesenchymal stem cells，BMSCs）。 免疫表型：研究发现ADSCs主要表达CD13、CD44、CD73、CD90、CD105、CD106、CD166、CD29、CD49e和HLA-ABC，而不表达CD34、CD3、CD19、CD45、CD14、CD117、CD31、CD62L、CD95L和HLA-DR。这个结果和其他的MSCs几乎一致。但ADSCs与BMSCs也有差别：大部分BMSCs表达CD10，而表达CD10的ADSCs仅占5%～20%；几乎所有的ADSCs表达CD49f和CD54，而BMSCs极少表达。 周苏娜,张明鑫. 脂肪来源的间充质干细胞的生物学特征及临床应用[J]. 中国现代普通外科进展,2009,12(1). 不同细胞的表面标志是不同的，脂肪干细胞的表面标记为：CD9、CD10、CD13、CD29、CD10、CD44、CD49e、CD49d、CD54、CD55、CD59、CD90、CD105、CD107、CD146、
骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展骨髓基质干细胞具有取材简单、增殖速度快、培养过程中始终保持多向分 化的潜能等特点，已经成为干细胞研究领域的热点，是最好的组织工程种子细胞之一，还可以诱导分化为神经细胞。本文对骨髓基质干细胞诱导分化为神经细胞的研究进展作一综述。 [Abstract] Bone marrow stromal cells has derived simple，fast growth，the training process remains much to differentiate and other characteristics，has been become the hot spot in the study of stem cells，is one of the best seed cells of tissue engineering.It can also differentiate into neural cells.The article reviewes the progress of induction of bone marrow stromal cells to neural cells and its mechanisms. [Key words] Bone marrow stromal cells；Neural cells；Bone marrow 骨髓基质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）位于骨髓中，是具有自我复制和多向分化潜能的非造血干细胞[1]。由于BMSCs具有取材容易、培养简单、增殖能力强、可以传代并且不改变生物学特性以及没有伦理学及免疫排斥等优点而备受瞩目[2-3]，BMSCs为治疗中枢神经系统疾病的一种理想供体细胞[4-6]。本文将BMSCs诱导分化为神经细胞的研究现状作一综述。 1 BMSCs定向分化为神经细胞的研究现状 1.1 体内定向分化 大量研究表明，BMSCs在体内可以分化为神经细胞。有学者将来源于人的BMSCs注入小鼠纹状体内，5～72 d后发现，在脑组织切片上有供体细胞存在，同时无明显炎症反应和排斥反应[7]。Mezey等[8]进行了雄性和雌性小鼠BMSCs 移植实验，将雄性小鼠的BMSCs植入雌性小鼠体内，一段时间后进行检测发现有携带Y染色体的神经细胞出现在雌性小鼠体内，提示雄性小鼠的BMSCs在雌性小鼠的体内分化成神经细胞。Guillermo等[9]将BrdU标记的大鼠BMSCs注入胎龄为15 d的大鼠胚胎的侧脑室内，在胎龄18、20 d时检测发现移植的细胞形成细胞团，2个月时检测仍有少量的移植细胞存活，表明BMSCs可以在脑的微环境中分化为神经细胞并存活较长时间。Chen等[10]将BMSCs应用于脑外伤动物，发现其能分化为神经细胞，并对神经功能的恢复有明显的促进作用。上述实验表明，BMSCs在体内可以迁移、存活、在相应部位的微环境影响下可分化为神经细胞，并能发挥一定的神经修复功能。 1.2 体外定向分化 能在体外分化为有较完整功能的神经细胞，是BMSCs作为神经细胞移植的来源细胞应用于临床的基础，很多学者在如何诱导BMSCs分化为神经细胞方面做了大量有益的探索，取得了较大进展，截止目前，诱导方法大致可归纳为以下
龙源期刊网 https://www.doczj.com/doc/c5908167.html, 胚胎干细胞的定向诱导分化及应用前景 作者：王士珍李雪甫陈培 来源：《科技视界》2012年第23期 【摘要】胚胎干细胞（embryonic stem cell, ES细胞)主要来自于胚胎发育早期囊胚中内细胞群(inner cell mass, ICM), 具有无限增殖、自我更新和多向分化的特性。理论上可以诱导分化为机体中200多种细胞，可作为细胞移植、组织替代, 甚至器官克隆的细胞供体，为将来治疗人类诸多难治性疾病提供细胞来源。本文简述了胚胎干细胞的诱导分化方法、定向分化的一些细胞种类以及应用前景。 【关键词】胚胎干细胞；诱导；分化 ES细胞是由囊胚的内细胞群或胎儿的原始生殖细胞(Primordial germ cells，PGCs)经体外抑制分化培养而获得的一种具有多向分化潜能的细胞。英国剑桥大学的Evans等[1]于1981年首次建立了小鼠胚胎干细胞系。Thomson等[2]于1998年利用临床上体外受精的胚胎，采用免疫法分离出内细胞群，首次成功分离出人胚胎干细胞系。同年，Sham blott等[2]以STO作为饲养层首次建立了人胚胎生殖细胞(hEGC)系。一般情况下，可将胚胎干细胞和胚胎生殖细胞统称 为胚胎干细胞。饲养层或白血病抑制因子（LIF）是ES细胞体外培养过程中保持未分化状态的必要条件。当培养条件有轻微改变时，例如在培养液中添加某些诱导分化因子（维甲酸RA、DMSO等），ES细胞就会发生分化；另外，如果把脱离饲养层的ES细胞进行悬浮培养，会发育成大小不一的拟胚体（embryoid boby, EB）,然后可诱导EB向不同类型细胞分化。至今，已从ES细胞诱导分化出心肌细胞、骨细胞、软骨细胞、肝细胞、造血细胞、脂肪细胞、胰岛素细胞、神经细胞、内皮细胞等。这些诱导后的细胞有望为器官移植、损伤器官的修复提供原材料，具有十分广阔的临床应用前景。所以，近年来有关胚胎干细胞的定向分化研究已成为全世界研究的热点。 1诱导ES细胞定向分化的方法 目前，通常针对人们设想要得到的终末靶细胞，而采用不同的诱导分化方法，使ES细胞最终定向分化为目的细胞。最常用的诱导方法一般包括以下四种：化学试剂诱导法、细胞因子诱导法、共培养诱导法以及转基因诱导法等。 1.1化学试剂诱导法 维甲酸（retinoic acid，RA）是体内维生素A的代谢中间产物，主要影响骨的生长和促进上皮细胞增生、分化、角质溶解等代谢作用。Schuldiner等[3]用一定浓度的RA（10-6M）诱导人ES细胞向神经细胞分化。实验证实：产生的神经细胞比未用RA处理的对照组增加了22%。目前，RA诱导ES细胞分化为神经细胞的机制还没有完全弄清楚。一般认为RA进入细胞后，最先与细胞质中维甲酸结合蛋白 (cellular RA binding protein，CRABP)形成复合物，然
B cell lymphoma DLBCL,37% FL,29% MALT,9% MCL,7% CLL,12% others T cell lymphoma PTCL,NOS,25.9% AITL,18.5% E/NK T cell lymphoma,10.4% ATLL,9.6% ALCL,ALK+,6.6% ALCL,ALK-,5.5% ETTL,4.7% Others,18.8% 这基本概括了淋巴瘤的相对发生率，由此可见，在B细胞淋巴瘤中，我们只要了解5种基本常见的淋巴瘤，就可以诊断大约95%以上的B细胞淋巴瘤；T细胞淋巴瘤的诊断相对复杂，分类也较多，一个原因是它与NK细胞来源的肿瘤被共同分在一组，还因为TCR的不同以及T细胞功能的多样化，导致了T细胞淋巴瘤在临床中的诊断相对于B细胞要困难一些。前面已经讲过分类的原则，是基于细胞分化所对应的阶段，还有一个重要原则就是预后和治疗手段。
前体细胞淋巴瘤 B淋巴母细胞淋巴瘤/B急性淋巴母细胞白血病 B淋巴母细胞淋巴瘤/白血病是来源于B前体细胞的肿瘤.前面已经讲解过淋巴瘤与白血病 的区别，即对于淋巴瘤的诊断来讲，当病变带有巨大肿块并表现为无外周血和骨髓或少量 外周血和骨髓浸润；当病变主要以骨髓和外周血浸润为主的情况下，诊断为白血病更为合适。但是如果既有巨大肿块又有骨髓病变应该如何来明确的区分两种诊断呢，WHO血液 系统分类将25%骨髓母细胞浸润来定义白血病。于髓系白血病相比，没有下线的限制，但 是通常如果母细胞少于20%的骨髓浸润，则应该避免诊断为白血病。 ALL： 75%的病例发生于小于6岁的儿童。全世界范围内的发病率在1-4.75/100,000人。遗 传性病变可能占有一小部分病例。 骨髓病变为主，通常具有外周血浸润。髓外浸润也很常见，如中枢神经系统，淋巴结，脾，肝和睾丸。 临床特征主要为血小板减少，贫血，中性粒细胞减少。白细胞计数可能减少，不变或 显著增加。淋巴结病变，肝脾肿大常见。骨痛和关节痛多见。 LBL： 主要为淋巴结或结外病变，最常见的侵犯部位有皮肤，软组织和骨。在无白血病相时 可能无症状，大多数病例为临床I/II级，头颈部表现较为常见，特别是儿童病例。骨髓和 外周血浸润可能存在，但是通常母细胞小于25%。 细胞形态学：组织切片表现为细胞中等大小，核圆形/椭圆形，或轻微的内陷，染色质 均质性弥散。核仁在不同病例中差异较大，有时不明显。有丝分裂情况也因为病例不同富 于变化。天星现象可见。低倍镜下主要是弥漫性生长，有时也呈现副皮质区生长，但较为 少见。在软组织切片上，肿瘤细胞呈单线排列，即single-file pattern。印片时，细胞可能 为小的带有少量细胞质和浓缩的核染色质肿瘤细胞，至大的中等量淡蓝染色的细胞质，弥 散的染色质及显著细胞核的大细胞。核圆形，不规则或呈回旋状。细胞质空泡可见，嗜天 青颗粒大约见于10%的病例。有时一些肿瘤细胞表现为“手镜”样（hand mirror cells）的 形态.
诱导分化成熟脂肪细胞 方案 集团标准化办公室：[VV986T-J682P28-JP266L8-68PNN]
Sigma的试剂：IBMX（Sigma I-7018) Dexamethasone (Sigma D-4902) Insulin (Bovine; Sigma I-5500) gibco血清：小牛血清 (GibcoBRL-Cat#16170-078/Lot #1060198) 胎牛血清(GibcoBRL-Cat# 10437-028/Lot # 1026566) 培养基DMEM;（GibcoBRL-Cat# 11965-084） MEM Sodium Pyruvate (100mM; GibcoBRL Cat#11360-070) Pen/Strep/Glutamine (100x P/S/G; GibcoBRL Cat#10378-016) 一: 本次3T3-L1细胞共一25cm3培养瓶消化后传代分为2个10cm培养皿， 3天后每个10cm皿分别传代3个10cm皿。共6个10cm皿，将其中5个皿细胞冻存于-80°，将一个10cm皿中3t3-l1细胞分别接种于一个6孔板一个12孔板其中4孔和2个10cm皿，待2个10cm皿中细胞铺满90%后消化冻存于-80。 二：6孔板和12孔板4孔即将用于分化。两者均在细胞铺满90%左右接触抑制2d开始加诱导剂，诱导方案严格按照之前计划的施行，诱导剂①培养2d后换为诱导剂②培养2d，后换诱导剂③培养，以后每48h换液，均采用诱导剂③，8天左右即可看到脂滴，此次整个诱导过程共用14天，出脂滴后继续48h换液，目的主要是获得更多的脂肪细胞。 三：3t3-l1诱导分化过程整体较为顺利，之前考虑到的诸如细胞可能贴壁不牢，易漂浮的情况基本未出现（漂浮很少），诱导剂配置过程中由于剂量极低，担心的浓度不准问题，后证明对分化影响不是很大。 一、诱导液配制 1、4,3-异丁基-1-甲基黄嘌呤溶液（IBMX）配制。分子量222，几乎不溶于水，现配现用，过滤除菌。100×母液（50mmol/L）： IBMX+940ul超纯水+60ul 1mol/L KOH。每毫升培养基加10ul IBMX.
少突胶质细胞前体细胞(OPCs)对髓鞘再生的影响 作者：裴星瑶 0905010326 动医093班 【关键词】少突胶质细胞；前体细胞(OPCs)；髓鞘再生；多发性硬化病（ＭＳ）；因素；炎症 髓鞘再生是一个在脱髓鞘的轴突上重新形成髓鞘的过程。在多发性硬化症中出现的非连续性髓鞘化，以及后继的轴突完整性丧失，使得增强髓鞘再生成为一个重要的治疗靶标。前体细胞(OPCs)分化为成熟的少突胶质细胞是髓鞘再生成功的一个关键步骤。而髓鞘再生遇到许多障碍，少突胶质细胞及其OPCs在的聚集不足或分化失败，受到了多种因素的调控。 少突胶质细胞前体细胞OPCs 募集：包括细胞活化、增殖和迁移，受多种信号系统调控。正常情况下，少突胶质细胞前体细胞存在于前脑脑室下区、后脑和脊髓的腹侧区，处于相对静止状态，数量也相对稳定。当CNS脱髓鞘时，OPCs被激活，体积增大，出现粘蛋白NG2阳性细胞标志。其中OPCs增殖与血小板源性生长因子(PDGF)关系密切。PDGF是胎儿OPCs的有丝分裂原，在脑发育阶段能调节OPCs数量。证明PDGF—Ot是调控OPCs增殖的重要因素。 分化：OPCs达到一定数量，即停止增殖并进入分化阶段。OPCs的分化是指在裸露的轴突周围，OPCs形成了能生成新的髓鞘的少突胶质细胞及其它胶质细胞的过程。 少突胶质细胞前体细胞(OPCs)及少突胶质细胞介导在中枢神经系统(CNS)中起着重要的作用，髓鞘再生是脱髓鞘疾病发生后的重要修复方式，其过程中OPCs 分化形成具有功能性的少突胶质细胞，而少突胶质细胞形成髓鞘。近来研究表明，前体细胞也可以分化成为星形胶质细胞，小胶质细胞等其它神经胶质细胞，但少突胶质细胞是形成中枢神经系统有髓神经纤维髓鞘的重要形成细胞，包裹髓磷脂于中枢神经的轴突周围，而且目前有大量的间接的证据表明少突胶质细胞不仅形成髓鞘，它们释放的营养因子，对于轴突生存是必要的。其中的一部分证据来源于对Cnpl基因在干细胞中功能的研究。在中枢神经系统中，这个编码2"-3 环核苷酸磷酸二酯酶的基因无一例外地只在少突胶质细胞中表达。实验表明少突胶质细胞在保护轴突完整性方面起着重要的作用，而该保护功能的实现，依赖于2"-3 环核苷酸磷酸二酯酶的表达。少突胶质细胞的这个营养功能与其形成正常髓鞘的功能有很大的不同。 多发性硬化病（MS） 多发性硬化(MS)是以中枢神经系统炎性脱髓鞘为特征的自身免疫性疾病。其发生机制与遗传易感性和环境因素(致病微生物)有关，引起T细胞介导的免疫系统紊乱，导致神经髓鞘破坏和继发轴索损害。是中枢神经系统脱髓鞘疾病。治疗这种疾病，首先要了解髓鞘再生和修复。 多发性硬化(MS)病人OPCs募集和分化均存在障碍，导致OPCs髓鞘不能修复，影响跳跃性传导，进而影响神经功能恢复。脱髓鞘化轴突的动作电位传导是非跳跃性的，在传导过程中的衰减也很快，而髓鞘再生可以恢复轴突高效的跳跃式动作电位传导功能。近来，研究者开始关注，髓鞘可以通过营养支持而提高轴突的寿命，从而保护神经元。由于其指出在脱髓鞘中更有效的保护轴突的方法是诱导