肠道原生生物保护小鼠免受细菌感染
尽管细菌经常是肠道微生物组的“明星”，但不断有新研究描画出一种更加复杂的情形——来自不同生物界的微生物积极地相互合作或彼此抵抗。在近日发表于《细胞》杂志上的一项新研究中，研究人员举了一个例子：一种新发现的原生生物，能阻止其宿主小鼠遭受肠道细菌感染。
该论文高级作者、美国西奈山伊坎医学院肿瘤学和医学教授MiriamMerad指出，“这是一个意外发现，但也是一项重要发现。该研究表明当研究肠道微生物组时，超越细菌是多么重要。”
研究人员意识到，在实验设施中培养的小鼠，要比从商贩购买的小鼠，拥有更多的肠道免疫细胞。于是，西奈山伊坎医学院研究生AlekseyChudnovskiy与博士后研究员ArthurMortha决定找出原因。当对两组小鼠进行肠道清洗时，他们惊讶地发现来自医学院实验室的小鼠，肠道中存在一种有鞭毛的原生动物。DNA测序结果揭示，这种微生物是一种新的原生动物寄生虫，他们将之命名为小鼠三毛滴虫。进一步研究表明，当这种原生生物被给予不含有它的小鼠体内时，这些小鼠肠道中的免疫细胞和炎性细胞因子数量增加。之后，研究人员发现小鼠三毛滴虫能激活小鼠肠道上皮细胞中的炎性体，从而激活细胞因子。他们还发现树突细胞是诱导炎症所必需的。
为了确定小鼠三毛滴虫的定植是否影响小鼠抵抗感染能力，他们让小鼠感染上沙门氏菌，结果发现含有小鼠三毛滴虫的小鼠能非常有效地抵抗感染。“这种保护效应非常惊人。”Chudnovskiy说。
小鼠三毛滴虫是脆双核阿米巴属的直系同源物。脆双核阿米巴属是一种在很多人的肠道中发现的寄生虫，但研究人员并不清楚其是否也有保护效应。他们计划进行进一步研究。Merad解释道：“来工业化国家的人们到新兴国家旅游时比本地人群更易遭受肠道感染。原因可能是新兴国家比较常见的原生生物产生了抵抗病原体感染的保护效应。”
大肠菌群及检验 一、大肠菌群介绍 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在（如沙门氏菌、志贺氏菌等），因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一，目前已被国内外广泛应用于食品卫生工
作中。 二、大肠菌群检验方法：由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行。目前国内采用的进出口食品大肠菌群检测方法主要有国家标准和原国家商检局制订的行业标准。两个标准方法在检测程序上略有不同。 （一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 具体操作参见GB4789.3-94 《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验大肠菌群测定》 （二）原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。证
资料收集于网络，如有侵权请联系网站删除 肠道感染细菌复习题 一、选择题 A型题 1．在初步鉴别肠道致病菌和非致病菌上具有重要意义的试验是 A.葡萄糖发酵试验 B.乳糖发酵试验 C.菊糖发酵试验 D.甘露醇发酵试验 E.吲哚试验 2.大肠埃希菌能引起尿路感染的主要原因是 A.膀胱内正常菌群 B.分解尿素 C.可利用CO2作为碳源 D.具有特殊菌毛 E.抵抗尿道中抗菌物质 3.关于肠道致病菌的主要特征，错误的是 A.革兰阴性杆菌 B.兼性厌氧 C.在SS琼脂平板上形成红色不透明菌落 D.能分解多种糖类和蛋白质 E.可用免疫血清鉴定 4．引起婴儿和旅游者腹泻的大肠埃希菌是 A.肠产毒型大肠埃希菌 B.肠致病型大肠埃希菌 C.肠侵袭型大肠埃希菌 D.肠出血型大肠埃希菌 E.肠集聚型大肠埃希菌 5．主要引起婴幼儿腹泻的细菌是 A.葡萄球菌 B.志贺菌 C.致病性大肠埃希菌 D.伤寒沙门菌 E.变形杆菌6．引起出血性结肠炎的细菌是 A.伤寒沙门菌 B.金黄色葡萄球菌 C.霍乱弧菌 D.O157：H7大肠埃希菌 E.副溶血性弧菌 7．能产生志贺样毒素的大肠埃希菌是 A.ETEC B.EIEC C.EPEC D.EHEC E.EaggEC 8．大肠埃希菌耐热肠毒素激活肠黏膜细胞中的酶是 A.转位酶 B.鸟苷环化酶 C.腺苷环化酶 D.透明质酸酶 E.胰酶 9．既能产生内毒素，又能产生外毒素的细菌是 A.结核杆菌 B.白喉杆菌 C.霍乱弧菌 D.脑膜炎球菌 E.痢疾志贺菌 10．对痢疾病人做微生物学检查，下列各项错误的是 A.分离培养细菌作生化鉴定 B.取粘液性或脓血便涂片，革兰染色镜检 C.取粪便标本增菌培养 D.取标本接种于肠道选择培养基培养 E.最后进行血清学鉴定 11．志贺菌引起中毒性菌痢的主要致病物质是 A.痉挛毒素 B.肠毒素 C.溶血毒素 D.内毒素 E.侵袭性酶12．能产生外毒素的志贺菌是 A.痢疾志贺菌 B.福氏志贺菌 C.鲍氏志贺菌 D.宋内志贺菌 E.以上均是13．迟缓发酵乳糖的志贺菌是 A.痢疾志贺菌 B.福氏志贺菌 C.鲍氏志贺菌 D.宋内志贺菌 E.以上均是 14.培养志贺菌常用的培养基中含有 A．亚碲酸钾B．孔雀绿C．5%的新鲜血球D．10%血清E．煌绿 15．关于志贺菌的叙述错误的是 A.无荚膜 B.不形成芽胞 C.有鞭毛 D.有菌毛 E.易出现耐药变异株
肠道菌群研究的主要方法 长期以来，为了研究肠道菌群的成员及其功能，科学家们建立和发展了众多技术 手段。经典的微生物学研究方法主要通过对细菌进行纯培养，然后在不同的培养条件下对细菌的生理活性进行研究。而随着分子生物学技术的飞速发展，在对环境中的复 杂微生物群落进行研究时，科学家们越来越多地运用不依赖于培养的方法，全面分析 各种微生物在环境中的活动和对环境的影响。 基于分离培养的方法 在肠道微生物学研究中，科学家们通常使用一定的选择性液体或固体培养基，对 粪便或肠道粘膜、肠道内容物等样本进行培养和富集，并对培养得到的细菌种类进行分析。根据肠道细菌的特性，对肠道菌进行培养通常需要在厌氧的条件下进行，严格 的厌氧和培养基的选择对于肠道菌的分离和生长非常重要。但是，局限于纯培养的方法具有很多不足之处。首先，体外培养体系难以模拟微生物在肠道中自然生长繁殖的条件，因此绝大多数的肠道微生物都还不能通过纯培养的方法得到分离；其次，仅仅依靠形态学和生理生化检测也不能对菌株进行准确的鉴定。因此，在研究肠道菌群结构和功能的研究中，研究者们通常结合分离培养方法和分子生物学方法，对感兴趣的细菌种类进行研究。 二．分子生态学研究方法 分子生态学方法通常以环境中各种微生物的基因组核酸（DNA 或RNA）为研究 对象。在以肠道菌群为对象的分子生态学研究中，研究者们最常使用核糖体小亚基 RNA 基因（细菌中的16S r RNA 基因）的全部或部分序列作为分子标签来代表物种，以基 因序列的多样性代表物种的多样性，从而对菌群的组成结构进行分析。细菌16S r RNA 基因具有广泛性、进化变异小、具备高保守区和高变区（V 区）等特点，同时序列还具有信息 量巨大且更新迅速的公开数据库，如Database Project（RDP）、SILVA 、Greengenes 等等，研究者们可以方便地将自己研究中的16S r RNA基因序列与数据库进行比对，确定细菌的分类地位。类似的，为了对肠道菌群中具有特定功能的类群进行检测，研究者们也建立了以功能基因片段为分子标签的分析方法。 常用的分子生态学分析方法分为两大类：基于DNA 指纹图谱的分析方法和基于DNA 测序技术的分析方法。除此之外，可用于实时定量的荧光定量PCR（Real time quantitative PCR）和荧光原位杂交技术（Fluorescence in situ hybridization, FISH）也是常用的分析手段。DNA 指纹图谱技术依据分子大小、核酸序列等特征的不同，将代表微生物群落中各物种的 DNA 分子标记物在凝胶上进行电泳分离，使代表不同物种的分子标记迁移到胶上的不同位置，最终得到的电泳图谱用于显示群落的组成结构。DNA 指纹图谱的最大优点是方便、快速、直观，常用于检测微生物群落结构的动态变化或比较不同群落之间的结构差异。最常用的DNA 指纹图谱技术包括变性梯度凝胶电泳（Denatured gradient gel electrophoresis，DGGE）和末端片段长度多态性（Terminal restriction fragment length polymorphism, T-RFLP）等。 不同于指纹图谱技术，DNA 测序技术的目的在于通过直接获取序列核酸信息的方法， 对群落中各物种的进化地位作出判断。基于单克隆质粒、转化细胞构建和桑格（Sanger）双脱氧法测序的16S r RNA 基因克隆文库长期以来广泛用于研究群落中微生物组成的方法，已被多次应用于人体肠道菌群的多样性分析，并获得了在物种检测深度和物种鉴定水平上均远远优于DNA 指纹图谱技术的结果 肠道菌群与健康相关研究中的应用
临床常用细菌感染指标 感染性疾病是目前临床上常见并严重危害人类健康的重要疾病之一，而细菌和病毒是最多见的、最主要的两种病原微生物，临床上快速、准确的诊断和鉴别对病人的治疗十分重要。在大多数情况下，尚无完善的、实用的、快速的病原学诊断技术以实现对细菌和病毒快速分离和鉴定，而目前常用鉴定感染指标有（1）血WBC和N分类；（2）血沉ESR；（3）白细胞介素-6（IL-6）；（4）血清hs-CRP；（5）PCT降钙素原。 一、白细胞计数和中性粒细胞分类比例 目前，WBC、N%作为传统感染指标，因其检测方法简便经济，是广大医院尤其是基层医院感染鉴别的主要指标，具有一定临床价值。WBC 计数方法简便、快捷, 目前仍被认为是鉴定细菌感染的常规项目。但是,白细胞及中性粒细胞计数对于细菌感染诊断的准确性较低,在局部细菌感染和脓毒症时二者有所升高，但在重症细菌感染组二者均下降，白细胞降至正常范围内，中性粒略有升高，因此二者均不能很好的反应细菌感染的严重程度。因为全身细菌感染时外周血WBC计数既可升高，又可减少，受许多因素的影响。另外剧烈运动、进食、寒冷刺激、情绪波动等以及采血部位不同和采血技术水平也可使血象出现较大差异[1]。所以WBC 计数和N%用于细菌性感染的诊断敏感性不够, 有一定的局限性。 血沉（ESR）是指在一定条件下红细胞沉降的速度。 绝大多数急性或慢性感染、恶性肿瘤、组织变性和坏死性疾病都能使血浆球蛋白和纤维蛋白原产生变化，或使异常蛋白进入血液，引起血沉加速。此外，贫血和月经期及妊娠三个月后也可以使血沉加速。因此，血沉是一种非特异性试验，不能单独用以诊断任何疾病。白细胞介素-6（IL-6） IL-6 是具有多种生物活性的细胞因子，由212 个氨基酸组成的多功能糖蛋白。在感染和炎症时，上皮细胞可分泌细胞因子IL-6 和IL-8，是局部和系统免疫反应的重要因子。在败血症患者体内的细菌感染产生炎症，刺激机体的T、B 细胞，单核细胞和内皮细胞分泌大量的IL-6。IL-6 通过促进巨噬细胞表达细胞黏附分子、组织因子，诱导肝细胞合成超敏C反应蛋白(hs- CRP)，使超敏CRP浓度提高。但国外资料表明，除细菌因素外，其它非感染因素也会引起IL- 6的非特异性升高，从而限制了IL- 6对诊断脓毒血症的诊断价值。而PCT 与hs- CRP则正好可以弥补IL- 6这一缺点。 另外，IL-6与急性胰腺炎疾病严重程度正相关，故IL-6水平能很好地评估急性胰腺炎的程度。 hs-CRP C －反应蛋白早于1930 年发现，是一种能与肺炎球菌C 多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白。近年来，随着检测技术的不断发展，检测超敏CRP（HS-CRP）方法的引入，CRP不仅可作为一种急性炎症的标志物，而且可区别在正常范围内低程度炎症反应中CRP 的水平。HS-CRP已被证实是由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素，检测其浓度对心血管疾病的干预及预后起重要作用被临床重视。 C 反应蛋白（CRP）是肝脏细胞在IL-6 的作用下分泌产生的一种非特异性急性时相蛋白，在应激情况下血清CRP 水平增高，在任何组织损伤和感染的急性期均可升高[2]。除细菌感染外，病毒感染、慢性炎症反应、梗死、急性创伤或手术、烧伤、免疫复合物沉积等都可以使CRP升高。健康人血清中CRP 含量很低，当机体受到细菌入侵引起炎症时，血中浓度其峰值可达基础值的数十倍至数百倍，并不受年龄、性别、体温及贫血等因素的影响，被认为是鉴别细菌感染与病毒感染的一个首选指标[3]。据沈国森等实验研究报道显示[4]，细菌性
肺炎动物模型研究现状及进展(一) 【关键词】肺炎动物模型研究现状 当前细菌性肺炎（bacterialpneumonia）占成人各类病原体肺炎的80%。然而过去30～40年中，由于细菌耐药率的不断增高，大量广谱或超广谱抗菌素投入临床并未使肺炎的死亡率持续下降。有报告住院死亡病人约15%与肺炎有关。社区获得性肺炎(CAP)死亡率为5%～10%，而医院获得性肺炎(HAP)的病死率则高达20%～50%。肺炎的临床症状趋于不典型，所谓“重症”肺炎时有发生，尤其在婴幼儿、老年人和免疫抑制患者中病死率极高。提高肺炎的病原学诊断水平，建立肺炎的动物模型，确立肺炎的动物诊断标准和肺炎动物模型的观测指标，是临床处理重症肺炎迫切而急需解决的课题。 国内外学者于上世纪上半叶先后建立了多种肺炎的模型，如卡氏肺孢子虫肺炎模型、衣原体肺炎模型、大肠杆菌肺炎模型、细菌性支气管性肺炎模型等，这些模型的建立为研究肺炎的发病机制和评价疗效奠定了基础。本文参考相关资料，综述近年的文献，旨在为同仁们提供更多有关肺炎模型相关研究的信息。 1卡氏肺孢子虫肺炎模型 卡氏肺孢子虫肺炎（PneumocystisCariniiPneumonia,PCP）为严重的机会性感染，多发生于AIDS 病人和其他免疫缺陷或免疫抑制的病人。机理是基于各种原因造成机体免疫力、抵抗力下降，潜伏状态下的卡氏肺孢子虫大量生长繁殖，形成“潜伏状态再激活”，引起相应的病理改变和临床症状。早在上个世纪50年代中期，Weller〔1〕首先用考的松注射大鼠，同时注射青霉素以预防细菌感染，通过病理检查证实大鼠患有PCP，从而建立PCP动物模型。Frenkel〔2〕等于1966年对大鼠注射考的松，2次/周，在动物饮水中加入四环素以预防细菌感染。Hughes 〔3〕等于1974年证实在蛋白质或热量摄入不足的情况下，更易诱导PCP的发生。经过几十年的发展，目前PCP模型的建立技术较为成熟。实验动物对象多为鼠科类，但也有用猪〔4〕或新西兰白兔〔5〕。最常用的模式为考的松类药物+抗菌药物+低蛋白质食物。此方式最早诱导出PCP时间多为6～8周。实验室采用这一方法最大的缺点就是易导致动物感染重度PCP，导致动物过早死亡，高死亡率的情况。动物低蛋白食物摄入，影响免疫球蛋白的合成，从而损害宿主免疫的免疫功能，促使肺孢子虫的繁殖和播散，加重宿主的感染度〔3〕。上个世纪90年代后期，国内学者〔6〕对上诉实验模式进行改进，增加实验动物蛋白质的摄入，从而使得PCP动物模型的病死率明显下降，寿命延长，更符合实验要求。目前国内文献报道〔7〕最早诱导出PCP时间为3周，较以前明显提前。国内有学者〔8〕采用半量诱导剂成功建立PCP模型，采用半量诱导剂使大鼠的死亡率由全量诱导剂的的70%下降至30%。于肺体检查出PC虫体为确诊PCP模型的成功建立。多采用以下三种方法：（1）肺印片检查（2）支气管肺泡灌洗液检查（BLAs）。三种检测方法以支气管肺泡灌洗液检查（BLAs）阳性率最高，约90%以上。以肺印片阳性率为最低，约为65%。 2衣、支原体肺炎模型 肺炎衣原体是人类较为常见的呼吸道感染致病源，易引起肺炎。由于此类肺炎症状较轻，到目前为止，人类对衣原体肺炎的肺部病理学改变尚不完全清楚〔9〕。为了对衣原体支原体肺炎的易感因素、抗生素的治疗效果以及宿主的免疫反应进行研究，国外学者先后在仓鼠、豚鼠等成功建立了肺炎支原体肺炎动物模型。国内学者分别于2001年、2004年以小鼠为实验对象成功建立肺炎衣原体肺炎模型〔10〕和肺炎支原体肺炎模型〔11〕。动物实验对象都采用鼠科类。肺炎衣原体肺炎模型建立中，按实验分组分别以鼻内接种或经静脉内接种衣原体菌液，分别于接种后的1、3、5、15、21、28、60天处死动物，通过检测肺炎衣原体lgG抗体、动物肺组织聚合酶链反应（PCR）、肺炎衣原体DNA扩增及组织病理学检查。实验结果发现鼻内接种的动物最早于接种后第7天发现lgG抗体，21天达到峰值。静脉接种动物的lgG抗体出现的更早。应用肺组织的PCR检查于接种后的14天内都可检测到肺炎衣原体DNA，
菌落总数和大肠菌群测定（固体样品） 药品： 1、平板计数琼脂 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST） 3、煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB） 4、氯化钠 设备材料： 烧杯、三角瓶、广口瓶、培养皿、刻度吸管、倒气管、玻璃 棒、试管、硅胶塞、洗耳球、棉花、布或报纸等。 一、准备工作 （指导书是按一个样品所需物品准备的，实验室可按样品量增加） 1、平板计数琼脂培养基准备----用于菌落总数测定 将三角瓶放在电子称上，去皮，按平板计数琼脂使用说明称量，加 200ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸加热煮沸，充分溶解，盖上硅胶塞，用报纸或布包好，再用橡皮筋扎紧。 2、月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤----用于大肠菌群测定 （a）将烧杯放在电子称上，去皮，按使用说明称量，加100ml蒸馏水搅拌，放电炉上煮沸，充分溶解。 （b）用10ml（毫升）的吸管分装到9支（18*180规格）试管中，每支试管加10ml的月桂基溶液LST （合计90毫升）。 （c）9支试管分别放入倒气管（开口向下），排气，盖上硅胶塞。
3、0.85%的生理盐水----用于样品稀释 将广口瓶去皮，称取氯化钠1.91g加225ml蒸馏水，摇匀，用报纸 或布包好，再用橡皮筋扎紧；同样配制第二瓶。 4、准备2个空试管，盖上硅胶塞----用于样品稀释。 5、准备8个培养皿，用布包扎好。 6、准备至少3支5ml和1支10ml带有刻度的吸管，用布包扎好（顶部可用棉球塞住，防止吸液时，液体不慎吸入洗耳球）。 7、准备操作的工具：剪刀1把、镊子1个、勺子等打开产品包装所需工具，用布包扎好。 二、使用灭菌锅灭菌 1、检查灭菌锅底部加热管水位是否正常，水位要高过加热丝。 2、将上面准备好的7步骤物品逐一放入锅内，注意：滴定管吸口向下，有棉球的向上。 3、盖上火菌锅盖子时，将排气管插到排气口内，注意从对角线开始拧紧螺丝，将排气阀打开（安全阀始终关闭），通电后，待排气阀放气3分钟后（锅内冷空气已经排完），关闭排气阀。 4、查看灭菌锅的压力表，当温度升到121°，压力升到0.1MP（兆帕）时，灭菌维持15分钟后（温度和压力不能过高或者过低），断电自然冷却到接近“ 0”度后，慢慢打开排气阀，再对角拧开灭菌锅。 三、无菌操作 进无菌室前的准备：放好工具（酒精灯，记号笔，消毒用75%酒精棉球，洗耳球，电子称），打开紫外线杀菌灯，杀菌30分钟后关闭，再等
前列腺炎动物模型研究进展 [摘要]前列腺炎动物模型有两大类即细菌性和非细菌性。前者主要用大肠杆菌注入实验动物前 列腺器官中制得；后者主要用化学制剂或生物制剂诱导而成。其中，生物制剂诱导的前列腺炎动 物模型具有较高的特异性，是较为理想的模型，它的造模方法主要有雌激素诱导法和大鼠前列腺 蛋白结合免疫佐剂法两种。这些模型为前列腺炎相关的探索性研究和开发应用性研究打下了必不 可少的坚实基础。 [关键词]前列腺炎；细菌性；非细菌性；动物模型 【】q95—33 【】a 【】1004—8448(20xx)03—021 1-04 前列腺炎是男性的常见病和多发病，国外研 究表明：其发生率约为4％---l1％，且多发生于青
壮年，可严重影响患者的家庭生活和精神生活。 由于研究方法、选择的研究对象不同，前列腺炎 概念的内涵各异。另外，前列腺炎的流行病学研 究也有待于深入。 1995年，美国国立卫生研究院fnih)对前列腺炎进行了重新分型，即i型：急性细菌性前列腺 炎；ii型：慢性细菌性前列腺炎；ⅲ型：慢性 非细菌性前列腺炎／慢性骨盆疼痛综合征；ⅳ型：无症状的炎症性前列腺炎。四型前列腺炎中，只 有i型的病因是较明确的，临床治疗效果也确切，占前列腺炎病人的2％～3％，其他三型的前列腺炎
发病原因都不清楚。其中，ⅱi型前列腺炎占临床 发病率的9o％以上，是前列腺炎中最常见的类型， 又可进一步分为ⅲa型和ⅲb型。因此前列腺炎疾 病的发生机制具有深入探讨的必要性。 为了给探索性研究和开发应用性研究打下必不 可少的坚实基础，众多学者研究制作了各种前列腺 (】20xx-01—17 【作者简介】李冬梅(1 970一)，女，硕士研究生，从事前列腺炎药 理毒理学研究 【通讯作者】孙祖越，email：sunzy64@ 1 63．corn
肠道感染细菌复习题 一、选择题 A型题 1．在初步鉴别肠道致病菌和非致病菌上具有重要意义的试验是 A.葡萄糖发酵试验 B.乳糖发酵试验 C.菊糖发酵试验 D.甘露醇发酵试验 E.吲哚试验 2.大肠埃希菌能引起尿路感染的主要原因是 A.膀胱内正常菌群 B.分解尿素 C.可利用CO2作为碳源 D.具有特殊菌毛 E.抵抗尿道中抗菌物质 3.关于肠道致病菌的主要特征，错误的是 A.革兰阴性杆菌 B.兼性厌氧 C.在SS琼脂平板上形成红色不透明菌落 D.能分解多种糖类和蛋白质 E.可用免疫血清鉴定 4．引起婴儿和旅游者腹泻的大肠埃希菌是 A.肠产毒型大肠埃希菌 B.肠致病型大肠埃希菌 C.肠侵袭型大肠埃希菌 D.肠出血型大肠埃希菌 E.肠集聚型大肠埃希菌 5．主要引起婴幼儿腹泻的细菌是 A.葡萄球菌 B.志贺菌 C.致病性大肠埃希菌 D.
伤寒沙门菌 E.变形杆菌 6．引起出血性结肠炎的细菌是 A.伤寒沙门菌 B.金黄色葡萄球菌 C.霍乱弧菌 D.O157：H7大肠埃希菌 E.副溶血性弧菌 7．能产生志贺样毒素的大肠埃希菌是 A.ETEC B.EIEC C.EPEC D .EHEC E.EaggEC 8．大肠埃希菌耐热肠毒素激活肠黏膜细胞中的酶是 A.转位酶 B.鸟苷环化酶 C.腺苷环化酶 D.透明质酸酶 E.胰酶 9．既能产生内毒素，又能产生外毒素的细菌是 A.结核杆菌 B.白喉杆菌 C.霍乱弧菌 D.脑膜炎球菌 E.痢疾志贺菌 10．对痢疾病人做微生物学检查，下列各项错误的是 A.分离培养细菌作生化鉴定 B.取粘液性或脓血便涂片，革兰染色镜检 C.取粪便标本增菌培养 D.取标本接种于肠道选择培养基培养 E.最后进行血清学鉴定 11．志贺菌引起中毒性菌痢的主要致病物质是 A.痉挛毒素 B.肠毒素 C.溶血毒
实验六食品中大肠菌群的测定一、概述 (一)大肠菌群的定义及范围 根据国家1994年颁布的食品卫生检验方法微生物学部分，大肠菌群(coliform bacteria)系指一群在37℃、24h能发酵乳糖，产酸、产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 大肠菌群主要是由肠杆菌科中四个菌属内的一些细菌所组成，即艾希氏菌届、拘橼酸杆菌属、克雷伯氏菌属及肠杆菌属，其生化特性分类见表5-4。 表5-4 大肠菌群生化特性分类表
注：+，表示阳性；—，表示阴性；+/-，表示多数阳性，少数阴性。 由上表可以看出，大肠菌群中大肠艾希氏菌I型和Ⅲ型的特点是，对靛基质、甲基红、v-P和拘橼酸盐利用四个生化反应分别为“十十一一”，通常称为典型大肠杆菌；而其他类大肠杆菌则披称为非典型大肠杆菌。 (二)大肠菌群的测定意义 1、粪便污染的指标细菌 早在1892年，沙尔丁格(Schardinger)氏首先提出大肠杆菌作为水源中病原菌污染的指标菌的意见，因为大肠杆菌是存在于人和动物的肠道内的常见细菌。一年后，塞乌博耳德“斯密斯(Theobold．Smith)氏指出，大肠杆菌因普遍存在于肠道内，若在肠道以外的环境中发现，就可以认为这是由于人或动物的粪便污染造成的；从此，就开始应用大肠杆菌作为水源中粪便污染的指标菌。 据研究发现，成人粪便中的大肠菌群的含量为：108个／g一109个／g。若水中或食品中发现有大肠菌群，即可证实已被粪便污染，有粪便污染也就有可能有肠道病原菌存在。根据这个理由，就可以认为这种含有大肠菌群的水或食品供食用是不安全的。所以目前为评定食品的卫生质量而进行检验时，也都采用大肠菌群或大肠杆菌作为粪便污染的指标细菌。当然，有粪便污染，不一定就有肠道病原菌存在，但即使无病原菌，只要被粪便污染的水或食品，也是不卫生的，不受人喜欢的。 2．粪便污染指标菌的选择 作为理想的粪便污染的指标菌应具备以下几个特性，才能起到比较正确
幽门螺杆菌感染的动物模型研究 十余年来，幽门螺杆菌（Helicobacterpylori,Hp）与各种慢性胃病（慢性胃炎，消化性溃疡，胃癌等）之间的关系，基本上已取得了一致认识。可是仍然有许多问题有待解决。例如：Hp的致病及致癌机进、Hp感染的免疫预防治疗问题；抗Hp治疗方案及药物的改进、是否所有Hp感染者都需要用抗Hp治疗等。这些问题的解决除了靠临床资料的累积外，免不了需要在实验动物模型上作更深入的研究。然而，制备与Hp感染有关的慢性胃病的动物模型比较复杂、比较困难，因此尚未能普遍采用。问题在于Hp是一种人类胃部的寄生菌，它并不能在任何动物胃中定居。另一方面许多动物消化道中自然寄生着一些类似于Hp的细菌，这给在实验动物中识别Hp与类似菌造成困难。下面我们来看一看已经发现的Hp 类似菌在自然动物中感染情况和已建立的Hp感染动物模型及其应用的现状。 1.Hp类似菌的自然感染 早在19世纪末有在狗、猫、棕色的挪威鼠胃中发现了螺形菌。但未在人、猴、牛、猪、小鼠、鸽子、乌鸦中找到。由于当时仅凭形态学判断，因此这些结果都未能肯定下来。直到1983年Marshall从人胃中分离到幽门弯曲菌（Campylobacter pylori,CP)后，才引起人们注意到此菌与慢性胃病的关系。同时亦引发人们对各种动物胃中类似菌的兴趣。1989年Goodwin对CP作了深入研究后，认为CP不同于弯曲菌属细菌，提出了一个新属名螺杆菌（Helicobacter），并确定Cp是这一属中的代表菌种，称作幽门螺杆菌（H.pylori, Hp）,同时亦把从雪貂胃中分离到的类似菌H.mustelac(Hm)，包括在这一属中，H属最主要的特 尿素酶（+）。有征是指这一类细菌属革兰阴性、螺旋形、有带鞘的鞭毛。微需O 2 特殊的脂肪酸组成等。自此以后，人们从不同种类动物的消化道中发现了不下10余种H属细菌。最早分离到的可能是大鼠和小鼠肠道中分离到的H.muridarum.已知有6种H菌从不同动物胃里分离到。除Hp与Hm外。尚有猫狗中的 H.felis(HF)，卷尾猴中的H.nemetrinae，猎豹中的“H.acinonyx”和狗中的https://www.doczj.com/doc/c11886212.html,zozero。原来归在Campylobacter属里的与人类胃肠炎有关的类似菌，H.cinaedi、H.fennelliac和H.heilmanii亦已归入此属。“Flexispira rappini”最早是在流产羔羊中分离到的细菌，最近亦在胃肠炎的病-人和小猎兔犬胃中发现。虽然这一细菌表现型上与Hp有差别，但根据产生尿素酶和基因型的特征已归入此属，称作“h.rappini”。除此之外尚有一些在动物下消化道中发现的，例如，引起小鼠肝炎的H.hepaticus等。 在人类或动物胃中除了Hp类似的细菌外，还有一些紧密螺旋形的细菌。例如：人胃中的人胃螺菌“Gastrospirillum bominis”，由于它们尚未能分离培养，对它们的生物学性状尚未充分了解，因此有的尚未正式命名。Henry就曾报告在小猎兔犬的胃粘膜电镜下曾显示三种形态的细菌：第一种是H.rappini，第二种H.felis，第三种是“G.hominis”，用特探针发现三者有明显的差别。还有一些未曾命名的H属细菌已经在燕鸥、家雀和猪中发现。有人还在雪貂中发现不同于Hm的H属细菌。在这同时亦有人报道从猴类动物及猫中直接分离到Hp。由此可以想像研制Hp感染动物模型的复杂性。
肠道菌群粪便涂片检查—用于菌群失调的诊断和防治 理论和基础 一、粪便直接涂片的优缺点： 1、优点： ①设备简单 ②操作简单 ③时间短 ④形象直观，直接了解粪便菌群的“像”，熟练者对诊断菌群失调有较高的准确性。 2、缺点： ①检验者必须有一定的经验，否则易判断错误 ②主要是定性检查，确定分度较困难。 二、操作技术： 1、涂片将新鲜大便直接涂抹在洁净的玻片上，粪便不可稀释以防细菌变形。标本务求新鲜，涂片厚薄适宜。 2、外观肉眼检查外观颜色、形状（若含有膜状物的大便应补做艰难梭菌培养）。 3、镜检染色技术是诊断准确成功的关键，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌要对比鲜明。镜检时应将涂片视野全面观览，切不可看几个视野就计数或报告。 三、检查方法：
1、细菌总数：观察菌群涂片首先要总览细菌总数。了解涂片上细菌的数量是增多还是减少，有无优势菌或真菌。细菌总数过多的情况较少见或不易引起重视。菌群失调时细菌总数多在正常、减少或消失。 细菌总数评定标准 每油镜视野细菌数评价 ＜10显著减少 11—100明显减少 101—500略微减少 501—5000正常 ＞5000增多 2、观察革兰氏阳性、阴性杆菌及球菌的比率改变 革兰氏阳性杆菌：革兰氏阴性杆菌：革兰氏阳性球菌：革兰氏阴性球菌（包括球菌/杆菌）比率反映了粪便菌群的质素，它一般不受粪便稀释或浓缩的影响，所以较细菌总数有更大的意义，更能反映菌群的本质和预后。 选定有代表性视野中的部分区域作细菌分类计数，需要数100—200个细菌以求得比例。不同年龄的人的比例都不一样，一般杆菌与球菌比例约为75：25。 各年龄组细菌比率平均值的正常参考值（%） 年龄革兰氏阳性杆菌革兰氏阴性杆菌革兰氏阳性球菌革兰氏阴性球菌 1d30.7—61.538.5—60.90—2.20—0.01 2d60.0—71.634.8—36.93.0—3.50—0.01 3d66.9—82.716.0—31.41.3—1.60—0.05 4d79.2—86.212.4—19.21.4—1.70—0.1 5d85.5—87.511.0—12.81.4—1.70.08—0.4 6d—7d75.4—90.17.2—20.81.3—2.90.1—0.6
大肠菌群检测方法 进入无菌室步骤 1．进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。 2．关灯后0?5小时后放可进入。 3．进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套 实验步骤 1，进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成） 2，准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。 3，直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml） 4，再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml） 5，再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 6，再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液 7，更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml） 8，再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml） 9，再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。） 10，把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中） 11，梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成 －2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成 －3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样 12，如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面） 13，取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。 14，再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准） 15，只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。16，清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
临床常见细菌感染及药物选择 1.一般软组织感染：痈、疖、蜂窝织炎、乳腺炎、丹毒、淋巴管炎等。常见病原菌是金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌。 首选药物是青霉素、苯唑西林；其次可以考虑氨基糖苷类（庆大霉素、阿米卡星等）、第一代头孢、万古霉素；严重感染用头孢哌酮舒巴坦、哌拉西林舒巴坦、氟喹诺酮类、碳青霉烯类。 2.软组织混合感染：即需氧菌和厌氧菌共同参与的感染，如坏死性筋膜炎、厌氧类杆菌窝织炎、肌肉坏死、糖尿病足及咬伤感染等，治疗上要兼顾到厌氧菌。 I消化链球菌感染：首选药物是青霉素；其次可以选择克林霉素；严重感染选择阿奇霉素、万古霉素等。 H大肠杆菌感染：首选广谱青霉素（氨苄西林、哌拉西林等）、头孢二三代；其次可以选择氨基糖苷类（庆大霉素、阿米卡星等）、头孢哌酮舒巴坦、哌拉西林舒巴坦、氟喹诺酮类；严重感染选择碳青霉烯类。 皿肠杆菌属（产气、阴沟）：首选抗绿脓B -内酰胺类（哌拉西林、 头孢他定、头孢吡肟等）＋氨基糖苷类（庆大霉素、阿米卡星等）；其次可以选择头孢哌酮舒巴坦、哌拉西林舒巴坦、氟喹诺酮类；严重感染选择碳青霉烯类。 以上感染必须考虑到厌氧菌感染，可以加用替硝唑、甲硝唑。 3.梭菌性肌肉坏死及蜂窝织炎和破伤风均为厌氧梭状芽孢杆菌感染，使用普通的青霉素即可。 4.烧伤创面感染：主要是由金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、肠道杆菌引起的感
染。对轻度感染可选用庆大霉素、哌拉西林、氟喹诺酮类等，耐庆大霉素菌株可予阿米卡星等耐氨基糖苷钝化酶的品种替代。严重感染可予三代头孢或哌拉西林联合氨基糖苷类，或予碳青霉烯类药物治疗。绿脓杆菌感染易引起肉芽肿，药物难以渗入，故较重感染治疗应保证有足够的疗程。形成生物膜时疗效降低，此时，可加用大环内酯类等抑制生物膜形成的药物。 5.人工关节或胸骨劈开术后：常见病原菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等。 MSS/和MSCN：首选苯唑西林；其次可以选择头孢一代、万古霉素；严重感染用头孢哌酮舒巴坦、哌拉西林舒巴坦、氟喹诺酮类、碳青霉烯类。 MRSA首选万古霉素；其次可以选择替考拉宁、严重感染用夫西地酸、利福霉素。 MRCNS首选万古霉素；其次可以选择左氧氟沙星；严重感染再加用利福霉素。 6.骨折复位及内固定术后、慢性骨髓炎、化脓性关节炎等：骨和关节的化脓性感染最主要为金黄色葡萄球菌，其次为表皮葡萄球菌、链球菌、肠道杆菌， 用药时要兼顾到使用能够比较多得进入到骨组织的抗生素。 7.脑脓肿（原发性或源自临近感染、创伤或手术后）、脑膜炎、脓胸：脑膜炎、脑室炎、脑脓肿等得颅脑创伤的手术感染，最主要的是金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和链球菌，少数时候也有肠道杆菌和厌氧菌。选药要考虑到药物能够进入血脑屏障而达到感染组织。脑膜炎球菌对青霉素及氨苄西林高度敏感，可首选较大剂量青霉素治疗脑膜炎球菌所致的脑膜炎及败血症。也可予二、三代头孢菌素治疗对青霉素过敏的患者，可用红霉素、阿奇霉素等大环内酯类或林可霉素类替换青霉素治疗。严重的化脓性感染、脑膜炎等可予二、
急性细菌性上呼吸道感染 急性上呼吸道感染是最常见的社区获得性感染，大多由鼻病毒、冠状病毒、流感病毒、副流感病毒、腺病毒等病毒所致，病程有自限性，不需使用抗菌药物，予以对症治疗即可痊愈。但少数患者可为细菌性感染或在病毒感染基础上继发细菌性感染，此时可予以抗菌治疗。 急性细菌性咽炎及扁桃体炎 患者扁桃体有渗出物、颈淋巴结肿大、发热伴周围血象白细胞及中性粒细胞升高有助于细菌性感染的临床诊断。如患者已出现猩红热样皮疹，或有扁桃体周围脓肿，则可诊断为细菌性感染。 急性细菌性咽炎及扁桃体炎的病原菌主要为A组β溶血性链球菌，少数为C组或G组β溶血性链球菌。 【治疗原则】 1.针对β溶血性链球菌感染选用抗菌药物。 2.给药前先留取咽拭培养，有条件者可做快速抗原检测试验(RADT)作为辅助病原诊断。 3.由于溶血性链球菌感染后可发生非化脓性并发症——风湿热和肾小球肾炎，因此抗菌治疗以清除病灶中细菌为目的，疗程需10天。 【病原治疗】 1.青霉素为首选，可选用青霉素G，也可肌注普鲁卡因青霉素或口服青霉素V，或口服阿莫西林，疗程均为10天。某些患者的依从性较差，预计难以完成10天疗程者，可予苄星青霉素单剂肌注。 2.青霉素过敏患者可口服红霉素等大环内酯类，疗程10天。 3.其他可选药有口服第一代或第二代头孢菌素，疗程10天，但不能用于有青霉素过敏性休克史的患者。此外，磺胺类药不易清除咽部细菌，A组溶血性链球菌对四环素类耐药者多见，这两类药物均不宜选用。 急性细菌性中耳炎 病毒性上呼吸道感染可合并轻度中耳炎表现，不需用抗生素，但如表现为急起的耳部疼痛、听力下降、发热、鼓膜进行性充血和膨隆，或已有鼓膜穿孔伴流液时，则需考虑急性细菌性中耳炎的临床诊断，可予以抗菌治疗。急性细菌性中耳炎的病原菌以肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌最为常见，三者约占病原菌的近80％；少数为A组溶血性链球菌、金葡菌等。 【治疗原则】 1.抗菌治疗应覆盖肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌。 2.疗程7～10天，以减少复发。 3.中耳有渗液时需采取标本做细菌培养及药敏试验。 【病原治疗】 1.初治宜口服阿莫西林。如当地流感嗜血杆菌、卡他莫拉菌产β内酰胺酶菌株多见时，也可选 用阿莫西林/克拉维酸口服。 2.其他可选药物有复方磺胺甲噁唑和第一代、第二代口服头孢菌素。 3.青霉素过敏患者除有青霉素过敏性休克史者外，确有用药指征时可慎用头孢菌素类。 急性细菌性鼻窦炎 急性细菌性鼻窦炎常继发于病毒性上呼吸道感染，以累及上颌窦者为多见。病原菌以肺炎链球菌和流感嗜血杆菌最为常见，两者约占病原菌的50％以上；卡他莫拉菌在成人和儿童中各约占病原菌的10％和20％；尚有少数为厌氧菌、金葡菌、化脓性链球菌及其他革兰阴性杆菌。 【治疗原则】 1.初始治疗宜选用能覆盖肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌的抗菌药物。在获知细菌培养及药敏试验结果后，必要时再加以调整。 2.局部用血管收缩药，以利于鼻窦内脓液引流。 3.疗程10～14天，以减少复发。 【病原治疗】 抗菌药物的选用与急性细菌性中耳炎相同。 急性细菌性下呼吸道感染 急性气管-支气管炎 本病以病毒感染多见，多数病例为自限性。 【治疗原则】 1.以对症治疗为主，不宜常规使用抗菌药物。
大肠菌群测定的操作细则 大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能。 食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。 1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。 1.2 冰箱:0～4℃。 1.3 恒温水浴:44.5±0.5℃。 1.4 天平。 1.5 显微镜。 1.6 均质器或乳钵。 1.7 平皿:直径为90mm。 1.8 试管。 1.9 吸管。 1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。 1.11 玻璃珠:直径约5mm。 1.12 载玻片。 1.13 酒精灯。 1.14 试管架。 2 培养基和试剂 2.1 乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。 2.2 伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。 2.3 乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。 2.4 EC 肉汤:按GB 4789.28中4.11规定。 2.5 磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中 3.22规定。 2.6 生理盐水。 2.7 革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。 3 操作步骤 3.1 检样稀释 3.1.1 以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。3.1.2 用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。 3.1.3 另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL 灭菌吸管。 3.1.4 根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3管。 3.2 乳糖发酵试验 将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置36±1℃温箱内,培养24±2h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。
脓毒症（Ｓｅｐｓｉｓ）作为急危重症领域的棘手难题，日益引起临床医师及科研工作者的关注。近十年来，现代生物科技的飞速发展极大地促进了人们对脓毒症发病机制的认识，并推动了脓毒症治疗措施的改进和更新。其中，脓毒症动物模型的应用对此起到了十分重要的作用。脓毒症动物模型的不断发展也反映了人们对脓毒症本质的认识正在逐渐深入，总结和分析现有动物模型，对于如何建立更贴近临床实际的脓毒症动物模型、合理设计实验以及准确解释动物实验数据都具有重要意义。 １ 应用脓毒症动物模型的意义 在过去的几年中，人们对感染后炎症反应分子机制的研究已取得显著进展，其中很大部分是利用体外观察的方法对细胞生理学研究的成果。应明确的是，尽管体外实验的手段先进而且方便，但要更好地了解脓毒症时体内炎症反应的发生、发展过程和其他病理生理变化，还需采用临床相关的脓毒症或脓毒性休克动物模型进行深入的探讨。 一般认为，利用动物模型进行脓毒症研究具有以下优点。 １．１ 在进行具有高度创伤性的操作或进行器官离体实验时只能使用动物模型。特别是在研究脓毒症的病理生理变化时通常需要采集组织标本（如肝、肺、肾等），而这些标本很难从临床获得。只有利用动物模型才可能方便地采取脓毒症各个阶段的组织标本。 １．２ 临床脓毒症病因较复杂，难以判断其确切的发病时间。很多患者还伴有其他严重的非相关疾病。并且，临床的脓毒症患者通常接受多种支持治疗，这些治疗不可避免地会影响对脓毒症自然病程的观察。因此，直接探讨人类脓毒症的病理生理机制相当困难，而采用动物模型进行实验则可免受上述因素的干扰。 １．３ 由于临床脓毒症患者的遗传学背景非常复杂，加之患者年龄、性别、同时存在的其他疾病以及支持治疗等因素均可导致临床资料的高度变异性。而要控制这种变异只能靠加大样本量，这无疑将会耗费更多的时间并给临床脓毒症试验带来很大的经济压力。由于动物模型的生物学差异较人类要小，因此所需的样本量也明显少于临床观察。 １．４ 在探讨脓毒症的发病机制时经常要使用一些药物或试剂（如某种细胞因子的抗体或拮抗剂等），这些制剂可能具有毒性或未经过临床的安全性检验不能用于人体。因此，只有采用动物模型才能方便地利用这些制剂来了解脓毒症发病的分子机制。除此之外，应用脓毒症的动物实验模型还可对药物进行临床试验前的筛选。 由此可见，在探索脓毒症发生、发展机制的过程中，选择适宜的脓毒症或脓毒性休克动物模型进行体内研究仍具有不可替代的地位。 ２ 脓毒症动物模型的选择及其局限性 大量的临床及实验研究资料表明，尽管在过去十几年中有关脓毒症发病机制的认识已取得较大进展，但对于脓毒症治疗和新药开发方面的研究却不容乐观。许多新的干预脓毒症制剂虽然在动物实验中表现出很好的应用前景，但其在临床ＩＩ期和ＩＩＩ期试验中均未取得显著的临床疗效，甚至反而加重疾病的程度。迄今为止，严重脓毒症或脓毒性休克的死亡率仍高达５０％左右。造成这一现象的重要原因之一即是在药物应用于临床前的动物实验观察中所 脓毒症动物模型的选择与评价 姚咏明（解放军总医院野战外科研究所 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所，北京，１０００３７） ＹＡＯ Ｙｏｎｇ－ｍｉｎｇ 作者简介 姚咏明（１９６５－），男，湖 北人，医学博士后，教 授，博士生导师。主要从 事创伤休克、脓毒症和 多器官功能障碍综合征 发病机制及防治的研究。 现任解放军总医院野战 外科研究所副所长、中 国微生物学会微生物毒 素分会副主任委员、中 国中西医结合急救医学 分会常委、中国灾害防 御协会救援医学会常务 理事等职。